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28 ava Edicin HARPER BIOQUIMICA ILUSTRADA CAPITULO 7 ENZIMAS: Mecanismos de accin IMPORTANCIA BIOMEDICA Las enzimas catalizan las

reacciones qumicas que hacen posible la vida, esenciales para la desintegracin de nutrientes y en proporcionar energa. La valoracin de la actividad de enzimas especificas ayuda al diagnostico y pronostico de enfermedades. La deficiencia de enzima (cantidad, actividad y/o estructura) puede ser producto de defectos genticos, dficit nutricional, toxinas, mutaciones genticas, enfermedades por virus o bacterias patgenas. Sus impresionantes caractersticas y funciones de las enzimas le permiten desempear funciones claves en procesos relacionados con la salud y el bienestar de seres humanos La estereoespecificidad absoluta de enzimas le permiten intervenir en sntesis de un frmaco o antibitico. Importante en la produccin y en el aumento del valor nutricional de los alimentos. LAS ENZIMAS SON CATALIZADORES EFICACES Y MUY ESPECIFICOS Las enzimas son muy eficientes y son catalizadores en extremo selectivos. Son especificas para el tipo de reaccin catalizada y tambin para el sustrato, sea nico o un pequeo conjunto estrechamente relacionados. La especificidad extrema le da a las clulas vivas la capacidad para conducir y controlar un gran nmero de procesos qumicos LAS ENZIMAS SE CLASIFICAN POR EL TIPO DE REACCION Es necesario identificar el nombre para indicar el sustrato, La fuente de la enzima, su regulacin o una caracterstica de su mecanismo de accin, y la numeracin alfanumrica para indicar las diferentes formas de enzimas La IUB (International Unin of biochemist s) cre un sistema de nomenclatura de enzima: con nombre, numero y cdigo singular. Las Enzimas son divididas en 6 clases: Oxidorreductasas catalizan oxidaciones y reducciones Transferasas catalizan la transferencia de porciones, como grupos glucosilo, metilo o fosforilo. Hidrolasas catalizan la divisin hidroliticas del C-C, C-O, C-N y otros enlaces

Liasas catalizan la divisin C-C, C-O, C-N y otros enlaces mediante eliminacin de tomo, dejando dobles enlaces Isomerasas catalizan cambios geomtricos o estructurales dentro de una molcula Ligasas catalizan la unin de 2 molculas acopladas a la hidrlisis de ATP Por la complejidad del nombre del sistema de la IUB aun se sigue usando los nombres tradicionales (reaccin catalizada asa) LOS GRUPOS PROSTETICOS, LOS COFACTORES Y LAS COENZIMAS TIENEN FUNCIONES IMPORTANTES EN LA CATALISIS Los grupos prostticos, los cofactores y coenzimas son molculas (no protenicas) y iones metlicos que participan en la catlisis, o unin de sustrato, directamente Los grupos prostticos estn estrechamente integrados en la estructura de una enzima Los grupos prostticos se caracterizan por su unin estrecha y estable hacia una protena (fuerzas covalentes o no covalentes) Los metales (Co, Cu, Mg, Mn y Zn) son los ms comunes, e importantes porque Facilitan unin y orientacin de sustratos, Forman enlaces covalentes, Aumentan carcter electroflico o nucleoflico Los cofactores se asocian de manera reversible con enzimas o sustratos Los cofactores tienen unin transitoria o disociable a la enzima o a sustrato, esta ultima requiere de cofactores en su medio para la Catlisis. Los ms comunes son iones metlicos que denominan a la enzima como enzimas activadas por metal. Las coenzimas sirven como transbordadores de sustratos Las coenzimas transportan sustratos, tambin grupos metilos o acilos y oligosacaridos, desde su generacin hasta su utilizacin, la asociacin entre ambas molculas le da estabilidad al sustrato. Muchas coenzimas, cofactores y grupos prostticos son derivados de vitamina B La vit. B proporciona componentes importantes de muchas coenzimas. Mayora de coenzimas.- contiene adenina, ribosa y fosforilo de AMP y ADP Coenzimas Redox.- contiene nicotinamida en NAD y NADP y riboflavina en FMN y FAD En el metabolismo de un C funcionan las coenzimas acido flico y cobalamina LA CATALISIS OCURRE EN EL SITIO ACTIVO El complejo enzima-sustrato se asemeja a una cerradura mecnica con la llave apropiada; esta cerradura recibe el nombre de Sitio Activo (hendidura o bolsa en la superficie). El sitio activo protege a los sustratos de solvente y facilita la catlisis. Ambos se encuentran estrechamente unidos, los cofactores y grupos prostticos catalizan su transformacin a producto

LAS ENZIMAS EMPLEAN MULTIPLES MECANISMOS PARA FACILITAR LA CATALISIS Emplean diversas combinaciones de 4 mecanismos generales y logran un aumento cataltico notorio. Catlisis por proximidad Para su reaccin deben de estar a la distancia formadora de enlace. A mayor concentracin, mayor es el ndice de su reaccin. La unin enzima-sustrato crea una regin de concentracin local alta de sustrato, este ambiente produce aumentos del ndice de al menos 1000 veces. Catlisis Acido-bsica Puede ser especifica (protones o iones) o general . La catlisis especifica por acido o base, es sensible el ndice de reaccin a cambios de la concentracin de protones (independiente de otros cidos o bases presentes) En la catlisis general los ndices responden a todos los cidos y bases presentes. Catlisis por tensin En reacciones lticas la ruptura de un enlace covalente se une a su sustrato provocando la divisin del enlace, imitando al intermediario de estado de transicin (punto de sustrato a producto). La tensin estira el enlace, lo debilita y luego se divide. El estado de transicin es aprovechado por los qumicos para crear inhibidores ms eficaces (anlogos de estado de transicin) como farmacforos potenciales. Catlisis Covalente Formacin de enlace covalente entre la enzima y uno o ms sustratos. Observada en transferencia de grupo. En la catlisis covalente la energa de activacin es ms baja y ms rpida que la reaccin en solucin homognea, pero la modificacin qumica enzimtica en transitoria, uan vez completada la reaccin, vuelve a su estado original (funcin permanece cataltica). LOS SUSTRATOS INDUCEN CAMBIOS CONFORMACIONALES EN ENZIMAS Daniel Koshland dice que los sustratos inducen un Cambio Conformacional en la enzima posterior a su unin. La enzima y su sustrato inducen cambios recprocos y aprovecha la energa de unin para transformar sustrato en producto LA PROTEASA DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA (VIH) ILUSTRA LA CATALISIS ACIDOBASICA La catlisis comprende 2 residuos aspartilo conservados, que actan como cataliicos acido bsicos.

1era etapa de la reaccin un aspartato (base) extrae un protn de la molcula de agua, lo que la hace ms nucleoflica. El nucleofilo resusltante ataca al carbono carbonilo electroflico del enlace peptdico, formando un intermediario de transicin tetradrico. El 2do aspartarto facilita la descomposicin de este ltimo al donar un protn al grupo amino producido por la rotura del enlace peptidico. LA QUIMOTRIPSINA Y LA FRUCTOSA 2,6 BISFOSFATASA ILUSTRAN LA CATALISIS COVALENTE Quimotripsina La catlisis por la serina proteasa quimotripsina comprende la formacin previa de un intermediario de enzima acilo covalente. Un residuo serilo muy reactivo, la srina 195, participa en una red de transmisin de carga con histidina 57 y aspartato 102 His 57 Ser 195, constituye una red de transmisin de carga que funciona como un Transbordador de protn. Fructosa 2,6 bifosfatasa Enzima reguladora de la gluconeognesis y cataliza la liberacin hidroltica del fosfato en el carbono 2 de la fructosa 2,6 bifosfato. LOS RESIDUOS CATALTICOS ESTAN MUY CONSERVADOS todas las familias de enzimas surgieron de la duplicacin de genes, estas protenas luego evolucionan independientes y reconocen diferentes sustrato. Ejm: La quimotripsina que desdobla enlaces peptdicos en el lado carboxilo terminal al igual que la Tripsina, la 1era de aminocido hidrofobicos y la otra de aminocidos bsicos. La presencia de aminocidos especficos en la misma posicin de cada miembro familiar se les llamaba residuos conservados. LAS ISOZIMAS SON NFORMAS DE ENZIMA DISTINTA QUE CATALIZAN LA MISMA REACCION Los organismos superiores varias versiones de una enzima, pero cada una cataliza la misma reaccin. Estas isozimas surgen por medio de duplicacin de gen y se diferencian de manera sutil por: Sensibilidad a factores reguladores particulares y Afinidad a sustrato que las adapta a tejidos Aumenta la supervivencia con copia de respaldo de una enzima esencial LA ACTIVIDAD CATALTICA DE ENZIMAS FACILITA SU DETECCIN La baja concentracin de enzimas presentes en clula determinan su presencia, pero su rapidez para transformar miles de sustratos en productos permite revelar presencia de la enzima. El ndice de reaccin cataltica es proporcional a la cantidad de enzima q permite conocer su concentracin.

Enzimologa de molcula nica La nanotecnologa ha hecho posible observar (microscopia de influorescencia) catlisis por enzima o molecula de sustrato individual. Ahora es posible medir el ndice de eventos catalticos nicos, incluso los pasos individuales en la catlisis mediante enzimologa de molcula nica. EL DESCUBRIMIENTO DE FARMACOS REQUIERE VALORACIONES ENZIMTICAS IDONEAS PARA INVESTIGACIN DE ALTA CAPACIDAD DE PROCESAMIENTO Las enzimas estn dirigidas para la creacin de frmacos y otros agentes teraputicos. Es mucho ms fcil descubrir nuevos frmacos cuando se valora gran nmero de farmacforos potenciales rpido y automatizado, proceso denominado investigacin de alta capacidad de procesamiento aprovechando los grandes avances recientes. Esta investigacin es ideal para analizar los muchos productos de qumica combinacional. Este complejo equipo solo est disponible casa farmacuticas, laboratorio patrocinado por gobiernoy universidades de investigacin cuyo principal uso es el anlisis de compuestos inhibitorios con potencial final para uso como frmacos. Inmuno anlisis ligado a enzima El anlisis inmunosorbente ligado a enizima( ELISA) se usan anticuerpos enlazados (covalente) con una enzima reportera. El suero o muestra biolgica se coloca en la placa de microtitulacin de plstico, las protenas se inmovilizan en la superficie del plstico. Se aade protena no antignica (albumina de suero bovino) y bloquea las areas absorbente del pozo, luego se aaden los anticuerpos covalente con enzima reportera, los anticuerpos de pegan en el antgeno y ambos se inmovilizan. Presencia y cantidad de anticuerpo unido luego de aadir sustrato a la enzima reportera Las deshidrogenasas dependientes de NAD(P) son valoradas de manera espectrofotomtrica En valoraciones espectrofotomtricas se determina la capacidad de un sustrato o producto para absorber luz. Las coenzimas NAD(P)H absorben luz a 340nm, cuando el NAD(P) se reduce, la basorvancia aumenta con la cantidad de NAD(P)H producida. A una deshidrogenasa que cataliza que cataliza la NAD(P)H se obsevara un decremento de absorbancia . En cada caso el ndice de cambio de la densidad ptica sera proporcional a la cantidad de enzima presente. _______________________________________________________________________________ Muchas enzimas son valoradas mediante acoplamiento a una deshidrogenasa Hay valoraciones difciles de realizar porque no producen un cambio de absorbancia o fluorescencia. Las alternativas serian obtener: un compuesto fcil de detectar, o un producto que absorbe luz o muestra fluorescencia.

El ms comn es una Valoracin Acoplada.- generalmente una Deshidrogenasa cuyo sustrato (producto de la enzima de inters) est en exceso cataltico. El ndice de aparicin o desaparicin de NAD(P)H depende del ndice de la reaccin enzimtica a la cual se ha acoplado la hidrogenasa. EL ANALISIS DE CIERTAS ENZIMAS AYUDA AL DIAGNOSTICO La presencia de enzimas en el plasma sanguneo y su posterior anlisis cuantitativo son fundamentales para el diagnostico de procesos morbosos, es decir, estas enzimas que son liberadas hacia el plasma despus de muerte o lesin celular, son importantes porque su aparicin o concentracin son tiles para el diagnstico y pronstico de enfermedades y lesiones (tejidos especficos) y la respuesta al tratamiento. Anlisis de la actividad enzimtica.- hecho por valoraciones cinticas estndar de ndices de reaccin inicial. Radioinmunovaloraciones (RIA).- cuantificacin de la cantidad absoluta de una enzima o de protena no cataltica. Enzima Srica Aspartato aminotransferasa (AST o SGOT) Alanina aminotransferasa (ALT o SGPT) Amilasa Ceruloplasmina Creatina cinasa - Glutamil transferasa Isozima 5 de la lactato deshidrogenasa Lipasa Fosfatasa cida Fosfatasa alcalina (isozimas) Principal uso Diagnostico Infarto de miocardio Hepatitis viral Pancreatitis aguda Degeneracin hepatolenticular (enfermedad de Wilson) Trastornos musculares e infarto de miocardio Diversas enfermedades hepticas Enfermedades hepticas Pancreatitis aguda Carcinoma metastsico de la prstata Diversos trastornos seos, enfermedades hepticas obstructivas

Las enzimas ayudan al diagnstico de infarto de miocardio (MI) En enzimologa diagnstica las enzimas: Deben ser especificas para el tejido u rgano bajo estudio, Presencia en plasma o cualquier liquido en el momento justo para el diagnstico (ventana diagnstica) y Factible a la valoracin automatizada. Para el diagnstico de M.I las 1eras enzimas usadas fueron el Aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT) y Lactato deshidrogenasa (LDH). AST y ALT no ayudaron por no ser especfica del musculo cardiaco, sin embargo la LDH tiene ventaja de especificidad hstica como una consecuencia de su estructura cuaternaria. La Cratina Cinasa (CK) tiene 3 isozimas: CK-MM (msculo estriado), CK-BB (cerebro), y CK-MB (corazn y msculo estriado), esta ultima tiene una ventana diagnstica til, aparece en el transcurso de 4 a 6 h luego de un M.I, alcanza mximo a 24 h y regresa a basal de 48 72 h.

Para diagnstico de M.I la CK se ha complementado mediante la troponina, esta ltima implicada en la contraccin muscular en los musculos estriados y cardiacos. La concentracin de troponinas aumenta de 2 a 6 h luego de un M.I o cualquier dao al musculo cardia y permanecen de 4 a 10 das. El activador de plasmingeno hstico (tPA) o la estreptocinasa se usan en tratamiento de M.I agudo, y la tripsina en fibrosis qustica. LAS ENZIMAS FACILITAN EL DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES GENTICAS E INFECCIOSAS La especificidad y eficiencia de las enzimas es aprovechada en tcnicas diagnsticas para actuar sobre oligonucletidos como el DNA. La endonucleasa de restriccin divide (sitios especficos) el DNA bicatenario en sitios de restriccin (secuencia de pares de bases) que son pequeos fragmentos caractersticos de DNA. Polimorfismo de longitud de fragmento de restriccin (RFLP) son desviaciones del modelo que ocurren por mutacin que deja al sitio de restriccin irreconocible para su endonucleasa. El RFLP facilita la deteccin prenatal de diversos trastornos hereditarios (rasgo de cel. Falciformes, fenilcetonuria en lactantes y enfermedad de Huntington). En la reaccin en cadena de polimerasa (PCR) se emplea una DNA polimerasa para producir miles de copias de un segmento de DNA a partir de pequeas cantidades de material. Por eso la PCR es usada por cientficos mdicos, bilogos y forenses para caracterizar DNA de cifras iniciales bajas, tambin puede usarse para detectar e identificar agentes patgenos o parsitos por medio de amplificacin selectiva de su DNA. EL DNA RECOMBINANTE CONSTITUYE UN IMPORTANTE RECURSO PARA ESTUDIAR ENZIMAS A fin de examinar su estructura y funciones se desea el aislamiento de una enzima individual pero es una tarea extremo difcil entre tantas protenas existentes en la clula. No todas las protenas animales pueden expresarse de forma activa en clulas microbianas, ni estos pueden tampoco realizar procesamiento postraduccional. Empleando el vector de expresin baculovirus para transformar clulas de insectos cultivadas, puede expresar un gen. Las protenas de funcin recombinantes se purifican mediantes cromatografa de afinidad El gen de inters se enlaza a una secuencia de olgonucleotidos que codifica una extensin carboxilo o amino terminal para la protena codificada. La Proteina de fusin o modificada contiene un dominio exacto para interactuar con un soporte de afinidad especfico. Las protenas de fusin codifican tambin para un sitio de divisin para una proteasa muy especfica (trombina), en la regin que enlaza las 2 porciones de la protena permitiendo la eliminacin del dominio de fusin aadido despus de purificacin de afinidad. La mutagnesis dirigida hacia sitio proporciona informacin mecanicista. La mutagnesis dirigida hacia sitio permite cambiar residuos aminoacilos especficos al alterar sus codones, este mtodo facilita la identificacin de las funciones especficas de residuos aminoacilos dados en la unin a sustrato y la catlisis.

CAPITULO 8 ENZIMAS: CINTICA IMPORTANCIA BIOMEDICA La cintica enzimtica permite la medicin cuantitativa de los ndices de reacciones catalizadas por enzimas y del estudio de factores que afectan estos ndices. La comprensin de la cintica enzimtica es importante para entender de que modo los estados de estrs fisiolgico o agentes farmacolgicos afectan la homeostasis. En casi todos los procesos fisiolgicos participan las enzimas por eso son objetivo de frmacos. La cintica enzimtica aplicada permite identificar y caracterizar agentes teraputicos que inhiben selectivamente los ndices de procesos catalizados por enzimas especficas; importante para el descubrimiento y modo de accin del frmaco. LAS REACCIONES QUMICA SE DESCRIBEN USANDO ECUACIONES BALANCEADAS Especies qumicas iniciales (sustrato) y nuevas especies qumicas (producto).

La doble flecha indica reversibilidad (A y B forman P y Q pero tambin P y Q pueden formar A y B) Por eso la designacin es un poco arbitraria debido a que los productos en una reaccin son los sustratos para la reaccin inversa. El termino productos se emplea para los reactivos cuya formacin fue favorecida por la termodinmica, en estos casos solo se usa un flecha como si fuese irreversible

Este tipo de reaccin sucede en clulas vivas donde el producto es consumido de inmediato por una reaccin subsiguiente lo cual impide la reaccin inversa, entonces la hace irreversible desde el punto de vista funcional en condiciones fisiolgicas. LOS CAMBIOS DE LA ENERGA LIBRE DETERMINAN LA DIRECCIN Y EL ESTADO DE EQUILIBRIO DE REACCIONES QUMICAS El cambio o variacin de la Energa libre de Gibbs ( libres de la formacin de sustratos ( Si la Gs) G) en una reaccin qumica es igual a la Gp) menos la suma de las energas

suma de las energas libres de la formacin de productos (

G en una reaccin es negativa se deduce que favorece de izquierda a derecha, es decir G determina que tan lejos proceder la reaccin

que es Espontanea. El signo y la magnitud de

Relacin entre la constante de equilibrio (Keq) y R: constante gaseosa (1.98 cal/mol. K) T: temperatura absoluta en K

G :

G = - RT In Keq

Si Si

G es (-), Keq ser mayor que 1 y la concentracin de productos exceder a la de sustratos G es (+), Keq ser menor que 1 y se favorecer la formacin de sustratos. G informa sobre la direccin y estado de equilibrio de la reaccin, y aunque la reaccin tenga G negativa grande puede dar lugar a ndice insignificante.

LOS INDICES DE REACCINES ESTAN DETERMINADOS POR SU ENERGA DE ACTIVACION Las reacciones proceden por estados de transicin. El estado de transicin es fundamental para entender la base qumica y termodinmica de la catlisis. En una reaccin de transferencia de grupo en el cual el grupo E (est entrando) reemplaza al grupo L (est saliendo).

En la mitad del proceso el enlace entre R y L se debilito (no est roto) y en nuevo enlace entre E y R esta incompleto. Es este el estado de transicin (no existe ni sustrato ni producto libre)

Las lneas punteadas indican los enlaces que pasan por formacin o rotura. La reaccin consta de 2 reacciones parciales: formacin de (F) y la descomposicin (D) Los cambios caractersticos de la energa libre GF GD se relacione con cada reaccin parcial

GF

GD

G=

GF +

GD

A partir de la G general es imposible inferir el nmero o tipo de estados de transicin de una reaccin, es decir la termodinmica no dice nada de la cintica. La La G define la energa de activacin GF generalmente en las reacciones qumicas es (+) quiere decir que la formacin de estados

de transicin debe superar barreras de energa. Por eso la GF para llegar a un estado de transicin a menudo se denomina la energa de activacin (E act.) Los parmetro termodinmicos que determinan la rapidez de una reaccin, son los formacin de los estados de transicin de una reaccin. MUCHOS FACTORES AFECTAN EL INDICE DE REACCIN La teora cintica o de la coalicin dice, para que 2 molculas reaccionen deben: -Estar dentro de la distancia formadora de enlace o chocar -Poseer suficiente energa cintica y alcanzar el estado de transicin. Es decir cualquier cosa que aumente la frecuencia o energa de colisin entre sustratos aumentare el ndice de la reaccin. Temperatura Al aumentar la temperatura, aumenta la energa cintica de las molculas, seguido de un aumento en su rapidez de movimiento, y por ende aumenta la frecuencia del choque (mas energticos y productivos). Todo esto produce un aumento en el ndice de reaccin. Concentracin de reactivo La concentracin de las molculas es directamente proporcional a la frecuencia con la cual chocan. Por ejemplo: GF para la

si las concentraciones de A y B se duplicaran, la probabilidad de choque aumentara cuatro veces. El nmero de choques con suficiente energa para formar P (producto) es directamente proporcional al nmero de choques entre A y B. La suma de las proporciones molares de los reactivos definen el orden cintico de la reaccin. En un laboratorio, el orden cintico de una reaccin respecto a un reactivo particular o variable (sustrato) se puede determinar al mantener constante la concentracin de los otros reactivos en un gran exceso del reactivo variable. El ndice de reaccin depender de manera exclusiva de la concentracin del reactivo variable o llamado reactivo limitante. Estos procesos tambin son aplicados en reacciones catalizadas por una enzima.

Keq es una proporcin de constantes de ndice Las reacciones qumicas son hasta cierto grado reversibles, en condiciones de equilibrio (concentraciones generales constantes) el ndice de conversin de sustratos a productos es igual que el de productos a sustratos. Indice1 = Indice -1 K1[A] [B] K1 K-1 [A] [P] [B] =K -1[P]

La proporcin de K1/K-1 = Keq Propiedades importantes que siguen de un sistema en equilibrio: 1) La constante de equilibrio es una proporcin de las constantes de ndices de reaccin. 2) En equilibrio, los ndicea de reaccin de las reacciones hacia adelante y hacia atrs son iguales 3) El equilibrio es un estado dinmico, por pequeas interconversiones de molculas individuales 4) El valor numrico de la constante de equilibrio (Keq) se calcula a partir de las concentraciones en equilibrio o por la proporcin K1/K-1 LA CINTICA DE LA CATALISIS ENZIMTICA Las enzimas disminuyen la barrera de energa de activacin para una reaccin Las enzimas aceleran los ndices de reaccin al disminuir la transicin, pudiendo diferir en la manera en que se logra. GF para la formacin de estados de

En algunos casos el ambiente del sitio activo disminuye la GF al estabilizar los estados de transicin, es decir la enzima puede imaginarse como unida al ntermediario de manera ms estrecha que a sustratos y productos. La proteasa del VIH ilustra la catlisis por una enzima que disminuye la barrera de activacin al estabilizar los estados de transicin. La catlisis por enzima (mecanismo de reaccin singular) ocurre cuando el intermediario del estado de transicin forma un enlace covalente con la enzima (catlisis covalente). LAS ENZIMAS NO AFECTAN LA Keq
Las enzimas pasan por modificacin durante la catlisis pero al terminar la reaccin salen sin cambios, la enzima no causa ningn efecto sobre la

G para la reaccin general, solo importa el estado inicial y final de los

reactivos.

Reaccin catalizada por enzima:

A ambos lados de la flecha la enzima esta en igual cantidad y forma por ende: [P][Q][Enz] [A][B][Enz] Se elimina la concentracin de la enzima y se reduce: [P][Q] [A][B] Por ende las enzimas carecen de efecto sobre Keq

MULTIPLES FACTORES INFLUYEN SOBRE LOS INDICES DE REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMA Temperatura El incremento de la temperatura aumenta el ndice de reacciones no catalizadas y catalizadas por enzimas al aumentar la energa y la frecuencia de choque de las molculas que estn reaccionando. Este incremento tambin produce aumento en la energa cintica de la enzima hasta un punto que excede la barrera de energa para alterar las interacciones no covalentes que mantienen su estructura tridimensional, empieza a desnaturalizarse con prdida de actividad cataltica. Las enzimas de seres humanos muestran estabilidad hasta 40 55 C. Q10 o coeficiente de temperatura, para un incremento de 10 C el ndice de un proceso biolgico aumenta, generalmente estos ndices se duplican para un aumento de 10 C (Q10 =2) Para organismos homeotrmicos, los cambios de los ndices de reaccin de enzimas (por temperatura) tiene importancia fisiolgica en caos como fiebre e hipotermia. Concentracin de ion hidrgeno Existe una dependencia a la concentracin de ion hidrgeno de los ndices de las reacciones catalizadas por enzima (actividad optima a ph 5 9) La concentracin de ion hidrgeno juega un papel importante en el equilibrio entre la desnaturalizacin de la enzima (ph alto o bajo) y los efectos sobre el estado cargado de la enzima y/o sustrato. La ganancia o perdida de grupos cargados cruciales(carboxilato(-) y amina(+)) afecta la unin a sustrato, por ende retrasa o suprime la catlisis.

LAS VALORACIONES DE REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMA POR LO GENERAL MIDEN LA VELOCIDAD INICIAL En las condiciones de velocidad inicial las mediciones de los ndices se hacen en periodos breves, por tantos se acumula trazas de producto. La velocidad inicial (Vi) de la reaccin es la del ndice hacia adelante. Vi es proporcional a la concentracin de enzima presente en exceso molar grande de sustrato. La medicin de la Vi permite estimar la cantidad de enzima en muestra biolgica. LA CONCENTRACION DE SUSTRATO AFECTA EL INDICE DE REACCIN En condiciones de seudoprimer orden, la conducta de una enzima con varios sustrato imitara a la de otra con uno solo, pero el ndice observado depender de la constante de ndice de K 1 para la reaccin y de la concentracin de sustrato(s). A medida que la concentracin de sustrato aumenta, para una enzima comn, Vi aumenta hasta un valor mximo (Vmax), hasta que la enzima se satura cuando la Vi ya no aumenta a pesar de seguir aumentando la concentracin de sustrato, en este caso depender de la rapidez de disociacin del producto con la enzima para combinarse con mas sutrato. LAS ECUACIONES DE MICHAELIS - MENTEN Y DE HILL MODELAN LOS EFECTOS DE LA CONCENTRACIN DE SUSTRATO La ecuacin de Michaelis Menten Relacin entra la velocidad inicial y la concentracin de sustrato [S] Vmax [S] Km + [S] La constante Km de michaelis es la concentracin de sustrato, Vi es la mitad de la Vmax alcanzable a una concentracin particular de enzimas. La ecuacin de Michaelis se da en 3 condiciones: 1) Cuando [S] es menor que Km .- donde Km + [S] es igual a la Km En estas condiciones, Vi es proporcional a K[S], por ende Vi es directamente proporcional a [S] Vmax [S] Km Vmax Km

: aproximadamente igual a

2) Cuando [S] es mucho mayor que Km.- el trmino Km + [S] es igual a [S] En estas condiciones, la velocidad de la reaccin es mxima (Vmax) y no est afectada por aumentos adicionales de la concentracin de sustrato. Vmax [S] [S]

3) Cuando [S] = Km La velocidad inicial es la mitad de la velocidad mxima

Vmax [S] 2 [S]

Una forma lineal de la ecuacin de Michaelis Menten se usa para determinar Km y Vmax Esta forma lineal permite extrapolar Vmax y Km desde datos de velocidad inicial obtenido a concentraciones menores de sustrato sin necesidad de llegar a la saturacin. Vmax [S] Km + [S] Se invierte: Km + [S] Vmax [S] Se factoriza: Km Vmax [S] Se simplifica: 1 Vi Km 1 1 Vmax [S] Vmax [S]

Vmax [S]

Es una ecuacin para una lnea recta expresada en el grafico de doble recproco o de Lineweaver Burk, cuya mayor virtud es la facildad para determinar los mecanismos cinticos de inhibidores de enzima

La constante cataltica, K cat La actividad de preparaciones de enzimas impuras o actividad especfica (Vmax dividida entre la concentracin de protena) Para una enzima homognea es posible calcular su nmero de recambio (Vmax divida entre los mol de enzima presente), pero si se conoce el nmero de sitios activos presentes, la actividad cataltica de una enzima homognea se expresa mejor con su constante cataltica (K cat) (Vmax dividida entre el nmero de sitios activos, S t) V max St Eficiencia cataltica, K cat / K m Los beneficios de una K cat alta solo pueden obtenerse si la K m es suficientemente baja. La eficiencia cataltica de enzimas se expresa mejor en trminos de la proporcin de estas 2 constantes cinticas, K cat / K m. Los ejemplos de enzimas para las cuales K cat / K m se aproxima al lmite de difusin de 10 - 10 M s incluyen la triosafosfato isomerasa, anhidrasa carbnica, acetilcolinesterasa y adenosina desaminasa. La naturaleza a menudo sortea las limitaciones sobre K cat / K m impuestas por la difusin al montar grupos de enzimas relacionadas para formar complejos de mltiples enzimas. La K m puede aproximar una constante de unin La afinidad de una enzima por su sustrato es la inversa de su constante de disociacin (K d), mientras menor es la disociacin de la enzima y sustrato, mayor es la afinidad entre ambas. La constante de michaelis K m a menudo aproxima la constante de disociacin K d, esto no sucede a menudo.

K -1 K1

1 / K m solo aproxima a 1 / K d , cuando la asociacin y disociacin del complejo ES son rapidas en comparacin con la catlisis

LA ECUACIN DE HILL DESCRIBE LA CONDUCTA DE ENZIMAS QUE MUESTRAN UNIN COOPERATIVA DE SUSTRATO Algunas enzimas se unen a sus sustratos de una manera cooperativa, anloga a la unin de oxgeno por la hemoglobina. Esta conducta cooperativa es exclusiva de enzimas multimricas que unen sustratos en mltiples sitios. Los enzimlogos emplean una representacin grfica de la ecuacin de Hill, dispuesta en una forma que predice una lnea recta donde k es una constante compleja Log Vi V max - Vi El coeficiente de Hill es una pendiente de la lnea n Cuando n=1, todos los sitios se comportan de manera independiente , y se observa conducta cintica de Michaelis Menten simple, si n es ms que 1 significa que la enzima muestra cooperacin positiva , cuanto ms alto sea el grado de cooperacin ms sigmoideo ser el grfico de Vi contra [S] EL ANLISIS CINTICO DISTINGUE ENTRE INHIBICION COMPETITIVA Y NO COMPETITIVA Los inhibidores de las actividades catalticas enzimticas proporcionan agentes farmacolgicos y recursos de investigacin para el estudio del mecanismo de accin de las enzimas. Los inhibidores pueden clasificarse con base en su sitio de accin en la enzima (modificacin qumica), o en los parmetros de cintica en los cuales influyen. Desde un punto de vista cintico encontramos 2 clases de inhibidores con base en la superacin o no del aumento de la concentracin de sustrato a la inhibicin. Los inhibidores competitivos tpicamente semejan sustratos Con el aumento de la concentracin de sustrato se puede superar los efectos de los inhibidores competitivos. Las estructuras de estos inhibidores tiende a asemejarse a la estructura de un sustrato (anlogos de sustrato), lo cual le permite unirse y bloquear la porcin de unin a sustrato del sitio activo. Proceso dinmico en la formacin y disociacin del complejo E-I n log [S] log K

EI

E+I

La constante de equilibrio (K i) es: [E] [I] [E I] Ki K i

Un inhibidor competitivo acta al disminuir el nmero de molculas de enzimas libres disponibles para unin a sustrato. EI E ES

E+P

El aumento de la [S] disminuye la concentracin del complejo E I (eliminando la enzima libre disponible) y aumenta la velocidad de la reaccin. Los grficos del doble recproco facilitan la evaluacin de inhibidores Estos grficos distinguen entre inhibidores competitivos y no competitivos, y simplifican la evaluacin de constantes de inhibicin . La Vi se determina en presencia o no del inhibidor a varias concentraciones de sustrato. Un inhibidor competitivo no tiene efecto sobre la V max pero aumenta la K m y la K m aparente para el sustrato. Se calcula Ki y los valores se usan para comparar diferentes inhibidores de la misma enzima, mientras ms bajo sea el valor de K i, ms eficaz es el inhibidor. Los inhibidores no competitivos simples disminuyen V max pero no afectan K m E n la inhibicin no competitiva, la unin del inhibidor no afecta la unin del sustrato, por ende se forman tanto EI como EIS, pero aun pudindose unir a sustrato su eficiencia para transformarlo en producto, expresado en V max est disminuida. Estos inhibidores unen enzimas en sitios distintos del sitio d unin al sustrato, muestran poco o ninguna semejanza con el susutrato. Aqu la E y el complejo EI tienen afinidad idntica por el sustrato, lo ms complejo ocurre cuando la unin del inhibidor afecta la afinidad de la enzima por el sustrato.

Grfico de Dixon Se emplea para determinar constantes de inhibicin. La V i se mide a varias concentraciones del inhibidor pero a una fija del sustrato (S). Para un inhibidor competitivo o no competitivo simple, el grafico de 1/Vi contra la concentracin del inhibidor (I) da una lnea recta. En publicaciones farmacuticas a menudo se emplean grficos de Dixon para evaluar la potencia comparativa de inhibidores competitivos. IC50 Alternativa menos rigurosa y ms frecuente para K i como una medida de la potencia inhibidora es la concentracin de inhibidor que produce inhibicin de 50%. El valor numrico de IC50 vara en funcin de las circunstancias especficas de la concentracin de sustrato, etc. (bajo la cual se determina) Inhibidores estrechamente unidos Cuando la concentracin de inhibidor requerida para medir K i cae por debajo de la concentracin de enzima tpicamente presente en una valoracin, suponemos que una fraccin del inhibidor est presente como un complejo EI (unido con afinidad muy alta) El anlisis cintico de estos inhibidores muy unidos requiere de ecuaciones cinticas especializadas que incorporan la concentracin de enzimas para estimar K i o IC 50 y distinguir inhibidores competitivos y no competitivos estrechamente unidos. Los inhibidores irreversibles envenenan enzimas Varios inhibidores producen modificacin (hacer o romper enlaces covalentes) qumica en la enzima actuando de manera irreversible. Una enzima envenenada por un inhibidor irreversible, como un tomo de metal pesado o un reactivo acilante, permanece inhibida aun habindolo eliminado del medio circundante. Inhibicin basada en mecanismo Tambin llamados inhibidores suicidas. Despus de la unin al sitio activo, la catlisis por la enzima genera un grupo muy reactivo que forma un enlace covalente con un residuo esencial y bloquea la funcin del mismo. Los inhibidores suicidas son especficos para enzimas y no reactivo fuera de los confines del sitio activo, importante para la creacin de frmacos especficos para enzima. CASI TODAS LAS REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMA COMPRENDE 2 O MAS SUSTRATOS Las enzimas tienen desde 1 hasta 2 o ms sustratos productos, sin embargo los principios fundamentales son aplicables para enzimas con nico o mltiples sustratos.

La diferencia est en la expresin matemtica donde para las de mltiples sustratos son ms complejas. Aspectos comunes de conductas cinticas para reacciones de 2 sustratos y 2 productos (Bi Bi): Reacciones secuenciales o de desplazamiento nico Reacciones donde ambos sustratos deben combinarse con la enzima formando un compuesto ternario antes de la catlisisLas reacciones Bi-Bi secuenciales pueden distinguirse si los 2 sustratos se agregan al azar o en uno forzoso. En orden al azar el sustrato A o el B pueden combinarse primero con la enzima para formar EA o EB En orden forzoso, A debe combinarse primero con E antes de que B pueda combinarse con EA, la adicin de A induce a un cambio conformacional en la enzima que alinea residuos que reconocen B y se unen. Reacciones de Ping Pong Estas reacciones comprenden catlisis covalente y una forma transitoria, modificada, de la enzima. Las reacciones Bi-Bi de ping-pong son reacciones de doble desplazamiento. El grupo que se transfiere primero es desplazado de A por la enzima para formar P y una forma modificada de la enzima (F), la transferencia del grupo subsiguiente desde F hacia B que forma el producto (Q) y regenera E, constituye el 2do desplazamiento. Casi todas las reacciones Bi-Bi se conforman a la cintica de Michaelis menten Donde la Vmax se refiere al ndice de reaccin que se alcanza cuando ambos sustratos estn presentes a concentraciones que producen saturacin. El valor K m caracterstico de un sustrato corresponde a la concentracin que da la mitad de la V max cuando el 2do sustrato est produciendo saturacin. Pueden usarse grficos de doble recproco para determinar V max y K m. La V i se mide como una concentracin de un sustrato (variable) mientras que la del otro (fijo) es constante. Los estudios de inhibicin del producto se usan para complementar anlisis cinticos y distinguir entre reacciones Bi-Bi ordenas y al azar. EL CONOCIMIENTO DE LA CINTICA, EL MECANISMO Y LA INHIBICION DE ENZIMAS, AYUDAN A LA CREACIN DE FARMACOS Muchos frmacos actan como inhibidores de enzimas Objetivo de la farmacologa es identificar agentes que pueden: 1) Destruir o alterar el crecimiento, la invasividad o el desarrollo de agentes patgenos invasores. 2) Estimular mecanismos de defensa endgenos 3) Suspender u obstaculizar procesos moleculares aberrantes desencadenados por estmulos genticos, con trastorno mnimo de las funciones celulares normales del husped.

Gracias a sus diversas funciones fisiolgicas y alto grado de selectividad de sustrato, las enzimas constituyen blancos naturales para la creacin de frmacos que son tanto potentes como especficos. La cintica enzimtica define condiciones de investigacin apropiadas La cintica enzimtica, tiene un papel crucial en el descubrimiento de frmacos, es necesario el conocimiento de la conducta cintica enzimtica para seleccionar condiciones de valoracin apropiadas que detectan con facilidad la presencia de un inhibidor. Tambin proporciona el medio para cuantificar y comparar la potencia de diferentes inhibidores y definir su modo de accin. Los inhibidores no competitivos son los ms resaltantes ya que sus efectos nunca pueden superarse por completo Muchos frmacos se metabolizan in vivo La enzimas presentes en el paciente o en el agente patgeno actan sobre frmacos, dicho proceso se denomina metabolismo de frmaco: Por ejemplo: La penicilina y otros antibiticos beta-lactmicos bloquean la sintesis de la pared celular en bacterias al envenenar (irreversible) la enzima alanil alanina carboxipeptidasatranspeptidasa, pero muchas bacterias producen beta-lactamasas que hidrolizan la funcin betalactmica crucial en la penicilina y farmacos relacionados. Para superar la resistencia a antibiticos, administrar de manera simultanea un inhibidor de beta-latamasa y un antibitico betalactmico. Tambin se requiere transformacin metablica para convertir un precursor farmacolgico inactivo (profrmaco) en su forma biolgica activa, el diseo y la administracin eficaces de profrmacos requieren conocimientos de la cintica y mecanismos de las enzimas encargados de transformarlos en sus formas biolgicas activas. CAPITULO 9 ENZIMAS: REGULACION DE ACTIVIDADES IMPORTANCIA BIOMDICA Gracias a Claude Bernard (regulacin metablica) y Walter Cannon (homeostasis), se sabe que los organismos responden a cambios de sus ambientes externo e interno por medio de ajustes balanceados y coordinados de los ndices de reacciones metablicas especficas. El mantenimiento del equilibrio homeosttico depende de la maquinaria de estmulo- respuesta que si se altera puede ser nociva para la salud de seres humanos. Ejemplos como: el cancer, la diabetes, fibrosis qustica y la enfermedad de Alzheimer, se caracterizan por disfunciones de la regulacin desencadenadas por agentes patgenos o mutaciones genticas. El conocimiento de los factores que controlan los indices de reacciones catalizadas por enzimas es esencial para un entendimiento de la base molecular de la enfermedad.

LA REGULACION DEL FLUJO DE METABOLITOS PUEDE SER ACTIVA O PASIVA Los valores de K m para enzimas guarda proporcion con la concentracin intracelular promedio de sus sustratos, por tanto los cambios de esta concentracin generan cambios correspondientes del flujo de metabolitos. Las respustas a cambios de la concentracin de sustrato de manera pasiva permite coordinar el flujo de metabolitos y manterner la homeostasis en clulas quiescentes, pero con alcance limitado para respuestas a cambios ambientales. Los mecanismos que regulan la eficiencia de las enzimas de manera activa en respuestas a seales interna y externas. El flujo de metabolitos tiende a ser unidireccional En las clulas vivas los productos de reaccin sirven como sustratos para otras reacciones catalizadas por enzimas, por ende las supuestas reacciones reversibles ocurren de manera unidireccional La sucesin de reacciones metablicas acopladas se acompaa de un cambio global de la energa libre que favorece el flujo unidireccional de metabolitos. Esto es anlogo al flujo de agua a travez de una tubera inclinada, donde hay pasos individuales catalizados por enzima (codos y vueltas). El flujo de agua permanece unidireccional debido al cambio general de altura que es el cambio general de la energa libre en una va. LA COMPARTAMENTALIZACIN ASEGURA EFICIENCIA METABLICA Y SIMPLIFICA LA REGULACIN Las vas anablicas y catablicas que interconvierten productos comunes pueden tener lugar en compartimientos subcelulares especficos. Por ejemplo: los lisosomas que sirve como compartiemiento para enzimas que degradan proteinas y polisacridos, o tambien los mitocondrias para la oxidacin de acidos grasos. La segregacion de vias metablicas en celulas especializadas puede proporcionar compartimentalizacin fsica adicional. La capacidad de las enzimas para distinguir entre coenzimas similares como NAD+ y NADP+ tambien origina una forma de compartimentalizacin ya que segrega los electrones de NADH (generacin de ATP) a partir de los del NADPH (pasos reductivos de vias biosintticas) El control de una enzima que cataliza una reaccion limitante regula una va metablica completa. La enzima ideal para intervencin reguladora es quella cuya cantidad o eficiencia cataltica dicta que la reaccin que cataliza sea lenta en comparacin con todas las otras en la va, por ende el decremento de la eficiencia o cantidad de catalizador para la reaccin limitante de la velocidad , reduce el flujo de metabolitos por toda la va, y a la inversa. Como rectoras naturales del flujo metablico, las enzimas que catalizan pasos limitantes, constituyen blancos eficientes para intervencin reguladora de frmacos.

REGULACION DE LA CANTIDAD DE ENZIMA La capacidad catalitica puede verse influenciada tanto al cambiar la cantidad de enzima presente como al alterar su eficiencia cataltica intrinsica. Las proteinas se sintetizan y degredan de manera continua Schoenheimer dedujo que las proteinas del cuerpo se encuentran en estado de equilibrio dinmico en el cual se estan sintetizando y degradando de manera continua (recambio de proteina) La cantidad absoluta de una enzima refleja el balance neto entre sus ndices de sntesis y de degradacin. En seres humanos las alteraciones de la cifras de enzimas especficas pueden estar afectadas por un cambio de la constante de ndice para los procesos generales de sintesis (K s), degradacin (K deg) o ambos Enzima

Aminocidos

Control de la sintesis de enzima La sintesis de ciertas enzimas depende de la presencia de inductores, sustratos o compuestos relacinados (estructural) que inician su sntesis. Un exceso de un metabolito puede restringir la sntesis de su enzima cognada por medio de represin. Tanto la induccin como la represin implican elementos cis (DNA especficos de genes regulados) y proteinas reguladoras que transactan La sntesis de otras enzimas puede estimularse mediante la unin de hormonas y otras seales extracelulares a receptores celulares especficos. Control de la degradacin enzimtica En animales muchas proteinas se degradan por medio de la va de la ubiquitina-proteasoma Esta va se encarga tanto de la degradacin regulada de proteinas celulares seleccionadas, como de la eliminacin de especies protenicas defectuosas o aberrantes. La va dela ubiquitinaproteasoma puede degredar de manera selectiva proteinas cuya integridad fsica y competencia funcional han quedado comprometidas por la prdida de un grupo prosttico o por dao del mismo, oxidacin de residuos cisteina o histidina, o desaminacin de residuos asparagina o glutamina. Se cree que las disfunciones de la ubiquitina-proteasoma contribuyen a la acumulacin de especies protenicas plegadas de modo aberrante, caractersticas de varias enfermedades neurodegenerativas.

HAY MULTIPLES OPCIONES PARA REGULAR LA ACTIVIDAD CATALTICA Los cambios de eficiencia cataltica intrinsica por unin de ligandos disociables (regulacin alostrica) o por modificacin covalente logran regulacin de la ctividad enzimtica en segundos. Los cambios de la concentracin de proteinas satisfacen requisitos adaptativos a largo plazo, mientras que los cambios de la eficiencia cataltica son mas idneos para alteraciones rpidas y transitorias del flujo de metabolitos LOS EFECTORES ALOSTRICOS REGULAN CIERTAS ENZIMAS La inhibicin por retroalimentacin se refiere a la inhibicin de una enzima en una va biosinttica por un porducto terminal. Ejm:

Las altas concentraciones de D inhiben la conversin de A en B. La inhibicion depende de la capacidad de D para unirse s Enz 1 e inhibirla. D se une a un sitio alostrico separado (espacial) del sitio cataltico de la enzima blanco, es decir D actua como efector alostrico negativo de Enz1. En una va biosinttica ramificada, las reacciones iniciales participan en la sntesis de multiples productos terminales, donde cada producto inhibe por retroaccin la secuencia de reaccin lineal. La cintica de inhibicin por retroalimentacin puede ser competitiva, no competitiva, parcialmente competitiva o mixta. Los inhibidores por retroalimentacin por lo general inhiben el primer paso comprometido en una secuencia biosinttica particular. Cada producto terminal solo puede inhibir de manera parcial la actividad cataltica, el efecto de un exceso de 2 o ms productos terminales puede ser estrictamente aditivo o mayor que su efecto individual (Inhibicion por Retroalimentacin Cooperativa) La aspartato transcarbamoilasa (ATCasa) es un modelo de enzima alostrica La ATCasa, el cataltico para la primera reaccin nica para la biosntesis de pirimidina, es un blanco de regulacin por retroalimentacin por trifosfato de citidina (CTP) y trifosfato de Adenosina ( ATP). El CTP, producto terminal de la va biosinttica de pirimidina, inhibe la ATCasa, mientras que el ATP la activa. Los sitios alostrico y cataltico son distintos desde el punto de vista espacial Los inhibidores por retroalimentacin no son isostricos con un sustrato, sino alostricos (ocupan otro espacio). Las enzimas alostricas son aquellas que tienen el sitio activo para la catlisis que puede modularse por la presencia de efectores en un sitio alostrico.

Jacques Monod propuso la existencia de sitios alostricos que son distintos desde el punto de vista fsico del sitio cataltico. Esta hiptesis se ha confirmado por cristalografa con rayos X y mutagnesis dirigida hacia sitio, lo que demuestra la existencia de sitios activos y alostricos distintos desde el punto de vista espacial sobre diversas enzimas. Los efectos alostricos pueden ocurrir sobre K m o sobre V max Se hace referencia a 2 clases de enzimas reguladas: de la seria K y de la serie V. Las alteraciones de K m y de V max se producen por cambios conformacionales en el sitio cataltico inducidos por union del efector alostrico en su sitio Para las enzimas alostricas de la serie K, la cintica de saturacin de sustratos es competitiva en sentido de que K m esta incrementada sin un efecto sobre V max. El cambio conformacional puede debilitar los enlaces entre sustrato y residuos. Para enzimas alostricas de la serie V, el inhibidor alostrico disminuye V max sin afectar la K m. Si hay cambio conformacional su efecto primario es alterar la orientacin o la carga de residuos catalticos, lo que genera un decremento de V max. LA REGULACIN POR RETROALIMENTACIN NO ES SINNIMO DE INHIBICIN POR RETROACCIN Los productos terminales de una reaccin producen retroalimentacin de su propia sntesis y aveces la controlan por medio de de inhibicin por retroaccin de una enzima biosinttica temprana. La regulacion por retroalimentacin es un termino fenomenolgico desprovisto de inferencias mecansticas e inhibicin por retroalimentacin es el mecanismo para la regulacin de la actividad enzimtica Ejm: el colesterol de la dieta aminora la sntesis heptica de colesterol, esta regulacin por retroaccin no incluye inhibicin por retroaccin. MUCHAS HORMONAS ACTUAN MEDIANTE SEGUNDOS MENSAJEROS ALOSTERICOS Los impulsos nerviosos y la unin de hormonas a receptores de superficie celular, desencadenan cambios del indice de reaccines catalizadas por enzimas dentro de celulas blanco, al inducir liberacin o sntesis de efectores alostricos especializados llamados segundos mensajeros (3,5cAMP; 3,5-cGMP y los polifosfoinositoles) cuya participacin es importante en procesos de regulacin celular. El primer mensajero es considerado la hormona o el impulso nervioso. LAS MODIFICACIONES COVALENTES REGULADORAS PUEDEN SER REVERSIBLES O IRREVERSIBLES Las formas ms frecuentes de modificacin covalente reguladora son proteolisis parcial y fosforilacin.

La proteolisis constituye una modificacin irreversible dado que los organismos carecen de la capacidad de volver a unir 2 porciones de una proteina producidas por hidrlisis de un enlace peptdico. La fosforilacin es un proceso de modificacin reversible, por ejemplo la fosforilacin de proteinas den residuo serilo, treonilo o tirosilo, catalizada por proteinas cinasa, es favorecida desde el punto de vista termodinmico. LAS PROTEASAS PUEDEN SECRETARSE COMO PROENZIMAS INACTIVAS DESDE EL PUNTO DE VISTA CATALTICO Las proproteinas.- ciertas proteinas son sintetizadas como proteinas precursoras inactivas La protelisis selectiva convierte una proproteina por medio de uno o ms cortes proteolticos sucesivos en una forma que mustra la actividad caracterstica de la proteina madura, por ejemplo su actividad enzimtica. Ejemplos: Insulina (proinsulina), pepsina (pepsingeno), tripsina (tripsingeno), colgeno (procolgeno) Las proenzimas facilitan la movilizacin rpida de una actividad en respuesta a demanda fisiolgica. La sntesis y secrecin de proteasas como proenzimas inactivas en el aspecto cataltico, protege al tejido de origen contra autodigestin . La formacin de coagulo de sangre, la disolucin de coagulo y la reparacin del tejido, solo se ponen en marcha en respuesta a necesidades fisolgicas o fisiopatolgicas apremiantes. Las enzimas necesarias de manera intermitente pero con rapidez se secretan en forma inactiva, puesto que la sintesis nueva de las proteinas requeridas podra ser insuficientemente rpida para responder a la perdida de sangre La activacin de la proquimotripsina requiere protelisis selectiva La protelisis selectiva suele originar cambios conformacionales que crean el sitio cataltico de una enzima. Los cambios conformacionales de la protelisis selectiva de la proquimotripsina (quimotripsingeno) alinean los 3 residuos de la red de transmision de carga lo que forma el sitio cataltico LA MODIFICACIN COVALENTE REVERSIBLE REGULA ENZIMAS CLAVES DE MAMFERO Las modificaciones covalentes (glucosilacin, hidroxilacin y acilacin) introducen caractersticas estructurales singulares en proteinas recien sintetizadas. Entre las modificaciones covalentes que regulan la funcin de las proteinas, la ms frecuente es la fosforilacin-desfosforilacin. Una clula de mamfero tpica posee miles de proteinas fosforiladas y varios cientos de proteinas cinasas y proteinas fosfatasas que catalizan su interconversin. La facilidad de interconversin de

enzimas entre sus formas fosfo- y desfosfo- , explica la frecuencia en que la fosforilacin y desfosforilacin ocurren como un mecanismo para el control regulatorio. La fosforilacindesfosforilacin permite alterar las propiedades funcionales de la enzima afectada solo durantes el tiempo que satisfaga una necesidad especfica. La fosforilacin influye sobre la eficiencia cataltica intrnsica de una enzima o sobre otras al inducir cambios conformacionales. La modificacin covalente regula el flujo de metabolitos Tanto la fosforilacin-desfosforilacin como la inhibicin por retroalimentacin proporcionan regulacin a corto plazo, facilmente reversible, del flujo de metabolitos en respuesta a seales fisiolgicas especficas. La fosforilacin-desfosforilacin y la inhibicin por retroalimentacin actuan sobre las primeras enzimas de una secuencia metablica larga y a menudo biosinttica, y ambas actuan en sitios alostricos ms que catalticos. LA FOSFORILACION DE PROTEINA ES EN EXTREMO VERSATIL La funcin enzimtica afectada a menudo es la eficiencia cataltica de la proteina, la fosforilacin tambien puede alterar su ubicacin dentro de la clula, la suceptibilidad a la degredacin proteoltica, o la capacidad de respuesta a regulacin por ligandos alostricos. La fosforilacin y desfosforilacin en cualquier sitio puede catalizarse por multiples proteinas cinasas o proteina fosfatsas, ambas actuan sobre varias proteinas y se interconvierten en forma activa e inactiva. En redes reguladoras complejas, las enzimas individuales muestran respuesta a diferentes seales ambientales. La capacidad de muchas proteinas cinasas y proteinas fosfatasas para marcar a ms de una proteina proporcionan un medio para una seal ambiental con el fin de regular de manera coordinada mltiples procesos metablicos. EVENTOS REGULADORES INDIVIDUALES SE COMBINAN PARA FORMAR REDES DE CONTROL COMPLEJAS. Para mantener la homeostasis y satisfacer las demandas de estas, las enzimas interconvertibles y las enzimas de las cuales depende la interconversin estn enlazadas para formar redes reguladoras integradas, un ejemplo claro de este tipo de red es el cilco de las clulas eucaritoas que controla la divisin celular.