Reacciones de Aglutinacin Mayo 02, 2011

Reacciones de Aglutinacin

Introduccin :
REACCIONES DE AGLUTINACIN Los ensayos inmunolgicos se basan en la especificidad de la unin Ag.- Ac. La unin antgeno- anticuerpo depende de la complementariedad entre ambas molculas. Las reacciones antgeno-anticuerpo se estudian "in vitro" utilizando preparaciones de antgenos y antisueros. El estudio de las reacciones antgenoanticuerpo "in vitro" se denomina serologa y es de especial importancia en la microbiologa, inmunologa, hematologa y en pruebas diagnosticas. En las reacciones antgeno-anticuerpo se distinguen 2 etapas: la primera consiste en la unin del antgeno con el anticuerpo y la segunda en las manifestaciones que resultan de dicha unin. La primera fase se realiza por la combinacin de reas pequeas tanto del antgeno como del anticuerpo, denominadas respectivamente determinante antignico y sitio activo, que al unirse forman un complejo antgenoanticuerpo. La reaccin es reversible, siguiendo, por consiguiente, la ley de accin de masas y existen factores externos que pueden modificar dicha unin, como son: el pH, la temperatura y la fuerza inica. Dependiendo de la naturaleza del antgeno y del anticuerpo y de las condiciones de la reaccin se puedenobservar diferentes tipos de reacciones serolgicas: Reaccin de Neutralizacin, Precipitacin y Neutralizacin. AGLUTINACIN Cuando un antgeno particulado multivalente, reacciona con su anticuerpo especfico al menos

divalente, se observa la formacin agregados de estas partculas, esto se conoce como aglutinacin. En estas reacciones el determinante antignico est sobre la superficie de una partcula o de una clula. Estas reacciones son ms sensibles que las de precipitacin para detectar pequeas cantidades de anticuerpos, debido a que relativamente pocas molculas de anticuerpo pueden unir efectivamente un gran nmero de partculas de antgeno macroscpicamente visibles. Cuando se aumenta la sensibilidad de reacciones antgeno-anticuerpo una reaccin de un antgeno soluble con su anticuerpo especfico, se transforma el antgeno soluble en particulado adsorbindolo o unindolo qumicamente a estructuras particuladas tales como esferas de ltex o arcilla coloidal y de esta manera pueden ser detectados los anticuerpos por reacciones de aglutinacin, estos ensayos se conocen como ensayos de aglutinacin pasiva. REACCIONES FEBRILES Antgenos Febriles es un trmino referido a un grupo de suspensiones bacterianas, representativo de un nmero de bacterias patgenas para la especie humana y responsables de la aparicin de infecciones (brucelosis, salmonelosis y ciertas rickettsiosis) que cursan con un cuadro febril en el husped infectado. La mejor forma para establecer la etiologa de una enfermedad infecciosa es el aislamiento e identificacin del agente causal de la misma. Sin embargo, estos medios de diagnstico no son siempre de fcil aplicacin y es ah donde radica la importancia del uso de las suspensiones bacterianas en la deteccin de los anticuerpos presentes en el suero del paciente (mtodo indirecto de diagnstico).

Reacciones de Aglutinacin Mayo 02, 2011 FACTOR REUMATOIDE En el 80% de los pacientes con artritis reumatoide se encuentra un anticuerpo en la sangre llamado factor reumatoide, anticuerpo de tipo IgG o IgM; se desconoce si es el causante de la destruccin de cartlago articular que caracteriza la enfermedad. Estudios demuestran que se trata de fallas en la regulacin de stos anticuerpos. PROTENA C REACTIVA (PCR) La PCR tiene una alta sensibilidad, es un examen que mide la cantidad de una protena en la sangre que indica inflamacin aguda. La Protena C reactiva es una protena plasmtica, una protena de fase aguda producida por el hgado y por los adipocitos. Es miembro de la familia de las pentraxinas. No debe ser confundida con el pptido C ni con la Protena C. La protena C reactiva se produce en el hgado cuando hay una infeccin o inflamacin aguda en el cuerpo. Su importancia es que reacciona con el sistema del complemento que es un sistema de defensa contra agresiones externas del cuerpo humano. HEMAGLUTINACIN La presencia de antgenos en la superficie de los glbulos rojos se puede detectar por la hemaglutinacin producida cuando se aade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antgenos. Esta tcnica se emplea habitualmente para la identificacin de los grupos sanguneos y Rh, para lo cual a la sangre heparinizada se le aaden los antisueros correspondientes: anti- A, anti-B o antiAB (todos ellos anti-Rh negativos). Habr aglutinacin cuando los glbulos rojos posean la especificidad del antisuero aadido. VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) La prueba de los Laboratorios de investigacin de las enfermedades venreas VDRL por sus siglas en ingles es de tipo tamizaje para sfilis y mide los anticuerpos reagnicos, los cuales son producidos en la sfilis como resultado de la interaccin de la bacteria causante de dicha enfermedad (Treponema pallidum) y el propio cuerpo del paciente. Este examen es una herramienta de tamizaje til para la sfilis, aunque su capacidad de deteccin depende de la etapa de la enfermedad. En la etapa ms temprana (sfilis primaria), el examen es positivo en aproximadamente

el 60% de las ocasiones. Su utilidad aumenta en etapas posteriores como sfilis secundaria y sfilis latente donde puede ser positivo en el 70 a 90% de las ocasiones; en las etapas finales (sfilis terciaria) el examen es positivo en slo el 60% de los casos.

cerebro y en la placenta en las mujeres embarazadas con diferentes funciones en hombres y mujeres: En la mujer estimula la maduracin del vulo y en el hombre la produccin de testosterona en los testculos

GONADOTROPINA

CORIONICA HUMANA

Objetivo :
Evaluar los diferentes mtodos de aglutinacin como aglutinacin directa en reacciones febriles para detectar la posible presencia de anticuerpos en sangre Humana para stos antgenos. Evaluar la prueba de hemaglutinacin directa por medio de anticuerpos de oveja anti glbulos rojos de carnero. Evaluar la presencia de la hormona Gonadotropina Corionica Humana en una muestra de orina. Realizar la prueba de Factor Reumatoide y Protena C Reactiva en 10 pacientes como posibles indicadores de enfermedad.

fraccin Beta. Se realiza un examen de sangre para detectar GCH (Gonadotropina Corinica Humana fraccin Beta), una hormona que normalmente se produce durante el embarazo. Una prueba de embarazo cualitativa simplemente verifica si la GCH est en la sangre, mientras que una prueba de embarazo cuantitativa revela el nivel de concentracin exacto de GCH- en la sangre. La gonadotropina corinica humana (GCH- ) es una hormona sintetizada en el

2
Prueba Equipo Reacciones de Febriles 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Salmonella paratyphi AH Prueba Equipo -

Salmonella paratyphi Factor Reumatoide BH 1 2 3

Reacciones de Aglutinacin Mayo 02, 2011

10

5 6 7 8 9 -

Diagrama de Flujo:
Diagrama 1. Reacciones febriles, Factor Reumatoide y Protena C Reactiva
Obtencin de suero Humano

Diagrama 3. Hemaglutinacin y Gonadotropina Corionica Humana (beta).

Salmonella typhi O
Hemaglu tinacin

Obtencin de suero de Oveja sensibilizado

Reacciones Febriles

Factor Reumatoide

Proena C Reactiva

Colocar PBS en Salmonella typhi H 12 pozos

GCH

Obtencin de orina

Si presen ta turbidez filtrar o cen trifugar

Colocar una gota en portaobjetos

Realizar dilucin 1:20

Realizar dilucin 1:20

Agregar una gota de suero al pozo 1

Agregar suspencin con anti-GCH

Aadir una gota de antigeno

Colocar una gota en portaobjetos

Colocar una gota en portaobjetos

Mezclar

Mezclar

Antigenos: Samonella typhi (O y H) Salmonella paratyphi (A y B) Brucella abortus Proteus OX19 Mezclar con aplicador Mover la placa en con movimientos ondulatorios

Agregar una gota de latexgammaglobulina

Aadir gota de PCR-ltex

Realizar diluciones hasta el abortus Brucellapozo 11

Observar su hay aglu tinacin

Incubar

Si es posi tiva repetir 5-7 das

Mezclar con aplicador

Mezclar con aplicador

Observar si hay aglu tinacin

Observar su hay aglutinacin

Observar su hay aglutinacin

Resultados:
Proteus OX19

Tabla 1.Resultados de pruebas febriles utilizando suero humano como fuente de anticuerpos, aplicado a 10 pacientes.
-

Observar su hay aglutinacin

Diagrama 2. Prueba de VDRL

VDRL

Obtencin de suero Humano

Inactivacin Colocar una gota en el portaobjetos

Aadir el antigeno

Mezclar con aplicador Observar a seco fuerte (100x)

Tabla 2. Resultados de factor reumatoide mediante aglutinacin aplicado a 10 pacientes, se muestra que ninguno presenta el factor

Prueba Gonadotropina Corionica Humana Equipo

1 2 3 4 5 6

8 9 10

Reacciones de * * * Tabla 3. Resultados de protena * Reactiva mediante C aglutinacin aplicado a 10 pacientes, se muestra 2 pacientes * presentan un resultado positivo + + Prueba Equipo * 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Proteina C Reactiva + -

Aglutinacin Mayo 02, 2011 inmunologco del paciente, adems se debe revisar el historial clnico de cada uno de ellos. Tamben Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a 1:40 y hasta 1:80 pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infeccin anterior. No siempre se presenta produccin de aglutininas en infecciones bacterianas. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a vacunaciones para ciertas enfermedades. La vacuna tfica puede producir aglutininas contra antgenos Proteus Factor Reumatoide (FR) Los anticuerpos de tipo IgG o IgM contra articulaciones son comunes en pacientes con artritis reumatoide por falta de regulacin, en el estudio aplicado a 10 pacientes se demuestra que ninguno de ellos es posible encontrar problemas con FR valores normales se consideran con titulo de 1:80 por el mtodo de aglutinacin Tabla 2. Proteina C reactiva En el estudio aplicado a 10 pacientes se demuestra que a solo 2 (equipos 9 y 10) Tabla 3. Un examen positivo significa que la persona tiene inflamacin en el cuerpo, lo cual puede deberse a una variedad de afecciones diferentes. Tambin con ste experimento cabe sealar que se puede encontrar 2 pacientes PCR por cada 10 personas, aunque se debe tener en cuenta el historial clnico del paciente, adems de realizar otros estudios. VDRL El estudio aplicado a 10 paciente arrojo un resultado negativo a la prueba de VDRL, Tabla 4, Un examen negativo es normal y significa que no se detectaron anticuerpos contra la sfilis. La prueba de deteccin es ms probable que sea positiva en la sfilis secundaria y latente. Durante la sfilis primaria y terciaria, el resultado del examen puede ser falso negativo. Gonadotropina Corionica Humana El estudio se llevo a cabo en orina en 4 pacientes, de los cuales slo 2 presentaron positiva la prueba, ste tipo de aglutinacin es indirecta. Tabla 6.

10 +

Tabla 4. Resultados la prueba de VDRL mediante de un kid para dicha prueba utilizando suero humano como fuente de anticuerpos aplicado a 10 pacientes.
Prueba | VDRL 1 2 3 4 Equipo 5 6 7 8 9 10 -

Tabla 5. Resultados la prueba de Hemaglutinacin mediante el uso de anticuerpos de oveja anti glbulos rojos de carnero, mediante aglutinacin directa, aplicado a 10 muestras.
Prueba Hemaglutinacin 1 4 2 4 3 4 4 4 Equipo 5 4 6 4 7 4 8 4 9 2 10 4

Tabla 6. Resultados la prueba de Gonadotropina Corionica Humana mediante aglutinacin indirecta, aplicado a 4 pacientes.

* No realizo la prueba

Anlisis de Resultados:
Pruebas Febriles Las pruebas febriles son tiles cuando se tiene a un paciente con fiebre de tipo desconocido. El estudio llevado a cabo en 10 pacientes demuestra que ninguno presenta anticuerpos determinados para el suero comercial (Salmonella sp, Brucella abortus y Proteus Ox-19) de dichos microorganismo debido a que las cinco pruebas dieron negativo Tabla 1, Las seroaglutinaciones son positivas a partir de la segunda semana de la enfermedad, y tienen valor clnico indudable los ttulos mayores a 1/100 en el antgeno O y mayores a 1/500 en el antgeno H. En el caso de las seroaglutinaciones paratficas tienen poco valor para el diagnstico positivo en la prctica clnica. Aunque tambin no se descarta que los pacientes no presenten una reaccin positiva, esto debido a la realizacin de la tcnica, calidad de los reactivos, estado

Reacciones de Aglutinacin Mayo 02, 2011 Hemaglutinacin sta prueba fue llevada a cabo con suero de oveja el cual haba sido sensibilizado contra glbulos rojos de carnero. En dicha prueba se demostr la aglutinacin directa debido a que el antgeno estaba sobre la superficie del eritrocito. Dicha prueba fue llevada a cabo en 10 muestras Tabla 5, donde 9 de los equipos reportan hemaglutinacin en dilucin con titulo 1:4 y slo uno con titulo 1:2, cabe seala que en sta ltima muestra los analistas hayan tenido un error en el manejo de la muestra, dado que todas las muestra fueron del mismo donador. Se debe considerar que el estudio no se llevo bajo condiciones estandarizadas, errores del analista y de la muestra