UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas 2000

Neutralizacion de la actividad proteoltica de venenos de viboras del gnero Bothrops del Litoral Argentino
Ruiz de Torrent, Raquel1 - Leiva, Laura2 - Acosta de Prez, Ofelia1
1- Ctedra de Patologa Mdica - Facultad de Ciencias Veterinarias - UNNE. Sargento Cabral 2139 (3400) Corrientes - Argentina. Tel./Fax: +54 (0783) 425753 - E-mail: patmed@vet.unne.edu.ar 2- Ctedra de Qumica Bilgica I - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura - UNNE. ANTECEDENTES

Los ofidios del gnero Bothrops (yarar) lo componen un grupo de serpientes responsables del 90% de los accidentes ofdicos en Argentina (1). El Litoral Argentino esta habitado por las siguientes especies : Bothrops alternatus y Bothrops neuwiedii distribudas en toda la extensin de dicho territorio, mientras que Bothrops jararaca ,Bothrops jararacussu y Bothrops moojeni se encuentran unicamente en la provincia de Misiones (2) Los accidentes ofdicos causados por el gnero Bothrops se caracterizan por producir efectos locales, con mionecrosis, hemorragia, edema y flictemas (3,4) y otros efectos sistmicos con importantes alteraciones de la coagulacin sangunea, debido a distintos componentes del veneno (5,6) por sus actividades proteolticas, hemorrgicas y mionecrtics (7), adems de interactuar con celulas blanco, induciendo a la liberacin de mediadores qumicos , como las interleucinas (IL6, IL8) (8). Las enzimas con actividad proteoltica actan degradando los componentes proteicos de la membrana basal de la microvasculatura y secundariamente producen disrupcin de clulas endoteliales estando muy ligada a la actividad hemorrgica (9). La actividad proteoltica fue comprobada en venenos de diferentes especies de serpientes del gnero Bothrops de Brasil (10,11,12,13), como tambin fue determinada y cuantificada en venenos del gnero Bothrops que habitan el litoral Argentino (14,15). En cuanto al estudio de la eficiencia neutralizante de distintos sueros antiofdicos sobre diferentes actividades de venenos de serpientes procedentes de distintos lugares geogrficos, se ha demostrado que el veneno de una misma especie, puede presentar diferentes caractersticas qumicas y farmacolgicas segn la regin que habite (11), por tales razones se estudi la capacidad neutralizante del antiveneno polivalente producido en el Instituto Clodomiro Picado de Costa Rica sobre la actividad proteoltica de venenos de diferentes especies del gnero Bothrops, neutralizando eficientemente dichos venenos (16). En este trabajo se estudi la capacidad neutralizante de un antiveneno que dispone nuestra regin, sobre la actividad proteoltica de venenos del gnero Bothrops de las distintas especies que habitan el litoral Argentino.
MATERIAL Y METODOS

Veneno : Se trabaj con venenos obtenidos de ejemplares de Bothrops jararaca y Bothrops jararacussu de la provincia de Misiones , Bothrops alternatus de la provincia del Chaco y Bothrops neuwiedii de la provincia de Corrientes , desecados, homogeneizados y conservados a -20C. Antiveneno : Se utiliz Suero antiveneno Bothrpico bivalente / hiperinmune equino el cual neutraliza el veneno de Bothrops alternatus y Bothrops neuwiedii . Lte N021 Del Laboratorio Central de Salud Publica Provincia de Bs. As. La Plata, Repblica Argentina. Diseo experimental : Se determin la actividad proteoltica de cada veneno aplicando la tcnica de Friendrich and Tu (1971) modificado por Lomomte y Gutierrez (1983). Dicha actividad (DPM) se define como la cantidad de veneno que induce un cambio de 0,5 en la absorbancia a 280 nm. Para determinar la actividad neutralizante se emple una dosis de reto de veneno correspondiente a una dosis proteoltica mnima confrontada con distintas diluciones de suero a 37C durante 30 minutos, luego se agreg el sustrato (casena bovina al 1%) que tambin fue incubado a 37C durante 30 minutos. La reaccin se detuvo

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con el agregado de cido tricloroactico al 5% quedando los tubos a temperatura ambiente durante 30 minutos. Luego de centrifugados se procedi a leer la absorbancia del sobrenadante a 280 nm. Todas las diluciones presentaban sus controles. Los resultados fueron expresados como porcentajes tomando como 100% la absorbancia del tubo conteniendo solamente veneno y casena y no antiveneno. La DE50 (Dosis efectiva 50 ) se traduce como la razn antiveneno/veneno en la cual se reduce en un 50% la actividad proteoltica .
RESULTADOS

El suero antiofdico bivalente utilizado, neutraliz las actividades proteolticas de todos los venenos ensayados, con diferencias cuantitativas en los valores de su DE50 (Cuadro 1). Cuadro 1 : Neutralizacin de la actividad proteoltica de los venenos de serpientes del gnero Bothrops del Litoral Argentino con suero antiofdico bivalente. Gnero y especie Dosis proteoltica Mnima (mg)* 1,7 2,5 2,7 4,0 Neutralizacin (DE50) (l antiveneno/mg veneno)** 167 115 162 126

Bothropas neuwiedii Bothrops alternatus Bothrops jararaca Bothrops jararacussu

* Cantidad de veneno que induce a un cambio de 0,5 en la absorbancia a 280 nm. ** Razn antiveneno/veneno que reduce un 50% el efecto proteoltico.

DISCUSION Y CONCLUSIONES

El tratamiento de la intoxicacin ofdica consiste en la administracin de suero hiperinmune, acompaado de drogas que complementan dicho tratamiento. Para la produccin de los sueros hiperinmunes se utilizan equinos que reciben mezclas antignicas (venenos) en dosis progresivas para obtener los anticuerpos neutralizantes. En este trabajo se utiliz un suero hiperinmune para accidentes causados por Bothrops alternatus y Bothrops neuwiedii, nico medicamento disponible en nuestra regin para tratar los accidentes ofdicos en animales. Los resultados de este trabajo indican que el suero utilizado posee capacidad neutralizante de la actividad proteoltica de todos los venenos estudiados. De los venenos utilizados en la mezcla antignica, neutraliza mejor al de Bothrops alternatus respecto a Bothrops neuwiedii, posiblemente por diferencias en los pesos moleculares de los componentes de ambos venenos; inclusive los venenos de Bothrops jararacussu y Bothrops jararaca tambin fueron neutralizados, a pesar de no haber sido utilizados en la mezcla antignica. Estos resultados probablemente sean debido a componentes semejantes en los venenos que induciran a reacciones cruzadas en accidentes causados por distintas especies de serpientes. Es muy importante lo anteriormente mencionado, ya que respalda el uso del suero bivalente utilizado en este trabajo, en accidentes causados por especies diferentes a las utilizadas en la mezcla de inmunizacin de los equinos.

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BIBLIOGRAFIA

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