Hector Lopez Faustino Arciniega

Instrumentacion para el seguimiento y control de la biorreaccion.

Introduccin
Los biorreactores estn equipados con distintos instrumentos. Estos se utilizan para facilitar el registro y anlisis de variables de operacin y parmetros especficos que sirven para mantener, dentro de ciertos intervalos de valores, las condiciones de operacin de la biorreaccion con fines de maximizar la productividad y garantizar el xito de la biorreaccion. La instrumentacin ha sido definida como una ventana al proceso y su objetivo es mantener al mnimo la diferencia entre el valor medido y un valor deseado. El control de un parmetro particular se lleva a cabo a travs de un sistema que consta de un sensor (o electrodo), un medidor y un controlador:

el sensor es un dispositivo que transforma una magnitud de una propiedad que se quiere medir, en otra que facilita su medida. El medidor recibe la medida el valor de la propiedad que emite el sensor. El controlador compara dicha medida con un valor fijo.

La seal implica usualmente la modificacin del estado de una vlvula, el encendido o apagado de una bomba dosificadora, la modificacin de la velocidad de giro de un motor de algn equipo.
Si, por ejemplo, se hace necesario el uso de una determinada fuerza para modificar el estado de una vlvula, se requerir de un traductor y de un actuador. El transductor es un dispositivo que convierte un tipo de energa en otro tipo de energa, mientras que los actuadores son dispositivos capaces de generar una fuerza a partir de energa elctrica, gaseosa o liquida.

Los sensores pueden estar conectados directamente al biorreactor (en contacto directo con la masa liquida o solida de fermentacin), en cuyo caso se dice que estn en lnea, si no estn conectados directamente al biorreactor entonces se dice que estn fuera de lnea. Debido a la naturaleza de la biorreaccion, se requiere que la gran mayora de los sensores en lnea renan, entre otros, los siguientes requisitos: i) que sean capaces de resistir el proceso trmico al que se somete el caldo de cultivo en el biorreactor (esterilizacin con calor hmedo): ii) que sean capaces de resistir las presiones de operacin; iii) que sean de fcil calibracin; iv) que tengan una adecuada vida media til.

Estos sensores (en lnea), se utilizan, bsicamente, para medir propiedades fsicas o variables de operacin tales como temperatura, presin, intensidad de agitacin o velocidad de giro de los impulsores, velocidades de flujo de lquidos y gases, y para medir ciertas propiedades qumicas como pH, concentracin de oxigeno disuelto y gaseoso, concentracin de dixido de carbono disuelto y en el gas, concentracin de azucares disueltos, concentracin de algunos productos celulares, etc.

Para conocer el estado de una variable de operacin o de un parmetro especifico con sensores fuera de lnea, se deber tomar aspticamente una muestra para que en ella se mida la propiedad.

Entre las propiedades ms comunes que se miden en un biorreactor estn las siguientes:
Temperatura pH fuljo de aire presin intensidad de agitacin nivel o volumen de medio de cultivo espuma concentracin de oxigeno disuelto concentracin celular concentracin de sustrato concentracin de producto

MEDICION Y CONTROL DE
El pH es una medida de la actividad de los iones hidronico (h+) en una disolucin acuosa Para la medicin y control del valor de pH, se utiliza un electrodo de vidrio colocado, en forma asptica, en el biorreactor y que est directamente en contacto con el caldo de fermentacin. El, electrodo, normalmente esterilizable, se conecta directamente a un medidorcontrolador de pH, con el cual se puede establecer el valor de control (Set Point) o ajustar el valor de la lectura que proporcione el electrodo de medicin. Un electrodo de pH consiste de dos celdas: un elemento sensor de pH y un elemento de referencia. El elemento sensor consiste de un alambre de plata cubierto con cloruro de plata inmerso en una solucin buffer (usualmente de pH 7), en un tubo sellado que termina con un fino tubo de vidrio sensible al pH. El elemento de referencia consiste de otro alambre de plata cubierto con cloruro de plata inmerso en una solucin buffer saturada de cloruro de potasio y un diafragma poroso que comunica con la sustancia a la que se medir el pH.

Medicin y control de temperatura

Aunque no existe un consejo para establecer cul de todas las variables de operacin es la ms importante de mantener y controlar en una biorreaccion, la temperatura se cuenta entre las ms importantes. El control, la medicin precisa y adecuada de la temperatura resultan esenciales para la biorreaccion. Un sistema de medicin de la temperatura debe presentar una precisin menor a los 0.5 C respecto a la temperatura de medicin y en muchos casos, una variacin de 1 a 1.5 C durante la biorreaccion, puede dar lugar a grandes prdidas econmicas en el bioproceso, por lo que se recomienda que la diferencia entre el valor medido y el de control se encuentre entre 0.5n y 1.5 C.

Generalmente, la temperatura en un bioproceso se mide con sensores RTD (resistance temperature devices) ya que estos son los que presentan las mejores caractersticas antes mencionadas
Generalmente se utiliza platino por sus mejores caractersticas lineales de cambio respecto a la temperatura, aunque tambin se utiliza nquel, cobre y aleaciones de nquel. Una desventaja es su precio moderadamente alto. La resistencia es medida con un dispositivo y convertida por un transductor a valores de temperatura (en C o K). El valor medido de la temperatura es comparado con el de control y de la diferencia entre los valores, el controlador emitir una seal que servir para realizar una accin de control de la misma. La accin puede consistir en hacer agua de enfriamiento o vapor, a travs de un serpentn inmenso en el caldo de biorreaccion o a travs de la chaqueta del biorreactor, para ajustar la temperatura al punto de control.

Para sensores RTD la relacin entre la temperatura y la resistencia esta descrita por la siguiente ecuacin: Rr/Ro = 1+a [T- 1 (T-1)( T)] Ecuacin en la que: Rr= resistencia a la temperatura T[=] Ro= resistencia a 0 C [=] a = una constante (0.00393 para platino) Laboratorio de Biorreactores Manual de practicas T= temperatura [=] C O= una constante (1.48 1.51 para Platino) Dicha ecuacin aplica para intervalos de temperatura comprendidos entre 0 y 360 C.

Medicin y control del oxigeno disuelto

El oxigeno disuelto es muy importante para el desarrollo de una biorreaccion aerbica, por lo que su medicin y control es un parmetro importante para el desarrollo y produccin econmicamente de bioproductos. El oxigeno disuelto generalmente proviene del aire que es introducido en el fondo del caldo de biorreaccion. Una parte del oxigeno contenido en el aire se disuelve en el caldo y otra parte sale tal cual con el aire agotado. El oxigeno disuelto es el que utilizaran los microorganismo para vivir y para realizar el proceso de transformacin de la materia prima a producto. El control del oxigeno disuelto en una biorreaccion ocurre a travs de la modificacin del flujo de gas (aire u oxigeno puro) o de la intensidad de agitacin del caldo de cultivo.

Medicin y control de espuma

Cuando en el caldo de cultivo existen compuestos orgnicos, como por ejemplo protenas y carbohidratos, generalmente se forma espuma. Esto se favorece a altos flujos de aire y alta intensidad de agitacin. La formacin de espuma es crtica en los biorreactores por muchas razones, las mas destacas son las siguientes: Disminucin del volumen del lquido en el interior del biorrector si la espuma sale por el evento o salida del gas agotado. Contaminacin microbiolgica del bioproceso si la espuma alcanza a salir por el venteo o salida del gas agotado. Disminucin de la actividad biolgica del bioproducto si posee propiedades tensoactivas y es sensible a fuerzas de torsin. Por las razones anteriores, la medicin y control de la espuma es imprescindible en los Bioprocesos.

El control del volumen de la espuma se logra a travs de un rompeador mecnico o mediante la edicin controlada de un antiespumante. El rompeador de espuma es un impulsor, colocado generalmente por encima del caldo de cultivo, que gira a altas velocidades que al girar y estar en contacto con la espuma acta en forma semejante a una centrifuga, impulsando a la fase pesada al fondo y dejando paras la fase ligera (el gas).

OBJETIVO
El alumno manejara los sistemas de medicin y control de variables de operacin de biorreactores de tanques agitados, a travs de las determinaciones en lnea de la temperatura, pH, oxigeno disuelto y espuma.

MATERIALES Y METODOS Equipo:

Biorreactor tipo tanque agitado Sistema de medicin y control de temperatura Sistema de medicin y control de pH Sistema de medicin y control de oxigeno disuelto Sistema de medicin y control de espuma

El sistema de medicin y control de temperatura consta de:

Sensor RTD Cables Medidor Controlador Recipiente de agua de enfriamiento con una resistencia elctrica de inmersin Bomba de agua de enfriamiento

El sistema de medicin y control de pH consta de:

Electrodo de pH con su camisa presurizable y conectores para el biorreactor Cables Medidor Controlador Bombas de adiccin de acido o lcali

En el sistema de medicin y control de oxigeno disuelto consta de:

Electrodo polarografico Cables Medidor Controlador

El sistema de medicin y control de espuma consta de:

Electrodo Medidor Controlador Bomba de adiccin de antiespumante

Materiales
Tanque de nitrgeno puro con vlvula de control de presin y de flujo. Vasos de precipitados de 250 mL, 500 mL y de 2000 ml. Probetas de 1000 ml. Mangueras de silicn para bombas peristlticas Reactivos Solucin de NaOH 0.5N Solucin de HCI 0.5N Antiespumante Mazu al 10% v/v en agua Solucin proteica o un detergente