CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

INTRODUCCION La cromatografa de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar molculas relativamente pequeas. En la biologa celular se utiliza frecuentemente para separar azcares simples, lpidos, aminocidos, nucletidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de poli pptidos y cidos nucleicos. Al igual que otras cromatografas, consiste de una fase estacionaria y una fase mvil y el principio es el mismo: la sustancia de inters se adherir a la fase estacionaria o se mover con la fase mvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie slida (una placa de vidrio, aluminio, plstico papel). Esta superficie slida puede ser rgida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento depender del tipo de molculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de un solvente que puede ser agua, un solvente orgnico o una mezcla de ambos. El procedimiento es sencillo: Se colocan las muestras a un centmetro del borde en uno de los extremos de la placa, se deja secar, se coloca la placa en un envase (tanque de desarrollo) que ya contiene una pequea cantidad del solvente, se tapa y se deja correr por un rato. El solvente subir por capilaridad e ir arrastrando las molculas, las cuales se movern segn la afinidad que muestren por la fase estacionaria. Si la mezcla de muestras que se est analizando presenta color, se vern los distintos colores migrando a distintas velocidades. Si son incoloras hay que someter la placa a algn tratamiento con una sustancia desarrolladora (developer) para poder determinar la presencia de sustancias sobre el silicato. El tipo de desarrollador depender del tipo de molculas que se analiza

OBJETIVO GENERAL

Separar los pigmentos ms abundantes presentes en hojas de espinacas utilizando la cromatografa de capa fina.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Conocer la cromatografa como tcnica de separacin de mezclas de sustancias, sus caractersticas y los factores que en ella intervienen. Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Analizar la influencia del solvente en la separacin cromatogrfica. observar las diferentes caractersticas de la placa en la cromatografa.

MARCO TEORICO

CONCEPTO DE CROMATOGRAFA. La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: slido-liquido (capa fina, papel o columna), liquido-lquido y gases-liquido (fase vapor). Todas las tcnicas cromatogrficas dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido. Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente, todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno de adsorcin selectiva es el principio fundamental de la cromatografa.

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA. En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta produciendo manchas de los componentes. Se usan lminas de: vidrio como soporte del adsorbente, plstico (ej: acetato) metlicos (ej: aluminio). Los tamaos de la placa para CCf convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2. Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la identificacin de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirn tcnicas de revelado.

ELUYENTES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA. ter de petrleo tolueno dietil-ter, t-butil-ter diclorometano acetato de etilo n-pentano, n-hexano ciclohexano tetracloruro de carbono ter dietlico cloroformo acetona iso-propanol etanol metanol

MATERIALES 2- Pitas de 5 mL 1-Motero con su mano 1-Capilar 3- Frasco de compotas. Trado por los estudiantes

REACTIVOS: 1- Placa cromatogrficas de silica gel de 20 x 20 en aluminio. Benceno ( 10 mL) Etanol ( 10 mL) cido Actico ( 1 mL) Cloroformo (10 mL) Diclorometano ( 10 mL) Acetato de etilo ( 10 mL) Tolueno ( 10 mL) Heptano ( 10 mL) Acetona ( 10 mL). Una hoja de espinaca. Trada por estudiantes

PROCEDIMIENTO La muestra se disuelve en muy poca cantidad de un disolvente voltil. Si se va a utilizar patrones de alguna sustancia se preparan de la misma manera. A continuacin se dibuja una lnea base con lpiz y unos puntos de referencia donde se pincharn las muestras con un capilar (zanahoria y hoja de espinaca trituradas).

Se debe preparar la cubeta en la que se va a realizar la cromatografa. Esta cubeta es un simple recipiente de vidrio en donde se aade el eluyente que se va a utilizar, siempre en un nivel inferior a la lnea base que se ha dibujado en la placa. En este momento se introduce con cuidado la placa en la cubeta y se tapa, esperando a que el nivel del eluyente ascienda por la placa.

Cuando el nivel se encuentra casi en el borde superior, se extrae la placa y se dibuja una nueva lnea en este nivel. El disolvente al ser voltil se evapora en poco tiempo dejando la placa seca. Ahora se debe buscar un mtodo para visualizar el resultado del cromatograma y ver la separacin de los componentes pinchados en la placa. En el caso de que la sustancia sea coloreada no habra ningn problema ya que se veran los componentes. .

ANALISIS La muestra aplicada en la fase estacionaria es adsorbida en la superficie del material por la accin de fuerzas electrostticas (fuerzas de Van der Waals, puentes de Hidrgeno, efectos inductivos, etc.) y para su posterior liberacin de acuerdo a la constante de afinidad de por los constituyentes de la muestra por la fase mvil. El factor que ms influye en la separacin de los componentes en este tipo de cromatografa es la polaridad de estos componentes. La placa est formada por una capa de gel de slice, una sustancia muy polar, y por lo tanto, atraer en mayor medida a componentes ms polares. Al realizar el cromatograma, las sustancias ms polares interaccionarn ms con el soporte y su velocidad de desplazamiento ser menor, esto significa que al revelar la placa cromatogrfica, el componente ms polar se encontrar en un lugar ms cercano a la lnea base que hemos dibujado, y por el contrario, el componente menos polar se mover ms rpidamente y se encontrar ms alejado de la lnea base.

La polaridad del eluyente es un factor que consigue que los componentes se muevan ms rpido o ms lento en una cromatografa. Es decir, para un eluyente con mayor polaridad, ste estar ms atrado por el soporte y los componentes sern ms libres para moverse mejor, por lo que, al revelar la placa, los componentes saldrn ms alejados de la lnea base. Por la misma razn, con un eluyente menos polar, ste casi no interacciona con el soporte polar, y los compuestos tendrn una mayor interaccin con el soporte, por lo que su velocidad ser ms pequea y al terminar la cromatografa, se habrn desplazado muy poco a partir de la lnea base.

PREGUNTAS 1. QUE ES RF? Rf es el registro y se define como: Rf = distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturacin, etc.). Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa.

2. CUALES SON LOS TIPOS DE CROMATOGRAFA MS UTILIZADOS Y DESCRIBIRLOS Cromatografa de adsorcin: El slido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase mvil (liquida o gaseosa) (Fuerzas de Van der Waals). Cromatografia de cambio inico: el slido es un cambiador de iones (fuerzas electrostticas). Cromatografia de exclusin (o de geles): el slido es un gel formado por polmeros no inicos porosos que retienen a las molculas de soluto segn su tamao. Cromatografia de afinidad: es un tipo especial de cromatografia de adsorcin, utilizada especialmente en bioqumica, en la que un slido tiene enlazado un llamado ligando de afinidad que puede ser por ejemplo, un indicador enzimtico o un anticuerpo.

Si es lquido/lquido, cabe distinguir: Cromatografa de particin: el soluto se reparte entra la fase mvil (liquido o gas) y la fase estacionaria.

Si es lquido/gas, cabe distinguir entre: Cromatografa gas-liquido (CGL), que es una cromatografa de particin. Cromatografa gas-slido (CGS), que es una cromatografa de adsorcin. Si es un fluido supercrtico, (fluido calentado a una temperatura superior a la temperatura critica, pero simultneamente comprimido a una presin mayor que su presin critica), se trata de la cromatografa de fluidos supercrticos (CFS), que puede ser de particin o de adsorcin. Las tcnicas cromatogrficas, segn el dispositivo utilizado para conseguir la separacin entre la fase mvil y la estacionaria, pueden ser: en columna y plana. Cromatografa en columna: Se utiliza un tubo cilndrico, en cuyo interior se coloca la fase estacionaria y a su travs se hace pasar la fase mvil. El flujo de la fase mvil (liquido o gas) a travs de la estacionaria se consigue: 1)por presin, 2)por capilaridad, 3) por gravedad. Cromatografia plana: La fase estacionaria esta colocada en una superficie plana que en realidad es tridimensional, aunque una de sus dimensiones es muy reducida, por lo que puede considerarse bidimensional. Se divide en dos tipos generales:

1. -Cromatografa en papel: en la que el papel absorbente acta como soporte de la fase estacionaria (cromatografia de particin). Una muestra lquida fluye por una tira vertical de papel absorbente, sobre la cual se van depositando los componentes en lugares especficos. 2. -Cromatografa en capa fina: en la que un slido acta como fase estacionaria (cromatografia de particin), se extiende en una capa delgada sobre una placa, generalmente de vidrio. El uso de la cromatografa est ampliamente extendido en el anlisis de alimentos, medicinas, sangre, productos petrolferos y de fisin radiactiva.

IBLIOGRAFIA E INFOBIBLIOGRAFIA www.google.com http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina Manual del ingeniero qumico 7ma edicin, Perry and Green Qumica anlisis de principios y aplicaciones, Aduni, 3era edicin. www.wikipedia.com, Enciclopedia virtual. 2007

ANEXOS