HEREDITARIEDADE E A NATUREZA DA C INCIA

Primeira aula
(T1)

Objetivos
1. Distinguir senso comum e cincia. 2. Explicar a hiptese da pangnese de Hipcrates. 3. Comparar o mtodo baconiano, a maneira clssica (teolgico-medieval) e a modo atual de analisar a natureza. 4. Conceituar os termos: induo, deduo, fato, hiptese, lei e teoria. 5. Comparar as idias de Popper e de Thomas Kuhn sobre o conhecimento cientfico.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

SENSO COMUM

E CINCIA

Uma caracterstica humana a necessidade que as pessoas tm de interpretar a natureza, desde o universo mais amplo at a si mesmas. A maneira mais comum de se fazer essa interpretao por meio do chamado senso comum. Senso comum uma forma no-programada de conhecimento que se d pela simples observao dos fatos, em geral, sem um aprofundamento racional. Isto , no h uma preocupao com as explicaes para os fatos, ou, quando estas so propostas, no h uma preocupao em testlas. Muitas vezes, as explicaes propostas so de natureza mstica ou sobrenatural. No entanto, a importncia do senso comum no deve ser subestimada; foi essa forma de conhecimento que produziu as bases sobre as quais se sustenta a civilizao moderna. Foi esse tipo de conhecimento que levou descoberta e ao melhoramento das plantas comestveis e medicinais, ao melhoramento dos animais para uso humano, inveno da roda e da maioria das mquinas, apenas para citar alguns exemplos. A cincia difere do senso comum porque procura explicaes sistemticas para fatos (provenientes da observao e de experimentos), as quais possam ser submetidas a testes e a crticas por meio de provas empricas1 . O objetivo do conhecimento cientfico desvendar a ordem oculta que atrs das aparncias das coisas ou fenmenos. 1

Alm da racionalidade, uma segunda caracterstica do conhecimento cientfico a objetividade. Assim, em cincia deve-se fazer grande esforo no sentido de excluir ao mximo a rigidez de pensamento, a emoo, a aceitao prvia de afirmaes, as opinies pessoais no baseadas em informaes cientficas e as explicaes sobrenaturais. O ideal seria acreditar s no que a natureza nos mostra e no no que gostaramos que fosse verdade por razes pessoais, religiosas, polticas etc. O poder da cincia como caminho para o conhecimento reside no fato de que toda resposta, independentemente de como ela foi obtida, necessita ser confirmada por outros cientistas com igual sabedoria, percia e receptividade. Assim, os procedimentos da cincia so autocorrigveis. Nesse sentido, o caminho da cincia contrasta com o da filosofia, da religio e de muitas disciplinas humansticas em que a opinio freqentemente toma o lugar das concluses verificveis. O contraste entre esses dois modos de pensar importante tendo-se em vista o objetivo da resposta que se procura.
Emprico relativo ao mundo natural observvel. Na verdade, a cincia moderna lida com diversos fenmenos que no so diretamente observveis, tais como as partculas fundamentais, genes, estados da mente, etc. Nesse contexto amplo, emprico refere-se ao uso de informaes obtidas da observao direta ou indireta.
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A cincia tem se mostrado um poderoso instrumento para solucionar muitos dos problemas que surgem da interao entre seres humanos e o mundo no-humano ao nosso redor, e tambm alguns dos problemas das interrelaes entre os prprios seres humanos. Contudo, no se pode desejar que a cincia nos diga o que bom, justo, belo, ou mesmo prazeroso. Em muitos casos, no entanto, as informaes cientficas podem nos ajudar a prever o resultado de decises humanas e, uma vez tomadas essas decises, procedimentos cientficos podem nos ajudar a atingir os objetivos desejados. Mais do que qualquer outro aspecto da civilizao, a cincia est moldando nossas vidas e as perspectivas futuras. Essa uma das razes pelas quais no se pode permitir que seu controle esteja unicamente nas mos de uma elite. Cursos de cincias devem fornecer uma compreenso efetiva do alcance e das limitaes dos procedimentos cientficos. Os atuais estudantes, futuros lderes da sociedade, precisam entender que o conhecimento cientfico uma condio necessria para o desenvolvimento de novas relaes com o mundo natural. Se a humanidade deseja evitar um desastre terminal sem paralelo fundamental o desenvolvimento de novos tipos de relaes com a natureza. Precisamos entender que cincia uma arma poderosa para atingir objetivos humanos, mas que impossvel para a cincia definir esses objetivos.

AS ORIGENS DA

TEORIA GENTICA

A importncia da teoria gentica Em 1973, o famoso bilogo Theodosius Dobzhansky lanou um desafio aos criacionistas, Nada em Biologia faz sentido a no ser sob a luz da evoluo. Isso uma verdade, embora exista algo mais fundamental de onde derivam todos os principais conceitos em Biologia, a Gentica. A caracterstica fundamental de um ser vivo sua capacidade de se replicar com grande exatido, transformando matria e energia do mundo no-vivo em mais matria viva. A replicao e todos os demais aspectos da vida so reflexos da estrutura e funcionamento do material gentico o cido nuclico. A Gentica o campo de investigao que procura entender esse fenmeno de replicao e, portanto, deve ser considerada bsica para toda a Biologia. 2

Veja como da replicao gentica est na base de todas as reas da Biologia. A Biologia Evolutiva o campo que investiga os aspectos da replicao ao longo do tempo. A Biologia do Desenvolvimento o campo de investigao que lida com a replicao ao longo do ciclo de vida de um organismo. A Sistemtica estuda a diversidade da vida que uma conseqncia da replicao, modulada pelo ambiente ao longo do tempo. A Ecologia lida com as interaes entre o ambiente e o indivduo ou grupos de indivduos, os quais so geneticamente programados. As conseqncias estruturais e funcionais da atividade do material gentico em todos os nveis de organizao, desde a clula at o organismo, so estudadas pela Morfologia e Fisiologia. Assim, Gentica, incluindo sua manifestao a longo prazo a Biologia Evolutiva a disciplina integradora de todos os conceitos e informaes biolgicas. Hoje existem problemas especiais no ensino da Gentica para principiantes. Esse ramo da cincia est se desenvolvendo de modo to espetacular e rpido que grande a tentao de apresentar principalmente as descobertas mais recentes quando existe tanta coisa interessante para ser dita difcil no diz-las. No entanto, quando isso feito dessa maneira, sem fornecer inicialmente uma estrutura conceitual da rea, as novidades podem ser memorizadas, mas impossvel compreend-las e apreci-las em toda sua profundidade. O que antigo para cientistas e professores pode ser novo para os alunos. Assim, aprender sobre cromossomos sexuais ou como se descobriu que o DNA o material hereditrio podem ser histrias hericas, importantes e estimulantes para aqueles que desconhecem como esses quebra-cabeas foram desvendados. Ou, como disse J. R. Baker: Em muitos campos da cincia necessrio conhecer a embriologia das idias: nossa viso moderna s pode ser completamente compreendida e julgada se ns entendermos as razes que nos fizeram pensar como ns pensamos. Esse conselho emitido h duas geraes ainda mais importante hoje. A velocidade com que o progresso alimenta a estrutura conceitual da Biologia to grande que existe o perigo de a saturao de informao nos levar a esquecer a prpria estrutura conceitual. Os estudantes no devem ser empanturrados com informaes e privados de entendimento.

O que a cincia gentica pretende responder? Cincia uma instrumento poderoso para se entender a natureza. Ela cria uma imagem de mundo na qual acreditam tanto os cientistas como boa parte das pessoas. Mas, ao contrrio do que se poderia pensar, o enorme sucesso da cincia moderna deve-se ao fato de ela procurar respostas para questes especficas, as quais, com freqncia, parecem triviais e no relacionadas com os grandes temas. Por mais surpreendente que possa parecer, um dos grandes obstculos para se compreender a natureza a incapacidade de se formular a pergunta apropriada. Por exemplo, a Gentica, hoje um dos campos mais rigorosos e conceitualmente completos da Biologia, s alcanou esse estgio de desenvolvimento nos ltimos cinqenta anos. Durante milnios a humanidade no conseguiu respostas para a hereditariedade porque foi incapaz de formular questes adequadas. Em cincia, questes adequadas so aquelas passveis de observao e experimentao e, portanto, de serem respondidas. Assim, durante a maior parte da histria da humanidade, hereditariedade no foi mais do que um princpio vago, desprovido de leis precisas e de resultados previsveis. Reflita, por exemplo, sobre os tipos de informao que se podia reunir a respeito de hereditariedade. Os filhos de um casal, com freqncia, diferem entre si em uma srie de caractersticas; alguns so mulheres, outros so homens uma diferena profunda. A no ser no caso de gmeos idnticos, os irmos diferem bastante na aparncia e na personalidade. Algumas vezes, as crianas tm pouca semelhana com seus pais, outras vezes a semelhana familiar grande. Como pode a mesma causa a reproduo pelos mesmos pais produzir resultados to diferentes? No entanto, existe alguma regularidade; por exemplo, os filhos de ndios, de negros, de orientais e de caucasianos tm os traos tpicos de suas raas. At o sculo XX, observaes em uma grande diversidade de organismos no foram alm da concluso de que, apenas nos aspectos mais gerais, os descendentes se assemelham a seus pais. Nenhuma regra que relacionasse as caractersticas da prole com as de seus pais foi descoberta. Isso no surpreende, pois, respostas vagas era tudo o que se podia esperar de uma questo vaga - Qual 3

a natureza da hereditariedade? No existia nenhuma hiptese aceitvel que explicasse o fato de que a hereditariedade parecia consistir da transmisso de semelhanas, de diferenas e mesmo de novidades. Uma vez que o valor educacional em cincia reside no apenas na informao que ela fornece, mas tambm na maneira de se obter essa informao, importante conhecermos algumas tentativas antigas para entender a hereditariedade. Como acontece com muitos outros tpicos da Biologia, conveniente comear pelos antigos filsofos gregos. As razes de como ns pensamos a respeito de fenmenos cientficos remonta aos antigos gregos, da mesma forma que nosso modo no-cientfico de pensar tem sua origem nos antigos hebreus (via bblias hebraica e crist). Os antigos filsofos gregos muitas vezes definiram o problema e sugeriram hipteses que perduraram at os tempos modernos. Consideraremos apenas dois desses filsofos: Hipcrates e Aristteles. Idias de Hipcrates sobre hereditariedade Hipcrates, considerado o Pai da Medicina, poderia tambm ser aceito como um dos Pais da Gentica. Por volta do ano 410 a.C., ele props a pangnese como uma hiptese para explicar a hereditariedade. A pangnese admitia que a hereditariedade baseava-se na produo de partculas por todas as partes do corpo e na transmisso dessas partculas para a descendncia no momento da concepo. Darwin iria adotar essa mesma hiptese muitos sculos depois, tendo a pangnese permanecido como a nica teoria geral de hereditariedade at o final do sculo XIX. Hipcrates elaborou essa hiptese a partir do conhecimento da existncia de uma populao humana, os macrocfalos, cuja caracterstica era ter cabea muito alongada. Nesta populao, ter cabea longa era sinal de nobreza; assim, os pais procuravam moldar os crnios ainda flcidos dos recm-nascidos de acordo com a forma desejada. Veja o que Hipcrates escreveu sobre esse fato: A caracterstica [cabea alongada] era, assim, adquirida inicialmente de modo artificial, mas, com o passar do tempo, ela se tornou uma caracterstica hereditria e a prtica [moldagem do crnio dos recm-nascidos] no foi mais necessria. A semente vem de todas as partes do corpo, as saudveis das partes saudveis, as doentes das partes doentes. Se pais com pouco cabelo

tm, em geral, filhos com pouco cabelo, se pais com olhos cinzentos tm filhos com olhos cinzentos, se pais estrbicos tm filhos estrbicos, por que pais com cabeas alongadas no teriam filhos com cabeas alongadas? Hipcrates props tambm o conceito de hereditariedade de caracteres adquiridos um ponto de vista que viria a ser adotado por Lamarck como o mecanismo das mudanas evolutivas uma explicao, ainda hoje, aceita por muitas pessoas. Embora no parea, a hiptese de Hipcrates para a hereditariedade foi um grande comeo. Ele identificou um problema cientfico (possivelmente o passo mais difcil de todos), props uma explicao (hiptese) e a escreveu de uma maneira compreensvel. A elaborao de uma anlise assim, h dois mil e quinhentos anos, algo excepcional. Idias de Aristteles sobre hereditariedade Aristteles (384-322 a.C.) em seu livro Gerao dos animais trata de problemas genticos e de desenvolvimento. Essa ligao entre dois campos aparentemente to distintos tem uma conotao bastante atual. Aristteles admitia a existncia de uma base fsica da hereditariedade no smen produzido pelos pais. Esse ponto, to bvio nos dias de hoje, foi fundamental para todo trabalho posterior na rea. Essa idia permitiu que se deixasse de atribuir hereditariedade uma base sobrenatural ou emocional e se passasse a pens-la como resultado da transmisso de algum tipo de substncia pelos pais. Naquela poca, cerca de quatro sculos antes de nossa era, sabia-se muito pouco a respeito da natureza do smen. Aristteles usou o termo smen como ns usamos gametas atualmente e no para designar a secreo dos machos que contm os espermatozides. O papel dos gametas na reproduo s foi estabelecido em meados do sculo XIX. A maneira como Aristteles discutiu a hiptese da pangnese sugere que ela era bastante conhecida e, provavelmente, bem aceita na poca; ele, no entanto, a rejeitou. Aristteles lista quatro informaes e argumentos mais importantes que apoiavam a pangnese como uma hiptese plausvel. Em primeiro lugar, a observao de que a cpula (nos humanos) dava prazer a todo o corpo permitia sugerir que todo o corpo contribua para o smen. Segundo, existiam informaes 4

que sugeriam a hereditariedade de mutilaes. Um relato nesse sentido vinha da regio do estreito de Bsforo, na atual Turquia, onde um homem havia sido marcado a ferro quente em um dos braos e seu filho, nascido pouco tempo depois, tinha um defeito no brao. Terceiro, era comum observar que os filhos se parecem com os pais no no geral, mas em caractersticas particulares. Assim, estas deviam produzir substncias especficas que se tornariam parte do smen. E quarto, se era produzido smen para o geral, por que no tambm para partes especficas do corpo? Apesar desses argumentos favorveis, Aristteles rejeitou a pangnese. A partir da observao de que as semelhanas entre pais e filhos no se restringia estrutura corporal mas podia abranger outras caractersticas como voz e jeito de andar, Aristteles se perguntou como caractersticas no-estruturais poderiam produzir material para o smen. Alm disso, filhos de pais com cabelos e barbas grisalhos no so grisalhos ao nascer. Foi observado tambm que certas crianas pareciam herdar caractersticas de ancestrais remotos, que dificilmente poderiam ter contribudo para o smen dos pais. Era conhecido o caso de uma mulher de Elis (na regio noroeste da Grcia Peloponsia) que teve, com um homem negro, uma filha branca, mas seu neto tinha pele escura. As mais importantes evidncias que refutavam a pangnese de Hipcrates eram do mesmo tipo das que foram usadas para refutar a hiptese da pangnese de Darwin, cerca de dois mil anos mais tarde. O fato de as plantas mutiladas poderem produzir descendncia perfeita era bem conhecido. Alm disso, havia ainda o poderoso argumento de que se o pai e a me produzem smen com partculas precursoras de todas as partes do corpo, no deveria se esperar que os descendentes tivessem duas cabeas, quatro braos etc? Estes e muitos outros argumentos levaram Aristteles a rejeitar a pangnese e a perguntar: Por que no admitir diretamente que o smen ... origina o sangue e a carne, ao invs de afirmar que o smen ele prprio tanto sangue quanto carne? Na verdade, isto era o mximo que Aristteles poderia concluir com os informaes e a metodologia de seu tempo. Ele props uma hiptese, que embora vaga, ainda hoje considerada verdadeira acima de qualquer suspeita. Essa

hiptese seria o limite conceitual para os dois milnios seguintes. Durante todo esse tempo, a falta de progresso na compreenso da hereditariedade foi conseqncia principalmente da incapacidade de formular perguntas precisas que pudessem ser estudadas com a metodologia disponvel. A questo da hereditariedade aps Aristteles O interesse pelas questes cientficas praticamente cessou no mundo ocidental durante o longo perodo em que a Igreja exerceu hegemonia sobre o pensamento humano. Foi apenas bem depois do Renascimento que a observao e a experimentao passaram a ser aplicadas de maneira sistemtica na tentativa de se compreender a hereditariedade. Mesmo assim o progresso foi muito lento, novamente porque no se conseguia formular uma pergunta adequada. Durante os sculos XVIII e XIX, o procedimento padro de se procurar informaes a respeito de hereditariedade era por meio de cruzamentos. Eram feitos cruzamentos entre indivduos com estados contrastantes das caractersticas e a descendncia era analisada. At hoje esse um dos procedimentos mais poderosos para se obter informaes a respeito de hereditariedade. Contudo, pouco progresso foi feito no campo da hereditariedade at o final do sculo XIX. Assim, poucas coisas relevantes no campo do estudo da hereditariedade aconteceram no perodo entre Aristteles (384-322 a.C.) e Gregor Mendel (1822-1884), mas nesse perodo foram estabelecidas as bases da investigao cientfica.

Lorde Chanceler da Inglaterra. Bacon considerado por de Solla Price (1975), como sendo quem estabeleceu a revoluo cientfica e organizou o mtodo cientfico. Francis Bacon e a Nova Era Em uma srie de livros publicados entre 1606 e 1626, Bacon defende a cincia emprica e critica severamente o hbito clssico e teolgicomedieval de comear uma investigao com um ponto de vista aceito como verdade, deduzindo a partir da as conseqncias. Sua contribuio para o desenvolvimento da cincia est no fato que ele considerava tanto a observao emprica quanto a obtida por meio dos experimentos formais como o nico caminho adequado para se testar hipteses. Seus argumentos tiveram enorme influncia e levaram ao rpido crescimento do nmero de cientistas profissionais nos dois sculos subseqentes. A sugesto de Bacon era comear com as observaes, no com a f. Isto , devia-se partir dos fatos conhecidos relacionados com algum fenmeno natural e tentar formular princpios gerais que explicassem esses fatos. Esse mtodo lgico de raciocnio do particular para o geral conhecido como induo um procedimento que est na base da cincia moderna. As idias de Bacon de como fazer cincia foram descritas em seu livro Instauratio Magna de 1620. Ele comea apontando a ineficincia das tentativas anteriores de compreender a natureza e ressalta que, a menos que se tome muito cuidado, as coisas que a mente humana absorve, tendem a ser falsas, confusas e abstradas dos fatos. Em boa medida, isso conseqncia de observarmos o que j assumimos como sendo verdade. A conseqncia disso que a filosofia e outras cincias intelectuais ... mantm-se como esttuas, so adoradas e celebradas, mas no se movem ou avanam. Segundo essa viso, um conhecimento do mundo natural digno de confiana vem da observao da prpria natureza e no de testes da mente humana. A natureza seria o juiz no plano de Bacon de comear a reconstruo total das cincias, das Artes e de todo conhecimento humano sua Grande Renovao. Ele sugere que uma investigao comece pela reunio de todas as informaes obtidas por 5

AS ORIGENS

DA CINCIA

A incapacidade dos antigos obterem avanos significativos no campo da hereditariedade causa surpresa, considerando a idia generalizada de que existem procedimentos padres em cincia o mtodo cientfico que, se devidamente seguidos, levam inexoravelmente a novas descobertas e entendimentos profundos. Esses procedimentos so aquisies recentes que foram sendo formulados lentamente pelos filsofos durante sculos, mas como quase sempre acontece, as contribuies de alguns indivduos se destacam. Admite-se que a cincia moderna teve incio com Galileu em 1632 e que a filosofia da cincia foi iniciada por Francis Bacon (1561 - 1626),

observaes e experimentos relacionados com o tpico investigado. Deve-se tomar muito cuidado para evitar a incluso de informaes erradas, o que, claro, levaria a concluses falsas.

O mtodo hipottico dedutivo

O procedimento preconizado por Bacon evoluiu para o chamado mtodo hipotticodedutivo. Nessa concepo, um estudo cientfico comea pela observao e/ou experimentao de Armadilhas da mente: dolos a serem algum fenmeno natural, utilizando as informaabominados es obtidas para se chegar a algum entendimento Segundo Bacon, a mente precisa se proteger das causas fundamentais ou de associaes entre de idias preconcebidas para que as informaes eventos aparentemente no relacionados. Hipsejam interpretadas com exatido. Essa uma teses provisrias so formuladas com base nas tarefa quase impossvel de ser cumprida uma vez informaes selecionadas e, a partir dessas hipque o que somos, pensamos e fazemos depende teses, so feitas dedues que permitem test-las. Assim, a deduo continua a ser um poderoso enormemente de nossa aceitao das crenas da sociedade onde vivemos e da cincia que profes- componente da anlise cientfica, mas a deduo samos. Essas crenas tornam-se os dolos aos dos cientistas modernos no a mesma do pensaquais nos submetemos, e a extenso dessa sub- mento dedutivo que Bacon considerava to repugnante. Na cincia contempornea, as dedumisso pode levar a concluses erradas. Bacon lista quatro grupos: dolos da Tribo, es a partir de uma hiptese so concluses plauda Caverna, do Mercado e do Teatro. (Bertrand sveis tiradas a partir da explicao provisria para Russell reconhece mais um grupo, que denominou o fato. Seu valor sugerir que observaes ou experimentos podem ser feitos para se validar ou dolos da Escola). Os dolos da Tribo so idias erradas precon- refutar a hiptese, e nada mais alm disso. As cebidas e pensamento confuso, comuns a todo dedues dos antigos filsofos e telogos eram com freqncia tomadas como concluses definiser humano. Os dolos da Caverna so as crenas erradas tivas tiradas de verdades eternas, mas na realidade de cada mente individual a mente da pessoa elas se baseavam em crenas ou imaginao frtil comportando-se como uma caverna isolada. e no em evidncias. Os cientistas de hoje se esforam no sentido Bacon aponta especialmente como cada pessoa de partir apenas das informaes mais fidedignas tende a favorecer suas prprias opinies e descobertas um srio problema em nossos dias. e confirmveis, fazendo a seguir uma constante Outros dolos da Caverna decorrem de uma valori- interao entre procedimentos indutivos e deduzao indevida do que antigo ou das novidades. tivos para chegar ao nvel mais fundamental de Os dolos do Mercado so os problemas compreenso do mundo natural. Essa compresemnticos que surgem quando as pessoas tentam enso no pode ser mais do que essa a se comunicar e utilizam palavras diferentes. As afirmao mais precisa que pode ser feita com palavras de nossos idiomas foram criadas devido base nas evidncias disponveis. Isso no sigs necessidades do dia-a-dia e, com freqncia, nifica que a cincia de hoje esteja errada; signiso imprprias, ou no so especficas o sufici- fica que ela ser substituda amanh por uma cincia melhor. Nossa anlise do desenvolvimento dos ente, para serem usadas em cincia. Os dolos do Teatro, isto , dos sistemas conceitos de Gentica fornecero um excelente filosficos, consistem na utilizao de modos exemplo disso; a Gentica de Mendel redescode pensar religiosos ou filosficos em que a berta em 1900 no estava errada, ela apenas foi verdade deduzida de premissas pr- ampliada em uma Gentica melhor de Sutton estabelecidas. Bacon aponta, por exemplo, o fato (1903), de Morgan (1912) e, finalmente, na vasta de algumas pessoas tentarem encontrar um e abrangente Gentica atual. Em resumo, a diferena fundamental entre o sistema filosfico natural (isto , Cincias procedimento de Bacon e o procedimento por Naturais) no primeiro livro da Gnese. Existem problemas mais gerais difceis de ele criticado que as afirmaes cientficas preciserem combatidos, como a superstio, a cegueira sam estar baseadas em informaes tiradas de aos fatos e o imoderado fervor religioso. observaes e/ou experimentos sobre fenmenos 6

naturais e no de idias e princpios preconcebidos, ou crenas de autores clssicos, ou da imaginao, ou da superstio. No correto dizer que Bacon acreditava que a induo fosse o nico procedimento adequado para se chegar a afirmaes cientficas. Sua nfase na induo foi mais no sentido de se opor aparente total confiana que filsofos e telogos tinham na deduo a partir de verdades pr-estabelecidas. Sua insistncia na induo e na defesa da cincia experimental fizeram com que nos sculos seguintes o mtodo experimental se tornasse sinnimo de mtodo cientfico. Infelizmente isso uma confuso entre o geral e o particular. Experimentos no constituem o nico caminho para se testar hipteses; elas tambm podem ser testadas pela simples observao ou por sua consistncia lgica interna, como faziam os grandes gemetras gregos). A vantagem da experimentao que por meio dela pode-se controlar a maioria da variveis com exceo da que se est sendo testada. No entanto, o desenvolvimento da matemtica estatstica a partir do sculo passado forneceu tcnicas poderosas que nos permitem realizar testes equivalentes aos experimentais com base apenas em dados da observao. Nesse processo lanamos mo de tcnicas matemticas para separar a influncia de diferentes fatores. Foi isso que provocou um aumento dramtico no nmero de estudos empricos noexperimentais, especialmente na segunda metade desse sculo.

Sociais e da Biologia at o sculo XX. Muitas pessoas ainda hoje vem a cincia dessa forma e consideram erroneamente que ela consiste na descoberta de novos fatos acerca do mundo. Desde o sculo XVII, no entanto, a viso positivista da cincia j era questionada. Em meados do sculo XVIII o filsofo escocs David Hume apontou um srio problema na induo de generalizaes. Segundo ele, a nica garantia que se tem para o sucesso do mtodo indutivo seu sucesso passado - o que nos faz supor que um prximo cisne que venhamos a encontrar seja branco o fato de todos os anteriores terem sido brancos. Mas isso por si s uma generalizao e uma prxima observao - encontrarmos um cisne preto - pode derrubar essa generalizao particular. Cria-se, assim, um crculo vicioso em que tentamos justificar uma generalizao por uma outra igualmente incerta. A contribuio de Karl Popper A tentativa mais conhecida para resolver esse paradoxo foi a do filsofo austraco Karl Popper (1902-1994). Reconhecendo que as tentativas de defender a cincia em termos lgicos por referncia induo eram inevitavelmente inviveis, Popper enfatizou que a idia, at ento vigente, de que os cientistas simplesmente acumulam exemplos de um fenmeno e, ento, derivam generalizaes a partir deles, estava errada. Na viso de Popper, os cientistas realmente fazem hipteses sobre a natureza do mundo (s vezes, mas nem sempre, por meio de generalizaes indutivas) e, ento, submetem as hipteses a testes rigorosos. Esses testes, no entanto, no so tentativas para provar uma teoria particular (uma forma de induo) mas sim tentativas de neglas. Provas, ele argumenta, algo logicamente impossvel de se obter. Ns podemos apenas negar algo com alguma certeza, pois pelas diversas razes que Hume apontou, um nico exemplo contra suficiente para negar uma generalizao; enquanto prov-la requereria a tarefa impossvel de documentar todo exemplo de um fenmeno em questo (inclusive, presumivelmente, aqueles que ainda no aconteceram!). Na viso popperiana, a pesquisa cientfica tem incio com problemas, quando h algo errado com os fatos, isto , quando a natureza no se comporta de acordo com o previsto por nossa viso de mundo. Como diz Popper: cada problema surge 7

CINCIA NO SCULO

XX

Os sculos que se seguiram a Bacon foram dominados pela idia de que as explicaes cientficas eram simples generalizaes derivadas de uma srie de observaes. Isto , a partir de uma srie de observaes de um fenmeno particular faz-se uma generalizao - como todos os cisnes que j observei eram brancos concluo que todos os cisnes so brancos, ou, toda vez que ocorre um relmpago, segue-se um trovo. O ponto central dessa idia que uma teoria cientfica desenvolve-se linearmente, em trs estgios separados:
observaes > hiptese > teste da hiptese.

Essa viso equivocada de cincia, denominada positivismo pelo filsofo-cientista francs Augusto Comte, perdurou em reas das Cincias

da descoberta de que algo no est de acordo com nosso suposto conhecimento; ou, examinado em termos lgicos, da descoberta de uma contradio interna entre nosso suposto conhecimento e os fatos. Assim, os fatos em si nada significam, eles se tornam importantes quando conflitam com o saber vigente; observar simplesmente um fenmeno no tem sentido em cincia. Uma vez identificado o problema, o pesquisador usa toda sua capacidade criativa para propor uma explicao provisria para o problema. Essa explicao nada mais do que um palpite sobre o porqu da contradio entre o conhecimento vigente e o fato. Esse palpite a hiptese. Uma hiptese cientfica, no entanto, no uma criao a partir do nada, em sua elaborao o pesquisador lana mo das teorias vigentes relacionadas ao problema em questo, reunindo, analisando e interpretando toda informao disponvel sobre o assunto. Pode-se dizer, portanto, que na elaborao de uma hiptese ocorre, em geral, um processo de induo. As hipteses provisrias so, ento, submetidas a testes que ofeream as mais severas condies para a crtica. Mas os nicos testes possveis so aqueles que, eventualmente podem mostrar que a hiptese falsa. No existe maneira em cincia de se mostrar que uma hiptese correta ou verdadeira. Assim, as hipteses cientficas se credenciam por meio de testes de falseabilidade. Neste tipo de teste, so feitas dedues a partir da hiptese, ou seja, imaginadas situaes em que, se a hiptese for verdadeira (embora no se possa provar que ela o seja), haver uma ou mais conseqncias especficas. As situaes imaginadas devem oferecer todas as condies para que, se a hiptese no for correta, a previso no se confirme e, assim a hiptese seja refutada. E se a hiptese no for refutada? Rigorosamente devemos dizer que a hiptese no foi rejeitada ou refutada, e nunca que ela foi confirmada, pois, como vimos acima, no possvel validar uma hiptese positivamente, por mais rigor e controle que tenham sido usados em seu teste. Isso quer dizer que em cincia, podemos ter certeza quando estamos errados, mas nunca poderemos ter a certeza de estarmos certos. Assim, o conhecimento cientfico e os resultados em cincia no devem ser aceitos como definitivos e inquestionveis; uma explicao em cincia 8

aceita enquanto no tivermos motivos para duvidarmos dela, ou seja, enquanto ela for verdadeira acima de qualquer suspeita. Como diz Bombassaro: Especialmente em cincia, aquele que julga ter encontrado uma resposta conclusiva d mostras no somente de seu fracasso mas tambm do fracasso da prpria cincia. Aquele que for incapaz de transpor os limites do pensamento dogmtico, impostos pela educao cientfica formal, e no aceitar o jogo do pensamento crtico est longe de fazer cincia, pois no poder resistir constante transformao das teorias, mudana conceitual e ao cada vez mais clere avano do conhecimento. Sobre essa nova viso de cincia, que substituiu o dogmatismo vigente at o final do sculo passado, Franois Jacob diz: No final desse sculo XX, preciso que fique claro para todos que nenhum sistema explicar o mundo em todos os seus aspectos e detalhes. Ter ajudado na destruio da idia de uma verdade intangvel e eterna talvez seja uma das mais valiosas contribuies da metodologia cientfica. Fatos, hipteses, leis e teorias O termo hiptese muitas vezes usado como sinnimo de teoria, mas h uma diferena entre eles. Uma hiptese, como vimos, uma tentativa de explicao para um fenmeno isolado, enquanto teoria um conjunto de conhecimentos mais amplos, que procura explicar fenmenos abrangentes da natureza. A teoria celular, por exemplo, procura explicar a vida a partir da estrutura e do funcionamento das clulas. A teoria da gravitao universal procura explicar os movimentos dos corpos por meio da fora da gravidade. Uma lei, por sua vez, uma descrio das regularidades com que ocorrem as manifestaes de uma classe de fenmenos. As teorias estruturam as uniformidades e regularidades descritas pelas leis em sistemas amplos e coerentes, relacionando, concatenando e sistematizando classes de fenmenos. Assim, embora seja universal, a lei tem um universo limitado, enquanto que a teoria abarca a totalidade do universo. Os termos hiptese e teoria, usados na linguagem do dia-a-dia, podem ter conotao pejorativa: muitas vezes se usa a expresso Isso no passa de uma teoria como se uma teoria fosse inferior a um fato. Em cincia, porm, fatos,

hipteses, teorias e leis so coisas diferentes, cada uma ocupando seu lugar no conhecimento. A respeito disso escreveu recentemente o bilogo norte-americano Stephen J. Gould: [...] Fatos e teorias so coisas diferentes e no degraus de uma hierarquia de certeza crescente. Os fatos so os dados do mundo. As teorias so estruturas que explicam e interpretam os fatos. Os fatos no se afastam enquanto os cientistas debatem teorias rivais. A teoria da gravitao universal de Einstein tomou o lugar da de Newton, mas as mas no ficaram suspensas no ar, aguardando o resultado. [...] A contribuio de Thomas Kuhn Uma dificuldade na aplicao das idias de Popper que grande parte dos cientistas, seno todos, trabalham, no para provar o erro das teorias, mas sim na tentativa de definir seus limites de aplicao pela identificao de pontos em que a teoria no funciona (i.e. as reas nas quais ela faz predies incorretas). O incio de uma soluo para esse dilema ocorreu na dcada de 1950, quando o fsico e historiador de cincia Thomas Kuhn (1923 1996) se interessou em saber porque os fsicos relutaram em abandonar a teoria newtoniana durante o sculo XIX, apesar do acmulo de evidncias contra ela. A partir do estudo da histria da Fsica, Kuhn concluiu que a cincia progride de modo irregular. No livro The Structure of Scientific Revolutions, publicado em 1962, Thomas Kuhn defende a idia de que o progresso em cincia se d em duas etapas que poderamos caracterizar como ajustes e mudanas drsticas, ou, para ser mais atual, por um equilbrio pontuado. Kuhn salienta que, de tempos em tempos, ocorre uma revoluo na maneira como os cientistas vem seus problemas de pesquisa e os tipos das observaes e experimentos que devem realizar. Alguma grande idia, audaz e inslita, os leva a ver os dados existentes sob uma nova perspectiva, sugerindo um novo programa de pesquisa. Estas grandes idias so, na terminologia de Kuhn, paradigmas as realizaes cientficas reconhecidas universalmente que durante um certo tempo fornecem modelos de problemas e solues para uma comunidade de cientistas. Para Kuhn, um paradigma uma maneira de ver a natureza; o mundo continua o mesmo, mas 9

um novo paradigma mostra o que antes os cientistas no conseguiam ver, pois vinham interpretando os fatos a partir das teorias fornecidas pelo paradigma em vigor. Como a cincia interpreta a natureza sempre a partir de um ponto de vista terico, os problemas a serem resolvidos e as solues encontradas dependem do ponto de vista terico adotado pelos investigadores. Assim, um novo paradigma seria uma mudana do ponto de vista terico adotado na interpretao de problemas e de solues encontradas. Uma vez ocorrida a mudana de paradigma, o campo de pesquisa passa por um perodo que Kuhn chamou de cincia normal durante o qual os cientistas exploram e testam as implicaes do novo paradigma. O objetivo durante esse perodo determinar as condies limites do novo paradigma - os limites de sua aplicabilidade. Eventualmente as predies feitas pela nova teoria comeam a ser submetidas a testes de falseabilidade. A refutao de hipteses previstas pela teoria, no entanto, no leva os cientistas a abandonar de imediato a teoria. Ao invs disso eles procuram defend-la invocando hipteses auxiliares que expliquem porque a teoria falhou naquelas circunstncias. Mas, eventualmente, o peso das predies refutadas torna-se to grande que a teoria tem de ser abandonada. Nesse ponto, algum sugere um novo paradigma, uma nova revoluo cientfica ir ocorrer e um ciclo completo ir se iniciar novamente. A seguir discutiremos dois grandes paradigmas na histria da Citologia. O primeiro foi a teoria celular, que forneceu uma nova maneira de ver a estrutura dos organismos. Este paradigma teve um desenvolvimento lento mas, nos primeiros dois teros do sculo XIX, ocupou a ateno de muitos citologistas. A cincia normal que foi estimulada por este paradigma resultou na investigao de inmeros tipos de organismos e, quase sempre, suas estruturas microscpicas faziam sentido nos termos da teoria celular. Estes estudos tambm ampliaram os limites do que poderia ser chamado de clula. A estrutura dos tecidos dos seres humanos foi investigada em grande detalhe e logo este conhecimento se tornou de considervel importncia na Medicina como base da Patologia. A estrutura de clulas e tecidos doentes tornou-se um dos critrios mais eficientes para a identificao de doenas. Basta dizer que durante o sculo XIX, o diagnstico e

no a cura, foi o auge da realizao na Medicina. Os mdicos eram muito mais capazes de identificar as doenas do que cur-las. Kuhn acredita que na maioria das vezes um paradigma no evolui para um novo. Em vez disso, a rea toma uma nova abordagem inteiramente diferente com um novo paradigma. Gradualmente os profissionais perdem interesse no velho paradigma e comeam a trabalhar nos detalhes do novo, ou a maioria dos cientistas mais velhos sai de cena com seu velho paradigma e os jovens passam a fazer a cincia normal dentro dos parmetros do novo paradigma. Isto aconteceu na Citologia. No ltimo tero do sculo XIX uma nova abordagem estava em voga. O novo paradigma pode ser chamado de teoria da continuidade cromossmica. Buscavase seguir o comportamento dos cromossomos na mitose, na meiose e na fertilizao. Muitos citologistas perderam o interesse em estabelecer se uma outra criatura tinha o corpo composto por clulas e, em vez disso, passaram a tentar descobrir qual era o papel dos cromossomos no ciclo celular. Mais uma vez, o novo paradigma fornecia uma base conceitual para um importante fenmeno biolgico e guiava a pesquisa, a cincia normal, que analisava os detalhes. Aparente antagonismo entre as idias de Popper e Kuhn A princpio as vises de Kuhn e de Popper parecem ser diametralmente opostas. Elas, no entanto, no podem ser comparadas nesses termos, pois se referem a coisas distintas. A concepo de Popper uma declarao prescriptiva do que os cientistas devem fazer se eles desejam obter as coisas certas; a concepo de Kuhn normativa sobre o que eles realmente fazem. Esse o motivo, segundo o filsofo hngaro Imre Lakatos, de os cientistas parecem se comportar de acordo com a viso de Popper em certas ocasies, mas de acordo com Kuhn em outras. Lakatos argumenta que essa aparente contradio decorre do fato de os filsofos de cincia no reconhecerem que esses dois casos envolvem tipos de teorias radicalmente diferentes. Cientistas, segundo ele, trabalham em um mundo com diversos nveis no qual algumas teorias funcionam de um modo programtico enquanto outras esto mais relacionadas com os detalhes de como o programa funciona.

Uma teoria programtica fornece aos cientistas as razes para fazer um experimento particular ou um modo particular de ver o mundo: ela funciona como um paradigma kuhniano. Dentro desse programa, os cientistas geram hipteses subsidirias que especificam como a rede terica funciona na prtica: isso que os cientistas testam em detalhe e aceitam ou rejeitam de um modo popperiano. A teoria de evoluo de Darwin por meio da seleo natural, por exemplo, fornece uma rede terica aos bilogos de como interpretar o mundo vivo. Isso estimula-os a interpretar suas observaes em um certo tipo de caminho e sugere hipteses particulares para serem testadas. A hiptese subsidiria pode ou no ser correta, mas sua rejeio no por si s evidncia de que a rede conceitual errada. Ela meramente nos diz que a rede no produziu os efeitos na maneira como ns supnhamos. Lakatos levanta outro ponto prtico importante quando ele diz que no h razo para rejeitarmos uma teoria apenas porque existe evidncia contra ela. Sem uma rede conceitual, ns no podemos fazer perguntas ou planejarmos experimentos. Assim no devemos abandonar uma rede terica na ausncia de uma melhor para substitula. Na verdade, o melhor caminho para se encontrar uma teoria alternativa continuar fazendo testes de hipteses geradas pelo velho paradigma. Fazendo isso, ns temos a chance de descobrir algum fato crucial que nos levar a um novo paradigma. Teorias so idias ou modelos de como o mundo funciona. Ns trabalhamos dentro de um mundo estritamente terico deduzindo que conseqncias devem acontecer a partir das suposies e premissas do modelo; ns ento testamos a validade do modelo comparando as previses contra o mundo real. Uma vez que o modelo fornece previses que coincidem com o que realmente observamos, ns continuamos a desenvolver o modelo. Mas quando o modelo falha ao prever corretamente a realidade, ns alteramos o modelo ou procuramos elaborar um melhor. Cincia, em outras palavras, um processo de retro-alimentao: ela aprende a partir de seus prprios erros. Seu comportamento darwiniano, no sentido de que apenas as teorias bem sucedidas sobrevivem. Essas mudanas na perspectiva de como os cientistas realmente trabalham levam-nos a uma importante reinterpretao das relaes entre 10

fatos

MUNDO EMPRICO

Nota (texto extrado do livro Sementes da descoberta cientfica, de W. I. B. Beveridge, traduo de S. R. Barreto. T. A. Queiroz, Editor, Ltda e EDUSP, So Paulo, 1981): Na serendipidade [ou, serendipismo], o cientista depara com um acontecimento incomum, ou uma coincidncia curiosa de dois acontecimentos no incomuns, ou um resultado experimental inesperado. No o caso, aqui, de juntar idias j meio formadas, ou procurar analogias sugeridas, porque o prprio observado a descoberta, ou pelo menos um forte indcio da descoberta; ela aparece de surpresa e pode ser recebida com dvidas ou mesmo incredulidade. Enquanto uma intuio do tipo eureka provoca a exclamao achei!, isto , uma soluo intensamente procurada, na serendipidade se experimenta uma reao completamente diferente - alguma coisa foi encontrada, mas alguma coisa que no estava sendo procurada. No uma intui-

o. Dois exemplos clssicos so os de Colombo, descobrindo o Novo Mundo enquanto procurava um caminho para o Oriente, e o da descoberta do raioX por Rentgen, no qual poucos acreditaram no comeo. A serendipidade definida, em trs dicionrios que eu consultei, como o dom de encontrar coisas valiosas em lugares inesperados por pura sorte, a faculdade de fazer felizes e inesperadas descobertas por acidente e um suposto dom de encontrar coisas valiosas e agradveis que no se buscava. A palavra serendipidade (serendipity) foi cunhada por Horace Walpole, em 1754, depois de ler um antigo conto de fadas oriental sobre trs prncipes de Serendip [antigo nome do Ceilo]. Walpole escreveu: eles estavam sempre fazendo descobertas, por acidente e sagacidade, de coisas que no estavam procurando [...] deve-se observar que nenhuma descoberta de algo que se est procurando surge como nesta descrio.

EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS
Preencha os espaos em branco nas frases de 1 a 13 usando o termo abaixo mais apropriado. (a) cincia normal (b) conhecimento cientfico (c) deduo (d) fato (e) induo (f) hiptese (g) lei (h) paradigma (i) prova emprica (j) senso comum (k) teoria 3. ( ) qualquer dado da natureza. 4. Uma previso do que ir ocorrer em determinada situao, tendo por base uma explicao provisria para um fato, um(a) ( ). 5. A reunio de diversas informaes sobre um fato, na tentativa de encontrar uma explicao para sua ocorrncia, um(a) ( ). 6. Uma realizao cientfica universalmente reconhecida que, durante algum tempo, fornece problemas e solues modelares para uma comunidade de praticantes de uma cincia , na viso de Kuhn, um(a) ( ). 7. Uma evidncia baseada na observao de um fenmeno natural ou experimental um(a) ( ).

1. Um conjunto de idias inter-relacionadas que procura explicar fatos abrangentes constitui um(a) ( ). 2. Um palpite sobre o porqu da ocorrncia de um fenmeno um(a) ( ).

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teoria e dados. Somos obrigados a fazer uma separao bem definida entre o mundo terico e o mundo dos dados empricos. Isso cria uma concepo de cincia circular ao invs de linear. Ela envolve dois mundos distintos mas paralelos (o mundo terico no qual residem as teorias, e o mundo emprico das observaes), ligados por um processo de retro-alimentao de testes de hipteses:

MUNDO TERICO
rede terica

. teoria subsidiria .hiptese

previses

8. A descrio das regularidades das manifestaes de uma classe de fenmenos um(a) ( ). 9. Uma definio de ( ) pode ser: um corpo de conhecimento obtido atravs de inferncias lgicas baseadas em observaes empricas. 10. ( ) uma forma de conhecimento que no se preocupa com as explicaes para os fenmenos naturais e quando as propem no se preocupa em apresentar provas. 11. ( ), na viso de Kuhn, o tipo de investigao que procura consolidar realizaes cientficas passadas.

natureza das coisas terranas cair para baixo. Essa idia pode ser considerada um(a) ( ). 18. Segundo dizem, Newton observou uma ma se desprender da macieira e cair ao cho. Isso um(a) ( ). Utilize as alternativas abaixo para completar as frases de 19 a 23. (a) Bacon (b) Dobzhansky (c) Hipcrates (d) Kuhn (e) Popper

19. A hiptese da pangnese foi proposta originalmente por ( ). 20. A frase Nada em Biologia faz sentido a no ser sob a luz da evoluo. de autoria de ( ). 21. A idia de que uma hiptese s pode ser credenciada por meio de testes de falseabilidade, pois impossvel demonstrar sua veracidade, est ligada a ( ). 22. ( ) considerado um dos introdutores de uma nova forma de investigar a natureza, a qual est na origem da cincia. 23. As expresses paradigma e cincia normal esto ligadas ao pensamento de ( ) sobre como ocorre o progresso em cincia. Utilize as alternativas abaixo para completar as frases de 24 e 25. (a) conhecimento cientfico (b) senso comum (c) deduo (e) teoria (d) fato

PARTE B: LIGANDO CONCEITOS

E FATOS

Utilize as alternativas abaixo para completar as frases das questes 12 e 13. a. (1) deduo e (2) hiptese. b. (1) hiptese e (2) deduo. c. ambas hipteses. d. ambas dedues. 12. (1) Se os bichos-da-goiaba surgem de ovos depositados por moscas na fruta, (2) goiabas ensacadas no devem ficar bichadas. As partes (1) e (2) dessa frase so ( ). 13. H mais de 100 anos, Charles Darwin e seu filho Francis (1) imaginaram que as plantas percebiam a luz atravs da ponta do caule e, assim, se curvavam em direo fonte luminosa. (2) Se fosse esse o caso, plantas decapitadas, ou com a ponta do caule coberta, no se curvariam em direo a uma fonte luminosa. As partes (1) e (2) desse texto so ( ). Utilize as alternativas abaixo para completar as frases de 14 a 18. (a) deduo (b) fato (c) hiptese (d) lei (e) teoria

24. A prtica de salgar alimentos, como carne e peixe, para conserv-los pode ser considerada como ( ). 25. A idia de que a presena de sal em alimentos, como carne e peixe, ajuda na sua conservao porque destri os microorganismos por choque osmtico, pode ser considerada como ( ).

14. A idia de que o universo surgiu entre 12 e 20 bilhes de anos atrs, a partir de uma grande exploso, explica e relaciona diversos fenmenos naturais. Por isso considerada um(a) ( ). 15. Galileu, aps realizar inmeras observaes,firmou que a velocidade de um corpo que cai livremente, a partir do repouso, proporcional ao tempo e que o espao percorrido proporcional ao quadrado do tempo empregado para percorr-lo. Isso um(a) ( ). 16. A idia de que a clula a unidade morfofisiolgica dos seres vivos um(a) ( ). 17. Os aristotlicos diziam que as mas caem para baixo e no para cima por ser prprio da

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

26. No que o caminho da cincia se diferencia dos da filosofia e da religio? 27. O que deve levar um pesquisador a iniciar uma investigao cientfica? 28. Qual a essncia do mtodo cientfico, ou seja, no que ele difere do mtodo clssico (teolgico-medieval) de se pensar a natureza? 29. O que a deduo no mtodo cientfico? Qual seu valor? No que ela difere da deduo dos antigos filsofos e telogos?

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30. Qual a principal caracterstica do mtodo dedutvel - falsevel? 31. Segundo Hanson, ver um ato complexo que traz consigo uma carga terica. Para ilustrar isso ele prope a seguinte situao: Pensemos em Johannes Kepler. Vamos imagin-lo no alto de uma colina olhando o amanhecer. Com ele est Tycho Brahe. Kepler considera que o Sol est fixo, e a Terra se move. Mas Tycho, seguidor de Aristteles e Ptolomeu, ao menos neste particular, sustenta que a Terra est fixa e que os demais corpos celestes se movem ao redor dela. Vem Kepler e Tycho a mesma coisa no leste ao amanhecer? 32. Analise as imagens da cincia e dos cientistas veiculadas em propagandas na televiso. Elas correspondem realidade? Que tipo de mensagem elas procuram passar ao consumidor? 33. Voc est assistindo a um filme na televiso e, de repente, a imagem some. O que voc faria com as mos e com a mente? Descreva seu raciocnio em uma folha de papel. O que pode ser considerado (a) atitudes baseadas no senso comum; (b) atitudes baseadas no conhecimento cientfico? (c) Tente identificar nas suas atitudes: hipteses, teorias, fatos, leis e dedues.

34. Ignac Semmelweis, numa poca em que nada se sabia sobre microorganismos, fez uma pesquisa sobre as causas da febre puerperal no Hospital Geral de Viena e props um modelo para a compreenso do processo pelo qual ela era transmitida. Mdicos e estudantes de medicina dissecavam cadveres e examinavam mulheres doentes para, logo em seguida, ir cuidar de parturientes sadias. Uma percentagem muito alta destas ltimas contraa a doena e morria. Semmelweis sugeriu que a doena era transmitida pela matria putrefata, que andava nas mos de mdicos e estudantes. (Alves, 1993) Identifique no texto acima: hipteses, teorias, fatos e dedues. Existe alguma hiptese que possa ser testada por falseabilidade? Se existir, comente o tipo de teste a ser realizado e as interpretaes dos possveis resultados. 35. Albert Einstein disse uma vez que consideraria seu trabalho um fracasso se novas e melhores teorias no viessem substituir as suas. Comente essa frase no contexto da viso moderna de conhecimento cientfico.

DUNBAR, ROBIN I. M. The trouble with science. Cambridge Massachusetts: The Harvard ALVES, R. Filosofia da cincia: introduo ao University Press,1995 jogo e suas regras. 18 ed. So Paulo: Brasiliense, FREIRE-MAIA, N. A cincia por dentro. 2 ed. 1993 Petrpolis: Vozes, 1992. BOMBASSARO, L. C. Cincia e mudana KCHE, J. C. Fundamentos da metodologia conceitual. notas sobre epistemologia e histria cientfica. 13 ed. Porto Alegre: EDUCS/EST/ da cincia. Porto Alegre: EDIPUCRS, 1995. Vozes, 1992. BRONOWSKI, J. O senso comum da cincia. POPPER, K. R. Conhecimento objetivo. Belo Belo Horizonte: Itatiaia/ EDUSP, 1977. Horizonte: Itatiaia / EDUSP, 1975. BRONOWSKI, J. O homem e a cincia. Belo ZIMAN, J. Conhecimento pblico. Belo Horizonte: Itatiaia/ EDUSP, 1979. Horizonte: Itatiaia / EDUSP, 1979.

Bibliografia complementar

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A S ORIGENS DA BASE C ITOLGICA DA H EREDITARIEDADE

Segunda aula
(T2)

Objetivos
1. Descrever como e quando foi descoberta a clula. 2. Explicar a idia central e a importncia da teoria celular. 3. Discutir as dificuldades para se identificar os gametas como clulas. 4. Descrever os passos que levaram compreenso da importncia do ncleo celular. 5. Identificar as dificuldades para a compreenso do processo de diviso celular. 6. Descrever o raciocnio dedutivo que levou concluso de que a mitose no seria o nico tipo de diviso celular. 7. Descrever as meioses masculina e feminina em Ascaris. 8. Explicar o papel da meiose e da fertilizao no ciclo de vida dos organismos. 9. Listar os principais argumentos que levaram alguns citologistas no final do sculo XIX a defender a idia que os cromossomos seriam a base fsica da herana.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

DESCOBERTA DA CLULA

O nascimento da Citologia pode ser fixado com considervel preciso. No dia 15 de abril de 1663, Robert Hooke (1635-1703) colocou um pedao de cortia sob seu microscpio e mostrou sua estrutura a seus colegas da Royal Society de Londres. A Royal Society havia sido fundada no ano anterior com o intuito de melhorar o conhecimento sobre a natureza. Ela reunia uns poucos homens cultos de Londres que se encontravam regularmente, em geral semanalmente, para discutir assuntos cientficos e como o conhecimento poderia ser usado para melhorar as atividades prticas. A inspirao para a formao da Royal Society veio de uma sugesto anterior de Francis Bacon. Hooke, um matemtico de excepcional habilidade, era um membro muito ativo da Royal Society. Era costume entre os membros no apenas discutir mas tambm realizar experimentos e fazer demonstraes. Havia um grande interesse no novo microscpio que Hooke havia construdo e ele deixou que os membros da sociedade olhas-

sem partes de um musgo em seu microscpio no dia 8 de abril de 1663. No dia 15 daquele ms o Sr. Hooke apresentou dois esquemas microscpicos, uma representao dos poros da cortia, cortados transversal e perpendicularmente .... Esse era o comeo de dois sculos de observaes e experimentaes que estabeleceram a Teoria Celular. As vrias observaes de Hooke foram reunidas e publicadas em 1665 com o ttulo de Micrographia, sob os auspcios da Royal Society. Essa foi a primeira viso geral de uma parte da natureza at ento desconhecida. Hooke descreveu e ilustrou muitos objetos em sua publicao: a cabea de um alfinete, muitos insetos pequenos e suas partes, penas, enguias [nematdeos] do vinagre, partes de muitas plantas, cabelo, bolores, papel, madeira petrificada, escamas de peixe, seda, areia, flocos de neve, urina, e, claro, aquele pedao de cortia. (Fig. 1) Hooke imaginou que a cortia consistia de inmeros tubos paralelos com divises transversais: Estes poros, ou clulas, no eram muito fundos, mas consistiam de um grande nmero de pequenas caixas, separadas ao longo do comprimento

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O ESTABELECIMENTO DA

TEORIA CELULAR

As clulas se tornaram verdadeiramente importantes somente quando foi proposta a hiptese de que os corpos de todos os organismos eram constitudos apenas de clulas ou de produtos de clulas. Essa hiptese foi formulada e testada no comeo do sculo XIX e est associada principalmente a trs cientistas: R. J. H. Dutrochet, Matthias Jacob Schleiden e Theodor Schwann. Mas como algum poderia provar que os corpos de todos os organismos so constitudos apenas de clulas ou de produtos de clulas? Ao tentar responder essa questo pode-se aprender algo muito importante sobre cincia. A resposta , obviamente, que no h nenhuma posFigura 1. Desenhos de cortes de cortia ao microssibilidade dessa afirmao ser comprovada. Como cpio publicados por Hooke em 1665. algum poderia estudar todos os organismos? A dos tubos por uma tipo de diafragma. Ele obser- maioria j se extinguiu h muito tempo e no seria vou estruturas semelhantes em muitos outros nem mesmo possvel estudar um indivduo de tipos de plantas. Muitos pensam que Hooke des- cada uma das espcies viventes. Qual seria sua creveu aquelas caixas como vazias e parou por resposta se algum lhe perguntasse se os corpos a. Isso no verdade, ele observou cortes de dos dinossauros eram constitudos de clulas? plantas vivas e verificou que as caixas microsc- Mas lembre-se, tudo o que se pode desejar em cincia que uma afirmao seja verdadeira picas eram preenchidas por um suco. A presena de clulas na cortia e em outras acima de qualquer suspeita. Aps as observaes iniciais de Hooke, foi plantas poderia ser uma caracterstica geral ou poderia ser restrita a uns poucos tipos de organis- verificado que as clulas eram uma caractemo. A continuao das pesquisas iria mostrar que rstica comum das plantas. Mais e mais plantas as plantas consistiam inteiramente ou quase intei- de uma quantidade crescente de espcies foramente de estruturas parecidas, semelhantes a ram estudadas e todas apresentavam estruturas caixas. Um outro membro da Royal Society, semelhantes a clulas. Foi observado que essas Nehemiah Grew (1641 - 1712), publicou uma estruturas microscpicas no tinham todas a monografia em 1682 que contm muitas pranchas forma de caixa como as clulas da cortia. belssimas mostrando a estrutura microscpica Descobriu-se que as clulas podiam ter diversas das plantas. Com o tempo, a idia de que os seres formas e tamanhos. No podemos esquecer que vivos so formados por clulas foi estendida para esses microscopistas pioneiros no estavam os animais. Hooke havia feito uma observao observando clulas como as entendemos hoje, interessante que no foi importante na sua poca eles observavam paredes celulares. ela se tornou uma descoberta importante muito Schwann e as clulas nos animais mais tarde, em funo de pesquisas posteriores. Com poucas excees, o corpo dos animais Mais de dois sculos foram necessrios para se chegar concluso que o conhecimento das no continha estrutura alguma que se parecesse clulas era essencial para a compreenso da here- com clulas, isto , com as paredes celulares ditariedade. Podemos ter certeza que, quando das plantas. Assim, foi necessrio muito trabalho Robert Hooke sentou-se frente de seu micros- e imaginao arrojada at tornar bvio que o concpio, ele no estava interessado em descobrir ceito de clula podia ser aplicado com sucesso os mistrios da herana. No havia maior razo aos animais. Isso foi conseguido principalmente para acreditar que as clulas tivessem algo a ver por Theodor Schwann (1810-1882) em sua com a hereditariedade do que, por exemplo, as monografia de 1839, publicada quando ele tinha cerdas que ele descreveu em detalhe sobre o 29 anos de idade. Algumas de suas ilustraes esto reproduzidas na figura 2. corpo de uma pulga. 15

Schwann enfatizou a grande diferena entre as clulas das plantas e o que ele acreditava serem as clulas dos animais, mas sugeriu que elas representavam fundamentalmente a mesma coisa. Por que chamar todas essas estruturas to diversas de clulas?

D E

Procure examinar fotomicrografias de diversos tipos de clulas de plantas e especialmente de animais, ou melhor, caso tenha oportunidade, obI serve preparaes citolgicas H desses tipos no microscpio. G Como possvel dizer que crebro, msculos, rins, pulmes, sangue, cartilagens, ossos, parede intestinal etc. Figura 2. Algumas das ilustraes apresentadas por Schwann em sua monoso feitos de um mesmo tipo grafia de 1839: A.) clulas de cebola; B.) de notocorda de um peixe; C.) de cartilagem de r; D.) de cartilagem de girino; E.) de msculo de feto de de elemento? J que essas porco; F.) de embrio de porco; G.) de gnglio de r; H.) de um vaso estruturas so obviamente to capilar da cauda de girino; I.) de embrio de porco. Note que o ncleo e os diferentes, por que afirmar nuclolos esto mostrados em quase todas as clulas. que elas so constitudas pelos mesmos tipos de elementos? Qual seria a vantagem em se afirmar que as mais importante do que a origem de clulas altaclulas animais correspondiam quelas mente diferenciadas a partir de clulas simples. estruturas com aspecto to diferente presentes Apenas seis anos antes, em 1833, Robert Brown nas plantas? (1773 - 1858), o mesmo que descreveu o posteSchwann nos fornece a resposta, Se, no riormente denominado movimento Browniano, entanto, analisarmos o desenvolvimento desses havia descrito a presena de uma aurola circular, tecidos, ento parece que todas essas diversas ou ncleo, em clulas de orqudeas e de muitos formas de tecidos so constitudas apenas por outros tipos de plantas. Antes dele, outros observaclulas e so anlogas s clulas das plantas ... dores j haviam visto e desenhado essas estruturas O objetivo do presente tratado provar essa idia em suas publicaes, mas no atriburam nenhuma por meio da observao. importncia a elas. Brown verificou que muitos tipos Isto , apesar da grande diversidade, todas as de clula continham ncleo mas no especulou sobre estruturas que Schwann propunha chamar de seu significado. clulas tinham em comum a caracterstica de se Schwann ento mudou as regras para definir desenvolverem a partir de estruturas muito mais clula. Ao invs de se basear na forma, que nas simples que podiam ser melhor comparadas com plantas correspondia estrutura da parede, ele as clulas das plantas. Mas, como se poderia escolheu como base para a definio, a presena definir clula? de um ncleo. Se um neurnio e um leuccito so clulas, eles Embora Schwann fosse um observador cuidadevem ter algo em comum para serem reunidos doso, sua principal contribuio no foi o que em uma mesma categoria. Schwann encontrou ele viu mas como ele interpretou as observaes. um critrio: a presena de ncleo, que ele achava Seus antecessores haviam enfatizado as caixas; 16

Schwann deu nfase ao que estava dentro das caixas. Para ele a clula animal era uma poro de matria viva envolta por uma membrana e contendo um ncleo, enquanto que as clulas vegetais eram ainda envoltas por uma parede. O que essa nova viso de clula tem a ver com hereditariedade? Muito pouco, tem que se admitir. Seriam necessrias outras duas informaes antes que as clulas pudessem ser consideradas importantes para a hereditariedade: a descoberta de que os gametas so clulas e o reconhecimento de que clulas s se originam de clulas pr-existentes. O reconhecimento dos gametas como clulas Schwann reconheceu os vulos como clulas, uma vez que eles apresentavam a estrutura requerida por sua definio de clula o ncleo. A natureza do espermatozide era menos clara. Seu nome, que significa animais do esperma, indicava essa incerteza. Em 1667, Antonie van Leeuwenhoek havia descoberto e comunicado Royal Society de Londres que o fluido seminal continha criaturas microscpicas que ele imaginou que entrassem no vulo causando sua fertilizao. Essa hiptese foi muito contestada e alguns cientistas imaginaram que os espermatozides fossem parasitas. Na dcima segunda edio do livro Systema Naturae (1766 - 1768), Linnaeus tentou classificar os animais encontrados no esperma por Leeuwenhoek, mas concluiu que a determinao de seu lugar correto no sistema de classificao deveria ser deixado para quando eles tivessem sido mais pesquisados. Cerca de um sculo mais tarde, em 1784, Spallanzani realizou importantes experimentos com o objetivo de determinar a funo do smen na reproduo de rs. Durante o acasalamento, os machos abraam as fmeas e, como sabemos atualmente, depositam esperma sobre os vulos medida que estes saem pela abertura cloacal. De incio, Spallanzani no sabia disso, foi ele quem descobriu. Um outro pesquisador com quem ele se correspondia havia tentado, sem muito sucesso, descobrir o papel das rs machos vestindo-as com calas. Spallanzani repetiu esse experimento e verificou que, quando o smen ficava retido nas calas, os ovos no se desenvolviam. No entanto, se os ovos fossem colocados em contato com o smen retirado das calas, em um processo de fecundao artificial, eles passavam a se desenvolver. Em um outro experi17

mento, Spallanzani filtrou o smen e verificou que, com isso, ele perdia seu poder fecundante. Ele observou o que hoje chamamos de espermatozides, mas no os considerou essenciais para a reproduo. Foi somente em 1854 que George Newport, usando rs, forneceu boas evidncias de que os espermatozides entram no vulo durante a fecundao (Nesse caso, como em muitos outros, difcil dar crdito ao cientista que descobriu um importante fenmeno biolgico. Afinal, o descobridor do espermatozide, Leeuwenhoek, havia pensado que o espermatozide era o agente da fertilizao. Outros antecessores de Newport eram da mesma opinio, mas foi Newport quem fez as primeiras observaes convincentes. Em 1841, Klliker estudou a histologia dos testculos verificando que algumas das clulas testiculares eram convertidas em espermatozides. Os espermatozides tinham uma aparncia to estranha que no eram considerados clulas. No entanto, quando se pde demonstrar que eles se originavam de clulas tpicas, sua verdadeira natureza tornou-se evidente. Os espermatozides passaram ento a ser considerados como clulas altamente modificadas. Vejamos o que se pode concluir dessa anlise: 1. Os gametas so a nica ligao fsica entre as geraes, pelo menos em muitos organismos e possivelmente em todos. 2. Portanto, os gametas devem conter toda a informao hereditria. 3. Uma vez que vulos e espermatozides so clulas, toda informao hereditria precisa estar contida nestas clulas sexuais. Portanto, a base fsica da herana so as clulas sexuais. Isto no permite concluir que todas as clulas contenham informao hereditria. Poderamos ainda pensar que os gametas so clulas especializadas onde os fatores responsveis pela herana, talvez as gmulas, entram. Ns ainda necessitamos de uma segunda informao: Qual a origem das clulas?
Omnis cellula e cellula

A diviso celular foi observada em 1835, mas, nessa poca, no se concluiu que fosse um fenmeno geral. Schwann, por exemplo, acreditava que as clulas podiam surgir espontaneamente por aglutinao de substncias amorfas. Essa hiptese assumia que a origem das clulas um evento episdico no

ciclo de vida dos organismos. Se isso fosse verdade, a unidade da hereditariedade seria o organismo todo e no a clula. A hiptese de Schwann sobre a origem das clulas foi logo rejeitada, uma vez que a diviso celular estava sendo observada com freqncia em uma variedade de organismos e em diferentes pocas do desenvolvimento. Mais e mais investigadores comeavam a suspeitar que a diviso celular era o nico mecanismo para a produo de novas clulas. Essa foi uma hiptese muitssimo difcil de se provar acima de qualquer suspeita. Os microscpios e as tcnicas para se estudar as clulas, no comeo do sculo XIX, eram muito inadequados e foi preciso muita observao em diferentes tipos de organismos e de tecidos antes que Rudolph Virchow pudesse, em 1855, cunhar sua famosa frase omnis cellula e cellula (toda clula vem de clula) e que ela fosse amplamente aceita. Em uma conferncia proferida em 1858 ele apresentou a idia de que uma clula s surge de outra clula pr-existente. claro que nem todos concordaram com a idia de Virchow de que todas as clulas e todos os organismos originavam-se de clulas e de organismos pr-existentes. Muitos pesquisadores continuavam a acreditar que clulas podiam se originar de novo e apresentavam o que pareciam ser observaes acuradas para provar isso. Alguns acreditavam at mesmo que organismos completos podiam se originar de novo. Pasteur e a aceitao geral de que gerao espontnea no pode ocorrer ainda estavam no futuro. Mesmo assim, as duas hipteses apoiadas por Virchow foram testadas em um nmero crescente de pesquisas e, gradualmente, elas se estabeleceram como uma verdade acima de qualquer suspeita. No restando, portanto, dvida alguma de que a hereditariedade est baseada na continuidade celular, podemos trabalhar agora com a hiptese de que toda informao hereditria est contida no apenas nas clulas germinativas mas tambm, muito provavelmente, nas clulas a partir das quais elas se formam e em todas elas at o zigoto. Igualmente possvel a hiptese de que todas as clulas contenham a informao hereditria necessria para o desenvolvimento do indivduo e sua transmisso, via clulas sexuais, para a gerao seguinte.

O DESENVOLVIMENTO TECNOLGICO E A CITOLOGIA

Durante a maior parte da histria da humanidade as pessoas se basearam quase que inteiramente em seus rgos dos sentidos para obter informaes sobre o ambiente. Cada um de nossos rgos sensoriais detecta apenas uma pequena poro da ampla gama de estmulos possveis. Nossos olhos, por exemplo, s conseguem responder poro do espectro eletromagntico entre o violeta e o vermelho de modo que s conseguimos ver os comprimentos de onda entre essas duas cores. Para detectar comprimentos de onda menores, como luz ultra-violeta, raiosX e raios csmicos, ou comprimentos de onda maiores, como luz infra-vermelha e ondas de rdio, precisamos utilizar instrumentos especiais. A olho nu no conseguimos visualizar em detalhe nem mesmo objetos em movimentao rpida. As lminas de um ventilador em movimento rpido so vistas como um crculo contnuo e uma bala que sai de um rifle totalmente invisvel para ns. Tambm no conseguimos ver objetos muito pequenos. A aparente uniformidade de uma ilustrao com meios-tons resulta do fato de os pontos individuais estarem to juntos que o olho humano no consegue distinguilos. Os faris de um automvel aparecem como um nico ponto de luz at uma certa distncia; medida que o automvel se aproxima, somos capazes de resolver o ponto nico de luz em dois. O poder de resoluo do olho humano, ou seja, sua capacidade de distinguir dois pontos muito prximos, da ordem de 100 micrmetros a uma distncia normal de leitura; a maioria das pessoas com viso normal distingue dois objetos separados por um espao de um milmetro a uma distncia de 10 metros. Uma afirmao mais geral que o olho humano pode distinguir dois objetos separados por um arco de 1 minuto. Esse valor foi determinado por Robert Hooke que estava preocupado em saber qual seria a menor distncia entre duas estrelas para que elas fossem vistas como dois objetos separados. Quando elas estavam a uma distncia menor do que um arco de 1 minuto, a maioria das pessoas as via como um nico ponto de luz. Algumas pessoas podem ver melhor do que isso, mas o poder mximo de resoluo de nosso olho de 26 segundos de arco.

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Quase todas as clulas so muito pequenas para serem vistas a olho nu, de modo que a Citologia no foi possvel, nem mesmo teoricamente, antes da inveno do microscpio o que ocorreu provavelmente na ltima dcada do sculo XVI. Um tempo relativamente longo se passou entre essa inveno e 1663, quando Hooke fez a demonstrao daqueles pedaos de cortia para os membros da Royal Society. Na verdade, foram poucos os trabalhos srios e contnuos com microscpios antes do sculo XIX. Durante a maior parte de sua histria, os microscpios no passaram de brinquedos de adultos. O pequeno tamanho das clulas no o nico problema que dificulta seu estudo. A maioria dos animais e de seus tecidos opaca e, uma vez que a observao atravs do microscpio composto mais efetiva quando os objetos so iluminados com luz transmitida, o objeto a ser estudado precisa ser muito fino ou cortado em fatias bem finas de modo que a luz possa atravess-lo. Imagine tentar cortar fgado, por exemplo, em fatias com cerca de 10 micrmetros de espessura, para que fosse possvel estud-lo no microscpio. Alm da quase impossibilidade de se fazer isso, as clulas hepticas, constitudas principalmente de gua, iriam secar rapidamente, tornando-se uma massa enrugada. Esse um problema especial com as clulas animais que no possuem uma parede de suporte como as clulas das plantas. Mtodos muito especiais tiveram que ser desenvolvidos pelos microscopistas do incio do sculo XIX quando eles quiseram aprender sobre a natureza celular dos organismos e, mais tarde, sobre a estrutura interna das prprias clulas. Tornou-se uma prtica comum tentar preservar os tecidos de tal maneira que a estrutura de suas clulas permanecesse intacta e que eles pudessem ser cortados em fatias finssimas. O primeiro passo foi a fixao. Ela consistia em tratar o material com lcool, com formaldedo, ou com solues de cido pcrico, de bicromato de potssio, de cloreto de mercrio ou de tetrxido de smio. Essas substncias matam e endurecem as clulas, em geral, por coagular suas protenas. Esperava-se, claro, que isso acontecesse de tal forma que as partes das clulas continuassem a guardar uma certa semelhana com as da clula viva. O tecido fixado podia ento ser embebido em parafina para ganhar sustentao e ser fatiado com

lminas cortantes ou em um instrumento construdo para essa finalidade o micrtomo. Mesmo essas fatias finssimas podiam revelar muito pouco; as clulas e seus contedos internos eram indistinguveis. Mas aqueles microscopistas inventivos tentavam de tudo e logo descobriram que alguns corantes tingiam certas partes das clulas mas no outras. Em 1858, Gerlach descobriu que uma soluo diluda de carmim corava mais intensamente o ncleo do que o citoplasma das clulas. Essa substncia era obtida dos corpos secos da fmea de um inseto (Coccus cacti), conhecido popularmente como cochonilha-do-carmim, que vive em cactos na Amrica Central e sudoeste dos Estados Unidos. Em 1865, Bhmer descobriu que a hematoxilina, extrada do tronco de uma rvore (Haematoxylon campechianum) da Amrica Central, tambm tinha maior afinidade pelo ncleo do que pelo citoplasma. Mais tarde foi sintetizada uma grande variedade de anilinas para a indstria txtil e, entre 1875 e 1880, muitas delas mostraram-se teis para corar clulas. Uma dessas anilinas era a eosina, que mostrou ter uma grande afinidade por protenas citoplasmticas. Um procedimento de colorao citolgica corriqueiro at hoje usa hematoxilina e eosina (HE) e cora o ncleo em azul e o citoplasma em laranja. Da mesma forma, houve melhoria dos microscpios disponveis para pesquisas citolgicas, principalmente no final do sculo XIX. Muitas delas foram introduzidas por Ernst Abbe (1840-1905) e pela indstria ptica Zeiss em Jena, na Alemanha. Abbe foi, durante a maior parte de sua vida, professor de Fsica na Universidade em Jena e o principal projetista de lentes da companhia Zeiss, da qual se tornou dono. Em 1878, ele desenvolveu a objetiva de imerso em leo e, em 1886, a objetiva apocromtica. Essas melhorias nas mos de um microscopista habilidoso tornava possvel a obteno de ampliaes de at 2500 vezes. O microscpio fotnico estava chegando ao limite de seu poder de resoluo terico. Esse limite imposto pela prpria natureza da luz; isto , dois objetos s podem ser resolvidos se a distncia entre eles for, pelo menos, igual metade do comprimento da onda utilizado. Oportunidades adicionais para se estudar a estrutura fina das clulas estavam ainda para vir com a inveno do microscpio de contraste-defase e do microscpio eletrnico, no sculo XX. 19

Veremos a seguir como os microscopistas do ltimo tero do sculo XIX foram capazes de usar a tecnologia disponvel na poca e estabelecer, como uma hiptese altamente provvel, que a base fsica da hereditariedade est no ncleo da clula, ou mais especificamente nos cromossomos. No devemos ficar imaginando que esses investigadores no faziam outra coisa seno examinar clulas vivas e fixadas com o melhor equipamento ptico disponvel, descrevendo do modo mais preciso o que viam. Um problema constante era se uma dada estrutura observada em uma preparao citolgica refletia ou no algo presente na clula viva, ou se era um simples artefato resultante do drstico tratamento a que as clulas eram submetidas para poderem ser observadas no microscpio. Uma preparao citolgica realmente reflete a estrutura de uma clula viva? A resposta No muito; mas se o tratamento produz sempre o mesmo resultado possvel imaginar como eram as preparaes quando vivas. Apesar disso, nenhuma descoberta importante em Citologia no sculo XIX foi aceita de imediato. As observaes eram repetidas e as concluses originais confirmadas por uns e contestadas com veemncia por outros. Uma interpretao errada podia fazer com que muitos citologistas perdessem meses na tentativa de repetir as observaes. Aconteciam debates interminveis sobre a estrutura fina do protoplasma uma vez que, como era admitido, estava-se olhando para a base fundamental da vida. Muitos citologistas acreditavam que o protoplasma fosse granular, ou um retculo fibroso, ou alveolar (composto de gotas) ou alguma combinao disso. A Citologia como um caminho para o conhecimento, especialmente no sculo XIX, nos mostra que a cincia no progride de maneira ordenada mas por meio de testes e retestes constantes das observaes, dos experimentos e das hipteses. Longe de ser uma linha direta em direo verdade, esse caminho assemelha-se mais quele retculo que alguns viam como a estrutura bsica do protoplasma. (Devemos ressaltar que o termo protoplasma raramente utilizado nos dias de hoje. Uma vez que ele significa nada mais do que substncia viva, Hardin [1956] sugeriu que poderamos passar sem ele.)

O QUE EXISTE NAS CLULAS?

Durante a ltima metade do sculo XIX, a hiptese de que os animais e plantas so compostos somente de clulas e produtos celulares estava estabelecida como uma verdade acima de qualquer suspeita nas mentes da maioria dos microscopistas competentes. Ns podemos falar, ento, da teoria celular, usando o termo teoria como um corpo completo de dados, hipteses e conceitos relativos a um importante fenmeno natural. At hoje a teoria celular o mais importante conceito relacionado com a estrutura de animais e plantas e no sculo XX ele foi sendo gradualmente aceito tambm como o mais importante conceito relativo ao funcionamento dos organismos. Essa enorme importncia da teoria celular decorre do fato de ela estabelecer que as clulas so as unidades bsicas de estrutura e funo, que elas so as menores unidades capazes de ter vida independente, isto , so capazes de usar substncias obtidas do meio para manter e produzir o estado vivo. A clula o denominador comum da vida. Existia uma outra razo importante para se estudar as clulas: a anlise dos nveis mais simples de organizao contribuem para o entendimento dos nveis mais complexos. As interaes das substncias qumicas so melhor entendidas quando se conhece sua estrutura molecular. Os movimentos do corpo humano podem ser estudados em muitos nveis. Pode-se observar e descrever os complexos movimentos de um bailarino ou de um arremessador de beisebol. A compreenso aumenta quando se obtm informaes sobre os diversos msculos e seus locais de ligao, que tornam os movimentos possveis. Outros tipos de entendimento surgem quando se estuda os msculos no nvel molecular. E, finalmente, mais informaes ainda so obtidas quando se aprende sobre a atividade da miosina, da actina e de outras molculas que participam da movimentao dos msculos. O conhecimento obtido em cada nvel de organizao contribui para um entendimento do fenmeno como um todo, enquanto cada nvel mantm seu prprio valor. Entender a arte de um bailarino ou de um esportista meramente com o

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conhecimento sobre actina e miosina seria to impossvel quanto predizer as propriedades da gua a partir do conhecimento sobre os elementos hidrognio e oxignio. No entanto, pode-se conhecer melhor os nveis mais complexos se conhecermos os mais simples. Assim, os bilogos do sculo XX j pensavam que poderiam saber mais sobre a vida se conhecessem melhor as clulas. Quando examinavam as clulas, aqueles citologistas pioneiros encontravam todo tipo de esferas, de grnulos e de fibras. Como seria possvel determinar qual dessas estruturas teria um papel na hereditariedade? Ou melhor, como seria possvel determinar a funo de qualquer estrutura presente nas clulas? Essa uma questo difcil e os citologistas daquela poca no conseguiam respond-la. Eles no podiam fazer outra coisa seno investigar as clulas de modo aleatrio. Este foi um estgio necessrio no desenvolvimento da Citologia a identificao de estruturas nas clulas e, quando possvel, descobrir alguma coisa sobre seu comportamento. Aparentemente se pesquisavam clulas de todo animal e planta disponvel procura de exemplos de estruturas celulares e, um a um, todos os reagentes disponveis nas estantes dos qumicos foram colocados sobre as clulas e suas conseqncias observadas em geral matavam as clulas. Esse perodo da Citologia foi de procura e destruio. O ncleo efmero Como mencionado anteriormente, as dificuldades em se analisar clulas vivas fizeram das preparaes fixadas e coradas o material ideal de estudo. Nesse tipo de preparao, a estrutura mais proeminente o ncleo descrito por Brown. Muitos corantes, especialmente os corantes bsicos como o carmim e a hematoxilina, coravam o ncleo profundamente; isto, juntamente com a aparente presena universal do ncleo, sugeria que ele tivesse um papel importante. Mas qual seria a origem do ncleo da clula? Levou mais de meio sculo de observaes e experimentaes por parte de numerosos pesquisadores para que essa questo fosse respondida. Em 1835, Valentin sugeriu que o ncleo seria formado pela precipitao de substncias no interior da clula. Trs anos mais tarde, Schleiden e, em seguida, Schwann tambm sugeriram que o ncleo podia se originar de novo. At por volta 21

de 1870, alguns pesquisadores famosos acreditavam que pelo menos alguns ncleos podiam ter uma origem no-nuclear. Nessa mesma poca, outros pesquisadores igualmente competentes estavam clamando que todos os ncleos surgiam de ncleos prexistentes. Diversos processos foram sugeridos em geral alguma forma de partio em dois ou fragmentao, um mecanismo que mais tarde foi denominado amitose. No havia nenhuma razo, claro, porque os ncleos teriam de surgir por apenas um tipo de mecanismo. Considerando a enorme variedade de fenmenos naturais, no seria surpresa se houvesse diversas maneiras de surgimento de ncleos. No entanto, os cientistas procuram regularidades na natureza e seria mais satisfatrio intelectualmente se houvesse um mecanismo constante para a origem do ncleo.

A DESCOBERTA

DA DIVISO

CELULAR

Em 1873, A. Schneider publicou o que agora pode ser tomado como a primeira descrio razovel das complexas alteraes nucleares, hoje chamadas de mitose, que ocorrem durante a diviso da clula. Neste ano, Otto Btschi e Hermann Fol fizeram descries semelhantes. A descrio de Schneider foi a mais completa; seu objetivo era descrever a morfologia de Mesostoma sp., um platelminto. Quase todo seu trabalho dedicado estrutura desse verme mas, sendo um observador cuidadoso, ele descreveu tudo o que viu. A fertilizao em Mesostoma sp. interna e o incio do desenvolvimento ocorre em um tero. As ilustraes do que ele viu esto mostradas na figura 3. Os primeiros desenhos mostram o ovo rodeado por clulas foliculares. Na regio bem central est o pequeno ncleo com seu pequeno nuclolo. As estruturas espirais so espermatozides. O ovo a rea clara central da ilustrao e os glbulos menores ao seu redor so as clulas foliculares, que no foram representadas nos desenhos seguintes. Pouco antes da clula se dividir o limite do ncleo se torna indistinto. Schneider, no entanto, verificou que com a adio de um pouco de cido actico ele se tornava visvel, apesar de dobrado e enrugado. Mais tarde o nuclolo desaparecia e tudo o que restava do ncleo era uma rea clara na regio central da clula.

Figura 3. Ilustraes de Schneider (1873) das alteraes nucleares durante a clivagem do ovo de Mesostoma. esquerda, desenho de um ovo (zona clara central, onde se v o ncleo com um nuclolo) rodeado por clulas foliculares. As outras figuras mostram os filamentos, hoje chamados de cromossomos, e seus movimentos durante a diviso da clula.

No entanto, o tratamento com cido actico mostrava uma massa de filamentos delicados e curvos. O segundo desenho mostra esses filamentos, os cromossomos (um termo que s seria proposto em 1888, por Waldeyer) alinhados em uma placa equatorial. A quantidade de filamentos parecia

aumentar e quando a clula se dividia eles iam para as clulas-filhas. O que algum faria com essas observaes? A resposta est longe de ser clara. Se no era possvel ver os filamentos nas clulas vivas e, se eles apareciam repentinamente quando as clulas

F 22

Figura 4. Ilustraes de Flemming de mitoses em clulas fixadas e coradas de embrio de salamandra. A.) Duas clulas em intrfase: no existem cromossomos visveis. B.) Clula em prfase: os nuclolos j desapareceram, mas a membrana nuclear continua intacta; o citoplasma no est mostrado. C.) Clula em incio de metfase: a membrana nuclear desapareceu e os centrossomos se separaram. D.) Uma preparao de excelente qualidade, onde se v os cromossomos metafsicos duplos, isto , compostos por duas cromtides. E.) As cromtides se separam e se movem para os plos do fuso. F.) Clula em final de diviso com os cromossomos dos ncleosfilhos sendo envolvidos pela membrana nuclear. (Flemming, 1882)

Figura 5. Ilustraes de Flemming de mitose em clulas vivas de larva de salamandra. Os desenhos esto organizados em seqncia, comeando com a prfase, no canto superior esquerda, e terminando com duas clulas, na fileira inferior. Os dois ltimos desenhos mostram os cromossomos vistos do plo da clula e uma telfase em vista lateral, respectivamente. O desenho mais direita na segunda fileira mostra que os cromossomos esto duplos. (Flemming, 1882)

eram tratadas com cido actico, no seria razovel pensar que eles fossem um artefato? No entanto, o fato de os filamentos serem observados repetidamente, e de eles parecerem sofrer estranhos movimentos, sugeria que j estivessem presentes na clula viva, numa forma invisvel. Flemming teve sucesso em determinar que os eventos nucleares observados na clula em diviso em materiais fixados e corados tinham sua contrapartida na clula viva. Apesar de no ter descoberto a mitose, devemos a ele mais do que a qualquer outro o conceito de mitose que temos hoje; apenas detalhes do processo foram adicionados sua descrio. (Fig. 4 e 5) O sucesso de Flemming foi conseguido graas a alguns fatores: material que ele selecionou para seu estudo; ter sido cuidadoso em procurar nas clulas vivas as estruturas observadas nas clulas fixadas e coradas; ter sua disposio microsc23

pios muito melhores do que os existentes anteriormente. O uso de clulas vivas, alm de dar a confiana de que o observado era real e no artefato, permitiu tambm determinar a seqncia dos eventos. As fases da mitose Costuma-se dizer que um ncleo que no est sofrendo diviso encontra-se em repouso. Esse um termo infeliz pois sugere inatividade e hoje ns sabemos que a maior atividade fisiolgica do ncleo acontece durante esse perodo. Flemming no viu cromossomos nos ncleos em repouso de clulas vivas. Esses ncleos pareciam no ter nenhuma estrutura interna. Quando essas clulas eram fixadas e coradas via-se que seus ncleos continham uma rede densa com grande afinidade por certos corantes, alm de um ou dois grnulos esfricos, os nuclolos.

Mudanas no ncleo so as primeiras evidncias que a mitose est a caminho. No ncleo vivo, aparentemente desprovido de estruturas, aparecem longos e delicados fios. Quando eles podem ser vistos, o comeo da prfase. (A mitose um processo contnuo; ela dividida em fases pelos citologistas apenas com o intuito de facilitar sua descrio.) Esses fios se condensam em cromossomos que se posicionam no meio da clula na metfase, poca em que a membrana nuclear j desapareceu. Em clulas coradas podese ver que os cromossomos esto presos a um elaborada estrutura fibrosa o fuso. Clulas coradas podem mostrar tambm a presena de minsculos grnulos nas extremidades do fuso os centrolos. Elas podem mostrar tambm um outro conjunto de fibras, os raios astrais, que irradiam dos centrolos. Durante a anfase das clulas vivas, os cromossomos se separam em dois grupos que se movem atravs do fuso para plos opostos da clula. Quando os cromossomos atingem as extremidades do fuso, a telfase. Os cromossomos nas clulas vivas se tornam cada vez menos distintos e a membrana nuclear se refaz. O ncleo est de novo em repouso. O que se pode concluir desse processo? bvio que todas as estruturas celulares precisam ser reproduzidas para que as clulasfilhas sejam idnticas clula-me. Flemming foi capaz de explicar como isso acontece para os cromossomos. Se os cromossomos de uma clula vo ser divididos igualmente entre as clulasfilhas, eles precisam dobrar em nmero em algum estgio do ciclo celular. Flemming observou que, quando os cromossomos aparecem pela primeira vez no incio da prfase eles j esto duplos; assim, em algum momento entre seu desaparecimento na telfase e seu reaparecimento na prfase, cada cromossomo deve ter se duplicado. Hoje, claro, ns consideramos os cromossomos como estruturas permanentes nas clulas mesmo sendo eles visveis apenas na mitose. Ns tambm reconhecemos a individualidade dos cromossomos, isto , que eles existem em geral em pares homlogos, cada par contendo um conjunto especfico de genes. Essas concluses poderiam ter sido tiradas a partir das observaes de Flemming? Na verdade no. E as hipteses a seguir, poderiam ser refutadas? Voc poderia argumentar o seguinte: como o processo mittico assegura que cada clula-filha

receba seu lote de cromossomos isto deve indicar, sem muita dvida, que um mecanismo to elaborado e preciso para duplicao e distribuio de importncia fundamental. E o que pode ser mais importante do que assegurar que os elementos controladores da hereditariedade e da vida de cada clula cheguem at elas? Mas algum pode responder que, sendo as clulas-filhas idnticas clula-me, todos os produtos celulares so reproduzidos. Pode-se argumentar que mero acidente que o processo de reproduo e distribuio seja mais facilmente observado nos cromossomos. No existe razo, portanto, para no assumirmos que cromossomos, membranas celulares e todos aqueles grnulos e glbulos observados no citoplasma possam ter igual chance de estarem envolvidos na hereditariedade.

DESCOBERTA DA MEIOSE

Flemming e muitos outros citologistas seus contemporneos estavam considerando que as divises mitticas do ncleo aconteciam em toda diviso celular. A reunio de inmeras observaes em clulas de um grande nmero de espcies de plantas e animais permitia que se fizesse esta afirmao geral. Note que isso um bom exemplo de induo. Ns podemos agora usar essa afirmao geral como uma hiptese a ser testada. Isto , ns podemos partir para um raciocnio dedutivo. Por exemplo: se a hiptese de que o ncleo sempre divide por mitose for verdadeira, ento o nmero de cromossomos deve dobrar a cada gerao. Isso seria inevitvel. Como os ncleos do vulo e do espermatozide se unem na fertilizao, caso eles se formassem por mitose, o zigoto deveria ter duas vezes o nmero de cromossomos de seus genitores. Mas isso no acontece: Flemming e outros citologistas estavam cientes de que o nmero de cromossomos parecia ser o mesmo em todos os indivduos e em todas as geraes de uma espcie. Obviamente existe um problema com essa hiptese. Deveria haver algum mecanismo que reduziria o nmero de cromossomos antes ou durante a fertilizao. Seria possvel supor que, quando os ncleos do vulo e do espermatozide se fundiam na fertilizao, os cromossomos tambm se fundiriam uns com os outros, sendo que metade de cada um deles seria destruda. Uma 24

Fig. 33

Fig. 36

Fig. 42

Fig. 43

Fig. 45

Fig. 46

Figura 6. Ilustraes da meiose em fmea de Ascaris. Anteriormente s etapas mostradas nos desenhos, os cromossomos haviam se duplicado e se emparelhado, formando duas ttrades. Estas se separaram na primeira diviso meitica e duas dades foram para o primeiro corpsculo polar, enquanto que as outras duas permaneceram nos vulos. Isto mostrado no desenho 33 de Boveri. No desenho 36, as dades esto em rotao antes da sua separao na segunda diviso meitica. O segundo corpsculo polar pode ser visto na posio correspondente das duas horas. Os desenhos 42 e 43 mostram as dades se separando. No desenho 45, a segunda diviso j terminou e o segundo corpsculo polar com seus dois cromossomos aparece na superfcie do vulo; o primeiro corpsculo polar est acima dele. Os dois cromossomos no vulo esto para formar o pr-ncleo feminino. O desenho 46 mostra o primeiro corpsculo polar na posio correspondente das 3 horas, o segundo corpsculo polar na superfcie do vulo, na posio correspondente das 12 horas, o pr- ncleo.

hiptese alternativa que ocorresse reduo do est contida no ncleo das clulas germinativas, nmero de cromossomos durante a formao dos no filamento enovelado no interior do ncleo [alguns citologistas pensavam que os vulos e dos espermatozides nas gnadas. cromossomos formavam um fio contnuo ou O significado dos corpsculos polares. espirema durante a interfase], que em certos Vrios pesquisadores tinham descrito, em perodos aparece na forma de alas ou barras diversas espcies animais, a eliminao de mins- [estes eram os cromossomos nos estgios culas esferas na regio do plo animal do vulo, mitticos]. Ns podemos, alm disso, considerar por ocasio da fertilizao. Essas esferas logo que a fertilizao consiste no fato de um nmero desapareciam e, como pareciam no ter funo igual de alas [cromossomos] de cada genitor alguma, foram denominadas corpsculos polares. ser colocado lado a lado, e que o ncleo do zigoto Observou-se tambm que na partenognese for- composto desta maneira. No que diz respeito a mava-se um nico corpsculo polar, mas que nos esta questo, no tem importncia se as alas vulos fertilizados eles sempre pareciam ser dois. [cromossomos] dos dois pais se misturam mais Em algumas espcies, um corpsculo era formado cedo ou mais tarde ou se permanecem separadas. antes da fertilizao e um segundo, depois da A nica concluso essencial necessria nossa entrada do espermatozide. Em outras espcies, hiptese que a quantidade de substncia os dois corpsculos polares eram formados aps hereditria fornecida por cada um dos genitores seja igual ou aproximadamente igual entre si. a fertilizao. (Fig. 6) Em 1887, August Weismann props uma Se for assim, as clulas germinativas dos hiptese para explicar a constncia da quanti- descendentes contero os germoplasmas de amdade de material hereditrio de uma gerao bos os pais unidos, isso implica que tais clulas para outra. Com base na observao de muitos s podem conter metade do germoplasma citologistas, ele diz: pelo menos um certo paterno, como estava contido nas clulas gerresultado sugere que exista uma substncia minativas do pai, e metade do germoplasma hereditria, um material portador de materno, como estava contido nas clulas tendncias hereditrias, e que esta substncia germinativas da me. 25

Weismann acreditava que a reduo metade do material hereditrio da me, necessria sua hiptese, ocorria quando o segundo corpsculo polar era formado. Diz ele: Minha opinio sobre o significado do segundo corpsculo polar , em poucas palavras, esta: a reduo do germoplasma acontece na sua formao, uma reduo no s em quantidade, mas sobretudo na complexidade de sua constituio. Por meio da segunda diviso nuclear, evita-se o acmulo de diferentes tipos de tendncias hereditrias ou germoplasmas que, sem isso, seria necessariamente produzido em excesso pela fertilizao. Com o ncleo do segundo corpsculo polar so removidos do vulo tantos tipos diferentes de idioplasmas [um termo usado na poca para designar o material hereditrio] quantos sero posteriormente introduzidos pelo ncleo do espermatozide; assim, a segunda diviso do ncleo do vulo serve para manter constante o nmero de diferentes tipos de idioplasmas, que compem o germoplasma durante o curso das geraes. E, se a constncia mantida de gerao a gerao, Weismann supe que um processo similar precisaria ocorrer no macho. Ele diz: Se o nmero de germoplasmas ancestrais contido no ncleo do vulo destinado para a fertilizao deve ser reduzido metade, no pode haver dvida que uma reduo semelhante tambm deve ocorrer, em alguma poca e de alguma maneira, nos germoplasmas das clulas germinativas do macho. Na poca em que essas surpreendentes predies foram feitas (surpreendentes porque se mostraram essencialmente corretas) os citologistas estavam encontrando evidncias que as apoiavam. A observao mais importante estava sendo feita no verme nematide Ascaris, que tem a grande vantagem de possuir poucos cromossomos e de grande tamanho, o que os torna fceis de serem estudados. Meiose na fmea de Ascaris Na penltima dcada do sculo XIX, foram feitas importantes contribuies para o entendimento da formao dos gametas e da fertilizao. Trs citologistas merecem referncia especial: Edouard van Beneden (1846-1912), Theodor Boveri (1862-1915) e Oskar Hertwig (18491922). Eles descobriram que ocorrem duas

divises celulares diferentes durante a formao dos gametas, as quais resultam na reduo do nmero de cromossomos metade como Weismann previu que deveria acontecer. Estas duas divises so divises mitticas modificadas e foram denominadas divises meiticas os nomes so to parecidos que continuam a causar problema para os estudantes at hoje. Na descrio que se segue, utilizaremos a terminologia moderna. O ovrio de Ascaris comea a se formar no incio do desenvolvimento e o extraordinrio aumento no nmero de suas clulas conseqncia de divises mitticas. Cada ncleo tem quatro cromossomos, o nmero diplide, e pode-se notar que cada cromossomo aparece duplo j no incio da prfase. Nessa fase, eles esto formados por duas cromtides, indicando que eles se duplicaram antes do incio da diviso. Na mitose, as oito cromtides so divididas entre as duas clulasfilhas, o que resulta em quatro cromossomos em cada uma delas. medida que a fmea de Ascaris amadurece, seu ovrio passa a conter clulas aumentadas, as ovognias, ainda com o nmero diplide de cromossomos. A clula reprodutiva feminina permanece diplide at ser libertada do ovrio e penetrada pelo espermatozide. somente ento que a meiose comea e os corpsculos polares so formados. A figura 6 (de Boveri, 1887) mostra o que acontece. No comeo da meiose, cada um dos quatro longos cromossomos da ovognia encurta e toma o aspecto de uma pequena esfera. Estes quatro cromossomos ento se juntam em pares, um processo conhecido como sinapse. Quando isso ocorre, cada um dos cromossomos j est duplicado, pois a duplicao ocorreu na intrfase precedente. Assim, a clula em incio de meiose ter dois grupos com quatro cromtides cada. Cada um desses grupos denominado ttrade. As ttrades se separam em uma diviso celular altamente desigual que resulta em um pequeno corpsculo polar e uma clula grande, o futuro vulo. Cada uma dessas duas clulas contm dois cromossomos duplicados. Portanto, cada ttrade foi dividida em duas dades. Na segunda diviso meitica, observa-se uma caracterstica essencial da meiose: os cromossomos no so duplicados. Ento, cada dade se liga ao fuso e, na anfase, suas duas cromtides 26

vo para plos opostos. A clula se divide novamente de modo desigual. O resultado um minsculo corpsculo polar com dois cromossomos e um grande vulo tambm com dois cromossomos. Assim, no decorrer das duas divises que compem a meiose, o nmero diplide de quatro cromossomos da clula feminina foi reduzido ao nmero monoplide de dois cromossomos. A hiptese de Weismann provou ser verdadeira, pelo menos para as fmeas de Ascaris. Meiose no macho de Ascaris A previso de Weismann para os machos tambm mostrou-se correta. Quando os testculos foram estudados, verificou-se que, durante o incio do

desenvolvimento, as clulas aumentam em nmero por divises mitticas, isto , as clulas que se originam desse processo tem o nmero diplide de quatro cromossomos (Bauer, 1893). No entanto, no testculo maduro, as duas ltimas divises antes de as clulas se diferenciarem em espermatozides so diferentes. quando ocorrem as divises meiticas no macho. No que se refere aos cromossomos, os eventos so os mesmos que os da fmea, mas quando se considera a clula como um todo, existem diferenas entre as divises meiticas de macho e de fmea. (Fig. 7) Durante a meiose do macho, os quatro cromossomos j duplicados se juntam dois a dois, formando dois pares, ou duas ttrades. Na

Clulas que iro formar espermatozides possuem 4 cromossomos, o nmero diplide.

Em Ascaris, a fecundao que desencadeia a meiose feminina.

Os cromossomos emparelhados formam ttrades, cada uma com 4 cromtides. Os cromossomos homlogos se separam na primeira diviso da meiose.

Os cromossomos homlogos separamse na primeira diviso da meiose.

Cada clula-filha da primeira diviso contm duas dades. A formao do segundo glbulo polar deixa o vulo com um nmero No h duplicao haplide de cromossomos. cromossmica antes da segunda diviso da meiose e as duas cromtides de cada dade se separam.

Cada pr-ncleo contribui com dois cromossomos para o zigoto, restabelecendo o nmero diplide da espcie.

Cada uma das clulas originadas na meiose diferencia-se em um espermatozide.

Figura 7. Representao esquemtica da meiose masculina, esquerda, e da meiose feminina, direita em ascaris de cavalos.

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No incio da meiose os cromossomos homlogos se emparelham.

No incio da meiose, ocorre o emparelhamento dos cromossomos homlogos.

Os cromossomos emparelhados formam ttrades, cada uma com 4 cromtides.

O primeiro glbulo polar e o futuro vulo contm duas dades cada.

Os ncleos de origem paterna e materna se aproximam um do outro.

deador do desenvolvimento do ovo, foi descoberto por J. L. Prvost e J. B. Dumas em 1824. No entanto, o real papel do espermatozide no foi estabelecido nesse trabalho. Como relatado anteriormente, foi George Newport (1854) quem demonstrou que o espermatozide penetra no vulo das rs. Mas o que acontece ento? Ascaris mostrou-se um material muito bom para o estudo dos detalhes da fertilizao, novamente devido ao fato de possuir poucos e grandes cromossomos. Van Beneden e Boveri descreveram o processo em detalhe. (Fig.8) A figura 8 mostra desenhos de Boveri, publicados em 1888. A primeira ilustrao (A) de um corte de um ovo logo aps a entrada do espermatozide. O pr-ncleo paterno aparece no quadrante inferior direito. As duas massas irregulares fortemente coradas so os dois cromossomos dois o nmero haplide. A estrutura formando uma cpsula dobrada imediatamente acima do pr-ncleo paterno o acrossomo, que a parte da cabea do espermatozide composta por material do aparelho de Golgi. A massa granular escura no centro do vulo o centrossomo, que tambm se origina Fertilizao e restabelecimento do nmero do espermatozide. Existem quatro corpos diplide de cromossomos escuros, aproximadamente na posio corresponO fato bsico da fertilizao, de que o esper- dente das 12 horas; os dois superiores so os matozide e no o lquido seminal o desenca- cromossomos do segundo corpsculo polar. Os primeira diviso meitica os cromossomos de cada par se separam, indo uma dade (cromossomo duplicado) para cada plo. No entanto, ao contrrio da primeira diviso meitica da fmea, no macho so produzidas duas clulas de igual tamanho. Na segunda diviso meitica no h replicao cromossmica, as dades se dividem e cada clula-filha termina com dois cromossomos. Assim, a partir de cada clula diplide original, com quatro cromossomos, formam-se quatro clulas, cada uma com dois cromossomos, o nmero hplide. No h outras divises dessas clulas e cada uma se diferencia em um espermatozide. Uma diferena fundamental entre a mitose e a meiose que na mitose h uma duplicao de cada cromossomo para cada diviso celular; na meiose h somente uma duplicao de cada cromossomo para duas divises sucessivas. Ento, a mitose um mecanismo que mantm a constncia do nmero cromossmico nas divises celulares enquanto a meiose reduz esse nmero metade.

Figura 8. Ilustraes de Boveri da fertilizao em Ascaris Veja explicao no texto. (Boveri, 1888)

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no entanto, meiticas e no mitticas. Durante estas duas divises, as clulas se dividiam duas vezes mas os cromossomos se replicavam somente uma vez. Essas divises celulares eram iguais, isto , produziam, cada uma delas, duas clulas de mesmo tamanho. Isso resultava em quatro clulas de igual tamanho, cada uma com dois cromossomos, o nmero haplide. As quatro clulas, ento, se diferenciavam nos espermatozides. Depois de muitos ciclos celulares de divises mitticas, algumas das clulas ovarianas aumentavam bastante em tamanho, formando os ovcitos. Como no caso dos machos, ocorriam duas divises meiticas do material nuclear com somente uma nica replicao dos cromossomos. A primeira diviso da clula era to desigual que a maior parte do material permanecia na clula que iria originar o vulo e s uma nfima quantidade era includa no primeiro corpsculo polar. Isto se repetia na segunda diviso, produzindo um minsculo segundo corpsculo polar e um grande vulo. Todavia, os ncleos do segundo corpsculo polar e do vulo eram idnticos cada um continha um nmero haplide de dois cromossomos. A meiose em Ascaris produzia, portanto, o espermatozide monoplide e o vulo monoplide. A unio deles originava o zigoto diplide o incio de um novo verme nematide. Os processos esto sumarizados na figura 7. Estava claro pelo trabalho de van Beneden, Boveri e outros que cada genitor transmite o mesmo nmero de cromossomos ao zigoto. Alm disso, os cromossomos no ncleo materno e paterno pareciam ser idnticos. Estas duas observaes podiam ajudar a explicar o que j se acreditava h algum tempo: que a contribuio hereditria de cada genitor aproximadamente a mesma. Este era um campo de pesquisa excitante e importante e logo muitos pesquisadores estavam estudando uma grande variedade de plantas e Significado da formao dos gametas e da animais. Com poucas excees, o que se fertilizao encontrou em Ascaris mostrou-se verdadeiro para Tudo estava acontecendo como previsto por todos os outros organismos. Certamente existiam Weismann. As clulas que iriam, muitas geraes pequenas variaes, mas um estudo intenso serviu mais tarde, formar os gametas, tanto no ovrio como somente para aumentar a profundidade do nosso no testculo de Ascaris, comeavam com quatro entendimento do processo global. Um conceito cromossomos, o nmero diplide. E, estas clulas de aplicao universal havia sido descoberto. As extraordinrias observaes sobre o se dividiam repetidamente, sempre por mitose. Nos machos, as duas ltimas divises das clulas comportamento dos cromossomos na mitose, formadoras de espermatozides no testculo eram, meiose e fertilizao, feitas entre 1870 e 1890, dois de baixo so os cromossomos, em nmero haplide, do pr-ncleo materno. O segundo corpsculo polar aparece nos cortes de embries mostrados em (C) e (E). Em (B), os pr-ncleos materno e paterno j se aproximaram um do outro e seus cromossomos tornaram-se indistintos. Em (C) os cromossomos alongaram-se bastante e, embora agora saibamos que existem apenas dois cromossomos em cada pr-nucleo, isto no pode ser visto na ilustrao (este um exemplo claro da grande dificuldade enfrentada pelos citologistas para chegarem concluso de que o nmero de cromossomos de qualquer espcie constante e que os cromossomos so individualmente nicos na maioria das vezes eles pareciam to emaranhados como um prato de espaguete). Pode-se distinguir dois grnulos escuros no centrossomo: os centrolos. Em (D), os cromossomos tornaram-se distintos uma vez mais [de (B) a (C) eles estavam em um estgio modificado de repouso] e v-se dois em cada pr-ncleo. O centrossomo dividiu-se em dois, cada um deles com um centrolo no centro. Este processo continua atravs de (E). Em (F), os quatro cromossomos, dois de cada prncleo, esto alinhados no fuso e, logo depois disso, pode-se ver que cada um est duplicado, isto , composto por duas cromtides. As cromtides iro se separar para formar cromossomos independentes que vo para plos opostos da clula. A forma do aparelho mittico est bem mostrada em (F). Em cada extremidade do fuso encontra-se um minsculo centrolo, cercado por uma rea granular escura o centrossomo. Em material bem preservado, pode-se observar fibras irradiando de cada centrossomo, formando um ster. Outras fibras se estendem de um centrossomo ao outro, formando o fuso. Em (F), clula em metfase da primeira diviso embrionria com os cromossomos alinhados na placa equatorial. 29

principalmente na Alemanha, forneceram um quadro geral para a transmisso de gerao a gerao das estruturas fundamentais responsveis pela herana. Pode-se argumentar, com razo, que esses estudos no forneceram qualquer evidncia crucial de que os cromossomos seriam, de fato, a base fsica da hereditariedade. Eles apenas sugeriam que os cromossomos poderiam desempenhar tal papel. Nem mesmo durante as ltimas duas dcadas do sculo XIX se chegou prximo descoberta de como seria possvel estabelecer o papel de uma estrutura celular na herana. Tanto a Citologia como o que atualmente chamamos de Gentica estavam no estgio de cincia normal Kuhniana, esperando pela chegada de um novo paradigma. Isso iria ocorrer, de uma forma dramtica, no ano de 1900. Mas antes de entrarmos no sculo XX, podemos concluir com este sumrio de E. B. Wilson sobre o que havia sido estabelecido durante o florescimento da Citologia no ltimo quarto do sculo XIX. O trabalho da Citologia neste perodo de estabelecimento de seus fundamentos construiu uma base ampla e substancial para as nossas concepes mais gerais de hereditariedade e seu substrato fsico. Foi demonstrado que a base da hereditariedade uma conseqncia da continuidade gentica das clulas pela diviso e que as clulas germinativas so o veculo da transmisso de uma gerao para outra. Acumularam-se fortes evidncias de que o ncleo da clula desempenha um papel importante na herana. Descobriu-se o significativo fato de que em todas as formas ordinrias de diviso celular o ncleo no divide em massa mas que primeiro ele se transforma em um nmero definido de cromossomos; estes corpos, originalmente formados por longos fios, dividem-se longitudinalmente para efetuar uma diviso merismtica da substncia nuclear inteira.

Provou-se que toda fertilizao do vulo, envolve a unio ou estreita associao de dois ncleos, um de origem materna e o outro de origem paterna. Est estabelecido o fato, algumas vezes chamado de lei de van Beneden em homenagem ao seu descobridor, que estes ncleos germinativos primrios do origem a grupos semelhantes de cromossomos, cada um contendo metade do nmero encontrado nas clulas do corpo. Demonstrou-se que quando novas clulas germinativas so formadas cada uma volta a receber apenas metade do nmero caracterstico de cromossomos das clulas do corpo. Acumularam-se evidncias, especialmente pelos estudos admirveis de Boveri, que os cromossomos de sucessivas geraes de clulas, que normalmente no so vistos nos ncleos em repouso, na realidade, no perdem sua individualidade, ou que de uma maneira menos bvia eles se adaptam ao princpio da continuidade gentica. Desses fatos, tirou-se uma concluso de que os ncleos das clulas do corpo so diplides ou estruturas duplas, descendentes igualitrios dos grupos de cromossomos de origem materna e paterna do ovo fertilizado. Esses resultados, continuamente confirmados pelos trabalhos dos ltimos anos [isto , cincia normal], gradualmente tomaram um lugar central na Citologia; [...] Uma nova era de descobertas agora se abre [um novo paradigma]. Assim que o fenmeno mendeliano tornou-se conhecido ficou evidente que em linhas gerais, ele forma um complemento para aqueles fenmenos que a Citologia j tinha tornado conhecido a respeito dos cromossomos. Esta citao parte da famosa Croonian Lecture to the Royal Society of London proferida por Wilson em 1914. Nessa poca as relaes entre cromossomos e herana j haviam sido testadas e se mostrado verdadeiras acima de qualquer suspeita..

EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS
Preencha os espaos em branco nas frases de 1 a 6 usando o termo abaixo mais apropriado. (a) anfase (b) meiose (c) metfase (d) mitose (e) prfase (f) telfase 1. ( ) um tipo de diviso nuclear em que os ncleos-filhos conservam o mesmo nmero de cromossomos do ncleo original. 2. A migrao dos cromossomos para os plos ocorre na ( ).

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3. ( ) um tipo de diviso nuclear que reduz metade o nmero de cromossomos nos ncleos-filhos. 4. Cromossomos arranjados na regio equatorial da clula caracteriza a fase da diviso chamada ( ). 5. ( ) a primeira fase da diviso celular, na qual os cromossomos se tornam evidentes. 6. ( ) a fase final da diviso celular, em que os ncleos se reorganizam. Preencha os espaos em branco nas frases de 7 a 11 usando o termo abaixo mais apropriado. (a) corpsculo polar (c) haplide (e) ovognia (b) diplide (d) ovcito 7. ( ) uma clula que est sofrendo meiose e dar origem a um gameta feminino. 8. Uma clula animal feminina que ir sofrer meiose chamada ( ). 9. ( ) o termo usado para designar uma clula que possui dois conjuntos de cromossomos. 10. ( ) o nome das minsculas clulas que se formam no decorrer da meiose feminina. 11. ( ) o termo que designa uma clula que possui apenas um conjunto de cromossomos. Preencha os espaos em branco nas frases de 12 a 17 usando o termo abaixo mais apropriado. (a) cromtide (b) dade (c) fertilizao (d) pr-ncleo (e) sinapse (f) ttrade

PARTE B: L IGANDO CONCEITOS

E FATOS

Utilize as alternativas abaixo para completar as frases de 18 a 21. a. fertilizao b. meiose c. mitose

18. Na ( ) ocorre uma replicao cromossmica para duas divises celulares. 19. Na ( ) ocorre uma replicao cromossmica para uma diviso do citoplasma. 20. Apenas clulas diplides se dividem por ( ). 21. Clulas diplides e haplides se dividem por ( ). Utilize as alternativas abaixo para completar as frases de 22 a 25. a. clulas diplides b. clulas haplides 22. Ovognias so sempre ( ). 23. Gametas so sempre ( ). 24. Zigotos so sempre ( ). 25. Meiose produz sempre ( ). 26. Dos cinco eventos listados a seguir, quatro ocorrem tanto na mitose quanto na meiose. Indique qual deles acontece essencialmente na meiose? a. Condensao dos cromossomos. b. Formao do fuso. c. Emparelhamento dos cromossomos. d. Migrao dos cromossomos. e. Descondensao dos cromossomos. Utilize as alternativas abaixo para completar as frase de 27 e 28. a. Antonie van Leeuwenhoek b. Nehemiah Grew c. Robert Brown d. Robert Hooke 27. ( ) considerado o descobridor da clula. 28. ( ) foi o descobridor do ncleo celular. Utilize as alternativas abaixo para completar as frases de 29 a 33. a. August Weismann b. Rudolph Virchow c. Theodor Schwann d. Walther Flemming

12. Dois cromossomos emparelhados no incio da meiose formam um(a) ( ). 13. O emparelhamento de cromossomos na meiose chamado ( ). 14. ( ) o nome do ncleo do espermatozide ou do vulo imediatamente antes de eles se fundirem para formar o ncleo do zigoto. 15. Um cromossomo duplicado, formado portanto por dois filamentos idnticos, chamado ( ). 16. ( ) nome que se d a cada um dos dois filamentos que formam um cromossomo duplicado. 17. A fuso de dois gametas com formao de um zigoto chamada ( ).

29. A idia de que a formao do corpsculo polar uma estratgia para a reduo do material hereditrio do vulo foi lanada em 1887 por ( ).

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30. Um dos formuladores da teoria celular foi ( ). 31. A clebre frase omnis cellula e cellula, indicando que toda clula provm da diviso de outra clula, foi cunhada em 1855 por ( ). 32. ( ) considerado o descobridor da mitose pelo fato de ter demonstrado que os eventos cromossmicos observados em clulas fixadas e coradas ocorriam nas clulas vivas. 33. A teoria celular mostrou que, apesar das diferenas visveis a olho nu, todos os seres vivos so iguais em sua constituio bsica, pois a. so capazes de se reproduzir sexuadamente. b. so formados por clulas. c. contm molculas. d. se originam de gametas. 34. Os vrus no so excees teoria celular pois a. so formados por clulas. b. formam gametas. c. so organismos vivos. d. s conseguem se reproduzir no interior de uma clula viva.

a. Espermatozide. b. vulo. c. Primeiro corpsculo polar. d. Segundo corpsculo polar. e. Ovcito primrio. f. Ovcito secundrio. 37. Qual a hiptese central da teoria celular? 38. Por que foi difcil estender o conceito de clula para os animais? 39. Que critrio Schwann utilizou para estabelecer relaes de semelhana entre as unidades microscpicas que compem o corpo dos animais e das plantas? 40. Que tipo de observao permitiu concluir que espermatozides eram clulas? 41. Por que no se deve chamar o ncleo interfsico de ncleo em repouso, como faziam os antigos citologistas? Por que era usado aquele nome? 42. O que Weismann imaginou ser necessrio para manter a constncia do nmero de cromossomos atravs das geraes? 43. Identifique as principais diferenas entre mitose e meiose. 44. Analise os tipos de argumento usados para justificar a idia de que a informao hereditria estaria contida nos gametas. 45. Que tipo de raciocnio dedutivo levou os antigos citologistas a concluir que a mitose no poderia ser o nico tipo de diviso celular? 46. Qual o significado da meiose e da fertilizao no ciclo de vida dos organismos? 47. Que importantes paradigmas direcionaram as pesquisas citolgicas nos primeiros dois teros e no ltimo tero do sculo XIX, respectivamente?

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

O nmero diplide de cromossomos da espcie humana 46. Essa informao deve ser usada para responder as questes 35 e 36. 35. Determine o nmero de filamentos cromossmicos (cromtides) presentes em um ncleo celular humana em a. prfase mittica. d. telfase mittica. b. prfase I da meiose. e. telfase I da meiose. c. prfase II da meiose. f. telfase II da meiose.
Obs. No caso das telfases, considere apenas um dos ncleos em formao.

36. Determine o nmero de filamentos cromossmicos (cromtides) presente em cada um dos tipos celulares relacionados a seguir.

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M ENDELISMO: AS LEIS DA SEGREGAO

E DA SEGREGAO INDEPENDENTE

Terceira aula
(T3)

Objetivos
1. Identificar as pocas da descoberta e redescoberta das leis fundamentais da hereditariedade, assim como os pesquisadores envolvidos. 2. Identificar as vantagens da ervilha para o estudo da hereditariedade. 3. Descrever os experimentos de Mendel. 4. Explicar como Mendel testou suas hipteses sobre hereditariedade. 5. Enunciar a primeira e a segunda leis de Mendel.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

AS ORIGENS DA GENTICA
O ano de 1900 marca o incio da Gentica Moderna. Foi quando um modesto, subestimado e esquecido trabalho de um monge Agostiniano, falecido em 1884, tornou-se conhecido pela comunidade cientfica em geral. A rea de cruzamento animal e vegetal tinha passado por um perodo longo e no-excitante de cincia normal kuhniana, mas em 1900 estava para acontecer uma notvel mudana de paradigma e a Gentica estava a caminho de se tornar uma Cincia com ampla capacidade de explicar fatos e de fazer previses. O novo paradigma surgiu com a descoberta de um trabalho longo e pouco conhecido, Versuche ber Pflanzen-Hybriden, baseado em conferncias que Gregor Mendel proferiu na Sociedade de Histria Natural de Brnn, na ustria (hoje Brno, na atual Repblica Tcheca) em 8 de fevereiro e 8 de maro de 1865, publicado em 1866. A histria familiar aos professores de Biologia e uma fonte apropriada de documentos bsicos fornecida por Stern & Sherwood (1966). Dois cientistas, o holands Hugo de Vries (1900) e o alemo Carl Correns (1900) so considerados como os primeiros a compreender a importncia do que Mendel tinha feito. Um terceiro cientista, o austraco Erick von Tschermark, usualmente 33

includo como um dos redescobridores mas Stern e Sherwood (1966, p. X-XI) do razes de porque ele no merece esse reconhecimento. De Vries havia cruzado numerosas espcies e variedades de plantas durante a ltima dcada do sculo XIX. Naquela poca, o termo espcie era s vezes aplicado para plantas cultivadas que diferiam entre si por um ou poucos alelos capazes de produzir grandes alteraes fenotpicas e que hoje so considerados como pertencentes mesma espcie. De Vries adotou o ponto de vista de que estas diferentes espcies poderiam ser consideradas como constitudas de fatores independentes ou unidades e que, As unidades determinantes dos caracteres especficos das espcies devem ser consideradas, nesse sentido, como entidades nitidamente separadas e deveriam ser estudadas como tal. Elas deveriam ser sempre tratadas como independentes umas das outras, uma vez que no h razo para ser de outro modo. Em todo experimento de cruzamento, apenas um carter, ou um nmero definido deles, deve ser considerado. De Vries se referiu a caracteres em estados antagnicos mas observou que somente um desses estados se expressava nos hbridos (isto , em F1). Contudo quando os gros-de-plen e vulos eram formados nos hbridos os dois estados antagnicos das caractersticas se

separavam, seguindo na maioria das vezes as leis simples da probabilidade. De Vries verificou que essas concluses essenciais a que havia chegado tinham sido apresentadas 35 anos antes por Mendel, cujo trabalho tinha sido esquecido e seu significado no compreendido. A histria de como De Vries tomou conhecimento do trabalho de Mendel bem interessante. Ele no o descobriu por meio de pesquisa bibliogrfica, mas por um desses acasos extraordinrios que parecem ser de grande importncia nas descobertas cientficas. Um cientista holands, Professor Beyerinck, sabia que De Vries estava trabalhando com hibridao de plantas e escreveu perguntando se ele no estaria interessado em uma antiga publicao sobre o assunto. Era o trabalho de Mendel. A carta e a publicao chegaram s mos De Vries em 1900, justamente quando ele estava preparando seus prprios resultados para publicao. Ele estava preparado para compreender que estava confirmando os experimentos anteriores e mais completos de Mendel. A histria sobre Correns igualmente interessante. Ele tambm tinha realizado experimentos de cruzamento com plantas e estava tentando desenvolver uma hiptese para explicar os resultados obtidos. No outono de 1899, a soluo veio a ele num estalo que, com mais freqncia do que se imagina, parece ser a origem de rupturas verdadeiramente importantes em Cincia. Pouco tempo depois ele encontrou o trabalho de Mendel e o leu. Ele publicou seus prprios resultados e mostrou sua semelhana com os de Mendel. A famosa obra de Gregor Mendel no um trabalho cientfico no sentido convencional, mas um conjunto de conferncias que ele apresentou na Sociedade de Histria Natural de Brnn em 1865. Os dados completos nunca foram publicados mas, a parte que ele incluiu, juntamente com sua extraordinria anlise dos resultados, coloca sua contribuio no mesmo nvel da de Charles Darwin. Mendel estava plenamente consciente dos experimentos de cruzamentos de plantas, normalmente chamados de hibridao, que haviam sido realizados durante anos por muitos cientistas famosos. Nenhuma lei geral havia sido proposta, como j vimos ao considerar o insucesso de Darwin no livro Variation ... publicado somente dois anos depois do trabalho de Mendel .

Mendel comeou seus experimentos sobre hereditariedade alguns anos antes da publicao, em 1859, da obra On the Origin of Species e uma das razes para o que ele se propunha a fazer, como ele prprio diz, era a necessidade de se chegar a uma soluo para a questo, cujo significado para a histria evolutiva da vida no deve ser subestimado. Assim, o trabalho de Mendel comeou como Cincia normal dentro do paradigma da Teoria da Evoluo. Somente mais tarde que ele iria se tornar o incio de um novo paradigma A Gentica mendeliana. Este um ponto interessante, pois mostra como uma descoberta em um determinado campo da Cincia pode ser de grande importncia para outro campo.

MATERIAL

E MTODOS USADOS

POR

MENDEL

Caractersticas favorveis da ervilha Na metade do sculo XIX, as pessoas interessadas em hibridao de plantas tinham uma riqueza de material sua disposio. Numerosas variedades de uma mesma espcie, tanto de plantas comestveis como ornamentais, tinham sido selecionadas. Muitas das variedades diferiam bastante entre si; algumas eram to diferentes que chegavam a ser consideradas espcies distintas e recebiam nomes cientficos prprios. Mendel decidiu trabalhar com ervilhas e comeou com 34 variedades. Ele as cultivou por duas estaes para estar seguro de que elas eram capazes de se cruzar e produzir descendncia frtil. No final reduziu o nmero a 22 variedades. (Fig. 9) As ervilhas tinham vantagens importantes. Alm de existir muitas variedades disponveis, como j mencionamos, elas eram fceis de se cultivar e seu tempo de gerao era curto. Os descendentes obtidos por cruzamento entre as variedades eram frteis. A estrutura da flor tambm era importante. Os estames e pistilos ficavam encobertos pelas ptalas e, se as flores fossem cobertas para evitar a ao dos insetos, elas se autofecundavam, isto , o plen caa sobre o estigma da mesma flor. Apesar disso, era possvel fazer cruzamentos experimentais removendo as anteras antes da maturao da flor e, mais tarde, colocando plen de outra planta sobre o estigma. Assim, Mendel podia cruzar qualquer uma das suas variedades

34

Estandarte

Estandarte

Ala

Carena

Ala

Spalas

vulo

Carena

Estandarte

o mesmo que dizer que 3/4 da amostra de um tipo e 1/4 da amostra de outro tipo ou ento que 75% de um tipo e 25% de outro. Na discusso do experimento de Mendel que se segue procurou-se apresentar o tpico de uma maneira que auxilie a compreenso e permita uma apreciao a altura do que Mendel fez.

OS RESULTADOS
Ala

DE

MENDEL

As caractersticas estudadas Ptalas que formam a carena

Por meio de cruzamentos genticos tenta-se descobrir a base hereditria das diferenas; ao mesmo tempo as informaes obtidas podem nos Estigma Filete ajudar a entender porque indivduos Anteras de uma mesma espcie se parecem E tanto entre si. No se cruzam indivduos geneticamente idnticos na D esperana de se descobrirem leis da vulo Estilete herana. Por isso Mendel escolheu variedades de ervilhas que diferiam entre si. A diferena era em relao Figura 9. Representao esquemtica da flor de ervilha (Pisum aos estados das caractersticas entre sativum). A. Flor inteira. B. Corte longitudinal da flor. C. Ptalas isoladas. D. Estames envolvendo o pistilo. E. Pistilo. as diversas variedades. Assim, (Redesenhada de Rawitscher, F. Elementos bsicos de Botnica. algumas de suas variedades tinham So Paulo: Nacional, 1967) sementes lisas enquanto que em outras as sementes eram rugosas ou, se ele deixasse as flores intactas, a prxima (angulosa seria a melhor traduo do termo usado por ele); algumas das suas variedades tinham gerao seria resultado da autofecundao. sementes amarelas e outras, verdes. Ao todo, ele usou 7 caracteres, que apresentavam estados A anlise matemtica contrastantes, como se segue: Aqueles que j ensinaram Gentica mendeliana sabem que muitos estudantes tm dificuldade com CARTER AFETADO E STADO a Matemtica. Isso poder se tornar mais fcil quando chegarmos a 1903 e colocarmos as unidaTextura da semente lisa ou rugosa Cor da semente amarela ou verde des hereditrias nos cromossomos, mas vale fazer Revestimento da semente colorido ou branco um pequeno esforo agora para entender alguns Textura da vagem inflada ou enrugada aspectos crticos do modelo mendeliano como, Cor da vagem verde ou amarela por exemplo, a proporo 3 : 1 para um par de Posio da flor axilar ou apical estados contrastantes de um carter pode ser exComprimento do caule longo ou curto pandida para a proporo 9 : 3 : 3 : 1 quando se trata de dois pares de estados de dois caracteres. Variedades apresentando estados contrastantes Em minha experincia, um dos princpios mais difceis para os estudantes aprender que 1/4 de de caracteres foram cruzadas por meio da remo1/4 no 1/2 nem 1/8, mas 1/16. Alm disso, os o das anteras ainda imaturas das flores de uma estudantes devem perceber que a proporo 3 : 1 variedade e colocao de plen de outra varieC

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dade, sobre seus estigmas. A primeira gerao hbrida, ou F1 ( abreviatura para first Filial generation) para usarmos um termo introduzido mais tarde, dava um resultado uniforme: todos as plantas F1 exibiam o estado da caracterstica de um dos genitores. Mendel chamou de dominante o estado da caracterstica que aparecia nas plantas F1, em contraste com o estado da caracterstica que no aparecia, por ele chamado de recessivo. Estes resultados, to familiares hoje em dia, eram bastante inesperados naquela poca. Embora outros casos semelhantes ao obtido por Mendel j houvessem sido descritos, a regra geral era a de que os indivduos de F1 apresentassem estados de caracteres intermedirios aos dos pais. E na maioria dos casos, isso ocorria por uma simples razo: se as variedades diferirem em diversas caractersticas os indivduos F1 sero, em geral, mais ou menos intermedirios entre os tipos parentais. Mas Mendel concentrou-se na anlise da herana dos detalhes, ou seja, dos caracteres isolados, e no do indivduo como um todo. Nesse sentido, ele esqueceu da planta como um todo e questionou somente se as ervilhas tinham sementes lisas ou rugosas, se eram altas ou baixas etc.

As plantas F1 foram protegidas para no serem polinizadas pelos insetos e, em conseqncia se autofecundaram. De novo, os resultados foram uniformes. Para cada um dos sete tipos de cruzamento originais entre plantas com estados de carter contrastantes, a descendncia F2 assemelhava-se a um ou outro genitor da gerao P. Ele nunca encontrava intermedirios. A proporo 3 : 1

Enquanto que a maioria dos cultivadores de plantas tinha descrito somente o reaparecimento de ambas as variedades em F2 ( abreviatura para second Filial generation), Mendel fez uma coisa simples e extraordinria. Ele contou o nmero de indivduos com cada caracterstica. Os resultados para os sete tipos de cruzamentos foram os mesmos: a proporo de trs plantas com a caracterstica dominante para uma com a recessiva. Ou ns podemos dizer 3/4 (75%) de F2 apresentava o estado dominante e 1/4 (25%), o estado recessivo da caracterstica analisada (Tab. 1). Estas propores e porcentagens eram derivadas dos dados brutos observados. Por exemplo, no caso do cruzamento de plantas Tabela I. Resultados obtidos por Mendel em cruzamentos entre variedades puras de sementes lisas de ervilha. com plantas puras de sementes rugosas, Mendel Tipos de cruzamento Caractersticas Autofecundao Plantas F Razo entre obteve 7324 sementes F2 entre plantas puras das plantas F de F os tipos F das quais 5474 eram lisas 5474 lisas Lisa X Lisa 1. Textura das sementes Sementes lisas e 1850, rugosas uma 1850 rugosas 2,96 : 1 Lisa X Rugosa proporo de 2,96 para 1. 7324 (total) 6022 amarelas O cruzamento de plantas Amarela X Amarela 2001 verdes 2. Cor das sementes Sementes 3,01 : 1 Amarela X Verde amarelas puras de sementes ama8023 (total) relas com plantas puras 705 cinzas Semente de Cinza X Cinza 3. Cor da casca 224 brancas de sementes verdes produ3,15 : 1 das sementes casca cinza Cinza X Branca 929 (total) ziu 8023 sementes F2 das 882 infladas quais 6022 eram amarelas Vagens infladas Inflada X Inflada 4. Textura das vagens 299 comprimidas 2,95 : 1 Inflada X Comprimida e 2001, verdes uma 1181 (total) proporo de 3,01 para 1. 428 verdes Vagens verdes Verde X Verde 5. Cor das vagens 152 amarelas Podemos ver que Mendel 2,82 : 1 Verde X Amarela 580 (total) tinha razo em suspeitar que 651 axilaress a resposta terica deveria se Flores axilares Axilar X Axilar 6. Posio das flores 207 terminais 3,14 : 1 Axilar X Terminal 3 : 1 e no 3,01 para 1. Estes 858 (total) eram cruzamentos mono787 longos Caule longo Longo X Longo 7. Comprimento do caule 277 curtos bridos, isto , envolviam s 2,84 : 1 Longo X Curto 1064 (total) um carcter com dois estados contrastantes.
2 1 1 2

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A proporo 9 : 3 : 3 : 1 Quando Mendel seguiu a herana de duas caractersticas com dois pares de estados contrastantes, no cruzamento dibrido, foram obtidos novamente, resultados uniformes. As plantas da gerao F1 exibiam os dois estados dominantes das caractersticas analisadas e, em F2, apareciam quatro tipos de planta na proporo de 9 : 3 : 3 : 1. Isto , 9/16 de F2 mostrava ambos os estados dominantes, 3/16 mostrava um dominante e outro recessivo, 3/16 mostrava o outro dominante e o primeiro recessivo e 1/16 tinha ambos os estados recessivos dos caracteres. Assim, quando as plantas cruzadas na gerao original P eram do tipo liso-amarelo e rugosoverde, todos os F1 apresentavam sementes do tipo liso-amarelo. Na gerao F2, Mendel obteve 315 sementes do tipo liso-amarelo, 108 liso-verde, 101 rugoso-amarelo e 32 rugoso-verde. Para um total de 556, a proporo dos diferentes tipos foi de 9,8 : 3,4 : 3,2 : 1. Estas propores representam os dados reais, mas Mendel props a hiptese de que o resultado terico esperado deveria ser 9 : 3 : 3 : 1. Agora nosso problema analisar como a proporo 3 : 1 est relacionada com a 9 : 3 : 3 : 1. No cruzamento amarelo com verde, a gerao F2 seria 3/4 amarela e 1/4 verde; no cruzamento liso e rugoso, F2 seria 3/4 lisa e 1/4 rugosa. Uma pergunta que se pode fazer nesse ponto se com base nessas informaes seria possvel prever a proporo de 9 : 3 : 3 : 1 obtida em F2? Para muitos essa pergunta parecer um problema insolvel, mas a anlise a seguir resolve a questo. Quando duas ou mais caractersticas com estados contrastantes esto envolvidas, pode-se verificar que a proporo 3 : 1 ainda mantida se considerarmos cada caracterstica individualmente. Verifique no cruzamento mencionado acima (liso-amarelo x rugoso-verde) que a proporo 3 : 1 mantida para cada um dos pares de estados das caractersticas consideradas.

Isso pode ser verificado tambm matematicamente. Considere a proporo 9/16 liso-amarelo: 3/16 liso-verde: 3/16 rugoso-amarelo: 1/16 rugoso-verde. Considerando o par liso/rugoso separadamente, temos 9/16 + 3/16 = 12/16 de sementes do tipo liso e 3/16 + 1/16 = 4/16 do tipo rugoso. Desde que 12/16 = 3/4 e 4/16 = 1/4, ns observamos a proporo 3:1 para esse par de caractersticas. O mesmo verdadeiro para o par amarelo-verde. Assim, se ns perguntarmos em que freqncias aparecero os indivduos F 2 de um cruzamento dibrido, a resposta pode ser obtida com uma simples multiplicao de fraes. Assim, dos 3/4 que sero lisos, 3/4 sero tambm amarelos e 1/4 ser verde; portanto 3/4 x 3/4, ou 9/16, sero lisos e amarelos e 3/4 x 1/4, ou 3/16, sero lisos e verdes. Do 1/4 de F 2 que ser rugoso, 3/4 sero tambm amarelos e 1/4 ser verde. Logo, 1/4 x 3/4 (ou 3/16) sero rugosos-amarelos e 1/4 x 1/4 (ou 1/16) ser rugoso-verde. Esta a derivao da proporo 9 : 3 : 3 : 1. Estas regularidades foram observadas por Mendel em todos os seus cruzamentos. Por isso, ele achou que devia haver um princpio fundamental responsvel por elas. E havia.

MODELO

PARA CRUZAMENTO MONOBRIDO

A figura 10 um modelo que explica a hiptese que Mendel props para os cruzamentos monobridos. Tanto o esquema quanto a terminologia seriam padronizados meio sculo mais tarde, no incio do sculo XX. A primeira coisa que um leitor atento notaria um erro nos gentipos da gerao P. Eles esto mostrados como haplides ao invs de diplides e isto levanta um ponto muito importante em nosso estudo sobre conceitos genticos. Mendel usou os smbolos de gentipo para indicar os tipos de fatores hereditrios, e no seu nmero por gameta. Os gametas parentais lisos poderiam conter inmeros fatores R, e no somente um, como se acredita hoje. A [No devemos nos esquecer que Mendel era professor de autopolinizao de linhagens puras lisas Fsica; teria havido aqui uma influncia do pensamento produzia apenas descendncia lisa, pois seus de Galileu? Para Galileu, o objetivo da investigao era o conhecimento da Lei, captada na prpria natureza, pela gametas s podiam conter fatores R. (As letras observao dos fenmenos, confirmada pela maisculas e minsculas indicam que um alelo dominante ou recessivo, respectivamente.) experimentao e matematicamente quantificada]

37

A pureza dos gametas No cruzamento entre plantas puras de sementes lisas com plantas de sementes rugosas poderia haver apenas um tipo de descendncia (Rr) j que h somente um tipo de plen e um tipo de vulo. Quando estas plantas F1 amadureceram, cada flor produziu vulos e gros de plen. Agora, surge um dos aspectos mais importantes do modelo de Mendel: ele assumiu que um gameta poderia apresentar fatores de hereditariedade de apenas um tipo, isto , um gameta produzido pela planta F1 iria ter R ou r, mas nunca ambos (Fig. 10).
P1 Fentipo Gentipo Gentipo dos gametas Liso R R

Rugoso r

F1 Fentipo Gentipo Gentipo dos gametas

Liso Rr

Rugoso Rr

F2 Fentipos e Gentipos

R Liso RR

Liso Rr rugoso rr Liso Rr

Figura 10. Modelo de um cruzamento mendeliano monobrido. Os gentipos dos indivduos da gerao P esto representados como mostrado por Mendel em seu trabalho. O quadro de cruzamento abaixo mostra a origem do F2 (gentipos como representado atualmente) a partir de plen e vulos de F1.

Com certeza, esta idia seria de difcil aceitao pelos geneticistas do incio do sculo suas mentes estavam influenciadas pelo conceito de inmeras gmulas. Como um gameta poderia ser puro, ou seja, ter gmulas apenas do tipo R ou r? Mendel considerou, ento, que os indivduos de F1 produziam gametas que continham ou o fator R ou o r, mas nunca ambos. Em seguida, ele assumiu que vulos e gros de plen seriam combinados aleatoriamente e que as freqncias dos diferentes tipos de descendentes seriam 38

determinadas pelas freqncias dos diferentes tipos de gametas formados. Deve-se enfatizar nesse ponto que a aparente simplicidade do esquema da figura 10, sobre a origem de F2 a partir de gametas de F1, advm do fato de as classes genotpicas de vulos e gros de plen estarem em freqncias iguais. Isto , cada indivduo produz 50% de gametas R (plen ou vulo) e 50%, r. As linhas representam todas as combinaes que podem ocorrer e elas ocorrem em freqncias iguais. O gameta R da esquerda, por exemplo, supondo que seja um gro de plen), tem igual oportunidade de se combinar com um vulo R ou r. O mesmo vlido para o plen r. O quadro inferior da figura 10 um outro modo convencional de apresentao que facilita o entendimento de como um cruzamento monobrido, pela hiptese de Mendel, resulta na proporo de 3 : 1 em F1. O modelo vlido para todos os cruzamentos que envolvem apenas um par de estados contrastantes de uma caracterstica. No entanto, o modelo explicar os resultados apenas nas seguintes condies: 1. Em cada par de unidades hereditrias contrastantes, um membro do par dominante e o outro recessivo. Dominncia e recessividade so definies operacionais determinadas pelo fentipo de um indivduo que apresenta ambos os tipos de unidades hereditrias. 2. As unidades hereditrias dominantes e recessivas, quando presentes juntas, no modificam uma outra de modo permanente. Assim, em F1 o fator r do parental rugoso, no cruzamento da figura 10, est combinado com o fator R do parental liso. No h expresso do fator r em F1, mas em F 2 1/4 dos indivduos so rugosos e to enrugados quanto um de seus avs. 3. Por algum mecanismo desconhecido por Mendel, os dois tipos de fatores segregam de tal maneira que cada gameta contm apenas um dos tipos. Assim, no exemplo, os gametas contero R ou r. 4. Ainda por outro mecanismo tambm desconhecido por Mendel, os gametas que contm R e aqueles que contm r so produzidos em nmeros iguais. 5. Combinaes entre os gros de plen e os vulos so totalmente ao acaso e a proporo da descendncia resultante ir depender da proporo das diferentes classes de gametas.

O teste da hiptese

Deve ser enfatizado que a concordncia entre os dados e o modelo no casual. Apesar dos itens 1 e 2 acima poderem ser considerados fatos, os itens de 3 a 5 so totalmente hipotticos foram propostos para explicar os dados. Esse um procedimento cientfico perfeitamente aceitvel. Este modelo deve ser considerado como uma tentativa de explicao, uma hiptese, que ser conirmada ou no atravs de testes das dedues feitas a partir dela. Um teste decisivo era fcil de ser realizado. A gerao F2 do cruzamento representado na figura 10 era composta por trs plantas com a caracterstica dominante lisa para cada planta recessiva rugosa. No entanto, se a hiptese fosse verdadeira, as sementes lisas deveriam ser de dois tipos e em propores previsveis. Assim, para cada Simulao com moedas semente com gentipo R (lembre-se que estamos Um jogo simples com duas moedas diferentes usando ainda o esquema de Mendel e, portanto, nos ajudar a entender a origem das quatro classes no falamos em RR), haveria duas Rr. No era possvel distinguir visualmente as sementes R e P Fentipos Liso - amarelo X Rugoso - amarelo 1 Rr, mas se elas fossem plantaGentipos RV rv das e ocorresse autofertiliGentipos zao de suas flores, a descenRV rv dos gametas dncia daria a resposta. Neste caso, as plantas com gentipo R produziriam apenas semen- F Fentipos X Liso - amarelo Liso - amarelo 1 tes lisas, enquanto as plantas Gentipos RrVv RrVv com gentipo Rr dariam origem a sementes lisas e RV RV Gentipos dos Gentipos rugosas, na proporo de 3:1. RRVV gros de plen dos vulos Rv Rv Mendel deixou que as plantas F2 se autofecundassem e obteRRVv RRVv rV rV ve o resultado esperado de RrVV RRvv RrVV acordo com sua hiptese. rv rv

uniformes: expressavam o fentipo dominante dos estados contrastantes das duas caractersticas analisadas. Na formao de gametas pelos indivduos de F 1, Mendel assumiu, como no cruzamento monobrido, que cada gameta receberia apenas um tipo de cada uma das duas unidades contrastantes - R ou r. O mesmo foi assumido em relao a V e v. Neste ponto, outra condio teve que ser assumida para explicar os resultados obtidos: deveria haver uma distribuio independente das unidades de cada par. Assim, cada gameta deveria ter ou R ou r, alm de V ou v. Deveriam, portanto, ser formadas quatro classes, tanto de gros de plen quanto de vulos: RV, Rv, rV e rv. O modelo tambm exigia que estas classes deveriam aparecer em igual freqncia - 25 % cada.

MODELO

PARA

F2 Gentipos

RrVv Rrvv

RrVv rrVV rrVv rrvv

RrVv Rrvv rrVv

CRUZAMENTO DIBRIDO

A figura 11 mostra o modelo de cruzamento dibrido j discutido anteriormente. A linhagem pura de plantas amarelo-lisas foi cruzada com a linhagem pura verde-rugosa. Os indivduos resultantes em F 1 foram

Figura 11. Modelo de um cruzamento mendeliano dibrido. Os gentipos da gerao P foram representados como Mendel os teria representado. O quadro de cruzamento mostra a origem de F2 a partir de gros de plen e vulos de F1 (os gentipos como representados atualmente).

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RrVv

de gametas. Cada moeda representar um gene e, em uma delas, cara representar, por exemplo, o alelo dominante R enquanto coroa ser o alelo recessivo r. Na outra moeda, cara representar o alelo dominante V e coroa, o alelo recessivo v. As moedas so ento lanadas e os resultados anotados. Se arremessos suficientes forem feitos, espera-se 1/4 de caras para ambas as moedas (ou seja, a categoria RV acima); 1/4 de coroas para ambas as moedas (o que corresponde categoria rv); 1/4 ser cara para uma das moedas e coroa para a outra (= Rv) e 1/4 ser o contrrio (= vR). Quando h quatro classes de gametas no prtico usar as linhas indicativas utilizadas na figura 10; assim, na parte inferior da figura 11 h um quadro indicando todas as possveis combinaes de gros de plen e vulos na produo de F2 (para simplificar, todos os gentipos foram representados como diplides). H 16 combinaes possveis e, se considerarmos os fentipos, 9 das 16 so amarelo-lisas, 3 so verde-lisas, 3 so amarelo-rugosas e 1 verderugosa. Isto representa uma proporo de 9:3:3:1. Note que somente os fentipos amarelo-liso e verde-rugoso estavam presentes nas geraes P e F1. O modelo predizia, no entanto, que dois novos tipos de sementes deveriam aparecer: verde-lisas e amarelo-rugosas. A seguir esto os resultados registrados por Mendel para F2:

hiptese predizia que, exceto as 32 sementes verde-rugosas, todas as outras classes consistiriam de indivduos geneticamente diferentes, apesar de iguais na aparncia. Isto pde ser testado, plantando-se as sementes F2, permitindo a autopolinizao das plantas adultas e, ento, contando-se as sementes F3. Primeiramente, considere as 32 sementes verde-rugosas. O modelo prev que estas manteriam suas caractersticas, se autofecundadas. Tais sementes foram plantadas e 30 atingiram a fase adulta. Todas comprovaram ser verde-rugosas. As 101 sementes amarelo-rugosas eram idnticas quanto aparncia. Podemos ver, no entanto, a partir do modelo da figura 11, que dois gentipos esto a representados dentre os 3/16 desta categoria: um dos trs rrVV e os outros dois so rrVv ( Mendel usaria rV, ao invs de rrVV, mas, para facilitar, estou usando a mesma representao da figura 11). Desta forma, uma em cada trs destas sementes, o grupo rrVV, manteria suas caractersticas, produzindo apenas sementes amarelo-rugosas, por autofecundao. J o grupo rrVv ( duas das trs), deveria produzir sementes em uma proporo de 3 amarelorugosas para 1 verde-rugosa. As 101 sementes foram plantadas, sendo que 96 atingiram a maturidade. Destas, 28 (onde o esperado era 32) produziram apenas sementes amarelo-rugosas, enquanto 68 (o esperado era 64) produziram tanto sementes amarelo-rugosas como verderugosas em uma proporo de 3:1. Assim, a deduo a partir da hiptese foi confirmada. Fentipo Obtido Esperado A mesma anlise foi realizada com as sementes verde-lisas. A proporo de 3/16 desta classe lisa - amarela 315 313 deveria ser composta por 1/3 RRvv e 2/3 Rrvv. lisa - verde 108 104 O 1/3, representado por RRvv, deveria produzir rugosa - amarela 101 104 prole idntica. Os 2/3 restantes deveriam produzir rugosa - verde 32 35 sementes em uma proporo de 3 verde-lisas para 1 verde-rugosa. As 108 sementes foram plantadas Os nmeros observados correspondiam aos e 102 atingiram a maturidade. O nmero esperado obtidos experimentalmente por Mendel e os de indivduos que originariam descendentes todos nmeros esperados correspondiam proporo verde-lisos era 34, enquanto 68 resultariam na exata de 9:3:3:1. A concordncia entre os dois proporo de 3 : 1. Os nmeros observados fovalores extraordinria, como Weldon e Fisher ram 35 e 67, respectivamente. O teste mais complexo para a hiptese baseounotariam anos mais tarde. se nos 9/16 de F2 que eram amarelo-lisos. A Outros testes da hiptese distribuio no quadro a seguinte: 1 dos 9 O modelo do cruzamento dibrido permitiu RRVV, 2 so RRVv, 2 so RrVV e 4 so RrVv. testes ainda mais requintados para a hiptese. A Assim, somente 1/9, o grupo RRVV, deveria 40

linhagem pura de plantas com uma produzir prole pura. A descendncia de RRVv caracterstica dominante com outra pura estaria em uma proporo de 3 amarelo-lisas para recessiva, o hbrido formado seria idntico ao 1 verde-lisa. Os RrVV deveriam produzir 3 parental dominante e uniforme na aparncia. amarelo-lisas para 1 amarelo-rugosa. E finalmente, os RrVv, que so iguais aos F1 na figura 3. J que o hbrido descrito acima era idntico em aparncia ao parental puro dominante, era 11, deveriam resultar na proporo de 9:3:3:1. possvel concluir que no havia relao exata As 315 sementes foram plantadas e 301 chegaram entre gentipo e fentipo. Assim, o fentipo fase adulta. O modelo predizia que os nmeros liso poderia ser conseqncia tanto do esperados em cada classe seriam, na ordem apregentipo RR (Mendel diria R) quanto do Rr. sentada acima, 33, 67, 67 e 134. Por exemplo, 1/9 ou 33 sementes deveriam manter suas caracte- 4. Os fatores da hereditariedade responsveis pelas condies de dominncia e recessividade rsticas, uma vez que o modelo previa que esse no eram modificados quando ocorriam junnmero de sementes corresponderia RRVV. tos no hbrido. Se dois destes hbridos fossem Mendel observou o seguinte resultado: 38, 65, cruzados, a descendncia seria constituda 60 e 138. tanto por indivduos manifestando o estado O fato de F2 resultar em uma F3 que no difere dominante da caracterstica quanto por aqueles significativamente da hiptese, em testes to preciapresentado o estado recessivo, no havendo sos quanto estes, um argumento muito forte em evidncia de que os fatores hereditrios favor da validade da hiptese. Em todos os casos responsveis por eles fossem modificados por os nmeros observados foram bem prximos dos sua associao nos hbridos parentais. esperados. E os valores esperados basearam-se na Qualquer indivduo recessivo de F2 deveria ser probabilidade dos gametas se comportarem de acordo com regras precisas. No entanto, os nmefenotipicamente idntico gerao recessiva ros observados e esperados nunca foram idnticos. original P. A probabilidade disto ocorrer equivaleria proba- 5. Quando hbridos tais como Rr eram bilidade de obtermos 5 caras e 5 coroas em 10 cruzados, os dois tipos de unidade heredilanamentos de moedas. tria (R e r) segregavam um do outro e recombinavam-se aleatoriamente na fertilizao. A proporo fenotpica na descenAS CONCLUSES DE MENDEL dncia seria de 3 : 1, enquanto que genotipicamente, usando a nomenclatura atual, seria Os experimentos de Mendel com cruzamentos de 1 RR, 2 Rr e 1 rr. A segregao dos de variedades de ervilha e a notvel anlise que fatores de um mesmo par ficou conhecida ele fez dos resultados levaram a oito importantes como Primeira Lei de Mendel. concluses, arroladas a seguir. Deve-se ressaltar que, em 1865, tais concluses eram vlidas para 6. Essa proporo somente poderia ocorrer se cada gameta recebesse apenas um tipo de fator ervilhas e somente para ervilhas. Para ter certeza, de hereditariedade no caso, R ou r. Mendel realizou alguns cruzamentos preliminares 7. Quando um cruzamento envolvia dois pares com feijo, mas os resultados foram confusos. de unidades hereditrias contrastantes, tal 1. A concluso mais importante era a de que a como RrVv x RrVv, cada par se comportava herana parecia seguir regras definidas e independentemente. Isto , os diferentes tipos relativamente simples. Mendel props um de unidades hereditrias associavam-se indemodelo que poderia explicar os dados de todos pendentemente uns dos outros. Ento, os os seus cruzamentos. Alm disto, o modelo tinha gametas podiam ser somente de quatro tipos: um grande poder de previso um objetivo de RV, Rv, rV ou rv. Desta maneira, todas as todas as hipteses e teorias em Cincia. combinaes possveis seriam obtidas, com 2. Quando dois tipos diferentes de plantas eram base estritamente na regra de que cada gameta cruzados, no havia mistura dos estados das podia apresentar somente um tipo de cada um caractersticas individuais. Nos sete pares de dos pares de unidades hereditrias. As estados contrastantes de caracteres estudados, diferentes classes de gameta estariam em um estado era dominante e o outro recessivo. freqncias iguais. Este fenmeno de associaIsto significava que em um cruzamento de uma 41

o independente ficou conhecido como Segunda Lei de Mendel. 8. A hiptese mendeliana, e sua formulao em um modelo, era to especfica que dedues podiam ser feitas e testadas pela observao e experimentos. Nenhum outro campo da Biologia experimental havia atingido equivalente nvel de desenvolvimento em 1865. O trabalho de Mendel no compreendido Mas, como vimos, naquela poca nenhum bilogo parecia ter conscincia de que esse era o caso. Certamente, o trabalho de Mendel no seria to importante, se ele valesse apenas para ervilhas, do mesmo modo que se a descoberta das clulas por Hooke se aplicasse apenas cortia. O campo do conhecimento relativo aos cruzamentos de plantas estava cheio de dados que no permitiam concluses gerais. Mendel escreveu cartas para um grande estudioso na rea, Ngeli, explicando seus resultados. Ngeli deve ter considerado os dados para ervilhas apenas como mais um exemplo da enorme variao nos resultados obtidos em experimentos de hibridao. Ngeli sugeriu que Mendel utilizasse outra planta, a chicria ( Hieracium sp.). Mendel assim

o fez e falhou em encontrar regras consistentes para a herana. (Ocorre que Mendel no estava realizando os experimentos que acreditava estar). Era extremamente dificil realizar experimentos de hibridao com as pequenas flores de Hieracium. Contudo, Mendel acreditou ter conseguido em muitos casos, e surpreendeu-se com a falta de uniformidade dos resultados. O problema estava, na realidade, com Hieracium, e no com Mendel. Muito depois de sua morte, descobriu-se que, em Hieracium, ocorre um tipo de desenvolvimento partenogentico, em que h a formao de um novo indivduo a partir de um vulo no fecundado. Assim, nenhuma proporo uniforme era de se esperar se parte da prole era resultado de fertilizao e parte, de apomixia. Deste modo, o prprio Mendel passou a acreditar que seus primeiros resultados tinham aplicao restrita, e o fato que seu modelo foi ignorado nas trs ltimas dcadas do sculo XIX. Durante esse perodo, os principais estudiosos de hereditariedade abandonaram o paradigma do cruzamento experimental e se concentraram principalmente no comportamento dos cromossomos na meiose, mitose e fertilizao. Eles acreditavam estar construindo uma base fsica para a herana, e pesquisas posteriores viriam a mostrar que eles estavam corretos.

EXERCCIOS

PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS

Preencha os espaos em branco nas frases de 1 a 8 usando o termo abaixo mais apropriado. (a) autofecundao (e) hibridao (b) espcie (f) hbrido (c) fecundao cruzada (g) vulo (d) gro-de-plen (h) variedade 1. A estrutura da flor que contm os gametas masculinos, ou ncleos gamticos, o ( ). 2. O ( ) das plantas angiospermas uma estrutura multicelular onde se forma o gameta feminino, a oofera. 3. Na ervilha ocorre ( ) , isto , o gameta masculino fecunda o gameta feminino da mesma flor.

4. O desenvolvimento do plen de uma planta no estigma da flor de outra planta um (a) ( ). 5. A ( ) em ervilha feita removendo-se as anteras de uma flor, antes de sua maturao e, mais tarde, colocando-se plen de outra planta sobre o seu estigma. 6. O termo ( ), empregado por Mendel, referese ao indivduo proveniente do cruzamento entre duas plantas de linhagens diferentes. 7. ( ) era o termo usado para designar plantas cultivadas que diferiam entre si quanto a uma ou algumas caractersticas contrastantes, transmissveis aos descendentes. 8. ( ) o termo usado para designar grupos de populaes naturais capazes de se cruzar, produzindo descendncia frtil.

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Preencha os espaos em branco nas frases de 9 a 16 usando o termo abaixo mais apropriado.
(a) dominante (d) gerao F1 (g) monobrido (b) fentipo (e) gerao P (h) recessivo (c) gentipo (f) gerao F2

21. Uma das premissas do modelo mendeliano de monoibridismo que a ( ) se d aleatoriamente na fertilizao, por meio da combinao ao acaso dos gametas masculinos e femininos.

9. As duas linhagens puras com uma ou mais caractersticas em seus estados contrastantes que so cruzadas em um experimento gentico constituem o (a) ( ). 10. Mendel chamou de ( ) o estado da caracterstica que aparecia em todas as plantas da primeira gerao hbrida. 11. O estado da caracterstica que no aparecia nos indivduos hbridos foi denominado por Mendel de ( ). 12. A primeira gerao hbrida, ou seja, aquela resultante do cruzamento entre indivduos de variedades diferentes, chamada ( ). 13. A descendncia resultante da autofecundao da primeira gerao hbrida chamada ( ). 14.O termo ( ) empregado para designar as caractersticas apresentadas por um indivduo, sejam elas morfolgicas, fisiolgicas, ou comportamentais. 15. O termo ( ) refere-se constituio gentica do indivduo, isto , aos fatores hereditrios, ou genes, que ele possui. 16. Um cruzamento ( ) envolve indivduos que diferem apenas quanto a um carter, com dois estados contrastantes. Preencha os espaos em branco nas frases de 17 a 21 usando o termo abaixo mais apropriado. (a) associao dos fatores (b) haplide (c) diplide (d) pureza dos gametas (e) segregao dos fatores 17. Gameta uma clula ( ) pois apresenta apenas um lote de cromossomos. 18. O zigoto, por possuir dois lotes cromossmicos, uma clula ( ). 19. A expresso ( ) significa que um gameta contm apenas um fator para cada caracterstica hereditria. 20. A ( ) ocorreria, segundo Mendel, na formao dos gametas e seria responsvel por sua pureza.

PARTE B: LIGANDO CONCEITOS

E FATOS

Utilize as alternativas abaixo para completar as frases de 22 a 26. (a). 1 : 1 (b). 1 : 2 : 1 (c). 3 : 1 (d). 1 : 1 : 1 : 1 (e). 9 : 3 : 3 : 1

22. Nos cruzamentos envolvendo apenas um par de caracteres contrastantes, Mendel obteve na gerao F 2 indivduos com caractersticas dominante e recessiva, na proporo de ( ). 23. Quando Mendel seguiu a herana de duas caractersticas, isto , em cruzamentos dibridos, encontrou na gerao F2 indivduos com ambos os estados dominantes para as duas caractersticas analisadas , com um dominante e o outro recessivo, com o primeiro recessivo e o outro dominante e com ambos recessivos, respectivamente, na proporo de ( ). 24. A proporo de ( ) na gerao F 2 corresponderia, segundo o modelo do monoibridismo, aos gentipos dos indivduos dominantes puros, hbridos e recessivos, respectivamente. 25. Um organismo heretorozigtico quanto a um par de fatores formar gametas na ( ). 26. Um organismo duplo-heterozigtico quanto a dois pares de fatores com segregao independente formar gametas na proporo ( ). 27. Mendel selecionou 22 ( ) de ervilha capazes de se cruzar e produzir descendncia frtil, para seus experimentos de hibridao. a. espcies c. populaes b. fatores d. variedades 28. De acordo com o modelo do monoibridismo, os indivduos da gerao F 2 a. so todos puros. b. so todos hbridos. c. so metade puros e metade hbridos. d. so 3/4 puros e 1/4 hbridos. 29. Se voc tem uma drosfila com uma determinada caracterstica dominante, que tipo de teste poderia ser feito para se determinar se ela pura (AA) ou hbrida (Aa)?

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Utilize as alternativas abaixo para responder s questes 30 e 31. a. b. c. d. associao dominncia segregao independente segregao

cinza. O cruzamento desses ltimos indivduos entre si produziu uma gerao F2 constituda por 198 camundongos cinzas e 72 brancos. a. Proponha uma hiptese para explicar esses resultados. b. Com base na sua hiptese faa um diagrama do cruzamento e compare os resultados observados com os esperados de acordo com o diagrama. 42. Um dos diferentes tipos de albinismo que ocorrem na espcie humana determinado por um fator recessivo a. a. Do casamento entre uma mulher portadora do fator para albinismo (Aa) e um homem albino, qual a proporo esperada de filhos albinos? b. Do casamento entre dois portadores (Aa), qual a proporo esperada de filhos albinos? 43. Em algumas variedades de gado bovino, a ausncia de chifres condicionada por um fator dominante (C). Um touro sem chifres foi cruzado com trs vacas. No cruzamento com a vaca I, portadora de chifres, foi produzido um bezerro sem chifres. No cruzamento com a vaca II, portadora de chifres, foi produzido um bezerro com chifres. No cruzamento com a vaca III, sem chifres, foi produzido um bezerro com chifres. a. Proponha uma hiptese para explicar esses resultados. b. Com base na sua hiptese faa um diagrama do cruzamento e compare os resultados observados com os esperados de acordo com o diagrama. 44. Uma planta de flores longas e brancas foi cruzada com outra de flores curtas e vermelhas. Os descendentes obtidos, todos de flores longas e vermelhas, foram autofecundados produzindo os seguintes tipos de descendente: 63 com flores longas e vermelhas, 21 com flores longas e brancas, 20 com flores curtas e vermelhas e 8 com flores curtas e brancas. a. Proponha uma hiptese para explicar esses resultados. b. Com base na sua hiptese faa um diagrama do cruzamento e compare os resultados observados com os esperados pelo diagrama.

30. A pureza dos gametas resultado da ( ) dos fatores de cada par na formao dos gametas. 31. Os quatro tipos de gametas que um dibrido forma resulta da ( ) dos fatores dos dois pares.

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

32. No que a anlise de Mendel diferiu da de seus predecessores que trabalharam com hibridao de plantas? 33. Quais as razes que levaram Mendel a escolher ervilha como material para os seus experimentos? 34. Qual foi a hiptese levantada por Mendel para explicar a proporo 3 : 1 obtida em cruzamentos monobridos? 35. Como pode ser derivada a proporo 9 : 3 : 3 : 1, tpica de um cruzamento dibrido, a partir da proporo 3 : 1, tpica de um cruzamento monobrido? 36. Quais das condies necessrias para que o modelo mendeliano fosse vlido podiam ser consideradas fatos? 37. Como se explica o fato de Mendel no ter encontrado as propores previstas por suas leis em cruzamentos de plantas de Hieracium? 38. Admitindo-se a segregao independente, quantos tipos de gameta cada indivduo abaixo produz? I. AaBbCCdd; II. AaBbcc; III. AAbbCCDDEe 39. Enuncie a primeira e a segunda leis de Mendel. 40. Com base nas hipteses e observaes de Mendel, esquematize os resultados esperados nos seguintes cruzamentos: a. ervilha alta homozigtica (dominante) com ervilha an. b. F1 do cruzamento (a) entre si. c. F1 do cruzamento (a) com a ervilha an original. 41. O bilogo francs Cuenot, no incio do sculo, cruzou camundongos selvagens de cor cinza, com camundongos brancos (albinos). Na primeira gerao todos os indivduos tinham cor

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A REDESCOBERTA E A EXPANSO
DO MENDELISMO
Quarta aula
(T4)
Objetivos da Unidade
1. Identificar os motivos que fizeram com que o trabalho de Mendel permanecesse ignorado por 35 anos. 2. Explicar os motivos do antagonismo entre mendelistas e biometristas. 3. Conceituar os seguintes termos: alelo, homozigoto, heterozigoto, loco gnico e gene. 4. Resolver problemas sobre variaes nas propores mendelianas.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

MENDELISMO ,

UM NOVO PARADIGMA

Muita importncia dada ao fato de que o trabalho de Mendel foi publicado em uma obscura revista de uma sociedade tambm obscura, de tal modo que foi esquecido ou desconhecido por 35 anos, durante os quais floresceram a Citologia e um enorme interesse pela hereditariedade. Um julgamento mais acurado, eu acredito, nos levaria concluso de que sua publicao foi desconsiderada, e no desconhecida. Essa publicao era do conhecimento de Focke (1881), que a discutiu brevemente em seu criterioso tratado de hibridao em plantas, e tambm foi mencionada mais tarde por Bailey (1895). Como j mencionado, Mendel se correspondia com um dos mais proeminentes estudiosos de hereditariedade daqueles tempos, Karl Wilhelm von Ngeli, o qual no se mostrou impressionado com os resultados dos cruzamentos em ervilhas. A explicao de Bateson, em sua introduo publicao de Mendel (Mendel, 1902, p.2), foi a seguinte: Pode parecer surpreendente que um trabalho de tal importncia no tenha tido reconhecimento por tanto tempo, e no tenha se difundido no mundo cientfico. bem verdade que a revista em que ele foi publicado era pouco divulgada, mas circunstncias como esta raramente tem retardado o reconhecimento de um trabalho pela comunidade. A causa ser, sem 45

dvida, encontrada na negligncia em relao aos estudos experimentais sobre o problema de Espcie, decorrente da aceitao geral das doutrinas darwinianas. O problema da Espcie, conforme concebido por Gartner, Klreuter, Naudin, Mendel e os demais hibridistas da primeira metade do sculo XIX, no mais atraia os pesquisadores. A questo, acreditava-se, j havia sido respondida e o debate concludo. Ningum mais tinha interesse no assunto [uma mudana de paradigma!]. Vrias outras linhas de pesquisa haviam sido repentinamente abertas e, em 1865, os pesquisadores mais entusiastas naturalmente consideraram esses novos mtodos mais atraentes do que as observaes tediosas dos hibridistas, cujos questionamentos tinham, alm do mais, levado a resultados inconclusivos. Entretanto, se pretendemos avanar no estudo da hereditariedade e levar adiante o problema de O que uma Espcie? como uma questo diferente de Como uma espcie sobrevive? devemos voltar e retomar a linha de questionamento exatamente como Mendel a tomou. E, como podemos ver, foi exatamente o que Bateson fez. O trabalho de Mendel com ervilhas no o nico exemplo de uma importante descoberta no compreendida pela comunidade cientfica de seu tempo. Novos paradigmas dificilmente so prontamente identificados e adotados. A maioria

dos cientistas de qualquer poca, estar ocupada fazendo sua cincia normal, seguindo os paradigmas preexistentes. A dificuldade em mudar o que se faz e como se pensa gera resistncia s novas idias e ao empreendimento de novos programas de pesquisa. Isto no foi problema para de Vries e Correns em 1900. A razo pela qual eles entenderam a importncia das concluses de Mendel foi terem feito o mesmo tipo de trabalho e desenvolvido hipteses semelhantes, antes mesmo de lerem a publicao de Mendel. Eles estavam trabalhando no novo paradigma antes de conhecerem seu paradigmtico autor. O mesmo pode ser dito de Bateson. Ele havia estudado variao e hibridao em plantas por anos e, apesar de nunca ter observado as regularidades do modelo mendeliano, ele sabia os tipos de experimentos que deveriam ser feitos. Considere o pargrafo a seguir, sobre as idias de Bateson. Em 11 e 12 de julho de 1899, uma tera e uma quarta-feira, a Royal Horticultural Society realizou uma Conferncia Internacional sobre Hibridao (cruzamento entre espcies) e sobre Cruzamento de Variedades em Chiswick, Londres. O volume 24 da revista da Sociedade consiste do registro da conferncia. Assim, temos acesso s opinies de importantes pesquisadores em hibridaes com plantas, da poca imediatamente antes de Mendel mudar sua Cincia. A maioria dos artigos da revista descrevem resultados de cruzamentos, mas Bateson preferiu um discurso mais terico, como podemos notar no trecho seguinte (Bateson, 1900a): O que precisamos inicialmente saber o que acontece quando uma variedade cruzada com outras variedades prximas. Se pretendemos que o resultado tenha algum valor cientfico, quase absolutamente necessrio que a descendncia de tais cruzamentos seja ento examinada estatisticamente. Deve ser registrado quantos descendentes se parecem com cada um dos parentais e quantos mostram o carter intermedirio entre eles. Se os parentais diferem em vrios caracteres, a descendncia deve ser examinada estatisticamente e classificada, considerando cada um dos caracteres separadamente. como se Bateson estivesse aconselhando um estudante de graduao, que atendia pelo nome de Mendel, como planejar o programa de pesquisa para seu Ph.D. (doutorado em filosofia)!

H vrios aspectos da histria de Mendel que so interessantes. Um deles a ateno quase universal que dada ao cientista que fez a descoberta. At recentemente, cientistas, especialmente biologistas, raramente poderiam ter a expectativa de fazer fortuna como cientistas isto , ganhar uma grande soma de dinheiro. A recompensa para um cientista era o prprio prazer de investigar a natureza e a aprovao de seus pares pela pesquisa bem feita e pela formulao de hipteses arrojadas e imaginativas. Hoje, cientistas vem o trabalho de Mendel com admirao. Como poderia ter ele avanado tanto em relao aos paradigmas da poca e feito observaes que, logo aps sua morte, revolucionariam as Cincias Biolgicas? Outro ponto interessante que, repetidamente na histria, parece que quando o campo est pronto a descoberta ser feita. Se Mendel no tivesse nascido, o caminho da Gentica no seria muito diferente. Ao redor de 1900, algum chegaria s mesmas concluses. Apenas aconteceu de serem de Vries e Correns. Tschermak estava to perto da resposta que geralmente includo com de Vries e Correns como co-redescobridor. Bateson, em mais ou menos um ano, poderia ter descoberto independentemente as regras mendelianas da herana. Como parece, o progresso da Cincia inevitvel.

OPOSIO

INICIAL AO MENDELISMO

No decorrer da histria de Mendel, podemos ser levados a acreditar que em 1900, com a publicao dos artigos de de Vries e Correns, a Cincia pura tinha finalmente triunfado. Mas no foi bem assim. Havia vigorosa, muitas vezes sarcstica, oposio s concluses de Mendel (Provine, 1971). Esse duelo cientfico envolveu principalmente trs ingleses - William Bateson versus Karl Pearson e W. F. R. Weldon, cada lado apoiado por um grupo de seguidores. As duas escolas eram fundamentalmente diferentes em suas propostas. Bateson procurava informaes sobre herana atravs de cruzamentos experimentais. Weldon, Francis Galton e Karl Pearson procuravam aplicar mtodos matemticos, especialmente estatsticos, aos problemas biolgicos. A oposio destes biometristas realmente surpreendente, se lembrarmos que Mendel se baseou na matemtica. A disputa bsica comeou antes de 1900 e estava relacionada com a temtica evolutiva. Mais 46

uma vez era o caso de paradigmas conflitantes. Weldon, Galton, Pearson e outros eram seguidores de Darwin, acreditando que a evoluo dos seres est baseada em alteraes filogenticas graduais. Em populaes naturais a variao tende a ser contnua. Quando organizados pelo tamanho ou outra caracterstica qualquer, os indivduos de uma espcie parecem mostrar uma variao contnua. No surpreende que se considerasse a evoluo envolvendo mudanas to pequenas que, apenas aps longo intervalo de tempo, seria possvel observar qualquer diferena. A lei da herana ancestral de Galton Uma importante assero desta escola da variao contnua era a lei da herana ancestral de Galton. Ele considerava a herana na sua totalidade e realava que cada caracterstica hereditria de um indivduo no provinha apenas dos pais, mas tambm dos ancestrais mais remotos. Galton (1897) props sua famosa lei, baseando-se em cuidadoso estudo de genealogias de ces basset. A lei a ser examinada pode parecer primeira vista muito artificial para ser verdadeira, mas uma anlise mais acurada mostra a predisposio advinda dessa impresso superficial infundada. O assunto ser mencionado novamente, por enquanto a lei deve ser enunciada. Ela diz que os dois genitores contribuem ambos com aproximadamente metade, ou (0,5) do total da herana da descendncia; os quatro avs, com um quarto, ou (0,5)2; os oito bisavs, com um oitavo, ou (0,5)3, e assim por diante. Assim, a soma da contribuio ancestral expressa pela srie {(0,5) + (0,5) 2 + (0,5)3 + ....)}, que, sendo igual a 1, d conta de toda a hereditariedade. Assim, traos de nossos mais remotos ancestrais poderiam ser encontrados em ns e esta herana passada frearia mudanas repentinas. As exigncias darwinianas de um mecanismo para mudanas imperceptveis e lentas na evoluo estariam ento satisfeitas. Mas, como funcionaria a Lei de Galton? Atualmente, a noo de que nossos genes so herdados apenas dos nossos pais, exatamente metade de cada, est to fixada em nossas mentes, que no podemos imaginar um mecanismo de herana de ancestrais venerveis, sobrepondo-se paterna. A resposta que Galton estava se referindo a fentipos, e no gentipos. J era bem conhecido 47

que um indivduo pode expressar certas caractersticas fenotpicas que seus pais no expressam. Variao contnua e descontnua em debate A noo de variao contnua em evoluo e, claro, em herana, foi contestada por Bateson e outros. Ele havia estudado evoluo e hereditariedade por muitos anos. Em 1894, produziu o imenso volume Materials for the Study of Variation Treated with Especial Regard to Discontinuity in the Origin of Species (Materiais para o Estudo da Variao voltado especialmente para a Descontinuidade na Origem das Espcies). Ele desejava descobrir se as evidncias sugeriam que a evoluo produto de variao contnua ou descontnua, e concluiu que esta ltima possvel. Sobre isso, escreveu, em 1900: Ns aprendemos que Evoluo um processo muito lento, acontecendo por passos infinitesimais. Na horticultura raro acontecer algo desse tipo .... O melhoramento de organismos anda a galope. Nesse caso, portanto, em que pode ser mostrado que a variao dos organismos descontnua, no mais necessrio supor que para sua produo foram necessrias inmeras geraes de seleo e acmulo gradual das diferenas, e o processo de Evoluo torna-se assim mais fcil de ser entendido. De acordo com o que pode ser descrito como a viso mais aceita, esse processo consiste na transio gradual de um tipo normal para outro tipo normal. Essa suposio implica na hiptese quase impossvel de que cada tipo intermedirio apareceu sucessivamente entre as duas formas extremas. Se existir descontinuidade essa hiptese totalmente dispensvel. No de admirar que Bateson acreditou ser o paradigma mendeliano to aceitvel. Diferenas hereditrias poderiam ser marcantes, isto , as variaes pareciam ser descontnuas. Para Bateson e seus seguidores o modelo de Mendel era compatvel com o seu paradigma. (Como um aparte, seria interessante notar que o motivo deste debate ainda hoje pertinente. Alguns evolucionistas acreditam que o padro principal seguido pela evoluo baseado em mudanas pequenas. Outros acreditam ser o padro comum de pequenas mudanas, ocorrendo durante longos perodos de tempo, seguidas por mudanas bruscas de curta durao equilbrio pontuado. Parte da confuso conse-

qncia da dificuldade de definio quanto ao tamanho da mudana, para consider-la grande ou pequena. Alm disso, o que exatamente um longo ou um curto perodo de tempo? Alguns curtos perodos so de 10 mil anos. A resposta ser, provavelmente, que algumas linhagens caracterizam-se por mudanas lentas e relativamente constantes ao longo das eras, outras por perodos de estase e de saltos, e outras por mudanas pequenas em perodos muito longos de tempo. As duas escolas opostas seriam, ento: Evoluo Gradual e Evoluo em Saltos). A veemncia com que estes debates se deram indica claramente que os partidrios do antigo paradigma da variao contnua sentiram-se ameaados. Mesmo aqueles que, do outro lado, viram a proposta de Mendel como uma grande promessa, isto , a idia da variao descontnua, tinham que admitir que as concluses de Mendel no poderiam explicar os resultados de cruzamentos para todos os organismos e para todas as caractersticas. A conseqncia foi que Bateson e os hibridistas continuaram a realizar experimentos que mostravam at que ponto os princpios de Mendel poderiam ser aplicados, e Weldon e outros continuaram a apontar que nem tudo poderia ser explicado a partir da hiptese original de Mendel. Weldon (1902) resumiu as concluses de Mendel e escreveu: evidente a importncia de se testarem essas afirmaes incomuns por meio de um estudo cuidadoso dos resultados numricos, e pela aplicao de tais testes sempre que possvel. Tenho a impresso que ao negligenciarem essas precaues alguns escritores deixaram de apreciar como os resultados de Mendel concordam de modo surpreendentemente consistente com sua teoria. A concordncia entre o esperado e o obtido por Mendel Weldon submeteu as propores obtidas por Mendel a testes estatsticos e concluiu que: se os experimentos fossem repetidos uma centena de vezes, ns esperaramos obter um resultado pior cerca de 95 vezes, ou as chances contra um resultado igual ou melhor que esse de 20 para 1 . Anos mais tarde, ainda outro cientista inclinado rea matemtica, R. A. Fisher (1936), veio a considerar a questo dos dados de Mendel serem to bons. De qualquer modo, havia abun48

dante confirmao disto. Sinnott e Dunn (1925, p. 47) relacionaram as propores obtidas por Mendel e por outros seis experimentadores que tentaram conferir os resultados dele, entre 1900 e 1909. No caso de amarelo x verde, por exemplo, o nmero total de sementes foi 179399. Destas, 134707 eram amarelas (75,09%) e 44692 (24,91%) eram verdes. Mendel havia registrado 75,05% e 24,95%, respectivamente. Aparentemente, no era muito difcil a obteno de dados to bons. Mendel nunca publicou seu trabalho completo. Seu artigo de 1865 foi baseado em palestras e pareceu razovel a ele selecionar os dados dos cruzamentos que melhor ilustravam a hiptese que estava propondo. Em conferncias, normalmente, os cientistas no descrevem todos os seus experimentos, nem apresentam todos os seus resultados mesmo quando parecem faz-lo. Ento, Mendel tambm estava seguindo os procedimentos de sua poca, no os atuais. Mas, aps todas as verificaes e discusses, comprovouse que Mendel estava certo. S. Wright (1966) estudou novamente os dados, e concluiu Estou convicto, entretanto, de que no houve esforo deliberado em falsificao. A questo da dominncia e da recessividade Weldon continuou a questionar a noo de dominncia e recessividade. Ele cometeu o erro, que Mendel insistiu em evitar, de assumir que um tal fentipo implica sempre em um mesmo gentipo. Weldon conhecia muitas variedades de ervilhas que tinham caractersticas semelhantes quelas que Mendel usou. Mas elas nem sempre davam os mesmos resultados quando cruzadas. Weldon parecia no entender que um determinado fentipo em uma variedade poderia no ter a mesma base genotpica que um fentipo aparentemente idntico, em outra variedade. Alm disso, Weldon parecia no entender a importncia de se conhecer previamente a constituio dos pais se, por exemplo, o fentipo era produzido por um gentipo homozigtico ou heterozigtico. No entanto, foi capaz de citar casos onde a dominncia no era completa e os hbridos eram intermedirios. Isto seria comprovado em vrios casos, como Correns e outros iriam descobrir mais tarde. Weldon atacava a idia de que as afirmaes de Mendel eram universalmente vlidas e resumiu, Eu penso que ns s podemos concluir

que aquela segregao dos caracteres das sementes nos cruzamentos de ervilha no de ocorrncia universal, e que quando ocorre, pode ou no seguir as leis de Mendel. A lei da segregao, como a lei da dominncia, parece portanto se aplicar a raas com ancestralidades particulares... . O erro fundamental que invalida todo trabalho baseado no mtodo de Mendel negligenciar a ancestralidade, e tentar considerar o efeito completo de um genitor particular sobre a descendncia, como devido existncia no genitor de caracteres estruturais particulares; enquanto que os resultados contraditrios obtidos por aqueles que observaram a descendncia de genitores aparentemente idnticos em certos caracteres mostram claramente que no apenas os pais, mas tambm sua raa, isto , sua ancestralidade, devem ser levados em conta antes que os resultados de um cruzamento entre eles possam ser previstos. A ltima objeo um tanto estranha. Mendel tomou muito cuidado para se assegurar que suas variedades originais sofressem autofertilizao. Esta uma das razes pelas quais ele obteve sucesso, quando tantos falharam. O ltima frase da citao mostra que Weldon ainda achava que a Lei da Herana Ancestral de Galton deveria ser considerada. O mendelismo estava em clara competio com a Lei de Galton e, portanto, no surpreende que os biometristas estivessem ansiosos para contestar seus resultados e concluses foi isso que Weldon fez. Algumas indicaes da alta considerao desse grupo por Galton esto presentes nas seguintes citaes de Pearson (1898): Em resumo, se a lei do Sr. Galton pode ser firmemente estabelecida, ela uma soluo completa, em qualquer caso, para todo o problema de hereditariedade. Ela baseia a questo da herana em duas constantes, que podem de uma vez por todas ser determinadas; da sua importncia fundamental. E Pearson fecha seu artigo com esta arrogante nota: No momento eu meramente registraria minha opinio pessoal que, com todas as reservas devidas, me parece que a Lei da Herana Ancestral ir provar ser uma das mais brilhantes descobertas do Sr. Galton; altamente provvel que seu enunciado descritivo simples que rene sob o mesmo foco todas as complexas linhas da hereditariedade. Se a evoluo darwiniana

seleo natural combinada com hereditariedade, ento a afirmao simples que abarca todo o campo da hereditariedade dever se tornar para o bilogo uma referncia quase do mesmo nvel que a lei da gravitao para o astrnomo. Bateson versus Weldon Esta rea desenvolveu-se muito rapidamente no anos 1900 - 1903. O artigo de deVries (1900) sobre a redescoberta havia sido submetido publicao em 14 de maro de 1900 e o de Correns (1900) em 26 de abril. Essas publicaes geraram muita discusso. Logo depois, Bateson (1900b) discutiu tais artigos em um encontro da Royal Horticultural Society. Subseqentemente, foi feita uma traduo do artigo de Mendel (1902), possibilitando uma anlise por todo o mundo cientfico poucas bibliotecas deveriam possuir o original de 1865. O artigo anti-Mendel de Weldon (1902) foi recebido pelos editores da Biometrika em 9 de dezembro de 1901. Bateson iniciou imediatamente a produo de um livro, Mendels Principles of Heredity: A defense (Os Princpios da Hereditariedade de Mendel: Uma Defesa) (1902). Este livro no apenas apresenta uma traduo dos artigos de Mendel sobre Pisum e Hieracium, como tambm discute seus dados com clareza. Bateson, ento, documenta a viso errnea e distorcida de Weldon sobre o trabalho de Mendel. Weldon, vendo seu paradigma severamente contestado, respondeu-lhe de uma maneira que gostaramos de acreditar no ocorresse em Cincia. Ele trouxe o descrdito para si mesmo e para os biometristas como um grupo. Bateson conclui com o seguinte: Eu acredito que o que escrevi convenceu o leitor de que ns estamos [como conseqncia do trabalho de Mendel] finalmente comeando a nos mover. O Professor Weldon declara que ele no deseja depreciar a importncia das realizaes de Mendel; que ele deseja simplesmente chamar a ateno para uma srie de fatos que para ele parecem sugerir linhas frutferas de investigao. Eu me aventuro a auxili-lo nesse propsito, pois eu penso que, da maneira como ele est desamparado - citando uma frase de Horace Walpole, est to prximo de acender fogo com pano molhado quanto de estimular o interesse pelas descobertas de Mendel com sua apreciao humorada. Se eu contribui um pouco para essa causa, meu tempo no foi perdido.

49

Nestas pginas eu apenas toquei as fronteiras desse novo campo que est se descortinando diante de ns, de onde em um perodo de dez anos deveremos olhar para trs, para o cativeiro dos dias atuais. Logo, toda a cincia que lida com animais e plantas estar repleta de descobertas que o trabalho de Mendel tornou possveis. O criador, seja de plantas ou de animais, no mais se desgastando nos velhos caminhos tradicionais, ser superado apenas pelo qumico em recursos e em capacidade de previso. Cada concepo de vida da qual fizer parte a hereditariedade - e qual delas estaria isenta? - dever mudar antes do desencadeamento de fatos que est por vir. A previso de Bateson sobre o que se veria dez anos mais tarde estava correta - Morgan estabeleceria as bases para um desenvolvimento espantoso em Gentica. Bateson, o campeo e o profeta, fez muito para proteger e promover o mendelismo em sua fase inicial. Ele agiu de maneira similar a seu compatriota, Thomas Henry Huxley, que meio sculo antes, havia sido vigoroso e efetivo defensor do darwinismo.

Bateson (em Bateson e Saunders, 1902) forneceu-nos algumas das terminologias bsicas para a Gentica mendeliana: Esta pureza da linhagem germinativa, e sua incapacidade de transmitir simultaneamente as duas caractersticas antagnicas, o fato central do trabalho de Mendel. Ns chegamos assim concepo de unidades de carter existentes em pares antagnicos. Ns propomos para tais caracteres a denominao de alelomorfos, e para o zigoto formado pela unio de gametas portadores de alelomorfos antagnicos, a denominao de heterozigtico. De modo semelhante, o zigoto formado pela unio de gametas portadores de alelomorfos semelhantes deve ser chamado homozigtico. Mais tarde, o termo alelomorfo foi encurtado para alelo. Distinguindo gene e alelo Nesse ponto irei explicar como planejo usar os termos gene, loco gnico, e alelo. Os professores com larga experincia no ensino de Gentica em cursos introdutrios sabem o quanto difcil para os estudantes lidarem com essa terminologia. Esta dificuldade se deve mais ao modo inexato como muitos geneticistas usam estes termos, do que falta de competncia do aluno. E, atualmente, apareceu um complicador adicional: quanto mais se sabe a respeito das bases moleculares de um loco gnico, mais complicado se torna o conceito de gene. No momento, vamos ignorar o presente e discutir os genes como eles eram concebidos nos Anos Dourados da Gentica Clssica: pequenas contas de um colar na verdade, no exatamente isso. O principal problema o uso freqente dos termos alelo e gene como sinnimos. Eu tentarei no fazer isso, mas como muitos de meus amigos geneticistas, eu poderei algumas vezes incorrer nesse erro. Gene ser a menor poro do cromossomo (os tomos da hereditariedade!) que produz um efeito definido que, claro, precisa ser detectvel (ou ns nunca poderiamos saber de sua existncia). A posio que o gene ocupa no cromossomo ser seu loco. Alelos sero as diferentes variantes detectveis de um dado gene. Cada gene deve ter pelo menos dois alelos de outro modo ns no saberamos de sua existncia. Um gene revela sua existncia quando ele muta de tal modo que o novo alelo mutante tenha um efeito detectvel.

DEFININDO

ALGUNS TERMOS GENTICOS

No ano de 1902 surgiu uma outra publicao de fundamental importncia - a primeira das comunicaes ao Comit de Evoluo da Royal Society, realizada por Bateson e pela senhorita Saunders (1902). Em 1897 eles deram incio a uma srie de cruzamentos em uma grande variedade de plantas e animais. Seu objetivo inicial era aprender mais sobre os fenmenos de herana contnua e descontnua, e tambm sobre o fenmeno da predominncia, que mais tarde seria denominado dominncia. Naquela poca eles pensaram que, Do que foi averiguado at o momento sobre o fenmeno da hereditariedade, no se pode evitar a inferncia de que no h uma lei universal, mas que, por meio do estudo de diversos casos especficos, diferentes leis podem ser descobertas. Um empreendimento muito grande para Darwin, Ngeli, Weismann e Galton! Por outro lado, Bateson e Saunders, antes de publicarem seus resultados, perceberam que todo o problema da hereditariedade estava sofrendo uma completa revoluo. Essa viso permitiu que eles usassem o paradigma mendeliano para explicar seus resultados. 50

VARIAES

NAS PROPORES

MENDELIANAS

Os resultados dos cruzamentos entre variedades de ervilhas - dominncia e recessividade, segregao e segregao independente, com suas conse-qncias, ou sejam, a proporo 3 : 1 em F2 de um cruzamento monobrido e a proporo 9 : 3 : 3 : 1 no F2 de um cruzamento dibrido exibiram um alto grau de uniformidade e, por isso, levantaram a questo da universalidade dos resultados. Um caso tpico de monoibridismo Em sua primeira comunicao ao Comit de Evoluo, Bateson e Saunders (1902) descreveram vrios cruzamentos, muitos dos quais iniciados antes deles tomarem conhecimento do trabalho de Mendel. Saunders descreveu seus experimentos com plantas de espcies selvagens do gnero Lychnis. Algumas das espcies so pubescentes, isto , com plos, e outras so glabras, isto , sem plos. a. Cruzamentos de plantas pubescentes com plantas glabras produziram em F1 1006 plantas pubescentes e nenhuma glabra. b. Quando indivduos F1 foram cruzados entre si, obteve-se um F2 constitudo por 408 plantas pubescentes e 126 glabras. Esses resultados podem ser explicados assumindo-se a existncia de um gene condicionante do carter, que se apresenta sob a forma de um alelo dominante, condicionante do trao pubescente, e de um alelo recessivo, condicionante do trao glabro. Essa concluso se baseia no fato de o carter glabro no ter aparecido em F1, mas ter reaparecido em 1/4 dos indivduos de F2. c. Quando um indivduo F1 foi cruzado com uma planta pubescente pura, a descendncia continha 41 plantas pubescentes e nenhuma glabra. d. Quando um indivduo F1 foi cruzado com uma planta glabra pura, a descendncia obtida era formada por 447 plantas pubescentes e 433 glabras.

de dois tipos de gameta (nas mesmas propores) pela gerao F1, a qual , portanto, formada por indivduos heterozigticos. Com base nesse raciocnio, quando se deseja determinar o gentipo de um indivduo com fentipo dominante faz-se o cruzamento dele com um indivduo com fentipo recessivo. No caso dos descendentes serem todos de fentipo dominante, conclui-se que o indivduo em teste formou apenas um tipo de gameta, sendo, portanto, homozigtico. No caso de se obter os dois fentipos na prognie, conclui-se que o indivduo em teste formou dois tipos de gameta, sendo, portanto, heterozigtico. Esse tipo de cruzamento, com o intuito de se determinar o gentipo de um indivduo, chamado cruzamento-teste. Herana da forma da crista em Gallus gallus Na mesma publicao Bateson descreveu seus primeiros experimentos com Gallus gallus. Ele estudou muitos tipos de caractersticas, incluindo a forma da crista desses galinceos. (Fig. 12)

B C

D
Figura 12. Tipos de crista em Gallus gallus: A. crista simples; B. crista ervilha; C. crista rosa; D. crista noz.

Esses tipos de cruzamento, em que o indivduo cruzado com um ou outro dos tipos parentais Um dos tipos de crista era ervilha e o outro, recebe o nome de retrocruzamento. O fato de no retrocruzamento com o parental recessivo (d) simples. ter sido produzido 50% de indivduos pubescentes a. Quando ervilha foi cruzada com simples, todo o F1 apresentou crista ervilha. e 50% glabros corrobora a hiptese da produo 51

b. Quando indivduos F1 foram cruzados entre si, f. A situao se tornou mais complicada com o a descendncia foi composta por 332 indivduos resultado do cruzamento entre animais de uma com crista ervilha e 110 com crista simples. linhagem pura de crista ervilha com animais de uma linhagem pura de crista rosa. A gerao Esses resultados podem ser explicados assuF 1 foi uniforme mas todos os animais mindo-se a existncia de um gene condicionante do apresentavam um tipo de crista diferente da carter, que se apresenta sob a forma de um alelo dos tipos parentais crista noz. Esse tipo de dominante, condicionante de crista ervilha, e de um crista j era conhecido de outros cruzamentos. alelo recessivo, condicionante de crista simples. Em uma segunda publicao (Bateson et al., g. Quando os F1 com crista noz foram cruzados entre si, obteve-se, em F2, 99 noz, 26 rosa, 38 1905), Bateson relatou outros experimentos sobre ervilha e 16 simples. herana da forma da crista em Gallus gallus. Pode-se perceber que a proporo em F2 c. Quando indivduos com um terceiro tipo de aproximadamente 9 : 3 : 3 : 1. Esta proporo pode crista, denominada rosa, foram cruzadas com indivduos de crista simples obteve-se um F 1 ser tomada como significando o envolvimento de dois genes cada um deles com um par de alelos. totalmente composto por rosa. Estes alelos esto cumprindo as regras mendelianas d. Quando os F1 foram cruzados entre si, obtevede dominncia, segregao e segregao indepense um F2 formado por 221 rosa e 83 simples. dente. A situao enigmtica apenas porque ame. Quando indivduos F1 foram cruzados com bos os pares esto afetando a mesma caracterstica, indivduos de crista simples, a descendncia foi a forma da crista. (Figs. 13 e 14) composta de 449 rosa e 469 simples. (Fig. 13) h. Quando indivduos noz foram cruzados com Esses resultados podem ser explicados assusimples, a descendncia foi de 139 noz, 142 mindo-se a existncia de um gene condicionante do rosa, 112 ervilha e 141 simples. carter, que se apresenta sob a forma de um alelo Esse foi um cruzamento teste, onde um dominante, condicionante de crista rosa, e de um indivduo recessivo (crista simples) foi cruzado alelo recessivo, condicionante de crista simples. Assim, rosa e ervilha so ambos dominantes com um indviduo cujo gentipo se deseja sobre simples. Mas como pode haver trs alelos: determinar (crista noz). O fato de terem sido produzidos quatro tipos de descendente nas simples, rosa e ervilha?

P1 Fentipo Gentipo Gentipo dos gametas

Rosa RR R

Simples rr

P1 Fentipo Gentipo Gentipo dos gametas

Ervilha EE

Simples ee

F1 Fentipo Gentipo Gentipo dos gametas

Rosa Rr

Rosa Rr

F1 Fentipo Gentipo Gentipo dos gametas

Ervilha Ee

Ervilha Ee

e r F2 Fentipos e Gentipos E

F2 Fentipos e Gentipos

R Rosa RR

Rosa Rr simples rr Rosa Rr

Ervilha e Ee Ervilha simples EE ee Ervilha Ee

Figura 13. Diagramas genticos de cruzamentos entre galinceos com diferentes tipos de crista.

52

P1 Fentipos Gentipos Gentipos dos gametas

Ervilha EErr Er

Rosa eeRR eR

F1 Fentipos Gentipos Gentipos dos espermatozides eR

Noz EeRr ER

Noz EeRr ER

Er EERr EeRR EeRr Eerr eeRr EeRr

EERR EERr EErr EeRr eeRR eeRr eerr

Er eR

Gentipos dos vulos

er F2 Gentipos

EeRR EeRr Eerr

er

proporo fenotpica obtida em F2 pode-se explicar esse caso supondo que a cor da flor seja determinada por um nico gene com dois alelos. Uma planta homozigtica para um dos alelos produz flor rosa, a homozigtica para o outro alelo produz flor branca e a heterozigtica produz flor violeta [Nota do tradutor: Posteriormente, este e outros casos semelhantes, no quais a proporo fenotpica era 1 : 2 : 1 e no 3 : 1 passaram a ser denominados de padro de herana monofatorial com codominncia] Herana da cor da flor em Lathyrus e em Matthiola

Os cruzamentos a seguir mostraram outra variao das Figura 14. Diagrama gentico de um cruzamento entre galinceos de crista propores mendelianas e so mais difceis de serem ervilha e de crista rosa, mostrando a produo de indivduos de crista noz. compreendidos. Bateson e colaboradores mesmas porcentagens indica que o indivduo em (1906) haviam realizado numerosos cruzamentos teste produziu quatro tipos de gameta na propor- com ervilhas-de-cheiro (gnero Lathyrus) e com o de 1 : 1 : 1 : 1. Isso corrobora o envolvimento crucferas (gnero Matthiola), obtendo em amde dois genes com segregao independente. bos os casos resultados confusos. Casos como esse, em que dois ou mais genes a. Quando duas variedades diferentes com flores interagem na determinao de um mesmo carter, brancas foram cruzadas, todas as plantas de so conhecidos como interao gnica. F1 foram coloridas. b. Quando os F1 foram cruzados entre si, pareceu primeira vista, que havia um nmero igual Herana da cor da flor em Salvia de flores brancas e coloridas em F2. Entretanto, Em seu segundo trabalho (Bateson et al., estudos posteriores mostraram que a propor1905), Bateson apresentou os resultados de vrios o em F2 era na verdade de 9 coloridas para cruzamentos com plantas de sangue-de-ado 7 brancas. (gnero Salvia). Foram usadas linhagens com A figura 15 apresenta o diagrama de Bateson flores rosa e branca. para os resultados de F 2. Ele e seus co-autores a. Quando rosa cruzado com branco todo o F1 concluram que a cor branca das flores das duas violeta. variedades originais no era determinada pelo b. Em um cruzamento entre plantas F 1 foram mesmo gentipo. Um gentipo era CCrr e o outro obtidas 59 plantas de flores violetas, 25 rosas ccRR. Para que as flores fossem coloridas era e 34 brancas. Em outro cruzamento, foram necessrio que a planta possusse pelo menos um obtidas 225 violetas, 92 rosas e 114 brancas. C e um R. Em F1, por essa hiptese, todos seriam Note que o F1 apresenta um fentipo diferente CcRr, e portanto, coloridos. Casos como esse, dos de ambos os tipos parentais. Com base na em que alelos de um gene mascaram a expresso 53

P1 Fentipos Gentipos

Branca CCrr

Bran ccRR

CONCLUSO

Este quadro da Gentica dos primeiros anos do sculo XX Cr cR nos conscientizou da complexidade e confuso que existia naquela poca. Aqueles que F1 Fentipos Colorida X Colorida desejavam que o mundo vivo Gentipos CcRr CcRr se comportasse como o deli neado pelas ervilhas de Mendel CR CR Gentipos dos Gentipos logo verificaram que isto no CCRR gros de plen dos vulos era verdadeiro. Isto no signifiCr Cr ca que a histria original de CCRr CCRr cR cR Mendel estivesse errada. Isto significa apenas que ela estava CCrr CcRR CcRR cr cr incompleta e que estava sendo CcRr CcRr CcRr CcRr substituda por uma compreF2 Gentipos enso mais profunda da Ccrr ccRR Ccrr natureza da hereditariedade. Nenhuma das regras originais ccRr ccRr de Mendel mostrou-se verdadeira para todos os casos. ccrr Pode ser argumentado que o significativo progresso da Figura 15. Diagrama que mostra a natureza da razo 9 : 7 em F2 de um Gentica foi baseado numa cruzamento entre variedades de ervilha-doce. O estado colorido do carter atitude que pode ser vista como cor da flor aparece apenas quando os alelos C e R se encontram. Cada no-cientfica. Ou seja, desde quadro corresponde a um zigoto e as letras em seu interior mostram seu o momento em que as hipteses gentipo. Os quadros escuros representam as plantas com flores coloridas de Mendel se tornaram conhee os claros, as com flores brancas. cidas, ficou claro que elas no se aplicavam a todos os organisde outro gene, so conhecidos como casos e inte- mos. Entretanto, os que realmente acreditavam nelas ignoraram as excees e lentamente encontraram rao gnica com epistasia. Esses poucos exemplos de cruzamentos gen- explicaes para esses casos que podiam ser ticos indicam o tipo de problemas que se pode colocadas em termos originais do mendelismo. encontrar em estudos genticos. H inmeros medida que o conhecimento sobre experimentos de outros, claro. Os livros indicados na bibliografia cruzamentos em diferentes espcies aumentava, foi complementar trazem diversos exemplos. Muitos possvel expandir a teoria para acomodar os novos dos problemas nestes livros apresentam apenas resultados. Foi possvel compreender mais e mais as propores observadas e no os nmeros reais as excees. Descobriu-se que alguns dos problemas mais de indivduos em cada classe fenotpica. Ter maior valor se os estudantes manipularem os difceis tinham base cromossmica. Um desses dados reais porque eles podem chegar a uma problemas foi o dos cromossomos acessrios ou concluso importante; quando somente as cromossomos X. Para discutir esse caso propores so dadas, esta concluso importante precisamos ver agora o que os citologistas estavam fazendo nos primeiros anos do sculo vinte. j foi alcanada.
Gentipos dos gametas

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EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS
Preencha os espaos em branco nas frases de 1 a 6 usando o termo abaixo mais apropriado. (a) biometrista (d) hibridista (b) evoluo gradual (e) variao contnua (c) evoluo em saltos (f) variao descontnua 1. A escola ( ) se caracterizava por procurar obter informaes sobre hereditariedade por meio de cruzamentos experimentais. 2. A escola ( ) se caracterizava por procurar compreender hereditariedade por meio da aplicao de mtodos matemticos. 3. Um carter com ( ) apresenta diferenas pequenas e graduais entre os indivduos de uma populao. 4. Um carter com ( ) apresenta diferenas contrastantes, facilmente identificveis, entre os indivduos de uma populao. 5. Pequenas mudanas, lentas e relativamente constantes ao longo do tempo caracteriza a ( ). 6. Perodos de mudanas lentas e graduais seguido de perodos curtos de mudanas bruscas caracteriza o ( ). Preencha os espaos em branco nas frases de 7 a 10 usando o termo abaixo mais apropriado. (a) alelo ou alelomorfo (b) gene (c) loco (d) mutao (d) homozigtico (e) interao gnica sem epistasia (f) codominncia 11. O zigoto, e conseqentemente o indivduo, resultante da unio de gametas portadores de um mesmo tipo de alelo chamado ( ). 12. O zigoto, e conseqentemente o indivduo, resultante da unio de gametas portadores de alelos diferentes de um mesmo gene denominado ( ). 13. O fenmeno de dois ou mais genes atuarem na determinao de uma mesma caracterstica chamado ( ). 14. O fenmeno de a expresso de um alelo de um gene mascarar o efeito de um alelo de um outro gene chamado ( ). 15. O fenmeno de um alelo de um gene mascarar o efeito de um outro alelo do mesmo gene chamado ( ).

PARTE B: LIGANDO CONCEITOS

E FATOS

Indique os termos que completam ou respondem as questes de 16 a 28. 16. Para Weldon e Pearson, seguidores de Galton, o mendelismo era incompatvel com a teoria darwinista e por isso o combatiam. Esse pensamento era defendido pela chamada escola a. evolucionista. c. hibridista. b. biometrista. d. darwinista. 17. A lei da herana ancestral de Galton dizia que a. as caractersticas adquiridas eram hereditrias. b. as regras da herana podiam ser expressas matematicamente pelas frmulas 3:1 e 9:3:3:1. c. a contribuio ancestral na formao de um indivduo era de 1/2 dos pais, 1/4 dos avs, 1/8 dos bisavs e assim por diante. d. as mudanas hereditrias eram lentas e graduais e dependiam da ancestralidade. 18.Para Bateson a explicao mendeliana para a hereditariedade no se contrapunha ao darwinismo, pois o processo de evoluo podia envolver caractersticas a. adquiridas. b. com variao contnua. c. com variao descontnua. d. com efeito aditivo.

7. ( ) pode ser definido como a poro do cromossomo (um segmento da molcula da hereditariedade) que produz um efeito detectvel no indivduo. 8. Uma alterao hereditria em uma caracterstica chamada ( ). 9. Cada uma das formas detectveis de um ( ) chamada ( ). 10. A posio que um determinado ( ) ocupa no cromossomo seu (sua) ( ). Preencha os espaos em branco nas frases de 11 a 15 usando o termo abaixo mais apropriado. (a) dominncia (b) interao gnica com epistasia (c) heterozigtico

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Utilize as alternativas abaixo para completar as frases de 19 e 20. a. dominncia c. interao gnica b. epistasia d. variao contnua 19. Em galinhas, como observado por Bateson e colaboradores no incio do sculo, o cruzamento entre indivduos de crista noz produz descendncia com crista tipo noz, rosa, ervilha e simples, na proporo de 9:3:3:1, respectivamente. Trata-se de ( ). 20. Em ervilha-de-cheiro, Bateson e colaboradores obtiveram, no cruzamento entre plantas hbridas com flores coloridas, plantas com flores coloridas e plantas com flores brancas na proporo de 9:7. Trata-se de ( ). 21. O cruzamento de um indivduo com fentipo dominante com outro de fentipo recessivo, com o objetivo de se determinar o gentipo do primeiro, denominado a. cruzamento teste. c. monoibridismo. b. diibridismo. d. retrocruzamento. Utilize as alternativas abaixo para responder s questes de 22 e 25. a. diplide. c. heterozigtico. b. haplide. d. homozigtico. 22. No cruzamento entre um indivduo com um carter hereditrio dominante eoutro com o carter recessivo, todos os descendentes apresentaram o carter dominante. Pode-se dizer, portanto, que, muito provavelmente, o tipo parental dominante ( ). 23. Em um cruzamento entre um indivduo com um carter hereditrio dominante e outro com o carter recessivo, foram produzidos descendentes com o carter dominante e descendentes com o carter recessivo. Esse resultado permite concluir que o tipo parental dominante ( ). 24. Um indivduo que apresenta em suas clulas apenas um alelo de cada gene ( ). 25. Um indivduo que apresenta em suas clulas um par de alelos de cada gene ( ). Utilize as alternativas abaixo para responder s questes de 26 a 28. a. 1 : 2 : 1 c. 9 : 7 b. 9 : 3 : 4 d. 12 : 3 : 1 26. Nos casos em que alelos diferentes de um gene se expressam na condio heterozigtica, a proporo fenotpica esperada em um cruzamento entre dois hbridos ( ).

27. No caso de uma interao entre dois genes com segregao independente, em que o alelo dominante de um dos genes mascara ou inibe a expresso do outro gene, a proporo fenotpica esperada no cruzamento de dois duplo-heterozigotos ( ). 28. No caso de uma interao entre dois genes com segregao independente, em que o par de alelos recessivos de um dos genes mascara ou inibe a expresso do outro gene, a proporo fenotpica esperada no cruzamento de dois duplo-heterozigotos ( ).

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

29. Qual a explicao que se costuma dar para o fato de o trabalho de Mendel no ter sido entendido durante 35 anos? 30. Por que Moore admite que o antagonismo entre o mendelista Bateson e os biometristas Weldon e Pearson era uma questo de conflito de paradigmas? 31. Por que algumas pessoas levantaram a questo de que Mendel pode ter falsificado seus resultados? 32. Como surgem os diferentes alelos de uma gene? 33. Quais sero as propores fenotpicas esperadas em um cruzamento entre dois duploheterozigotos em que os dois genes apresentam segregao independente e interagem das seguintes maneiras: a. um dos genes na condio homozigtica recessiva, independentemente da condio do outro gene, condiciona o fentipo A; em qualquer outra situao o fentipo do indivduo ser B. b. os alelos recessivos no produzem nenhum tipo de pigmento e cada alelo dominante condiciona a produo de uma quantidade X de um mesmo pigmento. c. basta ter um alelo dominante de qualquer dos dois genes para apresentar o fentipo A; no caso dos dois genes estarem na condio homozigtica recessiva, o fentipo ser B. 34. Em rabanetes, a forma da raiz pode ser arredondada, ovalada ou alongada. Cruzamentos entre plantas de raiz alongada e plantas de raiz arredondada produziram apenas indivduos com raiz ovalada. Em cruzamentos desses indivduos entre si foram obtidos 400

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descendentes, dos quais 100 apresentaram razes alongadas, 195 apresentaram razes ovaladas e 105 apresentaram razes arredondadas. a. Proponha uma hiptese para explicar esses resultados. b. Com base na sua hiptese faa um diagrama do cruzamento e compare os resultados observados com os esperados de acordo com o diagrama. c. Os resultados obtidos esto de acordo com as leis mendelianas? Explique d. De acordo com a hiptese, se cruzssemos rabanetes de raiz ovalada com rabanetes de raiz arredondada, quais as propores fenotpica e genotpica esperadas na descendncia? 35. Em abboras, a forma do fruto pode ser discide, esfrica ou alongada. Uma variedade pura de frutos discides foi cruzada com uma variedade pura de frutos alongados. A gerao F1 foi inteiramente constituda por plantas de frutos discides. A autofecundao das plantas F1 produziu 80 descendentes, dos quais 30 tinham frutos esfricos, 5 tinham frutos alongados e 45 tinham frutos discides. a. Proponha uma hiptese para explicar esses resultados.

b. Com base na sua hiptese faa um diagrama do cruzamento e compare os resultados observados com os esperados de acordo com o diagrama. c. Os resultados obtidos esto de acordo com as leis mendelianas? Explique. 36. Em uma certa linhagem de animais foram identificados dois genes com segregao independente afetando a massa. Os alelos dominantes condicionam, cada um, um acrscimo de 10 gramas massa bsica de 50 gramas do duplo-recessivo. Determine a massa mxima e a mnima na descendncia de um cruzamento Aabb X AaBB. 37. A pigmentao da plumagem em uma certa linhagem de galinhas condicionada por dois genes com segregao independente. O alelo dominante de um dos genes ( C) condiciona a produo de pigmento enquanto o alelo recessivo ( c) inativo, condicionando cor branca. O alelo dominante do outro gene (I) inibe a formao de pigmento, enquanto o alelo recessivo (i) no o faz. Determine a proporo fenotpica em um cruzamento entre dois indivduos duplo-heterozigticos.

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A S O RIGENS DA T EORIA CROMOSSMICA DA HERANA

Stima aula
(T7)

Objetivos
1. Descrever a hiptese de Sutton que relaciona cromossomos e fatores hereditrios. 2. Listar as concluses de Sutton sobre o comportamento dos cromossomos na espermatognese de Brachystola sp. 3. Mostrar, por meio de esquemas, como se explica a segregao independente de dois pares de fatores localizados em dois cromossomos diferentes. 4. Explicar os experimentos de Boveri. 5. Comparar as abordagens de Sutton e de Boveri. 6. Descrever a contribuio de Montgomery ao estudo dos cromossomos. 7. Explicar a estratgias de estudo cromossmico usada por Montgomery.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

RELAO ENTRE GENES E CROMOSSOMOS

Revendo o desenvolvimento conceitual da Gentica, podemos reconhecer 1902 como um ano de importantes acontecimentos. Em dois artigos, um publicado em 1902 e outro em 1903, o jovem Walter Stanborough Sutton (1877- 1916) demonstrou que havia um paralelismo entre o comportamento das unidades hereditrias postuladas por Mendel e o comportamento dos cromossomos na meiose e na fertilizao. A hiptese mais parcimoniosa, portanto, era a de que as unidades hereditrias fizessem parte dos cromossomos. Outra alternativa seria a de que as unidades hereditrias fizessem parte de estruturas celulares com comportamento exatamente igual ao dos cromossomos na meiose e fertilizao. Tudo isto muito bvio para ns atualmente a infalvel clareza da percepo tardia . Em 1902, estes conceitos estavam longe de serem claros. O geneticista mais proeminente da poca, William Bateson, no se convenceu das anlises e sugestes de Sutton. Edmund Beecher Wilson, certamente um dos citologistas mais importantes da poca, teve grande dificuldade em entender o

que Sutton estava propondo. Isso particularmente surpreendente, se considerarmos que, naquela poca, Sutton trabalhava no laboratrio de Wilson na Columbia University. Particularmente surpreendente quando tendemos a acreditar que a poca de uma descoberta corresponde quela em que o seu significado compreendido pela comunidade cientfica. Isto quase nunca ocorre leva um bom tempo para que o bvio se torne bvio.

MANUTENO

E INDIVIDUALIDADE

DOS CROMOSSOMOS

Duas das premissas da hiptese de Sutton eram: a) os cromossomos persistem durante o ciclo nuclear, isto , podem ser considerados estruturas permanentes, presentes mesmo durante a intrfase; b) os cromossomos possuem individualidade (isto , como sabemos atualmente, os cromossomos de uma clula diferem entre si, cada par de cromossomos homlogos tem um conjunto especfico de genes). Em 1902, essas premissas no podiam ainda ser consideradas como estando acima de qualquer

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suspeita. Explicar o desaparecimento dos cromossomos no estgio em que o ncleo de uma clula que acabava de se dividir entrava em repouso representava um srio problema para os que acreditavam na permanncia e individualidade dos cromossomos. A interpretao mais bvia era a de que os cromossomos fossem estruturas temporrias um fenmeno da fase mittica. Outros acreditavam que os cromossomos, entre as divises celulares, uniam-se pelas extremidades, formando um fio espiralado contnuo o espirema. O espirema, ento, se fragmentaria novamente em cromossomos no incio da diviso mittica seguinte. Entretanto, para que os cromossomos mantivessem sua individualidade, seria necessrio que a fragmentao ocorresse sempre no mesmo ponto, em todos os ciclos. Na segunda edio de seu livro The Cell, E. B. Wilson (1900) faz uma argumentao consistente em favor da hiptese da permanncia e individualidade dos cromossomos durante toda a vida da clula. Ele considera que as observaes de Rabl, feitas em 1885, eram uma evidncia de que os cromossomos no perdem sua individualidade ao final da diviso celular, persistindo individualizados na rede de cromatina do ncleo em repouso [interfsico]. Wilson cita tambm estudos de Boveri e de van Beneden, entre outros, mostrando que seja qual for o nmero de cromossomos que entra na formao do retculo nuclear [i.e., a cromatina do ncleo interfsico], o mesmo nmero se forma mais tarde a partir dele. A melhor evidncia da individualidade dos cromossomos veio de estudos em Ascaris. No final da telfase, a membrana nuclear das clulas desse animal forma lbulos envolvendo as extremidades dos cromossomos. Estes lbulos persistem e nas divises subseqentes, os cromossomos reaparecem exatamente nas mesmas posies, com suas extremidades acomodadas dentro dos lobos nucleares como antes.... Com base nesses fatos, Boveri conclui que os cromossomos precisam ser considerados como individualidades ou organismos elementares, que tm uma existncia independente na clula. Boveri expressa sua crena que ns podemos identificar cada um dos elementos cromticos que surgem do ncleo em repouso como um elemento definido que entrou na

formao daquele ncleo; a partir disso podemos tirar a importante concluso: que em todas as clulas originadas no curso regular das divises do ovo fertilizado, uma metade dos cromossomos rigorosamente de origem paterna e a outra metade de origem materna. As evidncias reunidas por Wilson eram relevantes, mas muitos citologistas no aceitavam a hiptese da persistncia dos cromossomos. interessante notarmos como as evidncias para conceitos fundamentais podem ser, de incio, bastante frgeis os lobos na membrana nuclear de Ascaris eram a melhor evidncia da persistncia dos cromossomos durante a intrfase. (Sobre isso Moore faz o seguinte comentrio: Durante o final dos anos 30, quando eu estava aprendendo Citologia com um aluno e sucessor de Wilson, Franz Schrader, na Columbia University aquelas protuberncias no ncleo de Ascaris ainda eram a principal evidncia da persistncia dos cromossomos na intrfase.) Na terceira edio de The Cell, Wilson (1928) relata que evidncias convincentes sobre a constncia dos cromossomos no foram obtidas at 1901: Que os cromossomos de algumas espcies podem apresentar diferenas de tamanho e de forma foi relatado por Flemming, Strasburger e outros observadores pioneiros, mas de incio no ocorreu aos citologistas que tais diferenas pudessem ter algum significado importante; elas eram consideradas variaes casuais ou flutuaes. Montgomery [1901] reconheceu a constncia das diferenas de tamanho, forma e, em alguns casos, de comportamento entre os cromossomos de uma mesma clula. Seu trabalho nesse campo, realizado especialmente em clulas da linhagem germinativa de insetos, constituiu a contrapartida morfolgica da dmonstrao experimental de Boveri [1902, 1907] das diferenas fisiolgicas e qualitativas dos cromossomos, contribuindo assim, de modo marcante, para a demonstrao da continuidade dos cromossomos e para a explicao citolgica das leis de Mendel.

O TRABALHO DE SUTTON EM BRACHYSTOLA

Os cromossomos de Brachystola O artigo de Sutton de 1902 foi um estudo dos cromossomos de clulas do testculo de gafa-

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nhotos do gnero Brachystola. Em seu artigo, sentava um problema a ser resolvido. Vamos ela afirma que As clulas de Brachystola,, como ignorar por um momento este cromossomo as de muitos anfbios, selquios, insetos e plantas acessrio e nos restringir aos outros 22, cujos com flores, exibem um conjunto cromossmico desenhos em cmara clara mostravam diversos cujos componentes possuem tamanhos bastante tamanhos e formas. Quando Sutton mediu diferentes. Isso permitiu que um dos pontos do cuidadosamente estes cromosso-mos, verificou [meu] trabalho fosse o exame criterioso de um que no existiam 22 tamanhos diferentes, mas grande nmero de clulas em diviso (princi- apenas 11. Em outras palavras, havia 11 pares de palmente dos testculos) a fim de determinar se, cromossomos, sendo que os do mesmo par como em geral se pensa, essas diferenas so apresentavam tamanhos iguais. (Fig. 16) Mesmo no sendo fcil identificar cromosmeramente casuais, ou se, de acordo com as idias recentes de Montgomery [1901], baseadas somos individuais, Sutton conseguiu reconhecer em um determinado par de elementos do ncleo que os 11 pares consistiam de oito pares grandes de uma espcie de Hemiptera, as relaes carac- e trs pequenos. Um estudo minucioso mostrou tersticas de tamanho so um atributo constante que a espermatognia sofria oito divises mitdos cromossomos considerados individualmente. ticas e, na metfase de cada uma delas, existiam Com o auxlio de desenhos feitos em cmara clara oito pares de cromossomos maiores e trs do conjunto cromossmico em vrias geraes de menores. Esta foi a evidncia que Sutton aceitou clulas, eu irei descrever brevemente a evidncia como indicadora de que os 22 cromossomos de Brachystola eram de 11 tipos. que me levou a optar pela ltima concluso. A anlise inovadora de Sutton precisava apenas de duas informaes adicionais: que os Meiose e fertilizao em Brachystola cromossomos eram estruturas celulares A espermatognia diferencia-se, ento, em permanentes e que eram estruturas individualmente especficas (isto , geneticamente diferen- espermatcitos que sofrem meiose. Ocorre o tes entre si e no, como acreditava Weismann, emparelhamento dos cromossomos de mesmo cada um contendo toda a informao hereditria). tamanho, formando 11 bivalentes oito grandes Como obter estas informaes? Sutton trabalhou e trs pequenos. Depois da segunda diviso em uma poca em que no era possvel o estudo da estrutura fina dos cromosA somos. O material com que lidava eram x B os cromossomos corados de clulas em mitose ou meiose, os quais podiam ser identificados apenas pelo tamanho. Mesmo este procedimento apresentava problemas, pois os cromossomos mudam de tamanho durante as divises celulares, aparecendo como fios longos e delicados na prfase e tornando-se curtos e grossos na metfase. Sutton se baseou nos tamanhos relativos dos cromossomos, j que aparentemente eles mudavam de tamanho de modo C sincrnico. As espermatognias de Brachystola sofrem uma srie de divises mitticas antes de entrar em meiose. A espermatognia jovem contm 23 cromosso- Figura 16 Ilustraes de Sutton dos cromossomos de Brachystola. mos. Um deles o chamado cromos- (A) Conjunto haplide de cromossomos do macho. (B) Conjunto somo acessrio, que j havia sido diplide de cromossomos da fmea. (C) Cromossomos mostrados observado em outras espcies e repre- em (A) arranjados em ordem de tamanho. 60

meitica, cada espermtide contm apenas um representante de cada um dos oito pares de cromossomos grandes e um de cada um dos trs pares pequenos. O desenho A da figura 16 mostra o nmero haplide de cromossomos aps a segunda diviso meitica. Na figura 16C, esto representados os cromossomos metafsicos, mostrando o cromossomo acessrio, esquerda, e os grupos de oito cromossomos grandes e trs pequenos, direita. As clulas da fmea eram mais difceis de serem estudadas. Sutton registrou, no entanto, que as fmeas possuiam 22 cromossomos; nova-mente oito pares de cromossomos longos e trs, curtos. Na figura 16B est apresentado um conjunto diplide de cromossomos de uma clula do folculo ovariano. O fato de tanto o ncleo do macho quanto o da fmea conterem o mesmo nmero de pares de cromossomos longos e curtos era uma evidncia adicional da especificidade dos cromossomos. Sutton props que a diferena de tamanho era real e no meramente casual como se considerava naquela poca. Assim, tudo indicava que no macho o nmero diplide fosse de 11 pares de cromossomos mais o cromossomo acessrio e que na fmea existiriam apenas os 11 pares cromossmicos. (Sutton cometeu um erro. Estudos posteriores revelaram 24 cromossomos na fmea: oito pares longos, trs pares curtos e um par de cromossomos acessrios). No ano anterior, McClung (1901) havia sugerido que o cromossomo acessrio (ou elemento X, como denominado por Henking em 1891) devia estar envolvido na determinao do sexo masculino, um assunto que voltaremos a discutir. De acordo com as observaes de Sutton, os vulos maduros de Brachystola deveriam, portanto, apresentar um nmero haplide de 11 cromossomos. Os espermatozides poderiam ser de dois tipos, metade contendo apenas 11 cromossomos e a outra metade, contendo 11 mais o cromossomo acessrio. A fertilizao resultaria, portanto, em dois tipos de descendentes. Parte teria 22 cromossomos, sendo fmeas, e parte teria, alm desses 22 cromossomos, o cromossomo acessrio, sendo machos. Anlise dos resultados Afinal, o que significaria tudo isso? Aqui est a parte extraordinria da anlise de Sutton: Em

seu conjunto, as evidncias fornecidas pelas clulas de Brachystola permitem concluir que um cromossomo s se origina pela diviso longitudinal de um cromossomo pr-existente e que os membros de um grupo cromossmico filho conservam, uns em relao aos outros, a mesma relao que existia no conjunto materno isso significa, em outras palavras, que cada cromossomo uma individualidade morfolgica. Essa concluso levanta a questo inevitvel se existe tambm uma individualidade fisiolgica, i.e., se os cromossomos representam respectivamente sries diferentes, ou grupos de qualidade, ou se eles so meramente agregados de tamanhos diferentes de um mesmo tipo de material e, portanto, qualitativamente semelhantes. Sobre essa questo minhas observaes no fornecem evidncias diretas. Mas bastante improvvel que as constantes diferenas morfolgicas que ns observamos existam a no ser como conseqncia de diferenas mais fundamentais das quais elas seriam uma expresso; e, alm disso, a distribuio desigual do cromossomo acessrio nos permitiu comparar as possibilidades de desenvolvimento das clulas que o possuiam e das clulas onde o cromossomo acessrio estava ausente. Considerando a constituio normal das clulas femininas examinadas e a semelhana do processo de reduo cromossmica nos dois sexos, tal comparao mostra que o cromossomo acessrio tem um poder no compartilhado por qualquer dos outros cromossomos o poder de imprimir nas clulas que o contm a estampa de masculinidade, de acordo com a hiptese de McClung. A generalizao dessa evidncia para o caso dos demais cromossomos mais uma sugesto do que uma prova, mas ela feita nesse caso como um complemento morfolgico das belas pesquisas experimentais de Boveri [ns voltaremos a esse assunto em breve]. Nesse trabalho Boveri mostra como ele obteve artificialmente para os vrios cromossomos de ourio-do-mar os mesmos resultados que a natureza est constantemente nos fornecendo no caso dos cromossomos acessrios de Orthoptera. Ele foi capaz de produzir e estudar o desenvolvimento de blastmeros deficientes em certos cromossomos da srie normal. Por srie normal entende-se aqui aquela que ocorre no ncleo de cada um dos produtos germi61

nativos maduros, uma vez que foi demonstrado claramente, pelos bem conhecidos trabalhos de fertilizao de fragmentos anucleados de vulos e de partenognese induzida por substncias qumicas, que ambos os produtos germinativos maduros so necessrios para fornecer toda a cromatina necessria para a produo de uma larva normal.... Todo ovo fertilizado, portanto, assim como toda clula derivada pela diviso dele, precisa ter cada carter coberto por dois cromossomos um de cada genitor.... Se, como os fatos em Brachystola sugerem to fortemente, os cromossomos so entidades persistentes, no sentido de que cada um possui uma relao gentica com outro da gerao precedente, necessrio aceitar a probabilidade de que cada cromossomo da mesma qualidade que aquele do qual se originou. Um dado tamanho relativo deve, portanto, ser considerado como uma caracterstica fsica de um determinado lote de qualidades definidas. Mas cada elemento da srie cromossmica do espermatozide tem o seu correspondente na srie cromossmica do vulo maduro e disso se conclui que ambos cobrem o mesmo campo no desenvolvimento. Quando os dois se renem, portanto, na sinapse (a sugesto de que cada cromossomo materno se une a um paterno foi feita primeiramente por Montgomery, 1901) toda a base cromatnica para um dado conjunto de qualidades herdadas dos dois genitores fica localizada pela primeira e nica vez em uma massa cromatnica contnua; e quando, na segunda diviso do espermatcito, as duas partes novamente se separam, cada uma vai inteiramente para um dos plos da clula fornecendo s clulas-filhas o grupo correspondente de qualidades do estoque materno ou paterno como devia acontecer. No ocorre, portanto, em Brachystola qualquer diviso qualitativa dos cromossomos mas apenas uma separao dos dois membros de cada par, os quais, uma vez que coexistem em um mesmo ncleo, podem ser considerados como controlando juntos certas pores restritas do desenvolvimento do indivduo. Sob luz dessa concepo ns somos capazes de ver uma explicao desse at agora problemtico processo, a sinapse, que faz com que os dois cromossomos que representam os mesmos caracteres espec-

ficos nunca entrem juntos no mesmo ncleo de uma espermtide ou de um vulo. Eu devo, finalmente, chamar a ateno para a possibilidade de que a associao dos cromossomos paternos e maternos em pares e sua subseqente separao durante a diviso reducional, como indicado acima, pode constituir a base fsica das leis mendelianas de herana. A esse assunto eu espero voltar em breve em uma outra publicao. Sutton realmente voltou a esse assunto no ano seguinte (1903), em um artigo ainda mais admirvel, The Chromosomes in Heredity (Os Cromossomos na Hereditariedade).

O TRABALHO DE SUTTON DE 1903

O trabalho de Sutton de 1903 discute o significado do que ele e outros pesquisadores observaram sobre cromossomos e mostra que existe uma impressionante semelhana entre o comportamento dos cromossomos e o comportamento dos hipotticos fatores hereditrios postulados por Mendel. As concluses bsicas do estudo de Sutton sobre os cromossomos de Brachystolasp. foram: 1. Os cromossomos de uma clula diplide podem ser agrupados em dois conjuntos morfologicamente semelhantes. Isto , cada tipo de cromos-somo est representado duas vezes ou, como dizemos atualmente, os cromossomos apresentam-se como pares de homlogos. Havia fortes razes para se acreditar que, por ocasio da fertilizao, um conjunto era derivado do pai e o outro, da me. 2. Os cromossomos homlogos se emparelham numa fase da meiose. 3. A meiose resulta em gametas que portam apenas um cromossomo de cada par de homlogos. 4. Os cromossomos mantm sua individualidade no decorrer da mitose e da meiose, apesar das grandes mudanas de aspecto que sofrem durante esses processos. 5. Na meiose, a distribuio dos cromossomos de um par de homlogos para as clulas-filhas independente da distribuio dos cromossomos dos outros pares. Se uma clula recebe um cromossomo de origem paterna de um par de homlogos, poder receber tanto o cromos62

somo paterno quanto o materno de um outro par, sendo isso uma questo de probabililidade. A concluso de Sutton foi que os resultados de Mendel podiam ser explicados supondo-se que os fatores hereditrios fossem parte dos cromossomos. Por exemplo, supondo que os alelos para sementes lisa e rugosa estudadas por Mendel estivessem em um par de cromossomos homlogos e que os alelos para sementes amarela e verde estivessem em um outro par de cromossomos homlogos, como mostrado na figura 17. Durante a meiose, os gametas do tipo parental liso-amarelo recebero um cromossomo de cada um dos dois pares de homlogos considerados e tero o gentipo RV. O tipo parental rugosoverde formar gametas rv. Assim, todos os indivduos em F1 tero o mesmo gentipo, RrVv. Na meiose dos indivduos F1, os cromossomos dos dois pares de homlogos considerados segregamse independentemente produzindo quatro tipos de gameta (RV, Rv, rV e rv) em propores iguais, 25% (ou 1/4) de cada tipo. A combinao aleatria dos gametas masculino e feminino produzir na gerao F2 quatro classes fenotpicas na proporo de 9 : 3 : 3 : 1. como mostrado no quadro (diagrama de Punnett) da figura 17. Esse rigoroso paralelismo entre os resultados genticos e as observaes citolgicos davam suporte a hiptese de Sutton de que os fatores mendelianos seriam partes dos cromossomos. Essa hiptese fornecia uma explicao formal para as principais suposies de Mendel. Por exemplo, o problema da pureza dos gametas ficaria esclarecido se as unidades hereditrias fossem partes dos cromossomos. A pureza dos gametas seria, ento, resultado da meiose, que ao impedir a ida de cromossomos homlogos para o mesmo gameta, evitaria a formao de gametas portadores dos alelos R e r ou V e v. A segregao independente dos fatores mendelianos podia ser explicada supondo-se que os cromossomos de dois ou mais pares de homlogos se segregam independentemente na meiose. Sutton no tinha como verificar isso; ele via a separao dos cromossomos de cada par de homlogos, mas no era possvel saber se os cromossomos de origem materna e paterna de dois pares de homlogos se segregavam independentemente. Neste caso, foram os resultados genticos que ajudaram a anlise citolgica: se

as unidades hereditrias so parte dos cromossomos e, se as unidades hereditrias segregam-se independentemente, os cromossomos tambm devem ter segregao independente. Esses resultados no podem ser considerados como uma prova absoluta de que os genes so parte dos cromossomos. Os genes poderiam ser parte de alguma outra estrutura celular desconhecida que tivesse um comportamento semelhante ao dos cromossomos na meiose, mitose e fertilizao. Assim, temos duas hipteses alternativas: uma envolvendo fatores conhecidos, os cromossomos, e outra envolvendo fatores desconhecidos, ou seja, algum outro componente celular. Quando um cientista se confronta com uma situao como esta, o bom senso sugere que a hiptese envolvendo fatores conhecidos seja a base do programa de pesquisa. Seria mais vivel fazer observaes e planejar experimentos para testar o papel dos cromossomos na hereditariedade do que procurar primeiramente por estruturas celulares desconhecidas com comportamento semelhante ao dos cromossomos. Os resultados dos testes das previses deduzidas a partir da hiptese de que genes so partes de cromossomos logo mostrariam ao pesquisador se o caminho seguido era promissor. Apesar da anlise requintada de Sutton no devemos nos esquecer que este foi apenas um passo na longa e difcil jornada que levou concluso de que o ncleo celular, ou alguma parte dele, era a base fsica da hereditariedade. Uma jornada iniciada cerca de 40 anos antes com a imaginativa suposio de Haeckel, e reforada 20 anos mais tarde pelas anlises de Hertwig, Strasburger, Klliker and Weismann. Devemos tambm ressaltar que nos primeiros anos do sculo vinte, o nmero de cientistas nos Estados Unidos que ganhavam fama mundial, aumentou rapidamente. De fato, a Gentica iria logo se tornar uma Cincia americana. Dedues a partir da hiptese de Sutton Sutton formulou uma hiptese frutfera; ou seja, suficientemente especfica para permitir previses passveis de serem testadas. A partir da hiptese genes so partes dos cromossomos pde-se procurar outros paralelos entre comportamento gentico e comportamento cromossmico. Se a hiptese fosse correta, qualquer 63

Gentipos cromossmicos dos pais

R R VV

r r v v

Liso - amarelo

Rugoso - verde R V

Gametas

r v

Gerao F1
Liso - amarelo

R r V v

R r V v Liso - amarelo

R V R R VV V

Gametas

Gametas
R v

R v R R V v V R r VV v Liso - amarelo R r V v Liso - amarelo R r v v Liso - verde r r V v R r V v Liso - amarelo r r

Liso - amarelo R R V v Liso - amarelo R R v v Liso - verde R r V v Liso - amarelo R r VV Rugoso amarelo r r V v r r v v Rugoso amarelo R r

r V

Liso - amarelo

VV Liso - amarelo R r V v Liso - amarelo v v Liso - verde

r v

Gerao F2

Rugoso amarelo

Figura 17. Distribuio dos fatores hereditrios postulados por Mendel, admitindo-os como parte dos cromossomos.

Rugoso - verde

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variao no comportamento usual dos cromossomos deveria se refletir nos resultados genticos. Da mesma forma, se os resultados genticos obtidos no fossem os esperados de acordo com as leis mendelianas, deveria ser encontrada uma base cromossmica para o desvio. Algumas das dedues a partir dessa hiptese j foram mencionadas anteriormente. Outras esto mencionadas a seguir. Assumamos como verdade o que Sutton disse sobre os cromossomos e o que Mendel disse sobre hereditariedade. Nesse caso, a segregao de alelos diferentes, A e a por exemplo, deve significar que tambm h uma segregao dos cromossomos meiticos. E isso realmente observado na primeira diviso da meiose. Alm disso, o fato aparentemente inexplicvel da pureza dos gametas, isto , de cada gameta possuir apenas um alelo de um par contrastante, significa que apenas um membro de cada par de cromossomos homlogos pode entrar no gameta. Observaes citolgicas sugerem fortemente a veracidade desse fato. De modo semelhante, a segregao independente de alelos de dois ou mais pares de genes pode ser justificada pela segregao independente dos cromossomos na anfase da primeira diviso meitica. Isto, entretanto, permaneceu apenas como provvel, pois a segregao dos cromossomos no pde ser demonstrada enquanto no foi possvel distinguir entre os membros de um par de cromossomos homlogos. Sutton conclui (1903, negrito dele): Assim, os fenmenos da diviso das clulas germinativas e da hereditariedade parecem ter as mesmas caractersticas essenciais, viz., pureza das unidades (cromossomos, fatores) e a transmisso independente dos mesmos; enquanto como um corolrio, segue-se em cada caso que cada uma das unidades antagnicas (cromossomos, fatores) est contida em exatamente metade dos gametas produzidos. As dedues mencionadas at agora puderam ser testadas porque tanto os resultados citolgicos quanto os genticos estavam disponveis. Sutton continuou sua deduo prevendo que resultados diferentes do observado por Mendel deveriam ser esperados caso sua hiptese estivesse correta: Ns encontramos razes, nas consideraes precedentes, para acreditar que h uma relao definida entre cromossomos e alelomorfos ou

unidades de carter mas ns no nos perguntamos se um cromossomo inteiro ou apenas parte dele considerado como base de apenas um alelomorfo. A resposta deve ser, inquestionavelmente, em favor da ltima possibilidade, pois de outra maneira o nmero de caractersticas diferentes de um indivduo no poderia exceder o nmero de cromossomos nos gametas: o que indubitavelmente contrrio aos fatos. Ns devemos, assim, assumir que pelo menos alguns cromossomos esto relacionados a um certo nmero de diferentes alelomorfos. Se for esse o caso, e tendo em vista que os cromossomos mantm permanentemente sua individualidade, os alelomorfos presentes em um mesmo cromossomo devem ser herdados juntos. Por outro lado, no necessrio assumir que todos devam se manifestar em um organismo, porque aqui entra a questo da dominncia e ainda no sabido se dominncia uma funo de um cromossomo inteiro. Pode ser que o cromossomo possa ser divisvel em entidades menores (como Weismann assume), as quais representariam os alelomorfos e podem atuar como dominantes ou recessivas de modo independente. Nesse caso, o mesmo cromossomo pode portar simultaneamente alelomorfos recessivos e dominantes. Assim, Sutton estava deduzindo que devia haver muitos genes no mesmo cromossomo e, se fosse esse o caso, que eles deveriam ser herdados juntos. Se os genes de um mesmo cromossomo fossem herdados juntos, no haveria a possibilidade de segregao independente e no observaramos, nesse caso, as propores genticas do tipo encontrado por Mendel - e por muitos outros autores na poca. Pode-se deduzir ento que uma exceo s razes mendelianas originais deveria ocorrer caso existissem mais pares de alelos do que pares de cromossomos homlogos.

SUTTON - WILSON - M ORGAN

Sutton tinha 25 anos e era estudante de E. B. Wilson no Laboratrio de Zoologia da Columbia University, quando publicou seu trabalho em 1902. Essa publicao termina assim: um prazer expressar aqui minha gratido ao Prof. E. B. Wilson pelos muitos conselhos valiosos e por sua assistncia na pesquisa sobre Brachystola e na preparao da presente publicao 65

Como mencionado anteriormente, Wilson estava h muito interessado na possibilidade de os cromossomos serem a base fsica da hereditariedade. Alm disto, ele possuia um grande conhecimento de Citologia e Embriologia, j tendo publicado as primeiras duas edies do livro The Cell. Um de seus amigos mais chegados era Th. Boveri, cuja brilhante pesquisa havia contribudo muito para o conhecimento dos cromossomos e sua possvel participao na hereditariedade. Wilson foi para a Columbia University diretamente do laboratrio de Bryan Mawr em 1891 e foi seguido por Thomas Hunt Morgan que deixou o mesmo laboratrio em 1904 (Crampton, 1942). As complexas e sinergsticas interrelaes de Wilson, Sutton e Morgan chegaram ao seu clmax na dcada seguinte com o trabalho em Drosophila melanogaster. Uma vez mais, entretanto, ns iremos notar a enorme dificuldade destes cientistas, neste caso Wilson e Morgan, que estavam fazendo cincia normal dentro do paradigma aceito no momento, para compreender um novo paradigma. Um brilhante cientista, a despeito de muito jovem, com a mente no saturada por uma tremenda quantidade de hipteses competidoras e fatos confusos, foi capaz de ver ordem conceitual onde os eminentes pesquisadores no conseguiram. E.B.Wilson descreve como Sutton explicou sua hiptese: Eu me lembro bem, quando, no incio da primavera de 1902 [o primeiro trabalho de Sutton saiu no nmero de dezembro de 1902 do Biological Bulletin, e o segundo no nmero de abril de 1903], Sutton mostrou-me pela primeira vez suas principais concluses, dizendo que ele acreditava que realmente havia descoberto porque o cachorro amarelo amarelo. Eu tambm me lembro claramente que, naquele momento, eu no compreendi completamente sua concepo nem mesmo percebi a enorme importncia de sua descoberta. Ns passamos juntos o vero seguinte (1902) fazendo estudos zoolgicos na costa, primeiro em Beaufort, N.C., mais tarde em South Harpswell, Me, e foi somente ento, no curso de muitas discusses, que eu pela primeira vez percebi a extenso e o significado fundamental de sua descoberta. Hoje, a base citolgica das leis de Mendel, da maneira como foi elaborada por ele, forma a base de nossa interpretao de muitos dos mais intrincados fenmenos da

hereditariedade, incluindo a separao e a recombinao de caracteres em geraes sucessivas de hbridos, o fenmeno da correlao e ligao gnicas, do sexo e da herana ligada ao sexo e uma vasta srie de processos relacionados que eram completamente misteriosos antes que sua explicao fosse concebida. Em seguida ao aparecimento das publicaes de Sutton, Boveri afirmou, em 1904, que na poca em que esses trabalhos foram publicados ele prprio j havia chegado mesma concluso geral. Isto, no entanto, no desmerece em nada a faanha de Sutton, que tomar seu lugar na histria da Biologia como um dos mais importantes avanos de nosso tempo. Ele deixou uma marca indelvel no progresso cientfico, e seu nome conhecido onde quer que se estude Biologia... Durante aquele vero, Sutton trabalhou em tempo integral em sua teoria sobre a relao entre cromossomos e as leis de Mendel e ao retornar a Nova York ele imediatamente preparou sua publicao. Seu primeiro trabalho, como j comentado, foi publicado no final de 1902, e o segundo no incio da primavera do ano seguinte. Estes dois curtos trabalhos seriam de natureza preliminar, uma apresentao mais completa de suas concluses, juntamente com um grande nmero de belos desenhos, j concludos naquela poca, seriam apresentados em uma publicao posterior, que ele pretendia apresentar como tese para a obteno do ttulo de Ph.D. (doutor em Filosofia) na Columbia University. Foi um grande pesar para ns que as circunstncias impediram a realizao deste plano e provocaram o trmino de suas investigaes citolgicas. Apesar de seu brilhante talento como pesquisador talvez fosse mais correto dizer por causa desse talento a carreira de professor no o atraia. Se tivesse sido possvel assegurar-lhe um apoio financeiro para uma vida devotada apenas pesquisa, ele no teria, eu acredito, hesitado em aceit-la. Mas ele teve de seguir seu prprio caminho no mundo e desde o incio tinha uma forte inclinao para o estudo da Medicina. A combinao de circunstncias foi irresistvel; aps um ano ou dois trabalhando em negcios, ele retornou Columbia University, ingressou na Escola de Medicina e graduou-se com nota mxima dois anos depois. Os comentrios de Wilson foram extrados de um volume histrico publicado em 1917 (Sutton, 1917). Aps uma brilhante carreira como mdico, 66

Sutton morreu com a idade de 39 anos. Em sua breve vida na pesquisa biolgica ele produziu dois trabalhos que podem, provavelmente, ser comparados em importncia e brilho com os de Mendel e de Watson e Crick. Uma vez convencido da hiptese de Sutton, Wilson tornou-se um forte defensor da idia. Apesar de antes de 1900, a maioria de seu trabalho ter sido no campo da Biologia do Desenvolvimento, aps as publicaes de Sutton, a pesquisa de Wilson voltou-se para o estudo citolgico dos cromossomos. A clareza e a talentosa explicao da hiptese de Sutton no implicaram em sua imediata aceitao. Antes da Segunda Guerra Mundial era muito grande o intervalo de tempo entre uma importante descoberta cientfica e sua aceitao como verdade acima de qualquer suspeita razovel. Esse intervalo muito mais curto agora que existem muito mais cientistas trabalhando nos mesmos problemas, por isso o progresso to rpido.

quadriltero, mas tambm diagonalmente entre cantos opostos. Os cromossomos eram, ento, separados de uma maneira anormal para as primeiras quatro clulas resultantes da primeira diviso. Boveri percebeu que ali estava um procedimento que podia alterar o conjunto de cromossomos que uma clula recebe. (Fig. 18)

Figura 18. Fuso quadripolar em ourio-do-mar, que resulta da fecundao de um vulo por dois espermatozides.

A CONTRIBUIO

DE

B OVERI
Na espcie de ourio-do-mar utilizada por Boveri, o nmero diplide de cromossomos era 36. Esses cromossomos eram pequenos e aparentemente uniformes. Em princpio, no havia razo para se supr que os cromossomos individuais diferissem uns dos outros. Lembre-se que Weismann havia sugerido que cada cromossomo continha toda a informao hereditria. Entretanto, Boveri quis testar a hiptese de que os cromossomos diferiam uns dos outros e que um conjunto completo de 36 cromossomos era necessrio para o desenvolvimento normal. Num zigoto monoespermtico normal, os 36 cromossomos se duplicam antes da primeira diviso para formar 72 cromossomos e estes so distribudos equitativamente na primeira diviso mittica, indo 36 para cada clula-filha. As divises mitticas subseqentes, durante o desenvolvimento, mantm este nmero. Uma vez que o nmero monoplide de cromossomos 18, um embrio diesprmico teria 54 cromossomos: 18 de cada um dos dois proncleos espermtidos e 18 do proncleo do vulo. Cada cromossomo se duplicaria antes da primeira diviso do zigoto originando108 cromossomos. O embrio sofreria ento a primeira diviso atpica que resultaria em quatro clulas. No haveria como cada uma dessas clulas receber um 67

Foi mencionado anteriormente, que a Citologia na virada do sculo era uma Cincia bastante descritiva. Ela se baseava no tratamento das clulas com diversos reagentes qumicos que coravam diferencialmente algumas estruturas celulares. Naquela poca, no era possvel testar a hiptese de que a base fsica da hereditariedade residia nos cromossomos com base na previso que dela decorre; ou seja, se a hiptese fosse verdadeira, a retirada de cromossomos individuais deveria resultar em alguma alterao no organismo. No entanto, Boveri (1902 e, especialmente, 1907) conseguiu executar tal faanha. Por mais de uma gerao, os ovos e os embries de equinodermos haviam sido estudados pelos citologistas e embriologistas e sabia-se como obter artificialmente seus vulos e espermatozides. Pesquisadores pioneiros haviam observado que se um concentrado de espermatozides fosse usado para fertilizar os vulos, dois espermatozides podiam entrar no mesmo vulo. Cada espermatozide carregava um centro de diviso (centrolos e centrossomo) que se dividia. Assim, formavam-se quatro centros de diviso, que se dispunham na forma de um quadriltero no ovo. As fibras do fuso estendiam-se a partir desses centros, no apenas ao longo dos lados do

complemento normal de 36 cromossomos: se os 108 cromossomos fossem divididos igualmente entre as quatro clulas, cada uma delas receberia 27 deles. Alm disso, a anlise de clulas fixadas e coradas mostrou que a distribuio dos cromossomos entre as quatro clulas era na maioria dos casos irregular. Assim, se cada clula, realmente, necessitasse do complemento normal de 36 cromossomos para que o desenvolvimento fosse normal, estes ovos diesprmicos deveriam ter um desenvolvimento anormal. Isto foi o que aconteceu: de 1500 embries originados de ovos diesprmicos, 1499 eram anormais (o nico normal pode ter sido um erro experimental). Boveri descobriu que se os ovos diesprmicos fossem agitados, um dos centros de diviso podia no se dividir. Neste caso, formavam-se trs centros de diviso, dispostos em forma de tringulo, com fibras entre eles. Um embrio desse tipo, ao se dividir, originaria trs clulas. Novamente, os cromossomos seriam distribudos para as clulas-filhas de maneira irregular, mas, nesse caso, existiria pelo menos uma chance de cada clula-filha receber um conjunto normal de 36 cromossomos se 108 cromossomos forem divididos em trs lotes, o resultado ser 36 cromossomos por lote. De 719 embries desse tipo, 58 desenvolveram-se normalmente. (Fig. 19)

fosse normal. Isto significava que cada um dos cromossomo do conjunto possuia qualidades especficas apesar do fato de morfologicamente todos eles parecerem idnticos.

COMPARAO ENTRE AS ABORDAGENS DE SUTTON E DE B OVERI

Sutton e Boveri usaram dois mtodos completamente diferentes para chegar a uma concluso semelhante: os cromossomos so a base fsica da hereditariedade. Eles no mostraram, claro, que os cromossomos so os nicos portadores da informao hereditria. A hiptese de Sutton relacionando genes e cromossomos foi feita e testada sem que ele nunca tivesse visto um gene, ele imaginava um gene como parte de um cromossomo. Ele relacionou genes e cromossomos porque eles se comportavam de maneira aparentemente idntica na meiose e fertilizao. Esta foi uma evidncia indireta, mas descobertas de relaes causais em cincia, com freqncia, se baseiam no comportamento paralelo de fenmenos. H muito tempo, o ciclo dirio das mars foi associado com a posio relativa da lua e, em menor grau, com a posio relativa do sol. A relao entre a lua e as mars pde ser checada de vrias maneiras e a hiptese foi estabelecida com tal firmeza que se pode prever, com grande preciso, as mars futuras. O nico modo prtico de estudar a relao entre a lua e a mar o comportamento paralelo uma vez que no possvel realizar um experimento onde a lua seja retirada do sistema solar para que as conseqncias disso possam ser observadas. Correlaes, entretanto, no implicam necessariamente em relaes causais. H muito tempo suspeitase que a relao entre o ciclo lunar de 28 dias e o ciclo menstrual de 28 dias da mulher causal, mas no h evidncias convincentes que permitam relacionar os dois fenmenos. Boveri realizou um teste mais direto para verificar a relao entre cromossomos e herana, alterando os cromossomos e estudando as conseqncias dessas alteraes. Qual dos mtodos melhor, o direto de Boveri ou o correlativo de Sutton? No que se refere ao apoio hiptese em questo, os dois so aproximadamente iguais. Fora isso, h uma grande e importante diferena. Qual seria o prximo passo 68

Figura 19. Fuso tripolar em ourio-do-mar.

Segundo Boveri, estes resultados concordavam com o nmero esperado pela lei das probabilidades de embries que receberiam um conjunto normal de cromossomos em cada clula e dessa forma poderiam se desenvolver normalmente. A concluso foi, portanto, que cada clula no embrio precisava ter o conjunto normal de 36 cromossomos para que o desenvolvimento

na abordagem de Boveri? difcil imaginar como, com a metodologia da poca, se poderia obter maiores informaes sobre a natureza da hereditariedade seguindo aquela abordagem. Poderia se pensar na remoo de cromossomos individuais mas, no apenas esta metodologia no era possvel como tambm no havia como, no ouriodo-mar, distinguir um cromossomo do outro. A abordagem de Sutton, por outro lado, foi muito mais requintada do que a de Boveri. Ele foi capaz de ligar o mendelismo e a Citologia to estreitamente, o que Boveri no conseguiu fazer, a ponto de sugerir dedues possveis de serem testadas. Sutton lanou as bases conceituais que permitiram Gentica clssica atingir seu ponto mais alto uma dcada mais tarde, com os trabalhos do grupo de Morgan em Drosophila melanogaster. E, interessante notar, que algumas vezes o grupo de Morgan foi capaz de manipular cromossomos individuais por meio de mtodos genticos. A hiptese de que os genes so parte dos cromossomos , algumas vezes, chamada de a hiptese Sutton-Boveri ou ainda de hiptese de Boveri-Sutton. Isto surpreendente quando se considera a contribuio relativa de ambos os autores em 1902-1903. Boveri apenas sugeriu, mas Sutton elaborou a hiptese e suas implicaes de maneira brilhante. Suspeita-se que a citao de Boveri como um co-autor tenha ocorrido mais devido a importncia que ele teve na poca e no pelo contedo do que ele disse. E Boveri foi realmente, um grande cientista com uma longa lista de descobertas de importncia fundamental. Sutton e, num grau menor, Boveri no foram os nicos, nos anos seguintes redescoberta do trabalho de Mendel, a suspeitar que a Citologia iria fornecer os mecanismos para explicar a herana mendeliana. Em 1924, E.B.Wilson disse: A possvel coneco entre a disjuno mendeliana e a diviso reducional foi sugerida quase ao mesmo tempo por vrios autores, inclusive Strasburger, Correns, Guyer and Cannon. Foi, entretanto, Sutton (1902-1903) o primeiro a expor claramente, em todo o seu significado, a explicao citolgica dos fenmenos mendelianos que mostrado pelo comportamento dos cromossomos, iniciando assim o formidvel movimento na direo que se seguiu. Foi o mesmo Correns um dos primeiros a compreender o trabalho de Mendel. O caso de W.A.Cannon especialmente interessante. Ele

tambm era um estudante na Columbia University mas pertencia ao Departamento de Botnica enquanto Sutton era do Departamento de Zoologia. Cannon estava estudando a citologia de plantas hbridas de algodo e observou a diviso reducional, vendo nela uma possvel relao com a herana mendeliana. Essa hiptese era um assunto quente e a questo da prioridade certamente iria acontecer. Os dois estudantes solicitaram a Wilson que publicasse um curto trabalho anunciando o que eles haviam feito, o que ocorreu em 1902. Uma vez que estes pesquisadores, ambos estudantes desta Universidade, chegaram mesma explicao por meios diferentes, eu preparei, por sugesto dos dois interessados, esta breve comunicao a fim de colocar suas concluses, obtidas de maneira independente, de um modo adequado para chamar a ateno sobre este assunto. O primeiro trabalho de Cannon foi publicado em dezembro de 1902, assim como o de Sutton. Em 1903, Sutton publicou mais dois trabalhos adicionais. Uma vez mais um importante conceito estava no ar. Quando o mendelismo surgiu em 1900, a Citologia estava num estgio de desenvolvimento capaz de explic-lo. Esse fato foi ressaltado por Wilson: Montgomery (1901), sem ter conheci-mento da fundamental lei da segregao de Mendel, reuniu quase todos os dados essenciais para essa explicao, ainda que no os tenha relacionado especificamente com os fenmenos genticos. (Wilson, 1924) Nesse estgio de desenvolvimento cientfico, Sutton pde dar um pequeno passo experimental e uma gigantesca contribuio conceitual. Mas, como j vimos, nem todos estavam prontos para entender o significado da nova hiptese.

CONTRIBUIO DE

MONTGOMERY

Um dos mais influentes estudos citolgicos na virada do sculo foi a investigao detalhada da espermatognese e oognese numa variedade de insetos hempteros, realizada por Montgomery (1901). A importncia deste trabalho reside na rica variedade do material descrito e no fato de, em muitos dos casos, ele ter fornecido evidncias que permitiram a outros pesquisadores realizar importantes alteraes na teoria vigente. Tanto Sutton quanto Wilson encontraram muitas coisas 69

importantes nas observaes e interpretaes de Montgomery. Na poca em que nenhuma das hipteses mencionadas a seguir era amplamente aceita, Montgomery interpretou seus resultados sugerindo que os cromossomos eram estruturas celulares permanentes; que eles existiam em pares de homlogos sendo que um deles era herdado do pai e outro da me; que a sinapse consistia no emparelhamento desses cromossomos homlogos; que na meiose cada espermtide recebia um cromossomo de cada tipo. Ele descreveu os cromossomos acessrios, mas no os relacionou com a determinao do sexo. As espcies de Hemiptera so, sob vrios pontos de vista, ideais para esse tipo de estudo. Os cromossomos no so muito numerosos, com freqncia diferem estruturalmente uns dos outros, e a maioria das espcies pode ser facilmente coletada. Entretanto, uma das caractersticas mais importantes a organizao dos testculos. As clulas imaturas esto localizadas em uma das extremidades do rgo e, medida que se avana para a extremidade oposta, os vrios estgios da espermatognese ocorrem em seqncia, finalizando com o espermatozide maduro. Assim, em um nico testculo, pode-se estudar todo o processo da espermatognese e se ter certeza da ordem de ocorrncia dos vrios estgios. Montgomery comeou pela elaborao de uma lista dos problemas de interesse: o significado das mudanas no estgio da sinapse, o significado da cromatina dos nuclolos, as razes para uma diviso reducional, o significado da seqncia de estgios no ciclo germinativo, e a questo do porqu diferentes espcies possuem diferentes numeros de cromossomos... impossvel responder estes problemas pelo exame de uma nica espcie e, por esta razo, esto apresentados aqui os resultados de um estudo comparativo da espermatognese de 42 espcies de Hemiptera heteroptera, pertencentes a 12 famlias diferentes. Este estudo comparativo evidenciou certos fenmenos completamente inesperados como a descoberta de quatro espcies com um nmero mpar de cromossomos [refere-se a cromossomos sexuais]; esta descoberta forneceu fatos para explicar-se como o nmero de cromossomos pode mudar com a evoluo das espcies, e como a cromatina do nuclolo deve se originar. E somente tal estudo

comparativo pde fornecer fatos para mostrar que no estgio de sinapse os cromossomos bivalentes so formados pela unio dos cromossomos paterno e materno - ou seja, que h um estgio de conjugao dos cromossomos. O mtodo comparativo na Citologia no pode ser superestimado, a menos que, claro, cuidadosas e detalhadas observaes tenham sido realizadas simultaneamente. Uma vez que apenas uma anlise raramente capaz de servir como base de explicao para todos os problemas, uma investigao de um certo nmero de formas sempre mostra que umas so mais favorveis que outras para responder certas questes, e ento h chance de que uma descoberta completamente inesperada possa ser feita e que tenha um grande significado. Justifica-se assim a utilizao do mtodo comparativo em Citologia.... Os comentrios de Montgomery chamam a ateno para um importante princpio de pesquisa cientfica: com freqncia enfatizam-se certos tipos de evidncias ao invs de considerar todas as evidncias indiscriminadamente. Se os cromossomos de apenas uma espcie de Hemiptera mostraram um comportamento peculiar, por que usar este fato para apoiar uma hiptese em detrimento das outras 41 espcies que no mostraram tal comportamento? Este procedimento pode parecer no cientfico, mas ns iremos verificar que o grande sucesso dos geneticistas foi conseqncia do fato deles terem dado nfase aos resultados que concordavam com a hiptese de Mendel e ignorado aqueles que estavam em desacordo com aquela hiptese. No devido tempo, as excees foram entendidas e incorporadas na teoria da Gentica. O desenvolvimento conceitual da Gentica pode ser comparado com a formao de um cristal em uma soluo supersaturada. Os ons em soluo so como os fatos desorganizados acumulados a respeito de cromossomos, de cruzamentos e de Biologia em geral. Um pequeno cristal, a hiptese de trabalho, comea a se formar e gradativamente, todos aqueles ons distribudos aleatoriamente incorporam-se em um todo organizado. Montgomery tinha 28 anos de idade quando seu trabalho clssico foi publicado. Quase a mesma idade de Sutton. Ambos morreram antes dos 40 anos. 70

EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS
Preencha os espaos em branco nas frases de 1 a 6, usando o termo mais apropriado: (a) clula diplide (e) origem paterna (b) clulas haplides (f) origem materna (c) espirema (g) meiose (d)fertilizao 1. Existe um paralelismo entre o comportamento dos cromossomos na ( ) e o comportamento previsto por Mendel para as unidades hereditrias. 2. Em todas as clulas originadas por mitose, a partir do ovo fertilizado, uma metade dos cromossomos de ( ) e a outra metade de ( ). 3. Em uma ( ) os cromossomos podem ser agrupados em dois conjuntos morfologicamente semelhantes. 4. Da meiose resultam ( ) que portam apenas um cromossomo de cada par de homlogos. 5. A ( ) resulta na formao de uma clula com pares de cromossomos homlogos. 6. Muitos citologistas pioneiros acreditavam qua os cromossomos, na intrfase, ficavam unidos pelas extremidades, formando um fio contnuo ao qual davam o nome de ( ). Preencha os espaos em branco nas frases de 7 a 11, usando o termo mais apropriado: (a) centro de diviso (b) diviso reducional (c) zigoto diesprmico (d)zigoto monoesprmico (e) disjuno mendeliana 7. A fecundao de um vulo por um nico espermatozide origina um ( ). 8. ( ) aquele resultante da entrada de dois espermatozides em um nico vulo. 9. ( ) a denominao genrica da estrutura localizada nas extremidades do fuso de uma clula em diviso. 10. Os membros de um par de fatores se separam no(a) ( ). 11. A segregao dos alelos conhecida tambm como ( ). 12. Se nas clulas espermatogoniais do gafanhoto Brachystola sp. existem 22 estruturas cromossmicas (sem contar o cromossomo acessrio), quantos bivalentes ou ttrades estaro presentes na primeira diviso meitica? a. 22. b. 11. c. 44. d. 10. 13. Se nas ovognias do gafanhoto Brachystola sp. existem 24 estruturas cromossmicas (contando o par de cromossomos acessrios), quantos bivalentes ou ttrades estaro presentes na primeira diviso meitica? a. 24. b. 12. c. 48. d. 22. 14. A espermatognese no gafanhoto Brachystola sp. produz espermatozides com a. 11 cromossomos apenas. b. 12 cromossomos apenas. c. 23 cromossomos apenas. d. 11 e com 12 cromossomos. 15. O fundamental na hiptese de Sutton era que a. cada cromossomo portava um nico gene. b. genes faziam parte dos cromossomos. c. genes se segregavam na meiose. d. cromossomo era sinnimo de gene. 16. De acordo com a hiptese de Sutton, a pureza dos gametas se deve ao fato de a. apenas um cromossomo de cada par de homlogos entrar em cada gameta. b. cada par de cromossomos portar apenas um gene. c. os alelos de dois ou mais genes poderem interagir. d. os cromossomos homlogos se emparelharem na prfase I da meiose. 17. Indique a alternativa que combina corretamente as observaes I e II com as concluses A e B. Observaes: I - Em uma espcie de Ascaris o nmero diplide de cromossomos 2 (2n = 2). II - Ovos de uma espcie de ourio-do-mar com nmero diplide de cromossomos (2n = 36) desenvolvem-se normalmente. Concluses: A - Os cromossomos de uma clula diferem geneticamente entre si. B - Um nico cromossomo pode portar todos os genes de uma espcie. a. A concluso A pode ser tirada da observao I e a concluso B, da observao II.

PARTE B: LIGANDO CONCEITOS E FATOS

Indique a alternativa mais apropriada para completar as frases 12 a 17.

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b. A concluso A pode ser tirada da observao II e a concluso B, da observao I. c. A concluso A pode ser tirada da observao I, mas a concluso B no tem suporte em nenhuma das observaes. d. A concluso B pode ser tirada da observao I, mas a concluso A no tem suporte em nenhuma das observaes. e. A concluso B pode ser tirada da observao II, mas a concluso A no tem suporte em nenhuma das observaes.

33. Como Boveri obtinha ovos com fusos mitticos tripolares? 34. Que resultados Boveri obteve em seus experimentos com ovos de ourio-do-mar tri e tetra polares?

35. Qual a concluso final de Boveri?

36. Por que se considera que a abordagem de Sutton foi melhor do que a de Boveri? 37. Quais as principais concluses de Montgomery sobre cromossomos? 38. Por que Montgomery escolheu insetos hempteros para seus estudos cromossmicos? 39. Por que Montgomery defendia a necessidade de se estudar um grande nmero de espcies para se tirar concluses sobre cromossomos? 40. Onde ocorre mitose e meiose nos seguintes organismos: samambaia, musgo, goiaba, pinheiro, cogumelo, r, mosca e caracol? 41. Considere uma clula heterozigtica quanto a trs genes (Aa Bb Dd) localizados em trs pares de cromossomos homlogos. Quais sero os gentipos das clulas resultantes de uma mitose e de uma meiose? 42. Considere que os alelos para semente rugosa e lisa da ervilha estejam no par 1 de cromossomos homlogos. Suponha tambm que os alelos para semente amarela e verde estejam no par 2. Faa um esquema da distribuio desses alelos, juntamente com os cromossomos portadores, em F1 e F2 de um cruzamento em que os parentais eram lisoverde e rugoso-amarelo. 43. Que tipos de clulas, em termos de nmero de cromossomos, so esperados na diviso de ovos tripolares de uma espcie com 2n = 2? 44. Em Drosophila melanogaster, o alelo que condiciona a cor castanha (selvagem) do corpo dominante sobre o que condiciona cor preta; e o alelo que condiciona asa normal dominante sobre o que condiciona asa vestigial. Quando fmeas de corpo preto e asas vestigiais so cruzadas com machos selvagens puros, toda a descendncia apresenta fentipo selvagem. Quando os machos dessa gerao F1 so retrocruzados com as fmeas parentais, 50% da descedncia apresenta corpo castanho e asas longas e 50% apresenta corpo preto e asas vestigiais. Explique esses resultados com base na hiptese de Sutton.

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

18. Qual foi a hiptese proposta por Sutton? 19. No que Sutton se baseou para formular sua hiptese? 20. Quais eram duas das premissas da hiptese de Sutton? 21. O que Sutton observou na espermatognese de Brachystola? 22. Que tipos de gameta seriam produzidos pelos machos de Brachystola, com relao ao nmero de cromossomos? Por que? 23. Partindo-se da hiptese de que os genes estavam nos cromossomos, como se explicava o fato de um indivduo duplo-heterozigtico formar quatro tipos de gameta? 24. Que tipo de previso pode ser feita a partir da hiptese de Sutton? 25. Qual seria um teste da hiptese de Sutton no realizvel na poca? 26. O que levou Sutton a supor que cada cromossomo portaria diversos genes? 27. Segundo Sutton, como seria a segregao de genes localizados em um mesmo cromossomo? 28. Por que Wilson achou importante o trabalho de Sutton? 29. Como se pode obter ovos de ourio-do-mar fecundados por mais de um espermatozides? 30. O que acontece na primeira diviso de um ovo de ourio-do-mar diesprmico? 31. Que hiptese Boveri queria testar em seus experimentos com ovos diesprmicos? 32. Qual a deduo feita por Boveri e que foi testada em seus experimentos?

72

A DESCOBERTA DOS CROMOSSOMOS

SEXUAIS Oitava aula
(T8)

Objetivos
1. Descrever como foi descoberto o cromossomo sexual. 2. Explicar a hiptese de McClung sobre a determinao cromossmica do sexo. 3. Descrever como se d a determinao do sexo nos sistemas XX/X0 e XX/XY. 4. Definir: sexo homogamtico e sexo heterogamtico. 5. Descrever como foi descoberta a herana ligada ao sexo em mariposas. 6. Discutir a hiptese de Doncaster para explicar herana ligada ao sexo. 7. Explicar o padro de herana para genes localizados nos cromossomos sexuais.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

HENKING E O ELEMENTO X
Como citado anteriormente, Montgomery havia sugerido em seu trabalho de 1901 a importncia de se estudar uma grande variedade de organismos uma vez que alguns deles poderiam mostrar variaes no comportamento de seus cromossomos (termo usado pela primeira vez em 1888 por Waldeyer), o que forneceria informaes para se tirar concluses impossveis de serem tiradas de outra maneira. O caso dos cromossomos acessrios um exemplo disto. Foi o estudo do comportamento desses cromossomos que forneceu a evidncia definitiva de que os genes so parte dos cromossomos. Lembre-se a razo pela qual Boveri realizou experimentos de poliespermia em ourio-do-mar. Seu sistema forneceu um mecanismo para se obter a distribuio de grupos anormais de cromossomos para clulas de embries em incio do desenvolvimento. Como conseqncia, os embries morreram, apoiando a hiptese de que um lote normal de cromossomos era necessrio para o desenvolvimento normal. Apesar disso, este no foi um tipo de experimentao muito produtivo. No havia meios para reconhecer cromossomos individuais ou para relacionar fentipos com cromossomos especficos ou mesmo para controlar quais cromossomos entravam em que clula.

Como acontece com freqncia, a natureza estava realizando o experimento necessrio em paralelo. E foi necessrio um considervel espao de tempo para que os citologistas percebessem este fato. Em 1891, H. Henking publicou suas observaes sobre o comportamento dos cromossomos na espermatognese do percevejo Pyrrhocoris sp. No macho desta espcie, o nmero diplide de 23 cromossomos - 11 pares mais um cromossomo adicional, que ele chamou de elemento X. Na sinapse, os 11 homlogos formavam 11 bivalentes. Mas o comportamento do X era diferente; como no possua um homlogo ele no podia se emparelhar, mas ele se duplicava, formando uma estrutura dupla. Assim, no incio da meiose, cada clula apresentava 11 bivalentes mais o X na forma de univalente. No decorrer da primeira diviso meitica os 11 bivalentes separavam-se, e um univalente (= apenas um homlogo duplicado, com duas cromtides) de cada bivalente migrava para cada clula-filha. O univalente do X, no entanto, ia inteiro para um dos plos do fuso e, portanto, era includo em apenas uma das clulas-filhas. (Fig. 20) Na segunda diviso meitica da clula com apenas 11 univalentes, era observada a separao das cromtides de cada univalente e uma cromtide de cada univalente ia para cada uma

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de algum modo relacionado com a determinao do sexo. Ele diz: Estando x convencido da fundamental importncia do cromossomo acessrio, por causa de seu comportamento na espermatognia e no espermatcito primrio, e fascinado pelo seu comportamento no usual na x diviso [meiose]do espermatcito, eu sugiro uma B C explicao que seria coeFigura 20. Meiose em macho de Pyrrhocorissp. (A) Espermatcito em rente com a importncia telfase da primeira diviso da meiose. O cromossomo X est indo para o destes fatos. Assumindo plo da direita. As clulas filhas resultantes esto mostradas nas figuras B que h uma diferena e C; o cromossomo X est presente em apenas uma delas, na C. (Conte o qualitativa entre os vrios nmero de cromossomos nas duas clulas). Dois tipos de espermatozides sero formados, como mostrado nas figuras D e E, um ter cromossomo cromossomos do ncleo X e outro no (Henking,1891). segue-se necessariamente que so formados dois tipos das clulas-filhas. Na clula contendo o elemento diferentes de espermatozide que, por fertiliX, uma cromtide de cada um dos 11 univalentes zao do vulo, produziriam dois tipos diferentes ia para cada um dos plos do fuso e o univalente de indivduos. Uma vez que o nmero de cada do X tambm se dividia, sendo que cada clula- um destes tipos de espermatozides o mesmo, deveria haver um nmero aproximadamente filha recebia uma de suas cromtides. Assim, das quatro clulas produzidas pela igual destes tipos de indivduos na descendncia. meiose masculina, duas tinham 11 cromossomos Ns sabemos que a nica qualidade que separa e duas, 11 cromossomos mais um cromossomo os membros de uma espcie em dois grupos o X. Desse modo, dois tipos de espermatozides sexo. Assim sendo, eu cheguei concluso de eram formados, um tipo com um X e outro sem. que o cromossomo acessrio o elemento que Henking descreveu o que ele havia observado determina que as clulas germinativas do sem maiores concluses. Mais tarde, foi embrio iro continuar o seu desenvolvimento, constatada a presena desse cromossomo pecu- do vulo pouco modificado at originar espermatozides muito especializados. liar em algumas outras espcies. Esta hiptese teve repercusso pelo fato de Esses cromossomos eram especialmente fornecer uma explicao para aqueles estranhos notados por uma ou mais das seguintes razes: a) eles se coravam diferentemente dos demais cromossomos que estavam sendo encontrados em cromossomos; b) eles se moviam para os plos um nmero crescente de espcies. Montgomery do fuso antes ou depois dos outros cromossomos; (1901) havia observado diversos casos. Sutton c) eles no apresentavam par, portanto no se (1902) havia descrito a mesma situao em gafaemparelhavam; d) eles eram distribudos para nhotos do gnero Brachystola, tendo escrito: apenas metade dos espermatozides. A grande assim, parece que ns encontramos uma maioria das observaes foi feita em machos, uma confirmao da sugesto de McClung de que o vez que a espermatognese era mais fcil de ser cromossomo acessrio est, de algum modo, relacionado com a determinao do sexo. estudada do que a oognese. Inicialmente acreditava-se que os cromossomos acessrios fossem cromossomos adicionais MCCLUNG 1901 e restritos aos machos. Sutton havia descrito que Em 1901, o citologista americano C. E. os cromossomos das clulas do ovrio eram McClung, sugeriu que o cromossomo X estava semelhantes queles do testculo exceto pela falta A D E 74

do cromossomo acessrio. Subseqentemente, foi descoberto que a fmea de Brachystola, ao invs de no possuir o cromossomo acessrio, possui dois. Portanto, McClung props uma hiptese frutfera.

WILSON 1905 - 1912: CROMOSSOMOS SEXUAIS

Na poca em que McClung props que os cromossomos acessrios ou cromossomos X estavam de alguma forma envolvidos na determinao do sexo, esses cromossomos j haviam sido observados em uma variedade de espcies. Uma vez que esta era uma das mais importantes hipteses da poca, muitas espcies de plantas e animais foram estudadas com o objetivo de se verificar at que ponto esta hiptese podia ser corroborada. Durante a primeira dcada do sculo XX, o estudo dos cromossomos sexuais seguiu um padro comum em Cincia; uma hiptese importante, provavelmente de larga aplicao, foi proposta embora com base em evidncias inadequadas. Esta era a situao da hiptese de McClung (1901) de que os cromossomos acessrios deviam determinar a masculinidade. A partir desta sugesto inicial seguiu-se um perodo bastante ativo de pesquisa. Disso resultaram observaes conflitantes, que deixaram claro que a sugesto original de que os machos tm um cromossomo extra no era vlida para todas as espcies. Alguns pesquisadores que no conseguiam encontrar cromossomos acessrios, propuseram uma variedade de hipteses para explicar este fato. Alguns acreditavam que estes eram cromossomos em degenerao, outros que eram um tipo especial de nuclolo, outros ainda pensavam que McClung estava provavelmente correto. O estgio de controvrsias terminou quando um ou alguns poucos indivduos, cuidadosos na seleo dos dados experimentais e cautelosos em suas concluses, trouxeram ordem conceitual ao campo que estava sendo investigado. E, novamente, como sempre acontece, dois ou mais indivduos, trabalhando independentemente, chegam essencialmente a uma mesma concluso simultaneamente. E. B. Wilson foi o principal responsvel pela soluo do problema dos cromossomos acessrios, mas o anncio de sua 75

descoberta coincidiu com uma publicao de Nellie M. Stevens que havia chegado a concluses semelhantes. Wilson (1905c) inicia seu trabalho do seguinte modo: O material pesquisado durante o ltimo vero demonstrou com grande clareza que os sexos em Hemiptera apresentam diferenas cromossmicas caractersticas e constantes. A natureza dessas diferenas no deixa nenhuma dvida da existncia nesses animais de algum tipo de relao definitiva entre cromossomos e determinao do sexo. As diferenas cromossmicas entre os sexos so de dois tipos. Em um deles, as clulas das fmeas possuem um cromossomo a mais em relao s dos machos; no outro, ambos os sexos possuem o mesmo nmero de cromossomos, mas um dos cromossomos dos machos muito menor que seu correspondente nas fmeas (o que concorda com as observaes de Stevens no besouro Tenebrio molitor). Esses tipos podem ser convenientemente designados como A e B, respectivamente. [Mais tarde, o tipo A passou a ser chamado Sistema XX (fmea) / X0 (macho) e B de Sistema XX (fmea) / XY (macho) de determinao do sexo.] .... Esses fatos admitem, eu acredito, uma interpretao. Desde que todos os cromossomos da fmea (oognia) podem se emparelhar simetricamente, no resta dvida de que a sinapse neste sexo d origem ao nmero reduzido de bivalentes simtricos, e que em conseqncia disso todos os vulos recebem o mesmo nmero de cromossomos. Este nmero ... o mesmo que aquele presente nos espermatozides que contm os cromossomos acessrios. evidente que ambos os tipos de espermatozides so funcionais, e que, no tipo A, as fmeas originam-se de vulos fertilizados por espermatozides portadores do cromossomo acessrio, enquanto que os machos originam-se de vulos fecundados por espermatozides desprovidos desse cromossomo (o reverso da idia de McClung). A situao em espcies do tipo B era essencialmente a mesma, exceto pelo fato de uma classe de espermatozides conter um cromossomo X e a outra, um Y. Stevens(1905) resumiu suas concluses do seguinte modo: Do ponto de vista da determinao do sexo, ns temos em Tenebrio molitor a mais interessante das formas consideradas neste trabalho. Tanto nas clulas somticas

quanto nas germinativas de ambos os sexos existe pequeno e muitos observadores poderiam no uma diferena no no nmero de cromossomos, ter notado. A figura 21, do trabalho de Stevens, mas no tamanho de um deles, o qual muito mostra o tipo de ilustrao que era usado nos pequeno nos machos e do mesmo tamanho que trabalhos de Citogentica da poca. Cortes de os outros 19 nas fmeas. Os ncleos de todos os tecido eram analisados na procura de clulas que vulos devem ser iguais em relao ao nmero e mostrassem o lote inteiro de cromossomos. Seu tamanho de seus cromossomos, enquanto corte 207 mostra uma clula do folculo ovariano absolutamente certo que as espermtides so de com 20 cromossomos grandes. Nos cortes 208a dois tipos quanto ao contedo cromatnico do e 208b, parte dos cromossomos estavam em ncleo metade delas possui 9 cromossomos um dos cortes e o restante no corte vizinho. grandes e 1 pequeno, enquanto a outra metade possui 10 S S cromossomos grandes. Uma vez 172 171 170 169 173 que as clulas somticas dos machos tm S 19 cromossomos grandes e 1 pequeno, enquanto as clulas 178 177 176 174 175 somticas das fmeas possuem 20 S cromossomos S S grandes, parece S S certo que um vulo 179 fertilizado por um 183 182 180 181 espermatozide contendo o cromossomo pequeno produz um macho, 187 184 enquanto um vulo 186 184 a 188 185 fertilizado por um espermatozide contendo 10 cromossomos de igual 191 tamanho produz uma 192 194 193 195 189 fmea. 190 Nem os trabalhos de Wilson, nem os de 198 a Stevens falam da 196 b grande dificuldade em se estudar os cro200 202 mossomos sexuais. 201 197 203 Em Tenebrio molitor, 199 por exemplo, todos S S os autossomos so muito pequenos e 208 b 207 208 a idnticos na aparn204 206 205 cia. O macho difere pela presena de um cromossomo muito Figura 21. Desenhos de Stevens (1905) dos cromossomos de Tenebrio molitor. 76

O conjunto diplide de cromossomos do macho est mostrado nos cortes 169 e 170. O de nmero 196 mostra o nmero haplide nas espemtides com 9 cromossomos grandes e 1 pequeno e o 197 mostra espermtides com 10 cromossomos grandes. Considerando a dificuldade em se trabalhar com tal tipo de material, no surpresa que a maioria dos problemas em Citologia tenha tido um incio marcado por controvrsias. As mais importantes contribuies de Wilson esto contidas em 8 longos trabalhos, Studies in Chromosomes I-VIII, publicados entre 1905 e 1912. Suas observaes, juntamente com as de outros pesquisadores, revelaram uma complexidade no imaginada por McClung e Sutton. Na maior parte dos animais, a fmea tem um par de cromossomos X e chamada de XX. Os machos de diversas espcies, por outro lado, variam consideravelmente. Alguns tem somente um X, sendo denominados X0 o 0 indica a ausncia de um cromossomo. Em outras espcies os machos podem ter dois cromossomos sexuais, um como o X da fmea e outro, em geral diferente em tamanho ou forma, denominado Y. Por isso estes machos so chamados XY. (Fig. 22) Em relao aos cromossomos sexuais, os machos nesse ltimo caso produzem dois tipos de espermatozides, um tipo que possui um cromossomo X e outro com um cromossomo Y. Pelo fato de produzirem esses dois tipos de gametas,
DETERMINAO DO SEXO TIPO XX / X0 = autossomos = cromossomo sexual

esses machos so denominados heterogamticos. As fmeas produzem apenas um tipo de vulo, sendo, portanto, homogamticas. [Foi verificado mais tarde que seres humanos e Drosophila melanogaster apresentam sistemas cromossmicos de determinao do sexo tipo XX / XY]. Estes dois padres de cromossomos sexuais, embora sejam os mais freqentemente encontrados, no esgotam a gama de possibilidades. Algumas espcies podem ter cromossomos sexuais mltiplos. Em aves e em Lepidoptera (borboletas e mariposas) as fmeas so heterogamticas e os machos homogamticos no que se refere aos cromossomos sexuais. Algumas das concluses que podem ser tiradas a partir dos numerosos estudos de Wilson, Stevens e outros so relacionadas a seguir. 1. O sexo cromossmico de um indivduo determinado no momento da fertilizao. 2. O sexo de um indivduo ser irreversvel se for baseado somente nos cromossomos sexuais a no ser que se possa alterar os cromossomos. 3. Se a meiose normal e a fertilizao casual, os dois sexos devem ser produzidos em nmeros aproximadamente iguais. 4. A relao entre sexo e cromossomos, firmemente estabelecida por volta de 1910, uma evidncia adicional que apia a hiptese de Sutton de que os cromossomos so a base da hereditariedade.
DETERMINAO DO SEXO TIPO XX / XY = autossomos = cromossomos sexuais

Complemento cromossmico diplide do macho

X XX

Complemento cromossmico diplide da fmea

Complemento cromossmico diplide do macho

XY XX

Complemento cromossmico diplide da fmea

Meiose produz dois tipos de espermatozide

Meiose produz um nico tipo de vulo

Meiose produz dois tipos de espermatozide

Meiose produz um nico tipo de vulo

Sexo determinado pelo tipo de espermatozide fecundante

XX X XX

Figura 22. Esquemas mostrando os mecanismos de determinao do sexo dos tipos XX/X0 e XX/XY.

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Sexo determinado pelo tipo de espermatozide fecundante

XY

HERANA LIGADA AO SEXO

Em 1906, Doncaster & Raynor descobriram um tipo de herana ligada ao sexo nas mariposas que eles estavam usando como material experimental. Dois anos mais tarde, o mesmo tipo de fenmeno foi descrito em canrios por Durham e Marryat e tambm por Noorduyn. A mariposa com que Doncaster e Raynor estavam trabalhando, gnero Abraxas, apresentava duas variedades. Uma das variedades, denominada grossulariata, tinha asas escuras devido a presena de grandes manchas; a outra variedade, denominada lacticolor, tinha manchas menores e suas asas eram mais claras. Quando um macho grossulariata era cruzado com uma fmea lacticolor a descendncia (F1) era toda grossulariata, e em F2 era obtida uma proporao de 3 grossulariata para 1 lacticolor, porm todos os indivduos lacticolor eram fmeas. O cruzamento de machos F1 (grossulariata) com fmeas lacticolor resultava em uma descendncia constituda por machos e fmeas lacticolor e por machos e fmeas grossulariata, na proporo de 1 : 1 : 1 : 1. Note que esta foi a

primeira vez que se obteve machos lacticolor nestes cruzamentos. O cruzamento de machos lacticolor com fmeas grossulariata resultou numa descendncia constituda por indivduos lacticolor e grossulariata, mas todos os lacticolor eram fmeas enquanto todos os grossulariata eram machos. (Fig. 23) Doncaster e Reynor observaram que, quando um macho lacticolor era cruzado com uma fmea grossulariata selvagem, todos os machos da descendncia eram grossulariata e todas as fmeas, lacticolor. A concluso que se podia tirar deste resultado era que, mesmo nas regies onde no existia a forma lacticolor, as fmeas grossulariata se comportavam como se fossem heterozigticas quanto a este carter. Foi elaborada uma hiptese baseada em duas premissas para explicar os resultados dos cruzamentos em mariposas. A primeira premissa era que a feminidade e a masculinidade seriam determinadas por um par de fatores mendelianos, sendo o fator para feminidade (F) dominante sobre o fator para masculinidade (M); deste modo, as fmeas seriam sempre heterozigticas
P MM G Gross.

MM g Lact. M Gametas

FM G Gross.

FM g Lact. F

M G

Gametas

M G

M g

F1

FM g

MM Gg Gross.

F1

FM G Gross.

Lact.

Gametas M g

F FM g

M g M G FM G Gross.

Gametas

Gametas M G

Lact.

F2

MM gg Lact. MM Gg

F2

MM Gg Gross.

Gross.

Figura 23. Representao esquemtica da hiptese de Doncaster e Reynor para a herana ligada ao sexo na mariposa Abraxas. esquerda, esquema do cruzamento entre macho lacticolor e fmea grossulariata. direita, esquema do cruzamento recproco: entre macho grossulariata e fmea lacticolor.

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MM Gg Gross.

F FM g Lact.

M g

Gametas

M G FM G Gross.

MM GG Gross.

com relao a esse par de fatores (FM) e os machos, homozigticos MM. A segunda premissa era que se os dois fatores dominantes, condicionantes do estado de carter grossulariata e da feminidade, coexistissem em um mesmo indivduo haveria uma repulso entre eles de modo que em cada vulo produzido por tal indivduo existiria um ou outro desses fatores, nunca ambos, ou se o fator dominante para feminilidade coexistisse com o fator recessivo para o estado do carter lacticolor, haveria tambm repulso entre eles. O desenvolvimento da gentica de drosfila logo iria fornecer uma explicao bem mais simples, como veremos no prximo item.

1910: POSSVEIS CONCLUSES SOBRE BASES FSICAS DA HEREDITARIEDADE

AS

Em 13 de Dezembro de 1910, Wilson terminou de escrever o trabalho Studies on Chromosomes VII (1911). Alguns meses antes, seu colega Thomas Hunt Morgan havia publicado uma breve

nota intitulada Sex Limited Inheritance in Drosophila (1910). O trabalho de Morgan descrevia o primeiro dos experimentos que viriam a ser considerados pelos bilogos como a prova definitiva de que os genes so parte dos cromossomos. Este paralelismo permitia fazer dedues, como apontado anteriormente. Uma deduo, relacionada aos cromossomos sexuais, era: Se genes so partes dos cromossomos sexuais, espera-se que a herana desses genes siga a herana dos cromossomos sexuais. Considere, por exemplo, o caso de um gene do cromossomo X de uma espcie em que as fmeas so XX e os machos XY (veja figura 22). A distribuio destes cromossomos tal que os descendentes machos s podem receber seu X de sua me (se recebesse um X tambm de seu pai, o indivduo seria uma filha). As filhas, por outro lado, recebem um X do pai e outro da me. De modo semelhante qualquer gene do cromossomo Y transmitido somente para os machos.

EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS
Preencha os espaos em branco nas frases de 1 a 6 usando o termo abaixo mais apropriado. (a) cromossomo X (d) sistema XY/XX (b) cromossomo Y (e) sexo homogamtico (c) sistema X0/XX (f) sexo heterogamtico 1. ( ) de determinao do sexo aquele em que o caritipo dos machos difere do das fmeas pela ausncia de um cromossomo de um dos pares de homlogos. 2. ( ) de determinao do sexo aquele em que o caritipo dos machos difere do das fmeas pela ausncia de um cromossomo de um dos pares de homlogos e pela presena de um cromossomo no presente nas fmeas. 3. ( ) aquele que, apesar de presente nos dois sexos, difere em nmero entre fmeas e machos. 4. ( ) aquele presente apenas nos machos. 5. Em uma espcie, os indivduos que formam apenas uma classe cariotpica de gameta constituem o ( ). 6. Em uma espcie, os indivduos que formam duas classes cariotpicas de gameta constituem o ( ).

PARTE B: L IGANDO CONCEITOS

E FATOS

Utilize as alternativas abaixo para completar as frases de 7 a 10. a. um tipo de espermatozide e um tipo de vulo. b. um tipo de espermatozide e dois tipos de vulo. c. dois tipos de espermatozide e um tipo de vulo. d. dois tipos de espermatozide e dois tipos de vulo. 7. A gametognese em uma espcie com determinao do sexo tipo XX/XY produz, com relao aos cromossomos sexuais, ( ). 8. A gametognese em uma espcie com determinao do sexo tipo XX/X0 produz, com relao aos cromossom os sexuais, ( ). 9. A gametognese em canrios produz, com relao aos cromossomos sexuais, ( ). 10. A gametognese na espcie humana produz, com relao aos cromossomos sexuais, ( ). 11. Em uma espcie de gafanhotos, as fmeas possuem 20 cromossomos nas clulas dos gnglios nervosos. Sabendo-se que nessa

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espcie o sistema de determinao do sexo do tipo XX/X0, espera-se que a. 100% dos vulos tenha 10 cromossomos e que 100% dos espermatozides tenha 9 cromossomos. b. 100% dos vulos e 100% dos espermatozides tenham 10 cromossomos. c. 100% dos vulos e 50% dos espermatozides tenham 10 cromossomos, e que 50% dos espermatozides tenha 9 cromossomos. d. 100% dos espermatozides e 50% dos vulos tenham 10 cromossomos, e que 50% dos vulos tenha 9 cromossomos. 12. Considere duas espcies, uma com sistema XX/XY e outra com sistema XX/XO, quem determina o sexo da prole a. a fmea em ambos os casos. b. a fmea no primeiro caso e o macho no segundo. c. o macho em ambos os casos. d. o macho no primeiro caso e a fmea no segundo.

21. Por que a herana da cor em mariposas foi chamada de herana ligada ao sexo? 22. Qual foi a hiptese de Doncaster para explicar a herana ligada ao sexo em mariposas e aves? 23. Admitindo-se como verdadeira a teoria cromossmica da herana, qual seria o padro de herana de genes presentes no cromossomo X? E de genes presentes no cromossomo Y? 24. Admitindo-se como verdadeira a teoria cromossmica da herana, qual seria a explicao para a herana ligada ao sexo em mariposas e em aves? 25. Represente, por meio de esquema, a segregao do par de cromossomos sexuais em um indivduo do sexo heterogamtico. 26. O heredograma abaixo representa a transmisso de uma anomalia que apresenta 100% de penetrncia ( Uma caracterstica tm penetrncia reduzida quando a freqncia de expresso de um gentipo menor que 100%, ou seja, nem todos os indivduos que tm um determinado gentipo o manifestam fenotipicamente. Em geral, esse conceito utilizado para estados dominantes de uma caracterstica em indivduos heterozigticos.

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

13. O que Henking observou em 1891 sobre o comportamento meitico do cromossomo que ele chamava de elemento X? 14. Que argumentos McClung usou para sugerir que o elemento X estava relacionado com a determinao do sexo? 15. No que a explicao de Wilson sobre o papel do cromossomo X na determinao do sexo diferia da hiptese de McClung? 16. Como determinado o sexo nos organismos com sistema XX/X0? 17. Como determinado o sexo nos organismos com sistema XX/XY? 18. No que o sexo homogamtico difere do heterogamtico? 19. Os resultados obtidos por Doncaster e Raynor no cruzamento entre machos escuros e fmeas claras de mariposa estavam de acordo com o esperado pela primeira lei de Mendel? Por que aqueles resultados chamaram a ateno dos pesquisadores? 20. Por que se concluiu que as fmeas escuras de mariposas sempre se comportavam como heterozigticas para esse carter?

a. Numere os indivduos de cada gerao de acordo com as regras apresentadas na aula sobre anlise de heredogramas. b. O padro de herana mais provvel desta anomalia ( ) ligada ao cromossomo X, dominante. ( ) ligada ao cromossomo X, recessiva. ( ) autossmica, dominante. ( ) autossmica, recessiva. ( ) holndrica. c. Se o indivduo V-2 casar-se com um indivduo no-afetado, qual a probabilidade deles virem a ter a primeira criana portadora da anomalia?

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27. Considere o heredograma abaixo. a. Numere os indivduos de cada gerao de acordo com as regras apresentadas na aula sobre anlise de heredogramas. b. Qual o padro de herana mais consistente para a anomalia em questo?

c. Supondo que o indivduo V-2 case-se com um indivduo no-afetado e que a anomalia tenha penetrncia de 85%, qual a probabilidade de uma segunda criana que eles venham a ter expressar a anomalia? d. Na terceira gerao, qual o significado do losango com o nmero 10 em seu interior?

10 3 2 2

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OS PRIMEIROS TRABALHOS COM DROSOPHILA MELANOGASTER

Nona aula
(T9)

Objetivos
1. Analisar o experimento de Morgan (1910) com o mutante white de Drosophila melanogaster. 2. Comparar os resultados de Morgan (1910) com os de Doncaster e Reynor (1906). 3. Discutir as hipteses de Morgan para explicar os resultados dos experimentos com o mutante white. 4. Explicar herana ligada ao sexo com base na teoria cromossmica da herana.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

O MUTANTE DE

OLHO BRANCO

A mais famosa mosca na histria da Cincia um macho da espcie Drosophila melanogaster, a mosca-da-banana, ou mosca-do-vinagre [inadequadamente chamada de mosca-das-frutas] (Fig. 24).

Figura 24. Imagos de Drosophila melanogaster: macho, esquerda, e fmea, direita .

Este indivduo tornou-se famoso porque tinha olhos brancos e no vermelhos como as moscas da sua espcie, mas to importante quanto isto foi o fato dele ter aparecido na Sala 613 do Schermerhorn Hall na Columbia University, na primavera de 1910. Esta era a Sala das Moscas, o laboratrio de Thomas Hunt Morgan e de um notvel grupo de jovens estudantes. Abaixo, no

mesmo edifcio, ficava o laboratrio de Edmund B. Wilson, que estava terminando a sua srie de artigos intitulada - Studies on Chromosomes. A mosca escolheu o momento e o lugar exatos para prolongar a sua vida curta e alcanar a imortalidade. Morgan conta essa histria da seguinte forma: Em uma linhagem de Drosophila [melanogaster] que estava sendo acompanhada por aproximadamente um ano, aps um considervel nmero de geraes, apareceu um macho de olhos brancos. As moscas selvagens tm olhos vermelho-brilhantes. O macho de olhos brancos, cruzado com suas irms de olhos vermelhos, produziu 1237 descendentes de olhos vermelhos e 3 machos de olhos brancos na gerao F1 o aparecimento desses trs machos de olhos brancos (F1) (devido evidentemente a novas alteraes) ser ignorado na presente comunicao. Os indivduos da gerao F1, cruzados entre si, produziram: 2459 fmeas de olhos vermelhos, 1011 machos de olhos vermelhos, 782 machos de olhos brancos. No apareceu fmea alguma de olhos brancos. O novo [estado do] carter mostrou ser, portanto, limitado ao sexo masculino no

82

sentido de que ele foi transmitido apenas do av para os netos. Mas o experimento a seguir mostra que o [estado do] carter no incompatvel com o sexo feminino. O [mesmo] macho de olhos brancos (mutante) foi, posteriormente, cruzado com algumas de suas filhas (F1), e produziu: 129 fmeas de olhos vermelhos, 132 machos de olhos vermelhos, 88 fmeas de olhos brancos, 86 machos de olhos brancos. Os resultados mostram que o novo [estado do] carter, olhos brancos, pode ser transmitido para as fmeas por meio de cruzamentos adequados e, conseqentemente, no limitado a um dos sexos. Ser discutido que as quatro classes de indivduos ocorrem aproximadamente em nmeros iguais (25 %). Vejamos o que se pode concluir com base nesses resultados. O cruzamento original de um macho de olhos brancos com fmeas de olhos vermelhos originou em F2 uma proporo de 4,3 moscas de olhos vermelhos para 1 de olhos brancos. Tal resultado poderia ser aceito como uma proporo de 3 para 1, uma vez que parecia evidente que os indivduos de olhos brancos eram menos viveis do que aqueles de olhos vermelhos (como se pode ver no ltimo cruzamento de fmeas F1 com o macho de olhos brancos). Mas interpretar este resultado como uma tpica proporo 3 para 1 em F2 seria um exagero, uma vez que a distribuio do carter olhos brancos entre fmeas e machos no era o esperado em um tpico cruzamento mendeliano. Convm lembrar que na gerao F2 do cruzamento original no havia fmeas de olhos brancos. Esta associao de hereditariedade com sexo indicava que a hiptese de Sutton poderia ser submetida a um teste crtico. Vejamos quais foram as explicaes de Morgan.

WWX, e para os dois tipos de espermatozides: WX - W. Admita que todos os vulos da fmea de olhos vermelhos possuam o fator red - R; e que todos os vulos (aps a reduo) carreguem cada um, apenas um fator X, a representao para a fmea de olhos vermelhos ser RRXX e para seus vulos ser RX - RX. interessante notar como Morgan indicou os gentipos dos indivduos e dos gametas. Ele imaginou os fatores genticos e os cromossomos [ele usou o termo fator sexual X] como se fossem fenmenos independentes. Em nosso esquema, substitumos a simbologia originalmente usada por Morgan, ou seja, R para o alelo para olhos vermelhos e W para o alelo para olhos brancos, pelo esquema mendeliano de smbolos maisculos e minsculos para alelos dominantes e recessivos. Assim, foi usado o smbolo w para o alelo condicionante de olhos brancos e W para o alelo que condiciona olhos vermelhos. Outro ponto para ser notado que Morgan admitiu que o macho tinha apenas um cromossomo sexual (X), ou seja, era X0, conforme havia sido determinado, incorretamente, por Stevens. (Fig. 25) Alguns anos mais tarde, verificou-se que o macho de D. melanogaster tem tambm um cromossomo Y.
P1 Fentipos Gentipos Gametas red W W XX WX

white

wwX wX

F1 Fentipos Gentipos

red W w XX

red

Ww X

Gametas

A PRIMEIRA HIPTESE DE MORGAN

WX wX

WX

Uma Hiptese para Explicar os Resultados - Os resultados que acabamos de descrever F2 Fentipos e podem ser explicados pela seguinte hiptese. gentipos Admita que todos os espermatozides do macho white de olhos brancos possuam o fator white W; que metade dos espermatozides possua um fator sexual X e que a outra metade no possua Figura 25. Primeira hiptese de Morgan para explicar este fator, i.e., o macho heterozigtico quanto a herana do estado olhos brancos do carter cor dos ao sexo. Assim a representao para o macho olhos em Drosophila melanogaster. 83

W W XX w red Ww X W w XX red red wwX

A figura 25 mostra a hiptese de Morgan para 1. P1 Fentipos os resultados do primeiro cruzamento do macho Gentipos de olhos brancos com uma fmea de olhos vermelhos. O esquema concorda com os dados, Gametas ou seja, prev que a gerao F1 seja constituda exclusivamente por fmeas e machos com olhos vermelhos. Continuando em F2, a hiptese prev F1 Fentipos que todas as fmeas tero olhos vermelhos e que Gentipos metade dos machos ter olhos vermelhos e metade, olhos brancos. No de se surpreender que as previses da hiptese tenham sido verifi- 2. P Fentipos 1 cadas. Afinal de contas, as observaes foram Gentipos feitas antes da hiptese ter sido formulada e no teria sentido propor uma hiptese que no expliGametas casse os resultados j em mos. Porm, a hiptese s explicaria os dados se fosse feita uma restrio essencial. Observe os F1 Fentipos indivduos F1. Note que na formao dos gametas Gentipos femininos, metade mostrada como tendo recebido o fator W juntamente com um X, e metade como tendo recebido o fator w com um X. A 3. P Fentipos 1 hiptese, entretanto, requer uma situao bem Gentipos diferente para os machos F1. Os machos so mostrados como sendo WwX. Esperar-se-ia, portanto, quatro classes de gametas: WX, wX, W Gametas (ou W0) e w (ou w0). Morgan reconheceu somente duas classes de espermatozides: WX e w. Ele explica essa sua restrio da seguinte maneira: necessrio admitir ... que quando as duas F1 Fentipos e classes de espermatozides so formadas pelo gentipos macho F1 de olhos vermelhos (WwX), W e X [sempre] vo juntos - de outro modo os resultados no seriam os obtidos. Esse ponto importante no pode ser amplamente discutido nessa comunicao. O TESTE DA PRIMEIRA HIPTESE O valor de uma hiptese no consiste apenas em explicar os fatos, mas tambm na sua capacidade de prever o que acontecer em situaes novas. Morgan fez quatro testes de sua hiptese. 1. Se o gentipo dos machos de olhos brancos wwX e o das fmeas de olhos brancos wwXX, sua descendncia deveria ser constituda somente de machos de olhos brancos e fmeas de olhos brancos A representao diagramtica deste cruzamento segundo a hiptese de Morgan est mostrada no item 1 da figura 26. O cruzamento foi feito e os resultados obtidos estavam de acordo com as previses. 84
4. P1 Fentipos Gentipos Gametas

white w w XX wX

white

wwX wX

white w w XX

W W XX WX

wX

red W w XX

red

Ww X

red W w XX

white

wwX

WX wX

wX

W w XX red white wwX

w w XX

Ww X red white

white w w XX wX

red

Ww X

WX

F1 Fentipos Gentipos

red W w XX

white

wwX

Figura 26. Representao esquemtica dos testes da primeira hiptese de Morgan para explicar a herana do estado olhos brancos do carter cor dos olhos em Drosophila melanogaster.

2. As fmeas F2 de olhos vermelhos do primeiro cruzamento (Fig. 25), apesar de serem todas

white

wwX

red

white

wwX

idnticas na aparncia, deviam ter dois gentipos, WWXX e WwXX. Se vrias dessas fmeas fossem cruzadas individualmente com machos de olhos brancos, seriam esperados dois tipos de resultado como se pode ver nos itens 2 e 3 da figura 26. Aproximadamente metade dos cruzamentos deveria resultar em descendncia apenas com olhos vermelhos, enquanto a outra metade deveria produzir moscas de olhos vermelhos e de olhos brancos, tanto machos quanto fmeas. Esses cruzamentos foram feitos e os resultados previstos foram obtidos. 3. Esperava-se que o gentipo das fmeas F1 do cruzamento original (Fig. 25) fosse WwXX. Nesse caso, o cruzamento dessas fmeas com um macho de olhos brancos daria os mesmos resultados mostrados no item 3 da figura 26. Novamente o cruzamento foi feito e os resultados previstos foram obtidos. 4. A hiptese exigia que os machos F1 originais (Fig. 25) fossem WwX. Se esses machos fossem cruzados com fmeas de olhos brancos, a previso seria a obteno de fmeas de olhos vermelhos e machos de olhos brancos, como mostrado no item 4 da figura 26. Os cruzamentos foram feitos e a previso verificada. Mais uma vez, entretanto, a hiptese exigia um tipo no-usual de meiose nos machos WwX: o fator W deveria estar sempre associado ao X, para formar espermatozides WX; no poderia haver espermatozides wX nesses machos.

VERDADEIRO, ACIMA DE QUALQUER SUSPEITA ?

Das hipteses levantadas no incio da Gentica, com exceo da de Mendel, poucas foram to exaustivamente testadas como essa. Quase tudo da primeira hiptese de Morgan estava baseado em princpios genticos bem estabelecidos: dominncia e recessividade, segregao e comportamento dos cromossomos sexuais. Suas quatro dedues eram explcitas e crticas. Em cada um dos casos os experimentos efetuados para testar as dedues forneceram os resultados esperados nas previses. Para se ter certeza, aquela premissa sobre a espermatognese dos machos WwX deveria ser esclarecida, porm, por volta de 1910, seu colega Wilson e outros citologistas j haviam registrado a ocorrncia de comportamentos inesperados de certos cromossomos durante a meiose. Por isto,

no havia razo a priori para excluir a hiptese da associao apenas do fator dominante W (mas nunca do recessivo w) com o X, na meiose dos machos heterozigticos da gerao F1 do primeiro cruzamento. Morgan publicou uma outra descoberta que era difcil de explicar: Um fato ainda mais surpreendente aconteceu quando uma fmea de olhos brancos foi cruzada com um macho selvagem (de olhos vermelhos), isto , com um indivduo de uma linhagem diferente. A previso (antes da realizao dos experimentos) era de que tanto machos quanto fmeas selvagens tivessem apenas o fator para olhos vermelhos e no o fator para olhos brancos; porm, os experimentos mostraram que todos os machos de linhagens selvagens deveriam ser heterozigticos para olhos vermelhos e todas as fmeas selvagens, homozigticas para aquele [estado do] carter. Deste modo, quando uma fmea de olhos brancos cruzada com um macho de olhos vermelhos, todos os descendentes do sexo feminino apresentam olhos vermelhos, enquanto que todos do sexo masclino apresentam olhos brancos. Estes resultados apresentavam uma dificuldade. Se todos os machos de uma populao natural eram heterozigticos quanto a esses alelos para cor dos olhos, seria de se esperar que numerosas moscas de olhos brancos estivessem presentes nas populaes naturais e nas culturas de laboratrio. No entanto, Morgan j estava criando D. melanogaster por muitos meses e nunca tinha observado tal fato. Morgan tenta uma explicao para esse fato nos seguintes termos: At o momento eu no encontrei evidncia alguma do aparecimento de mutantes de olhos brancos. possvel que este fenmeno esteja relacionado com fertilizao seletiva. H muitos pontos interessantes a respeito desta famosa publicao que deu incio linha de pesquisa que revolucionou a Gentica. O mais intrigante reside no fato do porqu Morgan no foi capaz de perceber, inicialmente, que os resultados poderiam ser explicados simplesmente assumindo que os alelos para cor dos olhos fossem parte integrante do cromossomo X. Em vez disso ele tratou o problema quase como se fosse um cruza-mento dibrido. Em 1910, seguramente Morgan ainda tinha muitas dvidas sobre a hiptese de Sutton mas, no teria ele discutido seus resultados com seu 85

colega Wilson ? G. E. Allen (1978, p.153) estima que o macho de olhos brancos tenha sido descoberto por volta de janeiro de 1910, quando os experimentos foram feitos. O trabalho foi terminado em 7 de julho de 1910, aps Morgan ter ido para Woods Hole, e foi publicado no nmero de 22 de julho de 1910 da revista Science. de grande interesse pedaggico o fato desse trabalho ter sido escrito em uma forma que corresponde viso popular do mtodo cientfico. Primeiro, h as observaes de um fenmeno natural, neste caso os resultados dos cruzamentos envolvendo a estranha mosca com olhos brancos recm-surgida. Em seguida, formulada uma hiptese. Finalmente, so feitas dedues a partir da hiptese, e estas so testadas. Admite-se que os resultados dos testes apiem a hiptese, de modo que o cientista prossegue para os prximos problemas. Estas etapas so raramente mencionadas em publicaes de trabalhos cientficos, embora alguma coisa semelhante ao mtodo cientfico esteja acontecendo na cabea do pesquisador. O trabalho de Morgan de 1910 incomum neste aspecto porque estes passos esto explicitados no trabalho publicado.

feminidade; Segunda, que a associao observada na transmisso de certas caractersticas devida proximidade, nos cromossomos, das substncias qumicas (fatores) que so essenciais produo daquelas caractersticas. Portanto, se admitirmos que o alelo recessivo para olhos brancos e o alelo dominante para olhos vermelhos so parte do cromossomo X, os resultados de todos os cruzamentos podem ser explicados pela distribuio do cromossomo X na meiose e na fertilizao. Seria, ento, desnecessrio invocar pressupostos, tais como o alelo w no sendo capaz de se associar com o X na meiose de machos WwX ou que todos os machos fossem obrigatoriamente heterozigticos. A segunda hiptese de Morgan foi submetida a todos os testes possveis e pde ser aceita, acima de qualquer suspeita, como verdadeira. A figura 27 mostra como ela explica a herana dos olhos brancos. Esta figura no mostra o cromossomo Y pois s alguns anos mais tarde se verificou que o macho de D. melanogaster era XY e no X0.

A NO -OBVIEDADE

DO

BVIO

A SEGUNDA HIPTESE DE MORGAN

Levou somente um ano para Morgan perceber que a sua primeira hiptese para explicar a herana, limitada ao sexo, da cor dos olhos tinha falhas fundamentais. Outros mutantes de D. melanogaster haviam sido encontrados e eram herdados da mesma maneira que o alelo white para cor dos olhos. Os resultados foram anunciados pela primeira vez em uma aula pblica ministrada no Laboratrio de Biologia Marinha de Woods Hole, no estado de Massachusetts, em 7 de julho de 1911. A nova hiptese era mais simples: ao invs de pensar em alelos limitados ao sexo como sendo associados aos fatores sexuais (primeira hiptese) porque no pensar neles como sendo parte do cromossomo X? Morgan props uma segunda explicao para seus resultados da seguinte maneira: Os experimentos com D. melanogaster me permitiram tirar duas concluses: Primeira, que a herana limitada ao sexo pode ser explicada admitindo-se que um dos fatores que determinam um carter limitado ao sexo transportado pelos mesmos cromossomos que transportam o fator para

Mais uma vez ns encontramos um exemplo do bvio no sendo to bvio assim. Deve-se lembrar da observao feita por Thomas Henry Huxley quando o conceito de seleo natural tornou-se claro para ele: My reflection, when I first made myself master of the central idea of the Origin [ele se refere ao livro Origem das espcies de Charles Darwin e idia de seleo natural] was: How extremely stupid not have thought of that. Morgan fazia suas pesquisas no Zoology Department, onde sete anos antes Sutton havia sugerido que os genes deviam ser partes dos cromossomos. Seu colega E. B. Wilson tinha continuado a trabalhar no paradigma suttoniano. Entretanto, Morgan no estava convencido de que os cromossomos representassem a base fsica da hereditariedade e no iria aceitar essa hiptese at que seus prprios experimentos o convencessem. De fato, ele tinha uma opinio bastante crtica sobre as explicaes que os geneticistas davam para os resultados obtidos em experimentos genticos. Em janeiro de 1909, o ano anterior publicao de seu primeiro trabalho sobre a mosca de olhos brancos, ele disse o seguinte em uma conferncia na American Breed86

ers Association: Na interpretao moderna do mendelismo, os fatos esto sendo convertidos em Gentipos XW XW Xw fatores uma grande velocidade. Se apenas um fator no explicar os fatos, propem-se a existnGametas XW Xw cia de dois; se estes so insuficientes, a explicao pode, s vezes, ser atribuda `a trs. O grande malabarismo, que s vezes se torna necessrio F1 Fentipos X red red para explicar os resultados obtidos, se elaborado Gentipos XW Xw XW com muita ingenuidade, pode nos levar a crer que, como geralmente ocorre, os resultados possam ser muito bem explicados porque a Gametas W Xw interpretao foi feita exatamente para explicX los. Ns partimos dos fatos para chegarmos aos XW Xw XW fatores, e ento, como em um passe de mgica, red w explicamos os fatos pelos mesmos fatores que W W X X X criamos para explic-los. Eu no posso seno F2 Fentipos e white red gentipos temer que estejamos desenvolvendo uma espcie XW de ritual Mendeliano, por meio do qual procured ramos explicar os fatos excepcionais das heranas alternativas. Esta era a opinio de algum que em poucos anos iria ser reconhecido como o Expoente da Gentica de nosso sculo e que certamente seria o ltimo dos eminentes geneticistas a estudar a hereditariedade acima do nvel molecular. Em 1909, Morgan, juntamente com muitos white red P1 Fentipos X outros, ainda tinha problemas com a noo de Gentipos Xw Xw XW pureza dos gametas. Ele continua seu seminrio na American Breeders Association nos seguintes Gametas Xw XW termos: Eu gostaria de chamar a ateno para certas implicaes sobre o fato de que, como atualmente se admite, os fatores (s vezes consiF1 Fentipos X red white derados como sendo os prprios caracteres ou Gentipos XW Xw Xw ainda unidade-carter) so separados, na condio de seus alelomorfos, nas clulas germinativas dos hbridos. Por exemplo, uma planta Gametas Xw Xw alta de ervilha cruzada com uma an produz w w X X apenas plantas altas na primeira gerao, que XW quando cruzadas entre si produzem 3 plantas white W w altas para cada planta an. Estes fatos so realXw X X F2 Fentipos e mente surpreendentes. Mendel chamou a ateno white red gentipos W de que estes resultados numricos poderiam ser X explicados se admitirmos que as plantas hbridas red produzam dois tipos de clulas germinativas, as produtoras de plantas altas e aquelas produtoras de plantas baixas. A simplicidade da explicao, sua ampla aplicabilidade e aquilo que eu chamaFigura 27. Representao esquemtica da segunda ria de probabilidade intrnsica, sugere esta hiptese de Morgan para explicar a herana do estado interpretao a todos aqueles que tm pesquisado olhos brancos do carter cor dos olhos em Droso- problemas semelhantes de hereditariedade. A phila melanogaster. partir desta suposio que surgiu a hiptese
P1 Fentipos red

white

87

1904 como um embriologista. Em 1911, Morgan (1866-1945) estava com 45 anos. Durante essa dcada ele teve trs colaboradores muito prximos, seus ex-estudantes: Sturtevant, Bridges e Muller. Alfred Henry Sturtevant (1891-1970) iria receber seu ttulo de doutor em 1914 com um trabalho no qual ele utilizou dados de ligao gnica para construir o primeiro mapa de um cromossomo. Herman Joseph Muller (18901967) recebeu seu ttulo de doutor em 1915 com um estudo que esclarecia definitivamente o fenmeno da permutao. Calvin Blackman Bridges (1889-1938) recebeu seu ttulo de doutor em 1916 com um trabalho clssico sobre nodisjuno, amplamente aceito como a prova final e conclusiva de que os genes so partes dos cromossomos. Bilogos vinham de todas as partes do mundo para visitar ou para fazer pesquisa na Sala das Moscas. A base para todas estas descobertas foi a mosca-da-banana, D. melanogaster. Essa espcie parece ser uma imigrante, originria do leste da frica e como uma espcie domstica freqentemente encontrada em residncias, mercados e depsitos de lixo onde quer que existam frutas maduras. Ela tambm se espalhou por certos ambientes naturais e, em algumas reas, a espcie mais abundante do gnero. Morgan comeou a usar D. melanogaster porque no conseguiu obter recursos para fazer experimentos com mamferos. D. melanogaster podia ser criada em grande nmero com alimentos baratos, de incio com bananas, em vidros de leite pequenos, que Morgan aparentemente trazia de sua casa. Alguns outros laboratrios estavam usando D. melanogaster naquela poca (G. E. Allen, 1975a) e tem havido muita especulao sobre onde Morgan obteve os estoques de suas famosas moscas. No h razo para acreditar que tenha havido apenas uma fonte. Quando eu era estudante na Columbia University na dcada de 1930, dizia-se que a fonte das moscas havia sido um abacaxi colocado do lado de fora da janela do laboratrio de Morgan. A descoberta do macho de olhos white foi creditada a Calvin Bridges. A SALA DAS MOSCAS Naquela poca ele era um estudante de graduao Na dcada iniciada em 1911, uma sala do Zo- no College da Columbia University, contratado ology Department da Columbia University , de para lavar os vidros usados nos experimentos com tamanho mdio, ocupada por Morgan e seus as moscas. Um pouco antes de lavar um deles, alunos, tornou-se o centro mundial da Gentica. Bridges reparou que havia uma mosca de olhos Ele tinha vindo para a Columbia University em brancos. Shine e Wrobel (1976) fazem uma moderna dos fatores. A grande estatura das plantas altas devida a um fator para altura, e a pequena estatura das ans se deve a um fator para o nanismo e quando estes fatores se encontram no hbrido, o fator para alta estatura predomina. At agora temos feito pouco alm de reafirmar o ponto de vista de Mendel. Porm, quando voltamos s clulas germinativas do hbrido avanamos um pouco mais. Ns admitimos que o fator para grande estatura e aquele para nanismo se separam em clulas distintas aps terem convivido por inmeras geraes de clulas sem terem influenciado um ao outro. Ns os consideramos como entidades que apresentam um antagonismo curioso, de tal forma que quando a oportunidade aparece, eles se afastam e partem para o seus vrios caminhos. Para mim parece que exatamente neste ponto que ns corremos o risco de negligenciar outras possibilidades que permitam produzir, do mesmo modo, os dois tipos de clulas necessrias interpretao mendeliana. Morgan props ento um mecanismo alternativo bastante vago que revela sua formao bsica como embriologista. Ele reconheceu um elemento de pr-formao na hiptese dos geneticistas. A sua hiptese envolvia estados alternativos de estabilidade, condies locais, mudanas no equilbrio e interao entre cromossomos homlogos. Isto parece no ser do carter de Morgan uma pessoa que insistia sempre na experimentao como o caminho adequado compreenso. Ele estava rejeitando uma hiptese que era muito mais fcil de ser experimentalmente verificada em favor de uma pura especulao. Mas Morgan no tinha uma mente completamente fechada. Aps rejeitar a hiptese, em 1909, que a segregao dos fatores (alelos) nos cruzamentos mendelianos poderia ser explicada pela segregao dos cromossomos na meiose, ele tornou-se o mais forte defensor da hiptese de que o mendelismo tinha suas explicaes no comportamento dos cromossomos. 88

interessante discusso sobre a possvel origem do macho de olhos brancos, mas foram incapazes de chegar a qualquer concluso definitiva. Morgan no comeou a trabalhar com D. melanogaster com o intuito de estender o mendelismo para este pequeno inseto. Ao contrrio, ele estava mais interessado em problemas evolutivos, especialmente numa questo polmica naquela poca a da variao contnua versus variao descontnua. Ele tinha especial interesse em testar a hiptese da mutao de De Vries (1901-1903, 1906) e percebeu que uma espcie com ciclo de vida curto, fcil de ser criada, e com numerosa descendncia iria servir para os seus propsitos. No intervalo de tempo entre as primeiras publicaes (1910) sobre a mosca de olhos white e o trabalho de Bridges em 1916 sobre no-disjuno, foram estabelecidos os fundamentos da gentica de D. melanogaster e os conceitos bsicos essenciais nesse campo do conhecimento foram completados tudo acontecendo na Sala das Moscas. Os trabalhos realizados no laboratrio de Morgan forneceram a evidncia crtica, acima de qualquer suspeita, para que o paradigma suttoniano pudesse ser aceito como verdadeiro. Em seu livro, publicado em 1965, Sturtevant d um depoimento pessoal daqueles dias memorveis. De 1916 at 1953 a maior parte do trabalho

em Gentica pode ser classificado como uma cincia normal que deu acabamento conceitual ao paradigma. Sturtevant (1965) d um depoimento pessoal daqueles dias memorveis. Ns discutiremos, a seguir, alguns dos tratados que foram produzidos na Sala das Moscas.

COLEO DE MUTANTES

Calvin Bridges lembrado como a pessoa na Sala das Moscas com maior capacidade de detectar novos mutantes. O grupo de pesquisadores, sob a liderana de Morgan, em pouco tempo tinha dezenas de mutantes para serem usados em seus experimentos. Algum poderia perguntar Para que estudar tantos mutantes? Uma vez estabelecido que o esquema mendeliano funcionava para os alelos nos autossomos e, com modificao, para os alelos no cromossomo X, porque acumular um nmero crescente de confirmaes? A resposta simples: os alelos mutantes poderiam ser usados como sondas para obteno de mais informaes sobre a base fsica da herana, isto , sobre a relao entre genes e cromossomos, a localizao dos genes, a elaborao de mapas de ligao gnica de cada cromossomo e vrias alteraes estruturais dos cromossomos em si.

EXERCCIOS
PARTE A : REVENDO CONCEITOS BSICOS
Preencha os espaos em branco nas frases numeradas de 1 a 12 usando o termo mais apropriado dentre os arrolados abaixo : (a) autossomo (b) cromossomos sexuais (c) herana ligada ao sexo (d) herana com expresso limitada ao sexo (e) mutante (f) pr-formao (g) mutao (h) dominncia (i) recessividade (j) herana holndrica (k) codominncia (l) dominncia incompleta ou ausncia de dominncia. 1. O processo pelo qual ocorre uma alterao herdvel de um gene denominado ( ). 2. A teoria da ( ), atualmente desacreditada, afirma que cada clula germinativa contm um organismo do seu tipo j completamente formado e que o desenvolvimento resulta apenas no aumento do seu tamanho. 3. ( ) o fenmeno pelo qual um alelo impede a manifestao de outro alelo de um mesmo gene. 4. ( ) um gene modificado, uma clula ou um organismo que porta alterao produzida por uma mutao. 5. ( ) qualquer cromossomo que no os sexuais. 6. Os cromossomos relacionados com a determinao do sexo de um indivduo so denominados ( ). 7. A expresso de um caracterstica (por exemplo, produo de ovos ou de leite ) restrita apenas um dos sexos denominada ( ).

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8. Os genes localizados exclusivamente no cromossomo Y seguem um padro de herana denominado ( ). 9. ( ) o fenmeno pelo qual um alelo no se manifesta fenotipicamente, porm mantm a sua individualidade. 10. Os genes localizados no cromossomo X seguem um padro de herana denominado ( ). 11. ( ) a situao em que ambos alelos de um indivduo heterozigtico se manifestam igualmente no fentipo, por exemplo, o que ocorre nos grupos sangneos do sistema MN. 12. ( ) a condio na qual o indivduo heterozigtico tem um fentipo intermedirio entre os dos dois homozigticos que lhe deram origem, por exemplo, o que ocorre com a cor da semente em certas variedades de trigo.

uma caso de ( ). 16. Um homem heterozigtico para um par de alelos autossmicos Bb e portador de um alelo recessivo d ligado ao cromossomo X. Que proporo de seus espermatozides ser bd ? a. zero. c. 1/4. e. 1/16. b. 1/2. d. 1/8.

PARTE C : QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

17. Qual a proproo fenotpica esperada entre os descendentes do cruzamento de fmeas de drosfila de olhos vermelho-claros com machos de olhos vermelho-escuros, sabendo-se que o fentipo destas fmeas determinado por um alelo recessivo ligado ao sexo? 18. De acordo com a hiptese de Sutton (teoria cromossmica da herana), como deveriam se comportar na meiose os genes localizados em um mesmo cromossomo? 19. Por que os resultados de Morgan nos cruzamentos com o mutante white no puderam ser interpretados como um caso de monoibridismo tpico? 20. Qual foi a primeira hiptese proposta por Morgan para explicar a herana do sexo e da cor dos olhos em Drosophila melanogaster? 21. O que levou Morgan a substituir a sua primeira hiptese para explicar a herana ligada ao sexo? 22. Em camundongos, um alelo dominante B, ligado ao sexo, responsvel pelo fentipo cauda curta e retorcida, enquanto seu alelo recessivo b, responsvel pelo fentipo cauda longa e reta. Se uma fmea de cauda longa cruzada com um macho de cauda curta, que proporo fenotpica deve ser esperada na gerao F1? 23. Na espcie humana, o alelo recessivo e ligado ao sexo (d) produz um tipo de daltonismo (cegueira s cores vermelho-verde). Uma mulher de viso normal, cujo pai era daltnico, casa-se com um homem daltnico. a) Quais so os gentipos possveis da me do homem daltnico? b) Qual a probabilidade de o primeiro descendente desse casal ser daltnico? c) Que porcentagem de daltonismo podemos prever entre as filhas nascidas deste casal? d) De todos os descendentes deste casal (sem considerarmos o sexo) que proporo provavelmente ter viso normal?

PARTE B : L IGANDO CONCEITOS E FATOS

Utilize as alternativas abaixo para responder s questes 13 e 15. (a) herana ligada ao sexo recessiva. (b) herana autossmica recessiva. (c) herana ligada ao sexo dominante. (d) herana autossmica dominante. 13. Nos cruzamentos entre drosfilas fmeas de asas curtas com machos de asas longas, todos os descendentes machos apresentaram asas curtas e todas as fmeas, asas longas. Um cruzamento recproco (fmea de asas longas com machos de asas curtas) produziu apenas descendentes de asas longas, tanto machos como fmeas. Esses resultados sugerem a hiptese de que o estado de carter asas curtas siga um padro de ( ). 14. Carneiros pretos cruzados com ovelhas brancas produziram apenas descendentes brancos, de ambos os sexos. Alguns cruzamentos recprocos produziram apenas machos e fmeas brancos: enquanto outros produziram metade da descendncia branca e metade preta, de ambos os sexos. Esses resultados permitem levantar a hiptese de que o estado de carter cor preta da l em carneiros segue um padro de ( ). 15. Um homem afetado por certa doena casase com uma mulher no-afetada. Eles tm oito filhos (quatro meninas e quatro meninos); todas as meninas tm a doena do pai, mas nenhum dos meninos a tem. Trata-se provavelmente de

90

24. O alelo m (miniature ) que determina asas curtas em Drosophila melanogaster recessivo e ligado ao sexo. Seu alelo dominante + determina a formao de asas longas. Que propores fenotpicas podemos prever nos seguintes cruzamentos: a) macho de asas curtas com fmea de asas curtas. b)fmea de asas curtas com macho de asas longas. c) fmea de asas longas (homozigtica) com macho de asas curtas. d)fmea de asas longas (heterozigtica) com macho de asas longas. e) fmea de asas longas (heterozigtica) com macho de asas curtas. 25. Em galinceos, o alelo dominante B , que ligado ao sexo, produz penas com padro barrado. O seu alelo recessivo b, em homozigose produz penas de cor uniforme. O alelo autossmico dominante R produz crista com forma rosa e seu alelo recessivo r, produz crista

com forma simples, quando em homozigose. Uma fmea de penas barradas, homozigtica para crista com forma rosa cruzada com um macho de penas de cor uniforme e crista com forma simples. Qual a proporo fenotpica esperada na gerao F1? 26. A distrofia muscular Duchenne ligada ao sexo e geralmente s afeta os homens. A doena se manifesta na infncia e as vtimas perdem progressivamente os movimentos dos membros e morrem antes da adolescncia. a) Qual a probabilidade de uma mulher cujo irmo sofre de Duchenne ter um descendente do sexo masculino afetado? b) Supondo que o tio materno de uma pessoa teve Duchenne, qual a probabilidade de essa pessoa ter recebido o alelo causador da enfermidade? c) Suponha que o tio paterno de uma pessoa teve a doena, qual a probabilidade de essa pessoa ter recebido o alelo causador da enfermidade?

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GRUPOS DE LIGAO
E CROMOSSOMOS Dcima aula
(T10)

Objetivos
1. Conceituar ligao gnica. 2. Analisar o experimento de Bateson, Saunders e Punnett sobre o fenmeno da ligao incompleta. 3. Explicar a teoria da quiasmatipia de Janssens. 4. Explicar acoplamento e repulso por meio da teoria cromossmica da herana. 5. Conceituar gene pleiotrpico. 6. Descrever o experimento de Curt Stern em que se demonstrou a relao entre permutao e recombinao gnica.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

Era bvio para os geneticistas que aceitavam as hipteses suttonianas, que o esquema mendeEm 1903, quando Sutton deu incio s pesqui- liano original no podia explicar os resultados sas relacionando genes e cromossomos, ele argu- quando um ou mais pares de diferentes alelos estimentava que deveriam haver mais pares de alelos vessem localizados no mesmo par de cromosdo que pares de cromossomos homlogos. Em somos homlogos. um trecho de seu trabalho ele diz: Ns devemos, portanto, admitir que pelo menos alguns cromosACOPLAMENTO E REPULSO somos estejam relacionados um nmero maior Bateson, Saunders e Punnett (1906) no de alelos. Se os cromossomos retm permanentemente as suas individualidades, ento todos os aceitaram a hiptese de Sutton e tiveram grande alelomorfos presentes em um mesmo cromossomo dificuldade para explicar alguns dos seus cruzamentos que no davam as propores devem ser herdados juntos. No se pode ler as publicaes deste extraor- mendelianas esperadas. Eles dizem o seguinte dinrio jovem cientista sem se estarrecer com o sobre isso: Logo no incio da retomada dos expebrilhantismo de suas anlises. Repare no trecho: rimentos de cruzamento, especialmente Correns, os diferentes alelos devem ser herdados juntos havia chamado a ateno para o fenmeno do no caso de os cromossomos reterem sua indivi- acoplamento entre certos caracteres. At aquela dualidade. Suspeita-se que quando a proporo poca, acoplamento completo havia sido mais peculiar que foi denominada acoplamento e comumente encontrado entre os caracteres de repulso foi descoberta, Sutton teria reconhe- natureza fisiolgica semelhante. Exemplos de cido que, de alguma forma, isto estava associado acoplamentos parciais no tinham at ento sido com a presena de diferentes genes no mesmo adequadamente estudados. Eles ento deram um exemplo. Em um dos cromossomo. E que quando o acoplamento no era completo, ele deve ter tambm percebido que experimentos com ervilhas-de-cheiro envolvendo um mecanismo deveria ser pensado para a explicar dois pares de alelos, foi obtida em F2 a proporo a observao de que os cromossomos nem sempre de 11,8 : 1 : 1 : 3,26. Em ervilhas-de-cheiro o estado azul (B) do carter cor da flor dominante retm a sua individualidade.

GENES LIGADOS

92

sobre o vermelho (b), e a forma longa (L) do plen dominante sobre a forma redonda (l). Quando uma planta de flor azul e plen longo era cruzada com uma planta de flor vermelha e plen redondo, todos os indivduos F1 eram do tipo azul-longo. Nada surpreendente at agora. Em F2 observavam-se as propores usuais de 3 plantas de flores azuis para 1 vermelha e de 3 plantas de plen longo para 1 redondo. Isso era esperado pela lei mendeliana da segregao dos fatores. Uma vez que este um cruzamento que envolve dois pares de alelos, o normal esperado pela lei mendeliana da segregao independente seria 9 azuis-longos : 3 azuis-redondos : 3 vermelhas-longos : 1 vermelha-redondo. Ao invs disto observou-se uma proporo fenotpica de 11,8 azuis-longos : 1 azul-redondo : 1 vermelha-longo : 3,26 vermelhas-redondos um resultado que no se encaixa no mendelismo. A figura 28 mostra o cruzamento. O indivduo de flores azuis e plens longos deve ter produzido os quatro tipos de gametas. A fim de se ter certeza que este era o caso, foram feitos cruzamentosteste. Isto , os indivduos F1 foram cruzados com o puro recessivo como mostrado na figura 28. O resultado esperado era 25% de cada um dos quatro fentipos, mas foi obtido um resultado diferente. Os resultados obtidos indicavam que o dibrido estava formando quatro tipos de gameta na proporo de 7BL : 1Bl : 1bL : 7bl. Embora estes no sejam os resultados esperados nos cruzamentos dibridos mendelianos, deve haver alguma regra funcionando, uma vez que, quando os experimentos eram repetidos, Bateson e seus associados sempre observavam os mesmos resultados. As duas regras pareciam ser: 1. Os fentipos mais comuns so aqueles dos parentais originais e eles esto na mesma freqncia - 43,7% cada (resultados mostrados acima para os cruzamentos esquematizados nas figuras 28). 2. As classes recombinantes, azul-redondo e vermelha-longo, aparecem em nmeros muito menores do que o esperado, mas suas freqncias so iguais, 6,3%. De alguma forma os alelos dos parentais originais esto acoplados e so mais freqentes do que o esperado. Embora o acoplamento no seja completo e os alelos dos parentais originais 93

possam sofrer repulso e produzir as classes recombinantes. Esta tendncia de acoplamento para os diferentes alelos foi confirmada no cruzamento de plantas do tipo azul-redondo com plantas do tipo vermelha-longo. Se estas ervilhas estivessem se comportando de acordo com as regras mendelianas, seria esperado que o resultado deste cruzamento fosse exatamente igual ao da figura 28. A nica diferena que os dois pares de alelos esto distribudos diferentemente entre os pais. Os indivduos F1 tem os mesmos fentipo (azullongo) e gentipo (BbLl). Seria esperado ento que o cruzamento de indivduos F1 da figura 28 com o puro recessivo produzisse o mesmo resultado que o do cruzamento mostrado na figura 28. Os resultados, no entanto, foram muito diferentes. Os fentipos azul-longo e vermelha-redondo, que estavam presentes em frequncia 43,7% cada um. Como mostrado na figura 28, cairam agora para 6,3%. As outras duas classes fenotpicas aumentaram de 6,3% para 43,7%, como mostra a figura 28. Bateson, Saunders e Punnet no conseguiram explicar satisfatoriamente os resultados destes cruzamentos. Eles puderam concluir apenas que, em cruzamentos deste tipo, os alelos dos pais estavam acoplados. Este acoplamento, no entanto, no era completo e em uma pequena frao dos gametas havia uma repulso dos dois diferentes alelos. Tal explicao, porm, no faz nada alm de descrever o que de fato acontece. Mais e mais exemplos de acoplamento e repulso continuaram a ser descritos e nada alm de uma descrio formal do fenmeno era possvel. No ano em que Morgan estava para propor uma hiptese satisfatria, Bateson e Vilmorin (1911) escreveram o seguinte (eu modifiquei os smbolos genotpicos de acordo com o que se usa atualmente): Se A, a e B, b representam dois pares de alelomorfos sujeitos acoplamento e repulso, os fatores A e B iro se repelir na gametognese de um indivduo duplo-heterozigtico proveniente de um cruzamento AAbb x aaBB, mas estaro acoplados na gametognese de um duploheterozigtico proveniente de um cruzamento AABB x aabb... Ns no temos at o momento explicao alguma para esta diferena, e tudo o que pode ser dito que nestes casos especiais a distribuio dos caracteres no heterozigoto

A. P Fentipos Gentipos Gametas

azul - longo BB LL BL

vermelho - redondo bb ll bl

Cruzamento - teste Fentipos Gentipos Gametas azul - longo Bb Ll Bl bL X bl vermelho - redondo bb ll bl

BL

Fentipos azul-longo Gentipos Bb Ll Gametas (esperado) 25% (obtido) 43,7%

azul-redondo Bb ll 25% 6,3%

vermelho - longo bb Ll 25% 6,3%

vermelho - redondo bb ll 25% 43,7%

B. P Fentipos Gentipos Gametas

azul - redondo BB ll Bl

vermelho - longo bb LL bL

Cruzamento - teste Fentipos Gentipos Gametas azul - longo Bb Ll Bl bL X bl vermelho - redondo bb ll bl

BL

azul-longo Fentipos Bb Ll Gentipos Gametas (esperado) 25% (obtido) 6,3%

azul-redondo Bb ll 25% 43,7%

vermelho - longo bb Ll 25% 43,7%

vermelho - redondo bb ll 25% 6,3%

Figura 28. Interpretao dos resultados dos experimentos de Bateson e colaboradores com ervilhade-cheiro. (A) Esquema de como se comportaram as plantas F 1 no cruzamento-teste; se houvesse segregao independente as freqncias esperadas seriam de 25% para cada tipo, o que no foi observado. Os tipos azul-longo e vermelho-redondo apareceram, cada um deles, na porcentagem de 43,7%;

do que se conclui que os alelos B e L esto em acoplamento, pois ocorrem nas classes de maior freqncia. Os tipos azul-redondo e vermelho-longo apareceram, cada um na porcentagem de 6,3%. (B) Resultado do cruzamento entre plantas dos tipos azul-redondo e vermelho-longo, em que os alelos B e L esto em repulso, pois ocorrem nas classes de menor freqncia.

influenciada pela maneira como se encontram distribudos nos parentais homozigticos. Bateson e seus colegas no eram adeptos da hiptese de Sutton mas, como veremos, o suttonismo no modificado, tambm no oferecia explicao para esses casos. Aps ver estes resultados, e admitir a falha em propor uma hiptese 94

explicativa, um pesquisador menos persistente poderia ter pensado na possibilidade de abandonar o mendelismo como uma hiptese de aplicao ampla. Muito embora as regras de Mendel se aplicassem a muitos outros cruzamentos, mesmo no caso dos alelos da ervilha-de-cheiro azul versus vermelho e longo versus redondo quando

considerados separadamente. Alm disso, embora misterioso, o fato de terem sido observadas freqncias constantes sugere a existncia de uma mesma causa, a ser descoberta, para explicar estes fatos. Note tambm que na figura 28 os alelos dos parentais originais estavam acoplados. Um processo ordenado, embora no-mendeliano, parecia estar acontecendo. Poderia ser um exemplo das previses de Sutton para o comportamento de diferentes alelos que fazem parte do mesmo cromossomo?

Fentipos Gentipos

azul - longo B L B L

vermelho - redondo b l b l b l

Gametas

B L

Fentipos Gentipos

azul - longo B b l b l

vermelho - redondo b l b l b l

ACOPLAMENTO

E A REPULSO PODEM SER

EXPLICADOS PELA HIPTESE DE

SUTTON ?
Gametas

L B L

Na tentativa de explicarmos os resultados inesperados obtidos nos cruzamentos de ervilhade-cheiro, usaremos a hiptese de Sutton, admitindo que os locos dos genes B e L estejam no mesmo cromossomo e que o parental azullongo do cruzamento da figura 28 seja homozigtico quanto a esses locos. Admitiremos que o outro parental seja homozigtico para b e l. A figura 29 seria, ento, a representao esquemtica para os cruzamentos das figuras 28, de acordo com as idias de Sutton. Segundo este esquema, quando um indivduo da gerao F1 do tipo azul-longo for cruzado com um do tipo vermelha-redondo a descendncia esperada ser constituda por apenas duas classes fenotpicas: azul-longo e vermelha-redondo. Entretanto, no foi isso que foi observado. Lembre-se que os resultados reais foram 43,7% para cada uma dessas duas classes, alm de 6,3% de azul-redondo e 6,3% de vermelha-longo. No haveria possibilidade, entretanto, de qualquer destas classes menos freqentes aparecer se admitssemos o modelo suttoniano representado na figura 29. Assim, a resposta para a questo colocada no incio deste tpico seria No. No entanto, uma modificao na hiptese de Sutton poderia fornecer a resposta. Na fervilhante atividade da Sala das Moscas, Morgan e seus associados estavam descobrindo dezenas de novas moscas mutantes. Estes novos mutantes eram testados, dois a dois, em cruzamentos com outros mutantes. Em muitos casos, os cruzamentos dibridos produziam em F2 a proporo mendeliana esperada de 9:3:3:1 , 95

Fentipos Gentipos

azul - longo B L b l

vermelho - redondo b l b l 50%

esperado

50%

Figura 29. Uma hiptese para explicar os cruzamentos das figuras 28A e 28B, assumindo ligao completa entre os dois genes.

o que indicava que os dois pares de alelos estavam se segregando independentemente. Entre muitos outros pares de mutantes de Drosophila, no entanto, eram observados os fenmenos de acoplamento e repulso que tanto intrigavam Bateson e seus colaboradores. A hiptese de Sutton podia explicar o acoplamento mas no a repulso. Como Morgan j estava convencido da veracidade da hiptese suttoniana de que os genes so parte dos cromossomos, ele imaginou que deveria haver algum mecanismo por meio do qual partes de cromossomos pudessem ser trocadas entre os homlogos. Aqui estava um caso em que os resultados genticos necessitavam de uma explicao citolgica. Para explicar a repulso entre diferentes alelos, podia-se imaginar muitos modos pelos quais partes de cromossomos pudessem ser trocadas. De fato, na poca, no fazia muito tempo, havia sido descrito um fenmeno citolgico que poderia fornecer uma resposta convincente.

fosse a nica maneira aceitvel de se explicar os dados. Esta a apreciao de E. A. Wilson em Em 1909 um ano antes do aparecimento da 1925: Uma interpretao mais apropriada do mosca de olhos brancos - o citologista F. A. fenmeno da permutao foi elaborada por Janssens (1863-1924) descreveu um fenmeno Morgan e colaboradores, inicialmente com base cromossmico que Morgan necessitava para sua na Teoria da Quiasmatipia de Janssens (1909). hiptese. (Fig. 30) Infelizmente, embora correta em princpio, esta Este fenmeno, que ocorre durante a meiose, engenhosa teoria entretanto se apia em uma atualmente denominado permutao (crossing- base citolgica inadequada; na realidade, ela over). Na sinapse os cromossomos homlogos foi originalmente proposta com base em se aproximam, emparelhando-se ao longo de todo interpretaes, hoje consideradas erradas, de seu comprimento. Ambos os cromossomos certos aspectos citolgicos. aparecem duplicados (hoje sabemos que eles j esto duplicados desde a intrfase precedente) e A EXPLICAO DE MORGAN PARA formam uma ttrade de quatro cromtides, que O ACOPLAMENTO E A REPULSO podem ser observadas ao microscpio. A seguir, segundo Janssens, h um consideMorgan (1911) props, em um artigo de rvel enrolamento das cromtides umas sobre as apenas uma pgina, uma nova hiptese que, aps outras e em alguns casos duas das cromtides se ter sido testada muitas vezes, pde ser considequebram em lugares correspondentes. As rada, sem sombra de dvida, como verdadeira. cromtides quebradas se juntam de tal modo que Ele iniciou sua anlise chamando a ateno para um pedao de uma cromtide fica inserido numa o fato de que, embora as excees proporo cromtide homloga e vice-versa. Como resul- 9:3:3:1 tivessem sido verificadas com muita tado, so produzidas novas cromtides que so freqncia, elas no podiam ser explicadas satisverdadeiros mosaicos de segmentos das crom- fatoriamente pela hiptese proposta por Bateson. tides originais. A quebra e unio no puderam Nesse artigo Morgan diz: No lugar de atraes, ser observadas, de modo que este evento perma- repulses, hierarquia e elaborados sistemas de neceu como uma hiptese no testada. acoplamento, eu ouso sugerir uma explicao A teoria da quiasmatipia de Janssens um caso relativamente simples com base nos resultados relativamente comum em cincia, de uma sobre a herana da cor dos olhos, da cor do hiptese, embora correta, ser sustentada por corpo, das mutaes das asas e do fator para dados provavelmente incorretos (a hiptese de feminidade em Drosophila. Se os materiais que McClung sobre a relao entre cromossomos e representam estes fatores esto nos cromossomos sexo um outro exemplo). e se aqueles fatores que se acoplam esto As evidncias em que se baseava a hiptese prximos e em uma ordem linear ento, quando de Janssens deixavam muito a desejar, embora os pares parentais (no heterozigoto) se conjugam

JANSSENS E A

TEORIA DA QUIASMATIPIA

A A

a a

A A

a a

A A

B B

b b

B b

B b

Figura 30. A hiptese da permutao de Janssens. Hoje sabemos que, do ponto de vista citolgico, este modelo est incorreto; pois se sabe que os cromossomos se duplicam antes da sinapse, que o quiasma conseqncia e no causa da permutao, e que o emparelhamento envolve as 4 cromtides e no apenas duas delas.

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[ isto , entram em sinapse] , regies semelhantes ficaro lado a lado. H boas evidncias que apiam a idia de que durante o estgio de estrepsinema [quando a ttrade comea a se separar] os cromossomos homlogos ficam presos em certos pontos, porm quando os cromossomos se separam (quebram) a quebra se d em apenas um plano, como afirma Janssens. Como conseqncia, o material original, para distncias pequenas, ter maiores probabilidades de ficar do mesmo lado da quebra, enquanto que regies mais distantes tero a mesma probabilidade de ficar tanto do mesmo lado como em lados opostos. Como conseqncia, ns encontraremos acoplamento entre certas caractersticas, e pouca ou mesmo nenhuma evidncia de acoplamento entre outras caractersticas; a diferena depender da distncia linear que separa os materiais, que representam os fatores, nos cromossomos. Tal explicao se aplica a todos os fenmenos que eu tenho pessoalmente observado e acredito, ir explicar tambm os demais casos descritos at o momento. Os resultados refletem simplesmente o resultado mecnico da localizao dos materiais nos cromossomos, e do tipo de unio dos cromossomos homlogos, e as propores resultantes no dependeriam tanto do resultado da expresso de um sistema numrico [ como proposto por Bateson], mas simplesmente da localizao relativa dos fatores nos cromossomos. Em vez de segregao independente no sentido mendeliano, ns encontramos associao de fatores que se localizam prximos nos cromossomos. A Citologia fornece o mecanismo necessrio para explicar a evidncia experimental. O termo ligao gnica foi proposto para aqueles casos nos quais genes diferentes esto localizados em um mesmo cromossomo. A permutao, que ocorre durante a meiose, consiste no emparelhamento dos cromossomos homlogos por intermdio da sinapse, na quebra de cromtides no-irms e, finalmente, na religao das cromtides em uma nova condio que resulta em associaes modificadas dos genes. Assim, possvel questionar se seria justo creditar a Thomas Hunt Morgan o esclarecimento de que as intrigantes excees herana mendeliana simples so uma mera conseqncia do fato de que genes podem eventualmente ser 97

partes do mesmo cromossomo e que, s vezes, eles podem ser separados por permutao durante a meiose. Na realidade, isso no pode ser dito. Tudo o que se pode concluir que a ligao poderia ser uma explicao para o acoplamento e que a permutao poderia explicar a repulso. Ns atribumos Morgan a explicao destas importantes idias porque pesquisas posteriores mostraram que sua hiptese estava correta. Este um padro comum na evoluo do conhecimento a respeito dos fenmenos da natureza. As grandes hipteses dos homens intelectualmente privilegiados so aquelas que, eventualmente dentre muitas hipteses concorrentes, foram consideradas verdadeiras pelas pesquisas subseqentes. A percepo que Morgan teve de que a hiptese de Janssens sobre a quebra e a fuso de cromtides em novas combinaes poderia explicar os dados obtidos, no foi imediatamente aceita por outros pesquisadores. Era impossvel uma observao direta da quebra e da fuso. Sturtevant (1959) relembra porque a hiptese de Janssens era to atrativa: A evidncia citolgica no era conclusiva, e a idia no era aceita por todos apesar de estar se tornando claro que apenas desse modo a interpretao cromossmica do mendelismo podia ser salva. Entretanto, havia um modo de testar a hiptese de que a ligao seria uma conseqncia do fato de diferentes genes fazerem parte de um mesmo cromossomo.

GRUPOS DE LIGAO

GNICA E PARES

DE CROMOSSOMOS

Por volta de 1911 no havia mais qualquer dvida de que os cromossomos se encontravam aos pares nos organismos diplides, com exceo dos cromossomos sexuais, onde poderia haver diferenas com relao a essa regra. Como observado anteriormente, Sutton (1903) havia proposto a hiptese de que todos os alelos presentes em um mesmo cromossomo deveriam ser herdados juntos. Se isso fosse verdadeiro, o nmero de grupos de alelos herdados juntos no poderia exceder o nmero de pares de cromossomos homlogos. Essa hiptese poderia ser testada em Drosophila melanogaster, onde um nmero crescente de genes estava sendo descoberto.

D. melanogaster tem 4 pares de cromossomos: trs pares de autossomos e um par de cromossomos sexuais. Na metfase mittica, os autossomos aparecem como dois longos pares em forma de V e um pequeno par puntiforme. O cromossomo X tem a forma de um basto e o Y tem forma de um anzol. (Fig. 31) Nos primeiros meses de trabalho com Drosophila, a equipe liderada por Morgan rapidamente verificou que alguns genes apresentavam ligao e que seu padro de herana sugeria que eles fizessem parte do cromossomo X (Morgan, 1911). Logo a seguir, dois outros grupos de ligao foram caracterizados (Morgan & Lynch,
GRUPO I Regio afetada

1912; Sturtevant, 1913). Pressups-se ento que tais grupos fossem associados aos dois pares de autossomos maiores. Deste modo, haviam sido encontrados apenas trs grupos de ligao, mas existiam quatro pares de cromossomos. Esta discrepncia poderia ser atribuda ao pequeno tamanho do par de autossomos puntiformes, provavelmente constitudo por poucos genes ainda no detectados, ou talvez esse cromossomo fosse completamente destitudo de qualquer loco gnico. O cromossomo Y provavelmente se encaixaria neste ltimo caso. Posteriormente, foi descoberta uma mosca, cuja mutao segregou-se independentemente
GRUPO III Regio Afetada Padro do trax Asas Cor dos olhos Olhos Tamanho do corpo Cor do corpo Tamanho do corpo Olhos

Nome

Nome

GRUPO II Regio Afetada

Nome

Abnormal Abdome Bar Olhos Bifid Veias das asas Bow Asas Cherry Cor dos olhos Chrome Cor do corpo Cleft Nervuras das asas Club Asas Depressed Asas Dotted Trax Eosin Cor dos olhos Facet Omatdios Furrowed Olhos Fused Veias das asas Green Cor do corpo Jaunty Asas Lemon Cor do corpo Lethals, 13 Morte Miniature Asas Notch Veias das asas Reduplicated Pernas Ruby Cor dos olhos Rudimentary Asas Sable Cor do corpo Shifted Veias das asas Short Asas Skee Asas Spoon Asas Spot Cor do corpo Tan Antenas Truncate Asas Vermilion Cor dos olhos White Cor dos olhos Yellow Cor do corpo

Antlered Asas Apterous Asas Arc Asas Balloon Veias das asas Black Cor do corpo Blistered Asas Comma Trax Confluent Veias das asas Cream II Cor dos olhos Curved Asas Dachs Pernas Extra vein Veias das asas Fringed Asas Jaunty Asas Limited Faixa abdominal LittlecrossoverCromossomo II Morula Omatdios Olive Cor do corpo Plexus Veias das asas Purple Cor dos olhos Speck Trax Strap Asas Streak Padro do trax Trefoil Padro do trax Truncate Asas Vestigial Asas

Band Beaded Cream III Deformed Dwarf Ebony Giant

Kidney Low crossing -over Cromossomo III Maroon Cor dos olhos Peach Cor dos olhos Pink Cor dos olhos Rough Olhos Safranin Cor dos olhos Sepia Cor dos olhos Sooty Cor do corpo Spineless Cerdas Spread Asas Trident Padro do trax Truncate intensf. Asas Whitehead Cor periocelar White ocelli Ocelos

Nome Bent Eyeless

X X X Y

GRUPO IV Regio Afetada Asas Olhos

Figura 31. Os quatro grupos de ligao gnica de Drosophila melanogaster estabelecidos at 1915. Na poca eram conhecidos mais de oito dezenas de genes distribudos em 4 grupos de ligao. O diagrama abaixo no centro mostra os cromossomos de clulas somticas de machos e fmeas. (Morgan,1915)

98

quando foi cruzada com moscas que apresentavam mutaes pertencentes a qualquer um dos trs grupos de ligao ento conhecidos (Muller, 1914). Deste modo, era altamente provvel que o novo mutante fizesse parte do autossomo puntiforme. Mais tarde foram descobertos outros genes pertencentes a este quarto grupo de ligao gnica. Por volta de 1915 a equipe liderada por Morgan j havia pesquisado os padres de herana de 85 genes. Estes distribuam-se em quatro grupos de ligao, como mostra a figura 31, que tambm apresenta um diagrama dos cromossomos metafsicos. O paralelismo entre o nmero de cromossomos, determinado pela anlise citolgica, e o nmero de grupos de ligao, verificado nos experimentos genticos, foi uma forte evidncia no apenas de que os genes so partes integrantes dos cromossomos mas tambm que genes localizados em um mesmo cromossomo tendem a ser herdados juntos. As informaes contidas na figura 31 nos permitem tirar algumas concluses adicionais. Veja que muitos genes diferentes afetam um mesmo carter: por exemplo, 13 influenciam a cor dos olhos; 33 modificam de algum modo as asas; 10 afetam a cor do corpo. Assim, possvel levantar a seguinte questo: que condies so necessrias para que uma mosca tenha olhos de cor vermelha selvagem ? A resposta que os alelos do tipo selvagem de todos estes 13 genes para cor dos olhos, juntamente com muitos outros descobertos posteriomente, atuem juntos para produzir a cor vermelha dos olhos dos indivduos selvagens. Se um indivduo homozigtico para um alelo mutante de qualquer um destes genes, os olhos no sero vermelhos, mas brancos, ou cor-de-pssego, ou spia, etc. Poderia se pensar na cor vermelha normal dos olhos como o produto final de um conjunto de genes em ao. Se qualquer uma dessas atividades for alterada, a cor do olho ser diferente. importante estar ciente que os olhos dos insetos no variam apenas na cor. H diversos genes que influenciam, por exemplo, a morfologia dos olhos, alguns muito drasticamente como o caso do mutante sem olhos (ou com olhos muito reduzidos) condicionado por alterao de 1 par de alelos (eyeless) localizado no quarto grupo de ligao, ou a mutao olho em forma de barra (Bar), condicionada por uma alterao no cromossomo X. 99

Na denominao dos alelos mutantes, so levados em conta os efeitos mais visveis da mutao, por exemplo, o alelo white-eyed produz olhos brancos. Entretanto, quando moscas homozigticas para essa mutao foram cuidadosamente examinadas verificou-se que tambm a pigmentao dos ocelos e de alguns rgos internos estava alterada. Isso no uma exceo, muitos genes so pleiotrpicos, isto , afetam mais de uma estrutura ou processo. Alguns geneticistas do comeo do sculo chegaram a suspeitar que cada gene afetava, de algum modo, todos os aspectos da estrutura e funo do corpo.

A PROVA CITOLGICA DA PERMUTAO

Muito importante foi o fato de a hiptese de Morgan, de que a permutao seria o mecanismo para explicar a recombinao dos genes ligados, ter sido exaustivamente testada e, caso no tivesse sido confirmada, ela teria sido substituda. A hiptese havia sido proposta para explicar algumas excees herana mendeliana simples; deste modo, o fato de que os resultados corroboravam a hiptese no podia ser usado como apoio validade da hiptese. A prova crucial deveria ser alguma evidncia citolgica para a quebra e a permutao de cromtides homlogas. Supunha-se que tais eventos ocorressem na meiose durante a sinapse e a formao dos bivalentes. O estudo dos cromossomos, naquela poca, era extremamente difcil. O problema se complicava ainda mais pelo fato de os cromossomos homlogos serem aparentemente idnticos, de tal forma que, mesmo se tivesse ocorrido permutao durante a sinapse, as cromtides no dariam evidncia visvel alguma de que elas tinham se quebrado e se permutado. Reflita sobre esta dificuldade e tente imaginar um experimento que pudesse fornecer uma evidncia crtica de que a recombinao entre genes localizados em um mesmo cromossomo fosse resultado da permutao entre cromossomos homlogos. Uma idia seria encontrar uma espcie com cromossomos homlogos diferentes ou torn-los diferentes experimentalmente, uma vez que no possvel obter evidncias quando os homlogos so idnticos. Por volta de 1910 no se sabia como fazer com que os cromossomos ficassem diferentes e a equipe

de drosofilistas aceitava como verdadeira a hiptese da permutao pelo simples fato de que tal hiptese continuava a explicar os dados que estavam sendo obtidos. Na realidade, se passaram quase vinte anos at que Curt Stern (1931) conseguisse obter uma prova citolgica da permutao. Na poca em que Stern iniciou seu trabalho, os geneticistas que trabalhavam com D. melanogaster j tinham um grande nmero de linhagens de mutantes, incluindo vrias contendo aberraes cromossmicas. Algumas destas mutaes haviam surgido espontaneamente nos estoques mantidos na Sala das Moscas, enquanto que outras surgiram nas linhagens expostas intencionalmente ao elemento qumico rdio ou a raios X. Existe uma atitude cooperativa notvel entre os geneticistas que trabalham com espcies de Drosophila, de tal forma que eles constantemente realizam intercmbio de linhagens entre diferentes instituies tanto nos Estados Unidos como em diferentes pases do mundo. Durante muitos anos, a equipe liderada por Morgan, inicialmente sediada na Columbia University e mais tarde, aps 1928, transferida para o California Institute of Technology manteve centenas de linhagens, tanto para uso pela prpria equipe como por qualquer geneticista que as requisitasse. Subseqentemente uma grande coleo passou a ser mantida pela University of Texas em Austin, e atualmente existe o National Drosophila Species Resource Center, mantido financeiramente pela The National Science Foundation, na Bowling Green State University, sediada no estado de Ohio (EUA). Stern construiu linhagens que forneceram o material-teste que ele tanto necessitava, isto , moscas com cromossomos homlogos estrutural e geneticamente diferentes. As fmeas tinham cromossomos X diferentes tanto do ponto de vista estrutural quanto gentico (a figura 32 uma representao simplificada de um dos experimentos cruciais feitos por Stern). Um dos cromossomos X estava partido em dois pedaos; um deles se comportava como um cromossomo independente, enquanto que o outro pedao estava fisicamente ligado a um dos minsculos cromossomos 4. O outro cromossomo X tinha um pedao de cromossomo Y ligado a ele. Estas diferenas estruturais eram to evidentes que era possvel identificar os cromossomos em clulas fixadas e coradas (Fig. 32).

Alm dessas modificaes estruturais, os dois cromossomos X apresentavam marcadores genticos (mutaes). Uma das partes do cromossomo X fragmentado apresentava tanto o alelo recessivo carnation (c), que quando em homozigose produz olhos de cor rubi-escura, como o alelo dominante Bar (B), que transforma os olhos selvagens, quase circulares, em olhos reduzidos em forma de basto. O cromossomo X ligado ao fragmento do Y apresentava, por sua vez, os alelos selvagens C e b, que produzem, respectivamente, olhos vermelhos e com a forma selvagem arredondada. Durante a meiose feminina esperava-se que houvesse permutao entre esses dois locos em algumas clulas mas no em outras. Como conseqncia seriam formados quatro tipos de vulos e cada um deles seria gentica e estruturalmente nico. Se esta fmea fosse cruzada com um macho duplo-recessivo, de olho cor carnation e forma selvagem, os alelos de cada um dos gametas da fmea se expressariam e poderiam ser identificados. A evidncia crtica seria fornecida pelas fmeas da gerao F1, que se distribuiriam em quatro classes fenotpicas. Alm disso, cada classe fenotpica teria cromossomos previsivelmente diferentes. Stern planejou o cruzamento de tal maneira que se a hiptese testada fosse verdadeira os indivduos recombinantes com olhos de cor carnation e de forma selvagem apresentariam 2 cromossomos X de tamanhos normais. A outra classe recombinante apresentaria olhos vermelhos em forma de basto; e suas clulas conteriam um cromossomo X de tamanho normal e outro X pequeno ligado ao fragmento de Y. As outras classes fenotpicas, originadas de vulos norecombinantes, teriam tambm configuraes cromossmicas caractersticas. Stern analisou os cromossomos de cerca de 400 fmeas de todas as quatro classes fenotpicas e verificou que os fentipos correspondiam exatamente s configuraes citolgicas previstas. Esta foi uma demonstrao notvel de que a hiptese de Morgan, de que a permutao citolgica seria a causa da recombinao gnica, estava realmente correta. Em um trabalho publicado algumas semanas antes, Harriet Creighton e Barbara McClintock (1931) demonstraram que, em milho (Zea mays), a permutao tinha uma base citolgica. A metodologia bsica delas foi a mesma utilizada por Stern em seus experimentos com Drosophila.

100

Creighton e McClintock desenvolveram linhagens de milho gentica e citologicamente diferentes em relao ao cromossomo 9. A

evidncia que elas obtiveram foi a presena de configuraes citolgicas previsveis, nas plantas com diferentes fentipos.

Y P
c B C b

c b

Permutao
c
21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21

C B

Ausncia de permutao

c b C B
21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21

F1
B b b b b b b
21 21 21 21

Carnation bar

Vermelho normal

Carnation normal

Indivduos resultantes de vulos no-permutados

Indivduos resultantes de vulos permutados

Figura 32. Prova citolgica da permutao obtida por Stern (1931).

101

21 21 21 21

Gametas

Descendncia no-utilizada

C B

Vermelho bar

21 21 21 21

21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21

21 21 21 21 21 21 21 21

21 21 21 21 21 21 21 21

21 21 21 21 21 21 21

EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS
Preencha os espaos em branco nas frases numeradas de 1 a 8 usando o termo mais apropriado dentre os arrolados abaixo: (a) acoplamento (b) ligao incompleta (c) ligao gnica (d) recombinao (e) herana ligada ao sexo (f) herana limitada ao sexo (g) grupo de ligao gnica (h) repulso 1. ( ) qualquer processo que ocorre em uma clula diplide e produz combinaes gnicas ou cromossmicas no encontradas naquela clula ou nos seus progenitores. 2. A condio na qual um indivduo duploheterozigtico (Ab/ aB), recebeu de cada um dos pais, um alelo mutante de um dos genes associado a um alelo selvagem do outro denominada ( ) ou arranjo trans. 3. ( ) ou arranjo cis a condio presente em um indivduo duplo-heterozigtico (AB/ab), no qual os 2 alelos mutantes associados so provenientes de um de seus progenitores, e os seus respectivos alelos selvagens, do outro. 4. A expresso de uma caracterstica (por exemplo, produo de ovos ou de leite) restrita apenas um dos sexos denominada ( ). 5. Os genes localizados no segmento do cromossomo X sem homologia com o cromossomo Y seguem um padro de herana denominado ( ). 6. A ( ) verificada por Bateson, Saunders e Punnett em seus experimentos com ervilha-decheiro, consistia na ocorrncia, em uma pequena frao dos gametas, do fenmeno da repulso (no esperada) dos dois alelos que estavam em acoplamento nos progenitores, produzindo assim uma certa porcentagem de recombinantes. 7. A tendncia de certos genes serem herdados juntos, denominada ( ) resulta do fato deles estarem localizados no mesmo cromossomo. 8. Um ( ) um conjunto de locos gnicos fisicamente conectados e que, portanto, no se segregam independentemente. Equivale a um cromossomo. Preencha os espaos em branco nas frases numeradas de 9 a 16 usando o termo mais apropriado dentre os listados abaixo : (a) permutao (b) bivalente (c) quiasma (d) gene pleiotrpico (e) cromossomo X (f) cromossomo Y (g) sinapse (h) marcador gentico (i) aberrao cromossmica 9. ( ) um processo pelo qual ocorre troca de pedaos correspondentes entre cromossomos homlogos. Este processo pode resultar na produo de indivduos recombinantes. 10. ( ) o emparelhamento ntimo dos cromossomos homlogos durante uma fase (prfase) da meiose, e que resulta em uma estrutura denominada ttrade. 11. Um alelo usado como uma sonda para seguir o destino de um gene ou cromossomo em um experimento denominado ( ). 12. Durante a meiose ocorre uma associao entre os cromossomos homlogos duplicados, a qual resulta em um feixe de 4 de cromtides que denominado ( ). 13. Uma alterao estrutural ou numrica dos cromossomos denominada ( ). 14. ( ) aquele que influencia mais de uma caracterstica. 15. ( ) uma estrutura em forma de cruz, observada entre cromtides homlogas durante a meiose, e que resulta de um processo denominado ( ). 16. ( ) o par do cromossomo X no sexo masculino de muitas espcies. 17. ( ) um cromossomo que geralmente ocorre em dose dupla nas fmeas e simples nos machos de muitas espcies (por exemplo, nos mamferos) e est relacionado com a determinao do sexo. Preencha os espaos em branco nas frases numeradas de 18 a 21 usando o termo mais apropriado dentre os arrolados abaixo : (a) cromossomos homlogos (b) cromtides homlogas (c) cromtides-irms (d) genes duplicados

102

18. ( ) so aqueles que se emparelham durante a meiose e geralmente so semelhantes no tamanho e na forma. Eles contm os mesmos locos gnicos e, em cada par, um tem origem paterna e o outro, materna. 19. ( ) so os pares de filamentos que resultam da auto-duplicao de cromossomos homlogos. 20. Dois pares idnticos de alelos em um indivduo diplide so chamados de ( ). 21. ( ) so os pares de filamentos idnticos, unidos pelos centrmeros, que resultam da autoduplicao de um cromossomo, durante o processo de diviso celular .

esfricos e vermelhos : 1 esfricos e amarelos : 1 oblongos e vermelhos : 1 oblongos e amarelos. Estes resultados sugerem ( ) entre os alelos que determinam a cor e aqueles que determinam a forma dos frutos. 25. Um indivduo duplo-heterozigtico (AaBb) para dois pares de alelos que determinam duas caractersticas cruzado com um duplorecessivo (aabb ) e produz apenas dois tipos de descendentes, na proporo 1 dominante para a primeira das caractersticas e recessivo para a segunda : 1 recessivo para a primeira e dominante para a segunda. Estes resultados so indicativos de ( ) entre os alelos A e b e entre a e B.

PARTE B : L IGANDO CONCEITOS E FATOS

Utilize as alternativas abaixo para responder s questes de 22 a 25: a. ligao incompleta b. ligao gnica do tipo cis c. ligao gnica do tipo trans d. segregao independente 22. Um indivduo duplo-heterozigtico (AaBb) para dois pares de alelos que determinam duas caractersticas cruzado com um duplorecessivo (aabb) e produz apenas dois tipos de descendentes, na proporo 1 : 1, ou com fentipo dominante para ambas as caractersticas ou apenas com fentipo recessivo. Estes resultados so indicativos de ( ) entre os alelos A e B e entre a e b . 23. O cruzamento de drosfilas de cerdas longas e ausncia de olhos (AAbb) com drosfilas de cerdas curtas e presena de olhos ( aaBB ) produziu apenas descendentes de cerdas longas e com presena de olhos (AaBb). Do cruzamento-teste efetuado com os indivduos da gerao F1 foram produzidas 4 classes fenotpicas na seguinte proporo: 1 (presena de cerdas longas e de olhos) : 99 (presena de cerdas longas, ausncia de olhos) : 99 (presena de cerdas curtas e de olhos) : 1 (presena de cerdas curtas, ausncia de olhos). Estes resultados so indicativos de ( ) entre os alelos A e b e entre a e B. 24. O cruzamento entre plantas de uma variedade de tomate de frutos esfricos e amarelos (AAbb) com plantas de outra variedade de frutos oblongos e vermelhos (aaBB) produz apenas tomates esfricos e vermelhos (AaBb). O cruzamento-teste realizado com indivduos da gerao F1 produz 4 classes fenotpicas : 1

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

26. O que levou Bateson, Saunders e Punnett a concluir que os genes para cor da flor e para forma do gro-de-plen em ervilha-de-cheiro se comportavam de acordo com o esperado pela primeira lei de Mendel, mas no de acordo com o esperado pela segunda lei? 27. O cruzamento entre plantas duplo-homozigticas de ervilha-de-cheiro do tipo azul-longo com plantas do tipo vermelho-redondo produz apenas plantas com fentipo igual s primeiras. O cruzamento-teste da gerao F1 produz 4 classes fenotpicas na seguinte proporo 6,9 azul-longo: 1 azul-redondo: 1 vermelho-longo: 6,9 vermelho-redondo. Se a gerao parental for contituda por indivduos azul-redondo X vermelho-longo o resultado do cruzamentoteste da gerao F1 ser: 1 azul-longo: 6,9 azulredondo: 6,9 vermelho-longo: 1 vermelhoredondo. Como Bateson, Saunders e Punnett explicaram as diferenas nestas propores entre os descendentes dos cruzamentos-testes do indivduos duplo-heterozigticos dos dois tipos de cruzamentos? 28. Drosfilas com gentipo AaBb cruzadas com outras com gentipo aabb. geralmente produzem descendentes na seguinte proporo genotpica : 9 AaBb: 9 aabb: 1 Aabb: 1 aaBb. Entretanto, de um cruzamento-teste de uma fmea duplo-heterozigtica nasceram descendentes na seguinte proporo genotpica : 1 AaBb: 1 aabb: 9 Aabb : 9 aaBb.Proponha uma hiptese para explicar o resultado do primeiro cruzamento e outra para explicar o resultado obtido no cruzamento com a ltima fmea.

103

29. Drosfilas duplo-homozigticas de asas vestigiais e cor castanha foram cruzadas com outras, de uma linhagem tambm duplohomozigtica, de asas longas e cor cinza e produziram apenas descendentes de asas longas e corpos castanhos. Dos cruzamentosteste realizados com as moscas da gerao F1 foram obtidas moscas com a seguinte proporo fenotpica: 1 (asas vestigiais-corpo castanho): 1 (asas vestigiais-corpo cinza): 1 (asas longas-corpo castanho): 1 (asas longas corpo cinza). Baseado nestes resultados responda: a) Qual o gentipo de cada um dos fentipos envolvidos no experimento acima? b)Quais fentipos so parentais? c) Quais fentipos so recombinantes? d)Qual a porcentagem de fentipos parentais? e) Qual a porcentagem de fentipos recombinantes? 30. Drosfilas duplo-homozigticas de asas vestigiais e cor castanha foram cruzadas com outras, de uma linhagem tambm duplohomozigtica, de asas longas e cor preta e produziram apenas descendentes de asas longas e corpos castanhos. Dos cruzamentosteste realizados com as fmeas da gerao F1,

foram obtidas moscas com a seguinte proporo fenotpica: 4,6 (asas vestigiais-corpo castanho): 1 (asas vestigiais-corpo preto): 1 (asas longas-corpo castanho): 4,6 (asas longascorpo preto). Baseado nestes resultados responda: a) Qual o gentipo de cada um dos fentipos envolvidos no experimento acima? b) Quais fentipos so parentais? c) Quais fentipos so recombinantes? d) Qual a porcentagem de fentipos parentais? e) Qual a porcentagem de fentipos recombinantes? f) A que podem ser atribudas as diferenas observadas nos resultados dos cruzamentosteste dos experimentos detalhados nas perguntas 28 e 29? g) Nos dois casos ocorre segregao independente? Justifique. Entretanto, nos cruzamentos-testes de machos F1, foram obtidos apenas 2 classes em F2 : 1 (asas vestigiais - corpo castanho) : 1 (asas longas - corpo preto). Tais resultados mostram que h uma diferena essencial na formao dos gametas masculinos e femininos em D. melanogaster. Que diferena essa?

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M APEAMENTO CROMOSSMICO
Dcima primeira aula (T11)
Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

Objetivos
1. Definir mapa cromossmico. 2. Explicar o raciocnio dedutivo que levou construo dos mapas cromossmicos. 3. Discutir a metodologia de construo de mapas cromossmicos em funo da dupla permutao. 4. Definir alelos mltiplos. 5. Explicar a origem dos alelos mltiplos.

DISTRIBUIO LINEAR DOS GENES NOS CROMOSSOMOS

O primeiro trabalho completo de Morgan (1911a), que tratava dos primeiros genes mutantes encontrados no cromossomo X de Drosophila melanogaster, j apresentava previses sobre uma parte considervel da gentica daquele organismo. Uma delas foi a possibilidade de se preparar um mapa cromossmico. Morgan comenta: the necessity of assuming some ... localization [of the genes] amongst some of the substances resident in the same chromosome. Morgan percebeu que, para explicar o acoplamento e a repulso gnica por meio da teoria da quiasmatipia de Janssens, seria necessrio admitir que os fatores da hereditariedade estivessem localizados linearmente, e em uma srie correspondente, ao longo de cada um dos pares de cromossomos homlogos. E, sendo assim, as associaes entre esses fatores seriam mais freqentes, ou menos, de acordo com a proximidade entre eles. Alm disso, vinha sendo observado que a porcentagem de recombinao entre dois genes quaisquer de um mesmo cromossomo era constante. Em um trabalho curto publicado no mesmo ano (1911), Morgan mostra-se mais decidido: ns encontramos acoplamento entre certas caractersticas, e pouca ou nenhuma evidncia

de acoplamento entre outras caractersticas; a diferena depende das distncias lineares entre os materiais cromossmicos que representam os fatores. Morgan props a hiptese de que os fatores estariam localizados em lugares definidos nos cromossomos e dispostos em uma ordem linear. A partir desta hiptese, deduziu que, para um determinado segmento de um par de cromossomos homlogos qualquer, a probabilidade de haver uma permutao entre suas cromtides noirms dependeria do comprimento desse segmento. Isto , se a chance de ocorrer uma permuta em qualquer ponto ao longo do cromossomo for a mesma, quanto maior o segmento, maior a probabilidade de ocorrer uma permuta em um ponto qualquer daquele segmento. Em novembro de 1912, Sturtevant, na poca um estagirio na Sala das Moscas, com base na hiptese de Morgan de que o grau de repulso depende da distncia entre os fatores, fez a seguinte deduo: Se a hiptese de Morgan estiver correta, a proporo de recombinantes pode ser usada como um indicador da distncia entre dois fatores quaisquer. Ao se determinar a distncia entre A e B e entre B e C, pode-se prever a distncia entre A e C. Se a proporo de recombinantes realmente representar a distncia entre os fatores, a distncia AC deve ser, aproximadamente, a soma entre as distncias AB e BC ou sua diferena.

105

PRINCPIO

DE CONSTRUO DOS MAPAS CROMOSSMICOS

O primeiro mapa cromossmico Sturtevant conta em seu livro A History of Genetics (1965) que teve essa idia ao voltar para casa aps uma discusso de fim de tarde no laboratrio. Entusiasmado com a idia, ele voltou ao laboratrio naquela mesma noite e, com os dados disponveis sobre os cruzamentos j realizados pelo grupo, construiu o primeiro mapa cromossmico (ou mapa de ligao gnica). Ele utilizou 5 mutantes, localizados no cromossomo X, e seus alelos selvagens: um para corpo de cor (yellow = y), dois para cor dos olhos (white = w e vermilion = v) e dois para tamanho alterado das asas (miniature = m e rudimentary = r). Um mapa mais elaborado foi preparado por ele (Sturtevant, 1913) como tema de sua tese de doutoramento. Sturtevant cruzou moscas mutantes com moscas selvagens homozigticas. As fmeas da gerao F1 foram ento cruzadas com machos portadores dos alelos recessivos (cruzamentoteste) - os machos F1 no foram utilizados porque Morgan j havia descoberto que neles no ocorria permutao. Os descendentes foram ento classificados de acordo com a ocorrncia ou no de recombinao entre os alelos pesquisados. Tais recombinaes indicariam a ocorrncia de permutao entre os locos analisados. Os dados de recombinao entre os genes y e v so mostrados na figura 33A. A freqncia foi de aproximadamente 30% e os 2 genes foram representados na figura separados por um espao equivalente a 15 mm. No segundo experimento foi observada uma porcentagem de recombinao entre y e m de aproximadamente 33%. Considerando-se que 2 pontos (y e v) j foram inseridos na linha que representa o cromossomo, h duas possibilidades para a posio do gene m: ele pode estar do mesmo lado que o gene v ou do outro lado do gene y (Fig. 33B). Admitindo-se que a hiptese de trabalho esteja correta, em um dos casos os genes v e m estariam muito prximos, isto , do mesmo lado do cromossomo em relao ao gene y e, portanto, separados por apenas 3 centiMorgans1 (cM) (33 - 30). No outro caso, eles estariam localizados em lados opostos em relao ao gene y e, portanto, separados por 63 cM (33 + 30). A formulao

precisa dessa hiptese que permitiu que uma deduo crtica fosse feita e que ela pudesse ser testada medindo-se a taxa de recombinantes entre v e m. Sturtevant fez o experimento e verificou que a porcentagem de recombinao entre v e m era igual a 3% ou seja, em 97% dos descendentes a mutao v estava associada mutao m e em apenas 3% deles elas apareciam separadamente. Esse resultado indicava que os genes v e m estavam muito prximos e, portanto, do mesmo lado do cromossomo em relao ao gene y. A grande concordncia entre os resultados obtidos e os esperados constituiu-se em um forte argumento a favor da veracidade da hiptese.

A.

v
30 cM

B.

33 cM

30 cM 33 cM

C.
01

Figura 33. Mtodo de Sturtevant para determinar a ordem linear dos locos gnicos nos cromossomos. A. Mostra y e v separados por uma distncia proporcional porcentagem de recombinantes entre eles. B. Mostra a impossibilidade de se saber se m est do mesmo lado que v ou do lado oposto. C. Mostra a posio relativa de cinco locos no cromossomo X de D. melanogaster.
1

CentiMorgan, representado pela sigla cM, a unidade de distncia entre dois genes ligados, equivalendo a 1% de recombinantes. Essa unidade utilizada em mapeamento cromossmico feito pela anlise da porcentagem de recombinantes entre dois lcus gnicos quaisquer localizados em um mesmo cromossomo. Por exemplo, se na descendncia de um cruzamento em que so analisados dois lcus, 15% dos indivduos so recombinantes, a distncia entre estes lcus de 15cM.

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6543210987654321098765432121098765432109876543210987654321 6543210987654321098765432121098765432109876543210987654321

yw

............. .............

v m

43210987654321098765432121098765432109876543210987654321 43210987654321098765432121098765432109876543210987654321 43210987654321098765432121098765432109876543210987654321

Agora m pode estar tanto direita como esquerda de y.

? m

? vm

43210987654321098765432121098765432109876543210987654321 43210987654321098765432121098765432109876543210987654321
............. .............

............. .............

30,7 33,7

57,6

Morgan no teve dvidas em adot-la, pois estava influenciado pela forma dos cromossomos, especialmente durante a prfase, isto , fios longos. Sturtevant fez experimentos semelhantes com os alelos mutantes white (w), que altera a cor dos olhos, e rudimentary (r), que altera o tamanho das asas, e construiu o mapa cromossmico para esses locos (Fig. 33C). O loco y foi considerado como ponto de partida e os demais locos gnicos foram colocados a distncias equivalentes s porcentagens de recombinantes entre locos adjacentes. A hiptese da permutao dupla

Uma situao intrigante foi logo encontrada. Experimentos repetidos mostravam que a distncia entre os locos dependia da maneira como o mapa cromossmico era construdo. O mapa da figura 33C, por exemplo, mostra uma distncia de 57,6 cM entre os genes y e r. Este valor equivale soma dos valores individuais de recombinantes entre os genes y e w, entre os genes w e v, e assim por diante. Quando a porcentagem de recombinantes era determinada por experimentos que utilizavam apenas os genes y e r, os valores encontrados eram menores que os previstos. Sturtevant levantou a hiptese de que essas diferenas poderiam ser devidas ocorrncia de permutaes duplas. Tal fenmeno poderia colocar os alelos de volta no cromossomo original. O resultado final seria uma aparente ausncia de permutao entre os dois locos, quando, na realidade, ocorreram duas. Mas de que modo a hiptese da ocorrncia de permutao dupla poderia ser testada? Sturtevant testou essa hiptese usando trs genes (marcadores) simultaneamente. Em um experimento, ele cruzou fmeas que tinham os alelos y, w e m em um dos cromossomos X e os alelos Y, W e M y y y y Y Y Y Y no outro cromossomo X com machos w w w w W W W W que possuam os 3 alelos recessivos. Ele obteve 10495 descendentes, que foram analisados com relao aos m m m m M M M M seus fentipos, e deste modo pde ter evidncias da ocorrncia ou no de Ausncia de Permutao Permutao Permutao permutao entre W e M entre Y e W dupla permutaes duplas. (Fig.34) 6972 moscas 3454 moscas 60 moscas 9 moscas Quando no ocorresse permutao entre os locos y e m, metade dos descendentes seria do tipo selvagem Figura 34. Representao esquemtica do experimento de Sturtevant e a outra metade teria corpo de cor para testar a ocorrncia de permutao dupla em drosfila.

amarela (yellow), olhos brancos (white) e asas reduzidas (miniature). Sturtevant verificou que 6972 moscas apresentavam um ou outro desses dois fentipos. Quando ocorresse permutao entre os locos w e m, as moscas teriam corpo de cor amarela, olhos brancos e asas longas ou olhos e cor do corpo do tipo selvagem, com asas mutantes (reduzidas). Sturtevant encontrou 3454 moscas que apresentam um ou outro desses dois fentipos. Permutao entre os locos y e w resultaria em moscas com corpo de cor amarela e asas e olhos do tipo selvagem ou moscas com cor do corpo do tipo selvagem, mas com olhos brancos e asas reduzidas. Apenas 60 moscas com um ou outro desses dois fentipos foram encontradas, o que indicava que os locos y e w estavam situados muito prximos no cromossomo. E, finalmente, foram obtidos apenas nove indivduos, dentre os 10495, que apresentavam corpo de cor amarela, olhos vermelhos e asas reduzidas ou olhos brancos e cor do corpo e asas do tipo selvagem. A origem destas duas classes fenotpicas poderia ser explicada com base na ocorrncia de permutao dupla, como mostrado na figura 34. Deve ficar claro, portanto, que necessrio a anlise de no mnimo 3 genes para que seja possvel detectar a ocorrncia de permutao dupla. Se apenas os locos y e m tivessem sido utilizados, qualquer permutao dupla entre eles no seria detectada, uma vez que os alelos y e m teriam reassumido suas posies originais. (Fig. 34, ltimo esquema direita). Para evitar erros devido a ocorrncia de permutaes duplas, os pesquisadores da Sala das Moscas faziam seus mapas cromossmicos por meio da soma dos dados de cruzamentos que envolviam lcus prximos.

107

INTERFERNCIA

E COINCIDNCIA

Em 1916, quando Muller publicou sua tese de doutoramento, o mecanismo da permuta adquiriu maior complexidade. Assumindo que as permutas ocorreriam ao acaso ao longo do cromossomo, Muller calculou a probabilidade de ocorrer dupla permuta envolvendo dois segmentos adjacentes. Por exemplo, a porcentagem de duplos recombinantes entre y e m, caso as permutas ocorressem ao acaso e fossem eventos independentes, deveria ser igual ao produto entre a freqncia de recombinantes para os genes y e w e a freqncia de recombinantes para os genes w e m. Em seus experimentos, ele verificou que: para pequenas distncias no foram encontrados duplo recombinantes; para distncias intermedirias (10 a 30 cM), embora um nmero razovel de duplo recombinantes estivesse presente, a porcentagem era menor do que a esperada; somente para grandes distncias o teste mostrou uma correspondncia entre o nmero de duplos recombinantes previsto (calculado teoricamente) e o realmente observado. Isso indicava que a ocorrncia de uma permuta em um determinado ponto do cromossomo poderia interferir na ocorrncia de uma outra permuta em regies adjacentes. Muller passou a chamar esse fenmeno de interferncia. Ele props que a razo entre as freqncias observadas e esperadas de duplo-recombinantes poderia ser usada como uma medida matemtica da interferncia, a essa razo ele denominou de coeficiente de coincidncia (c.c.). Portanto,
freqncia observada de duplo-recombinantes c.c. = freqncia esperada de duplo-recombinantes

Havendo interferncia completa (=1), ou seja, quando a ocorrncia de uma permuta impede a ocorrncia de permutas nas regies adjacentes do cromossomo, no se formam duplo recombinantes e, portanto, o coeficiente de coincidncia zero. Por outro lado, a ausncia de interferncia resulta em um coeficiente de coincidncia igual a um pois a freqncia esperada de duplo-recombinantes igual freqncia obtida. A interferncia dada por 1 - c.c.. Portanto, tanto o coeficiente de coincidncia como a interferncia so valores que variam de 0 (zero) a 1 (um). Uma pergunta que se pode fazer nesse ponto

: o mapa cromossmico, assim construdo, reflete acuradamente as posies dos genes nos cromossomos? Sturtevant tinha a seguinte opinio: claro que no se sabe se as distncias, como so obtidas, representam a real posio espacial dos fatores. A distncia w-v pode, em realidade, ser menor do que a distncia sc-w. O que sabemos, que as quebras so mais provveis de ocorrer entre w e v do que entre sc e w. Assim, h duas possibilidades: ou o segmento w-v seria mais longo do que o segmento sc-w, ou seria mais sensvel a quebras. O ponto que pretendo chamar a ateno que no temos como saber se os cromossomos tm uma uniformidade em sua extenso ou se existem pontos mais ou menos suscetveis a quebras. Sendo assim, nosso diagrama pode no representar as distncias relativas reais entre os fatores - mas, eu penso que isto no o desvaloriza como um diagrama. Em sua tese de doutoramento, Sturtevant chegou seguinte concluso: Estes resultados so explicados com base na aplicao da hiptese de quiasmatipia na associao entre fatores. Eles so um novo argumento em favor da teoria cromossmica da herana uma vez que so fortes evidncias de que os fatores investigados esto arranjados em uma srie linear, pelo menos matematicamente. Deve ser lembrado que ao dirigir-se American Breeders Association, Morgan acusou os mendelistas de sugerirem vrios tipos de mecanismos no provados para explicar todas as excees s leis originais de Mendel. O mesmo tipo de crtica foi, por sua vez, dirigido equipe de Morgan: Como seria possvel imaginar que nos cromossomos pudessem ocorrer coisas to extraordinrias, como permutaes simples e duplas, se no existia a menor evidncia citolgica a respeito de tais eventos? Esse era um tipo de crtica difcil de ser rebatida nos anos da dcada de 1910, porm os fatos bsicos permaneceram medida que novos dados iam sendo acumulados, esses mostravam fazer sentido com base nas hipteses que iam sendo propostas pela equipe que se dedicava ao estudo da D. melanogaster. A equipe vinha fornecendo um esquema conceitual que explicava cada vez melhor os mecanismos da Gentica. Assim, por si s, tornava mais provvel a veracidade do esquema conceitual.

108

UMA ALTERNATIVA

PARA MELHOR

COMPREENSO DESTE TPICO.

Admita que temos alguns dados relativos a uma viagem de So Paulo a Braslia pela interestadual BR-050 e que queremos utilizar estes dados para localizar algumas cidades situadas na rota e encontrar as distncias entre elas. Admita tambm que os dados fornecidos sejam os nicos disponveis. Nossos primeiros fatos sero as distncias, em km, entre estas cidades (Tabela I).
Tabela I. Distncias rodovirias entre algumas cidades brasileiras. CIDADES Distncia em km 153 166 274 319 425 440 593 699 865

Limeira - So Paulo Limeira - Ribeiro Preto Ribeiro Preto - Uberlndia Ribeiro Preto - So Paulo Uberlndia - Braslia Uberlndia - Limeira Uberlndia - So Paulo Braslia - Ribeiro Preto Braslia - Limeira

Que tipo de informaes adicionais so necessrias para que as cidades mencionadas possam ser colocadas em suas posies relativas? Isto pode ser feito, obviamente sem o conhecimento se So Paulo est situada Norte, Sul, Leste ou Oeste de Braslia. Qual ento a distncia entre So Paulo e Braslia? Esquematize, em uma linha reta imaginria, que corresponderia rodovia BR050, as 5 cidades arroladas na tabela I, com base nas distncias entre elas.

A distncia entre eles [white e yellow] uma unidade, o que significa que h um recombinante em 100 observaes. O loco do mutante eosin apresenta a mesma freqncia de recombinao com yellow. Entre a cor de olho white e a asa miniature a taxa de recombinao 33 %. Eosin apresenta este mesmo valor com miniature. O mesmo acontece com relao ao loco do mutante de olho bar , onde se observa uma taxa de recombinao de 44% tanto para white quanto para eosin. Relaes similares foram obtidas para todos os caracteres do primeiro grupo de ligao. O que se pode concluir a partir destas informaes? Se os dados de recombinao podem ser usados para se determinar a posio relativa dos genes em um determinado cromossomo, as informaes acima indicariam que eosin e white ocupam o mesmo loco. Seria possvel ocorrer tal situao? Pode-se sugerir que eosin e white esto to prximos um do outro, que seria necessria a observao de centenas de milhares de moscas para ser possvel detectar uma permutao entre eles. Para compreendermos melhor esse caso, faamos a seguinte pergunta: qual seria a explicao aceitvel para o aparecimento da proporo mendeliana de 3:1? A resposta do grupo de Morgan foi a seguinte: 1. Se um macho white de Drosophila cruzado com uma fmea selvagem (olhos vermelhos), a proporo fenotpica da F2 de 3 selvagens para 1 white explicada pela lei de Mendel, com base no fato de que o fator que condiciona os olhos vermelhos o alelomorfo do fator que condiciona os olhos brancos. 2. Se um macho eosin cruzado com uma fmea selvagem, a proporo da F2 de 3 selvagens para 1 eosin tambm explicada se o fator que condiciona os olhos vermelhos e o fator que condiciona os olhos brancos forem alelomorfos. 3. Se o mesmo macho white for cruzado com uma fmea eosin, a proporo da F2 de 3 eosin para 1 white mais uma vez explicada considerando-se eosin e white como alelomorfos. Este teste operacional para alelismo indica que a concepo dos alelomorfos no pode ser limitada a dois fatores diferentes que ocupam locos idnticos nos cromossomos homlogos.

DUAS

ESTRUTURAS PODEM OCUPAR O

MESMO LUGAR NO ESPAO

Aqui se encontra um outro fato intrigante para ser pensado. Durante a execuo dos experimentos que permitiram a construo do mapa do cromossomo X, foi identificado o loco do mutante eosin, que quando em homozigose, nas fmeas, produzia olhos de cor alaranjada. Observou-se que, tanto quanto se podia verificar, eosin e white apresentavam uma porcentagem de recombinao idntica em relao aos locos adjacentes. Qual seria a explicao para tal fato?

109

possvel que haja trs, ou mesmo mais fatores diferentes apresentando este tipo de relao entre si. Uma vez que eles ocupam o mesmo loco, eles so mutuamente exclusivos e conseqentemente, no mais do que dois podem ocorrer em um mesmo organismo diplide ao mesmo tempo. A priori razovel se supor que um fator pode mudar em mais de uma forma, e assim produzir mltiplos alelomorfos... Considerando-se a hiptese cromossmica, a explicao desta relao fica aparente. Um fator mutante est localizado num ponto definido de um determinado cromossomo; supe-se que o seu alelomorfo normal ocupe uma posio correspondente (loco) no cromossomo homlogo. Se uma outra mutao ocorrer no mesmo local, o novo fator deve agir como um alelomorfo do primeiro mutante; bem como do alelomorfo normal. medida que os anos foram passando, muitos outros mutantes que eram mapeados no mesmo loco do gene white foram sendo descobertos. No

se tratava mais de um caso isolado. Alelos mltiplos de um mesmo gene constituem um fenmeno gentico comum. Deve ser enfatizado, uma vez mais que, medida que o volume de informaes a respeito de D. melanogaster foi aumentando, novos esclarecimentos sobre os mecanismos da hereditariedade foram sendo efetuados. Foi muito mais lucrativo para aquela produtiva equipe da Sala das Moscas ter concentrado seus esforos em apenas uma espcie, do que se tivesse se dedicado ao estudo da gentica de uma dzia de espcies diferentes. Com a extensa biblioteca de alelos mutantes j disponveis em 1915, podiam ser levantadas diferentes tipos de questes, para as quais havia uma grande probabilidade de se encontrar respostas adequadas. Anos mais tarde, o fato de E. coli ter recebido uma ateno igualmente concentrada fez com que sua biologia se tornasse mais conhecida do que a de qualquer outro organismo vivo.

EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO ONCEITOS FUNDAMENTAIS
Complete as frases de 1 a 5 com as alternativas abaixo: (a) coeficiente de coincidncia (b) interferncia (c) loco gnico (d) mapa cromossmico ou mapa de ligao (e) unidade de mapa (u.m.) 1. A taxa de recombinao entre genes pertencentes a um mesmo grupo de ligao usada para se determinar o posicionamento relativo e linear desses genes no ( ). 2. A posio que um gene ocupa em um cromossomo ou em um segmento de DNA chamada ( ). 3. O fenmeno da ocorrncia de uma permuta diminuir ou aumentar a probabilidade da ocorrncia de outra permuta em uma regio adjacente do cromossomo denominado ( ). 4. Uma ( ) a distncia entre dois genes que apresentam 1% de recombinantes. 5. A razo entre a freqncia observada de duplo recombinantes e a freqncia esperada caso as permutas ocorram ao acaso ao longo do cromossomo denominada ( ).

PARTE B: L IGANDO CONCEITOS

E FATOS

Para responder as questes de 6 a 8 utilize as alternativas abaixo: (a) ocorrncia de permutao dupla (b)localizao linear e em posies definidas dos genes nos cromossomos (c) ocorrncia de recombinao intercromossmica (d)ocorrncia de recombinao intracromossmica 6. O fato de a porcentagem de recombinao entre dois genes quaisquer de um mesmo cromossomo ser constante explicado pela ( ). 7. O fato de a distncia entre dois genes, calculada diretamente, ser menor do que a distncia obtida pela soma de suas distncias em relao a um terceiro gene localizado entre eles explicada pela ( ). 8. Em um de seus experimentos, Bateson e colaboradores cruzaram linhagens de ervilhade-cheiro duplo-homozigticas dominantes quanto a cor da flor e a forma do gro de plen (flor azul e gro de plen longo) com linhagens duplo-homozigticas recessivas (flor vermelha e gro de plen redondo). Os indivduos da gerao F1 foram submetidos a um cruzamentoteste que resultou em 12,6% de descendentes recombinantes, isto , apresentando flor azul e

110

plen redondo ou flor vermelha e plen longo. Estes resultados podem ser explicados pela ( ).

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

9. O cruzamento-teste indispensvel para o mapeamento cromossmico dos genes ligados ao cromossomo X? Por qu? E quanto aos genes autossmicos? 10. Esquematize os cruzamentos realizados por Sturtevant para detectar as permutaes duplas e construa o mapa cromossmico por meio dos dados disponveis no texto. Compare o seu mapa com o da figura 33C (p. 106). Estime o coeficiente de coincidncia e a interferncia. Obs.: Inicie o mapeamento considerando a freqncia de recombinao entre os genes dois a dois, s depois considere as permutas duplas. 11. Por que dois genes que esto muito afastados em um mesmo cromossomo so herdados como se tivessem segregao (disjuno) independente, isto , uma taxa de recombinao de cerca de 50% ?

12. Drosfilas fmeas de uma linhagem heterozigtica para trs genes ligados foram submetidas a cruzamentos-teste e concluiu-se, pelos resultados, que produziram os seguintes gametas: ABc 410 abC 420 AbC 12 aBc 12 Abc 19 aBC 20 ABC 0 abc 1 Calcule a distncia entre os genes e a interferncia. 13. Em Drosophila melanogaster os genes A, B e C esto localizados no cromossomo III, nesta seqncia. A distncia entre eles A - B = 30 u.m. (u.m. = unidades mapa) e B - C = 40 u.m. O coeficiente de coincidncia para esta regio do cromossomo 80%. Qual ser a freqncia de cada uma das classes fenotpicas resultantes do cruzamento de fmeas triplo-heterozigticas a + c / + b + com machos triplo recessivos a b c / a b c ? 14. Assuma que em 6% de todas as meioses em beterraba ocorra uma permutao entre os locos A e B. Qual a distncia de mapa de recombinao separando estes locos?

111

TEORIA CROMOSSMICA DA HERANA: A PROVA DEFINITIVA

Dcima segunda aula (T12)
Objetivos
1. Discutir a hiptese de Bridges para a origem dos machos e fmeas excepcionais em Drosophila. 2. Conceituar no-disjuno cromossmica. 3. Explicar como Bridges testou sua hiptese da nodisjuno cromossmica. 4. Discutir a importncia dos trabalhos de Bridges no estabelecimento da teoria cromossmica da herana. 5. Conceituar ginandromorfismo. 6. Explicar como determinado o sexo em Drosophila melanogaster.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

INTRODUO
Durante as duas ltimas dcadas do sculo XIX, a hiptese de que os fatores responsveis pela herana, independentemente do que fossem, estivessem associados aos cromossomos era apoiada por apenas alguns renomados citologistas. Esta hiptese foi reforada por Sutton em 1903. Na dcada de 1910, as pesquisas realizadas por Morgan, Sturtevant, Bridges e Muller com Drosophila melanogaster indicavam que era muito provvel que os genes fizessem parte dos cromossomos; entretanto, Bateson e muitos outros geneticistas continuavam totalmente incrdulos a respeito desta possibilidade. Calvin Bridges considerado o responsvel pela prova definitiva que consolidou a teoria cromossmica da herana. Atualmente, quando no h mais a menor sombra de dvida a respeito da veracidade da hiptese de Sutton, fica difcil compreender porque, entre 1903 e 1916, havia tanta relutncia dos geneticistas em enxergar a luz. Certamente, a luz est mais ntida hoje do que nas duas primeiras dcadas do sculo XX. Provavelmente,

um fato importante que contribuiu para essa relutncia na aceitao da hiptese foi a extraordinria rapidez com que conceitos e resultados surpreendentes iam sendo obtidos na Sala das Moscas. Naquela poca, o progresso em Biologia era lento e provvel que mesmo os geneticistas mais iluminados tivessem problemas em entender as novas informaes e assimiliar os novos conceitos. Alm disso, havia dificuldade em decifrar tanto a terminologia como a simbologia utilizadas nos artigos que mostravam os cruzamentos efetuados com D. melanogaster. Ainda hoje, quando se examina os artigos publicados pela equipe de drosofilistas entre 1910 e 1920, difcil saber o que realmente foi realizado, a no ser que seja feita uma anlise prvia detalhada. Outra razo para a resistncia gentica de D. melanogaster parece ter sido puramente emocional. Moore comenta que quando esteve na Columbia University na dcada de 1930, a lembrana da equipe liderada por Morgan ainda era marcante (Morgan, Sturtevant e Bridges haviam se transferido para o Cal Tech em 1928). Fiquei sabendo, por intermdio daqueles que haviam trabalhado na Columbia University entre o final

112

da dcada de 1910 e o incio da dcada de 1920, que a equipe de drosofilistas era considerada um tanto irritante por alguns biologistas. Isto pode realmente ter acontecido. Os cientistas que trabalham em reas que progridem rapidamente podem se tornar impacientes em relao queles que realizam uma cincia normal dentro do conceito kuhniano. Na opinio dos zologos da Columbia University que vivenciaram aqueles momentos, as pesquisas realizadas com D. melanogaster foram reconhecidas graas influncia de E. B. Wilson. Wilson, um dos grandes nomes das Cincias Biolgicas daquela poca, era uma pessoa gentil e muito entusiasmada e suas opinies, bastante respeitadas. Eu nunca soube da existncia de qualquer inimigo de E. B. Wilson. De acordo com aqueles zologos, foi o fato de Wilson estar firmemente convencido da veracidade dos trabalhos realizados com D. melanogaster que favoreceu a sua aceitao pela comunidade de bilogos.

ligadas ao sexo) com fmeas homozigticas dominantes para ambas as caractersticas foram obtidos 550 indivduos (machos e fmeas) selvagens e trs machos white-miniature. Veja ao lado o esquema desse cruzamento. (Fig. 35) P

Xm 0

X + X+

gametas

Xm
w

0
+

X+

?
F1

Xm X +

+ X+ 0

X m0
machos excepcionais

descendncia esperada

Figura 35. Esquema de um cruzamento em D. melanogaster no qual apareceram machos excepcionais.

OS EXPERIMENTOS DE CALVIN BRIDGES: 1916

Quando Bridges iniciou seus estudos sobre a herana de genes ligados ao sexo em D. melanogaster, acreditava-se que a determinao cromossmica do sexo nessa espcie fosse do tipo XX/ X0, ou seja, no se sabia ainda da existncia do cromossomo Y. Essa crena se baseava na descrio do caritipo dessa espcie, feita por Stevens (1908), em que as fmeas tinham oito cromossomos e os machos, apenas sete. Bridges procurava uma explicao para a origem dos chamados machos excepcionais, isto , machos que herdavam do pai as caractersticas ligadas ao sexo, e no da me como era de se esperar. Convm lembrar que em seu primeiro trabalho sobre o mutante white Morgan obteve trs desses machos excepcionais. Na ocasio ele imaginou que eles fossem resultado de algum tipo de mutao recorrente, mas com o acmulo de informao sobre o aparecimento de mutantes em drosfila, essa hiptese tornou-se muito improvvel. Bridges descreve essa imperfeio na herana de caracteres ligados ao sexo da seguinte forma: De tempos em tempos, na gerao F1 de um cruzamento envolvendo caracteres ligados ao sexo, obtm-se machos ou fmeas cujo aparecimento inexplicvel pelas hipteses mendelianas. Em um cruzamento de um macho de olhos white e asas miniature (caractersticas recessivas

HIPTESE DA NO-DISJUNO CROMOSSMICA

Bridges concluiu que esses machos excepcionais haviam herdado o cromossomo X do pai, mas, sendo machos, eles s poderiam ter um cromossomo X. Mas a regra no era os machos herdarem seu nico cromossomo X da me? A nica explicao possvel era, ento, que esses machos no haviam herdado cromossomo sexual algum da me. Bridges props ento a hiptese de que, esporadicamente, poderiam ocorrer problemas na meiose feminina que resultariam na formao de vulos sem cromossomo X. Um vulo desse tipo, ao ser fecundado por um espermatozide portador de cromossomo X originaria um ovo X0 que se desenvolveria em um macho. Bridges props o termo no-disjuno cromossmica para essa suposta anormalidade meitica que originava, em mdia, 1/2.000 indivduos excepcionais e a imaginou como descrito a seguir. Normalmente, os dois cromossomos X da fmea se separam (ou disjuntam-se) na primeira diviso da meiose, migrando um para cada clula-filha. Assim, cada vulo recebe no final apenas um exemplar desse par de cromossomos. Raramente, no entanto, os dois cromossomos X no se separam, migrando juntos para uma mesma clula-filha e deixando a outra sem cromossomo sexual. Assim, como resultado dessa anomalia seriam produzidos vulos sem cromos-

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somo X e vulos com dois cromossomos X. Um vulo do primeiro tipo, ao ser fecundado por um espermatozide portador de cromossomo X, originaria m macho excepcional, pois ele herdaria do pai, e no da me como ocorre normalmente, os genes ligados ao sexo. Por outro lado, um vulo portador de dois cromossomos X, ao ser fecundado por um espermatozide sem cromossomo sexual (que, segundo se admitia na poca, era produtor de machos), originaria uma fmea excepcional, pois ela herdaria todos os genes ligados ao sexo diretamente de sua me, ao invs de metade de cada um dos pais. Qual seria ento a explicao para as duas outras possibilidades? (a) um vulo sem cromossomo sexual fecundado por um espermatozide sem cromossomo sexual, e (b) um vulo com dois cromossomos X fecundado por um espermatozide portador de um cromossomo X. Foi ento levantada a hiptese de que tais indivduos deveriam ser inviveis. (Fig. 36)
Gametas & Gametas % Xw X + X+ X+ X+ Xw morre X+ X+ 0 & selvagem 0 Xw 0 % white 00 morre

de linhagens normais. Considerando-se o padro normal de herana dos cromossomos sexuais, tal fato seria impossvel. As fmeas F1 white tambm eram excepcionais, pois no haviam recebido o cromossomo X do pai, uma vez que tal cromossomo transportaria o alelo para olhos vermelhos que, por ser dominante, teria prevalecido. Portanto, estas fmeas deveriam ter recebido dois cromossomos X da me. Havia necessidade de uma explicao semelhante para o aparecimento dos machos selvagens (no-esperados). Uma vez que os dois cromossomos X da me apresentavam o alelo para olhos brancos, o cromossomo X desses machos excepcionais s poderia ter vindo do pai, que apresentava olhos vermelhos. primeira vista, esse caso parece ser o mesmo que aquele dos machos excepcionais espordicos. Uma explicao lgica seria a de que algumas fmeas dessa linhagem herdavam fatores que prdispunham a uma alta taxa de no-disjuno cromossmica. Mas havia uma outra diferena: enquanto os machos excepcionais espordicos eram, em geral, estreis, os machos excepcionais produzidos pelas fmeas dessa linhagem eram frteis. Era necessrio, portanto, uma hiptese que explicasse tambm esse ponto.

DESCOBERTA DO CROMOSSOMO Y DE DROSOPHILA MELANOGASTER

Em 1914, Bridges se viu forado a rever a citologia de D. melanogaster e fez uma descoberta estarrecedora. Os machos dessa espcie no A hiptese de Bridges era bastante interes- eram X0 como descrito originalmente por Stevens sante, mas quase impossvel de ser testada, uma (1908): eles tinham dois cromossomos sexuais, vez que se tratava de um evento bastante raro e isto , alm do cromossomo X havia um cromossomo morfologicamente distinto, em forma de imprevisvel. No entanto, graas intensa atividade de pes- anzol, que foi denominado Y, de acordo com a quisa realizada na Sala das Moscas, um grande regras nomenclaturais vigentes. Que confuso! Aps 4 anos, nos quais as coisas nmero de novos mutantes estava sendo descoberto. Por outro lado, foi obtida uma linhagem pareciam estar indo a todo vapor, deve ter sido muito que apresentava um comportamento bastante chocante a descoberta desses novos fatos, ou seja, inesperado, pois um grande nmero de fmeas a da linhagem com um padro no-usual de herana produzia machos excepcionais em freqncia alta. e a do cromossomo Y. Estaria o paradigma da teoria Por exemplo, do cruzamento de uma fmea white cromossmica da herana incorreto? Bridges, visando a preservao do paradigma, com um macho selvagem seria esperado na gerao F1, apenas fmeas selvagens e machos elaborou uma hiptese realmente bizarra para white. Entretanto, Bridges encontrava um certo explicar os novos fatos. Mas essa hiptese era de nmero de fmeas white e de machos selvagens imenso valor, pois permitia a elaborao de deduna descendncia do cruzamento de fmeas white es claras e, assim, podia ser submetida a testes dessa linhagem especial com machos selvagens rigorosos. 114

Figura 36. Representao esquemtica da hiptese de Bridges para o aparecimento de machos excepcionais.

Bridges props que as fmeas daquela linhagem especial, produtoras de descendncia noesperada, teriam, alm de 2 cromossomos X, tambm 1 cromossomo Y. Na meiose desta fmea hipottica XXY seriam produzidas 4 classes de gameta com relao aos cromossomos sexuais : X, XX, XY e Y (Uma fmea normal produziria apenas uma classe de gameta com relao aos cromossomos sexuais: todos eles contendo apenas 1 cromossomo X). No se podia prever a porcentagem relativa de cada um dos gametas

possveis, mas os resultados experimentais sugeriam que 46% eram X, 46% eram XY, 4% eram XX e 4% eram Y. Estas moscas, supostamente XXY, foram denominadas fmeas provenientes de uma no-disjuno. Deve ter sido necessria muita coragem para postular esta hiptese aparentemente absurda, que implicava ainda em ser admitido que os genes fizessem parte dos cromossomos. Um dos cruzamentos cruciais realizados por Bridges est representado na figura 37.

red

white
Gametas

F1

X Y (46%)
1 2
red
No-disjuncional

X (46%)
red
Normal

XX (4%)
3 4
red
Em geral morre

X XY (23%)

XX (23%) X XX (2%)

(50%)

X YY(23%)
white
Extra Y

XY (23%) XXY (2%)

white
Normal

(50%)

No-disjuncional e excepcional

Figura 37. Experimento de Bridges com fmeas provenientes de no-disjuno cromossmica.

Teste da hiptese de Bridges

fentipos mas, se usadas em experimentos Um fato de importncia primordial na hiptese genticos adicionais, metade deveria ser norde Bridges consistia na possibilidade dela ser tesmal (classe 2) e metade provenientes de notada. A seguir so comentadas as principais dedudisjuno (classe 1). Bridges realizou os cruzaes da hiptese de Bridges. mentos e confirmou as previses. 1. Se a hiptese fosse verdadeira, seria esperado que 50% das fmeas da linhagem fossem 2. Se a hiptese fosse verdadeira, seria esperado que os machos excepcionais (classe 4), isto , provenientes de no-disjuno (classes 1 e 7 aqueles que herdassem seu cromossomo X do da figura 37; as porcentagens especificadas na pai no tivessem capacidade de produzir figura so relativas ao total de moscas, de tal descendentes excepcionais nas geraes forma que, quando apenas as fmeas esto seguintes; eles deveriam se comportar como sendo consideradas, os valores devem ser machos normais. Eles foram testados a esta duplicados). Todas as fmeas de olhos brancos previso se confirmou. (classe 7) deveriam ser provenientes de no3. Se a hiptese fosse verdadeira, seria esperado disjuno. A grande maioria das fmeas deveque 46% dos machos fossem XYY. Esses ria ter olhos vermelhos (classes 1 e 2). Estas machos deveriam produzir 4 tipos de no poderiam ser diferenciadas pelo seus 115

Gametas

Y (4%) XY (2%)
red
Excepcional

YY (2%)
invivel

white

mente, na poca em que foram realizados, era que os alelos white e red faziam parte do cromossomo X na linhagem de D. melanogaster utilizada nos experimentos. Por que, ento, estes experimentos foram considerados a prova definitiva de que os genes so parte integrante dos cromossomo? Isso implicava dizer que esta afirmao tambm deveria ser verdadeira para todos os genes de todas as espcies em todos os tempos. A concluso de Bridges reproduzida acima seria tudo o que poderia ser dito se este fosse o primeiro experimento gentico realizado com qualquer organismo. Porm, ele no foi o primeiro. Nos 16 primeiros anos do sculo XX, foi acumulada uma enorme quantidade de informao gentica. Muitas espcies de animais e plantas mostraram um padro de herana que parecia ser baseado em regras simples. De fato, apesar das grandes diferenas estruturais e fisiolgicas entre as diversas espcies, os seus sistemas genticos eram fundamentalmente os mesmos. Bridges estava solidificando a Teoria da Gentica isto , dando sustentao a todo o conjunto de resultados, hipteses e concluses sobre hereditariedade. Ele no estava desafiando nenhum paradigma bem estabelecido. Ao contrrio, por meio de excelentes provas, ele estava apenas fornecendo sustentao para aquele paradigma. X Y Deste modo, foi razovel expandir a X concluso, baseada nos experimentos de noX X disjuno, a outros genes da D. melanogaster e A B a outras espcies, e concluir que todos os genes Figura 38. Desenhos de Bridges dos cromossomos de fazem parte dos cromossomos. fmeas resultantes de um cruzamento como o mostrado A prova decisiva de Bridges, de que os genes na figura 37. Aproximadamente metade das fmeas de so partes integrantes dos cromossomos, publiolhos vermelhos analisadas tinha um conjunto normal cada em 1916 em um artigo que se inicia na de cromossomos como o mostrado em A. A outra primeira pgina do primeiro volume da recmmetade apresentava trs cromossomos sexuais, dois X criada revista Genetics, foi o apogeu de uma srie e um Y, como mos-trado em B. de investigaes realizadas na Columbia UniEssas dedues eram necessrias e os testes versity e iniciadas por Sutton em um laboratrio realizados foram excelentes e conclusivos. O localizado no mesmo piso no Schermerhorn Hall. jovem Bridges concluiu: No deve haver dvida Sutton havia chamado a ateno para o fato de de que o paralelismo entre o comportamento sin- que o paralelismo observado entre o comportagular dos cromossomos e aquele dos genes liga- mento dos cromossomos na meiose e o comportados ao sexo, neste caso, significa que os genes mento dos fatores mendelianos na formao dos ligados ao sexo esto localizados e so trans- gametas era um forte indicativo de que os fatores estavam, muito provavelmente, associados aos portados pelo cromossomo X. Trata-se de uma afirmao ousada, porm cromossomos. Wilson havia corrigido a interpreapropriada ao que foi estabelecido. A nica coisa tao errada dada originalmente por McClung que os experimentos mostravam inquestionavel- para os cromossomos sexuais e continuou suas espermatozide: X, YY, XY e Y. Caso esse macho fosse cruzado com uma fmea normal no deveria ser produzida descendncia excepcional alguma. Contudo, cada espermatozide XY que fertilizasse um vulo normal (com apenas um cromossomo X) produziria uma fmea XXY. Esse tipo de fmea poderia ser reconhecido pela sua descendncia, pois ela seria no-disjuncional. Isto foi testado e as previses foram confirmadas. Este ltimo pargrafo no d a mnima idia da enorme quantidade de trabalho necessria realizao deste e de outros testes. 4. Se a hiptese fosse verdadeira, seria esperado que 50% das fmeas (classes 1 e 7) fossem XXY. Esta deduo foi testada por meio da preparao de lminas dos cromossomos de muitas fmeas. A figura 38 mostra o resultado desta anlise. Aproximadamente metade das fmeas (Fig. 38A) apresentava um conjunto cromossmico normal, com 2 cromossomos X. A outra metade (Fig.38B) tinha autossomos normais, porm apresentava 2 cromossomos X e 1 cromossomo Y. 116

investigaes, presentes em seu clssico Studies of Chromosomes. Periodicamente, ele publicava cautelosas atualizaes sobre os avanos do conhecimento no campo da hereditariedade. Morgan, que estava mais interessado em Evoluo do que em hereditariedade, comeou a criar D. melanogaster a fim de tentar encontrar mutaes, como as que De Vries havia descrito em Oenothera, e que causavam enormes efeitos fenotpicos. Ele no conseguiu detectar esse tipo de mutao, porm, aps vrios meses, ele encontrou um macho de olhos brancos. Dois estudantes de graduao da Columbia University, Sturtevant e Bridges, comearam a trabalhar no laboratrio de Morgan e, pouco tempo depois, um terceiro, Muller, se juntou equipe. Esses quatro indivduos selariam o destino da Gentica Clssica. Pode-se apenas especular sobre qual teria sido a histria da Gentica se aqueles talentosos indivduos no estivessem juntos no mesmo local e na mesma poca, e se aps 1909, todos eles, com exceo de Wilson (que trabalhava com citologia, que por sua vez foi essencial para as concluses genticas), no estivessem pesquisando aquela mesma minscula espcie de mosca. Agora, vamos comentar outra lenda da Columbia University, que se relaciona com a visita de Bateson sala das moscas em 1921. Conta-se que Bridges passou dias mostrando e comentando com ele as preparaes cromossmicas de seus experimentos sobre no-disjuno. Bateson, que praticamente nada conhecia de Citologia, ia de microscpio a microscpio, deixando cair cinzas de seu cachimbo por todo lado. Eventualmente ele afirmava que estava convencido de que os genes faziam parte dos cromossomos. Entretanto, dali Bateson seguiu para o Congresso da American Association for the Advancement of Science em Toronto e, sem cerimnia, negou que aceitasse a Teoria Cromossmica da Hereditariedade. G. E. Allen (1978, p. 275-276) tem uma verso mais completa e provavelmente mais acurada sobre a visita de Bateson Columbia University. Na verdade, Bateson (1922) foi mais generoso na sua conferncia em Toronto do que afirmam alguns crticos, ele disse: Viramos mais uma curva do nosso caminho e, atrs dos gametas, observamos os cromossomos. As dvidas em relao tese principal dos pesquisadores de drosfilas - de algum que nunca havia admirado as maravilhas da citologia, exceto de forma obs-

cura e que eu espero sejam perdoadas - no podem ser mantidas por mais tempo. Os argumentos de Morgan e seus colaboradores e especialmente a demonstrao de Bridges, devem afastar todo ceticismo quanto associao entre os cromossomos especficos e certas caractersticas do zigoto. As caractersticas transmissveis que os gametas possuem, foram de uma maneira bem sucedida relacionadas s estruturas visveis da configurao nuclear. Os fundamentos da variao e hereditariedade que at os ltimos tempos pareciam curiosidades paradoxais, se dirigiram, passo a passo, at esta notvel descoberta. Eu venho, nesta poca de Natal, prestar a minha respeitosa homenagem s estrelas que surgiram no oeste. Bateson, que era britnico (leste), se referia Morgan e seus colaboradores que, eram americanos (oeste).

O MACHO - MAIS OU

MENOS?

Estes experimentos com D. melanogaster, e outros com muitas outras espcies mostraram que o sexo de um indivduo determinado pelos tipos de cromossomos sexuais que ele recebe quando o vulo e o espermatozide se combinam na fertilizao (sabe-se atualmente que isto no verdadeiro para todas as espcies). Uma explicao satisfatria sobre determinao do sexo fcil quando, como em D. melanogaster e no Homo sapiens, o zigoto contm XX ou XY. No entanto, uma pergunta que se pode fazer se uma fmea fmea porque tem 2 cromossomos X ou porque no tem Y? Um macho macho porque tem 1 cromossomo Y ou porque tem apenas um X? Ou seria o sexo conseqncia de fenmenos mais complexos? Aps tomar conhecimento dos experimentos de Bridges com fmeas XXY, pode-se concluir que D. melanogaster seria um bom material para fornecer respostas a essas perguntas. Duas dicas j apresentadas podem fornecer uma pista. A primeira que em algumas espcies os machos so X0, isto , eles tm apenas um cromossomo sexual. O segundo dado que, geneticamente, o cromossomo Y quase que completamente inerte. Assim, pode-se argumentar que durante a evoluo, o cromossomo Y foi se tornando progressivamente menos importante e, finalmente, em algumas espcies ele foi totalmente eliminado.

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Portanto, a hiptese de que machos so machos porque eles apresentam apenas um cromossomo X e fmeas so fmeas porque elas tm 2 desses cromossomos apresenta algum embasamento. Esta hiptese foi reforada pelo aparecimento de algumas moscas raras nas linhagens mantidas na sala das moscas, que apresentavam em um dos lados do corpo caractersticas femininas e no outro, masculinas. Indivduos semelhantes, denominados ginandromorfos, j tinham sido observados em outras espcies. Nenhuma anlise detalhada havia sido feita at ento, e a causa fundamental permanecia desconhecida. Machos e fmeas de D. melanogaster diferem externamente por diversas caractersticas. Os machos apresentam os pentes sexuais, que so grupos de setas modificadas no primeiro tarsmero das pernas anteriores, e a metade distal de seu abdmen preta, enquanto que nas fmeas, a metade distal listrada. A terminlia dos dois sexos difere consideravelmente. Por outro lado, os machos (asas inclusive) so geralmente menores do que as fmeas. Estudos citolgicos indicavam que esses ginadromorfos se iniciavam como fmeas normais XX, e por algum acidente citolgico bem no incio do desenvolvimento, um dos cromossomos X se perdia de uma das clulas em uma determinada parte do embrio. As clulas descendentes desta teriam apenas 1 cromossomo X e assim, teriam um gentipo masculino. Como conseqncia, alguns indivduos resultantes deste acidente citolgico se desenvolviam em adultos que eram machos de um lado do corpo e fmea do lado oposto. A metade masculina apresentava pentes sexuais e a metade distal do abdmen preta. A diferena sexual no tamanho do corpo resultava em uma mosca com o corpo curvado (o lado feminino, maior que o masculino, encurvava consideravelmente o corpo, resultando em um lado masculino cncavo). A terminlia era tipicamente masculina no lado cncavo e anormal ou feminina no lado oposto. Dependendo da poca do desenvolvimento na qual um dos cromossomos X era eliminado e da regio do corpo onde o evento ocorria, diferentes tipos morfolgicos de ginandromorfos foram encontrados. Nem todos eram obviamente bilaterais. Os mais interessantes eram aqueles que apresentavam marcadores genticos, por exemplo, nos quais os 2 cromossomos X eram portadores de alelos diferentes. Uma classe espetacular de

ginandromorfos bilaterais era formada por aqueles com o alelo para olhos vermelhos em um dos cromossomos X e o alelo para olhos brancos no seu homlogo. O resultado podia ser um indivduo com um olho vermelho em um dos lados e um olho branco no lado oposto. (Fig. 39)

Figura 39. Desenho de um ginandromorfo de D. melanogaster. A metade esquerda do corpo, predominantemente masculina, expressa as mutaes recessivas condicionantes de olho branco e asa miniatura, ambas ligadas ao cromossomo X. A metade direita do corpo feminina e apresenta fentipo selvagem (extrado de King, 1975)

A hiptese de que o sexo de um indivduo pertencente espcie D. melanogaster dependeria do nmero de cromossomos X presente em suas clulas, se tornou muito mais provvel depois da descoberta dos ginandromorfos. Por intermdio de um acidente de desenvolvimento, um importante teste de deduo tornou-se possvel. Os artigos subseqentes de Bridges sobre a no-disjuno (1921, 1939) mostraram que eventos acidentais podiam produzir variaes cromossmicas ainda mais notveis. Como conseqncia, tornou-se possvel testar de novas maneiras, a relao entre o nmero de cromossomos X e o sexo do indivduo. Como pode ser verificado, as moscas XXY analisadas por Bridges (Fig. 36) eram fmeas estruturalmente normais e frteis. Elas estavam entre os primeiros de muitos indivduos descobertos na sala das moscas que apresentavam

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cromossomos anormais. Aps anlises detalhadas, Bridges gradualmente comeou a acreditar que o sexo no era determinado apenas pelo nmero de cromossomos X (seus dados sugeriam pouca participao do cromossomo Y), mas por alguma relao entre o nmero de cromossomos X e o de autossomos. Uma verso simplificada de sua hiptese apresentada a seguir. Lembre-se que uma fmea de D. melanogaster tem 3 pares de autossomos e 2 cromossomos X (Fig. 38a). O termo conjunto de autossomos, representado pela letra A ser utilizado para se referir a um conjunto haplide de autossomos, isto , um grupo formado por um representante de cada um dos pares de autossomos homlogos. Portanto, uma fmea normal ter dois conjuntos de autossomos e um par de cromossomos X. A razo entre o nmero de cromossomos X e o nmero de conjuntos de autossomos ser 2X/2A = 1,0 para as fmeas e 1X/2A = 0,5 para os machos. Uma das fmeas descobertas pelos drosofilistas era triplide, isto , apresentava 3 cromossomos de cada tipo. Qual seria o efeito de um

cromossomo X extra? Uma superfmea? Nada disso. Ela era uma fmea frtil e, de acordo com o esquema discutido acima, ela teria a seguinte razo entre os cromossomos 3X/3A = 1,0. Assim, tudo indicava que como regra geral, a razo 1,0 determinava o sexo feminino e a razo 0,5, o sexo masculino. Entretanto, seriam possveis outras combinaes? O aparecimento daquela fmea triplide frtil, criou a possibilidade de se obter, por meio de seu cruzamento com um macho diplide, moscas com diferentes combinaes cromossmicas. Se frteis, vrias destas novas combinaes poderiam, por sua vez, ser utilizadas com o objetivo de produzir perturbaes adicionais no sistema cromossmico. Algumas destas combinaes so mostradas na figura 40. Sempre que o nmero de cromossomos X for igual ao nmero de lotes de autossomos, a razo entre eles ser igual a 1,0, e o indivduo produzido ser fmea. Se o indivduo tiver 2 cromossomos X mas 4 conjuntos de autossomos a razo ser igual a 0,5 e ele ser macho. Deste modo, uma mosca XX somente

Figura 40. As vrias combinaes de cromossomos X e nmero de conjuntos de autossomos obtidas por Bridges e por outros drosofilistas. O crculo inferior com razo 1 uma fmea haplide. Bridges no observou tal indivduo mas algumas fmeas diplides tinham reas haplides no corpo (eram mosaicos celulares) e quando essas reas incluiam estruturas sexuais elas eram femininas.

Fmea

Fmea

Macho

Intersexo

Fmea

Macho anormal 0 Razo X A

Macho 0,50

Intersexo

(Fmea) 1,00

Fmea anormal

Fmea anormal 1,50

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ser uma fmea se ela tiver apenas 2 conjuntos de autossomos. Mas o que acontece quando a razo entre os cromossomos resulta em um valor intermedirio entre 0,5 e 1,0? Por incrvel que parea, esta pergunta pde ser feita e respondida. Constatouse que estes indivduos apresentavam caractersticas sexuais intermedirias, e por esta razo foram chamados intersexuados. Tambm foi possvel aumentar a razo para valores maiores que 1,0, quando o nmero de cromossomos X era maior que o nmero de conjuntos de autossomos. Estes indivduos, denominados superfmeas (hoje denominados metafmeas), tendem a apresentar as caractersticas femininas exageradas. Outras combinaes alm das mostradas na figura 40 puderam ser obtidas, de tal forma que um padro consistente pde ser identificado por Bridges. O sexo em D. melanogaster o resultado da interao entre genes localizados tanto nos cromossomos X como nos autossomos, e

no apenas determinado por genes dos cromossomos sexuais. Os genes autossmicos relacionados com a determinao do sexo apresentam uma tendncia lquida masculinizante, enquanto que aqueles localizados nos cromossomos X apresentam uma tendncia lqida feminizante. Em um macho normal, os genes masculinizantes dos dois conjuntos autossmicos prevalecem sobre os feminizantes do nico X. Em uma fmea normal, a dose dupla dos genes feminizantes proporcionada pela presena de 2 cromossomos X prevalece sobre os genes masculinizantes autossmicos. O cromossomo Y est ligado fertilidade. Nele se localizam genes que atuam na diferenciao dos espermatozides. Um macho X0 estril pelo fato de no produzir espermatozides. Aparentemente, tanto os genes como os cromossomos de D. melanogaster poderiam ser modificados com o objetivo de responder s mais complexas perguntas.

EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO CONCEITOS FUNDAMENTAIS
Preencha os espaos em branco nas frases numeradas de 1 a 9 usando o termo mais apropriado dentre os arrolados abaixo: (a ) caritipo (b ) conjunto de autossomos (c ) ginandromorfo (d ) ligao ao sexo (e ) mutao cromossmica (f ) no-disjuno cromossmica (g ) razo X:A (h ) triplide (i ) 46,XY (j ) 46,XX 1. Um indivduo que um mosaico de estruturas femininas e masculinas chamado ( ). seu complemento cromossmico total observado durante a metfase mittica. 5. O processo pelo qual produzido um conjunto cromossmico diferente do tipo selvagem denominado ( ). 6. A clula ou o indivduo que possui trs conjuntos cromossmicos denominado(a) ( ). 7. Um ( ) que em Drosophila melanogaster representado por A um grupo formado por um membro de cada um dos pares de cromossomos homlogos. 8. Em Drosophila melanogaster, a ( ) denominada ndice sexual, que quando igual a 1 produz fmea e se igual a 0,5 produz macho.

9. Na espcie humana, o caritipo de um indiv2. Na meiose, a ( ) significa uma falha na segre- duo do sexo masculino possui 44 autossomos, gao dos cromossomos homlogos empare- um cromossomo X e um cromossomo Y, sendo lhados, que faz com que ambos se dirijam para representado por ( ). Indivduos do sexo femium mesmo plo da clula. Na mitose, esta falha nino, so representados por ( ) e possuem 44 est relacionada segregao das cromtides autossomos e dois cromossomos X. irms. 3. A ( ) relaciona-se aos genes localizados PARTE B: L IGANDO CONCEITOS E FATOS naqueles cromossomos sexuais que formam Utilize as alternativas abaixo para responder as pares perfeitos em um dos sexos. questes de 10 a 13. 4. O ( ) de um indivduo ou clula representa o a) no-disjuno cromossmica durante o

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desenvolvimento de um embrio XX no estgio de duas ou mais clulas b) no-disjuno cromossmica na meiose II materna c) no-disjuno cromossmica na meiose paterna d) no-disjuno cromossmica na primeira diviso mittica do zigoto XX 10. Uma mulher com sndrome de Turner (45,X0) tambm afetada por uma anomalia recessiva ligada ao cromossomo X. Tanto sua me quanto seu pai apresentam fentipo normal. Pode-se explicar o nascimento da mulher com sndrome de Turner e com a anomalia recessiva ligada ao X pela ocorrncia de ( ). 11. Na questo anterior, se o indivduo afetado pela anomalia recessiva ligada ao X fosse um homem com sndrome de Klinefelter (47,XXY), o fato poderia ser explicado por ( ). 12. Vrios casos de mosaicismo relacionados aos cromossomos sexuais vem sendo descritos na espcie humana. Que explicao voc daria para o surgimento de um indivduo que possusse em seu corpo clulas do tipo XO e XXX. ( ) 13. E se o indivduo apresentasse em seu corpo clulas do tipo XO, XX e XXX. ( ) Utilize as alternativas abaixo para responder as questes de 14 a 16. a) gametas cromossomicamente balanceados b) poliploidia c) irregularidades na meiose 14. O limo Taiti, as diversas variedades comercializadas de banana, bem como algumas de mas, peras e melancias, que no possuem sementes, so exemplos de plantas triplides. A maioria dos cultivares de bananeiras que so utilizados com fins comerciais triplide (3x = 33) com 11 cromossomos em cada conjunto bsico (AAB), originado pelo cruzamento de duas espcies com 2n=22, Musa acuminata Colla e Musa balbisiana Colla. Nesse caso, a probabilidade de ocorrer uma meiose na qual todos os univalentes migrem para o mesmo plo igual a (1/2)10, ou seja, 1/1024 dos gametas, por exemplo femininos, sero haplides e viveis. Portanto, a fertilidade muito pouco provvel, pois deve ser considerada ainda a probabilidade de se obter um gameta masculino tambm cromossomicamente balanceado. As bananas so estreis como a maioria dos organismos poliplides que apresentam um nmero mpar de conjuntos cromossmicos, e sua

propagao se d de modo vegetativo. A esterilidade destes organismos pode ser explicada pela ocorrncia de ( ). 15. Em espcies com reproduo sexuada, indivduos haplides so geralmente inviveis ou estreis. Isto se deve ao fato de que, durante a meiose de uma clula haplide, os cromossomos segregam ao acaso. Assim, a probabilidade de todos os cromossomos se dirigirem para qualquer um dos plos da clula de (1/ 2)x-1, onde x o nmero de cromossomos (x = nmero bsico, ou seja, menor nmero haplide de uma srie poliplide). Entretanto, ao contrrio do exposto acima, os machos de abelhas, vespas e formigas so haplides e frteis. Isto ocorre porque eles sofrem um tipo de meiose modificada (a segregao dos cromossomos no ocorre ao acaso) onde h sempre a formao de ( ). (Veja figura a seguir)

PRIMEIRA DIVISO DA MEIOSE

SEGUNDA DIVISO DA MEIOSE

Diagrama da meiose em macho de Apis mellifera. A. Clula reprodutiva do macho (represen-tada com somente trs de seus 16 cromossomos). B. Anfase I. C. Telfase I que termina com a expulso do broto citoplasmtico sem cromossomos. D. Met-fase II j com a disperso da membrana nuclear. E. Anfase II, separao dos cromossomos. F. Telfase II que termina com a formao de duas clulas com igual nmero de cromossomos, mas de tamanhos diferentes. A clula grande dar origem ao espermato-zide funcional e a pequena abortada. [Modificado de Camargo, J.M.F. & Stort, A.C. A abelha (Apis mellifera Linn.) So Paulo: EDART, 1967.] 16. A colchicina uma droga (alcalide), extrada principalmente das sementes e do cormo de uma planta da famlia Liliaceae denominada clquico (Colchicum autumnale), que tem a pro-

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priedade de inibir a formao do fuso durante a diviso celular. A colquicina se liga s protenas (tubulinas), que formam as fibras do fuso, impedindo a sua polimerizao, de modo que os microtbulos no se formam. Os cromossomos das clulas tratadas se duplicam corretamente mas, como a formao do fuso inibida, as cromtides-irms no se separam. O ncleo se reconstitui e passa a apresentar nmero cromossmico duplicado. Plantas diplides foram submetidas ao da colquicina e algumas delas passaram a produzir sementes que originavam indivduos muito maiores do que os das linhagens originais. O aumento no tamanho desses indivduos deve estar relacionado ( ), induzida pela ao da colquicina.

caule e das folhas. Quando se coloca colchicina no meio em que estas extremidades esto crescendo, pode haver uma interferncia na diviso celular que resulta no surgimento de clulas com o nmero de cromossomos duplicado. Caso a colchicina afete a mitose de uma clula da camada intermediria, possvel que haja a formao de gametas com o nmero de cromossomos duplicado. Considere uma planta diplide. A partir destas informaes, como voc sintetizaria um indivduo triplide com gentipo Aaa? 24. Em 1928, G. Karpechenko produziu um hbrido a partir do cruzamento entre dois vegetais da mesma famlia (Brassicaceae), porm pertencentes a gneros diferentes, o rabanete, Raphanus sativus, e o repolho, Brassica oleracea capitata. Karpechenko pretendia obter um hbrido frtil que possusse a raiz do rabanete e as folhas do repolho. Ambos, rabanete e repolho possuem 9 pares de cromossomos. O hbrido obtido possua 18 cromossomos e era, pelo menos a princpio, estril. Contudo, um dia, algumas sementes deste hbrido passaram a produzir indivduos frteis com 36 cromossomos. O hbrido frtil cruzado com qualquer das duas espcies parentais produzia descendncia estril. Assim, Karpechenko props o nome Raphanobrassica para este hbrido. Infelizmente, Raphanobrassica tem a folhagem do rabanete e a raiz do repolho. Proponha uma hiptese para explicar a esterilidade inicial do hbrido e sua posterior fertilidade. 25. Utilizando-se dos exerccios acima, exemplifique os seguintes conceitos: a. Euplides - clulas ou indivduos que possuam qualquer mltiplo de um conjunto completo (nmero bsico = x) de cromossomos. b. Aneuplide - clulas ou indivduos que possuam um nmero cromossmico que difira do nmero normal de cromossomos da espcie por um ou mais cromossomo, porm no por todo conjunto deles. c. Poliplide - clulas ou indivduos euplides que possuam mais de dois conjuntos cromossmicos (nmero bsico = x) completos. c1. autopoliplide - poliplide composto por mltiplos conjuntos cromossmicos de uma mesma espcie. c2. alopoliplide - poliplide composto por conjuntos cromossmicos de diferentes espcie. 26. Considerando as informaes do exerccio 14, calcule a probabilidade de que seja produzida uma semente vivel em bananeiras triplides.

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

17. Por que os machos white-miniature obtidos por Bridges foram considerados excepcionais? 18. Por que a descoberta do cromossomo Y em D. melanogaster complicou a hiptese inicial de Bridges para explicar o aparecimento de machos e fmeas excepcionais? 19. Considerando que os machos de D. melanogaster so XY, qual foi a hiptese de Bridges para explicar os cruzamentos que produziam alta freqncia de machos e fmeas excepcionais? 20. Por que os experimentos de Bridges foram considerados a prova definitiva e ampla da teoria cromossmica da herana e no apenas para drosfilas? 21. Que tipo de descendncia seria esperada no cruzamento de um macho white com uma fmea scute XXY, proveniente de uma no-disjuno, considerando que estes dois genes apresentam herana do tipo ligada ao sexo recessiva? 22. De acordo com a teoria de Bridges para a determinao do sexo em Drosophila melanogaster, qual o sexo esperado nos indivduos com os seguintes arranjos cromossmicos, onde A = nmero de conjuntos de autossomos e X = nmero de cromossomos X: a) 4X4A b) 3X4A c)2X3A d)1X3A e)1X2A

23. Em algumas plantas, as reas em crescimento na extremidade do caule e nos brotos laterais tm trs camadas de clulas distintas. A camada externa se torna a epiderme, a camada mdia d origem s clulas reprodutivas e a camada interna produz as partes internas do

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M UTAES G N ICAS E M UTAES C ROMOSSMICAS

Dcima terceira aula (T13)
Objetivos
1. Distinguir mutao espontnea de mutao induzida. 2. Conceituar gene letal. 3. Explicar como Morgan identificou mutaes letais ligadas ao sexo em Drosophila. 4. Conceituar sistema balanceado de genes letais. 5. Definir inverso cromossmica. 6. Explicar como inverses em estado heterozigtico suprimem recombinao gnica. 7. Descrever as caractersticas do sistema ClB de Drosophila melanogaster. 8. Explicar a deteco de mutaes letais ligadas ao sexo em Drosophila por meio do sistema ClB. 9. Conceituar mutao hometica.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

DESCOBERTA DAS MUTAES

Os relatos de De Vries (1901-1903, 19091910) sobre o aparecimento freqente de mutantes na planta Oenothera glazioviana (Onagraceae), abundante nas dunas da Holanda, estimularam muitos geneticistas e evolucionistas a procurar novos mutantes em outros organismos (veremos a seguir que os mutantesde De Vries no eram mutaes verdadeiras, definidas por ele como uma mudana hereditria em um dos alelos de um gene). Era isto que Morgan tinha em mente quando iniciou suas culturas de D. melanogaster. Em espcies de Drosophila, assim como em qualquer outro organismo, o aparecimento de novos mutantes um evento extremamente raro. Drosfilas com olhos brancos ou asas vestigiais s foram encontradas aps a anlise minuciosa de milhares de indivduos. Em 1914, Morgan escreveu: Na realidade, nossa experincia com Drosophila nos d a impresso que as mutaes so eventos raros, embora o nmero de mutaes obtidas por ns at o momento tenha sido muito grande. Existem duas razes principais para a raridade das mutaes. Uma delas a baixa freqncia

com que um determinado gene sofre mutao; a outra a recessividade da maioria dos alelos mutantes. Como conseqncia dessa ltima situao, a quase totalidade dos alelos mutantes encontra-se no estado heterozigtico, mascarados pelo alelo dominante selvagem. Imagine uma populao de 1.000 moscas, em que haja apenas um alelo recessivo presente em um indivduo heterozigtico, como seria possvel detect-lo? Durante as primeiras dcadas do sculo XX, os organismos foram submetidos a diversos tratamentos visando o aumento da taxa de mutao. Na esperana de obter novos mutantes, Morgan injetou vrias substncias qumicas em diferentes espcies de insetos. Posteriormente, ele exps drosfilas radiao, idia que deve ter vindo de seu colega da Columbia University, James Howard McGregor, que foi um dos primeiros a testar o efeito da radiao por rdio em organismos vivos (ele usou gametas e embries de rs). O fato de algumas das linhagens de D. melanogaster de Morgan terem sido submetidas radiao traz a remota possibilidade de que alguns dos primeiros mutantes descobertos possam ter sido induzidos por ela. Contudo, Morgan (1914a) no acreditava nesta hiptese e experimentos subse-

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qentes usando o elemento qumico rdio e raios X pareciam no produzir mutaes. Foram os trabalhos de Muller que, posteriormente, demonstraram a capacidade mutagnica dos raios X. Morgan (1914b) tambm levantou a possibilidade da eterizao das moscas causar mutaes, mas no pde demonstrar se isso realmente ocorria. E. B. Lewis (comunicao pessoal) acredita que seja pouco provvel que os mutantes encontrados na Sala das Moscas tenham sido induzidos por radiao. Uma das razes para isto que as dosagens de radiao usadas por Morgan eram muito baixas. Lewis suspeita que a causa da taxa elevada de mutaes tenha sido a disgenesia do hbrido1 decorrente de numerosos cruzamentos entre diferentes linhagens de D. melanogaster coletadas no campo. Se essa hiptese for verdadeira, significa que o advento da gentica de Drosophila foi um evento pouco provvel. Se Morgan tivesse usado somente uma linhagem, quer de Lutz, Castle, Payne ou que ele prprio tivesse coletado, a disgenesia do hbrido no teria ocorrido e o fervilhar de mutantes no teria sido observado. Logo aps o primeiro macho de olho branco ter sido descoberto, outros alelos mutantes apareceram. Em poucos anos o nmero chegou a 85. Isto se deveu, em grande parte, extraordinria habilidade de Calvin Bridges para detectar variaes entre indivduos com anomalias e o tipo selvagem. Na verdade, todos na Sala das Moscas tinham uma grande habilidade em descobrir novos alelos mutantes. Mesmo Sturtevant, apesar de daltnico, detectou muitos desses alelos. Um nmero enorme de moscas foi analisado e foi, muito provavelmente, a dedicao, o enfoque e a disciplina desses pesquisadores da Sala das Moscas, a maior razo para que tanto tenha sido descoberto em to pouco tempo. Convm lembrar que as mutaes somticas no so hereditrias e apenas aquelas que ocorrem na linhagem germinal que podem ser transmitidas s geraes subseqentes. Portanto, as mutaes somticas so aquelas que ocorrem em qualquer clula que no aquelas que iro originar gametas.

MUTAES INDUZIDAS

A natureza e as causas do processo de mutao despertaram o interesse no s dos geneticistas mas tambm dos evolucionistas. Seriam as mudanas herdveis estudadas na Sala das Moscas a base da variabilidade necessria evoluo darwiniana? A princpio, ningum imaginava que as mudanas genticas pudessem ser de tamanha magnitude a ponto de serem reveladas por meio de investigaes citolgicas dos cromossomos. Mas, se a natureza fsica da mudana parecia no poder ser detectada, possivelmente, o processo da mutao em si pudesse ser estudado. Isto se tornaria plausvel se as mutaes pudessem ser produzidas experimentalmente. As evidncias genticas indicavam que mutao era um fenmeno raro. Muller, por exemplo, estimou que em D. melanogaster qualquer gene particular teria uma taxa de mutao da ordem de 1x10-6; ou seja, em uma amostra de 1 milho de gametas seria esperado um portador de uma mutao nova em um gene particular. Foi verificado tambm que: a taxa de mutao variava para diferentes genes; a mutao podia ocorrer em qualquer etapa da vida do organismo; a maioria dos alelos mutantes era recessiva; mutaes com efeitos letais ocorriam com muito mais freqncia do que mutaes com efeitos visveis; um mesmo gene podia sofrer mais de um tipo de mutao, originando sries de alelos mltiplos que afetavam um mesmo carter em graus variados; podiam ocorrer mutaes reversas, ou seja, um alelo mutante mutar novamente restabelecendo a condio selvagem. A ocorrncia de mutao reversa mostrou de forma clara e definitiva que a mutao era uma alterao no gene e no uma simples perda do gene. Com isso foi sepultada a chamada hiptese da presena ou ausncia, proposta no incio do sculo para explicar as relaes entre os estados de carter mendelianos. Segundo essa hiptese, um dos estados do carter seria condicionado por um determinado fator e o outro, pela ausncia do fator. 1 Inicialmente, nenhum dos experimentos para Disgenesia do hbrido um fenmeno que ocorre quando fmeas de Drosophila melanogaster de linhagens de labora- induzir modificaes genticas foi conclusivo, trio so cruzadas com machos provenientes de certas popu- uma vez que no se distinguiam as mutaes indulaes naturais. A prognie apresenta uma srie de defeitos, incluindo esterilidade, devido segregao distorcida na zidas das espontneas e o planejamento dos expemeiose (desvio meitico), mutao e quebras cromossmicas. rimentos era inadequado. As mutaes que apare124

ciam em estoques no expostos aos agentes mutagnicos, para as quais no se podia correlacionar nenhuma causa conhecida, eram chamadas mutaes espontneas. E embora elas fossem raras, tambm o eram as mutaes obtidas por meio de experimentos onde indutores fsicos ou qumicos eram utilizados. Sendo assim, ao expor-se, por exemplo, D. melanogaster ao elemento rdio, e se observar o aparecimento de um mutante em F1, F2 ou em geraes posteriores, no se podia estar seguro quanto a origem espontnea ou induzida da mutao. Uma vez que o aparecimento de novos alelos mutantes era pouco freqente e praticamente todos eram recessivos, havia um problema em detect-los. Assuma, por exemplo, que um gene autossmico no ncleo de um espermatozide sofra uma mutao. Se este espermatozide fecundar um vulo um evento muito pouco provvel por si s o novo indivduo ter um alelo mutado proveniente do pai e um normal, dominante, proveniente da me. Ao observar-se a prole, no ser possvel detectar o indivduo que carrega o novo alelo mutante, pois este estar em heterozigose. Por meio de cruzamentos apropriados pode-se produzir homozigotos para o alelo mutante, mas para isto necessrio que se seja capaz de identificar o heterozigoto original. Como isso no possvel saber, a alternativa seria realizar inmeros cruzamentos na esperana de que um deles inclusse o indivduo heterozigtico. Este procedimento impraticvel para aqueles interessados em obter dados quantitativos na produo de mutantes. H. J. Muller foi a primeira pessoa a dar uma soluo prtica a esse problema. Ele props, em 1927, um experimento engenhoso que permitiu comparar, de maneira simples e acurada, a taxa de mutao espontnea com a taxa de mutao induzida por exposio aos raios X. Muller s pde elaborar seu famoso experimento de quantificao de mutao induzida, que lhe rendeu o prmio Nobel para Medicina e Fisiologia em 1946, a partir do conhecimento que se tinha na poca sobre genes letais e sobre o efeito inibidor de recombinao gnica exercido pelas inverses cromossmicas.

tando um comportamento peculiar ... algumas fmeas estavam produzindo duas fmeas para um macho, enquanto que outras fmeas produziam nmeros iguais dos dois sexos. Morgan imediatamente suspeitou que o distrbio na proporo sexual tinha algo a ver com o cromossomo X. Diz ele: Se o sexo determinado por um fator nos cromossomos sexuais parece provvel que alguma alterao tenha ocorrido nesse cromossomo. Com o objetivo de testar essa hiptese, Morgan cruzou fmeas daquele estoque com machos white. O resultado obtido foi apresentado nos seguintes termos: Algumas das fmeas F1 deram uma proporo 2:1. Quando estas fmeas foram cruzadas com machos white, novamente obtevese os seguintes resultados: 448 fmeas selvagens 2 machos selvagens 445 fmeas white 374 machos white. A anlise de Morgan foi brilhante. Ele assumiu, a partir de seu modelo sobre herana ligada ao sexo em D. melanogaster, que uma classe de machos selvagens era esperada e sua ausncia, portanto, s poderia ser explicada pela existncia de um fator no cromossomo X que impedisse a sobrevivncia das moscas que portassem este fator. Mas se tal fator existisse, como explicar o aparecimento dos dois machos selvagens na prognie? (Fig. 41) Morgan explicou estes resultados sugerindo a existncia de algum tipo de fator letal recessivo em um dos cromossomos sexuais das fmeas produtoras de 2 fmeas para 1 macho. Se na meiose da fmea heterozigtica para white e para o letal, ocasionalmente, o fator letal se separasse do alelo selvagem do gene white, por meio de uma permutao, o cromossomo X recombinante selvagem originaria um macho normal. E mais, de acordo com sua hiptese da ordenao linear dos fatores nos cromossomos, o suposto fator letal deveria estar prximo do loco white, j que ele se separava do alelo selvagem do white uma vez em cada 200 vezes. Morgan fez uma deduo a partir dessa sua hiptese: se o gene letal estivesse realmente to prximo do gene white, a freqncia de permutao entre ele e o gene miniature deveria ser semelhante freqncia de permutao entre minia-

GENES LETAIS
Em 1912, Morgan descobriu que um de seus estoques de moscas selvagens estava apresen-

125

X+ X l

X
+

X+ Y

gametas

X+
w

Xl
+

X+ X+ Y
Macho selvagem
+

Y X lY
Morre
+

F1

X + X+
Fmea selvagem

X l X+
Fmea selvagem

Cruzamento-teste
P

+ w X l X+

X+ Y

gametas

Xl
w

X+ X+ X+
Fmea white
w w

X+ Xl Y
Morre
+

Y X+Y
Macho white
w

F1

X l X+
Fmea selvagem

Figura 41. Representao esquemtica do experimento de Morgan (1912) sobre o alelo letal ligado ao cromossomo X em Drosophila melanogaster.

ture e white. Diz ele: Em resumo, ns previmos a proporo de machos com asas longas e asas miniaturas esperados nos retrocruzamentos, i.e., quantos machos de asas longas iriam escapar da dose fatal. A previso foi confirmada. E. A. Carlson, em seu livro THE GENE: A Critical History, considera que a capacidade de localizar um mutante apenas pela ausncia da prognie que deveria cont-lo e de restringir a localizao desse gene a uma regio conhecida de um dado cromossomo foi um feito mais extraordinrio do que a prpria hiptese da permutao. A proporo entre as classes de F2 nestes cruzamentos era inexplicvel com base em qualquer das hipteses de Bateson. Na verdade, dez anos antes, o prprio Bateson havia previsto a existncia de genes letais com base nas anlises da alcaptonria e do albinismo realizadas por Garrod, mas sua concepo da teoria gentica impediu que ele prprio fizesse a descoberta desses fatores.

SISTEMAS

DE LETAIS BALANCEADOS

Em 1917, Muller apresentou uma sensacional anlise da mutao Beaded que serviu para quatro 126

propsitos principais: a) revelou o mistrio de um fator inconstante, as asas beaded; b) provou a existncia da hereditariedade residual que causa variao de carter; c) explicou as mutaes obtidas por De Vries em O. glazioviana; d) introduziu um novo conceito para hbridos permanentes. Beaded uma mutao dominante que causa cortes curvos nas bordas das asas. Seus efeitos eram variveis e podiam ser modificados por seleo. Quando uma mosca Beaded era cruzada com uma mosca normal no mais do que metade da prognie apresentava fentipo Beaded. Aps anos de seleo, foi isolada uma linhagem cuja prognie era quase 100% Beaded. Umas poucas moscas no-Beaded apareciam irregularmente entre a descendncia Beaded. Muller props que Beaded era uma mutao visvel dominante, mas letal em homozigose. Ele sugeriu tambm que a variabilidade da expresso dessa mutao era devida a outros genes que ele realmente mapeou nos diversos cromossomos de D. melanogaster. Finalmente, ele lanou a hiptese de que a linhagem Beaded estvel era resultante da presena de outro gene com um alelo letal no cromossomo homlogo ao portador do alelo Beaded, o qual seria da mesma natureza do letal descrito por Morgan em 1912, um recessivo simples. A conseqncia desse estado era uma letalidade balanceada que matava qualquer uma das prognies homozigticas mas permitia a sobrevivncia dos heterozigticos. (Fig. 42) Os sobreviventes com asas normais seriam resultado de permutaes entre os dois genes letais (nesse sentido, eles seriam como os machos selvagens que escapavam da morte no experimento de Morgan, por serem produtos da permutao entre o gene letal e o white). Muller diz o seguinte a esse respeito: Esta extraordinria condio gentica, em que ambos os homozigticos no aparecem devido a ao de fatores letais em cromossomos opostos [homlogos] pode ser chamada condio de fatores letais balanceados. Se as plantas de De Vries (Oenothera glazioviana) fossem igualmente letais balanceados, elas produziriam recombinantes com caractersticas recessivas mantidas em heterozigose por inmeras geraes. Essas novas caractersticas apareceriam na populao em freqncias muito mais altas do que as mutaes simples encontradas na mosca

Por volta de 1915, observou-se que alguns estoques de Drosophila melanogaster apresentavam uma taxa muito pequena de recombinao Herana do alelo Beaded em condio entre determinados locos. Este fato chamou a no-balanceada ateno dos pesquisadores da poca, uma vez que a porcentagem de ocorrrncia de recombinantes P * * * * se constituia em um dado fundamental para a locaX lizao de locos gnicos. A causa para a reduo Bd Bd + + da recombinao, embora no fosse conhecida, gametas era herdada e sendo assim poderia ser estudada. Imaginou-se a existncia de um fator redutor * * * * de recombinao que seria herdado como um Bd Bd + + gene mendeliano simples. Este suposto fator estava localizado na regio do mapa cuja recombinao ele afetava. Alm disso, o suposto fator se F1 expressava apenas na condio heterozigtica. * * * * * * * * Em 1926, Sturtevant publicou os resultados Bd Bd Bd Bd + + + + obtidos com moscas portadoras de um destes MORRE Beaded Beaded Selvagem fatores que suprimia a recombinao entre genes localizados no brao direito do cromossomo III (fator CIII). Por meio de cruzamentos bem planeHerana do alelo Beaded em condio jados, ele conseguiu determinar que a ordem de balanceada quatro dos genes presentes na regio cromossmica onde a recombinao era suprimida no era a mesma que a do mapa gnico daquele l P l * * cromossomo. Enquanto nas linhagens normais a X Bd Bd + + ordem dos genes era ABCD, na linhagem portadora do fator CIII a ordem desses mesmos gametas genes era ACBD. l l * * Sturtevant concluiu que este e, possivelmente, os demais fatores inibidores de recombinao eram Bd Bd + + inverses de regies especficas dos cromossomos. Suponha um conjunto de locos hipotticos que normalmente ocorrem ao longo do cromossomo F1 l l l l na ordem abcdefg; um cromossomo que apresente * * * * estes locos na ordem abedcfg contm uma inverso. Bd Bd Bd Bd + + + + As inverses so formadas quando um cromossomo MORRE Beaded Beaded MORRE sofre quebras em duas partes, neste caso entre b e c Figura 42. Herana do estado de carter asas Beaded e entre e e f, seguidas de uma rotao de 180o do na condio letal no-balanceada e na condio letal segmento central e posterior fuso com as pontas balanceada. Homozigotos para o alelo Beaded no terminais, b e f, do cromossomo original. podem ser obtidos pois esse alelo letal em homozigose. Foi sugerido, ento, que a recombinao era Uma homozigosidade aparente ocorre quando um alelo suprimida, porque durante a meiose os cromosletal de um outro gene, sem efeitos visveis, est presente no cromossomo homlogo ao que contm o alelo Beaded. somos no podiam se emparelhar na regio onde Isso ocorre porque ambas as prognies homozigticas um dos homlogos contivesse a seqncia de locos morrem; uma por ter o alelo Beaded em homozigose e a normal e, o outro, a seqncia invertida. As observaoutra por ter o outro letal em homozigose. (* = alelo es de cromossomos invertidos na meiose de milho selvagem; l = alelo mutante letal recessivo). e, mais tarde, em clulas de drosfilas com cromos

D. melanogaster. Portanto, os mutantes descritos por De Vries no seriam resultado de novas mutaes, mas sim de permutaes raras entre grupos de alelos normalmente mantidos em heterozigose.

INVERSES CROMOSSMICAS E A SUPRESSO DA RECOMBINAO GNICA

127

segunda fica unida aos dois plos celulares, somos politnicos mostraram, no entanto, que o formando na anfase I da meiose uma ponte emparelhamento cromossmico, em geral, ocorre cromatdica que termina por se romper. Isso e forma uma espcie de ala no bivalente. faz com que os nicos produtos viveis dessa Nos segmentos invertidos emparelhados pode meiose sejam as cromtides que no sofreram ocorrer permutao com formao de quiasmas permutao dentro do segmento invertido. e de cromtides recombinantes que tero constituies distintas se o centrmero estiver situado b. Se a inverso inclui o centrmero (inverso pericentromrica), a permutao originar dentro ou fora do segmento invertido. (Fig.43) cromtides recombinantes com deficincia de alguns genes e com duplicao de outros. Os a. Se a inverso no inclui o centrmero (inverso gametas que recebem estes cromossomos, em paracentromrica), a permutao originar geral, no formam zigotos viveis. Assim, no uma cromtide sem centrmero e outra com se formam recombinantes entre os genes contidois centrmeros. A primeira no puxada para dos no segmento invertido. os plos onde se formam os ncleos-filhos; a

Inverso paracentromrica em heterozigose

A A B D C C D B E E

Inverso pericentromrica em heterozigose

A A B C C B D D

Emparelhamento
B A A

Emparelhamento
B C B C D D

C D C B D E E

Permutao na ala

Permutao na ala Meiose

A A

Meiose
A A B C D A A

B E

E A

E A

Final da meiose I
B B B B C C C C D A D A A D D

Final da meiose II
A A D D B B B B

C C C C

D A D A

D C B E

Fragmento sem centrmero ( perdido)

B C D

Ponte cromossmica (quebra em qualquer ponto) D C B E

A A D C B E

Com inverso Produtos Duplicao de D Deficincia de A Duplicao de A Deficincia de D Normal

Produto normal Produto com deficincia Produto com deficincia Produto com inverso

A A A

B B

C C

D D

Figura 43. Permutaes mpares dentro da ala que se forma pelo emparelhamento entre cromossomos homlogos de indivduos heterozigticos para inverso paracentromrica ( direita) e para inverso pericentromrica ( esquerda). Como resultado da meiose formam-se dois cromossomos parentais e dois recombinantes cujos gametas resultantes so, em geral, inviveis por possurem deficincia ou duplicao de genes (extrado de Griffiths et al., 2.000).

128 A

mo X de uma fmea qualquer de D. melanogaster poderia portar um alelo letal. A inteno de A descoberta do sistema balanceado de genes Muller era determinar a taxa espontnea deste letais e do efeito supressor de recombinao das tipo de mutao e, com esta informao, testar o inverses permitiu que Muller planejasse e cons- efeito dos possveis agentes mutagnicos (por trusse uma linhagem especial de drosfilas exemplo, do raio X). O mtodo desenvolvido por Muller, esquemachamada ClB. Com essa linhagem ele podia medir a taxa de mutao para o estado letal de genes tizado na figura 44, permite que seja estimada a freqncia com que ocorre uma mudana para o localizados no cromossomo X. Uma fmea ClB tem um dos seus cromossomos estado letal, de qualquer um dos alelos do cromosX portando uma grande inverso (C), um alelo somo X dos machos da gerao parental; o l inrecessivo letal (l) e o alelo dominante bar (B). Os dica presena desta mutao. Note que o X do macho ser transmitido para loci l e B esto includos na regio invertida C. Muller estrategicamente escolheu os genes l e suas filhas. Se uma das filhas receber um cromosB includos na regio invertida C, pois assim eles somo X do pai com uma nova mutao letal, ela permaneceriam ligados (a inverso impediria ficar com esse cromossomo e com o ClB recebido da me. Por que esta fmea no morre, uma vez que eles fossem separados por permutao). O alelo dominante B serviria como um meio que ela possui um alelo letal em cada um dos seus imediato de reconhecer as fmeas heterozigticas cromossomos X? Neste caso, o gene letal recmpara o cromossomo ClB, pois uma mutao mutado no est no mesmo loco gnico, ou seja, dominante facilmente visvel. As fmeas portadoras no alelo do gene letal presente no cromossomo de dois cromossomos ClB no seriam viveis pois ClB homlogo. Sendo assim, cada um dos alelos o alelo letal l entraria em homozigose levando-as letais ser inibido por um alelo normal presente no morte. Da mesma forma, os machos portadores cromossomo homlogo. A confuso vem do fato do cromossomo ClB em hemizigose morreriam. de os dois alelos mutantes, embora em locos Quando uma fmea heterozigtica para o diferentes, receberem o mesmo nome letal. cromossomo ClB cruzada com um macho selvaComo mutao um fenmeno raro, a maioria gem. A metade de suas filhas selvagem e a outra das fmeas F1 receber cromossomos X normais metade tem os olhos bar, sendo, portanto, porta- de seus pais e, portanto, elas s possuiro o alelo doras do cromossomo ClB. Os filhos que recebe- letal do cromossomo ClB. ram o cromossomo ClB morrem por no possuAs fmeas ClB da gerao F1 sero cruzadas rem o alelo dominante capaz de inativar o efeito com seus irmos machos normais. Cada fmea do alelo letal l. A proporo sexual , ento, de 2 ser, ento, separada em um vidro de cultura infmeas para 1 macho. dividual para que sua descendncia seja analisada. Como mencionado anteriormente, na poca Uma fmea no portadora de mutao letal em que Muller estava fazendo estes experimen- no cromossomo recebido do pai produzir uma tos, era sabido que genes em locos diferentes prognie constituda por 2 fmeas para 1 macho. podiam mutar e causar a morte e que estes genes Metade das fmeas ser Bar (possuidoras do letais eram quase sempre recessivos. J que cromossomo ClB) e metade ser selvagem; os diferentes locos podem mutar para um estado machos sero todos selvagens, pois os que letal, a chance de se obter uma mutao letal receberam o cromossomo ClB morreram. qualquer bem maior do que a de se obter uma Como mostrado na parte inferior da figura mutao em um loco especfico. Assim, se estu- 44, uma fmea F1 que tenha recebido um cromosdarmos a taxa de mutao para uma condio somo X do pai com uma nova mutao letal letal do cromossomo X, estaremos estimando a produzir apenas fmeas na descendncia: metade soma das taxas para todos os locos que podem com fentipo Bar (portadoras do cromosssomo mutar de maneira a levar a prole de machos ClB) e a metade com fentipo normal, embora morte. O nmero destes locos pode ser grande, sejam portadoras do novo letal. No haver mamas no ser conhecido. chos. Metade deles morrer por receber o cromosO estoque ClB permitiu a Muller medir a somo ClB e a outra metade por receber o cromosfreqncia com que locos gnicos num cromosso- somo X portador da nova mutao letal.

O MTODO ClB

DE

M ULLER

129

uma fmea F1 em mil (0.1 por cento) apresentava apenas fmeas na prognie. Esta era, portanto, a C P l X taxa espontnea de mutao letal. Vale lembrar, B + + mais uma vez, que esta no a taxa para apenas gametas um gene, mas para todos os genes do cromossomo X que podem mutar para um estado letal. C Embora Morgan e outros pesquisadores tivesl B sem concludo uma dcada antes que os raios X l + no induziam mutaes, Muller observou que, na verdade, isto ocorria. Quando os machos eram expostos a, aproximadamente, 4000r de raios X, F1 uma fmea F1 em 10 apresentava apenas fmeas C C l l na prognie portanto, uma taxa de mutao 100 B B l + l + vezes maior do que a taxa de mutao espontnea. Fmea MORRE Fmea Macho Muller demonstrou que os raios X podiam ser Bar selvagem selvagem utilizados para induzir mutaes nem todas letais, claro. De fato, foi observado que os raios X podiam induzir no apenas mutaes gnicas mas tambm inverses, translocaes ou deficincias (perda de um segmento do cromossomo). Os cromossomos e genes de D. melanogaster C poderiam a partir da ser modificados de maneira a l X B permitir que os geneticistas respondessem a vrias + l questes antes impossveis de serem respondidas. gametas Alm da importncia do dado e das concluses obtidas, no se pode esquecer o fato de que o C l mtodo ClB desenvolvido por Muller foi bastante B l + engenhoso. Em muitos momentos, principalmente quando nas mos de um pesquisador criativo, D. melanogaster pde ser moldada segundo as F2 necessidades dos experimentos. Ao construir o C C genoma das moscas ClB, Muller foi capaz de l l detectar a ocorrncia de um fenmeno muito raro. B B + l + l MORRE Uma vez que ele j podia medir, com preciso, a Fmea MORRE Fmea taxa de mutao espontnea, ele pode determinar Bar selvagem o efeito mutagnico de vrias condies externas. Figura 44. Representao esquemtica do mtodo ClB Este foi o incio de uma linha de pesquisa que de Muller para deteco de mutaes letais no cromosto importante para ns hoje em dia - a deteco somo X de Drosophila melanogaster. de radiaes e substncias qumicas txicas capazes de induzir mutaes. Embora D. melanogaster seja uma mosca pequena, possvel distinguir os machos das MUTAES HOMETICAS fmeas a olho nu. Assim, Muller podia, com rapidez, verificar se seus tubos de cultura contiDiscos imaginais so aglomerados celulares nham ou no machos. Foi, ento, possvel formu- presentes no corpo das larvas de insetos holomelar a questo: Qual a freqncia com que tablicos a partir das quais se desenvolvem (difequalquer loco no cromossomo X muta para um renciam-se) as estruturas do corpo do adulto, alelo letal? durante o estgio de pupa. Como suspeitava-se que esta porcentagem era Uma mutao que faz com que, durante o muito pequena, milhares de cruzamentos foram desenvolvimento (metamorfose), uma determinada feitos. Muller observou que, aproximadamente, estrutura do corpo seja substituda por outra Raios X

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Apndice em denominada mutao hometica. Em outras forma de perna Olho palavras, mutaes hometicas so mutaes que mudam o destino de um disco imaginal. A mutao Antennapedia em Drosophila melanogaster, por exemplo, transforma a determinao do disco imaAntena ginal de antena em disco imaginal de perna, o que resulta em uma imago (inseto adulto) que apresenta A B apndices em forma de perna na regio da cabea onde, na ausncia dessa mutao, normalmente se Figura 45. Esquemas da cabea de adultos de Drosophila melanogaster, em vista anterior, formaria uma antena. (Fig. 45) mostrando o efeito da mutao hometica Antennapedia no fentipo. A. Imago com fentipo selvagem: antenas normais. B. Imago portadora da mutao: a parte distal das antenas foi substituda por apndices em forma de pernas (extrado de Gardner et al., 1991).

EXERCCIOS PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS

Complete as frases de 1 a 8 com as alternativas abaixo: (a) inverso cromossmica (b) inverso pericntrica (c) inverso paracntrica (d) fenocpia (e) mutao cromossmica (f) letalidade balanceada (g) agente mutagnico (h) gene letal (i) mutao reversa (j) mutao somtica (k) mutao germinal (l) mutao hometica 1. D-se o nome de ( ) a qualquer alterao permanente na constituio cromossmica de um organismo. 2. Uma substncia qumica ou um fator fsico (por exemplo: raios X, luz ultra violeta etc.) capaz de alterar o material hereditrio chamado ( ). 3. Muller, em 1917, props a hiptese de ( ) para explicar o fato de a linhagem Beaded ser estvel apesar de ser portadora de uma mutao letal; segundo essa hiptese, as prognies homozigticas morriam restando apenas os indivduos heterozigticos. 4. Um rearranjo intracromossmico que resulta na rotao de 180o de um segmento cromossmico chamado ( ). 5. ( ) aquele cujo efeito fenotpico suficientemente drstico para matar seu portador. 6. Quando o centrmero est incluido em um segmento cromossmico invertido, fala-se em ( ). 7. Quando o centrmero est fora da regio invertida, fala-se em ( ). 8. Uma alterao hereditria em um alelo mutante que restabelece a condio selvagem denominada ( ). 9. Um fentipo (no-hereditrio) induzido pelo ambiente, que simula um fentipo sabidamente produzido por uma mutao herdvel denominado ( ). 10. ( ) uma mutao que ocorre em clulas que no iro originar gametas, ou esporos. 11. ( ) uma mutao que ocorre em clulas que iro originar gametas, ou esporos. 12. Uma ( ) aquela que modifica o destino de um disco imaginal.

PARTE B: L IGANDO CONCEITOS E FATOS

Utilize as alternativas abaixo para responder as questes 13 e 14. (a). Bateson (c). Muller (b). Morgan (d). Sturtevant 13. A demonstrao de que raios X causam mutao foi feita por ( ).

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14. A hiptese de que os fatores redutores de permutao eram inverses cromossmicas foi feita por ( ). 15. Inverses cromossmicas impedem recombinao porque a. um cromossomo portador de inverso no consegue se emparelhar com seu homlogo normal. b. indivduos homozigticos para cromossomos portadores de inverso so inviveis. c. permutao entre cromossomos portadores de inverso geram genes letais. d. uma permutao, dentro da regio invertida, entre um cromossomo portador de inverso e seu homlogo normal origina cromossomos recombinantes inviveis. 16. Com relao ao cromossomo ClB, construdo por Muller, pode-se dizer que a. machos portadores desse cromossomo so viveis. b. fmeas diplides portadoras de um par desses cromossomos so inviveis. c. trata-se de um tipo especial de autossomo. d. trata-se de um cromossomo Y especial. 17. O mtodo ClB de Muller permite estimar a freqncia com que ocorre (m) a. uma mutao recessiva no cromossomo X. b. mutaes recessivas no cromossomo X . c. uma mutao letal recessiva no cromossomo X. d. mutaes letais recessivas no cromossomo X. Utilize as alternativas abaixo para responder as questes 18 e 19. a. cada um dos cromossomos recombinantes apresenta dois centrmeros. b. nenhum dos cromossomos recombinantes apresenta centrmero. c. um dos cromossomos recombinantes apresenta dois centrmeros e o outro, nenhum. d. os cromossomos recombinantes, apesar de apresentarem centrmeros normais, tm deficincia ou duplicao de genes. 18. A ocorrncia de uma permuta na regio invertida em indivduos heterozigticos para uma inverso cromossmica paracentromrica no produz recombinantes porque ( ). 19. A ocorrncia de uma permuta na regio invertida em indivduos heterozigticos para uma inverso cromossmica pericentromrica no produz recombinantes porque ( )

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

20. Por que a descoberta de mutaes reversas derrubou a hiptese da presena ou ausncia? 21. Por que Morgan concluiu que o suposto fator letal, descrito em seu trabalho de 1912, estaria prximo ao loco gnico white? 22. Por que era impossvel obter uma linhagem Beaded pura? 23. Como Muller explicou o aparecimento de uma linhagem Beaded que apenas esporadicamente produzia descendentes selvagens? 24. Que tipo de estratgia usada para se manter uma linhagem ClB em laboratrio? 25. Qual o procedimento usado para se medir a taxa de mutao letal por meio do sistema ClB? 26. Drosfilas aparentemente normais foram cruzadas entre si, na descendncia de um dos casais obteve-se: 202 fmeas e 98 machos. Proponha uma explicao gentica para este resultado. Proponha um teste para a sua hiptese. 27. Em uma grande maternidade, de 100 mil crianas nascidas, 10 eram portadoras de acondroplasia; uma anomalia autossmica dominante, com penetrncia completa. Destas 10 crianas somente 2 tinham um dos pais afetados. Com base nessas informaes estime a freqncia de mutao para acondroplasia nos gametas. 28. Suponha uma petnia heterozigtica, com a seguinte distribuio de genes em um par de cromossomos homlogos ADBCDEFGHI / aDbcdhgfei (D representa o centrmero). a) Esquematize o emparelhamento desse par de cromossomos na prfase I da meiose. Identifique as partes do seu diagrama. b) Identifique as cromtides de um cromossomo como 1 e 2 e as cromtides de seu homlogo como 3 e 4. Considere a ocorrncia de uma permutao entre os locos G e H das cromtides 2 e 3 e faa o esquema dos resultados destas permutaes na anfase I. Quais os gentipos dos gametas, resultantes desta meiose, que dariam origem a descendentes viveis?

132

MAPEAMENTO EM CROMOSSOMOS POLITNICOS

Dcima quarta aula (T14)
Objetivos
1. Explicar a contribuio da Citologia para a Gentica. 2. Discutir a descoberta dos rearranjos cromossmicos a partir de resultados de cruzamentos. 3. Analisar o impacto que a redescoberta dos cromossomos politnicos teve na Gentica. 4. Explicar como os geneticistas usaram os cromossomos politnicos para testar a hiptese da distribuio linear dos genes nos cromossomos. 5. Arrolar os principais fundamentos da Gentica clssica.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

GENES E

CROMOSSOMOS

Os conceitos da Gentica foram desenvolvidos inicialmente a partir de resultados obtidos em cruzamentos, com uma assistncia ocasional da Citologia. A Citologia forneceu Gentica algumas confirmaes: o nmero de pares de cromossomos homlogos igual ao nmero de grupos de ligao; h uma correlao entre cromossomos e o sexo dos indivduos; o comportamento dos cromossomos adequado para explicar a segregao dos alelos de um mesmo gene e a segregao independente dos alelos de genes diferentes. Contudo, uma maior utilizao da Citologia foi impossvel porque as tcnicas disponveis no eram suficientes para revelar a estrutura fina dos cromossomos. Se os genes esto localizados em uma ordem linear, seria de grande importncia encontrar diferenas ao longo dos cromossomos. At a terceira dcada do sculo XX, as tcnicas citolgicas mostravam, com raras excees, os cromossomos como unidades uniformes, sem nenhuma diferena que pudesse ser associada aos genes. Como hiptese de trabalho os geneticistas consideravam que os genes eram protenas. Sendo assim, seria impossvel observ-los, uma vez que as protenas estavam abaixo do limite de resolu-

o dos mais poderosos microscpios. Os geneticistas resignavam-se a investigar seus genes invisveis, da mesma maneira que os qumicos e fsicos estudavam suas molculas e partculas atmicas invisveis, por meios indiretos. Alguns mtodos para marcar cromossomos (induo de aberraes por meio de radiaes) foram desenvolvidos para Drosophila melanogaster, Zea mays e outras poucas espcies. Stern obteve diferentes cromossomos homlogos em D. melanogaster da mesma forma que Creighton e McClintock o fizeram com o milho. Dobzhansky usou a radiao para quebrar cromossomos de D. melanogaster, com a finalidade de construir um mapa do segundo cromossomo (1930) e demonstrar a presena de translocaes (1929). Nenhum dos mtodos disponveis, no entanto, tinha a preciso desejada. Na tentativa de explicar desvios observados nas propores fenotpicas em diversos estudos genticos realizados com D. melanogaster, foi postulada a existncia de diversos tipos de rearranjos cromossmicos. Como citado anteriormente, casos de reduo ou supresso de recombinao foram atribudos s inverses. Suspeitava-se que o alelo Bar fosse uma duplicao de um dos locos responsveis pelo olho normal.

133

Eles observaram que cada cromossomo da glndula salivar consistia dos dois cromossomos homlogos intimamente emparelhados. Quando as clulas eram esmagadas os cromossomos se espalhavam e podiam ser estudados. Uma observao de grande importncia foi o fato do padro de faixas desses cromossomos ser especfico para cada uma de suas regies. Isso propiciava a identificao de cada cromossomo pelo seu padro de faixas. Neste mesmo ano, Painter (1933) publicou um trabalho preliminar descrevendo os cromossomos das glndulas salivares de larvas de D. melanogaster. Eles eram pelo menos 100 vezes maiores do que os cromossomos metafsicos e os homlogos se apresentavam intimamente emparelhados, sendo a linha que os separava difcil de ser identificada. Mais uma vez, temos um caso onde, simultnea e independentemente, a mesma descoberta foi feita. Painter (1934a) escreveu: Quando eu A DESCOBERTA DOS CROMOSSOMOS GIGANTES estava no meio do meu primeiro ano de trabalho, apareceu um artigo de Heitz e Bauer sobre os Em 1881, Balbiani descreveu estruturas cromossomos da glndula salivar de Bibio nucleares em clulas gigantes das glndulas hortulanus. salivares e dos tbulos de Malpighi de larvas da Painter descobriu os cromossomos politnicos mosca Chironomus. Estas clulas no se dividiam das glndulas salivares independentemente de e continham no ncleo estruturas muito grandes, Heitz e Bauer. Ele no teve conhecimento da que pareciam estar fundidas como um fio contnuo extensa literatura sobre esse assunto antes que enrolado e portador de faixas transversais. seu trabalho j estivesse bem adiantado. Painter, Em contraste com os trabalhos de Mendel, os em uma srie de trabalhos, descreveu em detalhe a de Balbiani foram muito lidos. E. B. Wilson (1900, estrutura dos quatro cromossomos gigantes de D. p.36) escreveu: O caso mais extremo deste tipo melanogaster e mostrou que esses cromossomos [a cromatina do ncleo em repouso formando correspondiam aos quatro grupos de ligao. um fio contnuo] ocorre em glndulas salivares Como Painter foi capaz de associar grupos de de larvas de dpteros (Chironomus), em que, ligao especficos aos cordes listados presentes como descrito por Balbiani, a cromatina tem a nas clulas das glndulas salivares das larvas? Ele forma de uma fita simples enrolada composta fez uma deduo simples: se fossem realmente por discos transversais, terminando em cada cromossomos, nos estoques de moscas onde o extremidade grandes nuclolos. comportamento dos genes indicavam a presena Wilson reproduziu a figura de Balbiani. Os dis- de aberraes cromossmicas, os cordes nucleacos ou faixas transversais foram chamados crom- res deveriam apresentar alteraes estruturais meros e pensava-se que se dividiam na prfase. A correspondentes. possvel importncia destes cromossomos bandaComo exemplo, pode-se tomar a inverso C dos no deve ter sido percebida porque se acre- usada no estoque ClB de Muller. Sabia-se, pelos ditava que eram parte de um fio contnuo e no dados genticos, que essa inverso estava localicromossomos individuais. zada no cromossomo X. Logo, deveria haver um Em 1933 Heitz e Bauer estudaram esses cromossomo politnico nas glndulas salivares cromossomos gigantes em um outro Diptera, de algumas larvas desse estoque (nas fmeas ClB) Bibio hortulanus, e concluram que os cromos- com um segmento de faixas invertido em relao somos no estavam em um espirema contnuo mas ao cromossomo correspondente de uma linhagem formavam um nmero haplide de elementos. selvagem. Isso realmente foi verificado. A confirOutros resultados genticos aberrantes foram considerados como sendo conseqncia de translocaes de conjuntos de genes de um cromossomo para outro. Estas explicaes sobre as conseqncias de rearranjos cromossmicos foram hipteses brilhantes para resolver problemas difceis, embora, exceto no caso de grandes translocaes, elas no pudessem ser confirmadas citologicamente. Esta ausncia de confirmaes fez com que alguns bilogos considerassem os argumentos dos geneticistas um pouco exagerados. Estava o grupo de Drosophila construindo um slido edifcio de cincia ou construam apenas um castelo de cartas? A resposta dependia a quem se fazia a pergunta. No entanto, por quase meio sculo, um mtodo esplndido capaz de responder a estas questes esteve disponvel, mas sua utilidade no foi percebida. 134

mao adicional foi obtida com a anlise de linhagens contendo outras supostas inverses, ou seja, com elementos supressores de permutao em grupos de ligao conhecidos, que foram associadas a segmentos invertidos em cromossomos especficos das glndulas salivares. Painter foi at mesmo capaz de determinar a posio aproximada de alguns locos gnicos. Sobre isso ele disse: De modo geral, existem 3 maneiras de se determinar a posio dos locos gnicos: 1) Translocaes simples ou inverses em que ns sabemos, geneticamente, entre que genes as quebras ocorreram; 2) pequenas deficincias em que ns sabemos quais so os genes que esto faltando; e 3) um estudo de uma srie de quebras, sendo todas entre os mesmos locos gnicos. A figura 46 mostra alguns dos genes localizados no cromossomo X. Este mtodo era fantstico e muitos geneticistas passaram a aplic-lo imediatamente.

Theodosius Dobzhansky contava que aps Painter apresentar seu trabalho em um seminrio na Cal Tech, Bridges chegou correndo ao seu laboratrio dizendo: Dobzhansky onde esto as glndulas salivares? Bridges iniciou seus trabalhos imediatamente e preparou os mapas dos cromossomos politnicos de D. melanogaster. Dobzhansky usou os cromossomos politnicos de Drosophila pseudoobscura e de outra espcie no-domstica para obter dados fundamentais para sua clssica srie Genetics of Natural Populations. Os cromossomos das glndulas salivares atraram uma considervel ateno. (Fig. 47)

Cromocentro

IV

III

B f sd

III
lz v

IIR X
fa

IIL

Figura 46. Primeiro desenho de Painter dos cromossomos politnicos das glndulas salivares de D. melanogaster. Os cromossomos ficam ligados ao cromocentro. Os cromossomos X (= I) e IV se ligam ao cromocentro por meio de uma de suas pontas. J os dois autossomos grandes ficam ligados ao cromocentro por suas regies medianas e, dessa forma, cada um deles apresenta dois braos (chamados de L e R - do ingls left e right). As letras indicam as localizaes provisrias de alguns genes do cromossomo X. (Painter, 1934)

Figura 47. Fotografias de parte de um mesmo cromossomo politnico de Drosophila pseudoobscura mostrando, acima, dois homlogos no-invertidos perfeitamente emparelhados e, abaixo, uma rea de uma inverso em estado heterozigtico. Note na figura abaixo que os dois homlogos esto intimamente emparelhados na parte inferior direita da fotografia, mas um pouco acima, a inverso comea e pode-se ver, ento, que os padres de faixas dos dois homlogos no correspondem mais e que o emparelhamento entre eles deixa de ocorrer. Um dos segmentos ento se dobra e forma uma ala, e o emparelhamento volta a ocorrer, como se v na parte superior da fotografia. (Fotos de Betty C. Moore)

135

A observao das faixas dos cromossomos das clulas das glndulas salivares permitiram que muitas das dedues feitas pelos pesquisadores de drosfilas, com base em dados somente genticos, fossem testados criticamente. Quando uma reverso na ordem dos genes foi evocada para explicar a supresso da recombinao, as faixas dos cromossomos das glndulas salivares apresentaramse invertidas. Quando os dados sugeriam que um segmento de um cromossomo estava ligado a outro, as faixas apresentaram-se translocadas. Para explicar algumas observaes estranhas, foi sugerido que uma pequena parte do cromossomo havia sido perdida, e os cromossomos das glndulas salivares revelaram a falta de algumas faixas. Suspeitava-se que o alelo Bar fosse uma duplicao de um segmento do cromossomo X. A figura 48 mostra que isso verdadeiro.

Normal

Bar

Figura 48. Pores de cromossomos X, de uma fmea selvagem (acima) e de uma fmea homozigtica Bar (abaixo). As linhas mostram as faixas correspondentes nos dois cromossomos. (Modificado de Bridges, 1936)

A equipe de drosofilistas teve a ltima palavra - eles necessitaram evocar uma lista, aparentemente interminvel, de aberraes cromossmicas para explicar os resultados genticos inesperados em seus experimentos e as faixas dos cromossomos das glndulas salivares confirmaram suas hipteses.

ONDE ESTO OS GENES?

No momento em que pores especficas dos cromossomos de Drosophila melanogaster passaram a ser definidas, houve um grande interesse na possibilidade de se determinar o local

ocupado pelos genes. Seriam as faixas os genes? E as reas entre as faixas, seriam geneticamente inertes? As tentativas para localizar os genes foram baseadas, principalmente, em pequenas delees. Estas podiam ser produzidas em grande nmero por meio do uso de raios X. Embora no fosse possvel, claro, induzir-se delees em locais especficos dos cromossomos. O procedimento consistia em irradiar um grande nmero de moscas, na esperana de se obter delees na regio desejada do cromossomo, e analisar sua prole. Um grande volume de trabalho foi necessrio, mas, para geneticistas dedicados e motivados, isto valia a pena. Demerec e Hoover (1936), por exemplo, estudaram estoques portadores de trs deficincias prximas a uma das pontas do cromossomo X. A maioria das deficincias, exceto quando muito pequenas, embora viveis quando em seu estado heterozigtico, so letais em homozigose. As deficincias possuem um efeito gentico especial, como ser visto a seguir. Assuma que uma mosca seja heterozigtica para uma deficincia que inclui o loco do gene A. Isto significa que o alelo presente no cromossomo normal no loco A determina o fentipo, uma vez que no h nada no cromossomo portador da deficincia que possa opor-se ao seu efeito. uma situao similar observada nos machos de D. melanogaster em que o alelo presente no cromossomo X que determina o fentipo, uma vez que o Y no possui praticamente nenhum gene. Demerec e Hoover determinaram precisamente as faixas que faltavam nas trs deficincias envolvidas. Eles selecionaram trs alelos mutantes, y- (yellow - mutante para a cor do corpo), ac(achaete - falta de algumas cerdas) e sc- (scute falta de outras cerdas). Estudos prvios haviam demonstrado que esses genes estavam localizados prximos extremidade do cromossomo. Os cruzamentos foram feitos de modo que as moscas estudadas possuam um cromossomo inteiro com os alelos y, ac e sc e o outro com uma das deficincias, porm apenas com os alelos selvagens. O experimento est apresentado na figura 49. A primeira deficincia removeu 4 faixas do final do cromossomo. Neste caso as moscas obtidas eram do tipo selvagem, indicando que os locos desses genes no se localizam nas 4

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X com os alelos y-, ac- e scX com os alelos y+ , ac+ e sc+

Moscas so todas selvagens.

X com os alelos y-, ac- e scX com a primeira deficincia

Moscas so todas selvagens; portanto, os genes Y, AC e SC no esto nas primeiras quatro faixas.

X com os alelos y-, ac- e scX com a segunda deficincia

Moscas so yellow e achaete; portanto, os genes Y e AC esto nas primeiras oito faixas.

X com os alelos y-, ac- e scX com a segunda deficincia

Moscas so yellow, achaete e scute; portanto, os genes Y, AC e SC esto nas primeiras dez faixas. Os genes Y e AC devem estar nessa regio do cromossomo.

O gene SC deve estar nessa regio do cromossomo.

Figura 49. Esquema dos experimentos de Demerec e Hoover para localizar alguns genes do cromossomo X de Drosophila melanogaster.

primeiras faixas. A prxima deficincia removeu 8 faixas terminais e as moscas que a portavam eram yellow e achaete. Como a primeira deleo havia indicado que esses alelos no estavam nas 4 primeiras faixas, os locos yelow e achaete deveriam estar na regio entre as faixas 4 e 8. A terceira deleo removeu as 10 faixas terminais e, neste caso, as moscas observadas eram yellow, achaete e scute. Logo, o loco para scute devia estar na regio que incluia as faixas de 8 a 10. Por meio desse mtodo, os drosofilistas da poca foram capazes de determinar os locos aproximados de vrios genes. Nenhum loco foi encontrado nas regies de interfaixas e, em alguns casos, foi possvel localizar um loco numa pequena regio onde havia apenas uma faixa. Estas observaes sugeriram a hiptese de que as faixas, ou uma poro delas, eram os locos gnicos.

Se esta hiptese fosse verdadeira, uma estimativa do nmero de genes em D. melanogaster poderia ser feita contando-se o nmero de faixas de seus cromossomos. Esta era uma tarefa rdua pois o nmero de faixas depende, de certa forma, do nvel de condensao dos cromossomos - elas variam de faixas fortemente condensadas a outras quase imperceptveis por estarem no limite de resoluo dos microscpios fotnicos. De qualquer forma, parece haver pelo menos 5 mil faixas nos cromossomos de D. melanogaster e este nmero tomado como uma estimativa mnima do nmero de genes nesta espcie. Uma vez que os genes foram localizados nos cromossomos das glndulas salivares, uma comparao entre os mapas cromossmicos citolgicos e aqueles obtidos por ligao gnica pde ser feita. Bridges realizou um cuidadoso estudo

137

e suas comparaes esto mostradas na figura 50. A semelhana muito grande e, apesar de ser isto o que os geneticistas esperavam, o resultado foi surpreendente. Note que a comparao, feita aqui, entre um conjunto de dados baseado no fentipo da prole de cruzamentos para anlise gentica e um outro conjunto de dados baseado em descries citogenticas. Os dados genticos apoiavam a hiptese de que os genes estavam arranjados em ordem linear e em uma certa seqncia. Os dados citolgicos sustentavam a mesma hiptese. S o fato da Gentica e da Citologia apresentarem dados que corroboravam a mesma hiptese j era, em si, uma prova de que ela era verdadeira acima de qualquer suspeita. A oportunidade de se conferir uma descoberta em um campo com descobertas em campos completamente diferentes uma das tcnicas mais poderosas ao alcance dos cientistas. Se um conjunto de dados genticos ou de dados citolgicos fossem obtidos para apoiar a hiptese da ordem linear dos genes, esses dados no seriam to convincentes como um conjunto de dados genticos em concordncia com um conjunto de dados citolgicos.

OS FUNDAMENTOS CONCEITUAIS DA GENTICA C LSSICA

Aps milhares de cruzamentos terem sido feitos e milhes de descendentes classificados, os geneticistas do final dos anos trinta tinham um sentimento de satisfao, pois a grande questo que havia permanecido sem resposta convincente por sculos tinha, naquele momento, uma resposta aceitvel. A Gentica foi o primeiro ramo da Biologia a alcanar um nvel de amadurecimento conceitual que permitiu que os resultados de experimentos fossem previstos. Por estar ligada aos problemas mais bsicos da Biologia, a Gentica a parte menos complexa das Cincias Biolgicas. O gentipo deve ser mais simples do que o fentipo, uma vez que o bsico menos complexo do que o derivado. O cdigo gentico essencialmente universal, enquanto as estruturas e funes dos organismos possuem suas prprias caractersticas. Afinal, qual o objetivo comum Gentica e Citologia? A resposta nada mais do que descobrir as leis que governam a transmisso de genes dos pais para seus filhos. Essas leis, aparentemente universais, so vlidas para plantas, animais e microrganismos. Quais so elas?

hy

px MI 2

mi pd mr lns bs M33 lx sp ba bw abb ll

95

100

105

Figura 50. Correspondncia entre faixas de um cromossomo politnico e o mapa de ligao dos genes da extremidade do cromossomo II de Drosophila melanogaster. (Modificado de Bridges, 1937)

138

Segue abaixo a lista dos principais fundamentos da Gentica clssica: 1. Morfologia, a Fisiologia e a Biologia Molecular de um indivduo so determinadas por sua herana gentica, agindo num ambiente definido.

rer. Logo, os genes so capazes de existir em vrios estados conhecidos como alelos. 9. Os genes podem ser transferidos de um cromossomo para seu homlogo por permutao. Ela ocorre regularmente na meiose, mas h algumas excees, como em machos de D. melanogaster, onde a permutao no ocorre.

2. Embora o material gentico herdado por um novo indivduo seja menor em quantidade, ele 10. No processo meitico, cada gameta recebe um cromossomo de cada um dos pares homlogos; contm toda a informao necessria para o qual ser recebido, depende do acaso. Assim desenvolvimento de um organismo semelhante os gametas recebero um ou outro de cada um a seus pais. dos pares de genes (segregao). Cada hom3. Os genes so partes dos cromossomos logo, com os genes que contm, ser distribudo (pesquisas posteriores mostraram que parte da para metade dos gametas. Machos X0 so uma informao gentica est contida em mitocnexceo bvia. drias, plastdeos e vrus). 11. Na formao dos gametas, a segregao dos 4. Cada gene, geralmente, ocupa uma posio cromossomos de um par de homlogos, com definida, seu loco, no cromossomo. So os seus genes, no tem nenhum efeito sobre a conhecidas excees a este conceito como as segregao de um outro par de cromossomos inverses e as translocaes. E, a cada dia, vem homlogos. aumentando o nmero de exemplos de partes do material gentico capazes de se movimentar 12. A fertilizao consiste na unio ao acaso do gameta feminino com o masculino, cada um de um cromossomo para outro (transposons). portando um dos cromossomos de todos os 5. Cada cromossomo possui muitos genes (exceto pares homlogos. O zigoto recebe um cromosem alguns casos como o Y de D. melanosomo de cada um dos pares homlogos da me gaster) e os genes esto arranjados em uma e outro, do pai. ordem linear. 13. Quando dois alelos diferentes do mesmo loco 6. As clulas somticas possuem dois de cada um esto presentes, o indivduo heterozigtico dos cromossomos. Eles esto, portanto, em para este gene. O alelo com o maior efeito pares homlogos, sendo que todo loco gnico fenotpico conhecido como dominante, e o representado duas vezes. Existem algumas outro como, recessivo. Em muitos casos, o excees bem conhecidas. Em algumas espheterozigoto idntico aos indivduos cies, como abelhas por exemplo, as rainhas e homozigticos para o alelo dominante. Menos operrias so fmeas diplides e os zanges, freqentemente, os heterozigotos so machos monoplides. Os cromossomos sexuais intermedirios. so uma outra exceo, onde machos XO e XY possuem apenas uma cpia dos genes ligados 14. Nos anos trinta, uma vez que nenhuma outra alternativa parecia possvel, considerava-se a ao sexo. Algumas clulas em alguns tecidos de hiptese de que os genes se expressam por certos animais podem ser poliplides, como as meio da produo de substncias qumicas, do nosso fgado. que por sua vez controlam as reaes qumicas 7. Durante cada ciclo mittico os genes so duplida clula . Alguns geneticistas sugeriram que cados a partir das substncias qumicas da clua maior funo dos genes seria produzir la. A duplicao celular envolve uma duplicaenzimas especficas que, em contra partida, o gnica anterior. controlariam a vida da clula. 8. Embora os genes sejam caracterizados por uma Essas 14 proposies incluem grande parte dos grande estabilidade atravs do tempo, duplicando milhes de vezes em muitas geraes, fenmenos da Gentica Clssica e formaram um existe a possibilidade de uma mutao ocor- conceito geral satisfatrio. Mas isto no foi 139

suficiente. A mente inquisitiva do homem mais estimulada pelo desconhecido do que pelo que se conhece. Conhecia-se com grande preciso como os genes para a cor dos olhos em D. melanogaster eram herdados mas, essencialmente,

nada sobre a estrutura destes genes ou seu modo de ao. Esse seria o prximo grande paradigma da Gentica, que direcionaria as anlises para o nvel das clulas e das molculas.

EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS
Preencha os espaos em branco nas frases de 1 a 4 usando o termo abaixo mais apropriado: a) cromossomos politnicos b) cromossomos homlogos c) loco gnico d) transposon 1.Os cromossomos que se emparelham na meiose e nas clulas de glndulas salivares so ( ). 2. O local do cromossomo ocupado por um determinado gene denominado ( ). 3. Cromossomos gigantes com centenas de cromtides arranjadas lado a lado so denominados ( ). 4. ( ) um segmento de DNA , que pode sair de um local do cromossomo e se inserir em outro local do mesmo ou de outro cromossomo. 9.Cromossomos com ( ) nunca revertem para a condio normal e expressam alelos recessivos presentes nos homlogos, na regio correspondente ao local da aberrao. 10. Muller utilizou, no cromossomo ClB , um gene recessivo letal e o gene dominante Bar, que permaneciam ligados porque os produtos da recombinao entre eles eram inviveis. Isto acontecia pelo fato desses genes estarem includos em uma ( ). 11. Assuma que em Drosophila melanogaster, os locos A-B- C-D- E-F estejam ligados nesta ordem. Uma mosca abcdef / abcdef foi cruzada com outra de um estoque selvagem. Cerca de metade dos descendentes foi selvagem como esperado, mas a outra metade apresentou fentipo recessivo quanto aos genes d e e . Uma possvel explicao seria a ocorrncia de uma ( ) na mosca selvagem usada no cruzamento.

PARTE B: LIGANDO CONCEITOS E FATOS

Utilize as alternativas a seguir para responder as questes de 5 a 8. (a) deficincia ou deleo (b) duplicao (c) inverso paracentromrica (d) inverso pericentromrica Em um determinado cromossomo de Drosophila, a sequncia normal de locos gnicos 123!456789 (o ponto ! representa o centrmero). Que tipos de aberrao cromossmica apresentam cada uma das moscas abaixo? 5. Uma drosfila com constituio 123!476589? 6. Uma drosfila com constituio 123!46789? 7. Uma drosfila com constituio 1654!32789? 8. Uma drosfila com constituio 123!4566789? Indique a alternativa mais apropriada para completar as frases de 9 a 11. a) translocao b) inverso c) deficincia

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

12. O que levou os antigos geneticistas a concluir que algumas de suas linhagens de D. melanogaster apresentavam rearranjos cromossmicos? 13. O que impedia o teste da hiptese da existncia de rearranjos cromossmicos? 14. Quais foram as caractersticas dos cromossomos politnicos que os tornaram to importantes para os testes das hipteses dos geneticista? 15. Como Painter conseguiu associar as informaes obtidas em cruzamentos de D. melanogaster com os cromossomos gigantes das glndulas salivares das larvas? 16. Como os geneticistas usaram os cromossomos politnicos para testar a hiptese da distribuio linear dos genes nos cromossomos?

140

17. Seis faixas de um cromossomo politnico das glndulas salivares de D. melanogaster esto representados abaixo, juntamente com 5 deficincias distintas.
1 1 1 1

Del Del Del Del Del

1 2 3 4 5

Os alelos recessivos a, b, c, d , e e f esto nesta regio do cromossomo, mas a ordem deles desconhecida. Quando as deficincias esto em heterozigose para cada um dos alelos, os seguintes resultados so obtidos:

a b
Del Del Del Del Del 1 2 3 4 5 - - + - + + + + +

Nesta tabela, (-) corresponde a falta do alelo selvagem (ou seja, permite a expresso do alelo recessivo) e (+) corresponde a presena do alelo selvagem.

Determine a ordem dos 6 genes no cromossomo e a possvel relao deles com as faixas numeradas.

21 21 21 21 21

I II
21 21 21 21 21

III

IV

VI

c
+

d
+ + + -

e f
+ + + + + + -

141

A DESCOBERTA DO MODO
DE AO GNICA
Dcima quinta aula (T15)
Objetivos
1. Explicar a hiptese de Garrod para a origem da alcaptonria. 2. Identificar nos experimentos de transplantes de olho em Drosophila melanogaster a origem da teoria um gene - uma enzima. 3. Analisar as diferentes estratgias utilizadas na caa ao suposto precursor do pigmento do olho dos insetos. 4. Explicar a interao entre os genes vermilion, cinnabar e white com base na teoria um gene - uma enzima. 5. Explicar o papel que tiveram os inibidores de enzimas no estudo das vias metablicas celulares. 6. Discutir as razes que levaram Beadle a trocar Drosophila melanogaster por Neurospora crassa nos estudos sobre o modo de ao dos genes. 7. Explicar a estratgia usada por Beadle e Tatum para identificar e cultivar mutantes de Neurospora crassa com interrupes em cadeias metablicas essenciais. 8. Explicar como se pode distinguir em Neurospora crassa mutantes de um mesmo gene de mutantes de genes diferentes, no caso de as mutaes afetarem uma mesma via metablica.

Texto adaptado de: MOORE, J. A. Science as a Way of Knowing Genetics. Amer. Zool. v. 26: p. 583-747, 1986.

O QUE

FAZEM OS GENES?

Ao final da terceira dcada do sculo XX no restavam mais grandes questes sobre os mecanismos de transmisso dos genes. Assim, a nfase mudou para questes como O que os genes fazem? e Qual a natureza qumica dos genes?. claro que j havia interesse nessas questes desde o incio do sculo, mas, com as tcnicas disponveis, havia pouca possibilidade de se obter qualquer resposta mais aprofundada. Nenhuma das tcnicas de rotina atuais, tais como microscopia eletrnica, istopos radioativos, computadores, cromatografias e instrumentos inacreditavelmente sofisticados estavam disponveis naquela poca. Tambm no havia muito apoio financeiro para pesquisa, e assistentes de laboratrio e ps-doutorandos eram escassos. Ensino e pesquisa eram considerados como de igual importncia nas grandes Universidades, de modo que menos tempo era dedicado

pesquisa. E. B. Wilson foi uma exceo, pois conseguiu realizar pesquisa de altssimo nvel e ter uma quantidade incrvel de publicaes cientficas, mesmo com uma carga horria de ensino que seria insuportvel para a maioria dos bilogos de hoje. Neste contexto, os campos referentes estrutura e funo do gene Biologia Celular e Bioqumica no alcanaram um estgio em que as questes pudessem ser respondidas de maneira definitiva. Porm um ingrediente importante para a pesquisa cientfica, de fato sine qua non, no estava faltando: havia crebros. No momento em que as tcnicas se tornaram disponveis, alguns drosofilistas pioneiros j haviam estabelecido, de maneira pouco questionvel, que os genes atuam controlando as atividades metablicas das clulas. O estgio estava pronto para que Watson e Crick formalizassem, em 1953, o paradigma central da Gentica que em breve se transformou no paradigma central das Cincias Biolgicas.

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ENZIMAS E GENES
As tcnicas disponveis antes de 1953, apesar de pouco sofisticadas em comparao com as atuais, possibilitaram descobertas importantes sobre a funo dos genes. Entre essas tcnicas estavam aquelas desenvolvidas para o estudo de enzimas. Durante a primeira metade do sculo XX, um dos mais frutferos campos de pesquisa da Biologia Celular e da Bioqumica foi o estudo de enzimas. Enzimas eram consideradas fatores essenciais vida e era opinio geral que os tipos de reaes que se sabia, ou se suspeitava, que ocorressem nas clulas simplesmente no poderiam acontecer sem estes catalisadores orgnicos. Em um desses estranhos episdios na histria das idias, a primeira ligao entre genes e enzimas aconteceu em uma poca em que muito pouco era conhecido sobre ambos. Um mdico ingls, Archibald E. Garrod (1857-1936), atendeu um paciente, um beb, com uma doena rara chamada alcaptonria. O nome dessa doena deriva do fato de a urina dos pacientes afetados conter corpos de alcaptona, compostos fundamentalmente por cido homogentsico. Essa substncia se torna vermelha escura ou preta ao se oxidar. Uma pista que indicou a doena do beb foram as manchas escuras em suas fraldas, decorrentes da oxidao da alcaptona da urina. Garrod sabia que os pais do beb eram primos em primeiro grau, o que sugeria uma possvel causa hereditria para a alcaptonria. Em 1902 ele consultou Bateson, que lhe sugeriu que a doena poderia ser devida a um alelo recessivo. Garrod chamou a alcaptonria e outras doenas semelhantes de erros inatos do metabolismo. Bateson continuou interessado no problema e escreveu em 1913: Alcaptonria deve ser considerada como decorrente da falta de um determinado fermento [= enzima], o qual tem a capacidade de decompor a substncia alcaptona. Em uma pessoa normal, esta substncia no est presente na urina porque ela foi degradada pelo fermento, mas quando a pessoa no consegue produzir este fermento, a alcaptona excretada na urina. A hiptese, ento, seria um gene, um fermento. Trinta anos mais tarde, com a terminologia atualizada, isto iria se tornar uma das mais importantes hipteses que guiaria a pesquisa gentica.

Nem Garrod e nem alcaptonria so mencionados em nenhum dos livros escritos pela escola de Morgan nos anos das grandes descobertas. Mesmo que tenha tido conhecimento das hipteses de Garrod e de Bateson, Morgan as ignorou. Morgan era to a favor da cincia experimental e contrrio a todo o resto incluindo cincia noexperimental que ele pode ter considerado a hiptese de Garrod como mera especulao. Mas possivel imaginar outras explicaes para o desinteresse dos drosofilistas pioneiros pela hiptese de Garrod. Quando programas de pesquisa esto se desenvolvendo de modo rpido e produtivo, como estavam para os que trabalhavam com D. melanogaster, h pouco estmulo para a procura de novas coisas para fazer. Foi somente na terceira dcada do sculo XX, quando a transmisso gentica estava satisfatoriamente explicada, que os geneticistas comearam um estudo intensivo do tipo de problema levantado pela hiptese de Garrod.

O GENE

VERMILION E GINANDROMORFISMO

EM DROSOPHILA MELANOGASTER

Morgan e Bridges (1919) usaram a teoria cromossmica da determinao do sexo para explicar a origem dos ginandromorfos em D. melanogaster. Eles concluram que as partes femininas dos ginandromorfos continham dois cromossomos X e as partes masculinas, apenas um X. A origem de um ginandromorfo seria, portanto, um zigoto fmea (XX) que, por perda de um cromossomo X em uma das mitoses embrionrias, apresentaria uma populao de clulas X0 que desenvolveriam fentipo masculino. Eles realmente verificaram que, muitas vezes, ginandromorfos originados em cruzamentos entre fmeas selvagens e machos portadores de mutaes recessivas ligadas ao sexo apresentavam a parte feminina do corpo com fentipo selvagem e a masculina com a mutao paterna. Em 1920, Sturtevant publicou o achado de um ginandromorfo, obtido em um cruzamento de uma fmea heterozigtica, portadora dos alelos recessivos dos genes cosen, ruby, vermilion e forked em um de seus cromossomos X e dos alelos selvagens desses genes no outro X, com um macho que portava em seu cromossomo X os alelos recessivos dos genes scute, echinus, cut, vermilion, garnet e forked. O cruzamento est esquematizados na figura 51.

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+ + + + + + + + + + + + + +

sc + rb + v + f

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sc ec + ct v g f

Fmea

Macho

sc ec + ct v g f

Zigoto feminino

+ + + + + + +

sc ec + ct v g f

sc ec + ct v g f

Perda do cromossomo X materno

A hiptese aventada por Sturtevant foi de que a colorao vermilion (olhos vermelho-claros) do olho da D. melanogaster no seria uma caracterstica autnoma, ou seja, desenvolvida pelas clulas portadoras da mutao gnica independentemente do gentipo das demais clulas do corpo. Ele imaginou que a colorao vermilion da D. melanogaster seria devida ausncia de alguma substncia produzida pelo alelo selvagem do gene homnimo e que, no ginandromorfo em questo, essa substncia havia se difundido do olho selvagem da parte feminina do corpo para o olho da parte masculina, tornando-o fenotipicamente selvagem (olhos vermelho-escuros). Na poca era praticamente impossvel testar essa hiptese, pois ginandromorfos eram bastante raros. Alm disso, havia muitas outras coisas interessantes a serem investigadas na Sala das Moscas e para as quais podiam ser aventadas hipteses testveis, bem ao gosto de Morgan o paradigma continuava a ser a teoria cromossmica da herana. O paradigma em que o trabalho de Sturtevant se encaixava s surgiria cerca de 15 anos mais tarde.

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Ginandromorfo
HIPTESE SOBRE O MODO DE AO DOS GENES
Figura 51. Representao esquemtica do cruzamento realizado por Sturtevant, onde foi descoberto o ginandromorfo que mostrou a no-autonomia da mutao vermilion.

A publicao do encontro desse ginandromorfo se justificava pelo fato dele possuir um fentipo inesperado. Ele era selvagem na parte feminina do corpo e scute, echinus, cut e forked na parte masculina. Isso indicava que o zigoto do qual ele havia se originado continha um cromossomo X portador dos alelos selvagens da me e o cromossomo X nico do pai, e que a parte masculina do corpo havia se originado de uma clula que tinha perdido o X materno, uma vez que apresentava as mutaes recessivas do pai. O fato inesperado, que chamou a ateno de Sturtevant e motivou a publicao daquele trabalho, foi o olho da parte masculina do corpo apresentar colorao selvagem. Uma explicao possvel seria a do alelo vermilion presente no cromossomo X paterno ter sofrido mutao reversa. Mas Sturtevant descartou tal hiptese por considerla altamente improvvel, ou seja, um mesmo indivduo ter sofrido um distrbio cromossmico e uma mutao reversa simultaneamente.

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Trs nomes esto associados ao incio das investigaes sobre o modo de ao dos genes: George W. Beadle (1903-1989), Boris Ephrussi (1901-1979) e Edward L. Tatum (1909-1979). Beadle recebeu seu Ph.D. em 1931 e foi contemplado com uma bolsa de estudos do National Research Council Fellowship para um treinamento de ps-doutorado no laboratrio de Morgan no California Institute of Technology. No Caltech, Beadle comeou a fazer pesquisas com D. melanogaster, ao mesmo tempo em que conclua o trabalho sobre citogentica de milho iniciado em seu doutoramento em Cornell. Em 1934, Boris Ephrussi chegou no Caltech; ele vinha de Paris para aprender gentica de D. melanogaster com Morgan e Sturtevant. Seu interesse j era no modo de ao gnica, um assunto que logo passaria a interessar Beadle, de quem se tornou muito amigo. Ephrussi era hbil nas tcnicas de cultura de tecidos e de transplantes e ele e Beadle planejaram um trabalho colaborativo em D. melanogaster utilizando essas tcnicas, com o objetivo de testar a hiptese de Sturtevant sobre a no-autonomia do gene vermilion.

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Em meados de 1935, Beadle foi para Paris realizar os experimentos no laboratrio de Ephrussi no Institute de Biologie. Suas tentativas de cultivar discos imaginais in vitro falharam, mas eles desenvolveram um mtodo para transplantar discos imaginais de uma larva para outra e obter o desenvolvimento do disco implantado quando a larva hospedeira sofria metamorfose para pupa e adulto (tambm chamado de imago nos insetos). O que so discos imaginais?

Antes de continuarmos essa histria talvez seja necessrio esclarecermos o que so discos imaginais. Nos insetos, a maioria dos rgos dos adultos, tais como olhos compostos, pernas, antenas, asas, peas bucais, genitlia etc. se desenvolvem a partir de aglomerados de clulas primordiais formados no final da fase embrionria, os chamados discos imaginais (relativos s imagos) Os discos imaginais permanecem indiferenciados at a fase de pupa, quando, ento, um aumento da concentrao de hormnios na hemolinfa induzem seu crescimento e diferenciao nas Hospedeiros estruturas adultas para as quais + bo bw ca car cd cl cm cn g Hn lt ma p pd pn pr ras rb se sed sf st v w w w estavam pr-determinadas. + bo Beadle e Ephrussi dissecavam larbw vas de D. melanogaster, separavam ca car os discos imaginais de olhos e, atracd vs de uma micropipeta de vidro, imcl cm plantavam esses discos na cavidade cn do corpo de outras larvas. O disco g Hn implantado continuava a se desenvollt ver na cavidade do corpo da larva ma p hospedeira e durante a metamorfose pd desta (fase pupal), ele se diferenciava pn pr em um olho que ficava solto na ras cavidade abdominal da mosca hosrb pedeira. A mosca hospedeira podia, se sed ento, ser dissecada e a cor do olho sf implantado na sua cavidade abdomist v nal podia ser observada. A colorao w do olho no sofria alterao decorw w rente da operao de implantao e nem pelo fato de ter se desenvolvido Figura 52. Representao esquemtica dos resultados de transno interior da cavidade abdominal. plantes de olhos em Drosophila. Os crculos listados indicam Beadle e Ephrussi realizaram desenvolvimento autnomo; por exemplo, discos brown (bw) transplantes entre 26 diferentes implantados em larvas selvagens desenvolvem colorao marrom. mutantes para cor de olho de D. Os crculos em preto indicam desenvolvimento no-autnomo melanogaster. Eles verificaram que da pigmentao. Crculos metade branco e metade preto indicam discos de olhos de larvas mutantes que o resultado do implante foi uma colorao intermediria. implantados em larvas selvagens, ou (Tirado de Beadle e Ephrussi, 1935)
2 r P 2 a c

vice-versa, se desenvolviam autonomamente, isto , produziam olhos com a cor de seu prprio gentipo, no sendo afetados pelo gentipo do hospedeiro. Ocorreram, no entanto, duas importantes excees: os discos imaginais de larvas mutantes vermilion e cinnabar no se comportavam autonomamente. Essas duas mutaes produziam o mesmo fentipo, olho vermelho-claro, apesar de serem dois genes distintos, localizados em cromossomos diferentes: o gene vermilion est localizado no X (posio 33,0) e o cinnabar, no cromossomo 2 (posio 57,5). (Fig. 52) Discos imaginais de larvas mutantes vermilion implantados em larvas do tipo selvagem desenvolvem olhos selvagem e no vermilion como seria esperado de acordo com o seu gentipo. Esses resultados confirmaram a hiptese original de Sturtevant de que o olho vermilion no teria desenvolvimento autnomo, sua colorao seria modificada em funo do gentipo de outras clulas do corpo do indivduo.

Implantados

a c

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32132132132132132132132132132132132132132132432432432321321321 1 1 1 1 4 1 4 1 32132132132132132132132132132132132132132132132432132321321321 1 1 1 1 32132132132132132132132132132132132132132132432432432321321321

 semelhana do vermilion, os discos imaginais de olhos de larvas mutantes cinnabar, quando implantados em hospedeiros de linhagens selvagem ou de alguns tipos de linhagem mutante de cor de olho, desenvolviam colorao selvagem. Em sua publicao de 1935, Beadle e Ephrussi escreveram: Sturtevant havia mostrado que a cor de olho vermilion , sob certas condies, noautmona em seu desenvolvimento em mosaicos. Nos implantes elas foram igualmente noautnomas, um [disco imaginal para] olho vermilion (v) implantado em um hospedeiro selvagem desenvolve [olhos com] pigmentao caracterstica do tipo selvagem. Por meio de tranplantes ns fomos capazes de estudar muitas combinaes que no so facilmente obtidas em mosaicos naturais e dessa forma ns verificamos que cinnabar (cn), uma cor de olho fenotipicamente similar ao vermilion, tambm no autnoma na diferenciao de sua pigmentao. Outros dois mutantes de cor de olho, scarlet (st) e cardinal (cd), tambm fenotipicamente similares ao vermilion, so, no entanto, completamente autnomos no desenvolvimento de sua pigmentao em todas as comimagos + st olhos do receptor

binaes em que os estudamos. (Fig. 53) Os transplantes recprocos entre mutantes vermilion e cinnabar levaram a resultados inesperados. Discos imaginais de larvas mutantes vermilion quando implantadas em larvas mutantes cinnabar, desenvolviam colorao tipicamente selvagem. No entanto, na situao inversa, ou seja, quando discos mutantes cinnabar eram implantados em larvas mutantes vermilion, eles desenvolviam a colorao vermelho-clara tpica dos mutantes. Beadle e Ephrussi relataram esses resultados nos seguintes termos: Ns verificamos que um disco v em um hospedeiro cn d origem a um olho do tipo selvagem, mas que um disco cn em um hospedeiro v origina um olho cn ... implantes de discos v e cn se comportam da mesma forma ... em um hospedeiro claret (ca), ambos so autnomos; em hospedeiros st ou cd ambos so modificados para o tipo selvagem. Isso corrobora a concluso tirada dos transplantes recprocos entre v e cn ao indicar que as influncias hospedeiro-implante em v e cn so geneticamente e presumivelmente quimicamente estreitamente relacionadas.
imagos + v ou cn v imagos cn

olhos transplantados

larvas

larvas v ou cn v

larvas cn

+ discos transplantados

A. Desenvolvimento autnomo

B. Desenvolvimento noautnomo para v e cn

C. Desenvolvimento autnomo para cn

Figura 53. Esquema de experimentos de transplante de olhos em Drosophila mostrando o desenvolvimento autnomo e no-autnomo de alguns gentipos. Em A, desenvolvimento autnomo do mutante scarlet (st) e do tipo selvagem: disco scarlet implantado num receptor selvagem desenvolve pigmentao scarlet; disco selvagem implantado em receptor scarlet desenvolve pigmentao selvagem. Em B, desenvolvimento noautnomo dos mutantes vermilion (v) e cinnabar (cn); discos imaginais de olhos desses mutantes implantados em hospedeiros selvagens desenvolvem pigmentao selvagem. Em C, mostrado o desenvolvimento no autnomo do olho vermilion em hospedeiro cinnabar e o desenvolvimento autnomo do disco cinnabar em hospedeiro vermilion.

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O comportamento no-autnomo dos discos imaginais de olho vermilion e cinnabar sob certas condies requeria uma hiptese explicativa que no apenas os relacionasse, mas que tambm explicasse como essas mutaes produziam seus efeitos nos transplantes. Beadle e Ephrussi propuseram o seguinte: Uma hiptese simples, e a nosso ver, plausvel pode ajudar a responder essas questes. Essa hiptese assume que as substncias ca+, v+ e cn+ so produtos sucessivos em uma cadeia de reaes. As relaes entre estas substncias podem ser indicadas de um modo diagramtico simples da seguinte maneira: substncia ca+ substncia v+ substncia cn+. Neste esquema ns assumimos que ... o alelo mutante ca de alguma forma produz uma mudana que a cadeia de reaes interrompida em algum ponto antes da formao da substncia ca+; dessa forma uma mosca ca no possui as substncias ca+, v + e cn+ ...O alelo mutante cn interrompe a reao essencial para a transformao da substncia v+ em cn +; assim uma mosca cn no possui substncia cn+ mas tem as substncias ca+ e v+. Posteriormente eles descobriram que o gene claret no controlava nenhum passo na cadeia de reaes do pigmento, mas era um modificador da reao controlada pelos genes vermilion e cinnabar. Em outras palavras, Beadle e Ephrussi estavam propondo que os resultados podiam ser explicados assumindo o seguinte: a. os alelos selvagens dos dois genes controlam a produo de duas substncias especficas, chamadas v+ e cn+, ambas necessrias para a formao do pigmento marrom dos olhos; b. a substncia v+ precursora da substncia cn+; c. a mutao do gene bloqueia a formao da substncia correspondente. No entanto, apenas mais tarde ficou claro que as duas hipotticas substncias seriam, na verdade, precursores do pigmento. Essa hiptese sugeria que o desenvolvimento de um organismo poderia ser conseqncia de conjuntos de reaes qumicas seqenciais, controladas pelos genes. Apesar de parecer modesta para os padres atuais de desenvolvimento da Gentica, essa idia era bastante avanada para a poca, e foi ela que abriu caminho para as investigaes que se seguiram nessa linha, ao implantar em Beadle os germes da idia um

gene - uma enzima, a partir da qual iria florescer toda a Gentica Molecular. O passo seguinte a ser dado na investigao do papel dos genes vermilion e cinnabar era testar a hiptese proposta, o que demandava a identificao das substncias v+ e cn+ e comprovao de sua capacidade de corrigir os fentipos dos mutantes vermilion e cinnabar. A colaborao entre Beadle e Ephrussi (1935 e 1937) foi extremamente produtiva: eles publicaram 30 trabalhos nesse perodo, a maioria originais. Com isso, avanaram rapidamente em suas carreiras cientficas. Ephussi foi nomeado diretor de um novo laboratrio de Gentica na cole des Hautes tudes, onde liderava um laboratrio de Drosophila com 4 assistentes e alguns tcnicos. Bilogos jovens e brilhantes, como Jacques Monod, foram atrados para ali pelos trabalhos de transplantes. Ephrussi contratou o qumico orgnico Khouvine para trabalhar na qumica dos pigmentos do olho. Para Beadle, o trabalho com transplantes em D. melanogaster rendeu um cargo de professor assistente na Harvard University em 1936 e, no ano seguinte, o cargo de full professor na Stanford University. Com uma verba de 3 mil dlares da Rockefeler Foundation, Beadle contratou Edward Tatum, um jovem bioqumico de bactria, para trabalhar em tempo integral na caa aos precursores do pigmento do olho da D. melanogaster. Assim, os dois drosofilistas comearam a deslocar o enfoque do trabalho de transplante da Gentica clssica para a Bioqumica. Essa mudana de enfoque, que primeira vista pode parecer de menor importncia, iria provocar profundas transformaes na Gentica: o gene at ento uma entidade abstrata iria se transformar em uma entidade hipottica passvel de ser investigada. Com isso abria-se o caminho para a identificao da natureza molecular e da funo do gene. Mas quais foram essas mudanas to importantes no enfoque de trabalho? Na tentativa de se identificar os precursores do pigmento do olho, larvas mutantes passaram a ser injetadas ou alimentadas com possveis candidatos a precursor. A idia era a seguinte: se a substncia precursora for injetada ou fornecida na alimentao dos mutantes existe a possibilidade de alterao fenotpica do olho. Essas estratgias transformaram D. melanogaster em uma ferramenta bioqumica. Ephrussi coloca isso de modo

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bem sugestivo: ... moscas so como reagentes para a deteco de quantidades mnimas de substncias biologicamente ativas. Ephrussi e Khouvine passaram a usar uma estratgia tipo tiro no escuro em sua caa ao precursor; eles injetavam ou alimentavam mutantes com substncias que poderiam ser precursoras de pigmentos e verificavam se havia alterao fenotpica do olho. Beadle e Tatum trabalhavam com muito mais critrio tentando quantificar o precursor em extratos de moscas e construir linhagens de moscas onde pudessem ser detectadas quantidades mnimas de precursor. Ephrussi e Khouvine, usando uma das linhagens sensveis e o mtodo de ensaio biolgico desenvolvidos por Tatum descobriram, por acaso, que a substncia v+ era quimicamente relacionada ao triptofano. Essa descoberta permitiu que o qumico orgnico Adolf Butenandt, experiente em competies cientficas, e que estava trabalhando no sistema de pigmentao do olho da mariposa Ephestia khniela, percebesse que um caminho fcil e rpido para a identificao da substncia v+ seria testar cada uma das substncias qumicamente relacionadas ao triptofano. Assim, Butenandt, Weidel e Becker (1940) descobriram que a quinurenina era o composto com as propriedades esperadas para a substncia v+. Larvas vermilion alimentadas com quinurenina desenvolviam olhos selvagens. Nessa poca Tatum havia obtido cristais da substncia v+ e estava realizando sua identificao. Ser vencido pelos alemes foi uma plula amarga, especialmente para Tatum que havia trabalhado to duro para aperfeioar Drosophila como um reagente bioqumico. Mas essa era a regra do jogo no campo da bioqumica nutricional, onde anos de trabalho podiam ser superados por um golpe de sorte de um competidor. Era um jogo diferente do que os drosofilistas estavam acostumados, onde a reciprocidade, a abertura e a sensibilidade para se evitar competio acirrada eram a regra. Beadle rejeitava essa atitude derrube seu competidor se voc tiver oportunidade dos bioqumicos. Foi nesse contexto que Beadle concluiu ser necessrio um mtodo diferente para lidar diretamente com o problema da ao gnica. E ele estava certo, a identificao da substncia cn+ demandou enormes esforos e muitos anos de trabalho ao grupo de Butenandt.

A VIA BIOQUMICA DO PIGMENTO MARROM DO OLHO DA Drosophila melanogaster

A partir dos resultados dos laboratrios de Beadle e de Ephrussi foi possvel chegar hiptese de que os v+ e cn+ atuariam no controle da via bioqumica de sntese do pigmento marrom do olho da Drosophila, como mostrado no esquema abaixo:
Precursor Substncia v+

Substncia cn+ Pigmento marrom

Enzima A

Enzima B Gene cn+

Gene v+

A enzima A seria produzida pelo gene v+ e a enzima B seria produzida pelo gene cn+. Um mutante vermilion no seria capaz de produzir a enzima A e, portanto, no teria a substncia v+; ele produziria a enzima B, mas no teria substncia cn+, pois a enzima B no teria o que trans-formar nessa substncia. Com isso no haveria produo do pigmento marrom (omocromo) e os olhos, contendo apenas pigmento vermelho (pteridina), teriam colorao vermelho-clara e no selvagem. Um mutante cinnabar produziria a substncia + v normalmente, mas no teria a enzima B para transform-la na substncia cn+. Com isso no haveria produo do pigmento marrom e os olhos, como no caso anterior, conteriam apenas pigmento vermelho , tendo colorao vermelho-clara e no selvagem. No caso do transplante de disco imaginal vermilion em um hospedeiro cinnabar a situao seria a seguinte: ! o disco no produziria substncia v+, mas teria a enzima B; ! o hospedeiro produziria a substncia v+, mas no teria a enzima B para transform-la em substncia cn+; ! a substncia v+ produzida pelo hospedeiro se difundiria para o interior das clulas do disco implantado onde, por ao da enzima B, seria transformada em substncia cn+ e subseqentemente em pigmento marrom, o que faria o olho desenvolver pigmentao selvagem. Estudos posteriores nessa rea desvendaram a cadeia de reaes na via de sntese do pigmento marrom e mostraram que a hiptese original estava correta. (Fig. 54) Uma dvida que surge com freqncia sobre o papel do gene white na sntese dos pigmentos

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C NH2

COOH

Triptofano
Reao catalisada pelo produto do gene v+

Triptofano pirrolase
C O N C O C C NH2 H

COOH

do olho. Na verdade, o gene white est envolvido no na sntese, mas na distribuio dos pigmentos omocromo (marrom) e pterina (vermelho) no olho e em alguns outros rgos da mosca. A funo da protena codificada pelo alelo selvagem do gene white ainda desconhecida, mas acreditase que seja uma protena de membrana, envolvida no transporte dos precursores dos pigmentos do olho para dentro das clulas.

N-formilquinurenina

ELUCIDAO DAS VIAS METABLICAS

George W. Beadle, Edward L. Tatum e Boris Ephrussi foram lderes na busca de informaes sobre o modo de ao dos genes. Foram eles que introduziram um novo paradigma e lanaram a semente de um novo ramo dentro da Biologia: a Gentica Bioqumica. No final da dcada de 1930, havia uma considervel quantidade de informao sobre o metabolismo celular. A reao fundamental para toda as formas de vida C6H12O6 + 6O2 --> 6CO2 + 6H2O havia sido decifrada em dezenas de reaes separadas, cada uma controlada por uma enzima especfica. A elucidao desta via metablica demandou esforos de muitos cientistas por muitos anos. Um dos maiores problemas era a velocidade das reaes, as quais, com freqncia, ocorriam em fraes de segundo; uma reao terminava antes que o investigador pudesse detectar o seu incio. A maneira usual foi utilizar substncias qumicas (venenos de enzimas) que bloqueavam a ao de uma enzima especfica. O resultado, nesse caso, era o acmulo do substrato da enzima, o qual podia, ento, ser detectado e identificado. Considere, por exemplo, que uma via metablica nas clulas envolve uma modificao da molcula A na molcula B e, em seguida, de B em C e, assim, sucessivamente at a molcula Z, passando por todo o alfabeto. Assuma, tambm, que a modificao de A em B controlada pela enzima A-ase, de B em C pela enzima B-ase e, assim, sucessivamente. Tudo que sabemos no incio que a clula transforma a molcula A na molcula Z. Uma hiptese inicial que a converso pode ser conseguida por apenas uma enzima, em apenas uma reao.

C O NH2

C NH2

COOH

Quinurenina
Reao catalisada pelo produto do gene cn+

Quinurenina 3-hidroxilase
C O NH2 C C NH2

COOH

3-Hidroxiquinurenina

OH

C O N

C NH2

COOH

Fenoxazinone

C OH N O

C NH2

COOH

C C

C NH2

COOH

Xantomatina
N O OH

N O

COOH

Figura 54. Via de biossntese do pigmento omocromo a partir do aminocido triptofano, mostrando os locais onde atuam os produtos dos genes vermilion e cinnabar.

149

Vamos supor que foi usado o cianeto como primeiro veneno de enzima. Nessa situao, observamos que no h produo de Z, e que uma outra molcula, ainda no conhecida, M, detectada nas clulas. O que podemos concluir? A explicao mais plausvel que a converso de A em Z pela clula ocorre em pelo menos duas etapas: A convertido em M e, ento, M convertido em Z. O cianeto estaria bloqueando a ao da enzima que catalisa a transformao de M num produto subseqente. Outros venenos poderiam ser tentados e com o tempo seria possvel saber mais e mais sobre o metabolismo normal, por meio da interferncia dessas drogas nas engrenagens bioqumicas da clula. Os estudos iniciais de Beadle e Ephrussi sobre a maneira como os genes para a cor dos olhos de D. melanogaster produziam seus efeitos indicavam que a ao do gene poderia ser mediada por enzimas. Foi descoberto o suficiente para se compreender que a hiptese um gene - uma enzima poderia ser uma abordagem promissora. No entanto, as primeiras tentativas de usar D. melanogaster como reagente bioqumico mostraram que esse sistema era muito complexo para se testar aquela hiptese e, pela primeira vez, aquele animal nobre deixou os geneticistas sem rumo. Ento, uma postura experimental antiga foi invocada: se os experimentos no podem ser feitos em uma espcie, procure um outra que sirva a seus propsitos.

genes que governam compostos bioqumicos conhecidos, e no a genes para substncias desconhecidas que requereriam anos de trabalho para serem identificadas, como era o caso de quase todas as mutaes conhecidas na poca. Para por em prtica essa idia seria necessrio um organismo que pudesse ser submetido a testes genticos e que crescesse em um meio de cultura quimicamente definido. Beadle conhecia tal organismo. Ele ouvira falar de Neurospora crassa, o bolor vermelho do po, quando ainda era estudante de graduao em Cornell, em uma palestra ministrada por B. O. Dodge. Dodge teve um papel importante na histria da N. crassa; foi ele quem descobriu que os ascsporos desse fungo s germinam aps terem sido submetidos ao calor. Com isso o ciclo de vida pde ser completado em laboratrio e o organismo submetido a estudos bsicos de Gentica. No entanto, os requisitos nutricionais de N. crassa ainda eram desconhecidos em 1940. No laboratrio de Dodge, esse fungo era cultivado em gar nutritivo, isto , complementado com diversas substncias orgnicas. Foi Tatum quem logo mostrou que Neurospora podia crescer em um meio bastante simples, composto por acar, sais minerias e um nico fator de crescimento, a vitamina biotina. Esse meio ficou conhecido como meio mnimo. Ciclo de vida de Neurospora A fase vegetativa de Neurospora foi descrita inicialmente por microbiologistas franceses, cerca de um sculo antes do trabalho de Beadle e Tatum. Esse fungo chamou a ateno dos pesquisadores quando, em 1842, em um vero muito quente e mido, os pes das padarias de Paris se deterioraram pelo crescimento de grande quantidade de um bolor alaranjado. Foi, ento, constituda uma comisso pelo Ministrio da Guerra francs para determinar as causas da infeco e fazer as recomendaes devidas para evit-la. O resultado desse estudo foi a descrio de diversas caractersticas do fungo, tais como, tipo de colnia, forma dos miclios, dos conidiforos e dos condios do bolor vermelho do po. Um segundo estudo cientfico de Neurospora foi feito pelo botnico holands F. A. F. C. Went no comeo do sculo XX. Durante o perodo em que trabalhou no famoso Jardim Botnico de

NEUROSPORA CRASSA E A GENTICA BIOQUMICA

A musa inspiradora da estratgia que iria revolucionar no apenas a Gentica mas toda a Biologia desceu inesperadamente em Beadle enquanto ele estava sentado, um dia, no incio de 1941, assistindo uma aula que Tatum ministrava em um curso sobre bioqumica comparada. Horowitz relata como Beadle contava essa histria: Nessa aula Beets [apelido de Beadle] aprendeu que os microorganismos diferem quanto a suas necessidades nutricionais, apesar de todos eles compartilharem a mesma bioqumica bsica. Se essas diferenas so de origem gentica, ele pensou, seria possvel induzir mutaes gnicas que iriam produzir novas necessidades nutricionais no organismo testado. Se bem sucedida, essa estratgia levaria diretamente aos

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Buitzenjorg (atualmente, Borgor) na Indonsia, na poca uma colnia da Holanda, Went conheceu o oncham, uma espcie de bolo alaranjado comumente encontrado nas feiras livres de Java. Esses bolos eram produzidos pelos nativos pela inoculao de um fungo em prensados de pasta de amendoim ou de soja que resultavam da extrao de leo. Os bolos alaranjados eram apetitosos e altamente nutritivos, seu sabor assemelhava-se ao do cogumelo champignon. A preparao do oncham um costume que persiste at hoje em certas regies de Java. A prtica de produo do oncham chamou a ateno do botnico holands, que, na virada do sculo, isolou o fungo e passou a utiliz-lo em experimentos cientficos. Foi ele quem descreveu o fungo N. crassa e seu mtodo de cultivo, tendoo utilizado tambm em uma srie de experimentos sobre os efeitos de diversos substratos em enzimas como a trealase, a invertase e a tirosinase. Todas essas observaes iniciais sobre N. crassa foram feitas usando a fase vegetativa do organismo e os esporos produzidos assexuadamente, chamados condios (esporos vegetativos). As caractersticas da fase sexuada do ciclo s se tornaram conhecidas na segunda dcada do sculo XX, quando Dodge descobriu que os esporos (ascsporos) produzidos sexuadamente s germinavam aps terem sido submetidos ao calor. N. crassa, diferentemente dos animais e das plantas em geral, um organismo haplide. Em sua fase vegetativa normal o organismo constitudo por filamentos (hifas) entrelaados que, em conjunto, formam uma estrutura esponjosa, o miclio. As hifas so segmentadas e cada segmento contm, em geral, alguns ncleos haplides idnticos. No entanto, hifas de indivduos diferentes, crescendo em estreita proximidade, podem, ocasionalmente, se fundir, formando hifas heterocariticas. Os ncleos das hifas fundidas no se unem, mantendo-se separados. As hifas heterocariticas, no entanto, originam por diviso mittica de seus ncleos haplides novas hifas heterocariticas. A reproduo assexuada pode acontecer de duas formas: por crescimento e fragmentao de hifas, e pela formao de um tipo especial de esporo haplde, o condio. A germinao de um condio d origem a um novo miclio geneticamente idntico ao tipo parental. (Fig. 55)

Um miclio pode formar corpos de frutificao imaturos (protoperitcios) contendo ncleos haplides maternos e filamentos sexuais especiais, chamados tricginos, que se extendem para fora do corpo de frutificao. Quando um fragmento de hifa ou condio de um sexo (A ou a) entra em contato com um tricgino do sexo oposto (a ou A) ele penetra no corpo de frutificao, sofre inmeras divises mitticas e, cada ncleo originado se funde com um ncleo materno. Formam-se, assim, zigotos diplides que ficam contidos no interior de bolsas ovais denominadas ascos. Um corpo de frutificao de Neurospora pode conter at 300 ascos. O zigoto de cada asco sofre meiose imediatamente, originando quatro ncleos haplides, que sofrem, ento, uma mitose. No final, formam-se, portanto, oito clulas que se diferenciam em esporos (ascsporos), os quais ficam arranjados em ordem no interior do asco. Finalmente, os ascsporos se libertam: quatro so do tipo sexual A e quatro, do tipo a. O ciclo de Neurospora crassa, desde a germinao de um esporo at a produo de novos esporos pelo novo miclio, se completa em cerca de duas semanas. Os ascsporos de N. crassa so grandes o suficiente para serem isolados manualmente, sem necessidade do uso de micromanipulador. Dessa forma, os quatro produtos de uma meiose podem ser facilmente recuperados e analisados individualmente. A ordenao dos esporos resultantes em um asco heterozigtico permite a determinao imediata da ocorrncia ou no de permutao entre um dado gene e o centrmero.

O TRABALHO DE BEADLE ETATUM EM NEUROSPORA

A idia fundamental de Beadle e Tatum (1941) era que as mutaes alteravam os genes tornandoos incapazes de produzir enzimas. Com isso, o organismo no podia realizar a reao qumica correspondente e, como conseqncia, expressava o fentipo mutante. No caso em que a reao bloqueada fosse essencial ao organismo, o mutante no sobreviveria, ou seja, a mutao seria letal. Para testar essa hiptese, Beadle e Tatum comearam tentando induzir mutaes letais em Neurospora crassa, por meio de radiao, e estudar seus efeitos bioqumicos. Isso parece,

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Condios

Condios

Miclio (N) do tipo A

Fec

o unda

de A

Fecu

nda

o d

ea

Miclio (N) do tipo a

Protoperitcio do tipo A

Resultado da primeira diviso da meiose

Asco com oito Asco com oito ascsporos ascsporos

Figura 55. Esquema do ciclo de vida do fungo Neurospora crassa. O corpo vegetativo do fungo consiste de filamentos segmentados chamados hifas. Condios so esporos assexuados que podem se desenvolver diretamente em um novo miclio ou podem fertilizar clulas de organismos de sexo oposto. O protoperitcio se desenvolve em uma estrutura na qual numerosas clulas sofrem meiose originando ascos com ascsporos. (De acordo com Hartl, 1994)

primeira vista, um problema insolvel, uma vez que: se o letal mata o indivduo, ele no pode ser estudado. Beadle e Tatum resolveram o problema com uma das mais inovativas e produtivas linhas de experimentao do sculo XX; por isso eles ganharam, em 1958, o Prmio Nobel para Medicina e Fisiologia. Beadle e Tatum concluram que os inmeros compostos orgnicos que constituem as clulas de Neurospora crassa so produzidos a partir de ar, gua, sais inorgnicos, sacarose e a vitamina biotina, pois o fungo se desenvolve normalmente apenas com esses nutrientes. Assim, a partir dessa matria prima simples, o fungo capaz de sintetizar todos os tipos de aminocidos, de protenas, de gorduras, de carboidratos, de cidos nuclicos, de vitaminas e de outras substncias presentes em suas clulas.

Como um exemplo dos muitos experimentos feitos por Beadle e Tatum, vamos discutir aqueles referentes sntese do aminocido arginina. A hiptese era que genes especficos controlam a produo de enzimas especficas responsveis por reaes que levam formao da arginina. Presumivelmente esses genes poderiam mutar para formas allicas incapazes de fazer as enzimas. Como arginina essencial para a vida da N. crassa, pois entra na formao das protenas, tais mutaes seriam letais. Beadle e Tatum desenvolveram, ento, um mtodo para a identificao de mutantes letais relacionados sntese de arginina e para o crescimento e a manuteno desses mutantes. Isto pode parecer impossvel, especialmente quando levamos em considerao que Neurospora crassa haplide na maior parte de seu ciclo de vida e 152

Germinao do esporo

Ncleo do zigoto (2n)

Protoperitcio do tipo a

Resultado da segunda diviso da meiose

Germinao do esporo

que, portanto, qualquer mutao que impedisse a sntese de arginina seria letal. Como fazer com que esses mutantes sobrevivessem de modo que pudessem ser estudados? Esse era o grande desafio. Primeiro, poderia se usado raio -X para induzir mutaes. Eles assumiram que todo tipo de mutao poderia ser produzida, mas que, dentre elas, algumas poderiam estar envolvidas na produo da arginina. Quando lembramos o quanto rara uma mutao especfica, a possibilidade de obteno da mutantes desejados pode parecer extremamente pequena. Mas isso pode ser resolvido, aumentado-se o nmero de esporos irradiados. Os esporos irradiados poderiam ser colocados em meio mnimo; parte deles iria crescer, seriam esporos selvagens ou mutantes de genes noessenciais, ou seja, que no impediam que a N. crassa sintetizasse todas suas substncias essenciais a partir dos poucos produtos qumicos do meio mnimo. Outros esporos no iriam germinar, e entre eles poderiam estar mutantes bioqumicos que no conseguiam produzir as enzimas necessrias para o crescimento e desenvolvimento normal. Alguns desses ltimos poderiam ser mutantes de genes envolvidos na sntese da arginina. Como poderiam ser encontrados? Isso era realmente um problema, pois esses esporos no germinariam em meio mnimo e, assim, estavam, em termos prticos, mortos. A soluo encontrada por Beadle e Tatum foi genial na sua simplicidade e eficincia. Se esporos no podiam sintetizar sua prpira arginina, porque no d-la a eles? E isto foi exatamente o que eles fizeram. Os esporos irradiados eram semeados em meio mnimo suplementado com arginina. Como esperado, parte dos esporos no cresceu; deveriam ser aqueles com defeitos que no eram corrigidos pela arginina adicionada ao meio. No meio suplementado era esperado que crescessem os selvagens, os portadores de mutaes noletais e os mutantes letais de genes envolvidos na sntese de arginina. Mas como distingui-los? Beadle e Tatum transferiram parte de cada miclio que havia crescido em meio suplementado com arginina para meio mnimo. Aqueles que crescessem tambm em meio mnimo seriam ou selvagens ou portadores de mutaes no-letais. J os que haviam crescido em meio suplementado com arginina, mas no em meio mnimo, deveriam ser os mutantes procurados. (Fig. 56)

O prximo e crtico passo na anlise era ter certeza que o defeito dos esporos era realmente herdado. No se poderia concluir que um evento de mutao fosse a causa de os esporos letais crescerem em arginina,. Procedeu-se, ento, anlise gentica.

FUNDAMENTOS DA GENTICA DE NEUROSPORA CRASSA

O ciclo de vida do fungo Neurospora crassa torna-o ideal para alguns tipos de anlise gentica. As colnias so haplides por quase toda a vida do organismo. H dois tipos sexuais, A e a, que no podem ser distinguidos, exceto pelo seu com0portamento sexual. Se colnias de A e a entrarem em contato, parte de seus ncleos se fundem originando zigotos diplides. A meiose ocorre imediatamente aps a formao do zigoto, originando quatro ncleos haplides. Estes se dividem, por mitose, e produzem oito esporos haplides. Os esporos ficam arranjados no interior do asco em ordem linear, que reflete as duas divises da meiose e a nica mitose. Os ascos podem ser abertos sob um estereomicroscpio e esporos removidos e colocados em meio de cultura. Portanto, possvel obter todos os produtos da meiose de apenas um zigoto. Para determinar se uma caracterstica de N. crassa hereditria, o miclio portador cruzado com uma linhagem normal (selvagem) do sexo oposto. Os esporos so, ento, isolados e colocados para se desenvolver e gerar miclios-filhos. Se verificarmos que metade dos esporos do tipo selvagem e metade apresenta a caracterstica alterada, pode-se concluir que a caracterstica devida a um alelo mutante. Por exemplo, suponha que a N. crassa selvagem tenha um gene B, que seja necessrio para a sntese de arginina, e que a radiao tenha causado uma mutao de B para b. Esta ltima forma incapaz de ter qualquer papel essencial na sntese de arginina. O cruzamento de um fungo selvagem (B) com o mutante b produzir um heterozigoto, que ao sofrer meiose originar quatro esporos B e quatro b. Com esse procedimento, Beadle e Tatum puderam demonstrar que as diversas linhages de Neurospora que estavam sendo obtidas em seus experimentos de radiao eram, realmente, decorrentes de mutaes gnicas. (Tab. 1)

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Raios X ou raios ultravioletas

Miclio tipo selvagem

Condios (esporos produzidos de modo assexuado

Cruzado com tipo selvagem do sexo oposto

Meio Meio vitaminas aminocidos

Meio Meio mnimo completo

Esporo Asco 17 18 Tabela 1. Dados originais de Beadle e Tatum (1941) referentes a uma anlise dos esporos de 7 ascos produzidos num cruzamento entre uma linhagem mutante dependente de piridoxal (vitamina B6) e outra selvagem. Os ascsporos isolados ordenadamente de cada asco foram colocados para germinar em meio contendo a vitamina, onde cresceram tanto mutantes quanto selvagens. Em seguida, eram transferidas para meio mnimo, para a identificao dos mutantes, que no crescem nesse tipo de meio. 19 20 22 23 24

1 N

pdx pdx pdx N N pdx N N * N * N * N

N = crescimento normal em meio mnimo; pdx = no cresceu em meio mnimo; * = esporos cujas posies foram misturadas; desses, dois germinaram e eram mutantes; - = esporos que no germinaram.

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Figura 56. Representao esquemtica do mtodo para deteco de mutantes bioqumicos em Neurospora crassa. O mutante, nesse caso, no consegue crescer em meio mnimo ou em meio suplementado com aminocidos, mas cresce em meio mnimo suplementado com vitaminas. Ele apresenta uma mutao em um gene que controla uma das etapas da via de biossntese de uma vitamina. (Original de Beadle, reproduzido de Sinnot et al., 1958)

Corpo de frutificao Esporo produzido de modo sexuado Meio completo com vitaminas, aminocidos etc. Meio mnimo
4 5 N 6 7 8 N N - pdx pdx N pdx N N pdx pdx pdx pdx pdx pdx

Foram obtidos diversos mutantes que dependiam de uma mesma substncia para crescer. Isso levantou um outro tipo de questo: seriam essas linhagens genticas idnticas, ou teriam mutaes em genes diferentes envolvidos na produo de uma mesma substncia? Por exemplo, pode-se imaginar diversos genes envolvidos na sntese da arginina: A1, A2, A3, A4, etc. Uma mutao em qualquer desses genes poderia originar alelos (a1, a2, etc.) que bloqueariam a produo de arginina. O resultado seria um mesmo fentipo: incapacidade de crescimento em meio mnimo sem arginina. Por meio de cruzamentos entre mutantes de mesmo fentipo seria possvel distinguir entre um caso de mutantes de genes diferentes ou de mutantes de um mesmo gene. Se apenas um gene estivesse envolvido, o cruzamento entre as duas linhagens produziria esporos incapazes de crescer em meio sem arginina. Alternativamente, caso se tratasse de mutantes de genes diferentes, alguns esporos iriam crescer como colnias selvagens, pela razo descrita a seguir. Considere um cruzamento entre dois mutantes diferentes a1 X a2. Cada um dos mutantes teria o alelo normal do outro gene: a linhagem mutante a1 teria A2 e a linhagem mutante a2 teria A1. Assim, o cruzamento seria entre a1A2 e A1a2, o que produziria zigotos diplides com o gentipo A1a1 A2a2. Caso esses genes estivessem em cromossomos diferentes, eles se segregariam independentemente, originando os seguintes tipos de esporo: 1/4 A1A2 (crescem em meio mnimo); 1/4 A1a2 (requerem arginina, pois a2 no funciona); 1/4 a1A2 (requerem arginina, pois a1 no funciona); 1/4 a1a2 (requerem arginina, pois nenhum dos genes funciona). Se, por acaso, os dois genes estivessem em um mesmo cromossomo, as freqncias dos 4 tipos de esporos iriam depender da quantidade de permutao entre eles.

entre esses mutantes na produo da arginina. A estratgia foi partir do que j era conhecido sobre a sntese desse aminocido em outros organismos. Em 1932, o bioqumico Hans A. Krebs descobriu que, em algumas clulas de vertebrados, arginina formada a partir de citrulina, e que citrulina formada a partir de ornitina; o precursor da ornitina, no entanto, ainda era desconhecido. Se N. crassa tivesse uma via metablica similar, seria possvel determinar como as sete linhagens mutantes estavam envolvidas na cadeia de reaes. Isso poderia ser feito verificando-se qual, se algum, dos sete mutantes crescia em meio suplementado com citrulina ou com ornitina no lugar de arginina. Muitos experimentos foram feitos. Quatro das linhagens mutantes cresceram em meios suplementados com qualquer uma das trs substncias. Isto sugeriu que essas quatro mutaes afetavam genes envolvidos em reaes anteriores ao estgio de ornitina. Se ornitina era fornecida aos mutantes, as etapas enzimticas seguintes, sendo normais, poderiam continuar at a produo da arginina. Duas das linhagens no cresceram em meio suplementado apenas com ornitina, mas cresceram normalmente quando citrulina ou arginina foram adicionadas ao meio. Nesses casos, concluiu-se que o bloqueio era entre ornitina e citrulina. Finalmente, uma das linhagens cresceu apenas em meio suplementado com arginina. Isto sugeriu que, neste caso, alguma enzima entre citrulina e arginina era deficiente ou defeituosa. Ento, Beadle e Tatum foram capazes de concluir que, para Neurospora crassa sintetizar arginina, era necessria uma srie de reaes controladas enzimaticamente, e que dois dos intermedirios eram ornitina e citrulina. A hiptese que a funo dos genes era controlar a produo de enzimas especficas ganhou apoio experimental. No se poderia concluir, no entanto, que essa seria a nica coisa que os genes fariam. Da mesma forma que Sutton ligou a Citologia e Gentica no incio do sculo XX. Beadle e ESTABELECENDO A SEQNCIA Tatum ligaram efetivamente a Gentica BioDE ATUAO DOS GENES qumica quarenta anos mais tarde. O tipo de expeNo incio de seus experimentos, Beadle e rimentao que eles desenvolveram foi usada Tatum descobriram 7 mutantes que requeriam imediatamente por numerosos investigadores de meio suplementado com arginina para seu cresci- fungos, leveduras e bactrias. Esta abordagem mento normal. Foi investigada, ento, a relao levou diretamente Biologia Molecular de hoje. 155

Enquanto tudo isto estava sendo feito, outra estratgia para se estudar gentica em nvel molecular estava a caminho. Foi essa segunda linha de investigao que levou identificao do gene como sendo DNA, trazendo a ns a formulao do paradigma atual da Gentica por Watson e Crick em 1953.
Bibliografia utilizada na complementao deste texto: CARLSON , E. A. The gene: a critical history. Filadlfia: W. B. Saunders., 1966. HARTL, D. L. Essential Genetics. Massachusetts: Jones and Bartlett, 1994.

HOROWITZ , N. H. George Wells Beadle (1903-1989). Genetics 124, 1-6, 1990. JENKINS , J. B. Genetics 2 ed. Boston: Houghton Mifflin, 1979. KOHLER, R. E. Lords of the fly. Chicago: The University of Chicago,1994. PERKINS, D. D. Neurospora: The Organism Behind the Molecular Revolution. Genetics 130, 687-701, 1992. SINNOTT, E. W., DUNN, L. C. & DOBZHANSKY, TH. Principles of Genetics. 5 ed. New York: McGraw Hill, 1958. STRICKBERGER, M. W. Genetics. 2 ed. New York: MacMillan, 1976.

EXERCCIOS
PARTE A: REVENDO CONCEITOS BSICOS
Complete as frases de 1 a 4 com uma das alternativas abaixo: (a) alcaptonria (c) enzima (b) disco imaginal (d) ginandromorfo 1. Uma substncia de natureza protica que regula a velocidade de uma reao metablica chamada ( ). 2. Um organismo que possui parte do corpo formado por clulas femininas e parte por clulas masculinas um ( ). 3. ( ) uma doena gentica em que o indivduo no consegue degradar o cido homogentsico e o excreta na urina. 4. Um grupo de clulas que se mantm indiferenciado nas larvas e que, durante a metamorfose, origina uma estrutura do corpo do inseto adulto chamado ( ). Complete as frases de 5 a 10 com um das alternativas abaixo: (a) asco (c) condio (e) meio mnimo (b) ascsporo (d) hifa (f) miclio 5. ( ) um tipo de esporo que se forma durante a fase assexuada do ciclo de vida de certos fungos. 6. ( ) um tipo de esporo que se forma durante a fase sexuada do ciclo de vida de fungos ascomicetos. 7. Cada um dos filamentos celulares que constituem o corpo de um fungo chamado ( ). 8. O conjunto mais simples de nutrientes que permite o desenvolvimento de um determinado microorganismo chamado ( ). 9. O conjunto de filamentos celulares que constitui o corpo de um fungo chamado ( ). 10. A bolsa, em forma de saco geralmente alongado, onde ficam alojados os esporos, que se formam durante o ciclo sexuado de um fungo ascomiceto chamado ( ).

PARTE B: L IGANDO CONCEITOS

E FATOS

Utilize as alternativas abaixo para responder as questes de 11 a 13: (a). Beadle e Ephrussi (c). Morgan (b). Garrod (d). Sturtevant 11. A idia de que os genes atuam controlando reaes qumicas do metabolismo foi proposta originalmente por ( ), no comeo do sculo. 12. Foi ( ) quem, a partir da descoberta de um ginandromorfo particular, aventou a hiptese de que a colorao vermilion do olho da Drosophila melanogaster no era uma caracterstica autnoma. Para cada uma das frases de 13 a 18 escreva no parnteses a letra V, caso a afirmao seja verdadeira, ou a letra F, no caso dela ser falsa. 13. A localizao de um disco imaginal implantado no corpo de uma larva determina o tipo de estrutura que ele originar. ( ) 14. A hiptese um gene - uma enzima postula que os genes atuam controlando a sntese das enzimas. ( ) 15. Diversas vias metablicas foram elucidadas por meio do uso de venenos que bloqueavam a ao de enzimas especficas. ( )

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16. Neurospora crassa foi um material ideal para a elucidao do modo de ao dos genes por apresentar, naturalmente, maior nmero de mutantes visveis que D. melanogaster. ( ) 17. Neurospora crassa um organismo que apresenta alternncia de geraes haplide e diplide em seu ciclo de vida. ( ) 18. Beadle e Tatum conseguiam manter mutantes incapazes de produzir substncias essencias vida, acrescentando essas substncias ao meio de cultura. ( )

as duas divises da meiose e a ltima mitose? 31. Qual o procedimento usado para verificar se mutantes que dependem de uma mesma substncia para crescer tm mutaes em um mesmo gene ou em genes diferentes? 32. Determine as propores genotpicas e fenotpicas (olhos selvagens ou vermelhoclaros) nas geraes F1 e F2 de um cruzamento de Drosophila melanogaster entre fmeas mutantes vermilion e machos mutantes cinnabar? (Lembre-se que o gene vermilion ligado ao sexo, enquanto o cinnabar autossmico.) 33. Qual o resultado esperado no cruzamento entre dois mutantes que dependem de uma mesma substncia para crescer, no caso de mutaes: a. no mesmo gene; b. em genes diferentes localizados em um mesmo cromossomo; c. em genes localizados em cromossomos diferentes? 34. O cruzamento de dois camundongos albinos (albinismo recessivo), provenientes de laboratrios diferentes, produziu 100% de descendentes selvagens. Explique como isso possvel. 35. Foram isolados cinco mutantes de fungo que necessitam de um composto G para crescer. O precursor e os produtos intermedirios da via metablica biossinttica que leva ao produto final G so conhecidos. Esses compostos foram fornecidos para os mutantes a fim de verificar se havia (+) ou no (-) crescimento na presena de cada composto. Os resultados esto apresentados na tabela a seguir: Composto fornecido no meio Mutantes A 1 2 3 4 5 + B + + + C + + D + + + + E G + + + + +

PARTE C: QUESTES PARA PENSAR E DISCUTIR

19. O que levou Garrod a suspeitar que a alcaptonria fosse hereditria? 20. Que tipo de resultado levou Sturtevant a suspeitar que a mutao vermilion em Drosophila melanogaster no tinha desenvolvimento autnomo? 21. Com que objetivo Beadle e Ephrussi iniciaram as pesquisas de transplante de discos imaginais em Drosophila melanogaster ? 22. Como se comporta um disco vermilion ou cinnabar transplantado para um hospedeiro selvagem? E um disco selvagem transplantado para um hospedeiro vermilion ou cinnabar? 23. Como se comporta um disco vermilion transplantado para um hospedeiro cinnabar? E um disco cinnabar transplantado para um hospedeiro vermilion? 24. Qual foi a hiptese levantada por Beadle e Ephrussi para explicar os resultados obtidos nos transplantes envolvendo os mutantes vermilion e cinnabar? 25. Que caractersticas da Neurospora crassa fizeram com que Beadle a escolhesse como material para o estudo do modo de ao dos genes? 26. Qual era a idia fundamental do trabalho de Beadle e Tatum em Neurospora crassa? 27. Como Beadle e Tatum puderam estudar mutaes letais induzidas por raio X? 28. Como Beadle e Tatum identificavam e mantinham mutantes incapazes de sintetizar arginina? 29. Como se demonstrou que os defeitos dos esporos irradiados eram de natureza gentica? 30. De que maneira a ordenao dos esporos de Neurospora crassa no interior do asco reflete

a. Qual a ordem dos compostos na via metablica? b. Em qual passo da via metablica cada mutante apresenta bloqueio?

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