Morfologa y estructura bacteriana

Morfologa bacteriana

Estructura bacteriana

CAPSULA
Estructura superficial

Presencia en ambientes naturales

Acumulacin de material mucoso o viscoso Situada externamente respecto de la pared celular

Grado de asociacin la pared celular

Integral: ntimamente asociada con la superficie

celular. Perifrica: asociada a la sup. celular slo en determinadas condiciones, pero finalmente se dispersa al medio exterior.

Consistencia y limites externos

Rgida: con suficiente consistencia estructural como

para evitar la entrada de partculas como las de tinta china o nigrosina. Suele tener un lmite exterior definido. Flexible: poca consistencia, de modo que no excluye partculas. Adems, es deformable y carente de lmites precisos.

Hay una cierta confusin en la nomenclatura de las cpsulas. Se usarn los sig. Conceptos:
Cpsulas en sentido estricto son aquellas de tipo

rgido e integral. Capas mucilaginosas son las de tipo flexible y perifrico. Glucoclix es el conjunto de estructuras superficiales bacterianas, exteriores respecto de la pared celular, y compuestas de polisacrido.

 Las cpsulas son estructuras inertes, no vivas,

carentes de papel activo (metablico). Pero les confieren algunas propiedades:

Adhesin a clulas hermanas, generando microcolonias

y consorcios. Adhesin a sustratos inertes o vivos, lo que les permite la colonizacin de sus nichos ecolgicos (p. ej., tejidos de organismos superiores) Proteccin contra agentes antibacterianos.

Composicin qumica y estructura

El material capsular se compone de macromolculas

asimtricas que, en muchos casos constan de una serie de unidades repetitivas: polisacridos o polipptidos. Capsulas polisacardas Capsulas polipeptcas (solo en el gnero Bacillus) Capsulas y capas mucilaginosas antgeno capsular (Ag K) Una misma especie puede constar de distintas razas, cada una de ellas con un Ag K distintivo, distinguible del de las dems por su composicin qumica y su inmunorreactividad.

Funciones
Mejora en las propiedades de difusin de nutrientes hacia la clula. Los polisacridos extracelulares aninicos funcionan como una resina de intercambio. 2. Proteccin contra la desecacin 3. Proteccin contra la predacin por parte de protozoos 4. Proteccin contra agentes antibacterianos:
1.
a) b) c) d) e)

Contra metales pesados Contra bacterifagos Contra clulas fagocticas (p. ej., la cpsula del neumococo) Contra detergentes Contra anticuerpos

5.

Adhesin a sustratos

Sustratos inertes (importante en medios acuticos) La mayora de las bacterias acuticas no son planctnicas, sino que viven en interfases (superficies, sedimentos), donde los nutrientes difunden mejor. Mediante el siguiente proceso:
La bacteria se adhiere por la cpsula al sustrato; La cpsula supone un aumento de superficie bacteriana, lo que se

traduce en una mejora en la capacidad de absorber nutrientes; La bacteria se multiplica, formndose una microcolonia donde los individuos estn ms protegidos frente a los agentes antibacterianos; Se forman consorcios con otros microorganismos. Ello permite una alianza o colaboracin metablica entre distintas especies, por la que se produce la degradacin concertada de sustratos insolubles.

Esta propiedad tiene una serie de importantes secuelas

econmicas:

Corrosin y obstruccin de caeras; Formacin de placa dental y caries; Formacin de biopelculas en catteres y prtesis quirrgicas

Sustratos vivos (tejidos de organismos vivos superiores) En sistemas normales (efectos benficos): La flora (= microbiota) autctona que coloniza los epitelios de los animales superiores est englobada en glucoclix, estando las bacterias adheridas a la superficie tisular. Es decir, las cpsulas pueden actuar como adhesinas (molculas para la adhesin). Otro ejemplo de ello lo da la microflora autctona de la simbiosis del rumen

 En sistemas patolgicos: La cpsula es uno de los factores

de virulencia, de los que depende el inicio de muchas infecciones por parte de bacterias patgenas.

Si, adems, la flora autctona del individuo afectado est

alterada o disminuida, esto supone un nicho ecolgico vaco o perturbado, que puede ser colonizado por bacterias patgenas. material extrao por el sistema inmune, debido a que su estructura mimetiza estructuras del propio hospedador. sistema inmune, o bien no activan eficientemente al sistema complemento.

Muchas cpsulas polisacardicas no son reconocidas como Otras cpsulas sobrepasan la capacidad de respuesta del

PROPIEDADES PARTICULARES
Propiedades conferidas por las cpsulas a algunas bacterias :
Como receptores para ciertos bacterifagos. En las bacterias tropicales fijadoras de N2 atmosfrico, de los

gneros Derxia y Beijerinckia la gruesa y espesa cpsula acta como barrera frente a la difusin de O2, con lo cual evitan la inactivacin de la enzima nitrogenasa. En Rhizobium (fijador de N2 en simbiosis con las races de leguminosas) el polisacrido extracelular acta en la fase de reconocimiento entre la bacteria y la planta especfica, a travs de lectinas de esta ltima. En Acetobacter xylinum la cpsula es a base de fibrillas de celulosa que retienen burbujas de aire, lo cual hace que la bacteria flote hasta su nivel adecuado.

PARED CELULAR
Las paredes celulares ms frecuentes en eubacterias

siguen dos modelos alternativos : paredes de tipo Gram-positivo o de tipo Gram-negativo. Unas pocas eubacterias (como las del gn. Planctomyces) poseen paredes a base de protenas. Las Arqueas poseen paredes diferentes a las de eubacterias y se pueden agrupar en diversos tipos.

 Pared celular (P.C.) rgida rodeando al protoplasto. Las

excepciones son los micoplasmas (dentro del dominio Bacteria) y algunas arqueas, como Thermoplasma.
Al microscopio electrnico se puede observar como

una capa en ntimo contacto con la membrana citoplsmica, con un espesor que oscila entre 10 y 80 nm (segn especies) -frente a los 8 nm de la membrana celular- , y con una estructura ms o menos compleja, segn los tipos bacterianos.

PARED CELULAR (Eubacterias)

Esqueleto macromolecular rgido peptidoglucano

(mucopeptido o murena) Gram-positivas inmerso en una matriz aninica de polmeros azucarados. Gram- negativas rodeada por una membrana externa, e inmersa en un espacio periplsmico.

PEPTIDOGLUCANO
En las bacterias Gram-positivas el peptidoglucano

representa el componente mayoritario de la pared celular (50-80% en peso), mientras que en Gramnegativas supone slo del 1 al 10%. Formado por repeticiones de una unidad disacardica fundamental unida a su vez a un tetrapptido. La unidad disacardica repetitiva: consiste en Nacetilglucosamina (NAG) unida por enlace (14) a N-acetilmurmico (NAM).

 Las distintas unidades disacardicas se van uniendo

entre s por enlaces (14) entre el NAM de una unidad y la NAG de la siguiente. Este enlace es susceptible a la rotura catalizada por el enzima lisozima. El nmero de repeticiones (n) puede oscilar entre 10 y 100. La cadena tetrapeptdica: Desde el grupo carboxilo de cada cido NAM, y mediante un enlace amido, se encuentra unido el tetrapptido. Un tetrapptido tpico de muchas bacterias es: L-alanina---D-glutmico---meso-diaminopimlico--D-alanina

 La estructura global: Las distintas cadenas

polisacardicas, con sus respectivos tetrapptidos, se unen entre s por medio de puentes o enlaces peptdicos, entre un aminocido de una cadena y otro aminocido de una cadena adyacente . De este modo, la estructura global es una sola macromolcula gigante que envuelve al protoplasto, formando un sculo rgido, a modo de tejido continuo, que tiene el volumen y la forma de la bacteria respectiva.

 En bacterias Gram-negativas este sculo est formado

por una sola capa (o unas pocas) de cadenas de PG. En Gram-positivas existen varias capas (hay varios niveles de PG). Peptidoglucano en Gram negativas
El enlace entre cadenas polisacardicas se realiza

normalmente mediante unin peptdica directa entre el grupo carboxilo de la D-ala terminal y el grupo amino del meso-DAP. (Participan solo el 50% de los tetrapptidos) Una capa simple de PG (de 1 nm de espesor), a modo de malla floja, y con grandes poros (los huecos dejados por las zonas donde no hay enlace peptdicos).

 Peptidoglucano en Gram positivas Desde el punto de vista estructural, el PG de Grampositivas se caracteriza por la existencia de mltiples capas, existiendo entrecruzamientos tanto entre cadenas adyacentes en el mismo nivel como entre niveles distintos. El resultado es una red tridimensional gruesa (hasta 50 capas en algunos Bacillus), y ms compacta que en Gram-negativas.

Otros componentes de la pared celular

cidos teicoicos
cidos teicurnicos
Buenos antgenos cuando no estn cubiertos por estructuras externas

cidos lipoteicoicos: facilitan la unin con las cl.

animales que parasitan

PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS CIDO ALCOHOL RESISTENTES

Determinadas bacterias Gram-positivas (corineformes,

Nocardia y, en especial Mycobacterium) pared celular muy compleja, con abundancia de lpidos. No se tien con los colorantes normales, pero una vez que se han teido con fucsina (forzando mediante calentamiento de la preparacin), tienen resistencia a decolorarse por una mezcla de cido clorhdrico al 3% en etanol de 96o (cido-alcohol resistentes) Esta propiedad depende esencialmente de la presencia, en su pared celular de unos lpidos llamados cidos miclicos.

MEMBRANA EXTERNA DE GRAM NEGATIVAS

Bicapa lipdica exclusiva de las bacterias Gram

negativas. La bicapa es altamente asimtrica: En la capa externa existe un 60% de protenas y un 40% de una macromolcula exclusiva de esta membrana externa: el lipopolisacrido (LPS); En la capa interna no hay LPS, existiendo fosfolpidos (FL), lipoprotenas (LPP) y otras protenas. LPP unidas covalentemente al PG

FUNCIONES DE LA MB EXTERNA
Proteccin frente a muchos agentes antibacterianos
Estructura donde se fijan los componentes del

complemento (sistema defensivo de los animales superiores que conduce a la insercin, en la membrana externa, de una serie de protenas llamadas complejo de ataque a la membrana, que agujerea dicha membrana y ocasiona la lisis de la bacteria). Receptores especficos de fagos y bacteriocinas. Punto de anclaje del anillo externo (L) del corpsculo basal de los flagelos.

ESPACIO PERIPLASMICO
Entre la membrana externa y la membrana

citoplsmica . Compartimento acuoso baando al peptidoglucano. Osmoregulacin Representa un 20-40% del volumen celular total. Contiene:
RNasa y fosfatasa, digiere molculas que por s mismas

no pueden pasar al citoplasma. Penicilinasa: degrada penicilina, evitando destruccin de PG Protenas de transporte de nutrientes (p. ej., de maltosa) Protenas de unin a estmulos qumicos.

PAREDES DE ARQUEAS
Capa S paracristalina, a base de disposicin regular de

subunidades idnticas de una protena o glucoprotena. En Methanospirillum y en Methanothrix varias clulas, cada una con su capa S, se encuentran englobadas por una vaina comn, a base de protenas y carbohidratos, con una estructura a base de anillos paralelos. En Methanosarcina y Halococcus la capa S se encuentra rodeada de metanocondroitina. Los miembros del orden Methanobacteriales poseen una pared de pseudomurena.

NUTRICIN BACTERIANA
1. La forma la que el organismo obtiene el carbono para la construccin de la masa celular:
Auttrofo. El carbono se obtiene del dixido de carbono

(CO2). Hetertrofo. El carbono se obtiene de compuestos orgnicos (glucosa, por ejemplo). Mixtrofo. El carbono se obtiene tanto de compuestos orgnicos como fijando el dixido de carbono.

2. La forma en la que el organismo obtiene los equivalentes reductores para la conservacin de la energa o en las reacciones biosintticas:
Litotrofo. Los equivalentes reductores se obtienen de

compuestos inorgnicos. Organotrofo. Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos orgnicos

3. La forma en la que el organismo obtiene la energa para vivir y crecer:

Quimiotrofo. La energa se obtiene de compuestos

qumicos externos. Fototrofo. La energa se obtiene de la luz.

REPRODUCCIN BACTERIANA: FISIN BINARIA

CICLO CELULAR PROCARITICO Un ciclo celular es una secuencia de acontecimientos interconectados que comienza con la formacin de una nueva clula y termina cuando dicha clula se divide en otras dos hijas. 1. Fase C: (equivalente a la S en eucariotas) replicacin o sntesis de ADN cromosmico. 2. Fase D: (equivalente a G2 y M): la clula entra nuevamente en un proceso de crecimiento y adquisicin de ATP. Divisin celular. 3. Fase innominada (equivalente a G1): acumulacin del ATP necesario y el incremento de tamao acontecen durante el intervalo G1 de la interfase.

 La fisin binaria o biparticin es una forma de

reproduccin asexual que se lleva a cabo en bacterias, levaduras de fisin, algas unicelulares y protozoos. Proceso de divisin celular:
Duplicacin del material gentico (que se encuentra

anclado) de la membrana. Proliferacin de la pared celular, con tabicamiento entre el punto de anclaje inicial, y el punto de anclaje de la hebra recin sintetizada dando lugar a dos clulas hijas idnticas. Condiciones ideales divisin cada 20 min. Conjugacin bacteriana.

CURVA DE CRECIMIENTO
En un cultivo discontinuo de bacterias en medio

lquido, se pueden diferenciar cuatro fases en la evolucin de los parmetros que miden el crecimiento microbiano: 1. Fase lag o de adaptacin: durante la que los microorganismos adaptan su metabolismo a las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de cultivo) para iniciar la fase de crecimiento exponencial.

2. Fase exponencial o logartmica: en ella la velocidad de crecimiento es mxima y el tiempo de generacin es mnimo. Durante esta fase las bacterias consumen a velocidad mxima los nutrientes del medio. La evolucin del nmero de clulas durante esta fase se explica con los modelos matemticos que describiremos a continuacin. 3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el nmero de bacterias (ni la masa u otros parmetros del cultivo). Las clulas en fase estacionaria desarrollan un metabolismo diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una acumulacin y liberacin de metabolitos secundarios que pueden tener importancia industrial.

 Los microorganismos entran en fase estacionaria

porque se agota algn nutriente esencial del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la fase exponencial hacen que el medio sea inhspito para el crecimiento microbiano.
La fase estacionaria tiene gran importancia porque

probablemente represente con mayor fidelidad el estado metablico real de los microorganismos en los ambientes naturales. 4.- Fase de muerte: se produce una reduccin del nmero de bacterias viables del cultivo.

CULTIVOS SINCRONIZADOS Y CONTINUOS

Se mantienen los microorganismos en crecimiento

constante porque se aade de forma constante medio de cultivo fresco (que aporta nuevos nutrientes) y se elimina cultivo (medio usado con sus microorganismos correspondientes) a la misma velocidad con objeto de mantener el volumen total del cultivo constante.

 Son importantes para trabajar con microorganismos que estn

creciendo constantemente de manera que sean capaces de producir constantemente productos de inters (biomasa, metabolitos secundarios, etc.).
Tambin es importante en los estudios de fisiologa y de ecologa

microbiana. En la naturaleza un ejemplo de cultivo continuo lo constituye el rumen de ciertos animales y el conjunto de procesos microbianos intestinales de todos los animales.
En un cultivo continuo se pretende mantener un ambiente

constante durante todo el tiempo de cultivo.

Esto es imposible en un cultivo estanco en el que los nutrientes

se van consumiendo progresivamente y el medio se va cargando de productos de desecho.

QUIMIOSTATO
El tipo ms frecuente de cultivo continuo. En el que se introduce medio fresco a un flujo

constante denominado velocidad de dilucin (D) a la vez que se elimina cultivo viejo al mismo flujo.
El medio de cultivo de un quimiostato contiene un

nutriente esencial en una cantidad limitante (nutriente limitante). Estos parmetros se relacionan de acuerdo a la siguiente ecuacin:
D = f/V

 f= velocidad de flujo (ml h-1)

V= volumen del recipiente en ml. Las dimensiones de D son [h-1]. El valor D indica el

nmero de volmenes de reactor (volmenes de fermentador) que pasan a travs el reactor por unidad de tiempo. Este valor es el recproco del tiempo de residencia o tiempo que una unidad de substrato est dentro del reactor.

 Velocidades de D bajas y pequeos incrementos

incremento de la densidad del cultivo, ya que se aportan ms nutrientes al medio y el microorganismo no ve limitada su tasa de crecimiento ().

 Cuando la energa aportada por los nutrientes

entrantes supera la energa de mantenimiento de los microorganismos del cultivo Vel. de crec. aumenta ( aumenta y disminuye)
A valores bajos de D la concentracin de nutriente

limitante (S) en el efluente es baja porque es consumido casi completamente por los microorganismos del cultivo que alcanzan unas poblaciones de gran tamao creciendo a una tasa () baja porque se encuentran en condiciones de limitacin de nutrientes (S<Ks). A valores ms altos de D no todo el nutriente es consumido por los microorganismos del cultivo por lo que S en el efluente aumenta.

TURBIDOSTATOS
Se ajusta la velocidad de dilucin de tal forma que la

densidad ptica del cultivo se mantiene constante.

El valor D en un turbidostato, por tanto, es variable.

Por otra parte, en un turbidostato el medio de cultivo no contiene nutrientes limitantes.

Los turbidostatos funcionan mejor valores de D altos,

mientras que el quimiostato a valores de D bajos.

Recuento directo

Consiste en la observacin al microscopio de volmenes muy pequeos de suspensiones de bacterias. Se usan portaobjetos especiales denominados cmaras de Petroff-Hausser.

Medida de la masa de clulas

El sistema se basa en que las clulas en suspensin

dispersan la luz causando la turbidez del cultivo. La turbidez depende de la masa en suspensin y, por tanto, midiendo esta se puede estimar aquella. Este es el parmetro de medida ms fcil de usar en los cultivos de laboratorio. La densidad de clulas debe ser del orden de 105 por ml.

Recuento de viables
Consiste en sembrar un volumen determinado de cultivo o

muestra sobre el medio de cultivo slido adecuado para estimar el nmero de viables contando el nmero de colonias que se forman puesto que cada una de estas deriva de una clula aislada.
En

ciertas ocasiones en las que la densidad de microorganismos es demasiado baja, stos se pueden recolectar por filtracin a travs de una membrana (de 0.2 m de tamao de poro) y posterior colocacin de la membrana en un medio de cultivo adecuado para que se formen las colonias.

Recuento electrnico
Los contadores electrnicos permiten realizar recuentos de

bacterias, levaduras no filamentosas y protozoarios, pero no de hongos y microorganismos filamentosos o miceliares. Principio de funcionamiento:
Un volumen fijo de una suspensin bacteriana es forzada a

pasar desde un compartimiento al otro a travs del pequeo conducto, en un muy breve intervalo de tiempo. Cuando un microorganismo pasa al nuevo compartimiento, la resistencia de ste se incrementa debido a que la conductividad de la clula es menor que la del medio. Estos cambios en la resistencia son convertidos en pulsos o voltaje y contados.

Medida de biomasa
Peso hmedo: Se obtiene a partir de una muestra en suspensin que es pesada luego de la separacin de las clulas por filtracin o centrifugacin. Es una tcnica til para grandes volmenes de muestra. Peso seco El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas que se encuentran en una suspensin se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105C hasta peso constante. til para grandes volmenes de muestra.

Determinacin de cidos nucleicos

Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Se determina la cantidad existente de un determinado cido nucleico (generalmente DNA) y a partir de este dato se estima la masa de la poblacin.

Determinacin de nitrgeno
Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Existen distintas tcnicas para determinar la cantidad de nitrgeno que contiene una muestra con relacin al compuesto que se quiera determinar.

Incorporacin de precursores radiactivos

Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. En esta tcnica se adiciona al medio un compuesto marcado radiactivamente que puede ser incorporado a la clula, y luego se determina la cantidad de marca incorporada por toda la poblacin.

PRODUCCIN Y UTILIZACIN DE LAS BACTERIAS

METABOLISMO
CATABOLISMO Descompone molculas grandes en pequeas Se obtiene la energa qumica contenida en las estructuras de las grandes molculas. Esta energa se conserva en forma de molcula conocida como adenosntrifosfato (ATP). ANABOLISMO Se sintetizan de nuevo las molculas que la bacteria o clula utiliza para regenerarse, mantenerse o dividirse. Requiere la energa que proporciona el ATP, que fue generado durante el catabolismo.

Glucolisis
Se reducen 2 NAD+ Se producen 2 ATP
Glucosa (6C)

2 Ac. Pirvico (3C) 2 NADH2

Ciclo de Krebs o C.A.T.

Ac. Pirvico Acetl-CoA El Acetil-CoA entra en el C.A.T. En el CAT se forman los coenzimas o nucletidos

reducidos (NADH y FADH) que luego se oxidan en la cadena de transporte de electrones. Los tres tomos de carbono del pirvico salen como CO2 cido pirvico 2 ATP, 3NADH y 2 FADH2

CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES

La energa contenida en NAD y FADH2 ATP

NADHNAD+ +2e- + H+ FADH2 FAD+ + 2e- + 2H+

Los e- pasan por la cadena transportadora de e- , la

energa de estos se usa para bombear los H+ del espacio intermembranoso a la matriz mitocondrial, entonces ocurre la formacin de ATP a partir de ADP y Pi.

 1NADH 3ATP
1FADH2 2 ATP

Glucolisis 6 ATP
Ciclo de krebs 18 ATP Fosforilacin 6 ATP Total: 24 ATP

RESPIRACIN ANAERBICA
Existe una cadena de transporte de electrones con un aceptor final distinto del O2 El aceptor final de electrones puede ser:
NO3-

NO2- o N2 (Pseudomonas y Bacillus) SO4= SH2 (Desulfovibrio) CO3= o CO2 CH4 (bacterias metangenas)

Se libera ATP de forma variable segn el proceso.

(Ej.: para el NO3- , se forman 2 ATP por cada NADH (en vez de 3) por ser la cadena de transporte de e- ms corta).

FERMENTACIN
Se inicia a partir del Ac. Pirvico No requiere oxgeno, aunque puede a veces ocurrir en su presencia. No funciona el CAT ni Cadena de Tr. e-. El aceptor final de e- es una molcula orgnica. Libera energa a partir de azucares o de otras molculas orgnicas (A.A., Ac. Orgnicos, bases nitrogenadas, etc.) Se producen solo 2 ATP por cada Glucosa.
Fermentacin lctica: c. Pirvico c. Lactico Fermentacin alcohlica: ac. Pirvico etanol

BACTERIAS FOTOSINTETICAS
6CO2 + 6H2O + energa luminosa - C6H12O6

(glucosa) + 6 O2 Dos fases:

Primaria o lumnica

Clorofila capta luz solar Rompe H2O H y O Se genera ATP H + CO2 glucosa almidon

Secundaria u oscura