.

2012
HONGOS PRESENTES EN AISLAMIENTOS DE PLANTAS DE Pinus hartwegii (pino de las alturas) Y Pinus montezumae (pino real)

BLANCAESTELA CORENA COMISION DE RECURSOS NATURALES DEL DISTRITO FEDERAL 03/07/2012

HONGOS PRESENTES EN AISLAMIENTOS DE PLANTAS DE Pinus hartwegii (pino de las alturas) Y Pinus montezumae (pino real)

OBJETIVO GENERAL. Clasificar a nivel especie los principales hongos presentes en plantas y semillas de P. montezumae y p. hartwegii.

OBJETIVOS ESPECIFICOS.

Utilizacin de diferentes medios de cultivo para la identificacin de los principales hongos fitopatogenos asociados en montezumae. Identificar de acuerdo a las claves taxonmicas los principales gneros de hongos fitopatogenos y realizar su clasificacin a nivel especie. Establecer recomendaciones de prevencin para los hongos fitopatogenos. especies de Pinus hartwegii y P.

INTRODUCCION.
Los hongos juegan un papel muy importante en la naturaleza como degradadores de la materia orgnica, pero por otra parte son causantes de enfermedades dentro de los

cultivos los cuales son invadidos por diversos hongos de efecto patgeno y otros tantos asociados dependiendo las condiciones de la planta. Los hongos se dividen en dos grupos hongos de campo y hongos de almacn la diferencia entre los dos grupos son las de aireacin, temperatura, cultura de sanidad y limpieza entre otras muchas condiciones ms. Dentro de la gran tarea de producir y mantener plntula con los mejores estndares de calidad se toma en cuenta principalmente, la importancia del conocimiento y estudio de los hongos asociados a la plantacin de P. hartwegii y P. montezumae En la actualidad los efectos, secuelas y consecuencias de estos patgenos ocasionan prdidas econmicas y a la diversidad de la especie. Con el siguiente trabajo se pretende dar recomendaciones de prevencin y control para gneros de hongos dentro del vivero San Luis para esto se tomaran antecedentes en cepas de Fusarium, Alternara, Aspergillius, Penicillium, Epicoccus, Mucor, Rhizopus, Carbn O Roya que fueron aisladas en aos anteriores por los

administradores de laboratorio de microbiologa del vivero san Luis Tlaxialtemalco para poder realizar la identificacin de las mismas

3.-ANTECEDENTES. 5.-ENFERMEDADES EN VIVEROS FORESTALES. En Mxico aproximadamente existen 400 vivero forestales, se encuentran en todos los ambientes desrticos, tropicales, hmedos y templados producen ms de 300 millones de rboles cada ao y utilizan ms de 100 especies de rboles la mayora de los viveros tiene un ciclo de produccin anual pero algunos producen planta de dos a mas aos de edad en los viveros, los problemas por enfermedad son de gran importancia y con frecuencia las perdidas rebasan el 50 % de la produccin (Aragn ,2007)

HONGOS ASOCIADOS A PLNTULAS Y SEMILLAS FORESTALES. La semilla que se cosecha de los arboles, tiene en su testa numerosos microorganismos saprofitos y parsitos facultativos que llegan transportados por el viento, el agua de la lluvia para depositarse en la superficie externa de la semilla. El arribo de estos hongos se inicia a partir de la apertura de frutos o conos de conferas en patio de secado al aire libre o durante el almacenamiento. Cuando existen condiciones de humedad, temperatura, estos microorganismos se desarrollan afectando los tejidos muertos de la testa y algunos logran penetrar el embrin y matar al endospermo y los cotiledones antes de la

germinacin de la plntula; otros alcanzan la plntula cundo esta ya germino y provocan su muerte (Aragn ,2007) Los gneros de hongos ms comunes que se presentan; Rhizopus, Aspergillius,

Penicillium sin embargo el numero de hongos que puede estar sobre las semillas es grande y rebasar ms de 30 especies (Aragn ,2007)

CARACTERSTICAS DE LOS HONGOS (Urbina ,2011) La reproduccin puede ser asexual o sexual, principalmente por esporas. La mayor parte de los hongos son saprofitos; algunos se consideran parsitos; otros mutualistas (que se asocian con otros seres en beneficio mutuo, como ocurre con los lquenes Eucariontes (con pared celular) Sin tejido vascular

Se reproducen principalmente por medio de esporas, que son diseminadas por el viento y pueden ser sexuadas o asexuadas. No tienen movimiento Pueden ser un o multicelulares La pared celular est formada de quitina; en las plantas es celulosa. Son heterotrficos, se alimentan de materia orgnica. Los organismos autotrficos, producen sus alimentos por medio de la fotosntesis. Los hongos primero digieren y despus ingieren Para lograr lo anterior producen toxinas La mayora de los hongos, almacenan alimentos como glicgeno. La mayora de los hongos tienen un ncleo pequeo con poco DNA. Son saprofitos Se les considera parsitos y mutualistas Se alimentan de materia orgnica en descomposicin. La falta de clorofila afecta profundamente su forma de vida: no necesitan de la luz crecen en cualquier direccin; invaden el sustrato con filamentos absorbentes. Como parsitos, usan la materia orgnica de organismos vivos, causando algn dao a plantas. En simbiosis, pueden beneficiar a otros organismos, como las micorrizas en las races de las plantas y los lquenes: asociacin de un hongo y un alga. Son organismos muy tiles por su versatilidad gentica y fisiolgica. Producen enormes cantidades de esporas que permanecen viables hasta que las condiciones climatolgicas favorecen su multiplicacin. Pueden causar daos a los humanos por las toxinas que producen. Descomponen toda clase de productos manufacturados, exceptuando los plsticos y algunos plaguicidas. Algunos como las levaduras, son muy tiles al ser humano. Los hay que producen antibiticos, hormonas y esteroides.

Son muy importantes en la investigacin, debido a que se reproducen rpida y fcilmente, ocupan poco espacio, se multiplican rpidamente y su ciclo de vida es corto.

Caractersticas moleculares (recin descubiertas), indican que los hongos estn ms relacionados con los animales que con las plantas.(Urbina ,2011)

GENERALIDADES DE LOS HONGOS

Alternara ness
Prioritaria de ambientes tropicales Nayarit (Aragn ,2007) Diagnosis Enfermedad ocasional en el vivero consecuencia de factores de estrs, puede causar un 80% de mortalidad segn la especie (Aragn ,2007) El dao se presenta con ms frecuencia en plntulas de 1 mes de edad, presentando principalmente clorosis proseguida por una necrosis (Aragn ,2007) En plantas de 3 meses de edad causa defoliacin parcial en las hojas cercanas al suelo (Aragn ,2007) En arboles adultos es de poca importancia, solo causa cambio de color en la planta (Aragn ,2007) Ciclo Biolgico Las esporas pueden llegar a la planta por diferentes medios ya que pueden ser (Chiapas, Estado de Mxico, Jalisco, Michoacn,

dispersadas por el viento, germina en las hojas o acculas cuando los tallos se mojan, producen tubos germinativos que penetran por los estomas directamente en la epidermis (Aragn ,2007) Recomendaciones. Evitar resecamientos por altas temperaturas. Evitar anegamientos por riego excesivo. Evitar daos por agroqumicos (Aragn ,2007)

Cuando ya dentro del vivero la enfermedad esta avanzada se recomiendo remover y retirar el material daado para evitar que el contagio contine (Aragn ,2007)

Mucor
Los mucorales se caracterizan por producir un micelio profuso, bien desarrollado, los mucorales se reproducen sexualmente por zigosporas y la asexual es por

esporangiosporas y algunas veces por medio de conidios (Aragn ,2007)

Rhizopus
Rhizopus (Mucorales, Mucoraceae) Amplia distribucin mundial, en ambientes templados a tropicales, muchas de sus

especies son saprofitas o algunas parasitas se presenta con mayor facilidad en almacn se encuentra a temperatura ambiente y en condiciones de humedad causa infecciones severas (Aragn ,2007) Diagnosis Estructuras asexuales y sexuales, las asexuales son ms comunes se reconocen por el micelio mas arqueado (Aragn ,2007) La estructura sexual se forma cuando las hifas de diferente origen y compatibles se unen por proyecciones miceliares de ambas (Aragn ,2007) La semilla afectada por este hongo muestra delgadas capas de micelio algodonoso de color blanco.la testa de la semilla es consumida cuando el micelio entra en contacto con los cotiledones y causa pudricin de ellos (Aragn ,2007) Las especies ms comunes de rhizopus son: R. stolonifer, R.tritici, R. nodosus, R.reflexus, R.maydis Y R. artocarpi (Aragn ,2007) Ciclo Biolgico Sobrevive como esporangio en residuos de materia orgnica, se desarrolla un micelio algodonoso multiramificado, blanquecino, en la madurez liberan esporangiosposras que inician un ciclo asexual rpido de apenas horas o das (Aragn ,2007)

Las esporas asexuales se dispersan por el viento, el agua o por insectos las zigosporas pueden permanecer por meses en estado de reposo (Aragn ,2007) Recomendaciones Evitar sobr humedad en el almacn o el rea de crecimiento de la planta (Aragn ,2007)

Aspergillius
Las plantas hospedantes pertenecen a grupos de angiospermas y gimnospermas, hongo saprofito se introducen en la semilla y afectan los cotiledones (Aragn ,2007) Se distribuye en todo tipo de ambientes desde clima templado hasta tropical (Aragn ,2007) Importancia. Son comunes en materia orgnica, como frutos sobre -maduros o productos alimenticios viejos, en almacenes de semilla que estn a temperatura ambiente y con alta humedad, reducen la viabilidad de la semilla (Aragn ,2007) Los aspergillius son un grupo de hongos cosmopolita y sumamente perjudicial para el hombre, aun como parasito benigno, su ataque se limita a las semillas, frutos maduros y otros rganos que se aprovechan como alimento (Aragn ,2007) Diagnosis Presenta conidiforos largos, con el pice hinchado, cubierto por una o dos series de fialides, donde se forman conidios hialinos u oscuros en cadenas, globosos u ovales .Se observa micelio blanquecino en la semilla daada (Aragn ,2007) Ciclo biolgico En ambientes hmedos se requiere de pocos das u horas para el desarrollo del micelio y se produzcan conidios. El hongo se mantiene mientras la materia orgnica se consuma por completo, las esporas de este tipo de hongo se dispersa por el viento (Aragn ,2007)

Recomendaciones manejo cuidadoso del producto durante la cosecha. evitar heridas que propician la infeccin los granos han de almacenarse a una humedad de 13% por que la mayora de las cepas de aspergillius desarrollan desde los 13.5% hasta 18.5%. (Romero ,1993)

Penicillium
Gnero con numerosas especies, saprofitas algunos son capaces de daar frutos y semillas almacenadas (Romero ,1993) Diagnosis La forma asexual es comn conidiforos largos septados, lisos a rugosos, individuales o en sinemas ramificados cerca de pice en uno, dos, o ms verticilos (Romero ,1993) Ciclo biolgico Ciclo rpido de pocos das los conidios se producen en grandes cantidades y se

dispersan con el viento, el desarrollo del hongo se presenta a temperaturas de medias a altas y en humedades mayores al 15% de la humedad relativa (Romero ,1993)

Fusarium
La mayora de los hospedantes son conferos y angiospermas, el dao que causa a la germinacin de la semilla de estas puede ser importante, la pudricin de raz por Fusarium es una de las enfermedades ms comunes en plntulas de conferas en el planeta (Romero ,1993) Diagnosis Los sntomas son variables las plantas afectadas generalmente son se acculas esparcidas y clorticas o solamente acculas retorcidas (Romero ,1993) Son hongos de ciclo rpido solo necesitan algunas crecimiento (Romero ,1993) horas o pocos das para su

Control Y Recomendaciones Mantener un ambiente fresco con una humedad del 13 % y temperaturas entre 3 y 5C. Utilizar en pisos y estanteras una solucin de hipoclorito de sodio Una interesante y novedosa opcin es utilizar control biolgico para la prevencin de infecciones se recomienda cubrir la testa de las semillas con esporas del hongo Trichoderma, este funciona como inhibidor de la mayora de los hongos que estn en la superficie de la testa adems su efecto permanece en las primeras etapas de la plntula. Para aplicacin de este hongo se aplican 150 a 300g por cada 100K de semilla la dosis varia con el tamao de la semilla lo recomendado es para semilla de tamao grande o media no calibre.de Pinus ayacahuite (Romero ,1993) Manejo Asegurar la aireacin de los arboles en las platabandas y con ello eliminar la humedad el follaje y que el hongo no pueda desarrollarse. Recolectar y destruir planta enferma Esterilizar las charolas Aplicar un tratamiento preventivo con cloratalonil a la base de los tallos, cuando la infeccin est presente se aplica dicloran (revisar indicciones de envase) (Romero ,1993)

Carbn O Roya
Su principal hospedante es Pinus pincea, su distribucin de esta enfermedad est en el estado de Mxico el .principal gnero encontrado en producciones de pino es el gnero Cronartium casi siempre presentes en plantas de edad avanzada y especies susceptibles.

Ciclo biolgico Entre los meses de marzo a mayo, es posible observar las picniosporas y los tejidos hinchados de los brotes (Romero ,1993) Manejo En el caso de Pinus pinea son tan severas que se limita el uso de la especie y se prefiere no utilizarla como el pino de navidad.(Romero ,1993) Para infecciones menos severas se sugiere el uso de triadimefon.la aspersin se dirige al follaje. (Romero ,1993) En los arboles urbanos es preferible no utilizar a las especies susceptibles, en particular P. radiata Y P. greggii (Romero ,1993)

Pestalotia
Acrvulos negros discado o pulvinados, subepidermicos; conidiforos cortos y simples conidios oscuros de varias clulas (la apical y la basal puntiagudas e hialinas).la literatura menciona varias especies que causan manchas foliares o lesiones cancrosas en frutos de plantas tropicales (Romero ,1993)

METODOLOGA El ensayo se llevo a cabo en el laboratorio de microbiologa dentro de las instalaciones de la Comisin De Recursos Naturales Del Distrito Federal, Delegacin Xochimilco (COREN )utilizando el material existente en el cepario del laboratorio tomando cepas aisladas anteriormente desde el 2006 en donde se tubo presencia de los siguientes gneros Fusarium, Alternara, Aspergillius, Penicillium, Epicoccus, Mucor, Rhizopus, Carbn O Roya .las cuales estuvieron presentndose en especies de P. montezumae Y P. hartwegii.

RE-AISLAMIENTO DE LA CEPA. Las cepas fueron sembradas en cajas petri con el medio de cultivo (PDA) Papa

Dextrosa Agar; se hicieron 3 repeticiones para purificar la cepa, Las observaciones se hicieron cada tres das para ver el crecimiento, se realizaron en cultivos monospricos. CULTIVOS MONOSPRICOS Los cultivos monospricos se usan para obtener cultivos desarrollados de una espora simple, para esto se utilizaron tres mtodos Agua-Tween 2% Agua Agar 2%

OBSERVACIN MICROSCOPICA. Preparacin en cinta adhesiva Tcnica 1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lacto fenol no demasiado grande para evitar que la cinta flote y la preparacin quede demasiado gruesa. 2. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm. 3. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentracin de esporas. 4. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro cintazo con diurex, ponindolas en porta objetos con un poco de lacto fenol el cual nos ayudo a ver mejor las estructuras morfolgicas de nuestro hongo. TCNICAS PARA LA IDENTIFICACIN DE LOS HONGOS Para la identificacin de hongos fitopatogenos es necesario la observacin de sus

estructuras somticas y reproductivas. Mediante la tcnica ya mencionada. La observacin de las caractersticas de las estructuras producidas y el uso de las claves taxonmicas son necesarios para determinar el gnero y la especie del hongo patgeno

RESULTADOS

RE-AISLAMIENTO DE LA CEPA En el proceso de re-aislamiento y purificacin de las cepas tomando en cuenta los aos y los medios de almacenamiento fue un poco complicado obtener cepas totalmente

purificadas esto aunado al corto tiempo para realizar la tcnica varias veces hasta obtener nuestro objetivo En la primer etapa de siembra del ensayo se sembraron 7 gneros de hongos

encontrados anteriormente en P. hartwegii entre ellos Alternara, Rhizopus. Aspergillius, Fusarium, Penicillium, Mucor, Pestalotia. Y en P.montesumae (Alternara, Aspergillius, Fusarium, Penicillium, Mucor, Pestalotia, carbn o roya.) De las 33 muestras solo el 9 de ellas salieron sin presentar contaminacin esto en P. hartwegii En la tabla (1) y grafica (1) se representa la cantidad de re-aislamientos y el porcentaje de cada gnero que se re-aisl. Tabla 1
GENERO Alternara Rhizopus Aspergillius Fusarium Penicillium Mucor Pestalotia TOTALES MUESTRAS REAISLADAS 3 3 6 12 3 3 3 33 MUESTRAS LIMPIAS 1 2 1 2 1 1 1 9 MUESTRAS CONTAMINADAS 2 1 5 10 2 2 2 24 TOTAL GENERAL

66

Grafica 1
Alternara

MUESTRAS RE-AISLADAS
Aspergillius 14% Fusarium 15% Penicillium Mucor Pestalotia

Carbn o roya

14% 14% 14%

15% 14%

Al mismo tiempo las cepas encontradas en P. montezumae fueron re -aisladas para purificarlas, obteniendo solo algunos aislamientos puros los cuales se muestran en la siguiente tabla (2) y porcentaje de cada gnero grafica (2).
GENERO Alternara Carbn o roya Aspergillius Fusarium Penicillium Mucor Pestalotia TOTALES MUESTRAS REAISLADAS 3 3 3 3 3 3 3 21 MUESTRAS LIMPIAS 2 2 1 1 1 2 2 11 MUESTRAS CONTAMINADAS 1 1 2 2 2 1 1 10

Tabla 2
TOTAL GENERAL

42

Grafica 2

MUESTRAS RE-AISLADAS
Alternara Penicillium Carbn o roya Mucor 14% 14% Aspergillius Pestalotia 15% Fusarium

15% 14% 14%

14%

Para determinar y clasificar cada tipo de hongo se tomaron en cuenta varios parmetros como: Morfologa bsica del hongo. Tamao de la colonia a 3 das de crecimiento. Tamao del conidio. Color de la colonia. El primer aislamiento puro que se obtuvo pertenece al gnero Fusarium este tipo de hongo es patgeno en la mayora de las plantaciones forestales. En P .hartwegii se presentaron 4 tipos de Fusarium que se describen a continuacin:

Fusarium (rojo) decoloracin en acculas P .Hartwegii. Macro conidios ausentes Micro conidios-abundantes Clamidosporas-ausentes Tamao de la colonia a los 3 das -2-2.5 cm de dimetro.

Objetivo 40 X Spp Fusarium moniliforme gibberella.

Para poder clasificar un hongo a nivel especie debemos tener en cuenta las caractersticas morfolgicas del gnero que estamos estudiando en el caso de Fusarium se toma en cuenta tamao de conidios, ausencia de macro conidios y Clamidosporas. Con los datos anteriores determinamos que este Fusarium en acculas de P. hartwegii corresponde a la especie Fusarium moniliforme gibberella. 2.- Fusarium hartwegii L.00600 M Objetivo 40 X Macro conidios ausentes Micro conidios-abundantes Clamidosporas-ausentes Spp. Fusarium moniliforme. (Booth, 1971).

Tamao de la colonia a los 3 das - 3.5 -4 cm de dimetro

3.5 4 cm

En P. hartwegii se realizaron aislamientos los cuales presentaron Spp. Fusarium moniliforme, al igual que en el aislamiento de P. montezumae. La descripcin fue basada en claves taxonmicas de Fusarium (Booth, 1971). Otro gnero del cual se realizaron aislamientos es Alternara la cual se presento en P. hartwegii, as como en P. montezumae lamentablemente por condiciones de espacio y estado de senescencia del aislamiento original de Alternara en P. montezumae el aislamiento fue perdido por contaminacin de otro gnero de hongo. Aqu se presenta la descripcin de alternara comprendida en P. hartwegii y la especie en la que se clasifico segn su morfologa Alternara obscura accula

Conidios.- 64 Septas.- 5 Cadenas.-largas de varios conidios.

De acuerdo con la descripcin y observacin morfolgica llegue a la conclusin de que la Alternara presentada en P. hartwegii pertenece a la especie Alternara tenuissima (Neergard, 1945) Otra de los gneros en estudio es Aspergillius flavus el cual se presento en las dos especies de Pinus. Para saber el tipo de especie se toman en cuenta varios parmetros que son de gran importancia los cuales se mencionan a continuacin.

 Aspergillius flavus en P. hartwegii

Color de la cepa o colonia verde azul, verde oscuro Esterigmas en una o dos series --presentadas en dos series.

Tomando en cuenta la morfologa y la utilizacin de las claves de identificacin a nivel especie del genero Aspergillius flavus (Moreno, 1988), se llego a la conclusin de que el aislamiento pertenece a la especie Aspergillius flavus link montezumae como en P. hartwegii tanto en P.

En el siguiente cuadro se representan las principales especies de hondos presentan en las dos especies de Pinus y de que parte de la plntula proviene. Cuadro 1

que se

CUADRO REPRESENTATIVO DE CEPAS CLASIFICADAS POR ESPECIE. Cuadro 1

Especie forestal Parte de la planta acculas semillas acculas tallo acculas acculas Perdida de cepa acculas acculas Genero de hongos fusarium fusarium Fusarium enchinamiento Fusarium violeta fusarium Alternara obscura x Aspergillius flavus Aspergillius flavus Especie
Spp fusarium moniliforme gibberella Spp fusarium moniliforme gibberella Spp fusarium moniliforme gibberella Spp fusarium moniliforme gibberella Spp fusarium moniliforme gibberella

P. hartwegii P. hartwegii P. hartwegii P. hartwegii P. montezumae P. hartwegii P. montezumae P. hartwegii P. montezumae

A. tenuissima
X

Aspergillius flavus link Aspergillius flavus link

Los 5 gneros de

hongos faltantes

Rhizopus, Penicillium, Mucor, Pestalotia,

Carbn o Roya, fueron examinadas solo en su estructura morfolgica debido al poco tiempo que se tuvo para continuar observando las muestras de estos gneros, la

complejidad para poder definir una especie acertadamente es cuestin de un anlisis minucioso de las estructuras y una comparacin exhaustiva de las caractersticas de dichas estructuras ,con las claves de identificacin para especies de hongos dependiendo el gnero ,todo esto no se puede determinar en un tiempo muy corto como el que se tuvo para realizar el ensayos , tiempo es una variable determinante para no cometer equivocaciones es por eso que el estudio de las cepas faltantes solo se realizo de manera general y en la parte de anexos se muestran las imgenes de estructuras principales.

Recomendaciones.
Las recomendaciones que propongo para prevenir los daos por hongos en plntulas de P. hartwegii y P. montezumae son las siguientes.

Lo esencial seria tomar medidas preventivas, la contaminacin ms frecuente causa ante de mayores daos es la presencia Fusarium este gnero desde la semilla est afectando se propone:

Hacer mas estudios pero desde la semilla (aislamientos de semilla) limpieza constante y de manera minuciosa del rea en que se llevan a cabo los

tratamientos pre -germinativos para evitar la contaminacin por aire o agua, o algn otro tipo de vector, ya sean moscas o mosquitos. Preferentemente mantener el rea de pre germinado en un control ms hermtico para evitar que las moscas o mosquitos depositen las esporas de este hongo o las mismas

corrientes de aire provoquen la enfermedad, se podran utilizar mallas trmicas o malla sombra para tener el efecto rompe viento. Las medidas de sanidad y la cultura de prevencin dentro del rea de semillas es esencial para no provocar enfermedades y afectar posteriormente la produccin de la plntula que recae en perdidas vegetales y econmicas Con respecto a los hongos de menor presencia y afectacin en plntulas debido a que son saprofitos u oportunistas se recomienda lo siguiente. Estudiar ms sobre el tipo de riego para cada especie, no todas las especies necesitan la misma cantidad de agua y esto provoca un estrs o saturacin hdrica la cual hace ms vulnerable a la plntula a hongos saprofitos dependiendo su especie. Con respecto a los pallets se recomienda poner un poco mas de espacio entre ellos para que las personas que pasen en los pasillos de extraccin de planta no maltraten o magullen las hojas de las plntulas. Los periodos para crecimiento y salida de la planta del vivero deben ser estudiados con la finalidad de ver el mejor tiempo de salida de cada especie ,tener plantaciones ms tiempo del requerido provoca mayor vulnerabilidad en las plntulas por que las instalaciones y charolas no son aptas para resistir plantas con mayor edad. En lo que respecta a sustratos deben tener tambin condiciones de limpieza rigurosas, por que aunque sea tierra y materiales minerales no estn exentos de contaminacin por agua o por aire. Estudio Y Prevencin De Hongos. Estos son algunos estudios o investigaciones que proponen hacer las afectaciones de los hongos patgenos y saprofitos en conferas. Porcentaje de infeccin por hongos en semilla, para verificar y fijar parmetros para determinar si el lote es puro o no. Realizar estudios sobre cuales hongos pueden competir con otros para elaborar un nuevo control biolgico, parecido en efecto al Trichoderma.

Las ltimas recomendaciones que son una base principal para cualquier investigacin y desarrollo eficaz del control dentro de viveros y semillas son las siguientes. Infraestructura de laboratorios, ampliacin e implementacin de espacios cerrados para obtener en menor tiempo los aislamientos puros. Mayor cantidad de material para los ensayos. Mantenimiento frecuente de las autoclaves y la incubadora. Implementacin de un cepario (cuarto frio para mantenimiento de las cepas ) Reactivos de acuerdo con los estudios a realizar.

Estas recomendaciones las propongo en consideracin a circunstancias que retrasaron el trabajo por realizar, el espacio del laboratorios es muy pequeo y esto aunado a la infraestructura no adecuada con la que se cuenta provoca falta de tiempo y espacio para las actividades dentro del lugar.

ANEXOS.

Figura 1 - estructuras de Rhizopus

figura 2.-estructuras de Mucor

Figura 3.- estructuras de Pestalotia.

Fig. 4.- estructuras de Penicillium

Figura 5.-estructuras de Carbn o Roya.

Figura 6.- material para aislamiento.

Figura 7.- caja con medio de cultivo.

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
DIA FECHA SEMANA 1 SEMANA 2 SEMANA3 SEMAN 4 SEMANA 1 SEMANA2 SEMAN 3 SEMANA 4 SEMANA 1

18/06/2012 22/06/2012

25/06/2012 29/06/2012

02/07/2012 06/07/2012

09/07/2012 13/07/2012

16/07/2012 20/07/2012
Observacin y separacin de cepas Buenas de cepas no viables

23/07/2012 27/07/2012

30/07/2012 03/08/2012
Revisin de literatura e investigacin Observacin de muestras Realizacin de mas muestras de hongos faltantes ,realizacin de cmaras hmedas para crecimiento de hongos en tejidos daados (aguacate) Observar las estructuras y tomar fotografas de las cepas que salieron.

06/08/2012 10/08/2012
Revisin de literatura Observacin y medicin de estructuras

13/08/2012 17/08/2012 revisin de literatura

LUNES

Laboratorio (M)

Semillas

Seleccin de las cepas listado de los principales existentes dentro del cepario del laboratorio de hongos en Pinus microbiologa se procedi a Montezumae y Pinus su siembra en (PDA) Hartwegii.

Permiso para salir

MARTES

Laboratorio (M)

Semillas

identificar cual es el medio de cultivo idneo para la reproduccin de las esporas y conidios de los diferentes hongos. observacin

Se observo el crecimiento de la cepa pero no presentaba as que saque unas muestras para observar los hongos en unas semillas, y se encontraron caros.

MIERCOLES Laboratorio (M)

Parcela

Investigacin

Sacar muestras de las cepas limpias. Resiembra de cepas que no salieron o se contaminaron Siembra de las Observar el crecimiento cepas de alternara Separar factibles y nulas en preparacin Y volver a ver cuales se Agua agar tendrn que re aislar Agua -tween Observacin de las principales estructuras de alternara al microscopio

Calibracin del microscopio Observacin microscpica

Revisin de literatura

Permiso para salir Revisar las siembras en agua agar Agua -tween
Preparacin de muestras de chile poblano en deterioro por hongos y su observacin Hacer tapones para tubos con medio de cultivo y tomar fotos de las estructuras de las cepas pendientes

Observacin microscpica Preparacin de medio de cultivo con Czapek Poner a licuar el medio de Czapek y vaciar la mezcla en cajas petri Observacin microscpica Siembra de aspergillius y penicillium en el medio de Czapek

Editar y terminacin de trabajo

JUEVES

Laboratorio (N)

Parcela

Investigacin

Preparacin de material Cepas factibles 5 repeticiones y cepas no viables 3 repeticiones c/u

VIERNES

Laboratorio (N)

Permiso por doc.

tomar acuerdos para organizar la siembra de los hongos en medio de Siembra de las muestras 93 cepas en total cultivo

Realizar literatura e investigacin Observacin de muestras. Siembra de tejidos P. hartwegii Preparacin de cmaras hmedas con teocote

Permiso para salir

Bibliografa. Aragn C. L.2007.Enfermedades Forestales En Mxico. Primera Edicin.587 pp. Booth.1971.THE GENUS FUSARIUM .primera edicin.233pp Moreno M.E.1988.manual para la identificacin de hongos en granos y sus derivados. primera edicin. 107.pp Romero C.S. 1993.Hongos Fitopatogenos. universidad chapingo .primera edicin .341pp. Clave Para Identificacin De Especies De Alternara ,Neegard .1945