Prof.

@ Luciana

Microrganismos se depositam, interagem nas superfcies, iniciam o crescimento e ao se liberarem, podem contaminar alimentos. Superfcies de equipamentos ou utenslios Fontes de contaminao Sob determinadas condies: Depositam-se Aderem Interagem com as superfcies Iniciam o crescimento celular

Multiplicao Colnias BIOFILMES

 definido como uma associao de clulas bacterianas e de fungos fixadas s superfcies, inclusas em uma complexa matriz extracelular de substncias polimricas (polissacardeos e protenas) junto com os nutrientes capturados para a formao da matriz. So constitudos por gua, microrganismos, substncias polimricas extracelulares, partculas retidas e substncias dissolvidas e adsorvidas.

a estrutura unificadora e protetora dos biofilmes. formada em parte pelas prprias clulas e em parte por componentes do ambiente, como protenas, detritos e matria inorgnica.

Pode ser constituda por protenas, cidos nuclicos, glicoprotenas e fosfolipdios, embora prevaleam os polissacardeos.

Ocorre em duas fases:

1. Quando o processo ainda reversvel - em virtude da adeso do microrganismo na superfcie por foras de Van der Waals, atrao eletrosttica e interao hidrofbica.

Nesse estgio, a bactria apresenta movimento browniano podendo simplesmente ser removida por rinsagem.

2. Ocorre a interao fsica da clula com a superfcie - com a sntese de material extracelular da natureza polissacardica ou protica, produzida pela bactria, que chamada matriz de glicoclix. Nesse momento, as fmbrias polimricas ligam a clula bacteriana ao substrato, dificultando a remoo do biofilme, sendo necessrio adotar foras mecnicas, como raspagens ou lavagem.

 A partir da, dentro de algum tempo (dias a meses) a adeso de outros microrganismos facilitada e ocorre a liberao de novos colonizadores que se desprendem do biofilme maduro; Os microrganismos liberados formaro biofilmes novos, caracterizando assim, um ciclo de contaminaes.

O padro de desenvolvimento de um biofilme envolve vrias etapas:

Um modelo descreve o processo em 5 estgios: 1) Eventos pr-adeso Os microrganismos, na sua forma de vida planctnica, recebem algum estmulo que os levam a aderir em alguma superfcie. Alguns fatores podem influenciar como: pH e temperatura; Concentrao e biodisponibilidade de nutriente; Presena de compostos inorgnicos e orgnicos.

2) Adeso reversvel Ocorre a interao clula-superfcie e sua colonizao inicial. O processo de adeso bem sucedido depende de alguns fatores como: Aparato celular do microrganismo; Caractersticas da superfcie da bactria e do substrato. Esta adeso considerada reversvel, pois possvel observar o retorno de clulas aderidas ao seu estado planctnico.

3) Adeso irreversvel
Ocorre, aproximadamente duas horas aps a adeso inicial e caracteriza-se pela presena de microcolnias que correspondem a um amontoado de clulas aderidas entre si e a uma superfcie. Neste instante, a motilidade cessa e genes envolvidos na comunicao clula-clula (quorum sensing) e na produo de exopolissacardeos (EPS) estejam totalmente ativos.

4) Maturao
Garante uma maior estabilidade e correspondente maturao da estrutura que j vem sendo formada. Ocorre de trs a seis dias aps a adeso inicial, podendo chegar a 10 dias. Acontece por meio do aumento da densidade populacional e, tambm, pela pronunciada produo e deposio de EPS, aumentando com isso a espessura do biofilme e a estabilidade da colnia contra flutuaes do ambiente.

5) Destacamento de clulas
Acontece entre 9 a 12 dias depois dos processos iniciais; As clulas se apresentam mveis e assemelham-se s clulas planctnicas podendo contaminar o alimento ou formar um novo biofilme na linha de produo.

Um biofilme pode ser:

Monoespcie - quando formado por apenas um tipo de microrganismo. Ocorrem mais em tecidos orgnicos, como vlvulas cardacas, em consequncia de processos infecciosos. Multiespcie - quando encontrada mais de uma espcie na comunidade microbiana. Ocorrem em organizaes do ramo alimentcio, onde se utilizam outras superfcies.

Os elementos importantes no processo de adeso e formao do biofilme compreende 3 elementos principais: Fase aquosa - alguns parmetros tm importante influncia nos processos de adeso, constituio e maturao da comunidade microbiana com relao ao meio aquoso como: Viscosidade Temperatura e pH Presena de nutrientes, molculas orgnicas e inorgnicas Fora inica e potencial osmtico

 Estas condies ambientais so notadas pelos microrganismos como sinais de estimulao ou no a sua adeso. Enquanto fase aquosa, o leite pode beneficiar o processo de adeso e de formao de biofilmes, devida a sua rica constituio em carboidratos, protenas, lipdeos, vitaminas e minerais, bem como devido a sua alta atividade de gua e pH.

 Micro-organismos - a capacidade de um microrganismo isolado em aderir ou no a uma superfcie e formar e manter um biofilme relaciona-se a seu fentipo e gentipo. Quando presentes alguns aparatos celulares nota-se um diferencial bactria em nvel de aderncia e formao do biofilme, como: Pili, flagelos e fmbrias; Algumas protenas da superfcie (quorum sensing); propriedades fsico-qumicas da superfcie microbiana (hidrofobicidade e carga eltrica).

 Pili - um componente competitivo muito importante no processo de adeso inicial e colonizao da superfcie. O Pili tipo IV constitudo por molculas de pilina com 145 a 160 aminocidos e localizase em uma das extremidades da clula. Pode se ligar a uma grande variedade de superfcies, sejam elas abiticas (ao inoxidvel) ou biticas (superfcie de outros microrganismos), onde se tem adeso clulaclula.

 Flagelos destaca-se os gram-negativos. Estas organelas, utilizadas para locomoo do microrganismo, so constitudas por unidades de flagelina e emergem por uma extenso da membrana externa. Alguns microrganismos apresentam flagelo polar em meios aquosos (adeso inicial). Porm, aps a adeso inicial esse flagelo polar substitudo por um flagelo lateral conferindo clula maior capacidade de locomoo em superfcies slidas e semislidas.

 Sistema quorum sensing um sistema de comunicao entre clula-clula de bactrias que dependem da densidade populacional. Bactrias sintetizam compostos sinalizadores de baixo peso molecular, os autoindutores (AIs) bacterianos, que so excretados no ambiente. Quando se atinge uma quantidade crtica desses compostos, as bactrias detectam a presena de um nmero suficiente ou qurum de bactrias e respondem por meio da ativao ou represso de certos genes.

 Interao clula-substrato caractersticas do substrato so consideradas importantes pois em funo delas que o processo de adeso e formao de um biofilme sero favorecidos ou no.

O contato entre a superfcie microbiana e o substrato corresponde adeso inicial e favorecido pela hidrofobicidade (capacidade de molhadura da superfcie em meio aquoso).
Quanto maior a hidrofobicidade da clula, maior a facilidade de adeso inicial de um microrganismo ( ao inoxidvel).

 Superfcies envolvidas na formao do biofilme uma grande variedade de microrganismos capaz de aderir e formar biofilme em superfcies biticas e abiticas, incluindo:

Lentes de contato Cascos de navios Encanamento em indstrias de alimentos Pedras em cursos dgua e slica Ao inoxidvel, vidro, alumnio, teflon, materiais de nilon e borracha encontrados em ambientes utilizados para processar alimentos

 O material mais comumente usado na indstria de alimentos o ao inoxidvel podendo ser de fcil tratamento para tornarse liso evitando a formao de biofilme.
Quando comparado a polmeros, borracha ou alumnio, apresenta resistncia maior a agentes oxidantes e outros sanificantes, como cido peractico, hipocloritos e iodforos. No entanto, vulnervel corroso localizada por ons clorados e componentes sulfurosos reduzidos.

Fatores que influenciam no desenvolvimento dos biofilmes: pH - a grande parte dos biofilmes naturais forma-se em valores de pH prximo a neutralidade. Desvios de pH para valores inferiores ou superiores a 7 iro certamente influenciar o desenvolvimento e atividade da comunidade microbiana pois o pH tem um efeito preponderante no metabolismo dos microrganismos.

 Efeitos de velocidade e turbulncia do fluido - tm um papel significativo no desenvolvimento e estabilidade dos biofilmes. A turbulncia e velocidade do escoamento de gua que entra em contato com as superfcies slidas interferem nos processos de adeso, transporte de nutrientes e de desprendimento dos microrganismos.

 Influncia de partculas inorgnicas na formao de biofilmes - determinadas partculas slidas podem contribuir para a limpeza dos sistemas industriais, porm, algumas partculas provenientes da corrente lquida tambm podem ser incorporadas no prprio biofilme e alterar a sua estrutura, sendo responsveis por algumas implicaes na sua estabilidade. O resultado ser ou o aumento do crescimento e estabilidade do biofilme, ou exatamente o seu inverso.

 Temperatura - fator determinante desenvolvimento microbiano, e como pode afetar a formao e a atividade qualquer biofilme, bem como o tipo microrganismo que o compe.

no tal, de de

Altas temperaturas - ocorre a desnaturao das protenas que compe os microrganismos (diminuio da taxa de crescimento). Baixas temperaturas - ocorre uma reduo na taxa de crescimento dos microrganismos at um dado valor em que o crescimento cessa (limite mnimo de temperatura).

 Concentrao de nutrientes os microrganismos requererem quantidades mnimas de nutrientes para que ocorra o seu crescimento. Quanto maior for a quantidade de nutrientes disponveis, maior ser o crescimento microbiano e maior ser a diversidade de organismos que podem ser mantidos.

Nutrientes disponveis sob a forma de carbono orgnico e ferro (tubulaes) so facilmente assimilvel pelos microrganismos e bastante usados.

 Tipo de superfcie a superfcie inerte em que se formam os biofilmes desempenha um papel importante na forma e desenvolvimento do biofilme.

O estado de conservao da superfcie pode, muitas vezes, ser um fator importante na formao do biofilme. Os depsitos porosos e irregulares que se encontram frequentemente s superfcies so zonas preferenciais para o crescimento bacteriano.