n

Facultad de Medicina Humana

ASIGNATURA

BIOLOGIA CELULAR

TEMA

MICROSCOPIA, TECNICAS DE COLORACIN,

PREPARCIN EN FRESCO Y EN SECO

DOCENTE

Dr. NESTOR RODRIGUEZ ALAYO

ALUMNOS

HINOSTROZA HUAMAN ADLER

CICLO

LAMBAYEQUE, 03 DE SEPTIEMBRE DEL 2011

CONTENIDO I. INTRODUCCIN

II.

FUNDAMENTO TERICO

III.

OBJETIVOS

IV.

MATERIALES

V.

PROCEDIMIENTO

VI.

RESULTADOS

VII.

DISCUSIN

VIII.

CONCLUSIONES

IX.

CUESTIONARIO

X.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

I.

INTRODUCCIN

El hombre en

su afn de llegar siempre ms lejos en la investigacin de la

naturaleza de lo que los lmites de sus rganos sensoriales le imponen, el hombre ha construido mltiples instrumentos que le han permitido acceder all donde los sentidos no podan penetrar. El microscopio hizo posible conocer los mundos de dimensiones nfimas, entre ellos la clula, base de la vida y por lo tanto poder diferenciar una clula normal de una patolgica El microscopio es un instrumento fundamental en cualquier laboratorio de anlisis biolgico, como en los anlisis bioqumicos y microbiolgicos. El trmino microscopio procede de micros: pequeo y scope: observar. Su descubrimiento se debe a Jean Faber, miembro de la antigua academia de los Lincel (1624), el holands Antoni Van Leewenhoek (1632 1723); fue el verdadero impulsador de la microscopa, construy microscopios con lentes muy convexos y realiz observaciones especiales, adquiriendo gran renombre como anatomista y fisilogo.

El microscopio ha sido una de las herramientas esenciales para el estudio de las ciencias de la vida. Abri el ojo humano hacia una nueva dimensin. Tanto es as que actualmente, el microscopio nos permite observar el "corazn" mismo de la materia: los tomos

MICROSCOPA II. FUNDAMENTO TERICO

MICROSCOPIO COMPUESTO Un microscopio compuesto es un microscopio ptico que se compone de una serie de lentes para conseguir imgenes aumentadas de objetos diminutos que por su extrema pequeez no son visibles al ojo humano. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas:

EL SISTEMA PTICO. Est constituido por: Objetivos: sistema de lentes convergentes que actua como una lente que se encuentran montados en el revlver. Lo usual es que cada microscopio tenga cuatro objetivos de diferentes aumentos (4x, 10x, 40x, 100x) los que se clasifican en: Objetivos en seco: en los que el aire se interpone entre la lente y la preparacin Objetivos de inmersin: en el cual un lquido (aceite) se interpone entre la lente y la preparacin. Ocular: El ocular es una lente convergente que recoge la imagen intermedia producida por el objetivo y forma una nueva imagen virtual, derecha, y amplificada un cierto nmero de veces (x veces, segn se indica en el propio ocular). Los aumentos ms comunes son 10x y 16x.

EL SISTEMA DE ILUMINACIN comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del microscopio. Condensador: sistemas de lentes convergentes que concentra el haz de luz sobre la preparacin Diafragma: Sirve para regular la cantidad de luz que llega a la preparacin. Fuente de luz: Puede ser natural o artificial (ampolleta) Portafiltro: Opcional, sirve para colocar filtro de distintos colores para mejorar el contraste.

EL SISTEMA MECNICO est constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque. La parte mecnica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina, el carro, el tornillo macromtrico y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la parte ptica y de iluminacin; adems, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto. El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular. Tubo ptico. Tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar las molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares. El revlver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, lo que se nota por el ruido de un pin que lo fija. La columna, llamada tambin asa o brazo, es una pieza colocada en la parte posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo inferior se adapta al pie.

 La platina. Es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje ptico del tubo, que permite el paso de los rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmvil; en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.

Carro. Es un dispositivo, colocado sobre la platina, que permite deslizar la preparacin con movimiento ortogonal de adelante hacia atrs y de derecha a izquierda.

El tornillo macromtrico. Girando este tornillo, asciende o desciende

el tubo del microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a una

cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin.

El tornillo micromtrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y ntido de la preparacin. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm., que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos. TIPOS DE MICROSCOPIOS Existen diversas clases de microscopios, segn la naturaleza de los sistemas de luz, y otros accesorios utilizados para obtener las imgenes. EL
MICROSCOPIO COMPUESTO

u ptico utiliza lentes para ampliar las

imgenes de los objetos observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de onda de la luz visible que

impone limitaciones. El microscopio ptico puede ser monocular, y consta de un solo tubo. La observacin en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observacin se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepcin de la imagen, ms cmoda la observacin y se perciben con mayor nitidez los detalles.

 MICROSCOPIO

ESTEREOSCPICO:

el microscopio estereoscpico hace

posible la visin tridimensional de los objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas para observaciones que requieren pequeos aumentos. El ptimo de visin estereoscpica se encuentra entre 2 y 40X o aumento total del microscopio.

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA: La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas sustancias de emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energticas. El tratamiento del material biolgico con flurocromos facilita la observacin al microscopio.

 MICROSCOPIO

DE CONTRASTE DE FASES :

es til para poner de manifiesto

diferentes recorridos pticos debidos a zonas de distinto ndice de refraccin o grosor, cuando estas diferencias son demasiados pequeas para ser vistas con el microscopio normal. La microscopia de contraste de fases resulta muy til para el examen de clulas y tejidos transparentes vivos, cristales, plsticos, emulsiones, etc. El microscopio de fases tiene un disco anular en el condensador para limitar la luz a un cono hueco sinttico, con el que queda enfocado en el objetivo como un anillo brillante de luz si no hay ninguna preparacin. Se utiliza cuando se necesitan ver objetos incoloros. Si la amplitud de la luz que incide apenas cambia, se obtiene un contraste muy malo. Se usa entonces una iluminacin por varios sitios y se miden diferencias de fase para poder "ver" el objeto.

MICROSCOPIO

ELECTRNICO :

es aqul que utiliza electrones en lugar de

fotones o luz visible para formar imgenes de objetos diminutos. Los microscopios electrnicos permiten alcanzar una capacidad de aumento

muy superior a los microscopios convencionales (hasta 500.000 aumentos comparados con los 1000 de los mejores microscopios pticos) debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones.

Comparacin del microscopio de luz, electrnico de transmisin y electrnico de barrido

III.

OBJETIVOS Reconocer las partes del microscopio ptico. Sealar las partes del mismo en el dibujo adjunto

MEDICIN A TRAVS DEL MICROSCOPIO

Para calcular el aumento que est proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por ejemplo, si estamos utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliacin con que estamos viendo la muestra ser: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto est ampliada 450 veces, tambin expresado como 450 dimetros.

MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO

El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran daarlo. Mientras no est en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien cubrirlo con una bolsa plstica o campana de vidrio.

Las partes mecnicas deben limpiarse con un pao suave; en algunos casos, ste se puede humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro, parafina, etc. Que hayan cado sobre las citadas partes.

La limpieza de las partes pticas requiere precauciones especiales. Para ello debe emplearse papel "limpiante" que expiden las casas distribuidoras de material de laboratorio. Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los dedos; las huellas digitales perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas.

Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel "limpiante" con ter y luego pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario. El aceite

de cedro que queda sobre la lente frontal del objetivo de inmersin debe quitarse inmediatamente despus de finalizada la observacin. Para ello se puede pasar el papel "limpialentes" impregnado con una gota de xilol. Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado hasta el tope; el condensador debe estar en su posicin ms baja, para evitar que tropiece con alguno de los objetivos. Gurdese en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la formacin de hongos. Ciertos cidos y otras sustancias qumicas que producen emanaciones fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio.

PROCEDIMIENTO DE LA PRCTICA N 1

OBJETIVOS:

Manejar adecuadamente los instrumentos y materiales de laboratorio Conocer las diferentes funciones de cada uno de estos materiales Dar el uso debido uso del microscopio conociendo cada uno de sus partes Mediante observaciones en el microscopio observar los diferentes

aumentos de las muestras en fresco y en seco

MATERIALES:

Lamina portaobjetos

Laminilla cubreobjetos

Microscopio compuesto

Agua estancada

Sarro dental:

Hisopo

Safranina :

Pipetas pasteur

Eosina

Agua destilada

Mechero

Azul de metileno

Aceite de inmersin

PROCEDIMIENTO:

PREPARADOS EN FRESCO: 1. Colocar una gota de agua estancada en una lmina.

2. Colocar una laminilla cubreobjetos.

3. Observar.

4.- Resultado observado:

Paramecio

PREPARADOS EN SECO: 1. Extraccin de muestra a utilizar de uno de nuestros compaeros

2.- Secamos la muestra en un mechero de alcohol

3.-Realizamos la coloracin respectiva agregando azul de metileno. 4.-Observamos al microscopio 5.- Resultados observados

Bacilos

OBSERVACIN DE GLBULOS ROJOS :

1.- Extraccin de sangre a uno de nuestros compaeros 2.-Colocacion de la muestra en la lamina portaobjetos 3.- Observamos al microscopio.

Glbulos Rojos

DISCUSIN:

El microscopio ptico se compone de una parte mecnica, que sirve de soporte, y una parte ptica, constituida por tres sistemas de lentes: el condensador, el objetivo y el ocular. La finalidad del condensador es proyectar un cono de luz sobre las clulas que estn siendo examinadas en el microscopio. Despus de atravesar a las clulas,

ese haz luminoso, en la forma de cono, penetra en el objeto. El objetivo proyecta una imagen aumentada en el plano focal del ocular, que nuevamente la amplia. Por fin, la imagen provista por el ocular puede ser percibida por la retina como una imagen situada a 25cm de la lente ocular o tambin, puede ser proyectada sobre un teln o una pelcula fotogrfica. La ampliacin total dada por un microscopio es igual al aumento del objetivo multiplicado por el aumento del ocular. Se llama poder de resolucin de un sistema ptico a su capacidad de separar detalles. En la prctica, el poder de resolucin es expresado por el lmite de resolucin, que es la menor distancia que debe existir entre dos puntos para que ellos aparezcan individualizados. Por ejemplo: dos partculas separadas por 0,3 um aparecen individualizadas cuando son examinadas en un sistema ptico con un lmite resolutivo de 0,2 um, pero aparecen como una partcula nica cuando el lmite resolutivo es de 0,5 um. Lo que determina entonces, la riqueza de detalles de la imagen provista por un sistema ptico es su lmite de resolucin, y no su poder de aumentar el tamao de los objetos. La propiedad de aumentar solamente tiene valor prctico si es acompaada de un aumento paralelo del poder resoluto. El lmite de resolucin depende esencialmente del objetivo. El ocular no puede detalles de una imagen; su funcin es solo aumentar de tamao a la imagen, que es proyectada en su plano de foco por el objetivo. El lmite de resolucin depende, sobre todo, de la abertura numrica (AN) del objetivo y de la longitud de onda de la luz utilizada.

CONCLUSIONES:
El Microscopio es: cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para obtener una imagen aumentada de objetos minsculos o

detalles muy pequeos de los mismos. El microscopio simple o lente de aumento es el ms sencillo de todos y consiste en realidad en una lupa que agranda la imagen del objeto observado. Las evidentes limitaciones de este sistema, conocido desde la antigedad, y el desarrollo de la ptica y de la construccin de lentes hizo que surgieran en el siglo XVII los microscopios compuestos, diestramente utilizados por el holands Antonie van Leewenhock en el estudio de la microfauna de los estanques y charlas. Estas observaciones, unidas a las de Robert Hooke, establecieron la microscopia como poderosa herramienta cientfica.

Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace converger los rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sita cerca del objeto que se quiere estudiar. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice que la imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que acta sencillamente como una lupa. El ocular est situado de modo que no forma una segunda imagen real, sino que hace divergir los rayos luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una gran imagen invertida situada ms all del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan realmente por ese lugar, se dice que la imagen es virtual.

BIBLIOGRAFA:
Biologa Celular y Molecular de De Robertis. 12 edicin. Buenos Aires. Ateneo 2007 Biologa Celular y Molecular. Junqueira, Carneiro 6 edicin

Enciclopedia Encarta 2009. Microsoft Corporation Enciclopedia Hispnica Millennium. (2000). Volumen 10. Caracas. Mazparrote, Serafn. (2000). Biologa. 9no. Grado. Editorial Biosfera. Caracas