FOTOMETRA VISIBLE

ndice 1. Resumen 2. Fundamentacin terica 3. Objetivos 4. Anlisis Cualitativo: Procedimiento toma de absorbancias a diferente longitudes de onda 5. Resultados 6. Anlisis cuantitativo: Procedimiento toma de Absorbancias a diferente concentracin y longitud de onda constante 7. Clculos y Resultados 8. Anlisis de resultados 9. Conclusiones 10. Bibliografa 11. Preguntas de consulta 2 2 3 3

4 6

7 9 10 11 12

Resumen. En este trabajo se utilizo la fotometra para determinar las absorbancias de una muestra problema a diferentes longitudes de onda y realizar un barrido espectral para comparar con barridos espectrales de la literatura y determinar la muestra problema, obtenindose azul de metileno. Con esta sustancia y escogiendo una longitud de onda especfica se toman 3 mediciones de absorbancia a distintas concentraciones para efectuar la curva de calibracin y determinar la concentracin de una muestra problema. Para este fin, la prctica se dividi en dos secciones, una cualitativa y otra cuantitativa, en la primera se identifica la sustancia y la longitud de onda de trabajo, en la segunda se realiza la curva de calibracin y se determina la concentracin de la muestra problema. Encontrndose que la muestra problema de azul de metileno tena un % de concentracin de 5,9103E-04 Palabras claves. Fotometra, concentracin, absorbancia

Fundamentacin terica La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Para descubrir la capacidad de absorcin de una sustancia a distintas longitudes de onda, se hace un barrido espectral. Cada sustancia tiene su espectro caracterstico, lo que permite identificar una sustancia en una solucin cuya composicin desconocemos, y esto se suele emplear en la determinacin de txicos en lquidos biolgicos. Existen dos formas de llevar a cabo los espectros de absorcin: Manualmente: se lleva a cabo en un espectrofotmetro de haz simple, se coloca en la cubeta la solucin y vamos midiendo las absorbancias a distintas longitudes de onda. Automticamente: se lleva a cabo en un espectrofotmetro de haz doble, en el que se sita la cubeta con el blanco en una de sus celdas y en la otra la solucin problema, se programa el aparato para que haga incidir distintas longitudes de onda y este hace el barrido.

Cuando se pretende determinar, espectrofotomtricamente la concentracin de un soluto de una disolucin, es imprescindible conocer las longitudes de onda a las que se produce la mxima absorcin. Lo ideal es hacer incidir sobre la solucin un haz de luz con la longitud de onda en la que se produce la mxima absorcin.

OBJETIVOS Determinar la identidad de una muestra problema a partir de su barrido espectral Analizar el comportamiento de la absorbancia con respecto a la concentracin Determinar la concentracin de una muestra problema a partir de una curva de calibracin

ANLISIS CUALITATIVO
Tabla 1. Propiedades de algunas sustancias. Sustancia Longitud de onda (nm) Agua Azul de metileno 660

Densidad (g/cm3) 0.980 1.757

Peso molecular 18,015 319,85

PROCEDIMIENTO TOMA DE ABSORBANCIAS A DIFERENTES LONGITUDES DE ONDA DIAGRAMA DE FLUJO

Se aprendi el adecuado manejo del Espectrofotometro Se utiliz agua como blanco fotometrico Se midio la absorbancia de una muestra problema a diferentes longitudes de onda

Se limpiaron las celdas adecuadamente

Se registr la longitud de onda que se utiliz en la parte cuantitativa

Se identific la muestra problema a travs de su barrido espectral

Se dej todo en orden

RESULTADOS Nota: Todos los clculos matemticos se llevaron a cabo utilizando la hoja de clculo Microsoft EXCEL Nota: La medida de tendencia central que se utiliz para los valores obtenidos (Tabla 2) fue la MEDIANA, ya que esta es la que mejor se ajusta a los datos. Para la tabla 4 se usa MODA Se realizaron 3 mediciones de la absorbancia de la sustancia (Tabla 2)
Tabla 2. Absorbancias a diferentes longitudes de onda de una muestra problema Longitud de onda 350 380 410 440 480 510 540 570 600 630 660 690 720 750 780 810 840 870 910 950 Absorbancia 0,017 0,003 -0,003 -0,001 0,014 0,023 0,042 0,118 0,273 0,385 0,670 0,182 0,013 0,003 0,004 0,001 0,000 0,001 -0,003 -0,020 0,020 0,005 0,000 0,000 0,013 0,022 0,042 0,115 0,261 0,365 0,642 0,177 0,012 0,001 -0,001 0,002 0,003 0,002 -0,001 -0,005 0,021 0,006 0,000 0,000 0,015 0,022 0,041 0,113 0,256 0,361 0,626 0,173 0,013 0,001 0,002 0,002 0,002 0,002 0,002 0,005 MEDIANA 0,020 0,005 0,000 0,000 0,014 0,022 0,042 0,115 0,261 0,365 0,642 0,177 0,013 0,001 0,002 0,002 0,002 0,002 -0,001 -0,005

Figura 1. Espectro de absorcin obtenido experimentalmente de la muestra problema

0.700 0.600 0.500 0.400

Espectro de absorcin

Absorbancia

0.300 0.200 0.100 0.000 320 -0.100 420 520 620 720 820 920

Series1

Longitud de onda (nm)

De acuerdo con los datos obtenidos para la muestra problema y despus de una bsqueda en la literatura (Figura 2) se puede inferir que: Muestra problema corresponde a azul de metileno Longitud de mxima absorcin 665,6 nm

Figura 2. Espectro de absorbancia UV-VIS de azul de metileno

ANALISIS CUANTITATIVO PROCEDIMIENTO: TOMA DE ABSORBANCIAS CONCENTRACIN Y LONGITUD DE ONDA CONSTANTE A DIFERENTE

Se encendi el equipo y se esper a que se estabilizara

Se prepararon diferentes diluciones de azul de metileno

Se ingres la longitud de onda de 665,6 nm en el espectrofotometro

Se tomaron 3 absorbancias por patrn igual para la muestra problema

Se realiz curva de calibracin

Se determin la concentracin de la muestra problema

CLCULOS Y RESULTADOS
Para la preparacin de diluciones se debe tener en cuenta un rango de porcentaje de concentracin 1E-04% 5E-04 % partiendo de una solucin de 0,01 % en concentracin

Nota: Inicialmente solo se prepararon 5 diluciones, pero como la muestra problema tuvo una absorbancia por fuera de la curva de calibracin se prepararon dos ms. V azul de metileno (Dilucin 1)= ([1E-04 %]*5ml)/ (0,01%) = 0,05ml V H2O = volumen final - V azul de metileno = (5 ml-0,05ml)= 4,95 ml
Tabla 3. Clculos para la preparacin de patrones Diluciones 1 2 3 4 5 6 7 Volumen (ml) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,4 0,5 Volumen de Concentracin H2O (ml) (%) 4,95 1,00E-04 4,9 2,00E-04 4,85 3,00E-04 4,8 4,00E-04 4,75 5,00E-04 4,6 8,00E-04 4,5 1,00E-03

Con las concentraciones de las diluciones se puede cuantificar la muestra problema por medio de la Ley de Beer. Primero se toman diferentes lecturas de absorbancia de las diluciones, para hacer una medida de tendencia central y tomar datos ms precisos, luego se procede a realizar la curva de calibracin de absorbancia Vs concentracin de azul de metileno.
Tabla 4. Resultados de Absorbancia vs concentracin a un longitud de onda constante Diluciones (nm) Concentracin (%) Absorbancia 665,60 1,00E-04 0,1400 0,1400 0,1398 0,1400 1 665,60 2,00E-04 0,1459 0,1458 0,1459 0,1459 2 665,60 3,00E-04 0,3713 0,3713 0,3712 0,3713 3 665,60 4,00E-04 0,4121 0,4119 0,4118 0,4119 4 665,60 5,00E-04 0,5705 0,5706 0,5705 0,5705 5 665,60 8,00E-04 1,1260 1,1270 1,1270 1,1270 6 7 Muestra problema 665,60 665,60 1,00E-03 1,2410 1,2400 1,2400 1,2400 5,9103E04 0,7340 0,7340 0,7340 0,7340

MODA

La figura 3 representa la forma en la que se distribuyen los datos de la tabla 4, obtenindose una ecuacin emprica (ND=1351,7*[%] -0,0649) con un coeficiente de correlacin de 0,9752
Figura 3. Absorbancia vs % de concentracin de azul de metileno
1.4000

Absorbancia vs % de concentracin
y = 1351.7x - 0.0649 R = 0.9752

1.2000

1.0000

Absorbancia

0.8000 Series1 0.6000 Linear (Series1)

0.4000

0.2000

0.0000 5.00E-05

2.50E-04

4.50E-04

6.50E-04

8.50E-04

% De concentracin

Concentracin de la muestra problema:

[ ])

% [ ]= (A+0,0649)/1351,7= (0,7340+0,0649)/1351,7= 5,9103E-04% [ ]= 5,9103E-04% /100% = 5,9103E-06

ANALISIS DE RESULTADOS El barrido espectral obtenido de la muestra problema en la sesin cualitativa concuerda por proximidad con el barrido espectral del azul de metileno buscado en la literatura, adems la longitud de onda escogida (665,6nm) para trabajar en la parte cuantitativa fue muy cercana a la que se usa en la literatura de 660nm para dicha sustancia. Los valores de absorbancia hallados corresponden a valores que se encuentran dentro del rango establecido por las limitaciones reales de la ley de beer, adems las concentraciones de las diluciones siempre estuvieron por debajo de la limitante de 0,01 M Como era de esperarse los valores de absorbancia hallados en la sesin cuantitativa para cada una de las diluciones aumentaban a medida que la concentracin se incrementaba La comparacin entre los barridos espectrales demuestra que en principio es posible, aunque algunas veces difcil en la prctica, poder identificar sustancias a partir de sus barridos espectrales. Es importante conocer la longitud de onda de trabajo ya que la absortividad es nica para cada molcula y cambia con la longitud de onda. Otra variable importante que afecta la absorbancia es la concentracin, debido a que la radiacin electromagntica interacta con las molculas produciendo la absorcin. Experimentalmente se obtuvo que a medida que aumenta la concentracin tambin aumenta la absorbancia. La absorbancia obtenida de la muestra problema fue 0,7340 un valor que inicialmente se encontraba fuera del rango de la curva de calibracin, por tal razn hubo que ampliar el rango para que dicha absorbancia estuviera dentro de l. Para llevar a cabo esto se prepararon dos diluciones ms con % de concentracin de 8,00E-04 y 10,00E-03. Posteriormente se procedi a realizar la curva de calibracin encontrndose que el porcentaje de concentracin de la muestra problema fue de 5,9103E-04%

CONCLUSIONES La absorbancia depende de factores como la absortividad, la concentracin, el espesor de la celda, longitud de onda, temperatura, velocidad de reaccin, tiempo, no obstante, el barrido espectral que se obtiene para cada sustancia es nico y se puede utilizar para identificar sustancias puras o en diluciones de compuestos desconocidos. La fotometra se puede usar en campos analticos donde se puede incluir la biologa, la agricultura y casi todo tipo de industrias. Por ejemplo, en biologa, podra ser usada en tejidos o fluidos biolgicos para analizar concentraciones de sodio, potasio, calcio, hierro, entre otros. Es importante tener presente que la absorbancia medida por el instrumento es relativa en un intervalo de longitud de onda debido a que es imposible que la radiacin sea monocromtica, tambin por que puede haber radiacin parasita o por errores de lectura, es decir, por que siempre hay errores instrumentales. La absorbancia vara con la concentracin en una relacin lineal, es decir, que a medida que aumenta la concentracin de la dilucin tambin aumenta la absorbancia. La fotometra de UV-VIS detecta fcilmente las insaturaciones en las molculas por tal razn cuando una molcula no tiene insaturaciones debe usarse un agente acomplejante para generar un compuesto que pueda ser medido y de esa manera poder cuantificar el analito de inters. Las celdas que se utilizan para realizar un barrido espectral deben ser similares en caractersticas, tales como, forma, espesor, tamao, superficie, ya que si estos factores no se tienen presentes pueden alterar enormemente los resultados analticos. Para que se cumpla la ley de beer las soluciones a utilizar deben ser homogneas, sin impurezas o precipitados, con concentraciones por debajo de 0,01 M, con absorbancias en un rango de 0,15 -0,8 y la luz utilizada debe ser monocromtica.

BIBLIOGRAFIA Eugene D. Olsen. Mtodos pticos de anlisis. Editorial revert. Capitulo 5 Metodos pticos de anlisis <http://books.google.com.co/books?id=gtRcq1g4DmYC&pg=PA328&lpg=P A328&dq=fotometria&source=bl&ots=C4No2Vtil&sig=0X8QMZLyVOrBK0XGxRxxZc20BkM&hl=es&sa=X&ei=f0hrUPLIG 42g8gTTrYC4DQ&redir_esc=y#v=onepage&q=fotometria&f=false> [Consulta: 1 de octubre de 2012] Espectroscopia de absorcin UV_VIS. http://es.scribd.com/doc/44436236/Informe-espectroscopia-de-AbsorcionUV-Visible [Consulta: 1 de 0ctubre de 2012]

PREGUNTAS DE CONSULTAS 1. Explicar cules son las desviaciones que pueden presentarse en la aplicacin de la Ley de Beer. R/: Desviaciones de la Ley de Beer: a. Desviaciones reales. (i) La concentracin debe ser inferior a 0,01 M (ii) La absorbancia debe darse en un rango de 0,15 -0,8 b. Desviaciones instrumentales. (iii) Radiacin no monocromtica (iv) Radiacin parsita (v) Errores de lectura c. Desviaciones qumicas. (i) Influencia del equilibrio (dimerizacin, acido-base, complejos) (ii) Influencia del disolvente (iii) Influencia de la temperatura (iv) Impurezas de los reactivos (v) Interaccin entre especies absorbentes http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/lhh345a/Espectrofotometria2.pdf 2. Cules son los cuidados que se deben tener con las celdas de un espectrofotmetro. R/: Cada que se utilice una celda electroqumicas se debe lavar varias veces con agua destilada, teniendo cuidado de no introducirle ningn contaminante u objeto, tener en cuenta que las huellas dactilares, manchas de grasa o polvo en las paredes de la misma alteran las caractersticas de transmisin de la radiacin produciendo datos errneos en la toma de absorbancia o de transmitancia; adems siempre hay que tener en cuenta de adicionarle soluciones homogneas, llenar las dos terceras partes de la celda y deben tener caractersticas similares si se van a usar varias celdas.

http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/cd29/laboratorio/cap11.pdf 3. Cules son los factores que se deben tomar en cuenta para la determinacin espectrofotomtrica de iones inorgnicos por formacin de complejos? R/: Velocidad de reaccin, formacin de insaturaciones, tiempo, temperatura, equilibrio quimico.

4. Una solucin de permanganato de potasion1.28 x 10-4 tiene una transmitancia de 0.25 a 525 nm, en una celda de 1 cm. a. Que absorbancia tiene esta solucin? b. Si la concentracin fuese el doble, cul seria la absorbancia y la transmitancia?. c. Que concentracin correspondera a una transmitancia de 0.75 en esta celda? R/:

5. El cobalto (II) forma fcilmente un complejo de color azul cuando reacciona con el Tiocianato. El procedimiento es el siguiente: se prepara una solucin 3:1 de acetona-soluicon acuosa al 50% de NH4SCN. Esta solucin se agrega a un matraz que contiene Co (II) y el complejo resultante es de color azul intenso. Posteriormente, se prepararon las siguientes disoluciones y se realizaron las lecturas a 620 nm, obtenindose los siguientes resultados. Co (mg/ml) 3.0 A 0.100 0.099 0.102 0.210 0.202 0.208 0.320 0.322 0.316 0.420 0.424 0.421

6.0

9.0

12.0

Se tomaron 4 ml de una muestra y se diluyeron hasta 100 ml con cetona y NH4SCN. La absorbancia leida a 620 nm fue 0.25. Cul fue la concentracin de Cobalto en la muestra? R/: