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dition scientifique Agents physiques Mars 2010

valuation des risques lis aux nanomatriaux


pour la population gnrale et pour lenvironnement
Les nanomatriaux
G Avis de lAfsset
G Rapport dexpertise collective
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Agence franaise de scurit sanitaire de lenvironnement et du travail
253 av. du Gnral Leclerc 94701 Maisons-Alfort Cedex
Tl. 01.56.29.19.30 Fax 01.43.96.37.67 Ml afsset@afsset.fr
www.afsset.fr



Le Directeur gnral
Maisons-Alfort, le 17 mars 2010

AVIS
de lAgence franaise de scurit sanitaire de
lenvironnement et du travail

Relatif valuation des risques lis aux nanomatriaux pour la population
gnrale et dans l'environnement



LAfsset a pour mission de contribuer assurer la scurit sanitaire dans les domaines de
lenvironnement et du travail et dvaluer les risques sanitaires quils peuvent comporter.
Elle fournit aux autorits comptentes toutes les informations sur ces risques ainsi que
lexpertise et lappui technique ncessaires llaboration des dispositions lgislatives et
rglementaires et la mise en uvre des mesures de gestion du risque (article L.1336-1 du
Code de la sant publique).

Prsentation de la question pose
LAfsset a t saisie le 05 juin 2008 par la Direction gnrale de la sant, la Direction gnrale
de la prvention des risques et la Direction gnrale du travail pour :
laborer et tudier des scnarios dexposition de la population gnrale quelques
nanomatriaux manufacturs contenus dans un chantillon de produits mis sur le
march, en prenant en compte les diffrentes voies dexposition,
valuer les risques potentiels pour la population gnrale et lenvironnement.
Il tait demand lAfsset de sintresser aux produits et leurs utilisations les plus pertinents,
afin danalyser les modalits dexposition prpondrantes de la population gnrale.

Contexte
Les nanomatriaux sont constitus de structures lmentaires dont au moins une des
dimensions est comprise typiquement, mais non exclusivement, entre 1 et 100 nanomtres
(nm). Cette caractristique dimensionnelle confre ces matriaux des proprits ou des
comportements particuliers, utiliss notamment pour de nouvelles applications technologiques.

Les proprits des nanomatriaux varient notamment selon leur composition chimique, leur
taille, leur surface spcifique, ltat de surface, ou encore la forme du nano-objet considr. De
plus, chaque nanomatriau peut tre dot dune ractivit ou dun comportement diffrent selon
la formulation et la matrice du produit fini qui le contient.

En raison des nombreuses applications innovantes que laissent entrevoir ces proprits
physiques, chimiques ou biologiques, les nanomatriaux reprsentent un domaine de la
recherche scientifique et technique en pleine expansion.
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Les nanomatriaux ne sont plus seulement confins dans les laboratoires de recherche, mais
sont dsormais intgrs dans de nombreux procds industriels et participent la composition
dune grande varit de produits ou systmes utiliss dans la vie courante (crmes solaires,
textiles, aliments, domaine des transports, etc.). Ces nanomatriaux sont prsents dans des
secteurs aussi varis que le btiment, lautomobile, lemballage, la chimie, lenvironnement,
lnergie ou la sant.
Ces nanomatriaux sont dits manufacturs, car ils sont produits intentionnellement, et sont
introduits dans lenvironnement par lhomme. Ils doivent tre distingus de lensemble des
particules dchelle nanomtrique prsentes par exemple dans le milieu ambiant naturel ou
issues involontairement de divers processus industriels ou domestiques. Les particules
ultrafines issues de combustion font par exemple quant elles lobjet dtudes relatives leurs
dangers spcifiques. Ltude des dangers et lvaluation des risques associs aux
nanomatriaux manufacturs savrent ncessaires dans la mesure o ces objets sont produits
en raison de leurs proprits nouvelles et spcifiques.

Plusieurs publications rcentes - dont la validit des modles animaux ou in vitro utiliss, et leur
extrapolation ventuelle lhomme doit encore tre analyse - ont ainsi mis en vidence la
dangerosit potentielle de certains nanomatriaux, notamment les nanotubes de carbone ou
encore les nanoparticules de chrome-cobalt.

Leur essor rapide entrane une augmentation de lexposition de la population aux nanomatriaux
manufacturs, concernant en premier lieu les employs de lindustrie et des laboratoires ou les
populations riveraines des installations industrielles, pour lesquels la possibilit de contact
chronique avec les nanomatriaux est leve. Cet aspect de lexposition professionnelle a fait lobjet
dun rapport publi par lAFSSET en 2008
1
.
Comme toute substance chimique, le devenir des nanoparticules dans lorganisme humain et la
toxicit potentielle associe dpendent notamment de leurs proprits physico-chimiques (taille,
forme, caractre soluble, etc.). Les phnomnes dabsorption, de distribution, de mtabolisation
et dexcrtion semblent tre diffrents pour les nanomatriaux, par rapport une entit
chimique classique, en raison notamment de leurs caractristiques spcifiques. La prise en
compte de lensemble de ces caractristiques est indispensable pour interprter leurs effets
potentiels. De faon gnrale, les connaissances scientifiques sur les substances classiques ne
sont pas directement transposables aux nanomatriaux.

Aujourdhui, la large diffusion des nanomatriaux manufacturs travers une multitude de
produits de consommation courante conduit sinterroger sur lexposition des consommateurs
et de la population gnrale ces nanomatriaux.

En labsence doutils dvaluation disponibles et spcifiques aux nanomatriaux manufacturs,
lAfsset a propos dutiliser une approche qualitative simplifie dvaluation des risques pour la
sant et pour lenvironnement.
Organisation de lexpertise
Lexpertise a t ralise dans le respect de la norme NF X 50-110 Qualit en expertise
Prescriptions gnrales de comptence pour une expertise (Mai 2003) avec pour objectif de
respecter les points suivants : comptence, indpendance, transparence, traabilit.
LAfsset a, dans un premier temps, confi lexpertise quatre experts rapporteurs rattachs au
comit dexperts spcialises (CES) valuation des risques lis aux agents physiques, aux
nouvelles technologies et aux grands amnagements . Dans un second temps, au vu de la
complexit et de la sensibilit de la thmatique traite, lAfsset a dcid, sur proposition du CES
en sance du 9 mars 2009, de constituer un groupe de travail formel nanomatriaux et

1
Les nanomatriaux Scurit au travail Afsset, juillet 2008 -
http://www.afsset.fr/index.php?pageid=707&parentid=424
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exposition du consommateur rattach ce CES. Ce groupe multidisciplinaire, compos
dexperts dont les comptences relvent des domaines de la mesure de lexposition, de la
mtrologie, de la toxicologie, de la biologie et de la physique, a t constitu la suite dun
appel candidature public.
Le groupe de travail sest runi 8 fois entre avril et novembre 2009. Lors de sances
supplmentaires, 3 auditions dindustriels ont galement t ralises.
Ltat davancement de ces travaux a t prsent rgulirement au CES agents physiques,
nouvelles technologies et grands amnagements , et discut au cours de ses sances de
travail. Le rapport produit par le groupe de travail tient ainsi compte des observations et
lments complmentaires transmis par les membres du CES ayant pris part aux dlibrations.

Le prsent avis se fonde pour les aspects scientifiques sur le rapport final et la synthse
dexpertise collective issus des travaux du groupe de travail et du CES. Ces travaux ont t
approuvs par le comit dexperts spcialis lors de sa sance du 23 novembre 2009.

Avis et recommandations

Recensement des produits de consommation courante contenant des nanomatriaux
manufacturs

Le recensement effectu a permis de mettre en vidence 246 produits contenant des
nanomatriaux manufacturs distribus sur le march franais. Ces produits (nano-produits)
sont rpartis dans 10 catgories. Parmi celles-ci, on peut citer par exemple : le domaine de la
cosmtique et de lhygine, le textile ou encore le btiment.
Ce recensement na pas eu pour rsultat de produire un liste exhaustive de produits contenant
des nanomatriaux : la consultation et le recoupement dune grande varit de sources de
donnes a t privilgie par rapport la quantit de produits recenss ; sites internet, bases
de donnes, inventaires, organismes, associations, rapports franais et internationaux ont t
consults. Une attention particulire a t porte la nature de la revendication produit
contenant des nanomatriaux du fabricant, et sa vrification, pour chacun des produits
rpertoris. Les difficults de recensement rencontres sexpliquent notamment par labsence
frquente de dclaration de la part des industriels de lincorporation de nanomatriaux dans les
procds de fabrication de leurs produits.


Evaluation des risques pour la population et lenvironnement lis la prsence de
nanomatriaux dans des produits de consommation

Slection des produits tudis
Le groupe de travail a tudi quelques produits finis contenant des nanomatriaux
manufacturs afin dlaborer des scnarios dexposition, en considrant les dangers nano-
spcifiques associs ces nanomatriaux, et daboutir une valuation qualitative des risques.
Les proprits des nanomatriaux varient notamment selon leur composition chimique, leur
taille, leur surface spcifique, ltat de surface ou encore la forme de la nanoparticule
considre. De plus, chaque nanomatriau peut tre dot dune ractivit ou dun
comportement diffrent selon la formulation et la matrice du produit fini considr qui le
contient. Ainsi, il est apparu peu raliste de travailler sur une famille de produits (i.e. : les
crmes solaires). Une slection de rfrences commerciales (produits) a donc t ralise,
chacune ayant une formulation ou une matrice diffrente et unique.
Lensemble des choix effectus sest aussi bas sur la disponibilit des donnes et donc la
possibilit de construire un scnario dexposition pertinent.
Quatre produits finis ont donc t slectionns sur la base des critres suivants :
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les donnes relatives au produit fini taient accessibles ;
il existait une revendication nano formelle ou dduite
2
;
le type de produit fini est largement utilis ;
les produits slectionns ont permis au groupe de travail de considrer les diffrentes
voies dexposition (ingestion, inhalation et cutane, avec seule considration de
lexposition directe et non accidentelle) ;
les produits considrs ont fait intervenir des matrices diffrentes (liquide, solide,
poudreuse) ;
lexposition aux nanomatriaux tait lexposition directe.

Mthodologie dvaluation des risques
partir de rflexions prliminaires engages sur la conception dune grille de cotation pour
valuer les risques nano-spcifiques, le groupe de travail a construit une mthodologie plus
classique dvaluation des risques. Cette grille prsente ainsi la liste des tapes cls
ncessaires examiner, ainsi que linventaire des paramtres essentiels considrer pour la
bonne ralisation des diffrentes phases de lvaluation des risques :
lvaluation de lexposition humaine et la dispersion dans lenvironnement ;
lvaluation du danger pour lhomme ;
lvaluation du danger pour lenvironnement.

De grandes difficults ont t rencontres pour identifier des produits contenant des
nanomatriaux manufacturs. Parmi celles-ci, le manque de traabilit des nanomatriaux
intgrs dans ces produits finis a t clairement mis en vidence au cours de ces travaux. Par
ailleurs, laccs aux donnes permettant de caractriser convenablement les produits identifis
sest avr trs limit. De plus, les outils mtrologiques et mthodologiques disponibles
aujourdhui ne permettent pas toujours dobtenir une caractrisation des nanomatriaux aussi
prcise que celle ncessaire pour en valuer les risques.
Pour lvaluation des risques, deux difficults apparaissent encore. Dune part, lintgration de
nanomatriaux au sein dun produit nimplique pas ncessairement leur mission au cours de la
vie du produit. Dautre part, un produit contenant des nanomatriaux nen met pas forcment
sous la mme forme que le nanomatriau initialement intgr dans le produit. Par ailleurs, les
caractristiques des nanomatriaux ventuellement mis sont susceptibles dvoluer au cours
du cycle de vie du produit.
Ainsi, pour raliser lvaluation de risque sur le produit fini, les donnes toxicologiques et
cotoxicologiques du nanomatriau entrant sont ncessaires, mais les donnes sur le
nanomatriau sortant savrent galement indispensables sur lensemble du cycle de vie.

Ces diffrents degrs de complexit ont rendu difficile la caractrisation des nanomatriaux
pour chacune des tapes du cycle de vie des produits tudis et, par consquent, la ralisation
de scnarii dexposition pertinents et complets. Cette forte spcificit de la caractrisation
implique donc que ltude dun cas concret ne permet en aucun cas de gnraliser les
conclusions ou dextrapoler un autre produit de la mme catgorie.
Lexposition des consommateurs aux nanomatriaux manufacturs, ainsi que la dispersion
environnementale conscutive leur consommation, se rvlent donc extrmement complexes
valuer, aussi bien qualitativement que quantitativement. Entre autres raisons, on peut citer :
la faible traabilit des nanomatriaux dans les produits disponibles la consommation ;
la grande varit des produits concerns ;
les scnarios de consommation et dexposition des consommateurs qui restent dfinir ;

2
Certaines informations rvles par le producteur du produit impliquant ncessairement des proprits de structure
nanomtrique (par exemple importantes surfaces massiques mesures pour des poudres) sont considres comme
des revendications dduites du nanomatriau.
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la difficult de la mesure de lmissivit des produits en fonction de leurs diverses utilisations
possibles.

Toxicologie et cotoxicologie
A cette complexit pour estimer des niveaux dexposition aux nanomatriaux manufacturs pour la
population gnrale sajoute le manque de connaissances des effets de ces objets sur la sant et
sur lenvironnement. En effet, les tudes toxicologiques et cotoxicologiques pour lesquelles la
caractrisation des nanomatriaux est absente ou incomplte sont nombreuses. Cependant, les
articles les plus rcents tendent prendre en compte cet aspect de faon plus rigoureuse. Par
ailleurs, la plupart des tudes sur la toxicit et lcotoxicit des nanoparticules a t conduite
avec des nanoparticules de synthse et donc non issues du produit fini.

La majorit des tudes sur lcotoxicit des nanoparticules a t conduite des concentrations
trs leves, elles ne refltent donc pas la ralit de lexposition environnementale ces
contaminants. Il faut souligner, dans ce domaine, lhtrognit des travaux et des effets
observs selon les espces, la diversit des protocoles utiliss ainsi que celle des
nanoparticules et des doses considres. La caractrisation de lexposition aux nanoparticules
dans le milieu exprimental est, l aussi, indispensable pour lanalyse et linterprtation des
rsultats obtenus.

Concernant les effets toxicologiques, mme si une action directe et/ou indirecte sur lADN a pu
tre mise en vidence dans certaines exprimentations in vitro, lextrapolation lhomme est
incertaine. Beaucoup dinterrogations subsistent autour des risques pour la sant des
personnes et de lenvironnement. En effet, le manque de donnes pidmiologiques,
toxicologiques et cotoxicologiques ne permet pas de mener actuellement une valuation
complte des risques potentiels lis aux nanomatriaux manufacturs contenus dans tous les
produits de consommation courante.

Les quatre tudes de produits finis dcrites dans le rapport du groupe de travail sont fondes
sur des donnes toxicologiques et cotoxicologiques non spcifiques au produit de
consommation considr.


Les conclusions de lvaluation des risques pour les quatre produits finis slectionns
sont les suivantes :

Pour le produit A (chaussettes antibactriennes) contenant des nanoparticules
dargent
Lexpertise collective conclut que, pour lhomme, lexposition cutane lors du port de
chaussettes contenant des nanoparticules dargent est non ngligeable (estimation indicative
pour le produit A : 1,18 g.m
-
.j
-1
)
3
. Les risques sanitaires lis lutilisation du produit A ne
peuvent pas tre estims, ils ne peuvent donc pas tre exclus.
De plus amples connaissances sur la caractrisation de ces nanoparticules, la dtermination de
leur niveau daccs la circulation systmique (passage de la barrire cutane) ainsi que des
tudes de toxicit chronique savreraient ncessaires ltablissement de conclusions solides
quant aux risques pour lhomme pour le scnario considr.
Pour lenvironnement, la dispersion attendue est qualifie dimportante (estimation indicative :
144 milligrammes par chaussette produit A). En raison de laugmentation attendue du nombre
de produits de consommation intgrant des nanoparticules dargent, de la diversit de
lexposition et du danger avr chez certaines espces animales (la proprit biocide tant celle
attendue pour la plupart des nanoparticules dargent), le risque pour lenvironnement, en

3
Unit : grammes par mtre carr par jour, la valeur donne est une estimation issue de nombreuses hypothses
dcrites dans le rapport de lAfsset.
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particulier pour les compartiments aquatiques, mme sil nest pas mesurable aujourdhui,
devrait faire lobjet dune attention particulire. Lvaluation de ces risques requiert des
informations sur le comportement des nanoparticules dargent dans lenvironnement
(biodisponibilit) ainsi que de nombreuses tudes cotoxicologiques ralises pour des temps
dexposition longs et des doses ralistes.

Pour le produit B (ciment) contenant des nanoparticules de dioxyde de titane (TiO
2
)
Pour lhomme (voie dexposition respiratoire) et pour lenvironnement, pour les effets et le
produit considrs dans les tudes disponibles, les risques ne peuvent pas tre valus, ils ne
peuvent donc pas tre exclus. Des tudes de dgradation des constructions labores avec ce
produit, de quantification de la dispersion des nano-objets dans les divers compartiments
environnementaux permettraient de combler les fortes incertitudes concernant lexposition qui
limitent actuellement lexercice dvaluation. Les personnes souffrant dune pathologie
respiratoire, plus vulnrables aux ractions dinflammation du systme respiratoire que pourrait
engendrer linhalation de ces nanoparticules, constituent des populations sensibles.

Pour le produit C (lait solaire) contenant des nanoparticules de dioxyde de titane
(TiO
2
)
Jusqu trs rcemment, les nombreuses tudes in vitro et in vivo utilisant diffrents modles de
peau ne montraient pas de passage des nanoparticules de TiO
2
de la barrire cutane, avec
une pntration limite aux premires couches de cette barrire cutane. Les rsultats de
certaines tudes rcentes montrent, l'inverse, lexistence dun passage cutan et la possibilit
pour ces nanoparticules de TiO
2
de se retrouver dans la couche profonde de l'piderme. Il
subsiste donc encore quelques questions concernant notamment les peaux lses (peau brle
par le soleil ou peau atopique) ou encore lincertitude lie la flexion mcanique de la peau qui
serait susceptible de favoriser la pntration des nanoparticules.
Ainsi, pour lhomme (voie dexposition cutane), pour les effets et le produit considrs dans les
tudes analyses, tant donn les incertitudes sur le potentiel de pntration cutane et sur
lactivit phototoxique, les risques ne peuvent pas tre exclus.
Pour lenvironnement, lestimation du risque requiert des tudes portant sur le comportement
des nanoparticules de dioxyde de titane dans les diffrents compartiments environnementaux
ainsi que de nombreuses tudes cotoxicologiques ralises pour des temps dexposition longs
et des doses ralistes. En labsence de ces donnes, le risque ne peut tre estim, il ne peut
donc pas tre exclu.

Pour le produit D (ingrdient alimentaire silice)
En sappuyant sur la norme ISO/TS/27687 qui dfinit les nano-objets, des industriels
considrent que leurs produits constitus dagrgats ne sapparentent pas des
nanomatriaux. Ceci peut entraner labsence de dclaration et de travaux de recherche
spcifiques. Une future norme en cours de discussion lISO intgrera les agrgats dans la
dfinition de nanomatriaux.
Pour lhomme (voie dexposition orale) et pour lenvironnement, pour le produit et les effets
considrs, en labsence dtudes toxicologiques et cotoxicologiques spcifiques la nano
silice considre (silice amorphe), le risque ne peut pas tre valu, il ne peut donc pas tre
exclu.

A travers ltude de ces quatre nanomatriaux, ce rapport a dmontr la difficult de raliser
des valuations de risques en labsence de donnes spcifiques aux nanomatriaux contenus
dans les produits finis tudis, mais a galement dmontr la ncessit du caractre
pluridisciplinaire de cette valuation, notamment en labsence de mthodologies ddies.
Bien quil y ait des indications de lexistence de danger potentiel pour certaines nanoparticules,
pour les quatre cas tudis, le manque de donnes (caractrisations physico-chimiques,
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toxicologiques, etc.) ne permet pas destimer le risque associ. Ce risque ne peut donc pas tre
exclu.


Recommandations

Compte tenu du manque de donnes sur la dangerosit potentielle des nanoparticules pour
lhomme et lenvironnement, et face la croissance rapide du nombre de produits intgrant des
nanomatriaux manufacturs, lAfsset recommande donc de prendre des mesures concernant :

lincitation la recherche dans les domaines de la caractrisation physico-chimique,
lvaluation de lexposition, de la toxicologie et de lco-toxicologie ;
la mise en place dune traabilit des donnes ainsi que linformation des
consommateurs sur les produits contenant des nanoparticules manufactures (nano-
produits) ;
la limitation de lexposition des consommateurs et de lenvironnement (en plus des
salaris).

Les recommandations suivantes s'appliquent la fois aux nano-produits dj sur le march et
aux futurs nano-produits. Par ailleurs, on ne considre ici que les nanoparticules manufactures
volontairement introduites dans les nano-produits.


Faire progresser les connaissances sur la caractrisation, lexposition et la dangerosit
potentielle des nanomatriaux

Considrant :
les enjeux et les dficits relatifs la caractrisation physico-chimique des
nanomatriaux ;
la difficult quantifier lexposition de la population gnrale aux nanomatriaux
contenus dans les produits finis ou ceux relargus tout au long du cycle de vie de ces
produits ;
la diversit des expositions lie la varit des confinements des nanomatriaux dans
les produits finis (produits arosols, textile, appareils lectroniques, etc.) ;
la spcificit de chaque nanomatriau sur le plan toxicologique et cotoxicologique tout
au long du cycle de vie du produit considr, recyclage et traitement des dchets inclus ;
le grand nombre de produits contenant des nanoparticules dargent, occasionnant une
importante dispersion environnementale et le caractre biocide de ce dernier ;
limpossibilit destimer et donc dexclure le risque que reprsentent certains nano-
produits en raison du manque de donnes ;

LAfsset recommande :

sagissant de la caractrisation des nanomatriaux et des expositions :
o damliorer et de valider ou dadapter les mthodes de caractrisation physico-
chimique du nanomatriau :
o de mettre au point des mthodes de prlvement, de dtection et de caractrisation
des nanomatriaux dans les fluides biologiques et dans les diffrents compartiments
environnementaux ;
o de dterminer le relargage des nanomatriaux sous contraintes dusage et en fin de
cycle de vie (combustion, mise en dcharge, etc.) ;
o dtudier le devenir et le comportement (agglomration, transport physique et
trophique, persistance, etc.) des nanomatriaux susceptibles dtre relargus dans
lenvironnement ;
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o dvaluer lefficacit des filires de fin de vie des nano-produits : recyclage,
stockage, procds dincinration, etc.


sagissant de la dangerosit des nanomatriaux :
o de dterminer la toxicit et lcotoxicit des nanomatriaux initiaux et ceux
susceptibles dtre mis rellement par les nano-produits, en termes de relation
niveaux dexposition / effets, pour des doses correspondant des scnarios
dexposition appropris (organisation de la recherche, personnel form pour les
valuations de la toxicologie des nanomatriaux, augmentation du pourcentage,
aujourdhui trop faible, du financement de la recherche en nanotechnologies
consacr aux tudes toxicologiques) ;
o dorienter les efforts de recherche sur les points cls identifis en toxicologie pour les
nanomatriaux, savoir la toxicocintique, la dtermination des mcanismes
dactions (permettant notamment la comprhension des interactions entre des
nanomatriaux parfaitement caractriss et les biomolcules, nutriments,
xnobiotiques) et ltude des effets in vivo lis des expositions aigus et multiples
incluant les marqueurs de linflammation, le stress oxydant et la prolifration
cellulaire, avec pour objectif terme la mise en uvre de modles prdictifs de
substitution lexprimentation ;
o dorienter les efforts de recherche sur les points cls identifis en cotoxicologie
pour les nanomatriaux, savoir tudier leurs effets dans lenvironnement au moyen
dorganismes prsentant des modes dalimentation diffrents et en prenant en
compte les mcanismes de bioaccumulation, de bioamplification et dinteraction
avec les autres contaminants.

sagissant de lvaluation des risques potentiels pour lhomme et pour lenvironnement
induits par les nanomatriaux manufacturs : le lancement dun programme national de
recherches spcifiques qui porterait la fois sur les nanomatriaux introduits et ceux
susceptibles dtre relargus par les nano-produits, et laugmentation notable de leffort
de recherche consacr lvaluation des risques.


Amliorer la mthodologie de lvaluation de risque sanitaire pour prendre en compte les
spcificits des nanomatriaux

Considrant les mthodologies actuelles existantes dvaluation de risque sanitaire qui ne sont
pas adaptes aux spcificits des nanomatriaux, et soulignant lintrt de disposer de tels
outils, la gestion des risques devant ncessairement se fonder sur leur valuation, lAfsset
recommande :

sagissant de ltablissement de tests normaliss, dencourager la participation des
quipes de recherche franaises la mise au point de protocoles exprimentaux
normaliss, en relation avec les travaux conduits au niveau europen et mondial,
concernant :
o les nanomatriaux types utiliser pour les tests : nanomatriaux manufacturs
initiaux et ceux susceptibles dtre mis rellement par les nano-produits
(nanomatriaux parfaitement caractriss et stables) ;
o la caractrisation des nanomatriaux ;
o les mthodologies des tests in vitro et in vivo ;
o les mthodes de prlvement dans les nano-produits et dans lenvironnement (air,
eau, sol).

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sagissant de la mthodologie dvaluation des risques nano-spcifiques :
o de poursuivre, dans un contexte international, le dveloppement dune mthodologie
dvaluation des risques spcifique aux nanomatriaux par la conception dune grille
de cotation permettant dvaluer un score de risques nano-spcifiques associs
des produits de consommation ;
o de tenter de dfinir des nanomatriaux de rfrence dont ltude pralable dtaille
faciliterait la caractrisation des nouveaux nanomatriaux par similitude ;
o ds prsent, lAfsset se propose de mettre en place de telles mthodologies
simplifies dvaluation des risques, dans lattente de donnes supplmentaires.
Ces mthodologies reposeraient sur la caractrisation du nanomatriau au sein du
produit (avec la prise en compte des paramtres dterminants proposs par lISO en
2008), lidentification des dangers pour lhomme et pour lenvironnement, lvaluation
de lexposition humaine, la dispersion environnementale et ventuellement
laccumulation.


Agir dans un contexte dincertitude scientifique concernant les risques potentiels
associs aux produits finis contenant des nanomatriaux manufacturs

Considrant :
labsence de traabilit la fois des nanomatriaux destins tre intgrs au sein de
produits finis (tapes de transformation entre producteurs et transformateurs -
distributeurs) et des produits finis disponibles sur le march et ce jusqu leur fin de vie ;
le caractre incomplet, voire inexistant, des informations destination des
consommateurs et de la population gnrale ;
lhtrognit de la prise en compte de la spcificit des nanomatriaux dans les
rglementations existantes (cf. annexe sur la rglementation) ;
lexistence avre et parfois ancienne de produits finis sur le march contenant des
nanomatriaux ;
en labsence de rglementation explicite, la difficult identifier la responsabilit de
chacun parmi la multiplicit des acteurs impliqus ;

LAfsset recommande :
La mise en place rapide de cadres rglementaires harmoniss pour renforcer la prise en
compte du caractre nanomtrique des composants des produits concerns, en fonction des
diffrents usages constats ;

Lamlioration de la traabilit des nanomatriaux manufacturs et la gnralisation de
ltiquetage des produits nano :
en demandant aux industriels de produire ds prsent une fiche descriptive des
donnes concernant les nanoparticules utilises dans leurs nano-produits
(concentration, taille, nature, informations disponibles sur la toxicit, etc.). Les
informations ncessaires devraient tre fournies pour les diffrentes tapes du cycle de
vie, notamment par des fiches de donnes de scurit adaptes et correctement
renseignes. Les informations dclares pourront tre recenses dans une base de
donnes, gre dans un cadre transparent ;
en informant les consommateurs pour quils puissent choisir de consommer ou de ne
pas consommer des produits contenant des nanomatriaux. Donner au consommateur
la possibilit de sinformer facilement sur la composition des nano-produits : en
envisageant par exemple un tiquetage comprhensible pour les consommateurs,
pertinent et spcifique des nanomatriaux prsents dans le nano-produit considr.

La limitation de lexposition des consommateurs et de lenvironnement :
AVIS de lAfsset du 15 mars 2010 Saisine Nanomatriaux et produits de consommation

10/14
par la construction dun rfrentiel ou cadre normatif permettant de caractriser les
missions de nanomatriaux par les produits contenant des nanomatriaux
manufacturs sous contraintes dusage normal et en fin de vie. Ce rfrentiel pourrait
galement supporter linformation ncessaire porter la connaissance du
consommateur (tiquetage) ;
par la rduction de lexposition des consommateurs aux produits contenant des
nanomatriaux manufacturs ainsi que leur dissmination dans lenvironnement, dans le
cadre dune approche graduelle, notamment :
o en favorisant les produits srs et quivalents en termes de fonction, defficacit et de
cot dpourvus de nanomatriaux ;
o en restreignant le recours aux produits dont lutilit dmontre serait faible pour les
consommateurs, par exemple sur la base dune analyse socio-conomique de type
bnfice/risque ;
o en restreignant le recours aux produits susceptibles de librer des nanomatriaux ou
des espces chimiques pouvant prsenter un risque pour lhomme ou pour
lenvironnement au cours de leur utilisation, sous contrainte dusage normal et en fin
de vie. Le critre de persistance dans lenvironnement doit tre galement pris en
compte, dans lventualit dun impact long terme ;
o en limitant ds aujourdhui aux usages essentiels le recours aux nanomatriaux pour
lesquels des alertes de danger ont t identifies.





Fait en quatre exemplaires,

Le Directeur gnral

Martin GUESPEREAU


AVIS de lAfsset du 15 mars 2010 Saisine Nanomatriaux et produits de consommation

11/14
ANNEXE : rglementation et nanomatriaux

Produits concerns Rglement associ Disposition propres aux nanomatriaux
Produits cosmtiques
RGLEMENT (CE) N
o

1223/2009 DU PARLEMENT
EUROPEN ET DU CONSEIL
du 30 novembre 2009
relatif aux produits
cosmtiques
Les nouvelles dispositions concernent
notamment l'interdiction des allgations
trompeuses dans la publicit et
l'tiquetage des produits cosmtiques,
l'valuation de la scurit des produits
cosmtiques contenant des
nanomatriaux (applicable ds le 1er
janvier 2013), l'indication dans la liste des
ingrdients des nanomatriaux et
l'interdiction ds le 1er dcembre 2010 des
substances cancrognes, mutagnes ou
toxiques pour la reproduction (CMR), sauf
cas exceptionnel et sous des conditions
trs strictes.
Produits alimentaires

RGLEMENT (CE) N 258/97
DU PARLEMENT EUROPEN
ET DU
CONSEIL du 27 janvier 1997
relatif aux nouveaux aliments
et aux nouveaux
ingrdients alimentaires

communment appel Novel
Food


Rglement actuel en rvision. Le
parlement et le
Conseil s'accordent pour dire que toute
denre alimentaire contenant ou
consistant en des nanomatriaux
manufacturs (modifications significatives
ou non) doit tre considr comme
nouveau et donc faire l'objet d'une
valuation d'autorisation. De plus, le
Parlement europen, dans une rsolution
d'avril 2009, souhaite qu'aucune
autorisation ne soit dlivre tant que des
mthodes d'valuation spcifiques des
risques n'auront pas t dveloppes.
Le projet de rvision inclut dans la
dfinition d'un nouvel aliment "une denre
alimentaire contenant des nanomatriaux
manufacturs ou consistant en de tels
nanomatriaux.
AVIS de lAfsset du 15 mars 2010 Saisine Nanomatriaux et produits de consommation

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Produits concerns Rglement associ Disposition propres aux nanomatriaux
RGLEMENT (CE) N
o

1333/2008 DU PARLEMENT
EUROPEN ET DU CONSEIL
du 16 dcembre 2008
sur les additifs alimentaires
Le paquet amliorants (rglements
(CE) 1332/2008,
1333/2008, 13334/2008) prvoit que tout
additif, arme ou enzyme dj autoris et
donc inclus dans une liste communautaire
et prpar de l'aide des
nanotechnologies doit faire l'objet d'une
rvaluation. Ces rglements vont entrer
en application entre 2010 et 2011.
article 12 du rglement 1333/2008 :
Lorsque s'agissant d'un additif alimentaire
dj inclus dans une liste communautaire,
les mthodes de production ou les
matires premires utilises dont l'objet
d'une modification notable, ou
lorsqu'intervient une modification dans la
taille des particules, par exemple par
l'emploi de nanotechnologies, l'additif
produit avec ces nouvelles mthodes ou
matires premires est considr comme
un additif diffrent et une nouvelle entre
ou une modification des spcifications
dans les listes communautaires est
ncessaire avant qu'il puisse tre mis sur
le march.
RGLEMENT (CE) N
o

1935/2004 DU PARLEMENT
EUROPEN ET DU CONSEIL
du 27 octobre 2004
concernant les matriaux et
objets destins entrer en
contact avec des denres
alimentaires et
abrogeant les directives
80/590/CEE et 89/109/CEE
Aucune spcificit nest donne aux
nanomatriaux
RGLEMENT (CE) N
o

450/2009 DE LA
COMMISSION
du 29 mai 2009
concernant les matriaux et
objets actifs et intelligents
destins entrer en contact
avec des denres alimentaires
Ce rglement institue des mesures
spcifiques pour
la catgorie des matriaux actifs et
intelligents et une liste de substances
autorises dans ces matriaux. Ce
rglement contient des dispositions faisant
explicitement rfrence aux
nanomatriaux : il prcise que l'valuation
et l'autorisation de ceux-ci est obligatoire
et systmatique. Le rglement prvoit que
les constituants actifs soient valus par
l'AESA

DIRECTIVE 2002/46/CE DU
PARLEMENT EUROPEN ET
DU CONSEIL
du 10 juin 2002
relative au rapprochement des
lgislations des tats membres
La rglementation complments
alimentaires s'applique sans prjudice du
rglement novel foods. L'introduction d'un
nouvel ingrdient dans un
complment alimentaire est soumise la
directive novel foods.
AVIS de lAfsset du 15 mars 2010 Saisine Nanomatriaux et produits de consommation

13/14
Produits concerns Rglement associ Disposition propres aux nanomatriaux
concernant les complments
alimentaires
RECTIFICATIF AU
REGLEMENT (CE) N
o

1907/2006 DU PARLEMENT
EUROPEEN ET DU CONSEIL
du 18 dcembre 2006
concernant
l'enregistrement, l'valuation et
l'autorisation des substances
chimiques, ainsi que les
restrictions applicables
ces substances (REACH)
Les nanomatriaux sont implicitement
mentionns dans REACH sans quune
dfinition ait t propose dans le
rglement. Il est fait tat notamment que
les diffrentes dispositions du rglement
sappliquent si des mthodologies sont
adaptes aux nanomatriaux afin de
rpondre aux obligations dinformation.
REGLEMENT (CE) N
o

1272/2008 DU PARLEMENT
EUROPEEN ET DU CONSEIL
du 16 dcembre 2008 relatif
la classification, l'tiquetage
et l'emballage des
substances et des mlanges,
modifiant et abrogeant les
directives 67/548/CEE et
1999/45/CE et modifiant le
rglement (CE) no 1907/2006
La classification et ltiquetage des
produits
chimiques sappliquent sur la base des
proprits intrinsques de toute substance
ou prparation dangereuse, ce qui peut
impliquer une classification lie la
spcificit de certains nanomatriaux.
Mais il nexiste pas dobligation explicite de
mention de ltat nanomtrique de la
substance concerne.
DIRECTIVE 2001/95/CE DU
PARLEMENT EUROPEN ET
DU CONSEIL
du 3 dcembre 2001 modifiant
la DIRECTIVE 92/59/CE
relative la scurit gnrale
des produits
Aucune spcificit nest donne aux
nanomatriaux
Produits chimiques
DIRECTIVE 67/548/CE du 27
juin 1967 concernant le
rapprochement des
dispositions lgislatives,
rglementaires et
administratives relatives la
classification, l'emballage et
l'tiquetage des substances
dangereuses





Aucune spcificit nest donne aux
nanomatriaux


Produits biocides
DIRECTIVE 98/8/CE du 16
fvrier 1998
concernant la mise sur le
march des produits biocides

Aucune spcificit nest donne aux
nanomatriaux
AVIS de lAfsset du 15 mars 2010 Saisine Nanomatriaux et produits de consommation

14/14
Produits concerns Rglement associ Disposition propres aux nanomatriaux
Produits
phytopharmaceutiques
RGLEMENT (CE) N
o

1107/2009 DU PARLEMENT
EUROPEN ET DU CONSEIL
du 21 octobre 2009
concernant la mise sur le
march des produits
phytopharmaceutiques et
abrogeant les directives
79/117/CEE et 91/414/CEE du
Conseil
Aucune spcificit nest donne aux
nanomatriaux











valuation des risques lis aux nanomatriaux pour la
population gnrale et pour l'environnement

Saisine n2008/005

RAPPORT
dexpertise collective

Comit dExperts Spcialiss Agents physiques, nouvelles technologies et grands
amnagements

Groupe de Travail Nanomatriaux - exposition du consommateur et de
lenvironnement


Mars 2010









Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 2
























Mots cls

Nanomatriau, valuation du risque, exposition, produit fini, consommateur, population gnrale,
environnement





Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 3
Prsentation des intervenants
GROUPE DE TRAVAIL
Prsident
M. Fabrice Nesslany Chef adjoint du service de toxicologie gntique de lInstitut Pasteur de Lille
Toxicologue.
Membres
Mme Magali BOIZE Pharmacien valuateur des risques sanitaires lectricit de France (EDF)
Evaluation et prvention des risques.
M. Jean-Yves BOTTERO Directeur du Centre Europen de Recherche et dEnseignement des
Gosciences de lEnvironnement (Cerege) Ecotoxicologie.
M. Dany CHEVALIER Docteur en pharmacie - Matre de confrences Toxicologue.
M. Eric GAFFET Directeur de recherche au Centre National de la Recherche Scientifique
(CNRS) Nanomaterials Research Group / UMR 5060 Nanomatriaux.
M. Olivier LE BIHAN Ingnieur tudes et recherche lInstitut National de l'Environnement
Industriel et des Risques (Ineris) Mtrologie/analyse de cycle de vie.
Mme Catherine MOUNEYRAC Directrice de linstitut de biologie et d'cologie applique
luniversit catholique de louest (UCO) Ecotoxicologie.
M. Michael RIEDIKER Chef de groupe de recherche linstitut de sant au travail (IST),
Lausanne, Suisse valuation des risques.
M. Franois TARDIF Chef de Laboratoire au commissariat lnergie atomique (CEA) Scurit
au travail et nanomatriaux.
RAPPORTEURS
Pour la premire partie du traitement de la saisine :
M. Emmanuel FLAHAUT Charg de recherche au Centre National de la Recherche Scientifique
CNRS Nanomatriaux.
M. Eric GAFFET Directeur de recherche au Centre National de la Recherche Scientifique
(CNRS) Nanomaterials Research Group / UMR 5060 Nanomatriaux.
M. Franois TARDIF Chef de laboratoire au Commissariat l'Energie Atomique (CEA) Scurit
au travail et nanomatriaux.
M. Olivier LE BIHAN Ingnieur tudes et recherche lInstitut National de l'Environnement
Industriel et des Risques (Ineris) Hygine industrielle et nanomatriaux.

Experts rapporteurs
1
auprs du groupe de travail :
M. Mostafa OULDELHKIM Chef de projet lagence franaise de scurit sanitaire des produits
de sant (Afssaps) Toxicologue.

1
LAfssaps, travers deux de ses experts a particip laudition dun industriel et a apport quelques
contributions ponctuelles au rapport.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 4
Mme Ccile VERDIER Evaluateur toxicologue lagence franaise de scurit sanitaire des
produits de sant (Afssaps).
ADOPTION DU RAPPORT PAR LE COMITE DEXPERTS SPECIALISES
Ce rapport a t soumis pour commentaires au CES :
Agents physiques, nouvelles technologies et grands amnagements

Prsident
M. Jean-Franois DOR Directeur de Recherche mrite lInstitut National de la Sant Et de la
Recherche Mdicale (Inserm) - Champs lectromagntiques non ionisants Ultra-violets.
Membres
Fabienne ANFOSSO-LDE Ingnieur de recherche au Laboratoire Central des Ponts et
Chausses (LCPC) Bruit.
Michel BRENGIER Adjoint au Chef de la division Entretien, Scurit et Acoustique des Routes
au Laboratoire Central des Ponts et Chausses (LCPC) Bruit.
Jean-Pierre CSARINI Retrait (Directeur du laboratoire de recherche sur les tumeurs de la
peau humaine, fondation A. de Rothschild et Inserm) Ultra-violets.
Jean-Claude COHEN Coordinateur en biomtorologie Mto France Mtorologie et sant.
Daniel COURANT Chercheur, chef de projet au Commissariat l'Energie Atomique (CEA)
Rayonnements non ionisants (lasers, ultra-violets).
Frdric COUTURIER Responsable du dpartement "tudes" lAgence Nationale des
Frquences (ANFR) Rayonnements non ionisants.
Jean-Claude DEBOUZY Directeur du dpartement effets biologiques des rayonnements-
biophysique de linstitut de recherches biomdicales du service de sant des armes (IRBA-
CRSSA) Champs lectromagntiques non ionisants.
Acha EL KHATIB Charge de mission lAssistance Publique des Hpitaux de Paris - Hpital
Avicenne Exposition et pathologies professionnelles.
Emmanuel FLAHAUT Charg de recherche au Centre National de Recherche Scientifique
(CNRS) Nanomatriaux.
Eric GAFFET Directeur de recherche Nanomaterials research Group au Centre National de la
Recherche Scientifique (CNRS) Nanomatriaux.
Martine HOURS Charge de recherche lInstitut National de Recherche sur les Transports et
leur Scurit (Inrets) Rayonnements non ionisants.
Agns JOB Chercheur au Centre de Recherche du Service de Sant des Armes (CRSSA)
Bruit.
Antoine LABEYRIE Professeur au Collge de France Environnement et sant.
Jacques LAMBERT Directeur de recherche lInstitut National de Recherche sur les Transports
et leur Scurit (Inrets) Bruit.
Dominique LAURIER Adjoint au chef de laboratoire d'pidmiologie lInstitut de
Radioprotection et de Suret Nuclaire (IRSN) Epidmiologie.
Olivier LE BIHAN Ingnieur tudes et recherche lInstitut National de l'Environnement Industriel
et des Risques (Ineris) Hygine industrielle et nanomatriaux.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 5
Philippe LEPOUTRE Responsable du ple technique auprs de lAutorit de Contrle des
Nuisances Sonores Aroportuaires (Acnusa) Bruit.
Didier MARCHAL Directeur Hygine Scurit Environnement (HSE) Europe de la division
Automotive Experience de Johnson Controls Inc. Sant au travail.
Annie MOCH Professeur lUniversit Paris X Nanterre Bruit.
Philipe PIRARD Mdecin pidmiologiste au Dpartement Sant Environnement lInstitut
national de Veille Sanitaire (IVS) Epidmiologie.
Serge PLANTON Ingnieur en chef Mto France Mtorologie et sant.
Michel RUMEAU Ingnieur en chef de la section acoustique, adjoint au chef de dpartement de
mesures physiques au Laboratoire Central de la Prfecture de Police (LCPP) Bruit.
Ren DE SZE Directeur de recherche lInstitut National de l'Environnement Industriel et des
Risques (Ineris) Rayonnements non ionisants.
Franois TARDIF Chef de laboratoire au Commissariat l'Energie Atomique (CEA) Scurit au
travail et nanomatriaux.
Michel VALLET Retrait (Directeur de Recherche lInstitut National de Recherche sur les
Transports et leur Scurit (Inrets) Bruit
Paolo VECCHIA Directeur de recherche lIstituto Superiore di Sanit (ISS, Rome, Italie)
Rayonnements non ionisants.

Les travaux du groupe de travail ont t adopts par le CES agents physiques, nouvelles
technologies et grands amnagements le : 23 novembre 2009.
PARTICIPATION AFSSET
Coordination scientifique
Mlle Aurlie NIAUDET Charge de projets scientifiques - Unit sources et procds Afsset
M. Anthony CADENE Charg de projets scientifiques - Unit agents physiques, nouvelles
technologies et grands amnagements Afsset
M. Olivier MERCKEL Chef de lunit agents physiques, nouvelles technologies et grands
amnagements Afsset
Contribution scientifique
M. Guillaume BOURDEL Chef de projets scientifiques dans lunit agents physiques, nouvelles
technologies et grands amnagements Afsset
Mlle Nathalie THIERIET - Chef de projets scientifiques dans lunit agents physiques, nouvelles
technologies et grands amnagements Afsset

Secrtariat administratif
Mme Sophia SADDOKI Afsset
AUDITION DE PERSONNALITES EXTERIEURES
Des reprsentants de producteurs du secteur de la protection solaire et du secteur des silices
alimentaires ont t auditionns par le groupe de travail.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 6
SOMMAIRE



Prsentation des intervenants ............................................................................. 3
EXPERTISE COLLECTIVE : .................................................................................... 9
SYNTHSE ET CONCLUSIONS.............................................................................. 9
Abrviations ........................................................................................................ 16
Dfinitions ........................................................................................................... 17
Liste des tableaux............................................................................................... 18
Liste des figures.................................................................................................. 19
1 Contexte, objet et modalits de traitement de la saisine......................... 20
1.1 Contexte............................................................................................................................... 20
1.2 Objet ..................................................................................................................................... 21
1.3 Modalits de traitement de la saisine............................................................................... 21
1.3.1 Droulement de la saisine....................................................................................................................21
1.3.2 Critres de qualit en expertise............................................................................................................22
2 Nanomatriaux et biens de consommation : tat du march .................... 23
2.1 Dfinition du march du consommateur .......................................................................... 23
2.2 Nanomatriaux dans les biens de consommation........................................................... 34
2.2.1 Proprits des nanomatriaux .............................................................................................................34
2.2.2 Exemples dutilisations dans les produits de consommation ...............................................................35
3 Nanomatriaux et cycle de vie ................................................................... 36
3.1 Principes et dfinitions classiques ................................................................................... 36
3.2 Cycle de vie des produits contenant des nanomatriaux : illustration et discussion . 38
3.2.1 Historique du produit : ..........................................................................................................................38
3.2.2 Etude de cas : vieillissement acclr dun produit fini ........................................................................39
3.2.3 Etude de cas : tat de lart concernant le nano-argent.........................................................................40
3.2.4 Discussion............................................................................................................................................41
3.3 Dfinition du champ danalyse pour ltude..................................................................... 41
4 Recensement et slection des produits ..................................................... 42
4.1 Mthodologie de recensement .......................................................................................... 42
4.1.1 Informations recherches.....................................................................................................................42
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 7
4.1.2 Sources consultes ..............................................................................................................................43
4.1.3 Principales difficults rencontres pour le recensement des produits finis contenant des
nanomatriaux manufacturs : .............................................................................................................44
4.1.4 Rsultat du recensement .....................................................................................................................44
4.2 Slection des produits........................................................................................................ 46
4.3 Rsultat du choix des produits.......................................................................................... 48
5 Mthodologie dvaluation des risques....................................................... 50
5.1 Discussion pour la construction dune chelle de cotation du risque.......................... 53
5.2 Mthode employe pour lvaluation qualitative des risques ........................................ 56
5.2.1 Mthode dlaboration des scnarios dexposition...............................................................................56
5.2.2 Mthode didentification des dangers et valuation des risques ..........................................................57
5.2.3 Mthode dvaluation des risques : ......................................................................................................57
6 Evaluation des risques pour les produits slectionns.............................. 58
6.1 Introduction ......................................................................................................................... 58
6.2 Effets biologiques potentiels des nanoparticules ........................................................... 58
6.2.1 Toxicologie ...........................................................................................................................................58
6.2.2 cotoxicologie ......................................................................................................................................62
6.3 Textile et argent................................................................................................................... 63
6.3.1 Evaluation de lexposition.....................................................................................................................64
6.3.1.1 Caractrisation du produit slectionn ........................................................................................................... 64
6.3.1.2 Dfinition du scnario dexposition pour lhomme .......................................................................................... 66
6.3.1.3 Dfinition du scnario de dispersion environnementale ................................................................................. 67
6.3.2 Evaluation du danger ...........................................................................................................................69
6.3.2.1 Danger pour lhomme ..................................................................................................................................... 69
6.3.2.2 Danger pour lenvironnement ......................................................................................................................... 72
6.3.3 Evaluation du risque.............................................................................................................................77
6.3.3.1 Discussion des rsultats ................................................................................................................................. 77
6.3.3.2 Discussion et identification des incertitudes ................................................................................................... 77
6.3.3.3 Conclusion...................................................................................................................................................... 78
6.4 Ciments et dioxyde de titane ............................................................................................. 78
6.4.1 Evaluation de lexposition.....................................................................................................................80
6.4.1.1 Dfinition de scnarios dexposition pour lhomme......................................................................................... 81
6.4.1.2 Dfinition du scnario de dispersion environnementale ................................................................................. 83
6.4.2 Evaluation du danger ...........................................................................................................................84
6.4.2.1 Danger pour lhomme ..................................................................................................................................... 84
6.4.2.2 Danger pour lenvironnement ......................................................................................................................... 93
6.4.3 Evaluation du risque.............................................................................................................................95
6.4.3.1 Discussion des rsultats ................................................................................................................................. 95
6.4.3.2 Discussion et identification des incertitudes ................................................................................................... 95
6.4.3.3 Conclusion...................................................................................................................................................... 96
6.5 Crme solaire et dioxyde de titane.................................................................................... 96
6.5.1 Evaluation de lexposition.....................................................................................................................96
6.5.1.1 Caractristiques du produit solaire tudi ...................................................................................................... 97
6.5.1.2 Dfinition du scnario dexposition pour lhomme .......................................................................................... 98
6.5.1.3 Dfinition du scnario de dispersion environnementale ................................................................................. 99
6.5.2 Evaluation du danger .........................................................................................................................100
6.5.2.1 Danger pour lhomme ................................................................................................................................... 100
6.5.2.2 Danger pour lenvironnement ....................................................................................................................... 106
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 8
6.5.3 valuation du risque...........................................................................................................................107
6.5.3.1 Discussion des rsultats ............................................................................................................................... 107
6.5.3.2 Discussion et identification des incertitudes ................................................................................................. 107
6.5.3.3 Conclusion.................................................................................................................................................... 108
6.6 Produit alimentaire et silice ............................................................................................. 108
6.6.1 Evaluation de lexposition...................................................................................................................109
6.6.1.1 Caractrisation du produit slectionn : ....................................................................................................... 110
6.6.1.2 Dfinition du scnario dexposition pour lhomme : ...................................................................................... 110
6.6.1.3 Dfinition du scnario de dispersion environnementale : ............................................................................. 111
6.6.2 valuation du danger .........................................................................................................................112
6.6.2.1 Danger pour lhomme ................................................................................................................................... 113
6.6.2.2 Danger pour lenvironnement ....................................................................................................................... 115
6.6.3 valuation du risque...........................................................................................................................117
6.6.3.1 Discussion des rsultats ............................................................................................................................... 117
6.6.3.2 Discussion et identification des incertitudes ................................................................................................. 118
6.6.3.3 Conclusion.................................................................................................................................................... 119
6.7 Discussion et conclusion sur les cas tudis................................................................ 119
7 Recommandations du groupe de travail ................................................... 121
8 Bibliographie.............................................................................................. 124
ANNEXES........................................................................................................... 136
Annexe 1 : Lettre de saisine............................................................................. 137
Annexe 2 : Document support aux auditions ................................................... 142
Annexe 3 : Synthse des dclarations publiques dintrts des experts par
rapport au champ de la saisine................................................................. 147
Annexe 4 : Revue bibliographique de la toxicologie de largent
nanoparticulaire......................................................................................... 163
Annexe 5 : Revue bibliographique de la toxicologie des silices amorphes
nanostructures......................................................................................... 186
Annexe 6 : Tableau de synthse (cotoxicologie) ........................................... 200
Annexe 7 : Liste des critres OCDE pour les essais de nanomatriaux ......... 206


Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 9

EXPERTISE COLLECTIVE :
SYNTHSE ET CONCLUSIONS

valuation des risques lis aux nanomatriaux pour la population gnrale et dans
l'environnement
Saisine Afsset n 2008/005
Ce document synthtise les travaux du groupe de travail et prsente les ventuels complments
du Comit dExperts Spcialiss.
Prsentation de la question pose
LAfsset a t saisie le 05 juin 2008 par la Direction gnrale de la sant, la Direction gnrale de
la prvention des risques et la Direction gnrale du travail pour laborer et tudier des scnarios
dexposition de la population gnrale quelques nanomatriaux manufacturs contenus dans un
chantillon de produits mis sur le march, en prenant en compte les diffrentes voies dexposition,
afin dvaluer les risques potentiels pour la population gnrale. Il tait demand lAfsset de
sintresser aux produits et leurs utilisations les plus pertinents, afin danalyser les modalits
dexposition prpondrantes de la population gnrale.
Contexte scientifique
Les nanomatriaux sont constitus de structures lmentaires dont au moins une des dimensions
est comprise entre 1 et 100 nanomtres. Cette caractristique dimensionnelle confre ces
matriaux des proprits ou des comportements particuliers. En raison des nombreuses
applications innovantes que laissent entrevoir ces proprits physiques, chimiques ou biologiques,
les nanomatriaux reprsentent un domaine de la recherche scientifique et technique en pleine
expansion.
Les nanomatriaux ne sont plus seulement confins dans les laboratoires de recherche, mais sont
dsormais intgrs dans de nombreux procds industriels et participent la composition dune
grande varit de produits ou systmes utiliss dans la vie courante (crmes solaires, textiles,
aliments, domaine des transports, etc.). Ces nanomatriaux sont prsents dans des secteurs aussi
varis que le btiment, lautomobile, lemballage, la chimie, lenvironnement, lnergie ou la sant.
Ces nanomatriaux sont dits manufacturs, car ils sont fabriqus intentionnellement. Ils doivent
tre distingus de lensemble des particules galement de tailles infrieures 100 nm prsentes
dans le milieu ambiant naturel ou issues involontairement de divers processus industriels ou
domestiques non destins la fabrication ou lutilisation de nanomatriaux (appeles particules
ultrafines).
Cet essor rapide entrane une augmentation de lexposition de la population aux nanomatriaux
manufacturs, concernant en premier lieu les employs de lindustrie et des laboratoires ou les
populations riveraines des installations industrielles pour lesquels la possibilit de contact chronique
avec les nanomatriaux est en effet la plus leve : les quantits rencontres sont les plus importantes
et leur manipulation est pour certains employs quotidienne. Cet aspect de lexposition professionnelle
a fait lobjet dun rapport publi par lAFSSET en 2008.
Comme toute substance chimique, le devenir des nanoparticules dans lorganisme humain et la
toxicit potentielle associe vont dpendre notamment de leurs proprits physico-chimiques
(taille, forme, caractre soluble, etc.). Les phnomnes dabsorption, distribution, mtabolisme et
excrtion semblent tre diffrents par rapport une entit chimique classique, de par leurs
caractristiques spcifiques. Il est aujourdhui vident que la prise en compte dun nombre restreint
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 10
de caractristiques nest pas suffisante pour interprter leurs effets potentiels. De faon gnrale,
ltude de la transposition des connaissances micro lchelle nano reste faire.

Aujourdhui, la large diffusion de ces nanomatriaux travers une multitude de produits de
consommation courante amne sinterroger sur lexposition aux nanomatriaux manufacturs
des consommateurs et de la population gnrale.
Organisation de lexpertise
Conformment la dmarche qualit suivie lAfsset sappuyant sur lutilisation de la norme NF X
50-110 relative la qualit en expertise, la demande des ministres en charge de la sant, du
travail et de lenvironnement a t confie au CES agents physiques, nouvelles technologies et
grands amnagements . Ce dernier a, dans un premier temps, mandat des experts rapporteurs
pour raliser les premiers travaux dexpertise concernant le recensement des produits contenant
des nanomatriaux manufacturs et le choix des produits tudier plus prcisment.
Dans un second temps, au vu de la complexit et de la sensibilit de la thmatique traite, lAfsset
a dcid, sur proposition du CES valuation des risques lis aux agents physiques, aux
nouvelles technologies et aux grands amnagements en sance du 9 mars 2009, de constituer
un groupe de travail formel rattach ce CES et compos dexperts slectionns suite un appel
candidature public. La prsidence du groupe de travail a t confie M. Fabrice Nesslany
(toxicologue Institut Pasteur de Lille).

Le groupe de travail nanomatriaux et exposition du consommateur coordonn par lAfsset a
t constitu au printemps 2009, suite un appel candidatures public. Ce groupe de travail
multidisciplinaire est constitu dexperts dans les domaines de la mesure de lexposition, de la
mtrologie, de la toxicologie, de la biologie et de la physique.

Afin dinstruire cette saisine sur les scnarios dexposition aux nanomatriaux manufacturs, le
groupe de travail sest runi 8 fois entre avril et novembre 2009. Lors de sances supplmentaires,
3 auditions dindustriels ont galement t ralises.
Ltat davancement de ces travaux a t prsent rgulirement au CES agents physiques,
nouvelles technologies et grands amnagements , et discut au cours de ses sances de travail.
Le rapport produit par le groupe de travail tient ainsi compte des observations et lments
complmentaires transmis par les membres du CES ayant pris part aux dlibrations.

Ces travaux dexpertise sont ainsi issus dun collectif dexperts aux comptences
complmentaires. Ils ont t raliss dans le respect des rgles de comptence, indpendance,
transparence, traabilit des travaux.
Description de la mthode
En labsence doutils dvaluation des risques disponibles adapts la question pose, lAfsset a
propos dutiliser une approche qualitative simplifie des risques pour la sant et pour
lenvironnement. La majeure partie du travail prliminaire du groupe de travail a consist
recenser des produits finis disponibles sur le march franais et contenant les nanomatriaux
manufacturs les plus utiliss. Si le recensement des produits nest pas exhaustif, lAfsset sest en
revanche attache consulter toutes les sources dinformations disponibles. Le rsultat de ce
travail dinventaire a permis de fournir un document de support pour la phase de slection de
quelques produits pour lesquels des scnarios dexposition de la population gnrale et de
lenvironnement ont t dvelopps. Les risques spcifiques de ces produits contenant des
nanomatriaux manufacturs ont t ensuite valus, de manire qualitative.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 11
Les scnarios associs chacun des produits ont t raliss principalement partir des donnes
bibliographiques suivantes, par ordre dcroissant dintrt :
- des lignes directrices existantes pour le type de produit ;
- des recommandations dutilisation par le producteur/distributeur pour un usage normal;
- des usages constats pour le type de produit ;
- des usages constats pour des produits de types proches ;
- des donnes de caractrisation fournies par les industriels lors dauditions.

Lorsquaucune donne ntait disponible, le scnario a t dfini partir dhypothses
raisonnables conduisant une maximisation de lexposition pour un usage normal, un pire-cas .
Rsultat de lexpertise collective
Les travaux dexpertise, les conclusions et les recommandations du groupe de travail
nanomatriaux et exposition du consommateur ont t soumis au CES Evaluation des
risques lis aux Agents physiques, nouvelles technologies et grands amnagements sous forme
dun rapport et de la prsente synthse dexpertise collective.

Le CES a adopt les travaux dexpertise collective du groupe de travail ainsi que ses conclusions
et recommandations lors de sa sance du 23 novembre 2009 et a fait part de cette adoption la
direction gnrale de lAfsset.
Conclusions et recommandations de lexpertise collective
Conclusions
Lexpertise a permis de mettre en vidence des lacunes dans lidentification des produits
concerns et dans lvaluation des risques pour lHomme et lenvironnement.

De grandes difficults ont t rencontres pour identifier des produits contenant des
nanomatriaux manufacturs. Le manque de traabilit des nanomatriaux intgrs dans ces
produits finis a ainsi t clairement mis en vidence. Alors que les notions de nanoparticule,
dagglomrat et dagrgat sont dfinies dans la norme ISO/TS/27687, des industriels considrent
que leurs produits nentrent pas dans le cadre de cette dfinition. Ceci peut entraner labsence de
dclaration et de recherche spcifique.
Par ailleurs, mme lorsquun produit contenant des nanomatriaux est identifi, laccs aux
donnes qui le caractrisent est trs limit. Il faut signaler que les outils mtrologiques et
mthodologiques disponibles aujourdhui ne permettent pas dobtenir une caractrisation aussi
prcise que celle qui est exige pour valuer les risques associs.
Un produit contenant des nanomatriaux nen met pas forcment sous la mme forme que le
nanomatriau qui a t intgr au dpart dans le produit. Dautre part, lintgration de
nanomatriaux au sein dun produit nimplique pas ncessairement leur mission au cours de la
vie du produit.
Lestimation de lexposition relle pour le consommateur est ralise avec le nanomatriau
sortant . Ainsi, pour raliser lvaluation de risque sur le produit fini, les donnes toxicologiques
et cotoxicologiques du nanomatriau entrant sont ncessaires, mais les donnes sur le
nanomatriau sortant sont galement indispensables.
Il a donc t difficile de caractriser le nanomatriau chaque tape du cycle de vie du produit
associ et de raliser des scnarios dexposition pertinents et complets.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 12
Lexposition des consommateurs aux nanomatriaux manufacturs, ainsi que la dispersion
environnementale conscutive leur consommation, se rvlent extrmement complexes
valuer, aussi bien qualitativement que quantitativement. Entre autres raisons, on peut citer :
la faible traabilit des nanomatriaux dans les produits disponibles la consommation ;
la grande varit des produits concerns ;
les scnarios de consommation et dexposition des consommateurs restent dfinir ;
la difficult de la mesure de lmissivit des produits en fonction de leurs diverses utilisations
possibles.
A cette complexit pour estimer des niveaux dexposition aux nanomatriaux manufacturs pour la
population gnrale sajoute le manque de connaissances des effets de ces objets sur la sant et sur
lenvironnement.
Les tudes toxicologiques et cotoxicologiques pour lesquelles la caractrisation des
nanomatriaux est absente ou incomplte sont nombreuses. Cependant, les articles les plus
rcents tendent prendre en compte cet aspect de faon plus rigoureuse.
La plupart des tudes sur la toxicit et lcotoxicit des nanoparticules a t conduite avec des
nanoparticules de synthse et donc non issues du produit fini.

La majorit des tudes sur lcotoxicit des nanoparticules a t conduite des concentrations si
leves quelles ne refltent pas la ralit de lexposition environnementale ces contaminants. Il
faut souligner, dans ce domaine, lhtrognit des travaux et des effets observs selon les
espces, la diversit des protocoles utiliss ainsi que celle des nanoparticules et des doses
considres. La caractrisation de lexposition aux nanoparticules dans le milieu exprimental est,
l aussi, indispensable pour lanalyse et linterprtation des rsultats obtenus.

Les avances scientifiques et technologiques, ainsi que les proprits biologiques et physico-
chimiques dans ce domaine sont largement dcrites par des publications scientifiques
particulirement nombreuses. Par exemple, dans certains cas, une action directe et indirecte sur
lADN a pu tre mise en vidence dans des exprimentations in vitro. Nanmoins lextrapolation
lHomme est incertaine. Beaucoup dinterrogations subsistent autour des risques pour la sant des
personnes et de lenvironnement.
En effet, le manque de donnes pidmiologiques, toxicologiques et cotoxicologiques ne permet
pas de mener actuellement une valuation complte des risques potentiels lis aux nanomatriaux
manufacturs contenus dans tous les produits de consommation courante.

Les quatre tudes de produits finis dcrites dans le rapport sont fondes sur des donnes
toxicologiques et cotoxicologiques non spcifiques au produit de consommation considr.

Ces produits ont t slectionns sur la base des critres suivants :
- les donnes relatives au produit fini sont accessibles ;
- il existe une revendication nano formelle ou dduite ;
- le type de produit fini est largement utilis et connu du public ;
- les produits permettent au groupe de travail de considrer les diffrentes voies dexposition
(ingestion, inhalation et cutane, avec seule considration de lexposition directe et non
accidentelle) ;
- les produits considrs sont de matrices diffrentes (liquide, solide, poudreux) ;
- lexposition aux nanomatriaux est lexposition directe.


Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 13
Les conclusions de lexpertise sont les suivantes :

Pour le produit A (chaussettes antibactriennes) contenant des nanoparticules dargent :
pour lHomme (voie dexposition cutane) et lenvironnement, si le risque li lutilisation de ce
produit ne peut pas tre estim, il ne peut cependant pas tre exclu.
En raison de laugmentation attendue du nombre de produits de consommation intgrant des
nanoparticules dargent, de la diversit de lexposition et du danger avr chez certaines espces
animales, le risque pour lenvironnement, mme sil nest pas mesurable aujourdhui, devra faire
lobjet dune attention particulire.

Pour le produit B (ciment) contenant des nanoparticules de dioxyde de titane :
pour lHomme (voie dexposition respiratoire) et pour lenvironnement, pour les effets et le produit
considrs dans les tudes disponibles, le risque, sil ne peut pas tre valu, ne peut pas tre
exclu en particulier chez les personnes souffrant dune pathologie respiratoire.

Pour le produit C (lait solaire) contenant des nanoparticules de dioxyde de titane :
pour lHomme (voie dexposition cutane), pour les effets et le produit considrs dans les tudes
analyses, tant donnes les incertitudes sur le potentiel de pntration cutane et sur lactivit
phototoxique, les risques ne peuvent pas tre exclus.
Pour lenvironnement, le risque ne peut tre estim, il ne peut donc pas tre exclu.

Pour le produit D (ingrdient silice) :
pour lHomme (voie dexposition orale) et pour lenvironnement, pour le produit et les effets
considrs, le risque, sil ne peut pas tre valu, ne peut pas tre exclu.

Ce rapport a dmontr la difficult de raliser des valuations des risques en labsence de
donnes spcifiques aux nanomatriaux contenus dans les produits finis tudis mais a galement
dmontr la ncessit du caractre pluridisciplinaire de cette valuation, notamment en labsence
de mthodologies ddies.
Bien quil y ait des indications de lexistence de danger potentiel pour certaines nanoparticules,
pour les quatre cas tudis, le manque de donnes (mtrologiques, toxicologiques, etc.) ne permet
pas destimer correctement le risque associ. Ce risque ne peut donc pas thoriquement tre
exclu.
Recommandations
Compte tenu du manque de donnes sur la dangerosit potentielle des nanoparticules pour
lhomme et lenvironnement, il serait souhaitable de prendre des mesures concernant :

linformation des consommateurs sur les produits contenant des nanoparticules
manufactures (nano-produits),
la limitation de lexposition des consommateurs et de lenvironnement (en plus des
salaris),
lincitation la recherche dans les domaines de lvaluation de lexposition, de la
toxicologie et de lco-toxicologie.

Les recommandations suivantes s'appliquent la fois aux nano-produits dj sur le march et aux
futurs nano-produits. Par ailleurs, on ne considre ici que les nanoparticules manufactures
volontairement introduites dans les nano-produits, et non pas celles mises par la matrice des
nano-produits.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 14
Informer les consommateurs pour quils puissent choisir de consommer ou de ne pas
consommer des nano-produits. Donner au consommateur la possibilit de sinformer
facilement sur la composition des nano-produits. Le groupe de travail recommande ainsi :
denvisager un tiquetage comprhensible pour les consommateurs, pertinent et spcifique
des nanomatriaux prsents dans le nano-produit considr ;
aux industriels de produire ds prsent une fiche descriptive des donnes concernant les
nanoparticules utilises dans leurs nano-produits (concentration, taille, nature, informations
disponibles sur la toxicit, etc.). Les informations ncessaires devraient tre fournies pour
les diffrentes tapes du cycle de vie, notamment par des fiches de donnes de scurit
correctement renseignes. Lensemble des fiches descriptives pourrait tre disponible sur
un seul site internet gr par un organisme public franais.

Limiter lexposition des consommateurs et de lenvironnement. Le groupe de travail
recommande :
de construire un cadre normatif permettant de caractriser les missions de nanoparticules
par les produits contenant des nanomatriaux manufacturs sous contraintes dusage
normal et en fin de vie,
de limiter lexposition des consommateurs aux produits contenant des nanomatriaux
manufacturs ainsi que leur dissmination dans lenvironnement, notamment :

o ceux pour lesquels il existe des produits quivalents en termes de fonction,
defficacit et de cot ne contenant pas de nanoparticules ;
o ceux dont lutilit dmontre serait faible pour les consommateurs, par exemple sur
la base dune analyse socio-conomique de type bnfice/risque ;
o ceux susceptibles de librer des nanoparticules ou des espces chimiques pouvant
prsenter un risque pour lhomme ou pour lenvironnement au cours de leur
utilisation, sous contrainte dusage normal et en fin de vie. Le critre de persistance
dans lenvironnement doit tre galement pris en compte, dans lventualit dun
impact long terme.

Faire progresser les connaissances sur lexposition et la dangerosit potentielle des
nanoparticules.
Le groupe de travail recommande le lancement dun programme national de recherches
spcifiques sur lvaluation des risques potentiels pour lhomme et pour lenvironnement
induits par les nanoparticules manufactures initiales introduites dans les nano-produits et
celles susceptibles dtre relargues rellement par les nano-produits ;

sagissant des expositions, le groupe de travail recommande :
o de mettre au point des mthodes de prlvement, de dtection et de caractrisation
des nanoparticules dans les fluides biologiques et dans les diffrents compartiments
environnementaux ;
o de dterminer le relargage des nanoparticules des nano-produits sous contraintes
dusage et en fin de vie (combustion, mise en dcharge, etc.) ;
o dtudier le devenir et le comportement (agglomration, transports physique et
trophique, persistance, etc.) des nanoparticules susceptibles dtre relargues dans
lenvironnement ;
o dvaluer lefficacit des filires de fin de vie des nano-produits : recyclage,
stockage, procds dincinration, etc.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 15
sagissant de ltablissement de tests normaliss, le groupe de travail recommande
dencourager la participation des quipes de recherche franaises la mise au point de
protocoles exprimentaux normaliss, en relation avec les travaux conduits au niveau
europen et mondial, concernant :
o les nanoparticules types utiliser pour les tests : nanoparticules manufactures
initiales et celles susceptibles dtre mises rellement par les nano-produits
(nanoparticules parfaitement caractrises et stables) ;
o les mthodologies des tests in vitro et in vivo ;
o les mthodes de prlvement dans les nano-produits et lenvironnement (air, eau,
sol).

sagissant de la dangerosit des nanoparticules, le groupe de travail recommande :
o de dterminer la toxicit et lcotoxicit des nanoparticules initiales et celles
susceptibles dtre mises rellement par les nano-produits, en termes de relation
niveaux dexposition / effets, pour des doses correspondant des scnarios
dexposition appropris ;
o dorienter les efforts de recherche sur les points cls identifis en toxicologie pour
les nanoparticules, savoir la toxicocintique, la dtermination des mcanismes
dactions (permettant notamment la comprhension des interactions entre des
nanoparticules parfaitement caractrises et les biomolcules, nutriments,
xnobiotiques) et ltude des effets in vivo lis des expositions aigus et multiples
incluant les marqueurs de linflammation, le stress oxydant et la prolifration
cellulaire, avec pour objectif terme la mise en uvre de modles prdictifs de
substitution lexprimentation ;
o dtudier les effets des nanoparticules dans lenvironnement au moyen
dorganismes prsentant des modes dalimentation diffrents et en prenant en
compte les mcanismes de bioaccumulation, de bioamplification et dinteraction
avec les autres contaminants.

sagissant de la mthodologie dvaluation des risques, le groupe de travail recommande :
o de poursuivre le dveloppement et la conception dune grille de cotation permettant
de calculer un score de risques nano-spcifiques associs des produits de
consommation ;
o Tenter de dfinir des nanomatriaux de rfrence dont ltude pralable en
profondeur faciliterait la caractrisation des nouveaux produits par similitude.

Maisons-Alfort, le 23 novembre 2009


Au nom des experts du CES valuation des risques lis aux agents physiques, aux nouvelles
technologies et aux grands amnagements ,
le prsident du CES

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 16

Abrviations
ACV : Analyse du cycle de Vie
ACGIH : American Conference of Governmental Industrial Hygienists - confrence amricaine des
hyginistes industriels gouvernementaux
ADN : acide dsoxyribonuclique
Afssa : Agence Franaise de Scurit Sanitaire des Aliments
Afssaps : Agence Franaise de Scurit Sanitaire des Produits de Sant
Ademe : Agence de l'Environnement et de la Matrise de l'Energie
ATP : Adnosine triphosphate
BET : Mesure de la surface spcifique (Brunauer, Emmett et Teller)
BEUC : Bureau europen des unions de consommateurs.
BLM : Biotic Ligand Model -modle du ligand biotique
BPCO : Broncho-pneumopathie chronique obstructive
BPL : Bonnes pratiques de laboratoire
CE
x
: concentrations effectives induisant x % de leffet observ
CEA : Commissariat lEnergie Atomique
Cerege : Centre Europen de Recherche et dEnseignement des Gosciences de lEnvironnement
CIRC : Centre International de Recherche sur le Cancer
CNRS : Centre National de la Recherche Scientifique
CPP : Comit de la Prvention et de la Prcaution
DiGITIP : Direction gnrale de l'industrie, des technologies de l'information et des postes
DLx : Dose ltale x, dose qui cause la mort de x % d'un groupe d'animaux d'essai
ECETOC : European Centre for Ecotoxicology and Toxycology of Chemicals
ERA : Espces ractives de lazote
ERO : Espces ractives de loxygne
FDS : Fiche de donnes de scurit
FSAI : Food Safety Authority of Ireland
HONEC : Highest Observed No-Effect Concentration - concentrations maximales sans effet
IARC : International Agency for Research on Cancer - Centre International de Recherche sur le
Cancer (CIRC)
ICV : Inventaire du cycle de Vie
ICP-MS : Inductively Coupled Plasma - Mass Spectrometry - torche plasma couple la
spectromtrie de masse
INRS : Institut National de Recherche et de Scurit
Ineris : Institut National de l'Environnement industriel et des Risques
Inserm : Institut National de la Sant et de la Recherche Mdicale
IRSST : Institut de recherche Robert-Sauv en sant et en scurit du travail
ISO : International Standardization Organization - organisation internationale de normalisation
LDH : lactate dshydrognase
LOEC : Lowest Observed Effect Concentration - plus faible concentration pour laquelle un effet
significatif est observ
MET : microscopie lectronique en transmission
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Mars 2010 Version finale page 17
NIOSH : National Institute for Occupational Safety and Health Institut national pour la scurit et
la sant au travail (tats-Unis)
NOEC : No Observed Effect Concentration - plus forte concentration sans effet significatif observ
NP : Nanoparticules
NTC : nanotube de carbone
OCDE : Organisation de Coopration et de Dveloppement Economiques
OMNT : Observatoire des Micros et Nano Technologies
OMVPE : OrganoMetallic Vapor Phase Epitaxy - pitaxie en phase vapeur dorganomtalliques
ONG : Organisation non gouvernementale
PCN : Point de charge nulle
PM 2.5 : Particulate Matter - particules de taille arodynamique infrieure 2,5 micromtres
PNEC : Predicted No Effect Concentrations - concentration sans effet prvisible pour
lenvironnement
PEC : Predicted Environmental Concentration - concentration environnementale prdictive
pH : potentiel Hydrogne
RIVM : Rijksinstituut voor Volksgezondheid en Milieu Institut national pour la sant publique et
lenvironnement
RNMP : Rseau Nouveaux Matriaux et Procds
RNS : Reactive Nitrogen Species - espces ractives de lazote
ROS : Reactive Oxygen Species - espces ractives de loxygne
SAS : Synthetic Amorphous Silica - silice amorphe synthtique
SNC : Systme nerveux central
TGD : Technical Guidance Document (manuel technique dvaluation du risque chimique commun
lUnion Europenne)
UCO : Universit Catholique de lOuest
UIOM : Usine dincinration dordures mnagres
UMR : Unit Mixte de Recherche
US EPA : United States Environmental Protection Agency Agence de protection de
lenvironnement des Etats-Unis
UV-A, UV-B : rayonnements ultraviolets A - rayonnements ultraviolets B
WWI : Woodrow Wilson Institute
Dfinitions
Produit fini : produit de consommation courante, bien de consommation.
Particule dexposition : la particule laquelle lhomme ou lenvironnement est expos.
Matrice du produit fini : phase du produit fini qui contient les nanomatriaux.
Nano-produit : produit contenant des nanomatriaux manufacturs.
Entrant : lment de base - ici poudre nanostructure - utilis pour fabriquer un produit fini.
Sortant : rsidu mis lors de l'usage, du vieillissement ou de la fin de vie d'un produit fini ; peut tre
en partie nanostructur, notamment s'il est issu d'un produit fini nanomanufactur.
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Liste des tableaux
Tableau 1 : Quantit de nanoparticules mises en uvre en fonction des applications dtailles. Document
tabli partir des diffrents tableaux issus du rapport 2009 du RIVM. Sont fournis les lments non
exhaustifs pour ltat actuel et ltat projet dans un futur proche (2010-2015). Est galement fourni le
cot de la matire premire par kilogramme de nanoparticules considres. ....................................... 30
Tableau 2 : Rcapitulatif synthtique des avantages et inconvnients des outils mthodologiques analyss.
............................................................................................................................................................... 54
Tableau 3 : Analyse des masses et concentrations massiques en nano-argent dans diffrents chantillons
de produits (daprs T.M Benn. et P.Westerhoff, 2008) ......................................................................... 65
Tableau 4 Concentrations de titane (Ti lmentaire) dans des poussires fines (PM
2.5
) prleves lintrieur
des voitures, ct des routes et dans un site urbain loin des routes. Les chiffres sont indiqu en
nano-grammes par mtre-cube (ng/m
3
, 1 g = 1000 ng) (Riediker M., 2003). ...................................... 83
Tableau 5 Approximation dune concentration en nanoparticules de TiO
2
partir des missions de
poussires de travaux. ........................................................................................................................... 83
Tableau 6 : Description des 8 types de nanoparticules de TiO
2
testes par Theogaraj et al. (Theogaraj E.,
2007) pour lvaluation de la photo clastognicit. ................................................................................ 89
Tableau 7 : Gnotoxicit et photognotoxicit in vitro de nanoparticules de TiO2 enrob (mlange
Rutile/Anatase) PSMA 1......................................................................................................................... 90
Tableau 8 : Gnotoxicit et photognotoxicit in vitro de particules de TiO2 anatase PSMA 3. .................... 91
Tableau 9 : Caractristiques des nanoparticules industrielles prsentes dans la crme solaire tudie
(daprs www.tayca.co.jp) ...................................................................................................................... 98
Tableau 10 : Description des 8 types de nanoparticules de TiO
2
testes par Theogaraj et al. (2007) pour
lvaluation de la photo-clastognicit.................................................................................................. 103
Tableau 11 : Rsultats des essais in vitro de gnotoxicit de PSMA1 : nanoparticules TiO
2
(rutile/anatase
enrobes) ............................................................................................................................................. 103
Tableau 12 : Rsultats des essais in vitro de gnotoxicit de PSMA2, PSMA 4, PSMA 5 et PSMA 6 :
nanoparticules TiO
2
(rutile enrobes ou non)....................................................................................... 104
Tableau 13 : Rsultats des essais in vitro de gnotoxicit de PSMA2, PSMA 4, PSMA 5 et PSMA 6 :
nanoparticules TiO2 (rutile enrobes ou non) (suite) ........................................................................... 105
Tableau 14 : Rsum des essais de toxicologie des SAS aprs traitements aigus ou ritrs (daprs
ECETOC, 2006) ................................................................................................................................... 186
Tableau 15 : Conclusion des essais de gnotoxicit des SAS (daprs OCDE-SIDS, 2004) ....................... 190
Tableau 16 : Rsum des essais de cancrogense et de reprotoxicit des SAS (daprs ECETOC, 2006)
............................................................................................................................................................. 193
Tableau 17 : Etudes de toxicit pour le dveloppement de 2 SAS (daprs ECETOC, 2006)...................... 195

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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Liste des figures
Figure 1 : Evolution du nombre de nano-produits rpertoris au niveau mondial dans le cadre du Nanotech
Project men par le Woodrow Wilson Institute....................................................................................... 23
Figure 2 : Rpartition des nano-produits par catgories (25 aot 2009, extrait du Woodrow Wilson Institute)
............................................................................................................................................................... 24
Figure 3 : Rpartition des nano-produits en sous-catgories de Sant et Fitness : Cosmtiques, Habillement,
Produits de soin personnel, Articles sportifs, Crmes solaires, Filtration (25 aot 2009, extrait du
Woodrow Wilson Institute)...................................................................................................................... 25
Figure 4 : Rpartition des nano-produits par secteur gographique dorigine : Etats Unis, Asie (Chine,
Taiwan, Core du Sud et Japon), Europe (Royaume Uni, France, Allemagne, Finlande, Suisse, Italie,
Sude, Danemark et Pays Bas), Reste du monde (incluant Australie, Canada, Mexique, Isral,
Nouvelle Zlande, Malaisie, Thalande, Singapour, Philippines), extrait du Woodrow Wilson Institute. 26
Figure 5 : Classement des nano-produits par nature chimique du nanocomposant....................................... 27
Figure 6 : Production nationale franaise de nanoparticules (en fonction de leur nature chimique). En
encadr la production mondiale (selon rapport Afsset, Juillet 2008)...................................................... 27
Figure 7 : Classification des nanomatriaux selon leur localisation au sein du composant / objet / produit
considr (Hansen S.F., 2007). ............................................................................................................. 37
Figure 8 : Historique partant de la fabrication de lentrant et sachevant la fin de vie de larticle................. 39
Figure 9 : Peut-on tablir un lien direct entre lentrant et les produits mis lors de lusage et de la fin de
vie du produit ?....................................................................................................................................... 39
Figure 10 : Nombre de produits finis par domaine application (march franais, 2008)................................. 46
Figure 11 : Nombre de produits par type de matrice (march franais, 2008) ............................................... 46
Figure 12 : Distribution de la nature chimique du nanomatriau parmi les 7 types retenus en fonction des
domaines dapplication (march franais, 2008). ................................................................................... 47
Figure 13 : Schma explicatif du modle de gestion des risques Nano Risk Framework .............................. 53
Figure 14 : Bio cintiques de particules de taille nanomtrique (daprs Oberdorster G., 2005). .................. 59
Figure 15 : Voies de gnotoxicit primaires et secondaires impliques dans la cancrognicit des particules
(Daprs (Schins R.P.F., Knaapen A.M.,2007)....................................................................................... 60
Figure 16 : Mcanismes indirects qui peuvent conduire la gnotoxicit (daprs Singh N., 2009). ............. 61
Figure 17 : Vue par MEB de nanoparticules dargent intgres des chaussettes (Benn T.M., Westerhoff
P.,2008). ................................................................................................................................................. 64
Figure 18 : Mcanisme possible de toxicit des nano-argent (Asharani P.V., 2009) ..................................... 71
Figure 19 : Cration de la paire lectron / trou suite lirradiation par un faisceau lumineux dnergie
(h) suprieure ou gale la diffrence entre lnergie de la bande de conduction (Ec) et la bande de
valence (Ev). .......................................................................................................................................... 78
Figure 20 : ractions doxydation et de rduction pouvant avoir lieu en surface de TiO
2
............................... 79
Figure 21 : Diffrentes formes de silice avec le numro CAS (daprs JACC 51) ........................................ 109

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 20
1 Contexte, objet et modalits de traitement de la
saisine
1.1 Contexte
Les nanomatriaux sont constitus de structures lmentaires dont au moins une des dimensions
est comprise entre 1 et 100 nanomtres. Cette caractristique dimensionnelle, domaine
intermdiaire entre la taille des atomes et celle des matriaux massifs, confre ces matriaux des
proprits ou des comportements particuliers. En effet, cette chelle, les lois de la physique
quantique sexpriment de faon prpondrante. En raison des nombreuses applications innovantes
que laissent entrevoir ces proprits physiques, chimiques ou biologiques, les nanomatriaux
reprsentent un domaine de la recherche scientifique et technique en pleine expansion.
Champ dexprimentation et de recherche dans le monde depuis une vingtaine dannes, leurs
utilisations ne se confinent plus aux seuls laboratoires. Les nanomatriaux interviennent dsormais
dans de nombreux procds industriels et participent la composition dune grande varit de
produits de la vie courante (crmes solaires, textiles, aliments, transports, etc.). On distingue les
nanomatriaux fabriqus intentionnellement de lensemble des particules galement de tailles
infrieures 100 nm mais prsentes dans le milieu ambiant naturel ou issues involontairement de
divers processus industriels ou domestiques non destins la fabrication ou lutilisation de
nanomatriaux (particules ultrafines).
Le champ dapplication des nanomatriaux est loin dtre spcifique un secteur industriel en
particulier. Celui-ci concerne dj une large varit de produits et dapplications appele
stendre dans des secteurs aussi varis que le btiment, lautomobile, lemballage, la chimie,
lenvironnement, lnergie, la sant, la cosmtologie, lalimentation, etc.
Cet essor rapide pourrait entraner une augmentation de lexposition de la population aux
nanomatriaux manufacturs, concernant en premier lieu les employs de lindustrie et des
laboratoires ou les populations riveraines des installations industrielles, pour lesquelles le risque de
contact chronique avec les nanomatriaux est en effet le plus lev : les quantits rencontres sont les
plus importantes et la manipulation quotidienne pour certains. Enfin, dans certaines tapes de
production, un certain nombre de nanomatriaux bruts se prsentent sous forme de poudre
dpourvue de toute matrice, impliquant dimportants risques potentiels dinhalations. Cet aspect de
lexposition professionnelle a fait lobjet dune saisine prcdente de lAfsset.
Aujourdhui, la large diffusion de ces nanomatriaux travers une multitude de produits de
consommation courante amne cependant sinterroger sur un autre aspect de lexposition aux
nanomatriaux manufacturs : celle des consommateurs et de la population gnrale. Ces
expositions, ainsi que la dispersion environnementale conscutive leur consommation, se
rvlent encore plus complexes valuer aussi bien qualitativement que quantitativement, pour de
multiples raisons : faible traabilit des nanomatriaux dans les produits disponibles la
consommation et exhaustivit de ces produits, scnarios de consommation et dexposition dfinir,
difficult de la mesure de lmissivit des produits en fonction de leurs diverses utilisations possibles,
etc.
Le risque est fonction de deux facteurs distincts que sont lexposition (des personnes et de
lenvironnement) et la dangerosit (respectivement en termes de toxicit et dcotoxicit).
Malheureusement, ces deux paramtres sont encore gnralement assez mal connus dans le cas
des nanoparticules.
Ainsi, pour le facteur exposition , les donnes scientifiques ne sont que partiellement
disponibles, notamment les scnarios dutilisation des nano-produits et la facult des
nanomatriaux mettre des nanoparticules au long de leur cycle de vie : cest--dire durant leur
usage et en fin de vie.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 21
Bien que les tudes de nano-toxicologie progressent de faon remarquable dans le monde,
lavance des connaissances sur la dangerosit des nanoparticules est retarde par le caractre
multiparamtrique des tudes. Celles-ci doivent en effet prendre en compte, pour chaque
matriaux constitutif des nanoparticules, leur taille, leur forme, leurs charges de surface, etc.
Par ailleurs, lcotoxicologie des nanoparticules est encore un domaine scientifique peu explor. Il
nest donc aujourdhui pas possible dvaluer globalement, et de faon exhaustive, les risques lis
lintroduction des nanomatriaux dans les biens de consommation courante actuels et futurs.
Cette tude de cas sest donc limite, titre dexemple, quelques nano-produits de grande
consommation pour lesquels un niveau de connaissance suffisant tait accessible.
1.2 Objet
En rponse une premire saisine de ses ministres de tutelle en 2005, lAgence franaise de
scurit sanitaire de lenvironnement et du travail a ralis un recueil dinformations scientifiques
intitul Les Nanomatriaux - Effets sur la sant de lhomme et sur lenvironnement . Ce rapport
dexpertise a t remis aux ministres de tutelle et rendu public par lAfsset en juin 2006.
Dans la continuit de ces travaux, lAfsset a t saisie le 29 juin 2006 par la Direction gnrale de
la sant, la Direction de la prvention de la pollution et des risques, ainsi que par la Direction
gnrale du travail afin de raliser une synthse des valuations des risques existantes et des
moyens mis en uvre pour garantir la protection des travailleurs, et de faire des recommandations
de mesures appropries pour garantir la protection des travailleurs et des populations riveraines
susceptibles dtre exposs des nanomatriaux manufacturs. En labsence dautres outils
dvaluation disponibles et spcifiques aux nanomatriaux manufacturs, lAfsset a alors propos
dutiliser une approche qualitative simplifie des risques pour la sant et pour lenvironnement.
Dans ce cadre, lAfsset a t saisie le 05 juin 2008 par la Direction gnrale de la sant, la
Direction gnrale de la prvention des risques et la Direction gnrale du travail pour laborer et
tudier des scnarios dexposition de la population gnrale quelques nanomatriaux
manufacturs contenus dans un chantillon de produits mis sur le march, en prenant en compte
les diffrentes voies dexposition afin dvaluer les risques potentiels pour la population gnrale.
1.3 Modalits de traitement de la saisine
1.3.1 Droulement de la saisine
Le traitement de cette saisine a t confi au Comit dExperts Spcialiss (CES) valuation des
risques lis aux agents physiques, aux nouvelles technologies et aux grands amnagements .
Dans un premier temps, lexpertise a t conduite avec laide de quatre experts rapporteurs
membres du CES agents physiques, nouvelles technologies et grands amnagements . Dans
un second temps, pour la partie relative lvaluation des risques, compte tenu de la complexit et
de la sensibilit de la thmatique traite, lAfsset a dcid, sur proposition du CES valuation
des risques lis aux agents physiques, aux nouvelles technologies et aux grands amnagements
en sance du 9 mars 2009, de constituer un groupe de travail formel rattach ce CES et
compos dexperts slectionns suite un appel candidature public.
La participation des experts rapporteurs pralablement slectionns sentendait dornavant titre
dexperts intuitu personae dans le cadre dun groupe de travail dont la prsidence a t confie
M. Fabrice Nesslany (toxicologue Institut Pasteur de Lille).
La collaboration avec les autres agences sanitaires, suggre par les ministres de tutelle, sest
formalise par la nomination de deux rapporteurs, experts lAfssaps, auprs du groupe de travail.
LAfssa, elle, a t rgulirement informe de lavance des travaux mais le groupe de travail na
pu profiter de la mise disposition dexperts de cette agence.
Le groupe de travail sest runi pour la premire fois le 18 mars 2009 puis huit fois en 2009. Le
rapport des travaux du groupe de travail, incluant ses conclusions et des propositions de
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 22
recommandations a t prsent au CES Agents physiques, nouvelles technologies et grands
amnagements le 23 novembre 2009.
La synthse dexpertise collective a t valide par ce CES, le 23 novembre 2009.
1.3.2 Critres de qualit en expertise
Les travaux dexpertise sont issus dun collectif dexperts aux comptences complmentaires. Ils
ont t raliss dans le respect de la norme NF X 50-110 qualit en expertise avec pour
objectif de respecter les points suivants : comptence, indpendance, transparence, traabilit.
Les travaux scientifiques retenus dans ce rapport sont issus :
de publications dans des revues scientifiques internationales avec comit de lecture,
de rapports dtudes scientifiques,
de communications lors de congrs et colloques internationaux,

Chaque expert a rdig une contribution dans son champ de comptences. Certaines parties ont
cependant fait lobjet dune concertation entre plusieurs experts. Les textes ont t ensuite soumis
lapprciation de lensemble du groupe. Les conclusions et les propositions ont t rdiges
collectivement par le groupe de travail.
Dans le cas o un expert a jug ncessaire de consulter une personne extrieure reconnue pour
ses comptences, la prise en compte ventuelle des informations fournies est la seule
apprciation de lexpert. Ces informations ne font pas lobjet de mentions spcifiques dans ce
rapport.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 23
2 Nanomatriaux et biens de consommation : tat
du march
2.1 Dfinition du march du consommateur
En labsence de donnes disponibles sur le plan national, lanalyse prsente ici dcrit le march
mondial des biens de consommations contenant des nanomatriaux.
Linventaire mis en place par le Woodrow Wilson Institute dans le cadre du NanoTech Project
rpertoriait, dans sa dernire mise jour du 25 aot 2009 (cf. Figure 1), plus de 1 000 nano-
produits sur le march, au niveau mondial
2
.
Cet institut est une entit mixte des secteurs priv et public dont un tiers des fonds est vers par le
gouvernement des tats-Unis.
Linventaire des produits contenant des nanomatriaux bnficie de mises jour rgulires. Les
produits que lon retrouve dans cet inventaire satisfont 3 critres :
1. les produits sont accessibles et peuvent tre aisment acquis par les consommateurs ;
2. ils sont identifis en qualit de nano-produit par le producteur (revendication) ou par
une autre source de donnes ;
3. la revendication nano du produit apparat raisonnable.

Figure 1 : Evolution du nombre de nano-produits rpertoris au niveau mondial dans le cadre du
Nanotech Project men par le Woodrow Wilson Institute

Ces nano-produits sont rpartis dans les catgories
3
suivantes (cf. Figure 2) :

2
http://www.nanotechproject.org/inventories/consumer/analysis_draft
803
580
356
54
1 015
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 24

sant et fitness : 605 produits ;
maison et jardin : 152 produits ;
lectronique et informatique : 57 produits ;
alimentation et boisson : 98 produits ;
automobile : 68 produits ;
lectromnager : 37 produits ;
produits pour enfants : 19 produits.


Figure 2 : Rpartition des nano-produits par catgories (25 aot 2009, extrait du Woodrow Wilson
Institute)

Pour la catgorie la plus importante (c..d. sant et fitness), des sous catgories ont t introduites
afin dobtenir une vue plus prcise des applications vises (cf. Figure 3) :

cosmtiques : 137 produits ;
habillement : 155 produits ;
produits de soin personnel : 193 produits ;
articles de sport : 93 produits ;
crmes solaires : 33 produits ;
filtration eau/air : 43 produits.

3
Il est utile de prciser que, dans cet inventaire, certains produits peuvent appartenir plusieurs catgories.
Par exemple les crmes solaires destines aux enfants sont catgoriss sant et fitness et produits
pour enfants la fois.
605
152
57
98
55
68
37
19
25 aot 2009
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 25


Figure 3 : Rpartition des nano-produits en sous-catgories de Sant et Fitness : Cosmtiques,
Habillement, Produits de soin personnel, Articles sportifs, Crmes solaires, Filtration (25 aot 2009,
extrait du Woodrow Wilson Institute)

Une analyse par pays dorigine des nano-produits est rsume sur la figure suivante (cf. Figure 4).
Linventaire a permis didentifier 24 pays distincts comme sources commerciales de ces nano-
produits. Les tats-Unis sont la source la plus importante avec un total de 540 nano-produits,
suivis par les pays asiatiques (Chine, Tawan, Core du Sud et Japon) avec un total de 240 nano-
produits. LEurope (Royaume-Uni, France, Allemagne, Finlande, Suisse, Italie, Sude, Danemark
et Pays Bas) est lorigine de 154 des 1 015 nano-produits rpertoris ce jour, alors que pour le
reste du monde (incluant Australie, Canada, Mexique, Isral, Nouvelle Zlande, Malaisie,
Thalande, Singapour, Philippines), 66 nano-produits sont rpertoris.

137
155
193
93
33
43
25 aot 2009
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 26

Figure 4 : Rpartition des nano-produits par secteur gographique dorigine : Etats Unis, Asie
(Chine, Taiwan, Core du Sud et Japon), Europe (Royaume Uni, France, Allemagne, Finlande, Suisse,
Italie, Sude, Danemark et Pays Bas), Reste du monde (incluant Australie, Canada, Mexique, Isral,
Nouvelle Zlande, Malaisie, Thalande, Singapour, Philippines), extrait du Woodrow Wilson Institute.

Enfin, la base de donnes du Woodrow Wilson Institute sest attache classer loccurrence des
nano-produits en fonction de la nature chimique du nano-composant et/ou nano-ingrdient (cf.
Figure 5) :

i) largent est le plus rpertori avec prs de 259 produits (53,6 %) ;
ii) le carbone (nanotubes et fullernes) est le second dans ce classement par nature
chimique avec un total de 82 produits (17 %) ;
iii) le titane (dioxyde de titane inclus) est prsent dans 50 produits (10,4 %) ;
iv) la silice est prsente dans 35 produits (7,2 %) ;
v) le zinc (oxyde de zinc inclus) est prsent dans 30 produits (6,2 %) ;
vi) lor est prsent dans 27 produits (5,6 %).

Il convient de noter que les nano-produits rfrencs contenant un nano-composant parmi ces 6
familles de natures chimiques les plus utilises ne reprsentent que 483 nano-produits sur un total
de 1 015. Ce constat souligne lextrme diversit de la nature chimique des composants lchelle
nanomtrique contenus dans des produits mis sur le march.

540
240
154
66
25 aot 2009
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 27
Une telle diversit de la nature chimique des composants nanomtriques est soutenue par
lanalyse du site maintenu par NanoWerk
4
, qui rpertorie pour sa part plus de 2 263 types de
produits contenant des nanoparticules commercialises.


Figure 5 : Classement des nano-produits par nature chimique du nanocomposant

La diversit de la nature chimique des nanocomposants avait dj t souligne dans le cadre du
rapport de lAfsset paru en Juillet 2008 (cf. Figure 6) (AFSSET,2008).


Figure 6 : Production nationale franaise de nanoparticules (en fonction de leur nature chimique). En
encadr la production mondiale (selon rapport Afsset, Juillet 2008)


4
http://www.nanowerk.com/phpscripts/n_dbsearch.php
259
82
30
35
50
27
25 aot 2009
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 28
Il convient de citer galement un inventaire japonais
5
pour complter le panorama des sites et
structures ralisant un inventaire des nano-produits (toutes applications confondues) mis sur le
march. Ltat de cet inventaire en fonction des catgories prises en compte est le suivant :
cosmtiques : 388 produits ;
habillement : 302 produits ;
lectromnager : 43 produits ;
maison : 157 produits;
articles Sportifs : 111 produits ;
alimentation : 36 produits ;
culture : 28 produits.

Toujours dans le cadre de linventaire des nano-produits mis sur le march, il existe galement un
autre site internet, Nanoshop
6
qui identifie les secteurs suivants :
btiments : 40 produits ;
automobile : 25 produits ;
articles pour applications marines : 3 produits ;
textiles : 17 produits ;
mdicine et sant : 34 produits ;
applications dans le domaine des cosmtiques : 27 produits ;
lectromnager : 12 produits ;
articles sportifs : 15 produits ;
maison et Jardin : 37 produits ;
alimentation : 16 produits ;
papier et emballage : 4 produits.

En 2009, lONG Environmental Working Group (tats-Unis) identifie pour le seul secteur des
produits de soin personnel, prs de 9 509 produits contenant des ingrdients de dimension
nanomtrique
7
.
Une autre source
8
fait tat dune liste de prs de 526 produits pour plus de 264 socits, pour les
nano-produits revendiquant contenir des nanoparticules dargent.

Si lon sintresse maintenant de faon plus dtaille au volume de nanoparticules mis en jeu par
champ dapplications concernes et par nature chimique des nanoparticules impliques, le
Tableau 1 ci-aprs sappuyant sur le rapport publi en 2009 par linstitut national pour la sant
publique et lenvironnement hollandais (Rijksinstituut voor Volksgezondheid en Milieu RIVM)
permettra de fournir un certain nombre dlments (RIVM,2009).

Il conviendra cependant dapprcier avec prudence les lments ainsi condenss, puisque la
catgorie correspondant des quantits suprieures 10 000 tonnes nest pas suffisamment

5
http://staff.aist.go.jp/kishimoto-atsuo/nano
6
http://www.nanoshop.com
7
http://ewg.org/node/26565 et http://ewg.org/node/26564
8
http://www.ec21.com/ec-market/nano_silver.html
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 29
prcise pour valuer exactement les quantits rellement mises en jeu. Cela consolide le fait que,
pour une application donne, il existe diffrents composants avec des quantits trs variables.
Dautre part, cet inventaire nest pas exhaustif puisquil nintgre pas par exemple lutilisation de
noir de carbone dans les pneumatiques.

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 30

Tableau 1 : Quantit de nanoparticules mises en uvre en fonction des applications dtailles. Document tabli partir des diffrents tableaux
issus du rapport 2009 du RIVM. Sont fournis les lments non exhaustifs pour ltat actuel et ltat projet dans un futur proche (2010-2015). Est
galement fourni le cot de la matire premire par kilogramme de nanoparticules considres.


Nature chimique Produits/application
Sous-catgorie de
produits
Catgorie de
produits
Quantit
actuellement
produite (t/an)
Part de
march
actuelle de la
catgorie de
produit (%)
Prospective de
quantit
produite (t/an)
Prospective
de la part de
march de la
catgorie de
produit (%)
Prix / Catgorie
$ / kg
Filtres catalyseurs Filtres catalyseurs
Vhicules
moteur
> 10 000 10 20 > 10 000 1 10 5 - 500
Systme dclairage
au xnon
Systme
dclairage
Vhicules
moteur
10 100 < 1 10 100 < 1 5 - 500
Alumine
Systme de filtration
Systme de
filtration et
purification de leau
Filtration et
purification
10 100 < 1 100 1000 < 1 5 - 500
Support
d'enregistrement
optique
Support
d'enregistrement
Informatique et
lectronique
10 100 < 1 10 100 < 1 5 - 500
Alumine
(couche mince)
Encres et pigments Encres et papiers
Informatique et
lectronique
NR NR NR NR NR
Nouveaux
dveloppements de
nanotubes de
carbone
Ecrans
Informatique et
lectronique
0 0 1 000 10 000 1 10 50 - 500
Nouveaux
dveloppements de
nanotubes de
carbone
Autres textiles
Textiles et
chaussures
0 0 100 1000 < 1 50 - 500
lectrodes
transparentes
Ecrans
Informatique et
lectronique
0 0 100 1 000 < 1 50 - 500
Nanotubes de
carbone (NTC)
lectrodes
transparentes
Energie
Informatique et
lectronique
0 0 100 1 000 < 1 50 - 500
Nanotubes de
carbone (NTC)
coniques
Nouveaux
dveloppements de
nanotubes de
carbone
Energie
Informatique et
lectronique
0 0 10 100 < 1 50 - 500
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 31
Nature chimique Produits/application
Sous-catgorie de
produits
Catgorie de
produits
Quantit
actuellement
produite (t/an)
Part de
march
actuelle de la
catgorie de
produit (%)
Prospective de
quantit
produite (t/an)
Prospective
de la part de
march de la
catgorie de
produit (%)
Prix / Catgorie
$ / kg
Matriaux
composites
(inc. NTC)
Equipements sportifs
Equipements
sportifs
Equipements
sportifs
10 - 100 < 1 100 - 1000 < 1 50 500
Emballages
alimentaires
Emballages
Produits
mnagers
> 10 000 10 20 > 10 000 20 - 30 5 50
Nano argiles
Cblage et gaine de
cble
Composants
lectroniques
Informatique et
lectronique
1 000 10 000 < 1 1 000 10 000 1 10 5 50
Nano argiles
(coton)
nanocomposites
R&D
Equipement
professionnel
Textiles et
chaussures
0 0 100 1 000 < 1 5 50
Nano argiles,
polymre, carbone
Composants
automobiles
intrieur
Vhicules
moteur
1 000 10 000 1 10 1 000 10 000 1 10 5 50
Arogel de silice Isolants
Matriaux
disolation
Divers 1 000 10 000 1 10 >10 000 1 10 5 50
Nano films de silice
Enrobage de fibre
optique
Composants
lectroniques
Informatique et
lectronique
1 000 10 000 1 10 1 000 10 000 < 1 5 50
Nanoparticules
dargent
revtements anti
microbiens
Assimil aux
produits de sant
Cosmtiques et
produits
dhygine
0,1 - 1 < 1 1 10 < 1 5 000 50 000
TiO2
Systmes de filtration
/ purification de lair
Systmes de
filtration /
purification de lair
Filtration et
purification
< 0,1 < 1 0,01 0,1 < 1 5 50
Couches minces
de TiO2
Revtements
photocatalytiques
Produits de
nettoyage
Produits
mnagers
1 000 10 000 1 10 1 000 10 000 1 10 5 50
TiO2, ZnO Absorbants UV
Produits
cosmtiques
solaires
Cosmtiques et
produits
dhygine
1 000 10 000 1 10 1 000 10 000 1 10 5 50
Oxydes de crium
Additif pour carburant
diesel
Carburants
Vhicules
moteur
NR NR NR NR NR
Chrome, cobalt et
carbone
Composant de
disque dur
Composants
informatiques
Informatique et
lectronique
1 000 10 000 1 10 1 000 10 000 1 10 50 - 500
HAP
(hydroxyapatite)
Dentifrices Hygine orale
Cosmtiques et
produits
dhygine
0 (en 2008) 0 NR NR 5 000 50 000
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 32
Nature chimique Produits/application
Sous-catgorie de
produits
Catgorie de
produits
Quantit
actuellement
produite (t/an)
Part de
march
actuelle de la
catgorie de
produit (%)
Prospective de
quantit
produite (t/an)
Prospective
de la part de
march de la
catgorie de
produit (%)
Prix / Catgorie
$ / kg
Oxyde de fer (et
aluminium)
Support
d'enregistrement
magntique
Support
d'enregistrement
Informatique et
lectronique
1 000 10 000 1 10 100 - 1000 < 1 50 - 500
Ferrofluides
Composants
lectroniques
Informatique et
lectronique
1 10 < 1 1 10 < 1 50 - 500
Nanoparticules
doxydes de fer
Ferrofluides
Composants
informatiques
Informatique et
lectronique
1 10 < 1 1 10 < 1 50 - 500
Nanoparticules de
lanthane
Anti-algues
Filtration et
purification de leau
Filtration et
purification
NR NR NR NR NR
Nanoparticules de
lithium
Batteries lithium ion Energie
Informatique et
lectronique
0 0 1 000 10 000 1 10 50 - 500
Film nanomtrique
de polymre
Revtement optiques
Produits de
nettoyage
Produits
mnagers
100 - 1000 < 1 100 - 1000 < 1 5 50
nanophosphore
(quantum dots)
diodes
lectroluminescentes
Systme
dclairage
Informatique et
lectronique
0 0 0,1 - 1 < 1 >50 000
Palladium Filtres catalyseurs Filtres catalyseurs
Vhicules
moteur
10 - 100 < 1 10 - 100 < 1 5 000 50 000
Platine Filtres catalyseurs Filtres catalyseurs
Vhicules
moteur
10 - 100 < 1 10 - 100 < 1 5 000 50 00
Adhsifs et
traitements de
surface
Revtements et
adhsifs
Divers > 10 000 40 - 50 > 10 000 30 - 40 50 - 500
Ecrans plats Ecrans
Informatique et
lectronique
100 1 000 < 1 1 000 10 000 1 10 50 - 500
Polymres
Traitement de textile
Traitement de
textile
Textiles et
chaussures
1 10 <1 1 10 <1 50 - 500
Nanocomposites
de polyurthane /
aluminium
proprits anti-
adhsives / anti-
abrasives
Produits de
nettoyage
Produits
mnagers
100 1 000 < 1 100 1 000 < 1 50 - 500
Quantum dots
diodes
lectroluminescentes
Systme
dclairage
Informatique et
lectronique
0 0 0,1 - 1 < 1 >50 000
Rhodium Filtres catalyseurs Filtres catalyseurs
Vhicules
moteur
1 10 < 1 1 10 < 1 >50 000
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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Nature chimique Produits/application
Sous-catgorie de
produits
Catgorie de
produits
Quantit
actuellement
produite (t/an)
Part de
march
actuelle de la
catgorie de
produit (%)
Prospective de
quantit
produite (t/an)
Prospective
de la part de
march de la
catgorie de
produit (%)
Prix / Catgorie
$ / kg
proprits anti-
adhsives / anti-
abrasives
Produits de
nettoyage
Produits
mnagers
100 1 000 < 1 100 1 000 < 1 50 - 500
Divers matriaux
incluant aluminium,
silice, titane,
zirconium et
carbure de silicium
proprits anti-
adhsives / anti-
abrasives
Revtements
Vhicules
moteur
0 0 100 1 000 < 1 50 - 500


Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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2.2 Nanomatriaux dans les biens de consommation
2.2.1 Proprits des nanomatriaux
Les nanomatriaux, comme cela est dcrit dans le rapport les nanomatriaux : effets sur la sant
de lhomme et sur lenvironnement (AFSSET,2006), prsentent de nombreuses proprits
particulires dont les principales sont les suivantes :

- Proprits mcaniques
Leffet de la nanostructure peut se traduire par un phnomne de superplasticit. Les
nanomatriaux peuvent ainsi permettre damliorer la rsistance des matriaux sans
compromettre leur ductilit, car la taille des nanoparticules limite les concentrations de contraintes.
Il faut galement noter l'effet de renfort dans les composites (absorption d'nergie, dviation des
fissures, etc.).
- Proprits lectriques
Lintroduction de nanoparticules et/ou de nanotubes peut modifier de faon drastique la
conductivit lectrique de matriaux rputs isolants, et ce des taux de charges extrmement
faible, notamment lors de lutilisation de nanotubes de carbone (NTC).
- Proprits optiques
Les nanoparticules ont des dimensions infrieures aux longueurs donde de la lumire visible (380
780 nm), ce qui permet damliorer les proprits optiques de certains matriaux (transparence).
- Proprits de transfert thermique
Lajout de nanoparticules peut permettre damliorer certaines proprits avec de faibles fractions
volumiques. Par exemple, lajout de nanoparticules dalumine ou doxyde de zinc peut modifier la
conductivit thermique de fluides caloporteurs (nanofluides).
- Proprits de barrire
Dans les nano-composites matrice polymre, lincorporation dargile augmente les proprits de
barrire vis--vis de leau et des gaz du fait de laugmentation de la distance parcourir pour les
molcules qui diffusent.
- Inflammabilit
Lintroduction de lamelles dargile de taille nanomtrique dans une matrice polymre retarde sa
dgradation et permet la formation dune couche superficielle carbonise qui ne se fracture pas
mais forme une nanostructure multicouche de silicate amliorant les proprits de barrire et de
rsistance, jouant le rle dun isolant et rduisant les missions de produits volatils issus de la
combustion.
- Proprits magntiques
Linfluence de la dimension des domaines cristallins a un effet trs important sur le comportement
magntique des matriaux.
- Proprits catalytiques
La diffrence des proprits catalytiques entre le matriel massique et le nano-matriel
manufactur correspondant est illustre par lexemple des nanoparticules dor. Lor massique na
pas de proprits catalytiques particulires. Haruta (Haruta M., 1987) a montr que les
nanoparticules dor disperses sur un support possdaient des proprits intressantes pour la
raction doxydation du monoxyde de carbone (CO). Cette raction est observe pour des
nanoparticules dor infrieures 5 nm.



Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 35
2.2.2 Exemples dutilisations dans les produits de consommation
Parmi les exemples dutilisation des nanomatriaux manufacturs nous pouvons retrouver les
suivants :
Apport dune fonction autonettoyante ou anti-adhsive de surface : certains revtements contenant
des nanomatriaux manufacturs possdent une fonction autonettoyante ou antiadhsive la
surface. Par exemple, lutilisation dun revtement en dioxyde de titane dune paisseur
nanomtrique sur des fentres autonettoyantes agit par destruction de la matire organique du fait
des proprits photocatalytiques du TiO
2
(sous forme anatase).
Augmentation de la duret : les revtements rsistants aux rayures peuvent tre renforcs par
lutilisation de couches intermdiaires de taille nanomtrique (ou de multicouches) entre la couche
dure externe et le matriau. Une protection mcanique externe peut ainsi tre apporte des
matriaux tendres tels que les polymres, les textiles ou le bois.
Amlioration de la rsistance au frottement : des revtements multicouches base doxynitrure de
titane (TiON), en particulier, peuvent prsenter des caractristiques intressantes dans le domaine
des outils de coupe.
Amlioration de la qualit des textiles : le progrs de la biotechnologie a permis lincorporation de
l'argent ionisable dans des textiles usage clinique afin de rduire le risque d'infections
nosocomiales ou pour l'hygine personnelle. Des textiles avec des proprits dites respirantes
et une rsistance leau ou aux taches ont pu tre raliss grce lamlioration du contrle de la
porosit lchelle nanomtrique et la rugosit pour un certain nombre de polymres et
dlments inorganiques.
Apport dune fonction antimottante et antiagglomrante : la silice peut tre utilise en tant quagent
anti-agglomrant et fluidifiant dans les aliments tels que le sel commun.
Absorption des rayons ultraviolets : des nano-particules de dioxyde de titane ou doxyde de zinc
peuvent tre introduites dans des crmes solaires car elles absorbent et rflchissent les rayons
ultra-violets tout en demeurant transparentes la lumire visible.
Rduction de linflammabilit : les nano composites argile/polymres prsentent notamment des
proprits de barrire vis--vis de leau et des gaz et permettent de rduire linflammabilit des
polymres.

Cf. aussi paragraphe 2.1.2 les entreprises franaises dans le contexte mondial du rapport de
lAfsset 2008 : les nanomatriaux : scurit au travail (AFSSET, 2008).



Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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3 Nanomatriaux et cycle de vie
Ce chapitre a pour objectif de dfinir le champ danalyse de ce travail dexpertise. Pour ce faire, un
certain nombre de dfinitions sont rappeles : notion de nano-objet, de matriaux
nanomanufacturs, danalyse du cycle de vie (ACV). Puis, des fins dillustration de la
problmatique, deux cas particuliers seront tudis :
le vieillissement acclr dun produit fini et
ltat de lart concernant le nano-argent.
Ces cas seront discuts et permettront de mieux dfinir notre champ danalyse.
3.1 Principes et dfinitions classiques
Les dfinitions prsentes ci-dessous sont extraites danalyses plus dtailles que le lecteur
trouvera dans les documents suivants : (ADEME,2005; AFSSET,2006; AFSSET,2008; INRS,2008;
ISO, 2008).

Nano-objets : (ISO, 2008)
Nano-chelle : gamme de taille allant environ de 1 nm 100 nm.
Nano-objet : lment dont une, deux ou trois dimensions sont la nano-chelle.
Nanoparticule : nano-objet ayant ses trois dimensions externes la nano-chelle.
Nanofilms, nanocouches ou nanorevtements : nano-objet dont une dimension est lchelle
nano, et dont les deux autres dimensions sont nettement plus grandes.
Nanofibres, nanotubes, nanofilaments ou nanobtonnets : nano-objet dont deux dimensions
externes sont la nano-chelle, et dont la troisime est nettement plus grande.

Nanomatriaux : (AFSSET, 2006)
Les nanomatriaux peuvent tre classs en quatre familles selon leurs formes dutilisation (cf.
Figure 7) :
matriaux de dimension 0 : matriaux sous forme disperse, alatoire ou organise,
comme dans les cristaux collodaux pour loptique ou les fluides magntiques ;
matriaux de dimension 1 : matriaux sous forme de nanofils ou de nanotubes ;
matriaux de dimension 2 : matriaux sous forme de couche mince, comme dans les
dpts dagrgats ou de revtements pais obtenus par projection plasma ou voie
lectrochimique ;
matriaux de dimension 3 : matriaux sous forme compacte comme dans les cramiques
et les mtaux nanostructurs.
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Figure 7 : Classification des nanomatriaux selon leur localisation au sein du composant / objet /
produit considr (Hansen S.F., 2007).

Origine naturelle ou anthropique ; particules intentionnelles ou non-intentionnelles
Lappellation particules ultrafines est couramment utilise pour dsigner des particules dont le
diamtre est infrieur 100 nm. Celles-ci sont prsentes de manire ubiquitaire dans
lenvironnement. Elles sont issues soit de sources naturelles (volcans, arosol marin, mission de
composs organiques volatils biogniques) soit de tout un ensemble dactivits humaines
anciennes dans le monde du travail ou dans notre quotidien (procds industriels tels le soudage,
les rejets diesel, les systmes de cuisson et de chauffage, les fumes de tabac, etc.).
Lusage qui est fait gnralement du terme particules ultrafines sadresse donc principalement
des sources non-intentionnelles, quelles soient naturelles ou anthropiques.
Il en est tout autrement pour les particules associes aux nanomatriaux manufacturs : la
prsence de particules nanomtriques est recherche en raison de leurs proprits
physicochimiques remarquables.
De fait, lappellation nanoparticule est plutt rserve aux particules manufactures et
destines des usages industriels, que ce soit des nanoparticules connues et produites depuis
dj plusieurs annes et dont les tonnages sont levs ou des nanoparticules nouvelles comme
les fullernes, etc. (INRS, 2008). On parle ici de particules intentionnelles .

Lanalyse de cycle de vie (ACV)
Les mthodes classiques disponibles pour lvaluation des risques des substances chimiques ne
sont pas adaptes aux nanomatriaux et une analyse des risques au cas par cas en prenant en
compte tout le cycle de vie apparat ncessaire. De nombreuses publications envisagent lanalyse
de cycle de vie, ou ACV, comme mthode permettant dvaluer les impacts potentiels des
nanotechnologies.
LACV a t normalise par lOrganisation Internationale de Standardisation entre 1997 et 2002
(ISO, 2006; ISO, 2006). Lanalyse de lACV est une dmarche globale et itrative dvaluation
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environnementale proposant une analyse des impacts potentiels sur lenvironnement et/ou la
sant dun systme, dun service ou dun produit sur lensemble de son cycle de vie, de lextraction
des matires premires la production de dchets. Les impacts considrs sont notamment le
changement climatique, la dpltion de lozone stratosphrique, lpuisement des ressources, la
sant humaine, etc.
En pratique, la norme ISO 14044 dfinit quatre tapes :
(1) le champ de ltude est dfini en prcisant le systme tudi et lunit fonctionnelle
associe (unit de rfrence qui permet dexprimer les impacts sur un lment
reprsentatif et bien caractris) ;
(2) les flux de matires et dnergies entrants (nergie, matriaux, substances, eau,
consommables) et sortants (missions dans les diffrents milieux, dchets, nergie)
chaque tape du cycle de vie sont inventoris (inventaire du cycle de vie : ICV) ;
(3) puis on procde une valuation des impacts potentiels environnementaux partir de ces
donnes grce des coefficients prtablis permettant de calculer la contribution de
chaque flux aux divers impacts environnementaux tudis (effet de serre, acidification,
sant humaine, etc.). Les rsultats sont exprims par rapport lunit fonctionnelle
choisie ;
(4) enfin, les rsultats sont interprts par lanalyse des informations obtenues lors des tapes
prcdentes, notamment par des analyses de sensibilit afin dprouver la robustesse des
rsultats et de prciser ltude.
La ralisation des tudes ACV ncessite un grand nombre de donnes dont la majorit est
manquante pour les nanotechnologies (relation dose-rponse, donnes d'mission, fraction
absorbe, etc.). De plus, la complexit des phnomnes en jeu et de leurs interactions est source
dincertitude sur la valeur relle des impacts sur lenvironnement (ex : caractre fig de certaines
donnes utilises, non prise en compte des effets de synergie ou dantagonisme entre polluants,
des caractristiques particulires du milieu local, des effets de cintique, etc.) : cest ce titre que
le qualificatif potentiel est utilis et on parle donc dimpacts potentiels. Enfin, il est trs
difficile dinterprter les units utilises dans les mthodes ACV disponibles et dvaluer leur
pertinence.
Lanalyse de cycle de vie dfinie selon la norme ISO ne peut se substituer une analyse de
risques chaque tape du cycle de vie.

3.2 Cycle de vie des produits contenant des nanomatriaux :
illustration et discussion
3.2.1 Historique du produit :
Ltude des risques lis un produit suppose le suivi de cet article et de ses rsidus tout au long
de sa vie (cf. Figure 8). Cette dmarche est symbolise par le concept danalyse du cycle de vie.
Les travaux mens jusquici dans le domaine des nanomatriaux ont port principalement sur le
risque en termes dhygine professionnelle (AFSSET, 2008; INRS, 2008). Ceux-ci ont clairement
mis en vidence diverses difficults, commencer par de fortes limitations au niveau de la mesure
de lexposition (difficult pour identifier les contributions spcifiques au milieu du bruit de fond), etc.
Le thme du prsent rapport est de considrer le risque vis--vis du consommateur, de la
population gnrale et plus largement de lenvironnement, partir de lmission ventuelle de
nanoparticules issues du produit fini. Nous nous intressons donc aux risques dmission de
particules ( relargage ) lors de lutilisation dun produit de consommation, et lors de sa fin de vie
(cf. Figure 8)
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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Des efforts trs importants sont mens en termes de recherche en toxicologie et en cotoxologie.
La quasi-totalit de ces travaux porte sur la forme primaire du produit : sur les entrants , c'est--
dire la plupart du temps sur les poudres lorigine du caractre nanostructur du futur produit fini.
Cette dmarche de recherche est complexe, et des efforts notables et stratgiques sont faits
notamment par lOCDE pour normaliser le descriptif de lentrant ainsi que les procdures
exprimentales. Un enjeu majeur est dassurer la comparabilit des rsultats.
Cependant, une question importante se pose dores et dj : quelle est la reprsentativit de cet
entrant au regard des particules potentiellement relargues partir dun produit fini (cf. Figure 9) ?
En effet, le cycle de vie du produit met en vidence des transformations majeures : la fabrication
du produit fini est mme de transformer profondment lentrant. Il en est de mme de lutilisation
et du vieillissement du produit, et plus encore de sa fin de vie - on pense par exemple
lincinration des ordures mnagres.
Cette complexit fait partie intgrante de la dfinition mme de lACV. Le chapitre suivant propose
une illustration de cette question.


Figure 8 : Historique partant de la fabrication de lentrant et sachevant la fin de vie de larticle.


Figure 9 : Peut-on tablir un lien direct entre lentrant et les produits mis lors de lusage et de la fin
de vie du produit ?

3.2.2 Etude de cas : vieillissement acclr dun produit fini
Sils restent peu nombreux, des travaux ont t mens sur les missions partir de produits finis
nanomanufacturs : produits contenant des nanotubes de carbone (Guiot A., 2008; Le Bihan O.,
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Schierholz K.,2008; Le Bihan O., Schierholz K.,2009), du TiO
2
(Hsu L.Y., Chein H.M.,2007), de
loxyde de zinc (Vorbau M., 2009) .
Une tude a t mene pour valuer spcifiquement limpact dune nanocharge dans un produit
fini soumis un vieillissement (Le Bihan O. et Schierholz K., 2008; Le Bihan O. et Schierholz K.,
2009). La structure du produit considr comprend une couche externe ( vernis ), puis une
strate assez fine constitue de fibre de verre mlange avec une rsine contenant des nanotubes
de carbone (NTC), et enfin un polystyrne de plusieurs centimtres dpaisseur.
le premier rsultat marquant est que le ponage et le perage dun chantillon sans NTC
induisent une mission de particules et notamment de nanoparticules, de manire
significative. La couche externe, savoir le vernis, est la principale source de particules.
Cet exemple illustre parfaitement le fait quune mission de particules ou nanoparticules ne
ncessite en aucun cas la prsence dun entrant nano ;
la comparaison des deux produits lun avec, lautre sans NTC - a fait apparatre des
niveaux dmission comparables : la nanocharge (minoritaire en masse) de ce produit na
donc eu aucune influence quantitative sur les missions ;
seule une tude plus pousse en termes de prlvement et danalyse serait mme de
donner des informations quantitatives et qualitatives sur le rle des NTC.
Compte-tenu du mode de fabrication, et tout particulirement du mlange des NTC avec une
rsine, il est trs probable que les particules mises soient htrognes. En dautres termes, on ne
retrouvera trace des NTC que probablement travers des dbris prsents au sein dun mlange
NTC + rsine + fibre de verre. Il y a peu de chance de retrouver dans le rejet une nanocharge sous
sa forme initiale.

En conclusion, ces rsultats suggrent que :
1. un relargage nano peut se faire sans la prsence de nanomatriaux manufacturs et
ajouts intentionnellement ;
2. la problmatique de lmission de nanoparticules nest pas spcifique aux entrants
nano mais concerne potentiellement toute partie dun produit ;
3. lidentification dans le rejet des drivs issus des entrants nano peut tre trs
complexe ;
4. ces drivs ont toute chance dtre loigns voire extrmement diffrents de lentrant
nano ; et par ailleurs de ntre quune composante dune particule htrogne.
Cette tude de cas illustre donc parfaitement la complexit de la question pose.

3.2.3 Etude de cas : tat de lart concernant le nano-argent
Nous considrons ici la dmarche trs intressante de Wijnhoven (Wijnhoven S.W.P., 2009). Cette
tude est en effet un bilan sur les donnes disponibles et manquantes pour matriser le risque li
aux nanoparticules dargent (risque pour les personnes et lenvironnement).
Cette dmarche est souligner car elle est incontournable pour prparer une analyse de risques
sur le cycle de vie.
Elle met en vidence que si de nombreux travaux ont port sur largent, trs peu encore ont port
sur son volet nano . Du fait de son usage tendu dans de nombreux domaines de production
(textiles, cosmtiques, agroalimentaire, etc.), ltude estime que le nano-argent a de fortes
probabilits de parvenir trs facilement dans lenvironnement aqueux.
Elle souligne galement le manque de donnes concernant le suivi du nano-argent le long de la
chane de vie : produit mission dispersion dans lenvironnement effets sur le biotope. Sur
ce point, ltude conclut quil est impossible, faute de donnes, de prtendre porter un avis sur le
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Mars 2010 Version finale page 41
risque pour lenvironnement issu de la production et de lutilisation du nano-argent. Lanalyse de
risques sur le cycle de vie est donc, de fait, impossible.
De plus, les auteurs constatent que ltude des voies et efficacits de pntration dans lorganisme
reste mener pour le nano-argent, et que, de faon plus gnrale, ltude de la transposition des
connaissances micro lchelle nano reste entreprendre.

3.2.4 Discussion
Ces deux exemples montrent quel point la formulation du problme doit tre dtaille avec soin.
Si des appellations telles que particules intentionnelles / non-intentionnelles permettent de
faciliter la discussion, elles savrent insuffisantes pour classer / diffrencier les diffrentes
situations.
1. Si lon prend le cas simple dun produit pour lequel il existe une revendication nano , tout
ou partie du produit est susceptible de contenir des produits non nano pouvant mener
un relargage nano ;
2. lhistorique du produit met en uvre diffrentes transformations qui attnuent fortement le
lien entre les entrants nanostructurs et les caractristiques du rejet du produit fini. La
labellisation a priori ne garantit pas une labellisation a posteriori ;
3. linverse, labsence dune revendication nano ne signifie en aucun cas labsence
dmission de nanomatriaux. Un fabricant peut laborer des produits sans raliser que
ceux-ci entrent dans le champ de dfinition des produits intgrants des nanomatriaux.
Cest le cas de certaines poudres utilises depuis de nombreuses annes. De la mme
manire quil existe des produits anciens non-conscients , il existe probablement des
dveloppements actuels non-conscients .

3.3 Dfinition du champ danalyse pour ltude
Le prsent rapport dexpertise a pour objet dvaluer le risque li lutilisation des produits finis
contenant des nanomatriaux manufacturs (risque pour le consommateur et pour
lenvironnement). Le groupe de travail a choisi de ne pas considrer lensemble du cycle de vie
dun produit pour lvaluation des impacts potentiels, mais de se limiter aux parties utilisation et
fin de vie . Comme cela a t discut ci-dessus, la problmatique est, mme dans cette
situation rduite, extrmement complexe. De plus, le volet production a t abord dans le
cadre de la saisine prcdemment confie lAfsset (AFSSET, 2008). Nous considrerons donc
des articles sortis du site de production et mis la disposition du consommateur dans un point de
vente ou qui peuvent tre utiliss tels quels par un transformateur dans un produit fini.
Lensemble de ce chapitre a montr la grande tendue du problme, en termes de variables.
Chaque produit considr gnre un haut degr de complexit. Nous avons constat la relative
fragilit de la labellisation nano . Par consquent, dans le cadre de ce rapport, un ensemble
rduit de trois produits de consommation pour lesquels le caractre nanomtrique et le caractre
intentionnel sont incontestables a t choisi.
A ces produits a t ajout un quatrime produit de consommation, la silice, afin de bnficier de
lun de ces entrants anciens, trs antrieurs lmergence de la problmatique nano , pour
lesquels il ny a pas forcment de revendication nano explicite.
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Mars 2010 Version finale page 42
4 Recensement et slection des produits
Ce chapitre prsente une liste de produits contenant des nanomatriaux manufacturs prsents
sur le march franais. Le recensement de ces produits a t ralis partir dun inventaire
spcifique, ax sur le march national. Contrairement aux inventaires disponibles (cf. chapitre. 2.2)
relatifs un tat des lieux lchelle mondiale, dont la mthodologie de recherche nest pas
toujours clairement identifie, ce recensement a fait lobjet de contrles stricts afin de sassurer
notamment de la prsence effective de nanomatriaux dans les produits considrs. La
mthodologie de recensement est explicite ci-dessous.
A partir de cette liste de produits, en constante volution, des familles de produits contenant les
nanomatriaux les plus utiliss ont t dtermines, avant doprer la slection de quatre produits
contenant des nanomatriaux, objets des valuations de risques dtailles dcrites dans le
chapitre 6.
4.1 Mthodologie de recensement
La majeure partie du travail prliminaire a consist recenser des produits finis disponibles sur le
march franais et contenant les nanomatriaux manufacturs les plus utiliss. Ce recensement
na pas eu pour ambition dtre exhaustif, la consultation dune grande varit de sources de
donnes a t privilgie par rapport la quantit de produits recenss. Lobjectif attach ce
travail dinventaire tait de fournir un support pour la slection de quelques produits qui ont fait
ensuite lobjet des valuations de risque (valuation des dangers et de scnarios dexposition).
ce jour, de nombreuses bases de recensement existent et contiennent une grande varit de
produits couvrant de nombreux domaines dapplication. Tous ces produits sont aujourdhui
accessibles grce au rseau internet. Il est en effet possible dobtenir pratiquement tout type de
produit depuis la France, et ceci, quel que soit le pays producteur. Le recensement effectu par les
rapporteurs en charge de la premire partie du traitement de la saisine se base donc sur la
consultation dun grand nombre de sources de donnes : sites internet, bases de donnes,
inventaires, organismes, associations, rapports franais et internationaux, etc. Les efforts se sont
particulirement ports sur les produits disponibles sur le march franais ainsi que ceux produits
en France ou dans les pays limitrophes.
4.1.1 Informations recherches
Pour chacun des produits, les informations qui ont t associes dans la base de recensement
sont les suivantes :
le domaine dapplication ;
lapplication ;
la nature chimique du matriau nanostructur ;
le type de matrice (solide, liquide, pte, arosol, poudre) ;
le nom commercial du produit ;
le nom du producteur et du distributeur si disponible ;
le pays producteur ;
la disponibilit du produit sur le march franais ;
la possibilit de se procurer le produit par lintermdiaire du rseau internet ;
la prsence dune revendication nano pour ce produit ;
la nature de la revendication, si elle existe (site internet du producteur, fiche technique,
fiche de donnes de scurit, etc.).
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La consultation dune grande diversit de sources et lassociation de la nature de la revendication
nano pour chacun des produits constituent le point fort de ce recensement. Concernant
lexhaustivit, celle-ci doit surtout concerner les catgories de produits recenss qui permettront de
dboucher sur un panel plus large de scnarii dexposition possibles.
4.1.2 Sources consultes
Internet :
Sites internet des producteurs de produits finis et de nanomatriaux, fiches et dossiers techniques
des produits, fiches de donnes de scurit des produits ;
Sites spcifiques aux nano , parmi lesquels nous pouvons citer nanopedia
9
, the web course of
nanotechology (tats-Unis) ;
Bases de donnes ou inventaires :
Linventaire des produits de consommation nano du Woodrow Wilson Institute
10
(tats-Unis) ;
La base de donnes des acteurs des nanomatriaux en France
11
dveloppe loccasion de
ltude stratgique ralise par le ministre de lindustrie (DiGITIP) en 2004 ;
Linventaire des produits et producteurs nano : The Nanotech Product Directory
12
;
La base de donnes Nano-Shops
13
(Allemagne) ;
La base de donnes nanoproducts
14
(Nanotechnology material database, Allemagne) ;
Le portail europenn Nanoforum
15
, (European Nanotechnology Gateway Nanoproducts in
Consumer Products) ;
Le portail Nanowerk
16
(tats-Unis) ;
Le portail nanotechnology now
17
.
Prsentation de confrences dans le cadre du Nanoforum du CNAM
18
:
8 novembre 2007 : Nanomatriaux et ciments ;
6 dcembre 2007 : Nanotechnologies et cosmtiques ;
7 fvrier 2008 : Nanotechnologies et alimentation.
Rapports :
Out of the laboratory and on to our plates, nanotechnology in Food & Agriculture, Friends of the
earth edition, mars 2008 ;
Small wonder? Nanotechnology and cosmetics, Which (ONG, UK), novembre 2008 ;
Nanowerk consumer product ;
Nanotechnology in Consumer Products, Nanoforum, octobre 2006 ;

9
http://nanopedia.case.edu ; consult durant la priode juin-dcembre 2008
10
http://www.nanotechproject.org ; consult durant la priode juin-dcembre 2008
11
http://www.nanomateriaux.org ; consult durant la priode juin-dcembre 2008
12
http://www.nanoshop.com ; consult durant la priode juin-dcembre 2008
13
http://nano-shops.com ; consult durant la priode juin-dcembre 2008
14
http://ww.nanoproducts.de ; consult durant la priode juin-dcembre 2008
15
http://www.nanoforum.org ; consult durant la priode juin-dcembre 2008
16
http://www.nanowerk.com ; consult durant la priode juin-dcembre 2008
17
http://www.nanotech-now.com ; consult durant la priode juin-dcembre 2008
18
Compte-rendus des sances du nanoforum disponibles sur le site internet suivant :
http://www.vivagora.org/spip.php?rubrique56
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 44
Nanomaterials in consumer products, RIVM, avril 2007 ;
Survey of nanotechnological consumer products (ministre danois de lenvironnement), 2007.
Consultation dorganismes europens
RIVM (Institut national pour la sant publique et lenvironnement, Pays Bas) ;
BEUC Bureau europen des unions de consommateurs.
Associations de consommateurs
Organisation Gnrale des Consommateurs - OR.GE.CO.
4.1.3 Principales difficults rencontres pour le recensement des produits finis
contenant des nanomatriaux manufacturs :
La principale difficult rencontre lors de llaboration de ce recensement a t didentifier la ralit
de la revendication nano , qui peut tre aussi bien commerciale que scientifiquement
fonde. En effet, en labsence dobligations rglementaires sur ce point, il est actuellement
impossible didentifier des produits commercialiss contenant des nanomatriaux manufacturs
partir de notifications ou dautorisations spcifiques existantes. Enfin, la seule identification des
produits amonts (produits intermdiaires) ne permet pas de tracer la totalit de la chane de
production et didentifier clairement les applications associes (produits finis). Cest pourquoi le
recensement contient aussi bien des produits amont que des produits mis sur le march et la
disposition du grand public.
Enfin, comme le souligne lAfssa dans son rapport de mars 2009, intitul les nanotechnologies et
nanoparticules dans lalimentation humaine et animale (AFSSA,2009), il est intressant de noter
que les interrogations grandissantes au niveau international sur les risques lis aux
nanotechnologies se sont traduites par la disparition de la rfrence ces nanotechnologies sur
certains supports de communication (sites de producteurs, fiches techniques, etc.). Ce phnomne
a pu parfois tre observ au long du recensement des produits finis dans le cadre des travaux de
lAfsset.
Au-del du problme li lidentification des produits contenant des nanomatriaux manufacturs,
les donnes permettant de caractriser le nanomatriau, lorsquelles sont disponibles, savrent le
plus souvent imprcises. En effet, mme si la revendication recherche est parfois disponible, il
est frquent de ne pouvoir identifier la nature chimique ou la forme du nanomatriau en question
ou encore den dterminer les quantits prsentes dans le produit. Ces donnes, quant elles
existent, doivent dailleurs tre considres avec prudence, leur exactitude pouvant tre remise en
question. Pour illustrer la difficult trier ces revendications, nous pouvons nous reporter une
tude mene par un laboratoire spcialis dans la caractrisation des produits rputs pour
contenir de largent, le Colloidal Science Laboratory, Inc., indiquant que la revendication nano-
argent ne signifie pas une teneur en argent certifie. Dans certains cas, cette tude a mme
montr que des produits se revendiquant comme contenant du nano-argent , ne contenaient
pas dargent
19
. Cette tude a dmontr non seulement que la quantit dargent pouvait tre remise
en question, mais aussi que la revendication mme de la prsence dargent sous forme
nanoparticulaire tait questionner.
4.1.4 Rsultat du recensement
Ce travail na pas t ralis dans le but daboutir un inventaire exhaustif des produits finis
contenant des nanomatriaux manufacturs, en raison des motifs exposs prcdemment. En
revanche, cet inventaire sattache prsenter toutes les catgories de produits contenant des
nanomatriaux et les types de nanomatriaux (nature chimique) prsents sur le march franais.
Au final, un total de 246 produits finis disponibles sur le march franais en 2008 a t recens.
Ce nombre est videmment en volution constante.

19
http://www.silver-colloids.com/Reports/reports.html
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 45
Les nanomatriaux pour lesquels le groupe de travail a pu identifier des produits finis ou
intermdiaires sont les suivants :
Argent ;
Argile ;
Biopolymres ;
Carbonate de calcium ;
Carbonate de potassium ;
Cramique ;
Dioxyde de titane ;
Fluoro-carbone ;
Fluoropolymres ;
Fullerne ;
Latex ;
Nanotubes de carbone (NTC) ;
Or ;
Oxyde daluminium ;
Oxyde de crium ;
Oxyde de zinc ;
Oxyde de zirconium ;
Platine ;
Rsine acrylique ;
Silicate daluminium ;
Silice.

La rpartition des usages de ces 246 produits disponibles sur le march franais en 2008 est
rsume dans les Figure 10 et Figure 11. II convient de considrer avec prudence cette
hirarchisation, compte-tenu du caractre non exhaustif de linventaire.
La catgorie applications multiples regroupe les produits intermdiaires destins la
production de biens de consommation dont seules les multiples catgories dapplications (par
opposition aux produits finis) sont identifies. De fait le poids de cette catgorie vient encore
relativiser ce recensement.
La rpartition des mmes produits en fonction cette fois-ci du type de matrice conditionnant le
nanomatriau dans le produit fini (Figure 11) rvle lampleur de limprcision des indications
accompagnant la description de ces articles commerciaux. En effet, pour environ le quart des
produits identifis (24 %), ce critre est indtermin.

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 46

Figure 10 : Nombre de produits finis par domaine application (march franais, 2008)


Figure 11 : Nombre de produits par type de matrice (march franais, 2008)
NR : Non renseign
4.2 Slection des produits
Le groupe de travail a tudi quelques produits finis contenant des nanomatriaux manufacturs
afin dlaborer des scnarios dexposition, en considrant les dangers nano-spcifiques associs
ces nanomatriaux, et daboutir une valuation qualitative des risques.
17
16
29
69
17 17
24 24
32
1
5
29
58
45
104
5
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 47
Les proprits des nanomatriaux varient selon leur composition chimique, leur taille, leur surface
spcifique, ltat de surface, ou encore la forme de la nanoparticule considre, etc. De plus,
chaque nanomatriau peut tre dot dune ractivit ou dun comportement diffrent selon la
formulation et la matrice du produit fini considr qui le contient. Ainsi, pour ces raisons, il est
apparu peu raliste de travailler sur une famille de produits (i.e. : les crmes solaires) et le groupe
de travail a donc choisi de considrer une slection de rfrences commerciales (un type et une
marque de produit bien prcis), chacune ayant une formulation ou une matrice diffrente et unique.
La mthodologie associe la slection de ces rfrences commerciales est la suivante : sept
nanomatriaux dintrt, parmi les plus utiliss (en termes de nombre dapplications
commerciales), ont dabord t slectionns dans le recensement :
Oxyde de titane ;
Argent ;
Silice ;
Oxyde de crium ;
NTC ;
Oxyde de zinc ;
Fullernes.


Figure 12 : Distribution de la nature chimique du nanomatriau parmi les 7 types retenus en fonction
des domaines dapplication (march franais, 2008).

Trois catgories de produits, juges dintrt par le groupe de travail dans le cadre de
lexposition/dispersion des nanomatriaux, ont alors t slectionnes pour chaque nanomatriau
cit ci-dessus. Un ensemble suffisamment large a en effet permis aux experts de raliser une
slection des produits finis les plus pertinents tudier pour raliser une analyse du risque.
Llaboration de cette prslection na pas donn lieu un cadrage mthodologique rigide de
hirarchisation ou de slection. En effet, lensemble des choix effectus sest principalement bas
sur la disponibilit des donnes et donc la possibilit de construire un scnario dexposition pour le
produit fini considr.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 48
Par la suite, une prslection de produits finis contenant un ou plusieurs des sept nanomatriaux
dintrt cits ci-dessus a t ralise. Afin de raliser ensuite une valuation des risques, quatre
produits finis ont ensuite t slectionns sur la base des critres suivants :
les donnes relatives au produit fini sont accessibles, sa prsence est valide dans le
recensement ;
il existe une revendication nano formelle ou dduite
20
;
le type de produit fini est largement utilis et connu du public ;
lensemble des produits slectionns permet au groupe de travail de considrer les
diffrentes voies dexposition (ingestion, inhalation et cutane, avec seule considration de
lexposition directe et non accidentelle) ;
les produits considrs disposent de matrices diffrentes (liquide, solide, poudreux) ;
lexposition aux nanomatriaux est considre comme lexposition directe.

La slection des produits finis aurait pu tre ralise en considrant les tonnages associs la
fabrication de ces produits, de manire cibler les utilisations a priori majeures et donc les plus
proccupantes. Le RIVM, qui a publi un rapport en 2009 intitul Exposure to nanomaterials in
consumer products (RIVM, 2009), a tudi quatre rapports danalyse de march publis entre
2006 et 2008. Le but principal tait didentifier les produits pertinents usage grand public
contenant des nanomatriaux manufacturs. Les donnes issues de ce travail de synthse, non
chiffres, sont des estimations. Ainsi, les donnes de consommation et de production ont t
estimes par catgories de produits. Cependant, aucune information sur des produits spcifiques
ou encore sur des rfrences commerciales prcises nest disponible dans ce rapport. Par
consquent, le mode de classification des catgories de produits en fonction des masses globales
de nanomatriaux produites annuellement associes ne prend pas en compte les spcificits des
produits finis telles que les concentrations du ou des nanomatriaux intgrs. Une telle
hirarchisation ne peut donc pas rendre compte elle seule de la pertinence de lexposition un
article.
La faible accessibilit aux donnes propres des rfrences commerciales prcises rend la
priorisation des produits par rapport aux critres principaux pour lvaluation de lexposition
difficile, voire impossible. Le choix des produits finis faisant lobjet dtudes dtailles a t alors
arrt aprs une rflexion collective du groupe de travail. Enfin, il faut noter que, dans le cadre de
cette tude, les donnes de march viennent conforter la slection qui sest faite sur les critres
prcdemment voqus en dbut de chapitre.
4.3 Rsultat du choix des produits
Pour des raisons de respect de la confidentialit, les noms commerciaux des produits ainsi que les
noms des producteurs associs ne sont pas donns.
Les produits retenus pour ltude dvaluation des risques, sur la base des critres prcdemment
identifis, sont les suivants :
produit A : chaussettes antibactriennes, de marque A1, dans la catgorie textile . La
voie dexposition considre est la voie cutane. Diverses proprits, dont celles anti-
bactriennes et anti-fongiques et anti levure correspondent aux proprits attendues des
nanoparticules dargent incorpors dans le produit A ;
produit B : ciment, de marque B1, dans la catgorie btiment . La voie dexposition
considre est la voie respiratoire. La spcificit revendique par le producteur de ce type

20
Certaines informations rvles par le producteur du produit impliquant ncessairement des proprits de
structure nanomtrique (par exemple importantes surfaces massique mesures pour des poudres mesures
par BET) sont considres comme des revendications dduites du nanomatriau
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 49
de ciment rside dans sa capacit diminuer la pollution atmosphrique, laide des
phnomnes de photocatalyse attribus aux nanoparticules de dioxyde de titane intgres
dans la matrice poreuse du ciment ;
produit C : lait solaire, de marque C1, dans la catgorie cosmtique . La voie
dexposition considre est la voie cutane. Les proprits physiques dabsorption et de
rflexion des rayonnements ultra-violets par des nanoparticules minrales de dioxyde de
titane permettent de substituer significativement lutilisation de molcules organiques dans
la formulation de ce produit ;
produit D : produit amont et non fini, il sagit dun ingrdient silice, de marque D1, dans la
catgorie alimentation . La voie dexposition considre est la voie orale. Cette gamme
de nano-silice constitue un produit intermdiaire destin tre incorpor, par un client
transformateur, un sucre de table. La proprit attendue est celle dantimottant
21
.
On remarquera que le choix des nanomatriaux effectu se montre cohrent avec ceux faisant
lobjet dune attention particulire de la France dans le cadre des travaux actuels de lOCDE sur
les tests de scurit sanitaire et environnementale pour des chantillons de nanomatriaux
manufacturs
22
.

Afin de complter les informations disponibles dans la littrature, des auditions ont t organises
avec les industriels concerns. La nature des informations demandes est spcifie dans le
document support (Annexe 2) remis aux industriels sollicits.
Ainsi, le producteur C1 a t auditionn le 21 septembre 2009 et le producteur D1 le 25 septembre
2009.

21
Additifs qui, dans une denre, limitent l'agglomration des particules.
22
La France parraine les essais de scurit pour le dioxyde de titane (en partenariat avec lAllemagne) et la
silice (en partenariat avec lunion europenne) et contribue ces tests pour largent.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 50
5 Mthodologie dvaluation des risques
Pralablement toute rflexion sur la construction dune mthodologie dvaluation des risques
spcifique, un premier effort a t port sur lidentification et lanalyse approfondie des outils
dvaluation disponibles applicables au contexte de la saisine. Trois rapports proposant chacun
une mthode de caractrisation des risques nano-spcifiques pour lHomme et lenvironnement
ont t identifis par les experts du groupe de travail.

Lobjectif vis ici a t de dterminer si lemploi de lun de ces trois outils mthodologiques
satisfaisait pleinement lvaluation des risques dans le cadre de la saisine, sil tait opportun de
les adapter ou bien, dans le cas contraire, sil tait ncessaire de dvelopper un nouveau cadre
mthodologique.
Les trois documents tudis sont les suivants :
a prudent approach to Nanotech Environmental, Health, and Safety Risks (Lux
Research,2005) ;
la grille de prcaution pour les nanomatriaux synthtiques (FOPH-FOEN,2008) ;
Nanorisk framework (Dupont , Environmental Defense2007).

A prudent approach to Nanotech Environmental, Health, and Safety Risks (Lux Research)
Le cabinet de consultants Lux Research a labor un outil cl en main simple et rapide
permettant lvaluation qualitative du risque nano-spcifique dun produit fini sur lensemble de son
cycle de vie. Reprenant le cadre standard des valuations de risques sanitaires, le niveau de
risque dun produit est dfini partir du niveau de danger intrinsque du nanomatriau et du
niveau dexposition/dispersion durant le cycle de vie du produit fini.

Dans le dtail, le niveau de danger, caractris par une chelle trois degrs (faible, moyen et
lev) se rapporte directement au type de nanomatriau employ. La classification de ce niveau
est prdtermine suivant plusieurs critres dclars par les auteurs.

De manire identique, la cotation du niveau dexposition, toujours dans un rfrentiel trois
chelons (faible, moyen et lev), est prdfinie en fonction de la catgorie de produit, pour
chacune des tapes du cycle de vie de ce produit (production / utilisation / fin de vie). Un certain
nombre de critres est prcis pour estimer ces niveaux dexposition.

Le niveau de risque nano-spcifique du produit, toujours dfini en trois niveaux (faible, moyen et
lev), provient de la combinaison des niveaux de danger et des niveaux dexposition estims
dans les tapes prcdentes. Le rsultat, sous forme de tableau croisant le type de nanomatriau
avec le type dapplication et intgrant un code couleur intuitif, aboutit une prsentation
schmatique des risques. Cet aspect synthtique rend la prsentation particulirement adapte
la lecture comparative des risques en fonction des produits.

Cependant, bien que la simplicit dutilisation soit vidente, les experts regrettent labsence de la
considration du devenir du produit chaque tape de son cycle de vie. En effet, comme indiqu
ci dessus (cf. chapitre 3), les nanomatriaux injects dans la matrice dun produit peuvent voluer
durant la vie de ce produit. Les nanomatriaux mis (disperss dans lenvironnement et auxquels
est expose la population), et donc leur toxicit, peuvent alors diffrer des nanomatriaux initiaux.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 51
Par consquent, une valuation de la toxicit devrait tre idalement ralise pour chacune des
tapes du cycle de vie. Sajoute cela que la toxicit dun nanomatriau peut dpendre de
nombreux facteurs dpendants ou non du type mme de nanomatriau (cf. 59 paramtres OCDE,
Annexe 8).
Dautres questions mthodologiques se posent, notamment la non-diffrentiation entre risques
pour lHomme et risques pour lEnvironnement, ou encore, comment traiter les produits contenant
plusieurs types de nanomatriaux ?

Enfin, plusieurs interrogations subsistent quant aux cotations prdfinies par les auteurs. Dune
part, les critres lists pour ces valuations sont trs gnraux et ne semblent pas exhaustifs (leur
pertinence et leurs poids ne sont pas expliqus dans le document fourni). Dautre part, les
mthodes permettant daboutir ces cotations (danger et exposition) partir des critres voqus
ne sont pas explicites. De mme, le procd dvaluation du risque global en fonction des
cotations proposes nest pas dcrit. Ces diffrents points interdisent lactualisation des
paramtres de cotation avec lavance des connaissances scientifiques (ce document a t publi
en 2005) et lextension des catgories employes (nanomatriaux et types dapplications) pour
adapter loutil en tant que tel notre problmatique.

Grille de prcaution pour les nanomatriaux synthtiques (FOPH-FOEN)
Cette grille construite par les offices fdraux suisses de la sant publique (FOPH) et de
lenvironnement (FOEN) permet destimer et de distinguer les risques nano-spcifiques dun
produit contenant des nanomatriaux manufacturs pour les travailleurs (risques professionnels),
les consommateurs et lenvironnement.

Le principe propos par la grille consiste combiner les scores associs chacun des critres
considrs laide dune formule afin daboutir un score de risque. Les diffrents risques
(employ / travailleur / environnement) sont ensuite caractriss en fonction des scores obtenus :
soit le risque nano-spcifique peut tre considr comme faible et la situation ne requiert pas
dtudes de risques complmentaires, soit le score de risque nano-spcifique dpasse le seuil
daction et des dmarches supplmentaires sont ds lors engager (tudes de risques
complmentaires, actions de rduction des risques, etc.).

Une des particularits de ce modle rside dans lintervention dun score relatif ltat des
connaissances pour valuer le niveau de risque encouru. Le calcul de scores partir de scnarios
dit normaux mais aussi partir de scnarios pire cas en constitue une autre particularit
intressante.

Cet outil repose sur des bases mthodologiques solides, cela pour plusieurs raisons. Tout dabord,
la grille sapparente un questionnaire rponses fermes, c'est--dire que la rponse apporte
chaque critre dvaluation nest pas subjective mais guide par un jeu de scores dpendant de
seuils quantitatifs se rfrant des lments dinformation rcents (publication en 2008). Ces
scores sintgrent ensuite dans un modle dont la cohrence (pondration de ces scores,
cohrence des units, etc.) a t vrifie par un expert extrieur statisticien. Enfin, la grille est
accompagne dun document explicatif complet pour son utilisation.

Cependant, des limites cet outil sont aussi constates, notamment concernant lestimation des
effets potentiels des nanomatriaux. En effet, le score figurant le niveau de ces effets potentiels
est calcul uniquement en fonction de deux critres pour lensemble du cycle de vie :
le niveau dactivit redox et/ou catalytique du nanomatriau ;
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 52
la stabilit dans les milieux pertinents (conditions physiologiques et conditions
environnementales pour le calcul des effets respectivement pour lHomme et pour
lenvironnement).

Ce modle implique donc la considration dun niveau de toxicit constant sur lensemble du cycle
de vie du produit et restreint le mcanisme toxicologique considr la seule formation despces
ractives oxydantes (ERO). Or, tel quindiqu dans le chapitre 3, les paramtres physicochimiques
cadrant la caractrisation du nanomatriau, et donc sa toxicit, sont le plus souvent amens tre
fortement modifis le long du cycle de vie du produit. Les tudes toxicologiques ont de plus montr
que les effets associs lexposition aux nanomatriaux ne sont pas exclusivement associs la
formation dERO. Ce score, dpendant uniquement de paramtres physico-chimiques conjugus
des donnes de toxicocintique (essentiellement la clairance), ne prend pas en compte les tudes
toxicologiques et cotoxicologiques, pourtant trs pertinentes (information sur la pntration de la
barrire cutane pour une exposition cutane par exemple). Ce modle ne permet pas non plus de
diffrencier les particularits associes aux diffrentes voies dexposition (respiratoire, orale et
cutane).

Nanorisk framework (Dupont)
Ce document dit par la socit Dupont apporte un rfrentiel complet pour lvaluation des
risques nano-spcifiques pour lHomme et lenvironnement pour les produits contenant des
nanomatriaux manufacturs durant lintgralit de leur cycle de vie. Destin aux gestionnaires de
risques qui souhaitent fonder leurs dcisions sur la base de lvaluation des risques, cet outil
sinscrit dans une logique itrative damlioration continue (cf. Source : Dupont et Environmental
Defense, 2007
Figure 13) et inclut pour cela des lments daide la gestion (valuation de lefficacit de la
gestion des risques, cots et dures prvisibles, cadre mthodologique des actions mener en
fonction de lanalyse de la situation).

La partie du document affecte lvaluation des risques sanitaires et environnementaux dtaille
lensemble des paramtres considrer pour chacune des phases de lvaluation des risques
pour une tape du cycle de vie :
caractrisation des proprits physico-chimiques ;
valuation du danger (pour lHomme et lenvironnement) ;
valuation de lexposition.

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 53

Source : Dupont et Environmental Defense, 2007
Figure 13 : Schma explicatif du modle de gestion des risques Nano Risk Framework

Ces donnes sont classes dans des sous-groupes en 2 catgories : celles appartenant
lensemble des donnes indispensables renseigner et les donnes supplmentaires permettant
daffiner lvaluation. Ce modle dvaluation des risques suppose que, chaque tape du cycle
de vie soit associ un jeu de donnes. Il est par consquent ncessaire de runir ces donnes
pour chaque tape du cycle de vie du produit afin daboutir une valuation correcte des risques
pour le cycle de vie entier.
Pour plus de flexibilit du document face aux multiples situations et usages possibles, ce
rfrentiel fournit un canevas de lvaluation des risques et non un algorithme prt lemploi .
Le type de donnes attendues nest pas prcis, les aspects quantitatifs et la manire de traiter les
donnes sont laisss lapprciation de lutilisateur. Il sagit donc dun outil destin des
spcialistes de lvaluation des risques appliqus aux nanomatriaux.

Il faut prciser ici que cet outil est utilis pour des produits contenant une substance dont peine
10 % (en masse) peut tre considre de taille nanomtrique
23
.
5.1 Discussion pour la construction dune chelle de cotation du risque
Lanalyse des outils existants prsents dans le paragraphe prcdent a permis de nourrir les
rflexions sur les modalits de cotation souhaites pour le traitement des cas concrets lors de
lvaluation des risques.

Les connaissances lacunaires actuelles pour les produits finis et les nanomatriaux intgrs ne
permettent pas pour le moment daboutir une valuation quantitative des risques nano-
spcifiques. Cependant, le groupe de travail sest attach construire un outil dvaluation
permettant de hirarchiser les risques nano-spcifiques, en suivant une chelle de cotation

23
http://www.edf.org/documents/6552_TiO2_Summary.pdf
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 54
simplifie (petit nombre de niveaux). Cette classification peut seffectuer sur la base dun score de
risque calcul de manire explicite partir dun nombre de paramtres suffisant caractrisant
distinctement le niveau de danger et le niveau dexposition associs chacune des tapes
tudies du cycle de vie du produit.
Ainsi, lidal serait de concevoir un outil capable de considrer lensemble des paramtres lists
par le document Nano Risk Framework dans un cadre mthodologique apparent celui propos
par la grille de cotation des offices fdraux suisses (questionnaire dont les rponses sont
associes un score) et dont le rsultat final, prsent sous forme synthtique et intuitive proche
de celle du document Lux Research, se rapporte lintgralit de la partie du cycle de vie tudi.

Les documents tudis ne correspondant pas individuellement ces attentes, le groupe dexperts
a dcid dexaminer la faisabilit dune mthodologie conciliant les avantages identifis de chacun
dentre eux.



Avantages Inconvnients
Lux Research
(2005)
A prudent approach
to Nanotech
Environmental,
Health, and Safety
Risks
Vision synthtique, communication
Actualisation des paramtres
Echelle de cotation
Pas dvaluation de la toxicit, ni
du risque, chaque tape du
cycle de vie
FOPH-FOEN (2008)
Grille de prcaution
pour les
nanomatriaux
synthtiques
Mthode de cotation du risque
Elments dinformation plus rcents
Nombre de critres insuffisant
Pas de prise en compte de la
toxicit et de lcotoxicit
chaque tape du cycle de vie
Dupont (2007)
NanoRisk
Framework
Paramtres pertinents en nombre et
en qualit pour une valuation du
risque au cours du cycle de vie
Prise en compte des cots et du
temps pour lvaluation
Communication, restitution
Plus destin aux experts
Tableau 2 : Rcapitulatif synthtique des avantages et inconvnients des outils mthodologiques
analyss.

Dans cette vise, deux travaux complmentaires ont t simultanment accomplis. Le premier a
consist tablir la liste des paramtres indispensables prendre en compte dans le modle de
cotation, le second concevoir les bases dun algorithme permettant de calculer correctement le
score de risque partir des rponses apportes pour chacun des paramtres du modle.

Rfrentiel des paramtres considrer
Plus quune simple numration des paramtres indispensables lvaluation des risques, le but
de ce rfrentiel revient aussi dfinir la nature des rponses attendues, notamment en mettant
ces paramtres en correspondance avec les tests standardiss de lOCDE (lignes directrices)
permettant de les obtenir, ceci afin de pouvoir alimenter correctement la grille de cotation.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 55
LAfsset participe aux groupes internationaux chargs de dfinir les fondements de lvaluation des
risques sanitaires et environnementaux spcifiques aux nanomatriaux. Parmi ceux-ci, un groupe
de travail scurit des nanomatriaux manufacturs a t mis en place en 2006 dans le cadre
de lOCDE. La construction dune base de donnes comportant 59 tests incluant la caractrisation,
la toxicit, lcotoxicit de 14 nanomatriaux manufacturs constitue lun des travaux la charge
de ce groupe. A ce titre, un document de travail dfinissant les paramtres concerns a t publi
rcemment
24
, ladaptation des tests habituellement pratiqus sur des substances chimiques aux
nanomatriaux tant encore discute (voir Annexe 8).
Ainsi, lensemble des paramtres, issus du croisement des donnes de ce document de travail de
lOCDE avec celles listes dans le document Nano Risk Framework et compltes par les experts
du groupe de travail Afsset, sont rpartis en plusieurs items :
caractrisation du nanomatriau ;
identification du danger pour lHomme ;
identification du danger pour lenvironnement ;
valuation de lexposition humaine et de la dispersion environnementale.

Grille de cotation des risques
Sur le modle de la grille suisse, le groupe de travail a orient ses efforts vers la conception dune
grille de cotation permettant de calculer un score de risques nano-spcifiques pour des produits de
consommation. Ce score de risque est objectiv sur la base dun algorithme intgrant les
paramtres identifis dans le rfrentiel prsent ci-dessus. La slection initiale dun modle
reposant sur une grille rponses fermes, c'est--dire proposant pour chaque question un choix
parmi des rponses prtablies associ un score de risque, sexplique essentiellement par la
ncessit de cadrer objectivement les rponses apportes, et donc de limiter laspect subjectif de
lvaluation.
La conception de cet outil requiert par consquent ltablissement de seuils quantitatifs ou
qualitatifs pertinents pour ces paramtres quil convient ensuite dassocier des scores
reprsentatifs du niveau de risque, ainsi que llaboration dun algorithme permettant de combiner
et pondrer lensemble de ces donnes pour calculer un score de risque global du scnario.
Cette contrainte mthodologique dexamen des paramtres cibls a permis dengager une
rflexion particulirement enrichissante sur ltat actuel des connaissances des corrlations entre
les paramtres et les effets et leur porte dans le cadre de lvaluation des risques nano-
spcifiques.

Malgr ltat avanc des discussions ncessaires sa conception, cet outil na pas t finalis en
raison notamment de lampleur du travail raliser dans un temps imparti trs court. Rappelons
que la vrification de la cohrence de lalgorithme de la grille de cotation suisse, malgr le faible
nombre de paramtres considrs, a sollicit les comptences dun expert statisticien externe en
appui au groupe dexperts en charge de sa ralisation. De plus, au-del de ces contraintes de type
organisationnelles, la russite dune telle dmarche nest actuellement pas garantie. En effet, de
nombreuses interrogations persistent sur plusieurs plans de lvaluation des risques et psent sur
la faisabilit dun tel outil. Au cours des travaux de rflexion engags par le groupe dexperts, la
difficult de raliser un outil adapt au large ensemble des situations rencontres dans le contexte
de ltude a t souleve : linfluence des paramtres pris en compte sur le niveau de risque (donc
leur pondration des scores dans le calcul) nest pas forcment identique selon le scnario tudi.
Il est donc aujourdhui parfaitement lgitime de sinterroger sur la faisabilit, et la pertinence, de
raliser un algorithme unique destin un champ dutilisation aussi vaste que celui gnr par
lutilisation des produits de consommation contenant des nanomatriaux manufacturs.

24
http://appli1.oecd.org/olis/2008doc.nsf/linkto/env-jm-mono(2008)13-rev
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 56
Enfin, les prochains rsultats issus des travaux de lOCDE sur plus de 14 nanomatriaux
apporteront certainement des lments dinformation cruciaux ces rflexions. Il apparaitrait au
final judicieux de reprendre ces travaux la lumire de donnes futures pour concevoir terme un
outil abouti.
5.2 Mthode employe pour lvaluation qualitative des risques

Fort des rflexions engages sur la conception dune grille de cotation, le groupe de travail sest
dirig vers une mthodologie plus classique dvaluation des risques consistant examiner au cas
par cas les risques nano-spcifiques engendrs lors de lutilisation des produits slectionns (cf.
chapitre. 4).
Dans ce contexte, lbauche dune grille de cotation a servi de trame commune aux scnarios pour
lvaluation des risques nano-spcifiques. Ce document liste les tapes cls ncessaires
examiner, ainsi que linventaire des paramtres essentiels considrer pour la bonne ralisation
des diffrentes phases de lvaluation des risques :
lvaluation de lexposition humaine et la dispersion dans lenvironnement ;
lvaluation du danger pour lhomme ;
lvaluation du danger pour lenvironnement.
5.2.1 Mthode dlaboration des scnarios dexposition
Les scnarios associs chacun des produits sont principalement raliss partir des donnes
bibliographiques suivantes, par ordre dcroissant dintrt :
des lignes directrices existantes pour le type de produit ;
des recommandations dutilisation pour un usage normal du producteur et/ou du
distributeur ;
des pratiques constates pour un usage normal pour le type de produit ;
des usages constats pour des produits de types proches ;
des donnes de caractrisation fournies par les industriels lors dauditions.

Lorsquaucune donne nest disponible, un scnario appel pire-cas est dfini partir
dhypothses conduisant une maximisation de lexposition, en restant dans le cadre dutilisation
du produit pour lequel il est destin.
Le contexte de lvaluation des risques lis aux nanomatriaux est caractris par un niveau
particulirement lev des incertitudes. Afin de rduire le niveau dincertitude associ aux rsultats
de cette expertise, il a t dcid de restreindre le champ des valuations des risques la seule
exposition majoritaire consquente lutilisation du produit concern et de ne traiter que la voie
dentre la plus expose. Ainsi, lexposition indirecte
25
humaine aux nanomatriaux manufacturs
disperss dans lenvironnement conscutive lutilisation des produits ne sera pas traite dans le
cadre de lvaluation des risques pour lHomme. Seule lidentification des milieux rcepteurs
contamins sera aborde.


25
L'exposition directe est dfinie comme dcoulant du contact direct avec, ou proximit immdiate, avec le
produit chaque tape de son cycle de vie, sciemment ou non. L'exposition humaine directe se distingue de
l'exposition humaine indirecte en ce qu'aucune voie importante dans l'environnement n'intervient entre le
point dmission et le point d'exposition humaine.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 57
5.2.2 Mthode didentification des dangers et valuation des risques
Dans la pratique, les publications toxicologiques et cotoxicologiques ou encore pidmiologiques
de qualit relatives des nanomatriaux dont les caractristiques, lorsquelles sont connues, sont
identiques ou proches de celles prsentes par les nanomatriaux manufacturs introduits dans
les produits tudis, savrent souvent peu nombreuses. Ainsi, la mthode de slection des
publications choisie par le groupe dexperts a consist ne pas restreindre le champ
bibliographique aux seules tudes toxicologiques et cotoxicologiques rputes de qualit
26

portant sur des nanomatriaux dont les proprits physico-chimiques (lorsquelles sont connues)
sont identiques ou proches de celles des nanoparticules intgres dans le produit fini. Au contraire
la discussion collective a t fonde sur la base dune revue bibliographique la plus exhaustive
possible en tenant compte de la voie dexposition principale. Pour cela, un tableau de synthse de
la revue bibliographique par nanomatriau entrant a t ralis afin de prioriser les donnes issues
de la littrature, en fonction de plusieurs critres, parmi lesquels la qualit des travaux dcrits et le
degr de cohrence entre le nanomatriau dans cette publication et le nanomatriau retenu pour
le scnario.
5.2.3 Mthode dvaluation des risques :
Les risques, pour lhomme et lenvironnement, sont caractriss partir de lanalyse effectue par
le groupe de travail, en croisant les rsultats de lvaluation de lexposition avec ceux des dangers
pour lHomme puis en croisant les rsultats de lvaluation de la dispersion environnementale avec
ceux des dangers pour lenvironnement.


26
Cest--dire par exemple satisfaisant aux bonnes pratiques de laboratoire (BPL).
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 58
6 Evaluation des risques pour les produits
slectionns
6.1 Introduction
Les valuations de risques respectives pour les quatre produits prcdemment slectionns (cf.
chapitre 4.3) sont successivement droules de manire indpendante en suivant la mthodologie
prsente au chapitre 5.2. Une courte prsentation du type de produit et du nanomatriau
concern (proprits attendues, utilisations constates, etc.) prcde chacun de ces travaux
dvaluation. Par souci de clart, chacune de ces tudes est subdivise en trois parties distinctes :
valuation de lexposition et de la dispersion ;
identification des dangers (homme et environnement) ;
valuation du risque.

Enfin, un bilan gnral ralis sur la base des quatre cas examins est prsent la fin de ce
chapitre.

Malgr le manque de connaissances vident lheure actuelle en matire de toxicologie et
dcotoxicologie des nanoparticules, il est communment admis que ces objets se distinguent des
substances particulaires habituelles (non nanomtriques) en ce qui concerne leurs interactions
avec le vivant. Ainsi, pralablement aux valuations de risques entreprises dans ce rapport, trs
spcifiques aux produits cibls, sont rappeles des gnralits en termes deffets biologiques
potentiels des nanoparticules (considres comme essentielles la comprhension des
problmatiques didentification des dangers en toxicologie et cotoxicologie).
6.2 Effets biologiques potentiels des nanoparticules
6.2.1 Toxicologie
Comme toute substance chimique, le devenir des nanoparticules dans lorganisme humain et la
toxicit potentielle associe vont dpendre notamment de leurs proprits physico-chimiques
(taille, forme, caractre soluble, etc.). Les phnomnes dabsorption, de distribution, le
mtabolisme et lexcrtion semblent tre diffrents par rapport une entit chimique classique, de
part leurs caractristiques spcifiques. Il est aujourdhui vident que la prise en compte dun
nombre restreint de caractristiques nest pas suffisante pour interprter leurs effets potentiels. De
faon gnrale, la transposition des connaissances micro lchelle nano reste un champ
dtudes part entire.
Ainsi, la connaissance des voies de pntration dans lorganisme apparat comme tant un pr-
requis indispensable lvaluation toxicologique. Les tudes de toxicocintique des nanoparticules
sont essentielles pour la caractrisation des dangers.
Elles permettent en outre de mieux comprendre les mcanismes impliqus dans la dispersion des
nanomatriaux dans lorganisme ainsi que de dterminer les organes cibles en fonction de la (ou
des) voie(s) dentre possible(s), les phnomnes de translocation (vers des organes secondaires)
et de bio persistance.
Certaines voies dabsorption et de translocation ont dj t dmontres, mais d'autres restent
hypothtiques et doivent tre tudies (Oberdorster, 2005). Les taux de transfert sont encore en
grande partie inconnus, ainsi que l'accumulation et la rtention dans des organes et tissus cible.
Les voies dabsorption des nanoparticules, attendues et connues, en fonction de lexposition ainsi
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 59
que les voies de distribution et d'limination peuvent tre schmatises telles que le montre la
Figure 14 ci-dessous :

Figure 14 : Bio cintiques de particules de taille nanomtrique (daprs Oberdorster G., 2005).

Ces tudes de toxico cintique devraient permettre galement de mieux comprendre les
mcanismes de dposition et de clairance, les effets pulmonaires, les phnomnes de
translocation vers des organes secondaires etc.
Comme le prcise le rapport de lIRSST (IRSST,2008) sur les nanoparticules : Elles peuvent
donc se retrouver dans le sang en ayant franchi les membranes pulmonaires ou gastro-
intestinales, se distribuer dans les diffrents organes et saccumuler dans certains sites
spcifiques. .
Parmi les mcanismes de toxicit des nanoparticules, on retrouve des phnomnes impliquant la
perturbation de la chane respiratoire mitochondriale conduisant la production despces
ractives de loxygne (ERO) et linterruption de la synthse dATP. Ces effets peuvent entraner
leur tour des lsions de lADN et larrt du cycle cellulaire, pouvant conduire potentiellement
une cancrognicit. La production despces ractives de loxygne a t clairement identifie
comme un mcanisme daction toxique des nanoparticules sur des cellules eucaryotes, mais
dautres mcanismes peuvent galement tre impliqus. Les principaux mcanismes cytotoxiques
et gnotoxiques identifis ou probables des nanoparticules sont rsums dans la Figure 15 ci-
dessous :
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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Figure 15 : Voies de gnotoxicit primaires et secondaires impliques dans la cancrognicit des
particules (Daprs (Schins R.P.F., Knaapen A.M.,2007).

Ainsi, des effets gnotoxiques primaires directs et indirects mais galement des effets
gnotoxiques secondaires peuvent survenir :
1. Effets primaires directs
les nanoparticules pntrent dans le noyau et interagissent directement avec lADN ;
Les nanoparticules produisent des radicaux libres induisant des lsions de lADN ou perturbent la
sgrgation des chromosomes pendant la mitose. En effet, du fait de leur gamme de taille
nanomtrique, il est communment admis que les nanoparticules sont capables dinteragir et
ventuellement dinterfrer avec des constituants cellulaires de dimension comparable tels que les
nuclosomes, les microtubules, les filaments dactine et les centrosomes. Ainsi, linterfrence avec
ces structures peut mener un dysfonctionnement de la division cellulaire et perturber le trafic
cellulaire (Gonzalez L., 2008). Chen et al. ont montr que l'incorporation de nanoparticules de
silice dans le noyau cellulaire a induit la formation d'agrgats de protines intranuclaires qui a
entran linhibition de la rplication, de la transcription, et de la prolifration cellulaire (Chen M.,
von Mikecz A.,2005).
2. Effets primaires indirects
Les particules entranent :
une dpltion en antioxydants, ce qui augmente le niveau de lsions oxydatives de lADN
endognes et rompt l'tat d'quilibre et/ou ;
une augmentation des lsions oxydatives de lADN via lactivit mitochondriale et/ou ;
Exposition aux
particules
Inflammation chronique et libration despces
ractives de loxygne et de lazote
Gnotoxicit Prolifration
Effets primaires
Formation de
tumeurs
Apoptose
Arrt du cycle cellulaire
Rparation ADN
Effets secondaires
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 61
une inhibition de la rparation de lADN, etc.
Trs rcemment, un autre mcanisme daction gnotoxique impliquant des cascades de ractions
a t identifi in vitro. Des nanoparticules de CoCr ont t mises en contact avec une barrire de
cellules confluentes (cellules BEWO) et de fibroblastes humains en dessous, les fibroblastes tant
les cellules cibles. Les nanoparticules induisent des lsions mitochondriales dans la couche
suprieure de la barrire BEWO, les ions Co
2+
mimant les conditions hypoxiques. Ces deux
conditions entranent une libration d'ATP qui peut passer soit via des canaux (rcepteurs P2X
activit intrinsque de canal ionique, canaux pannexine) ou jonctions, (jonctions communicantes
connexine) pour aller agir sur des rcepteurs P2Y (coupl des protines G) des cellules de la
deuxime couche, soit passer directement travers les jonctions communicantes connexine
dans la deuxime couche de cellules. Dans la deuxime couche de la barrire, lATP (directement
ou via lactivation des rcepteurs P2Y) entrane une augmentation du calcium intracellulaire et une
scrtion subsquente dATP. Cet ATP provoque alors des lsions de l'ADN des fibroblastes
humains via leurs rcepteurs P2 (Bhabra G., 2009).
3. Effets secondaires
Ces effets sont lis linflammation, via des composs oxydants provenant notamment de
lendocytose et/ou de la phagocytose des nanoparticules. En effet, les nanoparticules peuvent
entraner du stress oxydant et des rponses inflammatoires qui peuvent galement induire
potentiellement des lsions de l'ADN (Singh N., 2009). Ces mcanismes indirects sont rsums
dans la figure ci-dessous :



Figure 16 : Mcanismes indirects qui peuvent conduire la gnotoxicit (daprs Singh N., 2009).

En plus de la toxicocintique et des effets gnotoxiques, lvaluation toxicologique des
nanoparticules devra porter une attention toute particulire aux organes cibles (le foie, les reins, le
systme nerveux central (SNC), les organes du tractus gastro-intestinal les poumons, la rate),
mais devra galement sintresser leur potentiel reprotoxique et immunotoxique. De faon plus
gnrale, le corpus de connaissances acqurir pour lvaluation est encore considrable.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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Des modles inappropris peuvent gnrer des rsultats non pertinents, non extrapolables au
vivant. En revanche, un modle cellulaire bien choisi (co-cultures, cellules primaires fonctionnelles
etc.) avec des conditions exprimentales dfinies et matrises, permettrait de mettre en vidence
des mcanismes d'action toxique spcifiques. Si lapparition de lsions oxydantes de l'ADN, de
facteurs d'inflammation, etc. tait relie aux effets observs, il conviendrait de dterminer sils sont
exclusifs ou non.
6.2.2 cotoxicologie
Les nanoparticules manufactures sont susceptibles de se retrouver dans tous les compartiments
physiques (air, eau, sols et terme sdiments) et/ou biologiques de lenvironnement.
Les voies dexposition des organismes aux nanoparticules diffrent selon les espces
considres. Les procaryotes comme les bactries pourraient se voir protgs contre lentre de
nanoparticules lintrieur de la cellule, puisque leur paroi cellulaire ne possde pas les
mcanismes de transport de particules collodales. Cependant, ladsorption des nanoparticules
la surface de la paroi de ces organismes nexclut pas des effets toxiques de ces particules. En
revanche, chez les eucaryotes, la situation est diffrente puisquils sont dots de mcanismes
dinternalisation (endocytose, phagocytose) de nano et micro particules (Moore M.N.,2006). Les
organismes aquatiques peuvent tre exposs aux nanoparticules par ingestion directe ou par leur
entre travers les cellules pithliales (ex. : la peau ou les branchies pour les poissons). Les
organismes du sol, comme les vers, sont galement exposs aux nanoparticules par contact direct
et/ou ingestion de particules du sol.
La destine environnementale et lcotoxicit des nanoparticules est influence par un grand
nombre de facteurs comme la taille des particules et leur distribution, la solubilit, ltat
dagrgation, la nature chimique ou minralogique, la cristallinit, la surface spcifique, la charge
de surface, la concentration (masse et nombre), la structure ou encore la prsence dimpurets
(Tiede K., 2009). Ainsi, certains travaux ont test linfluence de ces facteurs sur lcotoxicit des
nanoparticules. Depuis ces cinq dernires annes, lcotoxicologie des nanoparticules a reu une
attention croissante mais ces travaux ont t conduits presque exclusivement avec des
nanoparticules synthtises en laboratoire. De plus, les tudes concernant des expositions des
concentrations ralistes dun point de vue environnemental sont rares. Lune des raisons majeures
pour expliquer ce manque de donnes est la forte demande de tests sur des cellules, la difficult
de dtection et de quantification des nanoparticules manufactures dans des matrices complexes
comme les milieux aquatiques (eaux douces, marines, estuariennes), les sdiments et les sols.
Dans ces environnements, une multitude de substances complexantes sont prsentes, qui, non
seulement rendent la dtection et la quantification difficiles, mais affectent galement la mobilit et
les proprits de surface des nanoparticules, qui par voie de consquence conditionnent leur
transport et leur toxicit vis--vis des organismes. Il est donc indispensable dans les tudes de
toxicit de caractriser prcisment lexposition. Des revues rcentes de la littrature discutent des
techniques, actuellement disponibles, de dtection et quantification des nanoparticules dans
lenvironnement (Burleson D.J., 2004; Lead J.R., Wilkinson K.J.,2006; Oughton D.H., 2008).
Les effets directs de la toxicit des nanoparticules sur les organismes sont principalement dus
leur composition chimique et leur ractivit de surface. Cette ractivit de surface est due
limportance des atomes de la surface par rapport aux atomes du cur et des proprits
nano particulires (Auffan M.A., 2009). Les effets associs la taille nanomtrique sont les
suivants : augmentation du produit de solubilit par rapport au mme matriau lchelle supra
nanomtrique, libration dions toxiques (par exemple des mtaux) ou encore production
despces ractives de loxygne (ERO) associes des transferts dlectrons (paire lectron-
trou) extrmement rapides. De plus, les nanoparticules peuvent galement servir de vecteurs
dautres polluants, augmentant ou diminuant la biodisponibilit dautres substances toxiques ou
encore interagir avec des protines telles que des enzymes.
Les travaux de la littrature rapportent des effets cotoxicologiques varis des nanoparticules chez
diffrentes espces bactriennes, vgtales, animales, terrestres et/ou aquatiques. Par
lintermdiaire dexpositions dorganismes des nanoparticules en laboratoire, de tests (par
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 63
exemple des bioessais OCDE) dcotoxicit aigu, chronique et/ou sub-chronique, diffrents effets
critiques ont t mesurs : mortalit, inhibition de la croissance, impact sur le dveloppement et la
respiration, stress oxydant (augmentation des concentrations des biomarqueurs de stress
oxydants : catalase, Super Oxyde Dismutase, GST), etc.
Des effets positifs de lexposition des organismes des nanoparticules ont galement t
rapports dans la littrature. Par exemple, le dioxyde de titane (TiO
2
) sous sa forme nanomtrique
induit la germination et la croissance de certaines plantes (Zheng L., 2005). Ces effets positifs
pourraient tre dus aux proprits antimicrobiennes qui augmenteraient la rsistance des plantes
au stress. Certaines nanoparticules pourraient galement tre susceptibles de squestrer les
nutriments leur surface et servir ainsi de rservoir nourriture pour les organismes. Les
algues vivant dans des environnements extrmes prsentent la capacit daccumuler la surface
de leur paroi des lments minraux indispensables leur survie dans des milieux de faible
disponibilit alimentaire (Luetz-Meindl U., Luetz C.,2006). Ainsi, les nanoparticules contenant des
lments essentiels comme le cuivre ou le zinc semblent particulirement appropries pour
suppler un manque de nutriments.
6.3 Textile et argent
Largent est utilis pour la purification de l'eau, le traitement des plaies, dans les prothses
osseuses, la chirurgie orthopdique de reconstruction, des dispositifs cardiaques, des cathters et
des appareils mdicaux. Les progrs de la biotechnologie ont notamment permis lincorporation de
l'argent ionisable dans des textiles usage clinique afin de rduire le risque d'infections
nosocomiales ou pour l'hygine personnelle.

L'action antimicrobienne de l'argent ou des composs base d'argent apparat proportionnelle aux
ions argent monovalent bioactifs (Ag
+
) librs et leur disponibilit pour interagir avec les
membranes des cellules bactriennes ou fongiques. Largent mtal et les composs inorganiques
base dargent peuvent sioniser en prsence d'eau, de liquides corporels ou d'exsudats
tissulaires. Les ions argent sont alors biologiquement actifs et interagissent facilement avec les
protines, les rsidus d'acides amins, les anions libres et des rcepteurs membranaires des
cellules de mammifres et eucaryotes. La sensibilit des bactries (et probablement des
champignons) l'argent est corrle leur capacit dabsorption intracellulaire d'argent, qui est
susceptible dinteragir et de dnaturer de faon irrversible les principaux systmes enzymatiques.
Lintgration de nanoparticules dargent au sein de nombreux produits rpond essentiellement
une attente de proprits biocides. Ces nanoparticules sont employes pour des produits destins
des applications trs diverses (lectromnager
27
, ustensiles de cuisine
28
, informatique
29
, textiles
etc.), pour leur propension combattre le dveloppement des moisissures (anti-fongique) et des
bactries (anti-bactrien), en vue dune fonction anti-odeur ou anticontamination.

Les concentrations mises en jeu en fonction des diffrents usages peuvent varier en fonction des
producteurs et intgrateurs, cependant, les ordres de grandeur concerns communment admis
sont les suivants (daprs NanoForum Avril 2009 Confrence E.Gaffet) :
dsinfection de surfaces : 1 10 ppm ;
hygine corporelle (dsodorisants, savons liquides) : 5 8 ppm ;
hygine corporelle (savon solide) : 20 50 ppm ;
plastiques ponges et peinture : 20 200 ppm ;

27
Filtre daspirateurs, filtres de rfrigrateurs, machines laver, sche-cheveux,
28
Planches dcouper,
29
Tlphones mobiles, claviers dordinateurs,
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 64
rcipients clos : 20 50 ppm ;
serviettes imprgnes, toile de matelas, T-shirt: 5 10 ppm ;
chaussettes et chaussures : 20 40 ppm ;
murs et plafonds : 10 20 ppm ;
tapis et revtement de sol : 20 50 ppm ;
produits dentretien de sol : 1 5 ppm.

Pour le secteur particulier des textiles nano-argent destins la consommation courante, la
fonction anti-odeur sans traitement chimique constitue lapplication la plus revendique dans les
mentions commerciales. Quelques applications trs spcifiques disposant dune fonction anti-
contamination du tissu (i.e. : tissus destins aux grands brls) peuvent tre identifies, mais elles
demeurent assez marginales. La vue obtenue par microscope lectronique balayage (MEB)
prsente Figure 17 illustre lincorporation de nanoparticules dargent des fibres de coton.


Figure 17 : Vue par MEB de nanoparticules dargent intgres des chaussettes (Benn T.M.,
Westerhoff P.,2008).

6.3.1 Evaluation de lexposition
6.3.1.1 Caractrisation du produit slectionn
Le produit commercial slectionn pour ltude de cas est le produit dsign A . Il correspond
une paire de chaussettes commercialise par un producteur europen de textiles spcialis dans
les tissus incorporant du nano-argent. Les informations donnes ci-dessous concernant le produit
A ont t acquises par le groupe de travail par lintermdiaire du site internet du producteur. Le
groupe de travail ne dispose donc pas de donnes quant la caractrisation du nano-argent
prsent dans le produit A. Les proprits annonces du produit (anti-bactrien, antifongique et anti
levure) correspondent aux proprits attendues des nanoparticules dargent.
Ce produit est constitu, daprs le producteur, de 20 % dlasthanne et de 80 % de coton,
comportant 0,3 % (pourcentage massique) de nano-argent , intgr la fibre de coton.
Toujours daprs le producteur, les diamtres des particules de nano-argent seraient compris entre
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 65
25 et 250 nm. Les rsultats danalyse de largent intgr au produit, obtenus laide de 2
mthodes standards de lASTM
30
(D1348 et D3516), mentionns sur le site internet de vente de
larticle, indiquent une puret du nano-argent de lordre de 99,9 % ainsi que lexistence de
concentrations rsiduelles en mtaux lourds
31
.

Tableau 3 : Analyse des masses et concentrations massiques en nano-argent dans diffrents
chantillons de produits (daprs T.M Benn. et P.Westerhoff, 2008)
Echantillon
Masse d'argent
par masse de
produit
Masse
moyenne de la
chaussette
Masse totale de l'argent
dans l'chantillon
Masse cumule
d'argent mis aprs
4 lavages de 24 h
(:g / g) (g) (:g) (:g)
1a 25,8 29,3 756 836
1b 57,8 27,3 1 578 1 845
2 2,1 28,6 60 NR*
3 1 358,3 23,0 31 241 165
4 35,9 58,6 2 104 NR*
5 NR* 24,2 NR* NR*
6 0,9 21,9 20 19
* en dessous du seuil de dtection

Les travaux raliss par Benn et al. (Benn T.M. et Westerhoff P., 2008) sur 6 paires de
chaussettes comportant la mention commerciale nano-argent rapportent des masses de nano-
argent contenues dans ces articles comprises entre 20 et environ 30 000 Bg. Les concentrations
massiques sont donc comprises entre 1 et 1 400 Bg/g de chaussette (cf. Tableau 3). Une tude
plus rcente (Geranio L., 2009) portant plus largement sur des textiles incorporant des
nanoparticules dargent (dont des chaussettes anti-odeurs), a mis en parallle la teneur dargent
intgr au produit avec la technologie dincorporation de cette substance, sous forme
nanoparticulaire ou non, au sein du textile. La teneur maximale en argent a t constate pour des
chaussettes commercialises (21,6 mg/g), produit pour lequel largent nest en ralit pas sous
forme nanoparticulaire (couches dargent de plusieurs micromtres dpaisseur sur la fibre
obtenue par dposition lectrochimique). Pour des chaussettes, la concentration maximale
observe pour largent apparemment sous forme nanoparticulaire (nanoparticules intgres au
coton) est de 2,66 mg/g. Lexamen des 7 autres textiles modifis tudis a rvl des
concentrations sensiblement infrieures (de 3 390 Bg/g).

La proportion massique calcule partir des dclarations du producteur du produit slectionn,
dans le cadre de ce scnario, (0,3 % massique de nanoparticules dargent intgr aux fibres de
coton composant 80 % du produit) est la suivante :

80 % x 0,3 % = 0,24 % soit une concentration massique de 2,4 mg/g.


30
American Society for Testing Materials
31
Arsenic (< 0,06 ppm), cadmium (< 0,05 ppm), mercure (< 0,05 ppm) et plomb (0,3 ppm)
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 66
Cette concentration se situe donc au-del de la limite suprieure des teneurs nominales observes
dans les travaux de Benn et al., mais se montre tout fait cohrente avec la concentration
maximale en argent nanoparticulaire constate pour un produit commercial quivalent. Ce produit
savre donc tout fait adapt un scnario maximisant lexposition, tout en restant dans le cadre
de lusage pour lequel il est destin.

6.3.1.2 Dfinition du scnario dexposition pour lhomme
Le groupe de travail ne disposant ni de la caractrisation du nano-argent dans le produit A, ni de
donnes sur le relargage ou la consommation de ce produit, le scnario propos ici est bas sur
un ensemble dhypothses.
La co-exposition avec dautres substances ventuellement prsentes dans le produit A (dont des
traces dlments mtalliques) ou avec dautres produits qui seraient appliqus au niveau cutan
par le consommateur nest pas considr dans le scnario.
La seconde hypothse pose est que le consommateur ne sera en contact quavec des
nanoparticules dargent. En labsence de donnes complmentaires, lajout dune substance
organique lors du procd dintgration (qui permet de modifier les caractristiques des
nanoparticules dargent, dempcher lagrgation et la croissance ultrieure des particules au
moment de la prcipitation) nest pas considr.
Nous ne disposons pas de donnes quantitatives quant au relargage des particules dargent sous
forme de nanoparticules ou dions argent lors du lavage du produit A considr. Cependant, nous
disposons de donnes sur le relargage dautres produits quivalents. La dgradation du produit,
travers la diminution de la concentration de nano-argent, lors de son usage (manipulation et
lavage), fait aujourdhui lobjet de nombreux travaux (Benn T.M. et Westerhoff P., 2008; Blaser
S.A., 2008, Geranio L., 2009). Ces rsultats publis rendent notamment compte de la large
diversit des comportements des tissus modifis, et donc de lampleur de lincertitude introduite
par ce paramtre cl. Cependant, dans le double objectif de maximiser lexposition et de prendre
en compte le renouvellement de larticle par le consommateur, nous considrerons, pour
lexposition humaine, que la concentration en nano-argent dans la chaussette considre reste
inchange et correspond donc la concentration initiale.
De plus, nous ne considrons pas non plus les ventuelles interactions avec les dtergents utiliss
au cours du lavage.
Dautre part, les effets associs aux mcanismes de friction ou de sudation (modification des
proprits des nanoparticules en contact avec lorganisme) ne seront pas traits. Dune manire
gnrale, nous considrerons que le consommateur est expos la seule forme nanoparticulaire
de largent Ag
0
. Laspect complexe de loxydation de cette forme en argent ionique pour cette
utilisation ne sera donc pas abord dans cette partie.

Dans le cas de lutilisation de ces chaussettes de marque A1, nous ne considrerons que
lexposition cutane, qui est la voie dexposition principale, comme cela a t dtaill dans la
mthodologie. Cependant, il convient de mentionner quune mise en suspension des
nanoparticules dans latmosphre est probable lors de la manipulation du produit. Nous ne
disposons pas actuellement de donnes quantitatives suffisamment fiables (facteur dmission
dans latmosphre) qui permettraient de caractriser cette exposition de manire correcte.
Ainsi, tant donn ltat lacunaire des connaissances pour son tablissement, ce scnario na pas
la prtention daboutir une caractrisation fine de lexposition mais plutt un ordre de grandeur
des donnes reprsentatives de lexposition.

Dure et frquences dutilisation :
Afin de rendre compte dun scnario pire-cas , c'est--dire maximisant lexposition humaine,
associ une utilisation dite normale de ces chaussettes, nous considrerons par hypothse une
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utilisation quotidienne et continue (24 h sur 24, 7 jours sur 7, toute lanne, pendant la vie entire)
de ce produit.

En labsence de donnes sur les quantits totales dargent intgr au produit tudi, nous
estimerons ce paramtre partir de la concentration massique dargent dans le produit (2,4 mg/g).
La masse totale du produit ntant pas connue, nous nous reportons ltude cite ci-dessus
(Benn T.M. et Westerhoff P., 2008). Nous considrerons la masse la plus leve rfrence dans
le Tableau 3, soit 60 g. Suivant cette hypothse, la masse totale de nano-argent contenue par
chaussette est environ :
2,4 x 60 = 144.10
-3
g

Lagence de protection de lenvironnement des tats-Unis (US EPA) fournit des surfaces
moyennes de pieds adultes
32
: 0,122 mpour la femme adulte et 0,137 mpour lhomme adulte,
par pied. Pour indication, nous considrons lexposition une paire de chaussette par individu
consommateur (2 pieds). Toujours dans un souci de maximaliser lexposition, nous tiendrons
compte des donnes de plus faibles surfaces (et donc de concentrations surfaciques plus
leves). En considrant que lensemble des nanoparticules dargent disponibles dans le produit
est rparti uniformment en contact avec la peau, alors la concentration surfacique moyenne en
particules dargent est de :

(2 x 144.10
-3
) / (2 x 0,122) = 1,18 g.m
-2
pour une femme ;
(2 x 144.10
-3
) / (2 x 0,137) = 1,05 g.m
-2
pour un homme.

Malgr les nombreuses incertitudes lies ce scnario, nous pouvons considrer que lexposition
ou la probabilit dexposition du consommateur aux nanoparticules dargent ne peut pas tre
nglige.

6.3.1.3 Dfinition du scnario de dispersion environnementale
Lestimation des impacts environnementaux occasionns lors de lutilisation de ces nouveaux
textiles se confronte aux donnes peu nombreuses de la littrature se rapportant aux missions de
nanoparticules dargent par ce type de produit (Borm P.J., Berube D.,2008; Luoma S.N.,2008;
Nowack B.,2009). La quantification des missions en fonction des divers compartiments
environnementaux nest pas ralisable. Nanmoins, les rejets aqueux dargent intervenant durant
ltape de lavage de ces produits apparaissent aujourdhui comme la problmatique
environnementale majeure attache la mise sur le march de tels produits (Benn T.M. et
Westerhoff P., 2008 ; Geranio L., 2009).
Lautorit de scurit alimentaire dIrlande
33
(FSAI, 2008) estime que 15 % des missions d'argent
dans l'eau en Europe seront issues des plastiques "biocides" et des textiles en 2010. Cette mme
autorit irlandaise indique que, compte tenu de l'expansion du march des applications nano-
argent , la contribution de ce type d'mission deviendra substantielle. Sur ce point, la
concentration attendue en nanoparticule dargent dans les eaux a t value 0,03 Qg /l en se
basant sur ltude de lanalyse du cycle de vie des produits intgrant des nanoparticules dargent
dans leur composition (Mueller N.C., Nowack B.,2008).

32
US EPA Exposure Factor Handbook (US EPA,2000)
: http://cfpub.epa.gov/ncea/cfm/recordisplay.cfm?deid=209866
33
The relevance for Food Safety of Applications of Nanotechnology in the Food and Feed Industries - 2008
http://www.lenus.ie/hse/handle/10147/69382
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 68

Les quelques travaux mens sur ce sujet (Benn T.M. et Westerhoff P., 2008; Geranio L., 2009) et
les nombreuses dclarations commerciales suggrent de plus une large htrognit de
comportement des articles disponibles pour cette gamme de produits durant leur usage. Ainsi,
certains fabricants garantissent une prservation des proprits anti-odeurs pour des conditions
particulires dentretien (proprits garanties jusqu 20 lavages, sils sont effectus la main
des tempratures infrieures 30C) tandis que dautres affirment une persistance plus longue de
ces proprits pour des conditions dusage plus standards (proprits garanties jusqu 50 lavages
effectus en machine jusqu des tempratures de 60C). Il convient de souligner que ce dernier
produit ne contient pas de largent sous forme nanoparticulaire mais intgre des sels dargent. Cet
exemple vient complter la difficult rpondre de faon gnrique la question de lexposition
dun consommateur utilisant un produit revendiquant intgrer du nano-argent.
Des chercheurs ont test 9 textiles et ont trouv que le pourcentage total dargent perdu aprs
lavage variait de 1 % 45 %. Certaines particules ne sont en effet que faiblement attaches la
fibre, quand d'autres y sont intgres
34
.

Dans la pratique, les travaux de Benn et al. (Benn T.M. et Westerhoff P., 2008) confirment ces
carts de comportement (voir Tableau 3) et, ainsi, les incertitudes quils impliquent dans
lvaluation des impacts environnementaux. Il convient de souligner, comme les auteurs de ces
travaux, que la quantit dargent perdue par lavage nest pas corrle la quantit initialement
prsente. Dautres travaux
35
indiquent quaprs seulement 2 4 lavages, lensemble de largent
prsent avait t lessiv et tait prsent dans les eaux de lavage (produit contenant initialement un
maximum de 1 360 Jg dargent par gramme et rejetant prs de 650 Jg dargent dans 500 ml deau
distille). Enfin, point important, largent ainsi mis dans les eaux de lavage se prsente aussi bien
sous forme solide particulaire (Ag
0
) que sous forme ionique.

Les autres travaux ayant cherch caractriser laltration de ces textiles modifis soulignent
galement cette forte diversit de comportement observe entre les multiples produits tudis.
Parmi ces tudes, Geranio et al. soulignent le rle dominant de la contrainte mcanique dans le
phnomne daltration de ces produits (perte des nanoparticules dargent initialement intgres
aux fibres). Ainsi, pour un lavage reprsentatif dun cycle en machine laver (et non par simple
trempage comme dans les travaux de Benn et al.), la plupart de largent initialement intgr au
produit est retrouv en solution (Geranio L., 2009).

Pour construire un scnario dexposition de type pire cas , et maximiser les missions dargent
de telles chaussettes, nous considrerons que lensemble de largent initialement intgr au
produit (144 mg par chaussette) est au final libr dans leau de lavage. Comme soulign
prcdemment, largent libr par ces textiles dans les compartiments aqueux se prsente comme
un mlange dargent sous forme nanoparticulaire (Ag
0
mtallique) et dargent ionique, ceci
certainement en raison de la forte solubilit de largent nanoparticulaire.

Ne disposant pas de statistiques prcises concernant la consommation et lutilisation de ces
produits (frquence de lavage), nous poserons lhypothse raliste de lachat (et donc de la
consommation) de 10 paires de chaussettes nano-argent par consommateur et par an. La quantit
annuelle dargent disperse dans les eaux de lavage par consommateur est estime laide du
calcul simple suivant :


34
http://pubs.acs.org/cen/news/87/i40/8740notw6.html
35
http://www.up3project.org/documents/Silver%20washing%20out%20of%20nano-silver%20products.pdf
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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(144.10
-3
x 2) x 10 = 2,88 g / an / consommateur

En estimant de faon a priori maximaliste la part de march de ce produit 10 % en France, ces
rejets hydriques sexprimeraient de la manire suivante lchelle du territoire national
36
:

2,88.10
-6
x (65.10
6
x 10 %) = 18,72 t/an

6.3.2 Evaluation du danger
6.3.2.1 Danger pour lhomme
6.3.2.1.1 Profil toxicologique gnral du nanomatriau

Toxicit
Aucun essai de toxicit aigu et/ou chronique, de toxicocintique par voie cutane (voie
dexposition considre), nest disponible. ce jour, aucune dtermination de labsorption cutane
in vivo selon la ligne directrice OCDE 427 nest publie dans la littrature.
Deux publications valuant le potentiel de pntration de la peau par des nanoparticules dargent
in vitro par la mesure du flux transcutan ex vivo ont t identifies et analyses (Larese F.F.,
2009; Filon F.L., 2007). Les auteurs dclarent avoir dmontr pour la 1
re
fois que largent appliqu
sous forme de nanoparticules enrobes avec du polyvinylpirrolidone est capable de pntrer dans
la peau endommage dans un systme cellulaire de diffusion in vitro. Nanmoins, les rsultats
montrent que labsorption de nanoparticules dargent travers la peau intacte ou endommage est
dtectable mais trs faible, aprs une exposition cutane. Ces tudes ont utilis des fragments de
peau congels, ce qui pourrait entraner une sous-estimation de lexposition interne, cest--dire la
quantit de nanoparticules qui est rellement absorbe lors dune exposition externe et qui gagne
la circulation systmique et pourrait alors atteindre dautres organes.

Reprotoxicit :
Aucune donne sur le potentiel reprotoxique ou sur une ventuelle bioaccumulation dans le (ou
les) organe(s) cible(s) par exposition cutane nest disponible dans la littrature.

Gnotoxicit
Concernant lactivit gnotoxique, une seule tude est disponible dans la littrature; il sagit du test
du micronoyau in vivo sur moelle osseuse chez le rat ralis par voie orale. Ce test, qui a t
conduit selon la ligne directrice OCDE 471 et a suivi les recommandations de bonnes pratiques de
laboratoire, sest rvl ngatif avec une exposition systmique dmontre (Larese F.F., 2009;
Kim Y.S., 2008). En revanche, la forme chimique sous laquelle se prsente largent (Ag
0

nanoparticulaire ou argent ionique) na pas t dtermine.


36
On assimilera par approximation les consommateurs de ce produit de consommation courante aux
rsidents franais sur le territoire national, soit environ 65 millions dindividus (64 303 482 habitants au 1
er

janvier 2009 pour la France mtropolitaine et les DOM TOM daprs lINSEE :
http://www.insee.fr/fr/themes/detail.asp?reg_id=99&ref_id=bilan-demo&page=donnees-detaillees/bilan-
demo/pop_age2b.htm)

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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Si la gnotoxicit des nanoparticules dargent a t tudie in vitro par le test des comtes et dans
le test du micronoyau (Larese F.F., 2009; Asharani P.V., 2009), ces essais ont t effectus sur
des types cellulaires de diverses origines non reprsentatifs dune exposition cutane. Au cours de
ces essais, les nanoparticules dargent ont induit des lsions de lADN dpendantes de la dose
aussi bien dans le test des comtes (augmentation de la fragmentation de lADN) que dans le test
du micronoyau. Laugmentation significative de la fragmentation de lADN aprs traitement par des
nanoparticules dargent est rapporte galement par des mthodes non standard telles que la
mesure de la phosphorylation de la protine H2AX et le niveau de rgulation de la protine Rad5
qui indiquent directement ou indirectement la prsence de cassures double-brin de lADN.

Gnration dERO
Concernant la dtermination du potentiel de gnration despces ractives de loxygne ou de
lazote (ERO/ERA), linduction de stress oxydant et/ou de phnomnes inflammatoires, il apparat
clairement que les nanoparticules dargent induisent un stress oxydant in vitro qui contribue aux
modifications morphologiques cellulaires, au dysfonctionnement mitochondrial et laugmentation
de la gnration despces ractives de loxygne dune faon dose-dpendante, quelle que soit
leur taille (Larese F.F., 2009; Hussain S.M., 2005; Hsin Y.H., 2008; Carlson C., 2008; Arora S.,
2008; Arora S., 2009).
Les effets entrains par largent sous sa forme ionique (apoptose et/ou ncrose par arrt du cycle
cellulaire) sont galement constats avec largent sous sa forme nanoparticulaire. La prsence
clairement dmontre dagrgats lintrieur des mitochondries est implique dans la toxicit
mitochondriale et les lsions de lADN via la production despces ractives de loxygne (Arora
S., 2008 ; AshaRani P.V., 2009). Les nanoparticules dargent induisent donc des lsions
oxydatives dans la cellule par des mcanismes directs et peuvent galement induire des lsions
indirectes de lADN par formation despces ractives de loxygne lies des ractions
inflammatoires (Carlson C., 2008).
Il faut prciser que ces tudes ont utilis des cellules de diverses origines qui sont souvent loin
dtre reprsentatives dune exposition humaine, cutane de surcrot. Ces effets nont pas t
confirms in vivo sur le (ou les) organe(s) cible(s).

Discussion / Conclusion
Daprs les donnes publies, les nanoparticules dargent induisent une cytotoxicit par un
mcanisme qui semble identifi et principalement li au stress oxydant avec induction dapoptose
des doses faibles et de ncrose des concentrations leves, et qui pourrait tre attribu la
production despces ractives de loxygne.
Les rares tudes de gnotoxicit in vitro (tests des comtes et du micronoyau) dmontrent un
potentiel gnotoxique via des cassures double-brin de lADN des faibles concentrations au moins
dans le test des comtes (25 g/ml). A ce niveau de concentrations, la production despces
ractives de loxygne a t dmontre (Asharani P.V., 2009). Le rle des ERO dans la
gnotoxicit des nanoparticules dargent, provenant la fois des ions Ag
2+
et de ltat
nanoparticulaire, apparat comme tant probable.
En effet, daprs Asharani et al. (Asharani P.V., 2009), il est possible que loxydation de surface
des nanoparticules dargent, au moment du contact avec le milieu de culture ou des protines du
cytoplasme, libre des ions Ag
+
qui pourraient amplifier la rponse. Les ractions entre H
2
O
2
et les
nanoparticules dargent sont prsumes tre un des facteurs permettant la libration dAg
+
in vivo
(les ions H
+
tant prsents en abondance lintrieur des mitochondries dans lesquelles lefflux de
protons est lvnement principal dans la synthse dATP) :
2 Ag + H
2
O
2
+ 2H
+
2 Ag
+
+ 2H
2
O
Asharani et al. proposent un mcanisme possible de toxicit qui implique la perturbation de la
chane respiratoire mitochondriale par les nanoparticules dargent, conduisant la production
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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dERO et linterruption de la synthse dATP, entranant son tour des lsions de lADN et larrt
du cycle cellulaire (voir figure ci-dessous). Les auteurs prcisent que si de nombreux travaux ont
port sur largent, trs peu encore ont port sur son volet nano . De plus, les auteurs constatent
que ltude des voies et efficacits de pntration dans le corps reste faire pour le nano-argent,
et que, de faon plus gnrale, ltude de la transposition des connaissances micro lchelle
nano reste produire.
In vivo, le test du micronoyau sur moelle osseuse par voie orale chez le rat est clairement ngatif.
Plusieurs hypothses peuvent tre formules sur la diffrence des rsultats obtenus dans des
essais in vitro et in vivo :
fixation de largent aux protines qui diminue la biodisponibilit cellulaire ;
argent sous forme non particulaire in vivo ;
systme de protection des espces radicalaires efficace in vivo et dpass in vitro.


Figure 18 : Mcanisme possible de toxicit des nano-argent (Asharani P.V., 2009)

Concernant lexposition, mme si les rsultats de labsorption cutane sont plutt en faveur dun
accs trs faible la circulation systmique, un passage transcutan ne peut pas tre totalement
exclu. En termes dvaluation des dangers, il apparat donc prmatur de conclure, en raison du
caractre discutable et en nombre limit des donnes de gnotoxicit et dexposition. Mme si les
premires tudes sont en faveur dun risque systmique faible aprs exposition cutane pour une
peau saine, le manque de donnes empche de raliser une valuation du danger correcte
prenant galement en compte le risque local.
Comme le concluent galement Wijnhoven et al., ltude des voies et lefficacit de pntration
dans le corps restent documenter pour le nano-argent, ainsi que, de faon plus gnrale, ltude
de la transposition des connaissances micro lchelle nano (Wijnhoven S.W.P., 2009).
Afin dvaluer correctement lexposition, il faudrait donc pouvoir disposer dtudes
complmentaires, en particulier sur labsorption cutane :
in vitro sur des fragments de peau non congels en valuant galement le rsiduel dans
les cellules vivantes de peau, et/ou
in vivo avec caractrisation de largent (forme soluble ou nanoparticulaire).
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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Ces tudes dabsorption par voie cutane devraient mesurer, dans la circulation sanguine et dans
les ventuels organes cibles, le niveau dabsorption de nanoparticules dargent inchanges ainsi
que le taux dions Ag
+
librs partir des nanoparticules dargent. Si ces tudes de caractrisation
dmontraient que seules les nanoparticules dargent pntrent dans lorganisme, celles-ci
devraient tre considres comme une nouvelle entit. Concernant les organes cibles, une tude
de toxicit de 28 jours par voie orale a permis de mettre en vidence une augmentation
significative et dpendante de la dose de la concentration en argent dans tous les tissus analyss,
mais sans en connatre la forme (Kim Y.S., 2008). Aprs lestomac (exposition directe), les reins,
le foie et les poumons se sont rvls tre les organes les plus exposs. Le systme immunitaire
pourrait galement tre une autre cible des nanoparticules dargent (Wijnhoven S.W.P., 2009).
Dans tous les cas, si ces rsultats montraient une absorption importante, i.e. une dose interne
significative dans la circulation systmique, des tudes de toxicit (toxicit chronique, gnotoxicit,
etc.) seraient ncessaires pour tayer des conclusions. Paralllement, afin de dterminer un
mcanisme daction, des essais spcifiques pourraient tre raliss, comme par exemple le test
des comtes (qui sest rvl le plus sensible) sur le(s) organe(s) cible(s), avec et sans FpG
(dtection des lsions oxydatives de lADN) mais aussi le test du micronoyau, la dtermination de
la plodie, la dtermination du contenu en glutathion, lanalyse de la fonction mitochondriale, la
recherche des effets pro-inflammatoires (exemple : NF-b), des facteurs dinflammation (ex. :
dosage des cytokines tels que TNF-, IL6, MIP-1, , etc.), des enzymes anti-oxydantes
(ex. :catalase, SOD, GPX, etc.), etc.
Si labsorption se rvlait limite, il serait toutefois ncessaire dvaluer la gnotoxicit au niveau
de la peau en utilisant un systme dessai qui reprsente les cellules types de lorgane considr,
comme par exemple les modles dpidermes humains reconstitus.

6.3.2.1.2 Evaluation du danger nano spcifique du produit fini
Ne disposant pas de donnes spcifiques au produit tudi nous ne pouvons pas aujourdhui
conclure sur les dangers pour lHomme associs lutilisation de ce produit A.

6.3.2.2 Danger pour lenvironnement
6.3.2.2.1 Profil cotoxicologique gnral du nanomatriau
Les aspects cotoxicologiques des nanoparticules dargent vis--vis de diffrentes espces sont
prsents ci-dessous : vgtales, animales dorigine terrestre et/ou aquatique en milieu continental
ou marin, bactries.

Analyse par rapport au produit considr :
Il convient de mentionner quaucun des travaux cits ci-dessous na test lcotoxicit de
nanoparticules dargent contenues dans le produit fini considr. Il nexiste ce jour aucune base
de donnes sur les quantits de nanoparticules prsentes dans lenvironnement. De plus, dun
point de vue analytique, dans lenvironnement, il nest pas possible de distinguer les formes
dargent nanoparticulaires des autres, solubles par exemple (DEFRA,2009).

Donnes disponibles :
Une approche pour estimer les quantits potentielles de nanoparticules dans lenvironnement est
lutilisation de modles mathmatiques dcrits dans le manuel technique d'valuation du risque
chimique commun l'Union europenne (Technical Guidance Document
37
). Les concentrations en
nanoparticules dargent estimes (Predicted Environmental Concentrations ou concentrations

37
http://ecb.jrc.ec.europa.eu/tgd/
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 73
prvisibles dans lenvironnement), au moyen de ces modles, dans les compartiments aquatique
et sdimentaire seraient comprises entre 0,01 et 0,32 g / l ; 2 et 14 mg / kg, respectivement
(Blaser S.A., 2008 ; Tiede K., 2009). Les travaux de Yoon et al., (Yoon K.Y., 2007) ont montr
chez lespce Escherichia coli une plus faible concentration d'effets observs (LOEC) leve
(40 mg/l) en comparaison avec un certain nombre d'tudes plus rcentes. Mueller et Nowack
(Mueller N.C. et Nowack B., 2008) proposent un facteur de scurit de 1 000, ramenant la valeur
de la PNEC 40 g/l. L'tude de Luoma (Luoma, 2008) est en accord avec cette proposition
puisquelle a suggr que les concentrations de nanoparticules d'argent sont peu susceptibles
datteindre des valeurs suprieures 1 g/l quel que soit le compartiment de lenvironnement.
Toutefois, l'tude de Luoma citait des valeurs pour l'argent dissous, avec une LOEC 10 ng/l,
donc de plusieurs ordres de grandeur plus faible que dans ltude de Mueller et Nowack. Si l'on
considre (i) que toutes les nanoparticules d'argent modlises dans ltude de Mueller et Nowack
se retrouveront sous formes dargent dissous dans l'environnement, (ii) des valeurs de PEC
d'environ 80 ng/l, pouvant atteindre environ 1 g/l tel que dcrit par Mueller et Nowack et Luoma;
(iii) que 10 ng/l reprsente la valeur de la LOEC pour largent dissous, il est possible d'en conclure
des valeurs de PEC / PNEC > 1. Il existe bien sr des incertitudes dans ces calculs, en raison du
manque actuel de connaissances. Dans ce scnario, les nanoparticules d'argent elles-mmes
reprsentent un danger limit car elles se dissolvent rapidement, mais l'argent dissous engendre
des risques spcifiques qui peuvent tre estims en utilisant la procdure standard d'valuation
des risques. Un deuxime scnario pourrait tre le suivant : les nanoparticules d'argent ne se
dissolvent pas rapidement et dans ce cas, lvaluation des risques se trouve limite par les
incertitudes lies la forme nanoparticulaire de largent.
Il est bien connu que largent, sous la forme de cation soluble Ag
+
, est extrmement toxique vis--
vis des bactries notamment, do son utilisation en tant quagent bactricide. Il fait partie
galement des mtaux les plus toxiques vis--vis des plantes, des invertbrs ou encore des
poissons (Luoma, 2008).
Les nanoparticules dargent qui sont incorpores dans de nombreux produits industriels
(vtements, nourriture, plastiques, etc.) possdent aussi des proprits bactricides recherches.
Elles peuvent agir selon deux mcanismes principaux qui sont i) la formation dions super-oxydes
O
2
-
forms aprs adsorption de loxygne dissout sur les faces (100) et (111) (Akdim B., 2008), ii)
la drgulation des fonctions de transferts des ions Na
+
, H
+
, Ca
2+
, Cl
-
via la forme soluble Ag
+
.
Les tudes sur la toxicit de largent nanoparticulaire sont nombreuses. Elles concernent aussi
bien les souches bactriennes des milieux aqueux continentaux et marins, que des organismes
comme les nmatodes (Caenorhabditis elegans) ou les poissons (Zebrafish, Medaka, etc.). Des
travaux apparaissent sur des colonies bactriennes prsentes dans les milieux marins. Les
approches gnomiques se dveloppent, en particulier la gnomique fonctionnelle, afin de mieux
cerner les mcanismes mis en jeu. Certaines tudes tentent de discerner les effets de
nanoparticules dargent de celles de la forme cationique Ag
+
en quilibre, ainsi que les effets de la
complexation de largent en surface des nanoparticules ou de ladsorption sur les composs
biotiques comme les algues sur la biodisponibilit. Cet aspect est encore trs peu tudi malgr
lintrt vident quil prsente lorsque lon veut modliser la biodisponibilit dun contaminant dans
un milieu complexe (ex : modle BLM).
Compte tenu des spcificits des diffrentes cibles biologiques tudies en cotoxicologie,
lanalyse de la littrature est prsente, suivant cette logique, par organisme cible.

Plantes
Rcemment, Barrena et al. ont tudi les effets toxiques de quelques nanoparticules, en particulier
largent (2 nm), vis--vis des plantes (Cucumis sativus, Lactuca sativa) et des microorganismes.
Les tests de toxicit employs (test de germination, bioluminescence : Microtox system, test de
toxicit anarobie) ont rvl une toxicit faible nulle aux doses employes, jusqu 116 g/m
1

selon le test. Des effets gnotoxiques de nanoparticules dargent (< 100 nm) des concentrations
pouvant atteindre 100 mg/l (25 100 mg/l), ont t observs chez loignon Allium cepa. Vis--vis
des champignons, Kim et al. ont tudi lactivit anti-fongique et le mode daction des
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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nanoparticules dargent (3 nm) chez Candida albicans. Les rsultats suggrent que ces
nanoparticules dargent exerceraient leur activit anti-fongique en dsorganisant la membrane
cellulaire et en inhibant le processus de bourgeonnement normal, en raison de la destruction de
lintgrit membranaire (Barrena R., 2009; Kim Y.S., 2008; Kumari M., 2009).

Micro-organismes bactriens
Le stress oxydant comme mcanisme responsable de la toxicit des nanoparticules dargent a t
rapport chez des microorganismes (Choi O., 2008). Lanion super-oxyde gnr la surface des
nanoparticules d'argent ou lion Ag
+
issu de la dissolution partielle de nanoparticules dargent
pourraient tre responsables des activits bactricides (Pal S., 2007; Kim J.S., 2007). Hwang et al.
ont tudi le mode d'action toxique de ces nanoparticules en utilisant un groupe de bactries
recombinantes bioluminescentes (Hwang E.T., 2008). Outre le fait que la prsence de ces
nanoparticules conduit la production d'un radical super-oxyde, lorigine des dommages des
membranes cellulaires, une perturbation de la rgulation de lexcrtion des ions Na, Cl, etc. est
aussi observe, car les cations Ag
+
sont, au sein des corps cellulaires, fortement complexs aux
protines via des liaisons avec le soufre ou le phosphore. Vis--vis des souches sauvages
Escherichia coli, la toxicit est mesurable trs faible concentration. La survie est affecte dun
facteur 10
7
en 15 heures en prsence de 900 ppb
38
dargent. Une tude rcente (Blaser S.A.,
2008) value entre 2 et 20 ppb les concentrations maximales sans effet (HONEC) selon les formes
chimiques de largent. Les mcanismes sont associs lapparition de ruptures de la membrane
cytoplasmique et linteraction avec des fonctions S et P au sein des protines membranaires ou
de lADN (Su H.L., 2009). Ces altrations membranaires pourraient faciliter lentre de
nanoparticules lintrieur de la cellule. Chez E. coli et P. aeruginosa, une internalisation de
nanoparticules infrieures 10 nm a t montre (Morones J.R., 2005), laccumulation de ces
dernires conduisant des malformations cellulaires (Choi O., 2008). Nanmoins, aucune analyse
physique na montr que ces nanoparticules taient bien de largent mtallique Ag et non une
autre forme issue de la prcipitation des ions Ag
+
dans le corps cellulaire. Linhibition de la
nitrification de lion ammonium par des bactries nitrifiantes est plus importante en prsence de
nanoparticules dargent de tailles infrieures 10 nm quen prsence dions Ag
+
. Une corrlation a
t montre entre la production interne despces radicalaires de loxygne et linhibition de la
nitrification (Choi O., 2008).
Une tude unique, ralise partir dun polyamide imprgn de nanoparticules dargent, a montr
un important relargage dions Ag
+
dpendant de la taille des particules dargent et du temps. Des
effets anti-microbiens importants sur E. coli et Staphylococcus aureus ont t mesurs au bout de
28 jours (Kumar R., Mnstedt H.,2005).
Par ailleurs, le dveloppement de la rsistance bactrienne largent, au mme titre que leur
rsistance aux antibiotiques, doit tre pris en considration. A lheure actuelle, mme si les
mcanismes gntiques de la rsistance bactrienne largent ne sont pas encore compltement
lucids, en raison des nombreux mcanismes par lesquels largent affecte les bactries (Chopra
I.,2007), il est fort probable quune rsistance largent puisse se produire, long terme et des
doses sub-ltales de ce mtal (Brett D.W.,2006).

Algues
Navarro a ralis une tude comparative de la toxicit de largent sous forme nanoparticulaire
(10 200 nm, moyenne : 40 nm) ou sous forme dissoute (AgNO
3
) pour lalgue deau douce
Chlamydomonas reinhardtii (Navarro E., 2008). En prenant en compte la concentration totale
dargent, les rsultats ont montr que la toxicit (EC 50) tait 18 fois plus importante pour AgNO
3

que pour les nanoparticules dargent. Dans le milieu exprimental, aucune agrgation des
nanoparticules na t observe par microscopie lectronique transmission. Toutefois, lion Ag
+


38
part per billion, cest--dire, en franais, partie par milliards
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 75
mesur dans les suspensions de nanoparticules dargent ne pouvait pas lui seul expliquer la
toxicit observe. Seulement 1 % de largent (Ag
0
) constituant les nanoparticules a t oxyd en
ion Ag
+
, libr dans le milieu. Estime en fonction de la concentration en ions Ag
+
dans le milieu
exprimental, la toxicit observe avec la suspension de nanoparticules dargent tait bien plus
leve en comparaison de celle obtenue avec AgNO
3
. Ces rsultats suggrent limportance des
interactions entre ces nanoparticules dargent et les cellules algales. Inversement, pour lalgue
marine (Thalassiosira weisflogii), la toxicit des nanoparticules dargent (60 - 70 nm) serait due la
forme ionique de largent (Miao A.J., 2009).

Poissons
Pour le poisson japonais Mdaka (Oryzias latipes), Chae et al. (Chae Y.J., 2009) ont montr une
expression diffrentielle des gnes, induite en rponse une exposition en laboratoire des
poissons des nanoparticules dargent (49,6 nm, surface : 50,71 nm
2
, de forme polydrique) ou
largent sous forme ionique. Les rsultats ont clairement mis en vidence que les nanoparticules
dargent (1 et 25 g/l) conduisent des dommages des cellules et de lADN ainsi qu un stress
oxydant, les gnes impliqus dans les processus de dtoxification mtallique et de rgulation du
mtabolisme tant galement induits. En ce qui concerne les ions argent, ils sont responsables
dune induction de la rponse inflammatoire et des processus de dtoxification mtallique
hpatique chez les poissons exposs. Cependant, dune manire gnrale, ces rponses au
stress sont plus faibles que celles induites par les nanoparticules dargent.
Avec des embryons dun autre poisson modle, le poisson-zbre (Danio rerio), Asharani et al.
(Asharani P.V., 2009) ont montr une relation dpendante de la dose (5 100 g/ml) de la toxicit
(par exemple : taux de mortalit, retard dclosion) de nanoparticules dargent (5 20 nm). La
concentration ltale moyenne vis--vis des organismes dpendant du stade de croissance des
embryons exposs aux nanoparticules variait de 25 50 g/m
l
, les derniers stades de
dveloppement tant plus rsistants lexposition aux nanoparticules. Cette toxicit serait
spcifique aux nanoparticules dAg et non lion Ag
+
, puisque lexposition des embryons
diffrentes concentrations dAg
+
(2,5 20 nM) na engendr aucune anomalie dans leur
dveloppement. Les images en microscopie lectronique transmission ont montr que les
nanoparticules dargent taient distribues dans le cerveau, le cur, le vitellus et le sang des
embryons. Les vitesses de diffusion passive et daccumulation des nanoparticules dans les
embryons seraient probablement responsables des anomalies dtectes dpendantes des doses
dexposition. Bar-Ilan et Lee (Bar-Ilan O., 2009; Lee S.W., 2009) ont compar la toxicit de
nanoparticules dargent ou dor de diffrentes tailles (3, 10, 50 et 100 nm) vis--vis dembryons de
ce poisson modle (Danio rerio). La toxicit de largent estime en taux de mortalit est plus
importante que pour lor. De plus, alors que les nanoparticules dor induisent des effets toxiques
subltaux minimes, lexposition aux nanoparticules dargent gnre une varit de malformations
morphologiques embryonnaires. La toxicit des nanoparticules dargent serait dpendante de la
taille, certaines concentrations, et ce pour certains temps dexposition.
En revanche, des corrlations ont aussi t montres entre la concentration des ions Ag
+
dissous
en quilibre avec des nanoparticules dargent recouvertes de PVP
39
vis--vis du poisson Fundulus
Heteroclitus dont la mortalit embryonnaire suit la courbe de solubilit de largent particulaire en
fonction de la salinit.
Par contre, cette corrlation est moins vidente dans le cas de particules nanomtriques dargent
recouvertes de gomme arabique (Auffan M. ., 2009 ; Matson C.W. et Auffan M., 2009).

Nmatodes
Des travaux trs rcents et en cours de lUniversit de Duke (Auffan M. ., 2009) semblent
corrler la concentration en ions Ag
+
en quilibre avec les nanoparticules dargent recouvertes de

39
Poly vinyl pyrrolidone
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 76
molcules de PVP et la croissance du nmatode C.elegans sauvage ou de la souche mute Mtl2
sensible aux mtaux.
Limpact de ces nanoparticules (14 - 20 nm) sur la survie, la croissance et la reproduction dun
nmatode du sol (C. elegans) a rcemment t tudi (Roh J.y., 2009). Les rsultats ont montr
une diminution du pouvoir reproducteur associ un stress oxydant.

Milieux complexes
Enfin, dun point de vue de limpact environnemental des nanoparticules dargent, compte tenu de
leur effet bactricide, la destruction de bactries vitales importantes dans le fonctionnement et
lquilibre des cosystmes (dgradation de matire organique, transformation, recyclage de
nutriments) mais aussi du fonctionnement des boues actives des stations dpuration des eaux
uses est fortement redoute. Rcemment, Bradford et al. (Bradford A., 2009) ont tudi limpact
de nanoparticules dargent (< 100 nm) sur la diversit gntique dassemblages bactriens de
sdiments estuariens. Les rsultats nont pas mis en vidence de modifications significatives dans
la diversit gntique des bactries issues des sdiments naturels contamins en laboratoire
pendant 30 jours aux nanoparticules dargent (0, 25, 1 000 g/l).
Ces rsultats sont corrler avec le travail de G.K Bielmyer (Bielmyer G.K., 2008) qui indique que
les ions Cl
-
protgent peu contre la toxicit du cation Ag
+
vis--vis de la truite arc-en-ciel
(Oncorhychus mykiss). Au contraire, Nichols et al. (Nichols J.W., 2006) montrent que la
complexation de Ag
+
avec les ions chlorure Cl
-
diminuerait la biodisponibilit des ions Ag
+
dans les
branchies du Toad fish . Par contre la complexation de lion argent des matires organiques
naturelles extraites de la Suwannee river ne semblait pas modifier sa biodisponibilit.
De plus, il est bien connu que les populations bactriennes environnementales se composent dun
grand nombre de souches rsistantes aux antibiotiques. Bien que cette rsistance soit grandement
lie au relargage dans lenvironnement dantibiotiques issus dactivits agricoles et/ou humaines
(Aarestrup F.M., 2000; Goni-Urriza M., 2000), dautres facteurs comme les mtaux lourds (Berg J.,
2005; Wright M.S., 2006) peuvent galement augmenter cette rsistance aux antibiotiques. Une
tude rcente (Mhling M., 2009) a estim le lien potentiel entre des nanoparticules dargent et le
dveloppement de cette rsistance aux antibiotiques. Les rsultats ont montr que les
nanoparticules dargent ninduisaient pas daugmentation de la rsistance aux antibiotiques de
bactries naturellement prsentes dans des sdiments estuariens. Les multiples facteurs
abiotiques prsents dans ces environnements, la salinit notamment, pourraient diminuer lactivit
antibactrienne des nanoparticules dargent (Lok C.N., 2007). Des tudes complmentaires sur le
comportement des nanoparticules dans lenvironnement et sur leur biodisponibilit savrent
indispensables quant lestimation des consquences environnementales potentielles de
lutilisation de nanoparticules dargent et de nanoparticules en gnral dans les produits finis.

Conclusion
Dune manire gnrale, la lumire des travaux publis, il est extrmement difficile de prdire les
impacts environnementaux des nanoparticules dargent. Pourtant, largent nanoparticulaire
intervient dans plus dun quart des nano-produits existants sur le march. Curieusement, largent
nanoparticulaire na pas fait lobjet dtudes importantes en France. Les rsultats contradictoires
quant leffet toxique montrent que les interactions entre les nanoparticules dargent ou encore les
ions Ag
+
en quilibre et leurs complexes minraux (SO
4
, Cl
-
, HPO
4
2-
, etc.) ou organo-minraux
(matires organiques dissoutes, ou particulaires) jouent un rle dans la biodisponibilit, mais les
mcanismes ractionnels concerns ne sont pas encore totalement lucids. Leur comprhension
savre cependant fondamentale la conception dune modlisation correcte de la biodisponibilit.
Les recherches futures doivent imprativement utiliser des temps dexposition plus longs et des
doses ralistes sur le plan environnemental dans des micro ou msocosmes, en corrlant les
interactions des nanoparticules avec les composants du milieu, leurs transformations (dissolution,
oxydo-rduction, complexation, etc.) et leur biodisponibilit (concentration de matire disponible
pour les espces vivantes prsentes). Les tudes de toxicit doivent comprendre les mcanismes
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 77
en sattachant analyser aussi bien les aspects gnomiques que la diversit des populations ou
assemblages, la croissance et la fcondit.
6.3.2.2.2 Evaluation du danger nano spcifique du produit fini
Aucune donne spcifique nest disponible pour le produit A.
6.3.3 Evaluation du risque
6.3.3.1 Discussion des rsultats
Cette tude montre que lexposition aux nanoparticules dargent contenues dans le produit A
considr ne peut pas tre nglige, de mme que le danger associ que ce soit pour lHomme ou
lenvironnement.

Nanmoins, compte tenu de :
la difficult dtablir des scnarios ralistes pour lHomme et lenvironnement (co-exposition
non considre, nombreuses hypothses poses, comportement du produit non connu,
etc.) ;
labsence de donnes spcifiques au produit tudi A (caractrisation, donnes
toxicologiques, cotoxicologiques, etc.),
le groupe de travail na pu raliser une valuation des risques proprement parler pour le produit
A. Ainsi, en labsence dvaluation, le risque ne peut pas tre exclu.

6.3.3.2 Discussion et identification des incertitudes
La caractrisation du produit A est mal connue. Ainsi, il existe de nombreuses incertitudes sur la
ou les formes chimiques auxquelles lhomme et lenvironnement sont exposs (forme ionique,
mtallique, etc.) ainsi que sur le comportement de largent.

Scnario homme :
En labsence dtudes (co) toxicologiques spcifiques au produit A, lidentification des dangers a
t ralise sur la base dtudes gnriques (nanoparticules dargent non spcifiques au produit
A).
Les seules donnes disponibles (deux tudes in vitro) ne permettent pas dexclure le passage
transcutan chez lhomme. De plus, les tudes de toxicit chronique et des tudes standards de
gnotoxicit, de reprotoxicit, etc. font dfaut pour caractriser lexposition par voie cutane.
Les proprits biocides du nano-argent contenu dans le produit, devraient tre considres pour
lvaluation des risques. Cette remarque est galement valable pour lenvironnement.
Ce produit de consommation tant destin une large diffusion, il apparat ncessaire de porter
une attention particulire aux populations dites sensibles.

Scnario environnement :
La considration dtudes gnriques sur des nanoparticules de synthse (et non sur le produit
tudi) rend prilleuse la transposition des conclusions au produit A tudi.
De plus, la comprhension des mcanismes est un stade trs prcoce et les conclusions de ces
tudes sont susceptibles de se modifier au fur et mesure que l'information devient disponible.


Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 78
6.3.3.3 Conclusion
Pour le produit A considr
Pour lhomme et lenvironnement, si le risque li lutilisation du produit A ne peut pas tre estim,
il ne peut pas tre exclu.
Pour le cas gnral des nano-argent
Compte tenu :
du nombre en constante augmentation de produits de consommation intgrant des
nanoparticules dargent ;
de la diversit de lexposition ;
et du danger avr chez certaines espces.

largent utilis sous ses diffrentes formes chimiques constituera certainement un risque pour
lenvironnement, mme sil nest pas mesurable actuellement.
6.4 Ciments et dioxyde de titane
La photocatalyse est gnralement dcrite comme une raction photo-chimique et catalytique qui
a lieu en surface dun solide, principalement un semi-conducteur (Fujishima A., 1999; Pelizzetti E. ,
Serpone N.1986; Serpone N. , Pelizzetti E.1989). Le terme photo-chimique signifie que cette
raction na lieu quen prsence de lumire et le terme catalytique indique que le catalyseur (le
solide) est rgnr. Cette raction est initie par la transition dun lectron depuis la bande de
valence (BV) vers la bande de conduction (BC) sous leffet dun rayon lumineux possdant une
nergie h suprieure ou gale la diffrence dnergie entre les deux bandes.


Figure 19 : Cration de la paire lectron / trou suite lirradiation par un faisceau lumineux
dnergie (h) suprieure ou gale la diffrence entre lnergie de la bande de conduction (Ec) et la
bande de valence (Ev).

En surface, les lectrons et les trous disponibles peuvent ragir avec des espces accepteuses et
donneuses pour former des radicaux. Deux ractions auront lieu : une raction doxydation lie au
trou photognr et une raction de rduction lie llectron photo-gnr. Diffrentes espces
oxydantes appeles ERO peuvent donc apparatre, comme le montrent les quations ci-aprs en
milieu aqueux.

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 79

Figure 20 : ractions doxydation et de rduction pouvant avoir lieu en surface de TiO
2

La paire lectron/trou peut ragir avec i) soit des oxygnes terminaux faisant partie du solide, ii)
soit avec des composs externes adsorbs (molcules deau ou composs organiques).

Effet de la taille
Les premires tudes menes dans les annes 1960 ont montr que lactivit photocatalytique
dpendait de la nature minralogique du solide. Kato et Mashio ont indiqu que lactivit
photocatalytique de lanatase pour oxyder des hydrocarbures et des alcools tait suprieure celle
du rutile (Kato S. et Mashio F., 1964).
Or, la stabilit des trois formes du TiO
2
(anatase, brookite, rutile) dpend de la taille (Ranade M.R.,
2002; Zhang H., Banfield J.F.,2000). Il a t rcemment montr que le rutile est la phase la plus
stable thermodynamiquement pour des particules suprieures 35 nm, lanatase pour des tailles
infrieures 11 nm, alors que la brookite se trouve tre la plus stable dans la gamme de taille
intermdiaire. La raison exacte de cette diffrence nest pas totalement lucide mais doit
certainement tre relie la nature des faces cristallographiques exposes. Outre cet effet indirect
de la taille, plusieurs auteurs (Almquist C.B., Biswas P.,2002; Wang C.B., Zhang W.x.,1997) ont
montr quil existait un optimum de taille pour la photo-oxydation de substrats organiques pour un
mme polymorphe. Almquist et Biwas (2002) ont dfini cet optimum entre 25 et 40 nm alors que
Wang et al. (1997) situent cet optimum aux alentours de 11 nm. Les auteurs considrent quil
existe des effets sopposant entre une surface spcifique importante lorsque la taille diminue et
donc une plus grande quantit de molcules adsorbes, et une plus grande proximit des paires
lectrons - trous aboutissant un taux de recombinaison lev avant toute raction de surface.
Lnergie de transition de bande dfinie ci-dessus (Ec Ev = Eb) peut aussi tre affecte par la
modification de taille des photo-catalyseurs (Almquist C.B. et Biswas P., 2002; Linsebigler L.,
1995; Nozik J.A., 1993). Ceci a t montr exprimentalement plusieurs reprises dans le cas de
diffrents matriaux, comme par exemple lanatase, o la valeur de Ec varie de 3,2 3,5 eV pour
des particules infrieures 12-16 nm. Une augmentation de lnergie Ec a pour consquence
daugmenter la ractivit photo-catalytique en augmentant le potentiel doxydo-rduction qui est le
paramtre cl du transfert dlectron.

Les ciments contenant du dioxyde de titane TiO
2
lchelle nanomtrique (nano-ciments) sont
proposs pour des applications dans les btons, mortiers et coulis lorsqu'un utilisateur souhaite
profiter d'un effet autonettoyant en surface ou encore dassainissement atmosphrique.
Lincorporation de ces adjuvants nanomtriques sous la forme cristalline anatase apporte en effet
des proprits photocatalytiques permettant la formation de substances trs oxydantes capables
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 80
de dcomposer une large varit de matires organiques et inorganiques. Le ciment acquiert ainsi
des capacits autonettoyantes dintrt pour la maintenance et la durabilit des btiments ainsi
que des capacits de dpollution de lair en contact. La nature photocatalytique de ces effets,
acclrant le lent processus doxydation des polluants, implique un contact direct de la couche
contenant le nano-ciment avec lextrieur (exposition la lumire UV) pour pleinement profiter de
l'effet nano-photo-catalytique dsir.

Cette application particulire aux matriaux de construction est directement issue du projet
europen PICADA
40
dont lobjectif tait prcisment la mise au point dun revtement de faade
pour les btiments prsentant des proprits dauto nettoyage et de dpollution de lair. Initi au
dbut des annes 1990 dans le cadre du cinquime PCRD, ce projet a rassembl quatre
partenaires industriels, deux centres techniques (en charge de lvaluation des performances
techniques des produits raliss) et deux laboratoires universitaires (en charge de la modlisation
des approches exprimentales). On notera que ces travaux ont essentiellement t ports sur
lvaluation des performances techniques et environnementales (relatives aux cahiers des charges
et normes en vigueur pour ce secteur) de ces nouveaux matriaux, la question des risques
sanitaires ou environnementaux spcifiques au caractre dimensionnel nano du dioxyde de
titane intgr au produit ntant pas alors encore aborde de manire explicite.
6.4.1 Evaluation de lexposition
Le produit commercial slectionn pour ltude de cas est le produit B. Il correspond du ciment
contenant des nanoparticules de dioxyde de titane (TiO
2
). Le groupe de travail, ne disposant pas
de donnes quant la caractrisation des nanoparticules de TiO
2
prsentes dans le produit B, a
pos lhypothse que le dioxyde de titane prsent dans le produit se prsente principalement sous
forme cristalline anatase (brevet du produit B concern). Par ailleurs, les dimensions
nanomtriques ne sont pas connues.

Afin didentifier correctement les produits contenant ces ciments modifis et les applications
associes, une analyse dtaille de leurs utilisations a fait lobjet dune tape prliminaire. Les
scnarios prsents ci-dessous, considrs comme raisonnablement envisageables, ont t
retenus au cours de cette analyse.
Dans la suite de ce document, nous prsentons les scnarios d'exposition ce produit les plus
probables pour un mode dutilisation dit normal , cest--dire conforme aux prescriptions
demploi, et ceci diffrentes tapes de son cycle de vie. Ils concernent tous des applications de
ciments sur des surfaces comme des murs ou des chausses. Selon la mthodologie mise en
uvre par le groupe de travail, la voie majoritaire dexposition considre pour lensemble des
scnarios est la voie respiratoire. Lingestion accidentelle de ciment ainsi que lexposition par voie
cutane lors de la manipulation des ciments ne seront donc pas tudies.

La littrature disponible relative aux flux et volumes de nano-ciments produits ou utiliss savre
trs limite. Ainsi, pour ltablissement des scnarios suivants, ne disposant pas de donnes
spcifiques au produit B considr, il sera considr une teneur de 0,3 10 % en masse de TiO
2

nanostructur dans le ciment (Pepe C., 2004).

Dans lair, les forces de diffusion des nanoparticules sont considres comme plus importantes
que celles observes pour les particules de tailles suprananomtriques et expliquent des
comportements qui se rapprochent de celui dun gaz ou dune vapeur. Ceci les diffrencie des
particules plus grosses pour lesquelles les forces inertielles tendent dominer. La taille des

40
http://www.picada-project.com/domino/SitePicada/Picada.nsf?OpenDataBase

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 81
particules doit absolument tre considre pour lvaluation de lexposition. La vitesse laquelle
les particules diffusent dans lair est dtermine par leur coefficient de diffusion qui est
inversement proportionnel leur taille. Les nanoparticules diffuseront beaucoup plus rapidement
que celles dont lchelle est de lordre du micromtre. Ainsi, des nanoparticules ne resteront pas
localises dans la zone dmission ; elles diffuseront rapidement et pourront se retrouver une
grande distance dune source et potentiellement exposer plusieurs individus localiss distance
de la zone dmission. De plus, les particules dun arosol subiront une multitude de collisions qui
conduiront leur agglomration ou coagulation et une augmentation de leur diamtre modifiant
en consquence les paramtres de diffusion de larosol. La vitesse laquelle les particules
sagglomrent dpend de leur concentration en nombre et de leur mobilit. La coagulation de
nanoparticules conduira rapidement la formation de plus grandes particules en concentration
plus faible et qui persisteront plus longtemps parce que leur mobilit sera rduite. Par ailleurs, la
plupart des nanoparticules une fois agrges ou agglomres sous la forme de poudre ne seront
pas faciles dissocier ou re-suspendre dans lair.

Cest pourquoi lextrapolation partir des donnes sur des particules plus grosses pour valuer le
devenir des nanoparticules de TiO
2
pourrait manquer de pertinence. Ne disposant pas des
caractristiques des nanoparticules de TiO
2
dans le produit B considr (taille, surface spcifique,
fonctionnalisation, tat des nanoparticules de TiO
2
dans le ciment, surface nanostructure
conserve si formation dagglomrats, etc.), il est trs difficile de prvoir leur comportement.
De plus, les co-expositions et interactions potentielles avec dautres particules prsentes dans lair
(pollution atmosphrique, autres particules gnres lors des travaux de voirie ou de btiment) ne
seront pas prises en compte, bien quelles puissent influencer le devenir des nanoparticules de
TiO
2
. La gnration dautres composs par photocatalyse ne sera pas non plus considre dans
lanalyse.
6.4.1.1 Dfinition de scnarios dexposition pour lhomme
6.4.1.1.1 Ciments dans leur forme poudreuse

Scnario dexposition li lutilisation de ciment
Demplois principalement destins aux travaux publics et la ralisation de btiments
41
, les
ciments se restreignent gographiquement presque essentiellement aux zones de construction
dont les accs sont usuellement limits pour la population gnrale. Lexposition ces produits
durant leur usage savre une problmatique concernant presque essentiellement le cadre
professionnel. Par consquent, la population gnrale nest en principe que peu expose au
ciment durant son utilisation.
Nanmoins, lors des travaux de voirie ou de btiment, il peut arriver que le passage proximit de
zones de construction gnre des situations dexposition par lenvol de ciment. Le fait de
considrer lexposition pour ce scnario est fond sur lhypothse dune rpartition suffisamment
large de lutilisation de ce produit pour justifier la possibilit dune relle exposition de la population
gnrale. Etant donn le manque de donnes et les incertitudes sur le devenir des nanoparticules,
voire des agglomrats de nanoparticules de TiO
2
aprs leur mission dans latmosphre, le
scnario selon lequel la population gnrale serait expose travers la dispersion
environnementale durant la ralisation de ce type de travaux na pu tre tudi.
A linverse du scnario prcdent impliquant la population gnrale expose via le passage
proximit de zones de construction, pour lequel lexposition savre moins probable, les modalits
dexposition pour un scnario correspondant un bricoleur utilisant du nanociment contenant des
nanoparticules de TiO
2
sont mieux dfinies. Le bricoleur pourrait tre facilement expos chaque
tape de manipulation du ciment (dballage des sacs de ciment, utilisation dun mlangeur, etc.).

41
http://www.infociments.fr/publications/industrie-cimentiere/rapports-activite/ra-g03-2008
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 82
En raison de l'absence de donnes disponibles spcifiques ce cas, lexposition du bricoleur
pourra tre assimile celle du travailleur dans un cadre professionnel pour ce qui est de
lamplitude de lexposition. De plus, le bricoleur dispose rarement des mmes moyens et
connaissances quant sa protection, ce qui pourrait favoriser une exposition accrue. Etant donn
la proximit du sujet expos la source dmission et donc le faible laps de temps entre ltape de
libration des nanoparticules entranes par la manipulation du produit et lexposition possible, on
considrera par hypothse que le sujet est effectivement expos des nanoparticules de dioxyde
de titane, les phnomnes classiques de dispersion/agglomration des particules pouvant tre
moindres. Cependant, le groupe de travail ne disposant pas de donnes pertinentes sur des
travailleurs, aucune estimation na pu tre ralise.

6.4.1.1.2 Produits contenant du ciment
Les applications de nano-ciments se trouvent avant tout dans des btons, mortiers, coulis et
briques utiliss pour la construction de murs et le revtement de surfaces paves. Les expositions
ces produits peuvent tre discrimines suivant plusieurs critres, parmi lesquels :
groupe de consommateur (utilisateur et bricoleur) ;
objet d'utilisation (murs et sol) ;
occasion de libration (usure quotidienne, travaux, dconstruction).

Concernant les missions dans latmosphre de nanoparticules de dioxyde de titane, entranes
par lusure quotidienne de constructions habitables base de ciments en contenant, celles-ci sont
usuellement considres faibles, cela dautant plus que la fonction photocatalytique recherche
doit tre normalement conserve pour une dure suprieure 10 annes (Nanoforum Novembre
2007). Lexposition une atmosphre dun environnement urbain constitu dune multitude de
constructions bnficiant de cette technologie suscite nanmoins une interrogation lgitime,
lexposition de la population un tel environnement se posant comme une question de sant
publique. Cependant, en raison des trop fortes incertitudes et inconnues associes un tel
scnario (configuration urbaine suppose, comportement de ces substances nanoparticulaires
dans latmosphre long terme non connu, etc.), ces expositions ne seront pas examines dans
cette tude.
Parmi les scnarios retenus, nous distinguons 3 cas :
exposition lie lusure des routes construites partir de ciments TiO
2
(produit B) ;
exposition lie la ralisation de travaux dans des btiments construits base de TiO
2

(produit B) ;
exposition du bricoleur suite des travaux sur des produits contenant le produit B.

Exposition lie lusure des routes
Dans le cas dutilisation de briques ou de bton de nano-ciment pour des routes empruntes par
des voitures, lusure de revtement durant lhiver pourrait constituer une part significative de
lexposition de la population gnrale aux mtaux lourds contenus dans le revtement routier
(Lindgren A.,1996). Nanmoins, lusure est fortement dpendante des conditions dusage. Ainsi,
elle serait par exemple considrablement augmente si les voitures taient quipes de chanes
neige ou de pneus clouts comme elles le sont plus rgulirement en Europe du Nord.
A titre indicatif, plusieurs tudes ont examin les concentrations de mtaux lourds dans des
particules fines (Hueglin C., 2005; Riediker M., 2003), et les concentrations de titane li des
particules fines (PM
2,5
) sont habituellement considres comme faibles (Tableau 4).

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 83
Tableau 4 Concentrations de titane (Ti lmentaire) dans des poussires fines (PM
2.5
) prleves
lintrieur des voitures, ct des routes et dans un site urbain loin des routes. Les chiffres sont
indiqu en nano-grammes par mtre-cube (ng/m
3
, 1 g = 1000 ng) (Riediker M., 2003).
Intrieur des voitures Site urbain loin des routes ct des routes
moyenne cart-
type
min max moyenne cart-
type
min max moyenne cart-
type
min Max
10,4 9,2 0,0 40,4 7,0 5,7 0,0 18,5 10,3 6,5 2,1 29,4

Exposition du bricoleur suite des travaux sur des produits contenant le produit B
Concernant la frquence et la dure dexposition, nous considrerons que, pour la majorit des
bricoleurs, lactivit de bricolage justifiant lexposition nest que ponctuelle donc aigu. De la mme
faon, tant donn la proximit du sujet expos la source dmission et donc le faible laps de
temps entre ltape de libration des nanoparticules entranes par la manipulation du produit et
lexposition possible, on considrera par hypothse que le sujet est effectivement expos des
nanoparticules de dioxyde de titane, les phnomnes classiques de dispersion/dagglomration
des particules pouvant tre moindres. Pour estimer le niveau dexposition dans le cas du bricoleur,
nous pouvons employer des valeurs d'exposition professionnelles aux poussires de bton
connues pour les lieux de travail (Chisholm J.,1999; Linch K.D.,2002) en considrant galement
lhypothse raliste selon laquelle, le plus souvent, les bricoleurs ne disposent que de peu de
connaissances sur les mesures de protection. Ces valeurs restent nanmoins trs incertaines et
ne doivent pas tre considres comme une estimation fiable de lexposition.

Tableau 5 Approximation dune concentration en nanoparticules de TiO
2
partir des missions de
poussires de travaux.
Scnarios pour
Bricoleurs
Niveau d'exposition Rfrence
Libration des (nano) particules de provenance de murs
Travaux (Perage
de trous, etc.)
Air: 7,6
253,2g/m
3
/min
Exposition considre
comme aigu
Estimation partir de 20, 54 mg/m
3
/min de
poussire inhalable, dont 0,3 10 % de TiO
2

(Linch K.D., 2002)

6.4.1.1.3 Fin de vie des produits contenant du nano-ciment
La fin de vie des produits contenant du nano-ciment correspond en principe la destruction des
(surfaces de) murs et des chausses. Nous pourrons donc envisager une exposition de la
population gnrale lors du passage proximit d'une zone de dconstruction.
De manire identique celle pour les travaux de rparation (paragraphe prcdent), nous
considrons par hypothse que les travaux de destruction de murs seront moins frquents, mais
que le temps dexposition pourra tre considr plus long.
6.4.1.2 Dfinition du scnario de dispersion environnementale
A l'heure actuelle, les quantits de nano-ciment produit et appliqu dans des diffrents btiments
ne sont pas connues. Bon nombre dinterrogations subsistent de plus sur les caractristiques de
dgradation et dures de vie des constructions ralises avec ces nano-ciments. Certaines
donnes indiquent que celles-ci pourraient tre encore plus stables (Lindgren .s., 1996). Par
consquent, nous ne disposons pas, l'heure actuelle, de donnes suffisamment toffes pour
pouvoir estimer les quantits disperses dans lenvironnement.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 84

Deux travaux peuvent nanmoins tre cits :
un travail sur la rsistance labrasion des btons contenant des nanoparticules de TiO
2

(Li H., 2006). Les btons sont fabriqus partir de ciment Portland et de sable de 5 -
25 mm puis sont mlangs des nanoparticules de TiO
2
denviron 15 nm des
pourcentages en poids par rapport au liant de 1, 3 et 5 %. Des essais normaliss de
rsistance la compression et la flexion ont t associs des essais dabrasion. Les
rsultats montrent, aprs 28 jours de cure, une diminution de la rsistance la
compression et la flexion avec laugmentation de TiO
2
dans les btons corrlativement
une diminution de la rsistance labrasion (indice de surface et indice de bordure).
Linterprtation donne par les auteurs est une diminution de la formation des particules de
CSH
42
et une microstructure diffrente en prsence de TiO
2
;

un travail sur lmission de nanoparticules de TiO
2
dans les eaux de ruissellement et issues
des faades extrieurs (Kaegi R., 2008). Les auteurs ont extrait des particules prsentes
dans les eaux de ruissellement de la ville de Dubendorff (Suisse) provenant de deux
immeubles rcents, traits avec des peintures contenant des nanoparticules de TiO
2
. Les
rsultats obtenus et analyss par microscopie lectronique transmission et ICP-MS
montrent la prsence de particules de TiO
2
de taille autour de 150 nm, formes dagrgats
de particules plus petites. La source des particules de TiO
2
des eaux de ruissellement
semblent tre les faades des immeubles. Les concentrations en Ti atteignent 600 g/l,
associes des concentrations en Ca (20 - 40 mg/l), Al (1 - 5 mg/l), et Si (1 10 mg/l)
importantes.

Labsence de donnes de caractrisation relatives au produit B tudi, et de connaissances
suffisantes quant au devenir des nanoparticules de TiO
2
aprs mission, empchent toute
estimation de ce quoi lenvironnement sera rellement expos et en quelle quantit.
6.4.2 Evaluation du danger
6.4.2.1 Danger pour lhomme
6.4.2.1.1 Profil toxicologique gnral du nanomatriau
Parmi les nanoparticules inorganiques, le TiO
2
a t abondamment tudi.
Les tudes pidmiologiques nont pas permis de dmontrer une augmentation du risque de
morbidit ou de mortalit lies au cancer pulmonaire chez les travailleurs affects la production
de TiO
2
(NIOSH,2005).
Aucune tude na t faite concernant des travailleurs manipulant ou utilisant le TiO
2
. Le National
Institute for Occupational Safety and Health (NIOSH) considre que les preuves sont actuellement
insuffisantes pour dsigner le TiO
2
comme un agent cancrogne potentiel pour la voie inhale.
Le NIOSH a labor en 2005 un document de travail qui fournit des recommandations concernant
lexposition professionnelle au TiO
2
. Il recommande une valeur limite dexposition de 0,1 mg/m
3

pour les particules ultrafines de TiO
2
de dimensions nanomtriques, alors que la limite
recommande pour les particules fines de TiO
2
est de 1,5 mg/m
3
(pour une exposition jusqu 10 h
par jour pendant une semaine de travail de 40 h). Cette diffrence reflte linfluence de la surface
spcifique dans la toxicit des particules ultrafines. Le respect de ces recommandations devrait
diminuer le risque de cancer pulmonaire moins de 1 sur 1 000 chez les travailleurs exposs au
TiO
2
(NIOSH, 2005).


42
Silicates de calcium hydrats (Hydrated Calcium Silicates)
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 85
Lorganisme a conclu que :
leffet tumorigne de lexposition au TiO
2
ne semble pas tre li au produit ou une action
directe, mais serait plutt fonction de la dimension des particules et de leur surface qui
agirait comme un mcanisme gnotoxique secondaire (non spcifique) associ une
inflammation chronique et une prolifration cellulaire ;
les indices indiquent que lexposition professionnelle des faibles concentrations de TiO
2
produit un risque ngligeable de cancer du poumon chez les travailleurs, il nest pas
possible de dterminer si lexposition des fortes concentrations est cancrogne chez
lhumain ;
les limites dexpositions recommandes peuvent permettre de rduire les risques qui
peuvent tre associs au dveloppement de linflammation pulmonaire et du cancer
(1,5 mg/m pour les particules fines et 0,1 mg/m pour les particules ultrafines; 10 h
pendant une semaine de travail de 40 h).

Selon le NIOSH, il y a peu deffets relis au TiO
2
dans les tudes de cas et les tudes
pidmiologiques ne fournissent pas dindice vident dune augmentation de la mortalit par
cancer ou de la mortalit chez les travailleurs exposs aux poussires de TiO
2
. Le NIOSH
considre que les indices sont insuffisants pour classer le TiO
2
comme cancrogne
professionnel potentiel .

De son ct, le Centre International de Recherche sur le Cancer (CIRC) considre que les preuves
de la cancrognicit du TiO
2
chez lhomme sont insuffisantes, mais quelles sont suffisantes chez
lanimal (IARC, 2006). Le TiO
2
est donc considr comme cancrogne possible pour lhomme
(groupe 2B) par le CIRC.
En fvrier 2006, un groupe consultatif du CIRC pour la rvision des monographies a rvalu la
classification du dioxyde de titane qui tait considr comme inclassable quant sa
cancrognicit pour l'homme (groupe 3). Lorganisme la re-classifi comme agent cancrogne
possible pour l'homme (groupe 2B) .
Le CIRC a analys les donnes pidmiologiques disponibles, soit trois tudes de cohorte (Europe
et tats-Unis) et une tude cas-tmoins dune population (Montral). Ces tudes nont pas permis
de mettre en vidence une association entre lexposition au TiO
2
, telle quelle tait susceptible de
se produire au cours des dernires dcennies en Europe et en Amrique du Nord, et le risque de
cancer. Cependant, le CIRC mentionne que les tudes souffraient de limitations mthodologiques
(par exemple concernant la classification des expositions, la dimension des particules, lenrobage).
Le TiO
2
, sous forme pigmentaire et ultrafine, a t test pour sa cancrognicit par diverses voies
dexposition (inhalation, orale, intra-trachale, injections) chez plusieurs espces animales (rat,
souris). Une augmentation des tumeurs bnignes et malignes a t constate chez le rat femelle
(inhalation) ainsi quune augmentation des adnomes pulmonaires forte dose chez les rats
femelle et mle. Deux autres tudes par inhalation chez le rat et une chez la souris se sont
avres ngatives. Aucune augmentation de la frquence de tumeur cancreuse na t observe
par les autres voies chez le rat et la souris.
Lvaluation du CIRC a tenu compte de considrations mcanistes et dautres donnes pertinentes
(Baan R., 2006) :
les donnes humaines disponibles par inhalation concernent des rapports de cas qui ont
montr un dpt dans le tissu pulmonaire et les ganglions lymphatiques ;
une tude clinique par ingestion de fines particules de TiO
2
a montr une absorption
gastro-intestinale dpendante de la dose avec une grande variation inter-individuelle des
concentrations sanguines ;
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 86
les tudes chez les rongeurs ont montr une atteinte dpendante de la dose de la
clairance
43
par les macrophages alvolaires ;
la clairance des particules ultrafines de TiO
2
tait plus lente que celle des particules fines ;
chez les rongeurs, la toxicit pulmonaire est plus forte aprs une exposition aux particules
ultrafines quaprs une exposition aux particules fines (sur une base de masse). Ces
diffrences seraient relies la charge pulmonaire en termes de surface de particules, et
sont considres comme rsultant de latteinte de la phagocytose et la squestration des
particules dans le tissu interstitiel ;
les particules ultrafines de TiO
2
inhibent la phagocytose des macrophages alvolaires
humains in vitro une concentration massique laquelle cet effet nest pas produit pour les
particules fines ;
linduction in vitro de dommages lADN, qui suggre la gnration despces ractive
doxygne, est plus forte pour les particules ultrafines que pour les particules fines.

LACGIH (ACGIH, 2005) classifie le dioxyde de titane comme substance non classifiable comme
cancrogne pour l'homme (groupe A4).
L'ACGIH a valu le dioxyde de titane (TiO
2
) comme une substance non classifiable comme
cancrogne pour l'homme en se basant sur labsence dindice concluant entre lexposition au
dioxyde de titane et le cancer, ainsi que sur des rsultats ngatifs ou non concluants concernant
lactivit cancrogne chez les animaux.

6.4.2.1.2 Evaluation du danger nano spcifique du produit fini
La recherche bibliographique a t ralise en retenant les essais mens par voie inhale qui
correspondent la voie dabsorption majoritaire retenue chez lHomme pour le produit B, et avec
lutilisation de nanoparticules TiO
2
anatase (enrobes et fonctionnalises ou non).

Lexposition par voie respiratoire
Une des premires tudes sur la comparaison de particules fines (250 nm) et ultrafines (20 nm) de
TiO
2
a t publie par Oberdrster et al. (Oberdorster G., 1994). Dans cette tude par inhalation
chez le rat, les auteurs ont observ une rtention pulmonaire plus importante des particules
ultrafines trois mois aprs lexposition. Les concentrations administres taient semblables pour
les particules fines et ultrafines (respectivement 22,3 4,2 et 23,5 2,9 mg/m
3
). Les particules de
20 nm se retrouvaient dans les ganglions lymphatiques en plus grand nombre, phnomne
indiquant la pntration des espaces interstitiels. Le temps de clairance pulmonaire des particules
ultrafines tait allong et la translocation de ces particules dans linterstitium pulmonaire et aux
nodules lymphatiques rgionaux tait significativement plus leve pour les particules de 20 nm.
La surface spcifique est le paramtre le mieux corrl avec les effets observs.

Dans leur exprience par inhalation chez le rat, Oberdrster et al. et Ferin et al. (Ferin J., 1992) ont
observ une augmentation significative de signes ou de paramtres de linflammation lors de
ladministration de particules de TiO
2
de 20 nm, en comparaison avec la mme masse de
particules de 250 nm. Jusqu ces tudes ralises par la mme quipe, le dioxyde de titane tait
considr comme une poussire non-toxique et servait de contrle inerte dans plusieurs tudes
toxicologiques. Des dommages lpithlium pulmonaire, lobstruction des pores de Kohn, le
dveloppement de foyers de fibrose interstitielle et laltration des fonctions des macrophages

43
Coefficient qui reprsente l'aptitude d'un organe ou d'un tissu liminer d'un fluide de l'organisme une
substance dtermine.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 87
(mdiateurs de linflammation) taient significativement plus levs. Ces rsultats dmontrent que
des particules inertes peuvent devenir biologiquement actives lorsque la dimension est rduite
une taille nanomtrique.

Warheit et al. ont tudi la toxicit aigu de particules et de tiges de TiO
2
chez des rats. Des tiges
danatase (200 nm x 35 nm ; surface de 26 m
2
/g) et des particules danatase (~ 10 nm ; surface de
169 m
2
/g) ont t administres par instillation intratrachale des doses de 1 ou 5 mg/kg. Des
particules de rutile (~ 300 nm ; surface de 6 m
2
/g) ont servi de contrle ngatif alors que le quartz a
t utilis comme contrle positif. Les auteurs ont observ une inflammation transitoire et des
dommages aux cellules 24 h aprs lexposition aux tiges danatase et aux particules danatase.
Les effets observs ntaient pas diffrents des effets pulmonaires observs suite lexposition
aux particules de TiO
2
de 300 nm, malgr des diffrences importantes de surface. Lexposition aux
particules de quartz a provoqu une rponse inflammatoire dpendante de la dose caractrise
par une accumulation de neutrophiles et de macrophages de mme quun paississement du tissu
pulmonaire indiquant le dveloppement dune fibrose pulmonaire. Les auteurs concluent que ces
rsultats sont en dsaccord avec lhypothse voulant que la surface spcifique soit un facteur
majeur associ la toxicit des particules de dimensions nanomtriques, mais ils soulignent que
les causes la base de cette divergence ne sont pas claires (Warheit D.B., 2006).

Chen et al. ont expos des souris adultes mles ICR une dose unique (0,1 ou 0,5 mg) de TiO
2

(19 - 21 nm) par voie intratrachale. Le TiO
2
induit de lemphysme pulmonaire, laccumulation de
macrophages, de lhyperplasie pneumocyte de type II et lapoptose de cellules pithliales. De
plus, les auteurs ont not une expression diffrencie de centaines de gnes qui ont, entre autres,
perturb le cycle cellulaire, caus de lapoptose, modifi le facteur de croissance du placenta et
conduit lexpression de certaines chimiokines pouvant causer de lemphysme pulmonaire et
lapoptose de cellules pithliales alvolaires (Chen H.W., 2006).

Dans une autre tude, Warheit et al. concluent que les proprits de surface sont critiques pour
dterminer les effets des particules ultrafines de TiO
2
. Par instillation intratrachale des doses de
1 5 mg/kg dun chantillon de particules de rutile fin, dun autre ultrafin, et dun lot contenant
80 % danatase et 20 % de rutile avec un contrle positif de quartz, ils ont expos des rats (5 rats
par groupe, par dose et par temps) et les ont valus 24 heures, une semaine et trois mois aprs
instillation. Lexposition au quartz, et un moindre niveau au mlange anatase/rutile (uniquement
pour les essais aux fortes concentrations pour le mlange) a produit de linflammation pulmonaire,
de la cytotoxicit et des effets histopathologiques clairement distincts sur les tissus pulmonaires.
En revanche, les particules fines et ultrafines de TiO
2
nont eu quun effet inflammatoire passager
et ne reprsentent quun faible risque pulmonaire. Les auteurs concluent que les diffrences
deffets seraient dues la structure cristalline, au pH des particules et la ractivit chimique de
surface, les particules danatase/rutile produisant plus de radicaux libres que celles de rutile, ce qui
reprsenterait une des sources dinflammation et de cytotoxicit. Les effets ntaient pas
totalement explicables uniquement par la surface des particules (Warheit D.B., 2007).

Grassian et al. ont expos des souris en chambre dinhalation de faon aigu (4 h) et sub-aigu
(4 h / jour pendant 10 jours) de lanatase cristallin (TiO
2
) agrg (particules lmentaires de 2
5 nm; agrgats moyens de 123 nm) des concentrations de 0,77 et 7,22 mg/m
3
. Lexposition
aigu a produit une toxicit pulmonaire ou de linflammation minimale alors que lexposition sub-
aigu a conduit une plus forte teneur en cellules totales et en macrophages dans le liquide
broncho-alvolaire. La rponse inflammatoire tait modre, significative mais rversible trois
semaines aprs lexposition (Grassian V.H., 2007).

Warheit et al. ont expos des rats (5 rats par groupe, par dose et par temps) par instillation
intratrachale des particules de quartz de 12, 50, 300 et 500 nm qui possdaient des surfaces
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 88
spcifiques de 4,2 90 m
2
/g et ont mesur le potentiel hmolytique et lactivit de surface des
particules. Aprs 24 h, une semaine, un mois et trois mois, ils ont valu la prolifration cellulaire
et ont fait une valuation histopathologique du tissu pulmonaire. Lexposition aux diffrentes
particules de quartz a produit une rponse inflammatoire soutenue et dpendante de la dose,
laccumulation de macrophages alvolaires avec le dveloppement prcoce de fibrose pulmonaire
et des effets cytotoxiques. Les effets observs ne sont pas toujours relis la surface de la
particule mais sont bien corrls lactivit de surface hmolytique des diffrentes particules. Les
rsultats obtenus suggrent que lintensit des effets mesurs est mieux corrle avec lactivit de
surface hmolytique de test in vitro quavec laire de surface, la taille, la cristallinit, la teneur en
mtaux (fer) ou les radicaux de surface (Warheit D.B., 2007).

Reprotoxicit
Aucune donne nest actuellement disponible dans la littrature.

Cancrogense
Borm et al., dans une revue sur le cancer pulmonaire, soulignent que les particules peu solubles,
tels que le noir de carbone et le dioxyde de titane, sont reconnues pour causer des fibroses, des
lsions noplasiques et des tumeurs pulmonaires chez le rat. La quantit requise de ces produits
pour gnrer les mmes effets est beaucoup plus faible avec des nanoparticules (Borm P.J.,
2004).

Gnotoxicit et photognotoxicit
Theogaraj et al. ont valu la photo clastognicit (test daberrations chromosomiques) de 8 types
de particules de TiO
2
(14 nm 60 nm ; concentration de 800 5 000 g/ml) dans les cellules CHO
en prsence ou non dUV (750 mJ/cm) (Theogaraj E., 2007).
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 89

Tableau 6 : Description des 8 types de nanoparticules de TiO
2
testes par Theogaraj et al. (Theogaraj
E., 2007) pour lvaluation de la photo clastognicit.


Lessai t ralis en prsence ou non dactivation mtabolique S9. Aucune gnotoxicit (en
absence dUV) ou photognotoxicit (prsence dUV) des nanoparticules de TiO
2
na t montre
dans les conditions tudies.

Linnainmaa et al. (Linnainmaa K., 1997) ont valu la photo clastognicit (test du micronoyau,
cellules pithliales hpatiques de rat) de 3 types de particules ultrafines de TiO
2
(UF1 : 20 nm,
anatase, non enrobe, Degussa, P25 ; UF2 : 20 nm, rutile, enrobage dhydroxyde daluminium et
dacide starique, UV-Titan M160 ; TiO
2
Pigmentaire : 170 nm, anatase, non enrob, Kemira
AFDC) aux doses de 5, 10 et 20 g/cm pendant 21 heures, en prsence ou non dUV. Aucune
clastognicit ou photognotoxicit des particules ultrafines de TiO
2
na t montre dans les
conditions tudies.

Nakagawa et al. (Nakagawa Y., 1997) ont valu la photognotoxicit de 4 types de particules de
TiO
2
non enrobes 1) ultrafine, anatase, 21 nm ; 2) anatase, 255 nm ; 3) rutile, 255 nm; 4) rutile,
420 nm en utilisant les 4 tests de gnotoxicit suivants :
a. Salmonella typhimurium / test dAmes
44
avec microsomes;
b. Cellules de lymphomes de souris L5178Y / essais de mutation sur des cellules de
mammifre ;

44
test de mutation gnique in vitro sur bactries,
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 90
c. Cellules de lymphomes de souris L5178Y / test des comtes ;
d. Cellules de hamster chinois CHL/IU / test des aberrations chromosomiques..

Les auteurs concluent que les particules photo excites de TiO
2
sont gnotoxiques in vitro. Elles
induisent les lsions primaires lADN ainsi que des aberrations chromosomiques mais pas de
mutations gniques.
Les rsultats des tudes de gnotoxicit du TiO
2
rutile/anatase et anatase, du rapport Opinion of
the Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for Consumers
Concerning Titanium Dioxide (2000)
45
sont prsents dans les tableaux ci dessous.

Tableau 7 : Gnotoxicit et photognotoxicit in vitro de nanoparticules de TiO2 enrob (mlange
Rutile/Anatase) PSMA 1.

Source: Opinion of the Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for
Consumers Concerning Titanium Dioxide (2000), Table 1)

45
http://ec.europa.eu/health/ph_risk/committees/sccp/documents/out135_en.pdf
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 91
Tableau 8 : Gnotoxicit et photognotoxicit in vitro de particules de TiO2 anatase PSMA 3.

Source: Opinion of the Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for
Consumers Concerning Titanium Dioxide (2000), Table 2C).

Mcanismes daction toxique
Renwick et al. ont expos des macrophages alvolaires (J774. 2 M ) des particules fines et
ultrafines de TiO
2
(250 et 29 nm) et de noir de carbone (260,3 et 14,3 nm) pendant 8 h. Aucune
cytotoxicit significative na t observe, mais une diminution de la capacit de phagocytose des
macrophages a t observe une concentration de 0,39 Gg / mm
2
pour les particules ultrafines
de noir de carbone et 0,78 Gg / mm
2
pour toutes les particules. toutes les concentrations, les
particules ultrafines de noir de carbone ont eu un effet plus marqu que les autres particules sur
les macrophages. De faon gnrale, les effets sur la phagocytose se sont manifests une
concentration infrieure pour les particules ultrafines (0,39 Gg / mm
2
comparativement
0,78 Gg / mm
2
pour les particules fines). Les auteurs concluent que le ralentissement de la
clairance des particules ultrafines dans les poumons est caus en partie par une diminution de la
capacit de phagocytose des macrophages rsultant de leur exposition des particules (Renwick
L.C., 2001).

Dans une exprience faite par instillation intratrachale chez le rat, Hohr et al. ont mis en vidence
une augmentation des neutrophiles pulmonaires, paramtres prcoces de linflammation, pour des
nanoparticules de TiO
2
de 20 - 30 nm. Cet effet ntait pas aussi significatif avec ladministration de
particules de 180 nm. Lenrobage par mthylation, pour rendre les particules hydrophobes, donc
encore moins solubles, a diminu lgrement la production de neutrophiles pour les 2 dimensions
particulaires de TiO
2
lorsque les doses taient de 1 mg, mais a eu peu dimpact aux doses de
6 mg. Les auteurs concluent que la surface des particules est le facteur dterminant dans
linflammation pulmonaire, alors que lenrobage par mthylation a eu un rle marginal sur les
paramtres de linflammation (Hohr D., 2002).

Gurr et al. ont tudi leffet de particules ultrafines de TiO
2
sur des cellules pithliales bronchiales
humaines (BEAS-2B), en absence de photoactivation. Des particules danatase de 10 et 20 nm
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 92
(10 Lg / ml) ont provoqu des dommages oxydatifs lADN, une peroxydation des lipides, la
formation de micronoyaux et une augmentation de la production de H
2
O
2
et de NO dans les
cellules. Des particules de 200 nm (ou plus) danatase nont pas induit de stress oxydatif en
absence de lumire. Par contre, des particules de 200 nm de rutile ont induit une production de
H
2
O
2
et des dommages oxydatifs lADN en labsence de lumire. Enfin, le niveau de dommages
oxydatifs lADN des cellules a t lgrement plus lev aprs une exposition un mlange
danatase et de rutile (200 nm ; 10 Lg / ml pendant 1 h dans lobscurit totale) comparativement
une exposition aux deux formes de TiO
2
sparment. Les auteurs concluent que plus la taille des
particules est petite, plus leur potentiel pour induire un stress oxydatif est lev (en absence de
photactivation). Les particules ultrafines de TiO
2
sont habituellement considres comme
biocompatibles en absence de photoactivation (Gurr J.R., 2005).

Dans une autre tude, Barlow et al. ont expos des cellules pithliales alvolaires de type II de
rat (ligne L-2) des nanoparticules de noir de carbone (14,3 nm ; 6 h). Les cellules pithliales
de type II joueraient un rle important dans le processus inflammatoire dans les poumons par la
production de cytokines proinflammatoires. Ces dernires sont responsables de la migration des
leucocytes aux sites dinflammation (par chimiotaxie). Les auteurs ont observ une production
significative de chimioattractants par les cellules de type II, mesure par la migration des
macrophages. Des nanoparticules de TiO
2
(29 nm) et des particules fines de carbone et de TiO
2

(260,2 et 250 nm respectivement) nont pas eu cet effet. Une augmentation dpendante de la dose
de la production de LDH suite lexposition aux quatre types de particules a galement t
observe. Les auteurs concluent que les nanoparticules de carbone sont fort probablement
responsables de la production de chimioattractants par les cellules de type II (Barlow P.G., 2005).

Sayes et al. ont expos des fibroblastes cutans et des cellules pithliales pulmonaires humaines
des nanoparticules sphriques danatase de 10 nm (une forme cristalline du TiO
2
), des particules
sphriques de rutile de 5,2 nm (une autre forme cristalline du TiO
2
) et des particules sphriques
mixtes danatase/rutile de 3,2 nm avec des surfaces spcifiques de 112 (rutile) 153 m
2
/ g
(anatase). De la cytotoxicit et de linflammation ont t observs partir de concentrations de
100 Lg / ml selon un comportement dose-rponse classique et les effets ont augment en fonction
du temps et de la concentration. Les effets observs ntaient pas corrls la surface des
particules, lanatase (surface spcifique 153 m
2
/ g) tant 100 fois plus toxique que le rutile (surface
spcifique 123 m
2
/ g) concentration gale. Les particules les plus cytotoxiques taient les plus
efficaces gnrer des espces ractives de loxygne et la toxicit augmentait rapidement avec
une illumination dans lultraviolet, facteur favorisant la gnration de radicaux libres (Sayes C.M.,
2006).

Des cellules pithliales pulmonaires humaines ont t exposes in vitro des nanoparticules de
silice contenant du fer, du cobalt, du manganse et du titane de mme quaux oxydes
nanomtriques de ces mtaux. Les auteurs (Limbach L.K., 2007) ont utilis des particules trs bien
caractrises ayant les mmes morphologies, de mme que des dimensions, des formes et des
degrs dagglomration comparables. Ils ont dmontr que ces particules pntrent efficacement
dans les cellules et provoquent jusqu huit fois plus de stress oxydatif dans le cas du cobalt et du
manganse que les solutions aqueuses des mmes mtaux. Ils concluent que lvaluation du
risque devrait galement tenir compte des compositions chimiques et des proprits catalytiques
des nanoparticules.

Des chercheurs se sont intresss l'tude de phnomnes cellulaires se manifestant par
linduction de divers mcanismes ou par la production de mdiateurs de l'inflammation.
Dans une exprience visant valuer la compatibilit sanguine de diverses formes du dioxyde de
titane (TiO
2
), Maitz et al. n'ont pas observ d'effet de la forme nanocristalline sur plusieurs
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 93
paramtres du plasma humain riche en plaquettes (agrgation plaquettaire et temps de
coagulation) (Maitz M.F., 2003).

Une tude in vitro de Lucarelli et al .a dmontr que les nanoparticules de SiO
2
et de cobalt (Co)
prsentaient une activit proinflammatoire significative sur lactivit des monocytes de la moelle
humaine, alors que les nanoparticules de TiO
2
et de ZrO
2
prsentaient une activit plus faible
(Lucarelli M., 2004).

Peters et al., tudiant le comportement et la viabilit de cellules endothliales humaines in vivo,
observaient que les nanoparticules de PVC, TiO
2
, de SiO
2
et de Co taient incorpores dans les
vacuoles des cellules. Les nanoparticules de Co dmontraient un potentiel proinflammatoire et
cytotoxique important, alors que celles de SiO
2
avaient un potentiel proinflammatoire faible et
celles de TiO
2
un potentiel encore moindre, mais observable, en dpit du fait que cette substance
est souvent considre comme biologiquement amorphe. Les nanoparticules de PVC et de Ni
nengendraient pas ces effets (Peters K., 2004).
Lexposition de microglies de souris in vitro des nanoparticules de TiO
2
non photo-actives (2,5-
120 ppm) a provoqu une production rapide (< 5 minutes) et prolonge (2 h) despces ractives
de loxygne de mme que la phagocytose des nanoparticules par les microglies (Long T.C.,
2006).

Conclusion
Daprs les donnes publies, les nanoparticules TiO
2
(forme anatase) sont absorbes au niveau
pulmonaire et pourraient engendrer un phnomne inflammatoire. En relation avec leurs proprits
photocatalytiques, les nanoparticules de TiO
2
de forme anatase induisent galement une
cytotoxicit par un mcanisme principalement li au stress oxydant. Les rsultats de gnotoxicit
sont contradictoires et certains auteurs ont pu montrer des lsions primaires lADN ainsi que des
aberrations chromosomiques.
6.4.2.2 Danger pour lenvironnement
6.4.2.2.1 Donnes cotoxicologiques du dioxyde de titane

Concentrations attendues dans lenvironnement
Un travail sur un modle dexposition environnemental des nanoparticules manufactures (Mueller
N.C. et Nowack B., 2008), concernant en particulier les nanoparticules de titane a tent dvaluer
des concentrations environnementales prdites (PEC) par rapport aux concentrations prdites
sans effet (PNEC). Les auteurs avancent que les concentrations attendues sont de 0,7 16 g / l
et sont suprieures aux PNEC (< 0,1 g / l). Les nanoparticules de TiO
2
ont le plus fort rapport
PEC/PNEC compares aux nanoparticules dargent ou aux nanotubes de carbone.

Interaction avec le vivant
Des revues rcentes (Hirano K., 2005 ; Hoffmann M., 2007; Ju-Nam Y. et Lead J.R., 2008)
montrent que la production dERO par les nanoparticules de TiO
2
, en prsence de lumire, est la
cause des dommages aux organismes aquatiques, quil sagisse de micro-organismes
(Oberdrster G., 2007) ou de poissons, avec pour ces derniers des problmes inflammatoires et
un stress respiratoire (Federici G., 2007; Reijnders L.,2008). Une des consquences de la
production dERO est le dclenchement de ractions en chane radicalaires destructrices, de type
proxydation lipidique, dans la couche de lipopolysaccharides bactriens par exemple.

Micro-organismes bactriens
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 94
La comparaison entre des oxydes de titane nanomtriques et micromtriques montre des effets
trs faibles ou inexistants sur des souches bactriennes varies comme des levures, E Coli ou des
bacilles. Les raisons invoques sont essentiellement le faible nombre de contacts avec la
membrane cellulaire. Par contre, Sunada et al. ont notamment observ la destruction de la
membrane externe puis interne chez E. coli en prsence de nanoparticules de TiO
2
(Sunada K.,
2003).

Algues
La toxicit de TiO
2
nanomtrique et micromtrique vis--vis de diffrents types dalgues comme
Pseudokirchneriella subcapitata a t tudie suivant les tests de croissance normaliss par
lOCDE (OCDE 201) en prsence et en labsence de lumire. Les rsultats obtenus sont peu
diffrents. Le TiO
2
nanomtrique est plus toxique que le micromtrique. La valeur de EC50 est de
35,9 mg / l pour le TiO
2
micromtrique et de 5,83 mg / l pour le nanomtrique. En dessous de
0,98 mg / l le TiO
2
nanomtrique ne montrait aucun effet alors que pour le TiO
2
micromtrique la
dose est de 10,1 mg/l. Le TiO
2
nanomtrique forme des agrgats en contact direct avec la surface
des micro-algues. De mme, des travaux sur des algues unicellulaires Chlamydomonas reinhardtii
ont montr des rponses des niveaux physiologiques, biochimiques et gnomiques. La
croissance tait inhibe durant les deux ou trois premiers jours. Un stress oxydant apparaissait
partir de 6 heures de contact via des analyses de peroxydation des lipides. Lexpression de quatre
gnes marqueurs du stress (sod1, gpx, cat, and ptox2) apparaissait pour des concentrations en
TiO
2
de 1 mg / l et des temps de 1, 3, 5 et 6 h de contact et proportionnelles aux doses de TiO
2
.
La concentration finale de cellules tait dpendante de la dose.

Poissons
Une tude trs complte traite de lexposition de la truite arc en ciel (Oncorhynchus mykiss) des
nanoparticules de TiO
2
(Federici G., 2007). Des effets toxicologiques sont observs au niveau des
branchies et se traduisent par la prolifration des cellules pithliales et le dveloppement
ddmes des filaments branchiaux. En revanche, les paramtres sanguins des poissons sont
peu altrs. Une augmentation de lactivit de lATP-ase au Na
+
, K
+
et une baisse de concentration
des substances ractives de lacide thiobarbiturique (TBARS) tmoignent deffets possibles sur
losmorgulation et dun stress oxydatif dans les branchies des poissons. Ces effets sont
galement observs dans lintestin, et dans une moindre mesure dans le cerveau, mais pas dans
le foie. Daprs ces rsultats, les deux voies dexposition semblent donc entraner une
accumulation de nanoparticules, la voie directe tant cependant prpondrante par rapport la
voie trophique. Ces tudes ne donnent pas dinformation sur la provenance des nanoparticules
observes dans les organes internes des animaux. Ces dernires pourraient y tre amenes par
voie sanguine suite un transfert travers les cellules branchiales exposes par voie directe, ou
suite un passage travers lpithlium du tractus gastro-intestinal aprs exposition par voie
trophique.

Invertbrs aquatiques
Trois tudes dveloppes sur des espces de crustacs : Daphnia magna, Thamnocephalus
platurus) utilisant des nanoparticules et des microparticules de TiO
2
:
ne montrent pas deffets toxiques jusqu 20 g / l pour lune (Heinlaan M., 2008) ;
ne montrent pas deffets cyto ou gnotoxiques pour lautre (Lee S.W., 2009) ;
montrent des effets sur la reproduction sur 6 tests sur 25 (contact de 48 h) avec EC
compris entre 0,5 mg / l et 91,2 mg / l. La mesure de la reproduction est plus sensible que
la mortalit.
Aprs 21 jours de contact, le NOEC tait de 30 mg / l pour la mortalit et de 3 mg / l pour la
reproduction. Les valeurs de EC10 et EC50 pour la reproduction taient resepctivement de 5 et
26,6 mg / l.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 95
Conclusion
Les travaux sur les effets du TiO
2
sur les cosystmes sont peu nombreux par rapport dautres
nanoparticules manufactures. A ce jour, trois tudes sur des plantes (1) et sur des vers (2) ont
t ralises, conduisant des effets positifs avec les plantes et nuls sur les vers. Les tudes sur
des bactries procaryotes montrent des effets contradictoires dus des proptocipes diffrents.
Rares sont les travaux complets intgrant la gnotoxicit et la cytotoxicit. Un seul a t
apparemment ralis sur des poissons et montre une gnotoxicit.
La dispersabilit de TiO
2
peut tre aussi mise en cause. Les diffrentes formes de TiO
2
prsentent
toutes un point de charge nulle (PCN)
46
autour de pH 6 concourant une forte agrgation. Cette
agrgation peut limiter le contact avec les organismes comme les bactries ou les micro-algues.
Par contre cela naffecte pas lingestion par les poissons, sauf si une sdimentation importante
existe.

6.4.2.2.2 Evaluation du danger nano spcifique du produit fini
Ne disposant pas de donnes spcifiques au produit tudi, nous ne pouvons pas aujourdhui
conclure sur les dangers environnementaux associs lutilisation de ce produit.
Les quelques rares donnes sur le phnomne de lixiviation
47
de TiO
2
associ aux ciments
donnent des quantits dans la phase aqueuse pouvant atteindre 600 g / l. Par contre, on ne sait
rien sur lassociation des nanoparticules de TiO
2
avec les phases CSH (CaOSiO
2
x H
2
O) qui
reprsentent la phase minrale majeure des ciments hydrats.
6.4.3 Evaluation du risque
6.4.3.1 Discussion des rsultats
Cette tude montre que, pour lHomme, lexposition par voie respiratoire na pu tre estime pour
le produit B considr. Cependant, elle ne peut pas tre nglige.
Pour les effets spcifiques au produit B considr (cf. chapitre incertitudes), labsence de donnes
na pas permis de conclure sur les dangers.
Cependant, labsorption par voie pulmonaire est avre et aux vues des donnes sur les
nanoparticules de TiO
2
sous forme anatase, les effets constats pour une exposition pulmonaire
aigu et chronique (effets inflammatoires, fibrose et emphysme pulmonaire), le danger pour
lhomme ne peut pas tre exclu.

Les donnes ne permettent pas de conclure sur les risques encourus par lenvironnement. Etant
donn les dangers observs pour le dioxyde de titane non spcifique du produit tudi et la
dispersion environnementale avre pour des produits quivalents, le risque ne peut pas tre
exclu pour lenvironnement.
6.4.3.2 Discussion et identification des incertitudes
Scnario homme
La caractrisation du produit B nest pas connue.
En labsence dtudes (co) toxicologiques spcifiques au produit B, lidentification des dangers a
t ralise sur la base dtudes gnriques (nanoparticules de dioxyde de titane). Le danger
supplmentaire que pourrait reprsenter l'absorption secondaire par voie orale des nanoparticules
de TiO
2
n'a pas t pris en compte dans l'valuation du produit B et pourrait donc modifier le
niveau de risque potentiel li l'exposition ce produit. En effet, dans le cas du dioxyde de titane

46
valeur du pH pour laquelle la charge de surface est nulle.
47
lessivage de produits solides par un solvant appropri, de faon en extraire les parties solubles
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 96
et du ciment, nous avons pris en considration exclusivement la voie pulmonaire : voie directe
dexposition. Nanmoins, une exposition gastro-intestinale existe un niveau significatif. En effet,
les particules inhales se dposent en partie dans la rgion tracho-bronchique, mais la clairance
mucociliaire et la dglutition conduisent l'ingestion de ces particules. Concernant la toxicit du
dioxyde de titane par voie orale, plusieurs tudes montrent des rsultats contradictoires : Jani et al.
nobservent pas de toxicit aprs une administration quotidienne pendant 10 jours de particules de
TiO
2
de 500 nm (Jani P.U., 1994). Warheit et al. (Warheit D.B., 2007 a) montrent des rsultats
similaires avec une seule administration de nanoparticules de TiO
2
de 140 nm des doses variant
de 175 5 000 mg / kg pc. Au contraire, Wang et al. (Wang J.J., 2007) observent une toxicit
hpatique, rnale et cardiaque avec des nanoparticules de TiO
2
mais les anomalies biologiques et
histologiques varient avec la taille des nanoparticules (25, 80 et 155 nm).

Il est indispensable de fournir des tudes standards de toxicologie adaptes au TiO
2
sous forme
anatase spcifique au produit B : entre autre des tudes de toxicologie chronique de gnotoxicit,
et reprotoxicit.
Des catgories de population, notamment celles souffrant de pathologies respiratoires (BPCO),
pourraient tre plus risque et devraient faire lobjet dune attention toute particulire lors dune
valuation de risque sanitaire.

Scnario environnement
De manire identique lvaluation des risques pour lhomme, les tudes decotoxicologie
adaptes au TiO
2
sous forme anatase spcifique au produit B considr, indispensables
lvaluation des risques pour lenvironnement, sont manquantes.

6.4.3.3 Conclusion
Chez lhomme et pour lenvironnement, pour les effets et le produit considrs dans les tudes et
hors populations sensibles (cf. chapitre incertitudes), le risque, sil ne peut pas tre valu, ne
peut pas tre exclu.
6.5 Crme solaire et dioxyde de titane
6.5.1 Evaluation de lexposition
Les produits de protection solaire ont pour but dviter lrythme de la peau en filtrant les
rayonnements ultra-violets du soleil : les UV-B de longueurs donde comprises entre 290 et
320 nm et les UV-A de longueurs donde comprises entre 320 et 400 nm. Un grand nombre de
composs organiques entrent dans leur formulation, dont des filtres optiques qui doivent la fois
stopper les rayonnements dangereux UV-A et UV-B tout en demeurant transparents pour des
raisons desthtique. La rponse de lil humain se situant des longueurs donde comprises
entre 380 nm (violet) et 700 nm (rouge), les combinaisons de filtres utilises dans les produits de
protection solaire doivent donc attnuer avec une certaine efficacit (qui dfinit lindice de
protection) les rayonnements jusqu 400 nm, et par contre laisser passer le plus possible les
rayonnements au-dessus de 380 - 400 nm.
Depuis dj quelques annes, certains fabricants utilisent des particules minrales de tailles
nanomtriques doxyde de titane (TiO
2
) et/ou doxyde de zinc (ZnO) dans les crmes solaires, afin
den augmenter lindice de protection. Ces nanoparticules semi-conductrices attnuent les
rayonnements UV par une combinaison dabsorption (de la mme faon que les cellules
photovoltaques), de dflection et de diffusion de la lumire.
La taille nanomtrique (< 30 nm) est indispensable pour que la crme reste transparente (viter les
phnomnes de diffusion dans le domaine du visible) et pour le cas du TiO
2
, prsenter une
meilleure efficacit dabsorption des rayonnements UV.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 97
Les nanoparticules primaires utilises, cristallites de tailles typiquement comprises entre 10 et
30 nm, sagglomrent entre elles pour former des nanoparticules gnralement de plusieurs
microns, tout en conservant leurs proprits optiques.
La prsence de nanoparticules dans les produits solaires favorise galement leur adhrence sur la
peau.

Les nanoparticules de TiO
2
sont insolubles, elles peuvent exister dans 2 phases
cristallographiques principales : anatase et rutile. Pour les produits de protection solaire, les
fabricants utilisent gnralement la phase rutile, qui prsente moins deffet parasite
photocatalytique : gnration despces oxydantes en prsence doxygne dissout. Les
nanoparticules de TiO
2
sont le plus souvent enrobes dans une coquille de silice, dalumine etc.
pour inhiber cet effet, puis fonctionnalises chimiquement par le greffage de molcules organiques
assurant la stabilit de leur dispersion dans les formulations.
6.5.1.1 Caractristiques du produit solaire tudi
Le produit C tudi est une crme solaire pour le corps appliquer manuellement, dindice de
protection SPF 30, vendue pour empcher les coups de soleil et le vieillissement de la peau, de
consommation courante, disponible sur le march franais et reprsentatif sur le plan
technologique des crmes solaires de dernire gnration comportant des particules
nanostructures, daprs le producteur C1.
Comme beaucoup de produits du march, sa formulation est complexe, elle comprend comme
absorbeurs optiques des rayonnements UV-B et UV-A des nanoparticules doxyde de titane TiO
2

(pas de ZnO) et un absorbeur organique. Le fabricant de la crme solaire ajoute directement dans
sa formulation des nanoparticules de TiO
2
, disponibles sur le march, sans modification.
Le Tableau 9 dcrit les caractristiques des nanoparticules industrielles prsentes dans des
crmes solaires dont celle tudie.

Le producteur C1 achte un fournisseur les nanoparticules de dioxyde de titane prtes
lemploi : elles sont enrobes dhydroxyde daluminium pour limiter les effets photocatalytiques et
fonctionnalises par de lacide starique pour les disperser dans la crme.

Daprs les donnes communiques au groupe de travail par le producteur C1 (audition du 21
septembre 2009), la stabilit de la dispersion a t vrifie entre 20 et 45C par le fabricant de la
crme solaire. Elle est suprieure 36 mois. Nous ne disposons pas de donnes sur la stabilit
dans les milieux aquatiques des nanoparticules utilises.













Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 98
Tableau 9 : Caractristiques des nanoparticules industrielles prsentes dans la crme solaire tudie
(daprs www.tayca.co.jp)
Type de nanoparticules Oxyde de titane (TiO
2
)
enrob et fonctionnalis
Masse du produit
industriel dans la crme
solaire
10%
Phase cristalline 100% rutile
Taille des cristallites
primaires
18 nm (distribution 50% :
9 - 24 nm)
Agrgats Btonnets de 70 150 nm
daprs photo TEM
Enrobage Hydroxyde daluminium
(Al(OH)
3
)
Fonctionnalisation Acide starique
(CH
3
-[CH2]
16
-COOH)
Composition massique
du produit industriel :
TiO
2

Al(OH)
3

CH
3
-[CH2]
16
-COOH


83%
9%
8%
Porosit Inconnue
Potentiel Zeta Inconnu

6.5.1.2 Dfinition du scnario dexposition pour lhomme
Dans le cas de lutilisation dune crme solaire application manuelle, la voie dexposition
principale est la voie cutane. Le groupe de travail pose lhypothse que lintgralit des
nanoparticules contenues dans la crme solaire applique est en contact avec la peau. En
dautres termes, la disponibilit des nanoparticules contenues dans la crme solaire applique sur
la peau est considre 100 % pour lexposition cutane.

Le risque darosolisation de nanoparticules contenues dans un liquide est considr comme
ngligeable. Au vue de la mthodologie adopte dans le cadre de ce rapport, la voie dexposition
pulmonaire (arosolisation de nanoparticules contenues dans un liquide) et la voie orale (voie
dexposition accidentelle chez les enfants) ne sont donc pas tudies.
De mme, la co-exposition avec dautres substances ventuellement prsentes sur la peau ne
sera pas tudie.

Dure et frquence dutilisation :
Concernant les statistiques dutilisation des crmes solaires, nous reprenons la mthode utilise
dans le rapport du RIVM de 2006 (Institut National Hollandais de sant public et de
lEnvironnement) qui se base sur le guide technique Europen (1996) rdig en support de la
directive 93/67/EEC concernant les substances rcemment notifies et la commission des lois
1488/94 concernant les substances existantes :
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 99
t : 2 3 enductions par jour sur tout le corps sur une priode cumule de 2 semaines ;
hiver : 2 3 enductions par jour sur le visage uniquement sur une priode cumule dune
semaine.

Population expose :
La population susceptible dtre expose est la population gnrale (dont les populations
sensibles).

Surface dexposition :
La surface du corps humain daprs louvrage Body Surface Area (Bender A.E. et Bender D.A.,
1995) est en moyenne (homme / femme) de 17 000 cm
2
et celle du visage de 112,5 cm
2
daprs
lagence de protection environnementale amricaine (US EPA,2000).

Quantit utilise :
Daprs le fabricant de la crme solaire tudie, la concentration moyenne surfacique de crme
enduite doit tre comprise entre 1 et 2 mg par cm
2
de peau pour assurer les performances
annonces. Le calcul conduirait donc une utilisation denviron 100 g de crme solaire par jour.
Ce chiffre nest videment pas raliste, car dans la pratique on ne senduit pas de crme sur tout le
corps et surtout on utilise des concentrations surfaciques beaucoup plus faibles que celles
correspondant lindice de protection annonc.

Pour la quantit journalire, on se rfrera finalement lestimation donne par le Scientific
Committee on Consumer Products (SCCP)
48
rvision 6 p.89 : une valeur dutilisation raliste de
crme solaire serait de lordre de 18 g / jour .

Calcul de dose :
La prise en compte de la concentration de TiO
2
dans la crme solaire choisie pour cette valuation
permet de calculer lexposition quotidienne maximale en nanoparticules de TiO
2
enrobes et
fonctionnalises qui est donc de 18 g x 10 % = 1,8 g / jour ou environ 38 g / an pour une utilisation
de 3 semaines.
6.5.1.3 Dfinition du scnario de dispersion environnementale
valuation de la quantit de nanoparticules de TiO
2
dissmine annuellement dans
lenvironnement en France par les produits solaires
Daprs Eurostaf (socit du groupe Les Echos), spcialis dans les expertises sectorielles de
march, le chiffre daffaire annuel des produits solaires tait dj estim plus de 400 millions
deuros TTC en 2006 (Eurostaf,2007). Une analyse sommaire des prix des produits du march en
vente dans lhexagone, en considrant les 15 premiers produits compars sur le site Leguide.com,
donne une ide du prix de vente TTC moyen des crmes solaires de 171 / kg.

Suivant lestimation ci-dessus, lachat de crmes solaires en France correspondrait alors 2 300
tonnes.

Afin de rendre compte de la dispersion environnementale des substances tudies, nous
considrerons simplement que toute masse de produit utilise sera tt ou tard rejete dans
lenvironnement (effluents liquides, sols, atmosphre).

48
http://ec.europa.eu/health/ph_risk/committees/04_sccp/04_sccp_en.htm
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 100
Il est trs difficile de connatre la part des produits solaires contenant du nano TiO
2
et la
concentration moyenne en TiO
2
de ces produits. On ne peut donc questimer un majorant pour la
quantit de TiO
2
dissmine annuellement en France dans lenvironnement, en considrant que
toutes les crmes solaires contiennent 10 % de TiO
2
: soit 230 tonnes / an.

Les dispersions de nanoparticules sont stables dans la crme. La dilution dans le milieu naturel
peut favoriser lagglomration des nanoparticules entre elles ou avec dautres matires en
suspension du milieu. La fonctionnalisation des nanoparticules peut se dgrader au cours du
temps dans les milieux naturels. Par contre, le TiO
2
est trs stable chimiquement long terme,
compte tenu de sa faible solubilit.
6.5.2 Evaluation du danger
6.5.2.1 Danger pour lhomme
6.5.2.1.1 Profil toxicologique gnral du nanomatriau
Cf. chapitre 6.4.2.1.1.

6.5.2.1.2 Evaluation du danger nano spcifique du produit fini
La recherche bibliographique a t ralise en retenant les essais mens par voie cutane qui
correspond la voie dabsorption majoritaire retenue chez lhomme pour le produit C, et avec
lutilisation de nanoparticules TiO
2
rutile (enrobes et fonctionnalises ou non).

Toxicit chronique par voie cutane :
Un seul essai de toxicit chronique par voie cutane est disponible. Le traitement par particules de
TiO
2
pendant 4 semaines n'a entran aucune apparition drythme ou ddme au niveau de la
peau d'oreille des porcs traits (Wu J., 2009). Aucun signe clinique anormal ou de changements
comportementaux des animaux des groupes tmoin et traits na t observ. En revanche, une
pntration travers la couche corne a t retrouve comme cela est dcrit dans le paragraphe
suivant.

Pntration et absorption du TiO
2
:
Si de nombreuses tudes in vitro et in vivo, utilisant diffrents modles de peau, montrent que les
nanoparticules de TiO
2
ne pntrent pas les tissus cutans vivants et restent limits aux premires
couches du Stratum corneum, d'autres dmontrent que les nanoparticules de TiO
2
peuvent
pntrer travers la peau au-del du Stratum corneum et atteindre des cellules vivantes.

Lademann et al. nont pas observ dabsorption significative de nanocristaux de TiO
2
enrobs
(17 nm) (UV-Titan M 160, LOral, TiO
2
80 % / Al
2
O
3
7 % / acide starique 10 %), au-del de la
couche corne de la peau de volontaires humains, lexception dune faible quantit (< 1 %) qui
avait pntr les follicules pileux. Puisque les follicules sont aussi isols des tissus vivants par une
couche corne, les auteurs concluent labsence dabsorption cutane du TiO
2
dans les tissus
cutans vivants (Lademann J., 1999).
Schulz et al. et Pflucker et al. nont pas observ dabsorption cutane du TiO
2
nanocristallin dans
les couches infrieures la couche corne de la peau chez lhumain, aprs avoir test lapplication
de trois formulations dont les caractristiques particulaires diffraient (T805 : 20 nm surface
hydrophobe Ti/Si, cubique ; Eusolex T-2000 : 10 - 15 nm cubique, sagglomrant en 100 nm,
surface amphiphile Ti/Al/SiO
2
, en forme daiguilles ; Tioveil AQ-10P : 100 nm, surface hydrophile
Ti/Al/Si, en forme daiguilles). Les auteurs montrent une localisation du TiO
2
exclusivement au
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 101
niveau des couches suprieures du Stratum corneum et concluent labsence dabsorption
cutane du TiO
2
dans les tissus cutans vivants (Pflucker F., 2001; Schulz J., 2002).

Les crmes solaires sont utilises sur peau saine mais peuvent ltre galement sur peau lse.
Dans la population gnrale, 30 50 % des individus sont atopiques (prdisposition aux allergies)
et 2 3 % souffrent de psoriasis (SSCP, 2007). Au niveau de la peau psoriasique, le Stratum
corneum est plus pais (jusqu 100 m), compar la peau saine (10 15 m) et la fonction de
barrire de la peau peut en tre altre.
Dans le cadre du projet Nanoderm, Pinheiro et al. (Pinheiro T., 2007) ont tudi la pntration des
nanoparticules de TiO
2
(crmes solaires commerciales) sur peau saine ou peau psoriasique. La
pntration des nanoparticules de TiO
2
est plus profonde au niveau du Stratum corneum de la
peau lse compare la peau saine. Cependant, aucune pntration de TiO
2
nest retrouve au
niveau des cellules vivantes de la Granulosa ou du Spinosum strata.

Dautres articles ou revues montrent une pntration jusqu lpiderme des nanoparticules de
TiO
2
.
Par exemple, Menzel et al. (Menzel F., 2004) ont ralis une tude sur des coupes de peau de
porc traites avec quatre diffrentes formulations contenant des particules de TiO
2
micronis
d'environ 15 nm de diamtre. En raison de la taille des nanoparticules, il a t suppos que les
particules de TiO
2
peuvent passer travers la couche superficielle corne de la peau (Stratum
corneum) via des canaux intercellulaires et pntrer ainsi dans les couches profondes de la peau
(cellules viables). Les formulations ont t appliques sous forme de pansement (1 cm
2
) et les
chantillons ont t prlevs 8, 24 et 48 h aprs lapplication. Les mesures ont t effectues sur
les biopsies de la peau. L'analyse s'est concentre sur la profondeur et sur les voies de
pntration des particules de TiO
2
dans la peau. Au cours des mesures, la pntration de
particules de TiO
2
travers le Stratum corneum dans le Stratum granulosum via l'espace
intercellulaire a t mise en vidence. En revanche, les follicules pileux ne semblent pas tre des
voies de pntration importantes, le TiO
2
nayant pas t dtect l'intrieur. La concentration de
particules de TiO
2
dans le Stratum spinosum sest rvle infrieure au seuil minimal de dtection
d'environ 1 particule / m
2
.

Rcemment, Wu et al. (Wu J., 2009) ont montr que, aprs l'application topique sur l'oreille de
porc pendant 30 jours conscutifs avec environ 24 mg de la formulation tester contenant 5 % de
TiO
2
, des nanoparticules de TiO
2
(4 nm et 60 nm) pouvaient pntrer travers la couche corne et
se retrouver dans la couche profonde de l'piderme. En effet, des nanoparticules de TiO
2
ont t
dtectes dans le Stratum corneum, le Stratum granulosum et au niveau de la couche basale,
mais pas dans le derme. La capacit des nanoparticules de TiO
2
pntrer travers la peau est
dpendante de leur taille, car seules les nanoparticules de TiO
2
de 4 nm ont atteint la couche la
plus profonde de l'piderme (couche basale).
Par ailleurs, des biopsies (2 mm de diamtre) effectues au niveau de loreille des porcs ont t
prleves 24 heures aprs le dernier traitement. Lanalyse par microscopie lctronique en
transmission (MET) de lpiderme pntr par des nanoparticules de TiO
2
a rvl des
modifications des structures cellulaires telles quun allongement de l'espace intercellulaire, une
dtrioration des desmosomes et la prsence de vacuoles autour du noyau des cellules basales.
Daprs les auteurs, ces rsultats indiquent que l'application topique de nanoparticules de TiO
2

pour une priode prolonge peut induire une toxicit cutane, probablement associe avec la
gnration de radicaux libres, du stress oxydant et un appauvrissement en collagne qui peuvent
entraner un vieillissement de la peau.
Par ailleurs, aprs 60 jours d'exposition par voie cutane chez des souris nude, les nanoparticules
de TiO
2
peuvent pntrer travers la peau, atteindre diffrents tissus et induire diverses lsions
pathologiques au niveau de plusieurs organes majeurs. Les rsultats indiquent quaprs une
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 102
exposition subchronique par voie cutane, les nano particules de TiO
2
saccumulent
principalement dans la rate, le cur et le foie, mais, lexception de lune dentre elles (P25
Degussa : environ 21 nm, surface spcifique de 50 m
2
/ g, 25 % rutile / 75 % anatase), elles ne
peuvent pas passer la barrire hmato-encphalique.
Enfin, comme le souligne le rapport Nanoderm
49
(2007), il subsiste galement encore quelques
questions ouvertes concernant par exemple la peau brle par le soleil ou la peau atopique. En
outre, le rle des microlsions n'est pas clair. La plus grande incertitude est lie au fait que des
publications ont dmontr que la flexion mcanique de la peau peut largement augmenter la
pntration (Rouse J.G., 2007; Tinkle S.S., 2003). D'une faon gnrale, l'exposition cutane aux
nanoparticules peut se produire lors de l'utilisation de cosmtiques et dans l'application
intentionnelle de crmes topiques (et autres traitements mdicamenteux).
Les premires tudes de l'absorption de nanoparticules travers la peau ne sont pas concluantes,
d'autres montrent la pntration dans l'piderme, tandis que d'autres en utilisant des protocoles
plus complexes montrent une absorption plus profonde dans l'piderme (Vega-Villa K.R., 2008).

Gnotoxicit et photognotoxicit
Theogaraj et al. (Theogaraj E., 2007) ont valu la photo-clastognicit (test daberrations
chromosomiques) de 8 types de particules de TiO
2
(14 nm 60 nm ; concentration de 800
5 000 g / ml) dans les cellules CHO en prsence ou non dUV (750 mJ / cm).

Lessai a t ralis en prsence ou non dactivation mtabolique S9. Aucune gnotoxicit (en
absence dUV) ou photognotoxicit (prsence dUV) des nanoparticules de TiO
2
na t montre
dans les conditions tudies.
Cette tude aussi intressante soit-elle ne rsout pas dfinitivement la polmique concernant la
gnotoxicit et la photognotoxicit des nanoparticules de TiO
2
.

Linnainmaa et al. ont valu la photo clastognicit (test du micronoyau, cellules pithliales
hpatiques de rat) de 3 types de particules ultrafines de TiO
2
(UF1 : 20 nm, anatase, sans
enrobage, Degussa, P25 ; UF2 : 20 nm, rutile, enrob avec hydroxyde daluminium et acide
starique, UV-Titan M160 ; TiO
2
pigmentaire : 170 nm, anatase, sans enrobage, Kemira AFDC)
aux doses de 5, 10 et 20 g / cm pendant 21 heures, en prsence ou non dUV. Aucune
clastognicit ou photognotoxicit des particules ultrafines de TiO
2
na t montre dans les
conditions tudies (Linnainmaa K., 1997).
Les rsultats des tudes de gnotoxicit du TiO
2
rutile/anatase et rutile, du rapport Opinion of the
Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for Consumers
Concerning Titanium Dioxide (2000) sont prsents dans les tableaux ci dessous.










49
http://www.uni-leipzig.de/~nanoderm/index.html
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 103
Tableau 10 : Description des 8 types de nanoparticules de TiO
2
testes par Theogaraj et al. (2007)
pour lvaluation de la photo-clastognicit.


Tableau 11 : Rsultats des essais in vitro de gnotoxicit de PSMA1 : nanoparticules TiO
2

(rutile/anatase enrobes)

Source : Opinion of the Scientific Committee on Cosmetic Products and Non-Food Products Intended for
Consumers Concerning Titanium Dioxide (2000), Table 1.
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Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 106
Les effets cellulaires
Les filtres solaires ont retenu lattention des chercheurs au cours des dernires annes, en
particulier cause du potentiel de certaines de leurs composantes gnrer la production
de radicaux libres et de modifications de lADN des cellules donc potentiellement induire
des effets cancrognes. Cela serait principalement li leur photo instabilit.

Sayes et al. ont expos des fibroblastes cutans et des cellules pithliales pulmonaires
humaines des nanoparticules sphriques danatase de 10 nm (une forme cristalline du
TiO
2
), des particules sphriques de rutile de 5,2 nm et des particules sphriques mixtes
danatase/rutile de 3,2 nm avec des surfaces spcifiques de 112 (rutile) 153 m
2
/ g
(anatase). De la cytotoxicit et de linflammation ont t observs partir de concentrations
de 100 Gg / ml selon un comportement dose-rponse classique et les effets ont augment en
fonction du temps et de la concentration. Les effets observs ntaient pas corrls la
surface des particules, lanatase (surface spcifique 153 m
2
/ g) tant plus toxique que le
rutile (surface spcifique 123 m
2
/ g) concentration gale. Les particules les plus
cytotoxiques taient les plus efficaces gnrer des espces ractives de loxygne et la
toxicit augmentait rapidement avec une illumination dans lultraviolet, facteur favorisant la
gnration de radicaux libres (Sayes C.M., 2006).
6.5.2.2 Danger pour lenvironnement
6.5.2.2.1 Donnes cotoxicologiques du nanomatriau tudi
Cf. chapitre 6.4.2.1.1

6.5.2.2.2 Evaluation du danger nano spcifique du produit fini
Trs peu de travaux sont publis sur les risques pour les cosystmes lis au relargage des
nanoparticules de TiO
2
issues de lemploi des cosmtiques (crmes solaires).
Les travaux sur les proprits photocatalytiques des oxydes de titane (rutile et anatase)
existent bien entendu. Ils sont utiliss industriellement pour ces raisons, en particulier pour le
traitement de certains effluents aqueux (photo-oxydation de molcules organiques), ou pour
la photo-oxydation de molcules gazeuses.
Des travaux sintressant aux impacts sur les cosystmes existent. Ils concernent presque
exclusivement des nanoparticules de TiO
2
synthtises en laboratoire.
Actuellement deux articles rcents traitent i) de la production de radicaux libres de loxygne
par des formulations industrielles, ii) des effets chroniques et aigus du TiO
2
(Ti-Lite) sur
Daphnia magna.
Le premier article (Brezova V., 2005) est une tude par rsonance paramagntique
lectronique de crmes solaires qui a compar 9 crmes contenant du nano TiO
2
en fonction
de diffrents filtres organiques, la production despces ractives de loxygne produits par
irradiation de la crme ou des mulsions. Les rsultats montrent que si le nano TiO
2
nest
pas correctement dsactiv, la production dERO est de 0,625 3,75 mg / ml pour une
quantit de TiO
2
de 0,1 0,4 % en masse.
Le deuxime article de K. Wiench et al. concerne les effets du Ti-Lite formul en surface par
des hydroxydes daluminium et/ou oxydes de silice, ainsi que des organo-silicium ou silanes.
Les tests sur les daphnies furent dvelopps selon la norme OCDE. Des analyses
granulomtriques et de sdimentation ont t faites, montrant une agrgation importante
avec des D90 % pouvant atteindre environ 300 Gm
50
. Les auteurs montrent une faible
toxicit aigu, la mortalit ne semblant pas tre un indicateur pertinent. Les tests de

50
Autrement dit, les tests de granulomtrie indiquent que 90 % des particules prsentes ont des
diamtres apparents suprieurs 300 Gm
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 107
reproduction montrent une toxicit chronique des concentrations 1 10 fois moindre que
pour les tests de toxicit aigu (Wiench K., 2009).
Aucune analyse de laltration des particules de T-Lite na t faite, ni de production dERO.
6.5.3 valuation du risque
6.5.3.1 Discussion des rsultats
Ltude de cas ralise montre que, pour lhomme, lexposition cutane au produit considr
est avre. Nanmoins, la plupart des publications montrent quil ny a pas dabsorption (pas
de passage vers la voie systmique). La prsence de nanoparticule de TiO
2
se limite au
Stratum corneum (couche superficielle de lpiderme) pour une peau saine dans les modles
de peau humaine. Cependant, quelques tudes rcentes ont montr que les nanoparticules
de TiO
2
pouvaient passer jusqu lpiderme.

Lenrobage des nanoparticules et lutilisation de la seule espce rutile inhibe les effets
photocatalytiques (production dERO). Aucun effet toxique li une exposition par voie
cutane na t identifi parmi les effets toxiques recherchs et les temps dexposition
considrs. En particulier, les tudes de reprotoxicit, de toxicit chronique et des tudes
standards de gnotoxicit font dfaut.
Pour les effets et le produit considrs dans les tudes et hors populations sensibles (cf.
chapitre incertitudes), le risque ne peut donc pas tre exclu.

Les donnes disponibles ne permettent pas de conclure sur les risques encourus par
lenvironnement.
6.5.3.2 Discussion et identification des incertitudes

Scnario homme :
En labsence dtudes toxicologiques spcifiques au produit C, lidentification des dangers a
t ralise sur la base de quelques tudes gnriques (nanoparticules de dioxyde de titane
forme rutile, mlange rutile/anatase, nanoparticules enrobes ou non, etc.).
Si certaines tudes in vitro et in vivo, utilisant diffrents modles de peau, montrent que les
nanoparticules de TiO
2
ne pntrent pas les tissus cutans vivants et restent limites aux
premires couches du Stratum corneum, l'inverse, d'autres semblent indiquer que le
passage cutan existe et que les nanoparticules de TiO
2
peuvent se retrouver dans la
couche profonde de l'piderme.

Il est indispensable de fournir des tudes toxicologiques adaptes : tudes de reprotoxicit,
de toxicit chronique et des tudes standards de gnotoxicit.
Des catgories de population (peau lses, tudes sur psoriasis, enfants, femmes
enceintes) pourraient tre plus risque et devraient faire lobjet dune attention particulire
lors dune valuation de risque sanitaire.

Scnario environnement :
La stabilit de lenrobage des nanoparticules de dioxyde de titane contenues dans le produit
C, dans les diffrents compartiments environnementaux ainsi que le potentiel dagrgation
dans les milieux ne sont pas connus.
Il nexiste que deux tudes sur le produit C tudi. En labsence de donnes spcifiques, les
quantits relargues associes au produit ont d tre estimes.

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 108
6.5.3.3 Conclusion
Concernant le produit C tudi :
Chez lhomme, pour les effets et le produit considrs dans les tudes, tant donn les
incertitudes sur le potentiel de pntration cutane et sur lactivit phototoxique, les risques
ne peuvent pas tre exclus.
Pour lenvironnement, le risque ne peut tre estim, il ne peut donc pas tre exclu.

Concernant les crmes solaires contenant du TiO
2
nanoparticulaire en gnral :
Il faut galement prciser que, vis--vis de lenvironnement, la quantit de nanoparticules
issues des crmes solaires ne reprsente que 0,1 % de la totalit de la production nationale
de TiO
2
(AFSSET, 2008).
6.6 Produit alimentaire et silice
La silice existe sous des formes cristallines et amorphes. La silice cristalline est abondante
dans la plupart des types de roches (granit, grs), dans le quartz, dans le sable ainsi que
dans les sols. Une exposition excessive la silice cristalline a t relie des maladies
pulmonaires telles que la silicose, la tuberculose, la bronchite chronique, la maladie
pulmonaire obstructive chronique et le cancer du poumon. Sur la base de plusieurs tudes
de toxicit, le Centre International de Recherche sur le Cancer (CIRC) a class la silice
cristalline comme cancrogne de groupe 1 (cancrogne certain pour lhomme).

Les silices amorphes, non-cristallines, sont gnralement dorigine synthtique (silices
amorphes de synthse - SAS) et sont commercialises depuis les annes 1950 avec une
production mondiale actuelle suprieure 1 Mt / an. Les silices amorphes peuvent tre
divises en 2 catgories, les silices naturelles (i.e. terre de diatome) et les silices fabriques
intentionnellement, i.e. les silices amorphes synthtiques (SAS). Ces dernires peuvent
elles-mmes tre classes en SAS prcipites, pyrognes ( thermique ou fume ) et
en silices modifies chimiquement ou physiquement (Poma A., Di Giorgio M.L.,2008). Les
SAS ont de nombreuses applications industrielles comme agents de renforcement ou
paississants dans divers systmes (lastomres, rsines, peintures et encres) ou dans la
clarification de la bire et du vin. Elles peuvent tre galement utilises comme agent
fluidifiant et entrent dans la composition de nombreux produits de consommation tels que
des produits cosmtiques, pharmaceutiques, des ptes dentifrices et sont aussi retrouves
telles quelles dans certains aliments ou utilises comme additifs alimentaires (INRS, 2007;
OCDE, 2004).



Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 109


a
toutes les formes de SAS peuvent tre traites en surface soit physiquement, soit chimiquement.
b
sous-produit de four lectrique
c
transformation partielle en cristobalite
d
synonyme de pyrogne dans certains pays
Les SAS hydrophiles peuvent tre rendues hydrophobes aprs un traitement de surface.

Figure 21 : Diffrentes formes de silice avec le numro CAS (daprs JACC 51)

Les SAS (CAS 7631-86-9), toutes confondues, ont fait lobjet de trs nombreuses tudes.
Les donnes de synthse prsentes ci-aprs sont principalement extraites des documents
suivants :
ECETOC JACC Document N 51 (2006)
51
,
SAS SI EPA Nano Submission, dossier de soumission volontaire lUS EPA dans le
cadre du NMSP (programme d'intendance pour les matriaux nanomtriques,
2008)
52
.
6.6.1 Evaluation de lexposition

Produits alimentaires et silice
La silice est utilise en alimentaire pour diffrentes proprits. Elle peut tre employe par
exemple comme anti-agglomrant ou modificateur de viscosit pour la sauce tomate, mais
aussi les sauces vinaigres. Cet additif est autoris et employ depuis plusieurs dizaines
dannes.
Il existe plus dune quarantaine de produits nanosilice commerciaux ayant la fonction d'agent
anti-agglomrant ou encore dagent fluidisant dans diffrentes applications alimentaires.
Ces diffrentes nanosilices peuvent se retrouver sous la forme de nanoparticules
individuelles et/ou d'agrgats, et/ou de perles nanostructures. Les surfaces spcifiques
associes ces produits peuvent aller de quelques dizaines de m
2
/ g prs de 350 m
2
/ g.
Enfin, ces nanosilices peuvent tre hydrophiles ou hydrophobes.

51
http://staging.idweaver.com/ECETOC/Documents/JACC%20051.pdf
52

http://www.epa.gov/oppt/nano/sassia.pdf?bcsi_scan_16B740F25AA79220=0&bcsi_scan_filename=sa
ssia.pdf
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 110
6.6.1.1 Caractrisation du produit slectionn :
Le produit D tudi est un produit amont nanostructur. Il est important de prciser que ce
produit se prsente sous la forme dagglomrats de nanomatriaux. Les particules isoles
ont des dimensions de lordre de 1 50 nm, les agrgats de 50 1 000 nm et les
agglomrats, eux, de 1 50 m.
Au stade de sa production, le produit ne se prsente pas strictement sous forme de
nanoparticules, mais dagglomrats de nanoparticules. Ainsi, le statut nano en tant que
tel de ce produit nest pas systmatiquement revendiqu par le producteur de silice.
Cependant, si lon considre les caractristiques du produit D (en particulier les surfaces
spcifiques associes), on identifie pourtant lexistence dune structure nanomtrique au sein
de lagglomrat considr. Dautre part, les proprits du produit sur lesquelles reposent la
communication commerciale sont pour la plupart confres par cette structure nanomtrique.
Cest donc sur la base de la dduction de laspect nanostructur, et non partir dune
revendication formelle de la part du producteur, que ce produit et son producteur ont t
identifis.
Compte tenu de nombreux problmes de traabilit imputables pour une large part la non-
explicitation du caractre nano du produit par le producteur, il na pas t possible
didentifier un produit fini disponible sur le march franais contenant ces silices. Cette
difficult identifier un produit fini contenant le nanomatriau dintrt illustre le manque de
traabilit vident entre le produit manufactur en amont et son intgration dans la
formulation dun produit fini destin tre mis sur le march. Le lien entre les producteurs de
nanomatriaux et les revendeurs de produit fini savre trs complexe tablir, notamment
en raison de labsence de communication de cet aspect nano de la part du producteur
envers son client, ce qui semble systmatiquement entraner une absence de revendication
pour les produits finis confectionns partir de ces silices.
Par consquent, il a t dcid de raliser lvaluation de risque, non pas sur un produit fini
ralis avec ces silices, mais sur la silice non encore intgre dans un produit fini. Le produit
D, de marque D1, est donc une silice, produit amont, destine tre intgre dans des
formulations alimentaires pour son rle danti-mottant
53
. Une des applications vises est le
sucre de table (application cite par le producteur D1 lors de laudition du 25 septembre
2009). Le groupe de travail na pas pu accder la teneur exacte de silice mise en uvre
par les clients qui lintgrent dans des formulations pour la fabrication de produits
alimentaires, mais elle ne devrait nanmoins pas dpasser 1 %
54
(massique), limite
rglementaire.
6.6.1.2 Dfinition du scnario dexposition pour lhomme :
Lapplication considre est donc lapplication alimentaire (le sucre de table), la silice
constituant un ingrdient (additif alimentaire) de ce produit fini. Dans le cas de lutilisation du
sucre de table, nous ne considrerons que la voie dexposition par ingestion, qui est la voie
dexposition principale, comme cela a t indiqu dans la mthodologie employe.
Cependant, il convient de mentionner que des voies d'exposition secondaires pourraient
exister en fonction du type de produit :
l'exposition cutane avec la manipulation d'ingrdients lorsquils se retrouvent sous
forme de poudres. Il y a des exemples de plantes aromatiques broyes et sches
pour lesquelles de la nanosilice a t ajoute (proprits hydrophile de la nanosilice
fonctionnalise) ;

53
Additifs qui, dans une denre, limitent l'agglomration des particules
54
Information obtenue lors de laudition du producteur D1 : directive 95/2/CE du parlement europen
et du conseil du 20 fvrier 1995 concernant les additifs alimentaires autres que les colorants et les
dulcorants
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 111
l'exposition par inhalation. De la mme faon, la manipulation de certaines poudres
alimentaires est connue pour mettre des particules dans l'air (exemple du sucre
glace).

Dun point de vue qualitatif, ltat des donnes disponibles ne permet pas de caractriser
correctement ce quoi est rellement expos le consommateur. En effet, la dnomination
commerciale du produit fini considr (sucre) nayant pas t identifie, aucune
caractristique des nanomatriaux intgrs ce produit nest disponible (concentration
prcise massique de la silice dans le produit fini, enrobage des particules, fonctionnalisation
ventuelle etc.). Le mode dutilisation du produit (cuisson par exemple) pourrait galement
fortement modifier ces paramtres physico-chimiques initiaux. De plus, nous ne disposons
daucune donne concernant le comportement de ce type dagglomrat dans un milieu acide
(pH de lestomac) ou ses interactions avec le bol alimentaire. La caractrisation de ltape
dabsorption se rvle complexe.
Sur le plan quantitatif, pour des raisons identiques, nous ne connaissons ni la quantit par
prise ni la quantit journalire absorbe. Il savre donc impossible destimer une dose
partir des informations obtenues. Nous pouvons nanmoins mentionner que lexposition par
voie orale risque dtre leve, puisque ce sont des produits de consommation courante. Si
nous ne considrons que le sucre de table, lexposition est sans doute plus rduite. En effet,
il faut tenir compte des autres produits alimentaires susceptibles de contenir le produit D.

A ce point de llaboration du scnario, trop dlments manquent pour construire un
scnario dexposition raliste.
6.6.1.3 Dfinition du scnario de dispersion environnementale :
Dventuels rejets peuvent tre effectus dans les eaux (lavage de vaisselle notamment),
mais principalement dans les dchets mnagers (jusquaux usines dincinration dordures
mnagres - UIOM). La dispersion dans les sols est suppose quasi inexistante. Lexposition
pour lenvironnement semble donc limite.

Discussion / conclusion
En plus des problmes de traabilit qui ont t voqus ci-dessus par rapport
lidentification dun produit fini contenant des nanoparticules de silice agglomres ou non, il
est important de prciser que le produit D considr existe depuis longtemps sur le march.
Cependant, aucune donne nest disponible sur les quantits potentiellement ingres.
Laudition des producteurs du produit D a particulirement soulign le fait que les industries
productrices de silices amorphes synthtiques communiquent avec leurs clients
(intgrateurs) plutt en terme de proprits physicochimiques que sont censs apporter les
SAS aux produits finis (effet anti-mottant dans le cas tudi ici) quen terme de
caractristiques physicochimiques. En quelques mots, les SAS sont commercialises en tant
que proprits spcifiques et non en tant que nanomatriaux.
Cette particularit de communication, expliquant labsence de revendication explicite du
caractre nanostructur du produit, est justifie par les industriels sur le fondement de
plusieurs considrations. Dune part, historiquement les SAS ont t exploites de manire
industrielle bien avant lmergence des proccupations sanitaires vis--vis des
nanomatriaux. Dautre part, sur le plan industriel, les clients intgrateurs fondent le plus
souvent la slection des SAS quils incorporent sur leurs proprits plutt que sur leur
caractrisation physicochimique fine. Enfin, les industriels considrent les SAS comme des
agglomrats indissociables de nanoparticules de silices, cest dire des particules
nanostructures mais de diamtres apparents suprieurs lchelle nanomtrique, catgorie
de particules ne rpondant pas, suivant linterprtation de beaucoup dentre eux, la
dfinition des nanomatriaux.

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 112
LELC (Federation of European Food Additives, Food Enzymes and Food Cultures
Industries
55
; section Food additives and nanotechnologies) donne pour exemple la silice (E
551) qui a t approuve depuis longtemps comme agent anti-agglomrant pour certaines
applications dans les ingrdients alimentaires en poudre. Au cours de sa production, des
particules primaires de taille nanomtrique formes temporairement s'agglomrent ensuite
pour donner des structures de plus grandes tailles. La silice sous cette forme a t value
et approuve comme additif alimentaire sans danger depuis de nombreuses annes.
Daprs lELC : Un additif alimentaire n'est jamais consomm en tant que tel mais toujours
intgr un faible pourcentage dans les denres et boissons alimentaires complexes. Le
seul cas potentiel o la taille serait un critre dterminant pour le statut nano est celui o
la taille de l'additif est dlibrment conue pour obtenir un effet physiologique spcifique,
c'est dire des substances potentielles qui sont la fois des additifs alimentaires et des
substances nutritives.

En ligne avec les dveloppements scientifiques les plus rcents en la matire, lELC
considre que le critre de taille est insuffisant et inadquat pour qualifier le statut nano
dun additif alimentaire : de nombreux autres aspects doivent tre considrs, en particulier :
la production doit tre intentionnelle (l'additif est dlibrment cr comme forme
nano) ;
les proprits doivent tre caractristiques de l'chelle nanomtrique (proprits
nouvelles et non connues pour le matriau brut) ;
une approche base sur les risques : mettre l'accent sur les nanomatriaux
insolubles ou persistants puisque les matriaux qui sont solubles dans l'eau ou qui
sont biodgradables ne prsentent pas de risques nano-spcifiques.

LELC conclut que, selon la dfinition propose par le Parlement europen la suite de leur
premire lecture de la proposition de la Commission relative au rglement sur les nouveaux
aliments (Novel Foods, 2009), il n'y a pas d'additifs alimentaires produits par la
nanotechnologie.
Il faut nanmoins souligner que les agrgats et agglomrats de SAS doivent tre considrs
comme des entits nano-structures.
6.6.2 valuation du danger
Les donnes de la littrature sur lcotoxicit des silices amorphes synthtiques (SAS) sont
extraites principalement des documents :
ECETOC JACC Document N 51 (2006),
SAS SI EPA Nano Submission, dossier de soumission volontaire lUS EPA dans le
cadre du NMSP (programme d'intendance pour les matriaux nanomtriques, 2008).

Il convient de mentionner quaucune donne ne porte prcisment sur le produit D
spcifiquement tudi, ce malgr sa large diffusion travers les nombreux produits de
consommation courante auxquels il est intgr, et quaucune caractrisation spcifique lie
au caractre nanomtrique des particules utilises na t effectue. Par ailleurs, ces tudes
sont relativement anciennes.
Quelques travaux existent nanmoins sur lcotoxicit des nanoparticules de silice (SiO
2
)
synthtises en laboratoire. Il convient galement de souligner que l'on peut trouver sur les
sites de producteurs, pour une mme dnomination de silice synthtique, des revendications
commerciales portant tant sur des applications dans le domaine alimentaire que dans le
domaine des insecticides, pesticides et fongicides.

55
http://www.elc-eu.org/PDF/Food_additives_and_nanotechnologies_-_ELC_position.pdf
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 113
6.6.2.1 Danger pour lhomme
6.6.2.1.1 Profil toxicologique gnral du nanomatriau

Toxicit :
La toxicit par voie orale des silices amorphes de synthse (SAS) demeure faible
contrairement celle des silices cristallines avec une absence dindication dun pouvoir
silicogne pour les silices amorphes industrielles (INRS, 2007). Le CIRC a conclu que :
compte tenu des donnes actuellement disponibles, les silices amorphes de synthse ne
peuvent pas tre classes quant leur potentiel cancrogne chez lhomme . Nanmoins,
la littrature rcente rvle que la silice amorphe peut prsenter un problme de toxicit
des niveaux de doses leves par voie orale avec un effet toxique sur le foie (So S.J., 2008).
Les rsultats obtenus lors des tudes de bio distribution confirment que le foie, mais aussi la
rate, sont les principaux organes cibles lors de l'administration chronique de nanoparticules
de silice (Cho M., 2009; Nishimori H., 2009; Nishimori H., 2009).

Gnotoxicit :
Concernant la gnotoxicit, les tests effectus et prsents dans le document JACC51
(ECETOC, 2006) utilisent le plus souvent des mthodes standard et nont mis en vidence
aucune gnotoxicit des SAS tudies aussi bien in vitro quin vivo. Cependant, des
remarques concernant ces tudes effectues peuvent tre formules.
Tout dabord, concernant le test d'Ames, celui-ci napparat pas judicieux quant la mise en
vidence dune activit mutagne des particules nanomtriques. En effet, ce jour, nous ne
disposons daucune preuve de pntration des nanoparticules dans la bactrie et les
comportements de la suspension nanoparticulaire avec le gel dagar sont inconnus.
Dautres tudes rcentes utilisant le test des comtes ont dmontr que les nanoparticules
de silice, dont la taille varie de 20 400 nm, ninduisaient pas de gnotoxicit significative
(Barnes C.A., 2008), mais pouvaient entraner une inhibition de la rplication, de la
transcription, et de la prolifration cellulaire (Chen M. et von Mikecz A., 2005). Des
interfrences dordre mcanique avec le fuseau mitotique et lADN ont dj t identifies
comme un mode daction des particules micromtriques et du fait de leur gamme de taille
nanomtrique, il est communment admis que les nanoparticules sont capables dinteragir et
ventuellement dinterfrer avec des constituants cellulaires de dimension comparable tels
que les nuclosomes, les microtubules, les filaments dactine et les centrosomes. Ainsi,
linterfrence avec ces structures peut mener un dysfonctionnement de la division cellulaire
et perturber le trafic cellulaire (Gonzalez L., 2008).
Concernant les tests raliss in vivo (ECETOC 2006 ; US EPA, 2008), lensemble des
tudes a t effectu sur une seule SAS collodale, i.e. Syloid 244. Aucun test rglementaire
na t men sur des SAS pyrognes ou prcipites. Par ailleurs, les organes tudis
napparaissent pas pertinents au regard des essais de bio distribution disponibles dans la
littrature qui ont permis de dterminer que les principaux organes cible sont le foie et la
rate, ceci aprs des traitements uniques ou rpts par voie intraveineuse (Cho M., 2009;
Nishimori H., 2009a; Nishimori H., 2009b).
Ainsi, concernant prcisment le test du micronoyau in vivo, mme si la moelle osseuse
constitue un organe systmique, ce choix napparat pas pertinent puisquil nest pas un
organe cible. Au cours de cette tude, aucune preuve formelle dexposition de la moelle
osseuse na t fournie.
De la mme faon, le test du dominant ltal chez le rat sintresse exclusivement aux
mutations ltales dominantes survenant au niveau des cellules germinales. Cest donc un
test spcifique par rapport au tissu tudi, i.e. les cellules germinales, qui ne sont pas
toujours les mieux exposes et qui ne reprsentent pas un organe cible majeur. Comme
pour le test du micronoyau, aucune preuve formelle dexposition des animaux nest donne.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 114
Enfin, le test host-mediated nest pas un test rglementaire. Il a t utilis pour tudier la
mutagnse de produits aprs activation par les systmes mtaboliques in vivo. Les micro-
organismes permettant de montrer une ventuelle activit mutagne sont en contact avec
le(s) mtabolite(s) mutagne(s) trs peu de temps, ce qui rend ce systme dessai peu
sensible. De plus, ce test utilise des bactries qui, comme cela a t soulign
prcdemment, ne semblent pas adaptes la mise en vidence du potentiel gnotoxique.
Enfin, aucune preuve formelle dexposition des animaux nest fournie.
Il apparat ncessaire dobtenir des indications claires quant au potentiel gnotoxique en
mettant en uvre une batterie de tests standardiss qui permettraient de quantifier les
diffrents types d'aberrations gntiques couvrant toutes les formes possibles de lsions de
l'ADN pouvant tre induites aprs exposition aux nanoparticules (Singh N., 2009). Par
exemple, tant donn les rsultats obtenus lors des tudes de bio distribution, la gnotoxicit
devrait tre value au niveau du foie ainsi quau niveau dun organe directement expos tel
quun organe du tractus digestif (estomac, duodnum, etc.).
Pourtant, comme le souligne le rapport du CPP (Comit de la Prvention et de la
Prcaution), les interactions dpendent fortement de la nature et de la dimension des
particules, ce qui ncessite un approfondissement des connaissances dans le cas des
nanoparticules (CPP, 2006). De plus, il semble qu masse gale et composition chimique
et forme identiques, la rponse biologique (stress oxydant, rponses pro-inflammatoires ou
cytotoxiques, transformation cellulaire) augmente avec la surface spcifique des particules
aussi bien in vitro quin vivo (Park M.V.D.Z., 2009; Singh N., 2009; Waters K.M., 2009; Park
E.J., Park K.,2009). Ainsi, les agrgats et agglomrats de SAS doivent tre considrs
comme des entits nano-structures et, dautre part, la quantit de nanoparticules
lmentaires et/ou dagrgats de taille nanomtrique qu'ils peuvent contenir devrait tre
connue.

Cancrogense / Reprotoxicit :
Des tudes de cancrogense et de toxicit pour le dveloppement de SAS (gel et
prcipite) ont t ralises par voie orale chez diffrentes espces.
Chez la souris B6C3F1 et le rat Fischer, la SAS gel (Sylod 244) administre dans
l'alimentation pendant 21 mois 0, 1,25, 2,5 ou 5 % na induit aucune augmentation
significative des lsions noplasiques ou non noplasiques dans les tissus examins.
Aucune tumeur maligne n'a t observe au cours dune tude ralise sur la SAS
hydrophobe (Arosil R972) chez le rat Wistar expos 100 mg / kg / j via l'alimentation
pendant 24 mois. Aucune diffrence dans le type et/ou dans le nombre de tumeurs bnignes
na t observe par rapport aux contrles. Aucune lsion sur d'autres organes na t
signale (ECETOC, 2006).
Dans toutes les tudes effectues sur la SAS gel, aucune mortalit ou variation significative
de gain de poids chez les mres traites na t retrouve. Aucune diffrence significative
entre le nombre de corps jaunes (mesure chez le lapin seulement), le pourcentage
d'implantation et / ou de rsorption et le poids des petits vivants na t note par rapport aux
contrles. Le nombre danomalies externes, viscrales ou squelettiques des groupes traits
ne diffre pas des contrles (ECETOC, 2006).
Ltude sur SAS prcipite (Arosil R972) a t effectue sur rats Wistar femelles ayant reu
des doses quotidiennes de 500 mg / kg de SiO
2
dans l'alimentation pendant 8 ou
17 semaines avant l'accouplement avec des mles ayant eux-mmes t soumis une
exposition semblable pendant 4,5 mois. Le traitement a t poursuivi au cours de l'levage.
Les animaux de la gnration F0 n'ont pas t affects par le traitement quel que soit le
paramtre considr. Aucun effet reli au traitement au niveau de la taille de la porte ou du
poids la naissance na t rapport. Aucune anomalie clinique, comportementale
significative na t observe chez les petits la naissance. Le dveloppement de la
descendance sest rvl normal et aucune modification lie au traitement na t observe
chez les petits de 4 semaines, pour les deux gnrations (ECETOC, 2006).
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 115
Aucune tude spcifique sur la toxicit pour la fertilit nest disponible.
En conclusion, ce jour, les SAS n'ont pas t classes comme cancrognes ou
dangereuses pour lhomme par le CIRC.

Stabilit :
Concernant la stabilit, dune faon gnrale, la silice amorphe est stable entre pH 1 et
pH ~ 7 - 8 c'est dire l'quilibre avec une concentration en ion H
3
SiO
4
-
de 3.10
-4
mole / l.
La silice possde un PCN
56
autour de pH = 2. Pour des pH > 2 la silice est charge
ngativement. Au del de pH ~ 7 la silice est solubilise et pH ~ 10 la concentration
l'quilibre des ions H
2
SIO
4
2-
est de 10
-2
mole / l. pH acide (voisin de 2 ou 3), l'agrgation
est assure par la diminution des rpulsions, par le fait que les sites Si-O
-
ont une charge
ngative compense par l'adsorption d'un proton H
+
(Iler R.K.1979).
L'action de molcules plus complexes, comme les protines, concourent au mme
processus : les fonctions amines s'adsorbant sur les sites prcdents et pontant des
nanoparticules entre elles. La diffrence viendra des effets striques (encombrement et
rpulsion des protines entre elles). Des agrgats fractals dont la structure et la taille vont
dpendre de nombreux paramtres (charge de la protine, l'affinit, la masse molaire par
rapport la taille des nano silice) vont apparatre (Iler R.K., 1979).

6.6.2.1.2 Evaluation du danger nano spcifique du produit fini
Pour les SAS tudies, aucune donne de stabilit des agrgats / agglomrats nest
disponible (SAS telles quelles ou en solution, diffrents pH, y compris des pH acides
mimant celui dun estomac par exemple).
Les formes solides de SAS manufactures sont constitues majoritairement de particules
agrges et agglomres. On estime que la taille des particules lmentaires varie entre 5 et
100 nm, la taille des agrgats fluctue de 0,1 1 Qm et celle des agglomrats de 1 250 m.
A ce jour, aucune revendication nano nest spcifie par les industriels et il est important
de prciser que pour lensemble des tudes rglementaires, il semble quaucune
caractrisation spcifique lie au caractre nanomtrique des particules utilises na t
effectue (surface spcifique, etc.).
6.6.2.2 Danger pour lenvironnement
6.6.2.2.1 Donnes cotoxicologiques du nanomatriau tudi

Micro-organismes
Une tude trs ancienne de 1970 a valu leffet antibactrien de SAS, de puret leve,
presse et non presse (Aerosil, sans prcision) vis--vis de plusieurs souches bactriennes
(Escherichia coli, Proteus sp., Pseudomonas aeruginosa, Aerobacter aerogenes,
Micrococcus pyrogenes aureus, Streptococcus faecalis, Streptococcus pyrogenes humanus,
Corynebacterium diphtheriae, Candida albicans, Bacillus subtilis). Les micro-organismes
Gram-ngatif
57
(Escherichia coli, Bacterium proteus Pseudomonas aeruginosa et Aerobacter
aerogenes) moururent entre 6 heures et 3 jours aprs leur exposition aux SAS alors que
ceux Gram-positif taient plus rsistants. De plus, la survie des bactries tait plus courte
avec les SAS non presses (Kienholz M.N., 1970).
Plus rcemment, Adams et al. (Adams L.K., 2006) ont conduit avec Escherichia coli et
Bacillus subtilis une tude comparative de la toxicit (pourcentage dinhibition de la

56
valeur du pH pour laquelle la charge de surface est nulle.
57
La paroi des bactries Gram- montre une structure diffrente de la paroi de celles Gram+. Elles
possdent une membrane externe en plus du peptidoglycane (structure commune aux Gram+ et
Gram-).
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 116
croissance) de nanoparticules de SiO
2
, TiO
2
et ZnO. La caractrisation (taille des
nanoparticules) dans le milieu dexposition des bactries a t ralise par microscopie
lectronique transmission. Pour chacune des nanoparticules, une gamme de concentration
variant de 10 5 000 mg / l

a t teste. Les rsultats ont montr que la toxicit des
nanoparticules de SiO
2
tait infrieure celle induite par les nanoparticules de TiO
2
et plus
encore par celles de ZnO. En effet, chez Bacillus subtilis ce nest qu partir de 1 000 mg / l,
que 7 % dinhibition de la croissance ont t observs en rponse lexposition aux
nanoparticules de SiO
2
(205 nm) contre 75 % pour celles de TiO
2
(330 nm). Avec
Escherichia coli, 15 % dinhibition de la croissance ont t nots partir dune exposition des
bactries 500 mg / l

de nanoparticules de SiO
2
ou TiO
2,
contre 38 % pour celles de ZnO. Le
stress oxydant via la formation despces ractives loxygne serait responsable de la
toxicit observe.

Organismes aquatiques
Chez les poissons (Brachydanio rerio), les crustacs (Daphnia magna) et les algues
(Scenedesmus subspicatus), lcotoxicit de diffrents types de SAS de nature hydrophobe
(Aerosil R972, Aerosil R974) ou hydrophile (Aerosil 200 et VN3 Ultrasil ; puret 100 % et
98 % respectivement), a t value au moyen de diffrents tests, conformment aux lignes
directrices de l'OCDE (OCDE TGD N201, 202 et 203) et dans le respect des bonnes
pratiques de laboratoire (OCDE, 1982; OCDE, 1984a; OCDE, 1984b; OCDE, 1984c). Les
rsultats des tests de toxicit aigu nont montr aucun effet pour des concentrations
nominales de 1 000 mg / l

chez les daphnies et 10 000 mg / l

chez les poissons et les algues
(Degussa, 1992b; Degussa, 1992c; Degussa, 1992a; Degussa, 1999). Chez les algues
vertes, des cellules de deux souches : i) SA-3 issue dune symbiose avec Paramecium
bursaria et ii) Chlorella vulgaris c-27 ont t cultives de faon asynchrone en prsence de
0,01 % dAerosil A-300 (100 mg / l

) pendant 9 12 jours. Les conditions de cette tude ont
t diffrentes de celles dun test standardis OCDE, puisque les algues ont t incubes
dans un milieu peu nutritif, les cultures ne progressant pas de faon exponentielle. Les
rsultats ont montr que lAerosil stimule la prolifration des algues par une acclration de
leurs cycles de vie (Gerashchenko B.I., 2002).
Une tude rcente a montr que la taille des nanoparticules de SiO
2
(silice colloidale LUDOX
LS et LUDOX TM40) conditionne leur toxicit vis--vis de lalgue verte Pseudokirchneriella
subcapitata (Van Hoecke K., 2008). Lcotoxicit de ces nanoparticules a t estime au
moyen du test standardis dinhibition de la croissance algale (OCDE TGD N201). Les
distributions de taille des nanoparticules de SiO
2
dans le milieu dexposition ont montr que
celles provenant de LUDOX LS avaient un diamtre moyen de 12,5 0,2 nm et celles de
LUDOX TM40 un diamtre moyen de 27 0,5 nm. Les valeurs des CE20 taient
significativement plus faibles (CE20 = 20 5,0 mg / l) dans le cas dune exposition pendant
72 h des nanoparticules de SiO
2
de 12,5 nm par comparaison avec celles
(CE20 = 28,8 3,2 mg / l) mesures avec les nanoparticules de 27 nm de diamtre. En
revanche, lorsque les CE20 sont exprimes en fonction de la surface, aucune diffrence
significative na t observe entre les nanoparticules de 12,5 nm (CE20 = 4,7 1,2 m
2
/ l) et
27 nm (3,9 0,4 m
2
/ l). La microscopie lectronique transmission a permis de montrer une
adhsion des nanoparticules de SiO
2
la surface des algues mais aucun transport
lintrieur des cellules na t observ.
Il nexiste pas, lheure actuelle, de donnes disponibles concernant des tests de toxicit
chronique chez des espces aquatiques.

Organismes terrestres
La toxicit spcifique des SAS vis--vis des insectes a t tudie principalement en raison
de lutilisation de la silice comme support de biocides dans certaines formulations
d'insecticides. Lcotoxicit de SAS pyrognes (HDK, HDK N20, Cab-O-Sil srie),
prcipites (Sipernat 22), et glifies (srie Gasil) a t teste chez la blatte (Blatella
germanica). La mortalit a t mesure aprs 24 heures d'exposition, 30C et 75 %
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 117
dhumidit relative. Il n'y avait pas de groupe tmoins au cours de cette tude. Les valeurs
de la DL50 taient comprises entre 23 et 786 mg / cm
2
de SAS, selon les chantillons de
silice. Les SAS n'taient pas toxiques lorsque l'humidit atteignait 95 % ou lorsque de l'eau
tait fournie aux organismes. De plus, aucune toxicit par ingestion de SAS vis--vis de B.
germanica na t montre. Il a t suggr que les SAS sadsorberaient la cuticule des
organismes, les rendant plus vulnrables la dshydratation (Le Patourel G.N.J. et Zhou
J.J., 1990). Cette hypothse de la dshydratation de l'insecte a galement t dveloppe
dans une autre tude, o les auteurs (Gowers S.L. et Le Patourel G.N.J., 1984) ont tudi
l'accumulation de SAS (Sipernat 22S) sur le corps du charanon (Sitophilus oryzae) se
dplaant dans des parcelles de bl traites par la silice (150 mg / kg de bl). La masse de
la silice porte par les coloptres aprs 48 heures d'exposition tait de 3,83 mg / insecte et
aucune mortalit na t observe parmi les insectes, en raison de la forte humidit du bl.
Dans certains cas, la silice accumule sur les insectes semblait davantage translucide
quopaque, et les auteurs ont interprt cette caractristique comme tant due la saturation
de la silice avec des lipides de la cuticule. Sur la base de cette observation, les SAS
agiraient en sadsorbant la cire cuticulaire des insectes, les rendant ainsi plus vulnrables
la dessiccation (Le Patourel G.N.J., 1989).
Toutefois, ces tudes ont t classes CoR 3a (documentation insuffisante pour lvaluation)
et CoR 3b (dficiences quant aux mthodologies employes) (ECETOC, 2006).

Stabilit :
Dans les milieux aquatiques (environnementaux ou biologiques), la silice, comme tous les
minraux, est soumise des interactions avec les soluts simples ou complexes.
En prsence de cations simples (Na+, Ca, K, etc.) la silice, du fait de sa charge ngative, va
s'agrger en formant des agrgats fractals 3D, les particules de SiO
2
pouvant se rapprocher
du fait de l'crantage des charges ngatives par l'adsorption de cations sur les sites Si-OH et
Si-O
-
(Iler R.K., 1979).

6.6.2.2.2 Evaluation du danger nano spcifique du produit fini
Ne disposant pas de donnes spcifiques au produit tudi, nous ne pouvons pas
aujourdhui conclure sur les dangers environnementaux associs lutilisation de ce produit.
6.6.3 valuation du risque
6.6.3.1 Discussion des rsultats
Comme cela a t mentionn ci dessus, tant donn le manque de connaissance sur les
caractristiques du produit D dans un produit fini et le manque de donnes sur son utilisation
(homme et environnement), le groupe de travail na pas t en mesure dtablir des
scnarios dexposition, mme qualitatifs, un produit fini qui contiendrait le produit D (silice
majoritairement sous forme dagglomrats). La seule information dont le groupe de travail
dispose est que ce produit de marque D1 est destin tre intgr dans des formulations
alimentaires pour son rle danti-mottant et que, selon les normes rglementaires, la teneur
en silice ne devrait pas dpasser 1 % en masse dans le produit fini. Mme si lexposition na
pas pu tre estime, elle ne doit pas tre nglige.
Concernant le danger pour lhomme, aucune donne spcifique au produit D nest
disponible. Lensemble des tests semblant ncessaires une caractrisation complte du
danger des silices amorphes nayant pas t ralis, les donnes ne permettent donc pas
dexclure un danger pour la sant humaine li une exposition des nanoparticules de
silices amorphes ou des agglomrats.
En labsence de ces donnes, le danger pour lhomme li au produit D ne peut tre exclu.
Concernant le danger pour lenvironnement, compte tenu :
des proprits physicochimiques des SAS ;
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de lubiquit des silices dans lenvironnement ;
de labsence de donnes cotoxicologiques, spcifiques au produit D et/ou sur les
nanoparticules de silice sous forme dagglomrats et/ou sur les nanoparticules de
silice amorphes,
il nest pas possible de conclure sur lcotoxicit potentielle dune exposition court et/ou
long terme dorganismes, le danger pour lenvironnement ne peut donc tre exclu.

Le groupe de travail na pu raliser une valuation des risques pour le produit D. Le risque
ne peut tre exclu, ni pour lhomme, ni pour lenvironnement.
6.6.3.2 Discussion et identification des incertitudes

Scnario homme :
Si la silice a t value et approuve comme additif alimentaire il y a de nombreuses
annes, la majorit des tudes de toxicit prsentes dans des documents (ECETOC,
2006 ; OCDE, 2004) portent sur diverses SAS collodales, prcipites et/ou pyrognes
indistinctement. Celles-ci ont t prises comme une entit unique, identique, sans distinction.
Dans la pratique, chaque type de nanoparticule devrait tre actuellement considre comme
unique et devrait faire lobjet dune investigation toxicologique spcifique indpendante des
tests toxicologiques traditionnels dj raliss sur les espces chimiques entrant dans la
composition de ces particules (CPP, 2006).

Par ailleurs, tant donn que lors des tudes de bio-distribution les nanoparticules de silice
sont retrouves sous forme dagrgats dans le foie et la rate, il serait ncessaire :
dapporter des informations complmentaires sur les modalits de pntration des
nanoparticules dans lorganisme animal, en particulier lexistence de passages
travers la muqueuse intestinale (type de mcanismes, i.e. passif ou actif,
circonstances facilitant la pntration et leur importance) ;
deffectuer des tudes complmentaires de toxicit et en particulier de gnotoxicit
au niveau du foie ainsi quau niveau dun organe directement expos, tel quun
organe du tractus gastro-intestinal (estomac, duodnum, clon).

Il apparat aussi ncessaire de mettre en uvre des tudes de caractrisation et surtout de
dtermination des proprits physico-chimiques des SAS utilises incluant les ventuels
processus de dsagglomrations / dsagrgations. Dans un second temps, et en fonction
des rsultats, des essais toxicologiques complmentaires (toxicit chronique, reprotoxicit,
etc.) pourraient savrer ncessaires.

Certains points peuvent tre galement mentionns :
les formes solides de SAS manufactures sont majoritairement sous forme de
particules agrges et agglomres ;
mme si le produit D existe depuis un certain nombre dannes et quaucune toxicit
na t directement relie son utilisation, il est important de rappeler quen dehors
deffets spcifiques, lventuelle toxicit (surtout lie une exposition chronique)
dune substance est difficile mettre en vidence dans une population gnrale en
raison de nombreux facteurs confondants (co-exposition dautres substances,
mode de vie, etc.) ;
il est probable quune partie non ngligeable de la population soit expose au produit
D dans une quantit potentiellement significative, tant donn que le produit D est
destin tre intgr dans des produits alimentaires de diffrents types, dont
certains sont de consommation courante.
Scnario environnement :
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La dispersion environnementale des SAS intgres aux produits alimentaires est suppose
relativement faible, notamment en raison de lexistence des infrastructures de gestion de la
fin de vie de ces produits (UIOM, stations dpuration des eaux uses).
Cependant, certaines applications de ces mmes silices alimentaires visent des effets
insecticides, pesticides et fongicides et contribueraient ainsi augmenter la dispersion
environnementale de ces nanomatriaux.
6.6.3.3 Conclusion
Chez lhomme et pour lenvironnement, pour les effets et le produit considrs dans ltude,
le risque, sil ne peut pas tre valu, ne peut pas tre exclu.
6.7 Discussion et conclusion sur les cas tudis
Le groupe de travail a rencontr de grandes difficults quant lidentification de produits
contenant des nanomatriaux manufacturs. Le manque de traabilit a t soulign
plusieurs fois. Ceci va de pair avec les problmes actuels dinterprtation du terme
nanomatriau (i.e. : cas de la silice nanostructure) par certains industriels.
Lorsque le produit est identifi, il faut rappeler que laccs aux donnes de caractrisation
est trs limit. Les outils existants ne sont pas suffisants et ne permettent pas dobtenir une
caractrisation aussi prcise que celle exige pour en valuer les risques associs.
Il a donc t difficile de caractriser le nanomatriau chaque tape du cycle de vie et de
raliser des scnarios pertinents et complets pour les produits finis considrs. Cependant,
le groupe de travail a pu constater que, pour un produit fini, seule la connaissance complte
de son cycle de vie permet de caractriser le risque associ.
Une autre difficult provient du fait que la prsence de nanomatriaux dans le produit
nimplique pas ncessairement que ce produit soit source dmission de nanomatriaux. De
plus, lestimation de lexposition relle pour le consommateur seffectue avec le
nanomatriau sortant. Ainsi, si les donnes toxicologiques et cotoxicologiques du
nanomatriau entrant sont ncessaires pour raliser lvaluation de risque sur le produit fini,
les donnes sur le nanomatriau sortant sont indispensables.
Nombreux sont les travaux toxicologiques et cotoxicologiques analyss au cours de cette
tude pour lesquels les travaux de caractrisation sont absents ou incomplets. Cependant,
les articles les plus rcents tendent prendre de plus en plus en compte la caractrisation
des nanomatriaux tudis.
Les tudes de cas reposent la plupart du temps sur des tudes gnriques (toxicologie et
cotoxicologie) non propres au produit de consommation considr.

La majorit des tudes sur lcotoxicit des nanoparticules a t conduite avec des
nanoparticules de synthse et non issues du produit fini considr. De plus, les
concentrations sont si leves quelles ne refltent pas la ralit de lexposition
environnementale ces contaminants. Lhtrognit des travaux et des effets selon les
espces, les protocoles, les nanoparticules et les doses considrs est souligner. La
caractrisation de lexposition aux nanoparticules dans le milieu exprimental est
indispensable dans lanalyse et linterprtation des rsultats obtenus.

Ce rapport a dmontr la difficult raliser des valuations de risque en labsence de
donnes spcifiques, mais a galement dmontr la ncessit du caractre pluridisciplinaire
de lvaluation, notamment en labsence de mthodologies ddies.
Avec une valuation de risque ralise pour quatre produits diffrents, nous remarquons que
le manque de donnes ne permet pas destimer le risque, ce qui nautorise donc pas
lexclure, ceci malgr les multiples comptences qui ont t rassembles pour tudier
chacun des diffrents produits tudis.
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On peut lgitimement se poser la question de la possibilit pratique, pour des PME
notamment, de raliser ces valuations de risque, en labsence de moyens humains et
financiers suffisants.

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7 Recommandations du groupe de travail
Compte tenu du manque de donnes sur la dangerosit potentielle des nanoparticules pour
lhomme et lenvironnement, il serait souhaitable de prendre des mesures concernant :

linformation des consommateurs sur les produits contenant des nanoparticules
manufactures (nano-produits) ;
la limitation prventive de lexposition des consommateurs et de lenvironnement (en
plus des salaris) ;
lincitation la recherche dans les domaines de lvaluation de lexposition, de la
toxicologie et de lcotoxicologie.

Les recommandations suivantes s'appliquent la fois aux nano-produits dj sur le march
et aux futurs nano-produits. Par ailleurs, on ne considre ici que les nanoparticules
manufactures volontairement introduites dans les nano-produits, et non pas celles mises
par la matrice des nano-produits.

Informer les consommateurs pour quils puissent choisir de consommer ou de ne pas
consommer des nano-produits. Donner au consommateur la possibilit de sinformer
facilement sur la composition des nano-produits. Le groupe de travail recommande
ainsi :

denvisager un tiquetage comprhensible pour les consommateurs, pertinent et
spcifique des nanomatriaux prsents dans le nano-produit considr ;
aux industriels de produire ds prsent une fiche descriptive des donnes
concernant les nanoparticules utilises dans leurs nano-produits (concentration,
taille, nature, informations disponibles sur la toxicit, etc.). Les informations
ncessaires devraient tre fournies pour les diffrentes tapes du cycle de vie,
notamment par des fiches de donnes de scurit correctement renseignes.
Lensemble des fiches descriptives pourrait tre disponible sur un seul site internet
gr par un organisme public franais.

Limiter lexposition des consommateurs et de lenvironnement. Le groupe de travail
recommande :

de construire un cadre normatif permettant de caractriser les missions de
nanoparticules par les produits contenant des nanomatriaux manufacturs sous
contraintes dusage normal et en fin de vie ;
de limiter lexposition des consommateurs aux produits contenant des nanomatriaux
manufacturs ainsi que leur dissmination dans lenvironnement, notamment :

o ceux pour lesquels des produits quivalents en termes de fonction, defficacit
et de cot ne contenant pas de nanoparticules existent ;
o les produits dont lutilit dmontre serait faible pour les consommateurs, sur
la base dune analyse socio-conomique de type bnfice / risque ;
o les produits susceptibles de librer des nanoparticules ou des espces
chimiques pouvant prsenter un risque pour lhomme ou pour lenvironnement
au cours de leur utilisation, sous contrainte dusage normal et en fin de vie. Le
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critre de persistance dans lenvironnement doit tre galement pris en
compte, dans lventualit dun impact long terme.

Faire progresser les connaissances sur lexposition et la dangerosit potentielle des
nanoparticules.

Le groupe de travail recommande le lancement dun programme national de
recherches spcifiques sur lvaluation des risques potentiels pour lhomme et pour
lenvironnement induits par les nanoparticules manufactures initiales introduites
dans les nano-produits et celles susceptibles dtre relargues rellement par les
nano-produits.

sagissant des expositions, le groupe de travail recommande :
o de mettre au point des mthodes de prlvement, de dtection et de
caractrisation des nanoparticules dans les fluides biologiques et dans les
diffrents compartiments environnementaux ;
o de dterminer le relargage des nanoparticules des nano-produits sous
contraintes dusage et en fin de vie (combustion, mise en dcharge, etc.) ;
o de comprendre le devenir et le comportement (agglomration, transports
physique et trophique, persistance, etc.) des nanoparticules susceptibles
dtre relargues dans lenvironnement ;
o dtudier lefficacit des filires de fin de vie des nano-produits : recyclage,
stockage, efficacit des procds dincinration, etc.

sagissant de ltablissement de tests normaliss, le groupe de travail recommande
dencourager la participation des quipes de recherche franaises la mise au point
de protocoles exprimentaux normaliss, en relation avec les travaux conduits au
niveau europen et mondial, concernant :
o les nanoparticules types utiliser pour les tests : nanoparticules
manufactures initiales et celles susceptibles dtre mises rellement par les
nano-produits (nanoparticules parfaitement caractrises et stables) ;
o les mthodologies des tests in-vitro et in-vivo ;
o les mthodes de prlvement dans les nano-produits et lenvironnement (air,
eau, sol).

sagissant de la dangerosit des nanoparticules, le groupe de travail recommande :
o de dterminer la toxicit et lcotoxicit des nanoparticules initiales et celles
susceptibles dtre mises rellement par les nano-produits, en termes de
relation niveaux dexposition / effets, pour des doses correspondant des
scnarios dexposition appropris ;
o dorienter les efforts de recherche sur les points cls identifis en toxicologie
pour les nanoparticules, savoir la toxicocintique, la dtermination des
mcanismes dactions (permettant notamment la comprhension des
interactions entre des nanoparticules parfaitement caractrises et les
biomolcules, nutriments, xnobiotiques) et ltude des effets in vivo lis des
expositions aigus et multiples incluant les marqueurs de linflammation, le
stress oxydant et la prolifration cellulaire, avec pour objectif terme la mise
en uvre de modles prdictifs de substitution lexprimentation ;
o dtudier les effets des nanoparticules dans lenvironnement au moyen
dorganismes prsentant des modes dalimentation diffrents et en prenant en
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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compte les mcanismes de bioaccumulation, de bioamplification et
dinteraction avec les autres contaminants.

Sagissant de la standardisation des mthodes, le groupe de travail recommande :
o de poursuivre le dveloppement et la conception dune grille de cotation
permettant de calculer un score de risques nano-spcifiques associs des
produits de consommation ;
o de rflchir une standardisation des nano-produits par un regroupement de
ceux-ci par grandes catgories constitues sur la base d'un rfrencement
des nanoparticules / nanomatriaux en fonction des paramtres essentiels les
spcifiant. L'objectif est ainsi de rduire le nombre de degrs de libert
influant tant sur le niveau d'exposition que sur la toxicit et l'cotoxicit (par
exemple, les nanoparticules prsentant une fonctionnalisation interdisant une
pntration cutane, ou encore les nano-textiles prsentant une non
dispersion dans l'environnement, etc.).

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ANNEXES



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Annexe 1 : Lettre de saisine

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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Annexe 2 : Document support aux auditions







Document de prparation
aux auditions

Nom du produit :


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1. Prsentation et contexte

1.1. Mission de lAfsset

LAfsset a t saisie le 05 juin 2008 par la Direction gnrale de la sant, la Direction
gnrale de la prvention des risques et la Direction gnrale du travail pour laborer et
tudier des scnarios dexposition de la population gnrale quelques nanomatriaux
manufacturs contenus dans un chantillon de produits mis sur le march, en prenant en
compte les diffrentes voies dexposition et les risques potentiels pour la population
gnrale.

Concernant le traitement de cette saisine, lAfsset, dans un premier temps et, conformment
la demande de ses tutelles, a slectionn un panel de produits mis sur le march et
comportant des nanomatriaux manufacturs les plus utiliss. Dans un second temps, il
appartient lAgence dlaborer pour ces produits des scnarios dexposition qui tiennent
compte des voies dexposition ainsi que des risques potentiels pour la population gnrale.

La partie production de nano-objets et protection des travailleurs est un volet qui a t tudi
dans la saisine prcdemment confie lAfsset : Nanomatriaux et scurit au travail .
Aujourdhui les efforts se tournent vers la population gnrale et lenvironnement.

Dans ce cadre lAfsset souhaite se rapprocher la fois :
des principaux producteurs afin de connatre au mieux les caractristiques du
nanomatriau incorpor,
des importateurs (de nanomatriaux ou nano composants),
de certains intgrateurs/ transformateurs/ distributeurs afin de pouvoir laborer des
scenarios dans des cas prcis en connaissant galement au mieux les
caractristiques du nanomatriau entrant ainsi que du sortant.

Nous rappelons que lAfsset sengage respecter la confidentialit de lensemble des
informations qui lui seront fournies dans le cadre de cette tude. Cependant, nous vous
informons que lAfsset dispose du droit daccs tous renseignements utiles dans le cadre
de lexercice de ses missions (article L.1336-1 du code de la sant publique
58
).

1.2. Utilisation du document

Dans le contexte prsent ci-dessus, ce document a pour ambition de servir de support de
prparation daudition. Remis au reprsentant de lorganisme auditionn, il rsume les
principales interrogations de lAfsset.

La finalit de ce document support est donc de permettre au reprsentant auditionn de
mieux cerner les attentes de lAfsset, danticiper les demandes qui seront formules au cours
de laudition et de rassembler les donnes sa disposition qui lui sembleront ncessaires
pour y rpondre de la manire la plus satisfaisante possible.

58
L'agence accde, sa demande et dans des conditions prservant la confidentialit des donnes l'gard des tiers, aux
informations ncessaires l'exercice de ses missions et dtenues par toute personne physique ou morale sans que puisse lui
tre oppos le secret mdical ou le secret en matire commerciale et industrielle .
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 144

Ces attentes vis--vis des multiples parties prenantes tant diffrentes en fonction de leurs
implications au sein de la chane de production de produits contenant des nanomatriaux, le
document compartimente les interrogations de lAfsset suivant la catgorisation suivante :
Les producteurs de nanomatriaux ;
Les clients utilisateurs/transformateurs de nanomatriaux (produit intermdiaire) pour
llaboration dun produit fini.

Lauditionn doit ainsi en premier lieu se positionner et dfinir son rle (producteur /
importateur / client / transformateur) afin de se rfrer aux parties concernant son activit.

Dans un souci dhomognit entre les diffrentes instances travaillant sur ces aspects, un
certain nombre de dfinitions pralables sont rappeles dans le paragraphe suivant ( 1.3).

1.3. Dfinitions

Reprenons le chapitre 2 du rglement (CE) n1907/2006 du Parlement europen et du
Conseil du 18 dcembre 2006 concernant l'enregistrement, l'valuation et l'autorisation des
substances chimiques, ainsi que les restrictions applicables ces substances (REACH),
Article 3, Dfinitions :
substance : un lment chimique et ses composs l'tat naturel ou obtenus par
un processus de fabrication, y compris tout additif ncessaire pour en prserver la
stabilit et toute impuret rsultant du processus mis en uvre, mais l'exclusion de
tout solvant qui peut tre spar sans affecter la stabilit de la substance ou modifier
sa composition ;
prparation : un mlange ou une solution composs de deux substances ou plus ;
article: un objet auquel sont donns, au cours du processus de fabrication, une
forme, une surface ou un dessin particuliers qui sont plus dterminants pour sa
fonction que sa composition chimique ;
producteur d'un article : toute personne physique ou morale qui fabrique ou
assemble un article dans la Communaut;
distributeur: toute personne physique ou morale tablie dans la Communaut, y
compris un dtaillant, qui n'excute que des oprations de stockage et de mise sur le
march d'une substance, telle quelle ou contenue dans une prparation, pour des
tiers ;
utilisateur en aval: toute personne physique ou morale tablie dans la
Communaut, autre que le fabricant ou l'importateur, qui utilise une substance, telle
quelle ou contenue dans une prparation, dans l'exercice de ses activits
industrielles ou professionnelles. Un distributeur ou un consommateur n'est pas un
utilisateur en aval. Un rimportateur exempt en vertu de l'article 2, paragraphe 7,
point c), est considr comme utilisateur en aval ;
mise sur le march: le fait de fournir un produit ou de le mettre la disposition
d'un tiers, titre onreux ou non. Toute importation est assimile une mise sur le
march.

Puis, la norme ISO/TS 27687:2008 (Nanotechnologies -- Terminologie et dfinitions relatives
aux nano-objets -- Nanoparticule, nanofibre et nanofeuillet) :
chelle nano : structures lmentaires dont au moins une des dimensions varie
entre 1 et 100 nanomtres (nm) ;
nano-objet : matriau avec une, deux ou trois dimensions externes
lchelle nanomtrique.
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Mars 2010 Version finale page 145
2. Informations recherches

A. Les producteurs/importateurs

A.1 Les entrants

A.1.1 Caractrisation

- Quel est (sont) le(s) type(s) de nanomatriau(x) que vous utilisez : mtalliques,
cramiques, semi conducteurs, et organiques ?
- Quelle est la composition ? (composition chimique et structure) ?
- Sous quelle forme se prsentent ces nano-objets dans la formulation de vos produits:
particules isoles, agrgats, agglomrats, nano fibres, nano fils, films, massif (nano
composite, organique, poudre nanostructure, poudre micronique) ? Quel est ltat
dagglomration, dagrgation ?
- Quelles sont les degrs de puret et les impurets identifies?
- Quelles sont les caractristiques de tailles pour la partie nanostructure et les
agglomrats/agrgats? (tailles moyennes et distribution)
- Quelles sont les caractristiques de solubilit ? (milieu aqueux et organiques)
- Quelles sont les caractristiques de densit ?
- Quelles sont les caractristiques de porosit ?
- Quelles sont les proprits de stabilit ?
- Quelle est la surface spcifique ?
- Quelle est la physico - chimie de surface ? (prsence dun revtement de surface ?)
- Quelle est la charge de surface ?
- Des donnes toxicologiques et cotoxicologiques pertinentes (Koc, tudes propres
au produit, relatives des produits similaires, ) sont-elles disponibles ?
- Y a-t-il dautres indicateurs de ractivit connus ? (ractivit acido basique,
photocatalytique, redox, formation radicalaire, )
- Quelles sont les autres informations qui vous paraissent pertinentes ?

A.1.2 Production

- Quelle est la voie de synthse des nanomatriaux ? La mthode est-elle brevete ?
- Quel est le conditionnement de votre nanomatriau (poudre en vrac, solution)?
- Quelle est sa stabilit ?


A.2 Les sortants

- Quelles caractrisations (fiche de donnes de scurit) sont fournies avec les
nanomatriaux aux utilisateurs ?
- Des recommandations dutilisations sont-elles fournies ?
- Quelles sont les utilisations prvues / la catgorie dutilisateurs ?
- Quels sont les utilisateurs prvus ? (industrie - prciser lesquelles / bricoleurs /
particuliers / ?)
- Quelles sont les conditions de livraison ? (le produit est-il trait comme un produit
dangereux ?)
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Mars 2010 Version finale page 146
B. Les utilisateurs/ transformateurs/ distributeurs

B.1 Les entrants

- Quel est (sont) le(s) type(s) nanomatriau(x) que vous utilisez pour lapplication
vise : mtalliques, cramiques, semi conducteurs, et organiques ?
- Quelle est la composition ? (composition chimique et structure) ?
- Quelles caractrisations sont fournies par le producteur (Une Fiche de donnes de
scurit est-elle disponible) ? Mentionnent-elles laspect nano ? Sont-elles
suffisantes et adaptes la spcificit nano ? Une batterie de tests est-elle effectue
sur les entrants avant utilisation ?
- Quelles sont les principales proprits attendues des nanomatriaux incorpors dans
vos articles ?
- Utilisez-vous dautres nanomatriaux pour dautres applications ? si oui, prcisez.

B.2 Les sortants

- Quelle est lapplication vise ?
- Utilisez vous ce mme nanomatriau pour diffrentes applications, si oui prcisez.
- Quelles sont les principales tapes de votre processus dincorporation ainsi que les
principaux paramtres de production (quantit de nanomatriaux, concentrations,
rendement,..) ?

B.2.1 Caractrisation

- Quelles sont les caractrisations des produits finis (articles)? Tiennent-elles compte
des nanomatriaux incorpors ?
- Quelle est la composition de larticle ?
- Quelle est la teneur en nano ?

Analyse du cycle de vie depuis la sortie dusine :
- Existe-t-il des tudes de vieillissement spcifiques larticle contenant des
nanomatriaux ? si non, existe-t-il un futur programme dtude sur le sujet ?
- Avez-vous effectu des tudes de comportement de larticle contenant des
nanomatriaux ? (Dispersion, missivit et relargage prvisibles de nanomatriaux
issus du produit) Si non, un programme dtude est-il envisag ce sujet ?
- Les aspects cotoxicologiques sont-ils pris en compte ou feront-ils lobjet dtudes
futures ? Dans laffirmative quelles sont les tudes effectues ainsi que les
paramtres pris en compte ?

B.2.2 Mise sur le march

- Quelles sont les catgories de consommateurs vises ?
- Quelles sont les utilisations prvues ? (frquence, dure / taux de pntration dans la
population, mthodes de conservation par le consommateur, ).
- Existe-t-il des recommandations dutilisation pour le produit ?
- Existe-t-il des dispositifs de recyclage, rcupration des produits en fin de vie ou
durant lutilisation ?
-
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 147
Annexe 3 : Synthse des dclarations publiques dintrts des
experts par rapport au champ de la saisine
RAPPEL DES RUBRIQUES DE LA DECLARATION PUBLIQUE DINTERETS
IP-A Interventions ponctuelles : autres
IP-AC Interventions ponctuelles : activits de conseil
IP-CC Interventions ponctuelles : confrences, colloques, actions de formation
IP-RE Interventions ponctuelles : rapports dexpertise
IP-SC Interventions ponctuelles : travaux scientifiques, essais, etc.
LD Liens durables ou permanents (Contrat de travail, rmunration rgulire )
PF Participation financire dans le capital dune entreprise
SR Autres liens sans rmunration ponctuelle (Parents salaris dans des entreprises
vises prcdemment)
SR-A Autres liens sans rmunration ponctuelle (Participation conseils dadministration,
scientifiques dune firme, socit ou organisme professionnel)
VB Activits donnant lieu un versement au budget dun organisme
SYNTHESE DES DECLARATIONS PUBLIQUES DINTERETS DES MEMBRES DU CES PAR RAPPORT AU
CHAMP DE LA SAISINE

NOM


Analyse Afsset :
Prnom
Rubrique de la DPI
Description de lintrt
en cas de lien dclar
Date de
dclaration des
intrts

ANFOSSO-LDE Fabienne
13 mai 2008



Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

BRENGIER Michel
07 mai 2008
23 octobre 2009


Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

CSARINI Jean-Pierre
15 mai 2008
09 mars 2009
02 novembre 2009
IP-SC

Investigateur principal pour Oenobiol (Rmunration

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 148
personnelle) (2006-2007)
SR-A



Analyse Afsset :
Membre du Conseil scientifique de lassociation
Scurit solaire depuis 1997
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la
thmatique de la saisine

COHEN
Jean-Claude 06 mai 2008
26 octobre 2009


Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

COURANT Daniel

28 avril 2008
03 novembre 2009

Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

COUTURIER Frdric
15 mai 2008



Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

DEBOUZY Jean-Claude
06 mai 2008
24 octobre 2009

Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

DOR
Jean-Franois 29 avril 2008
11 mai 2009

IP-CC
Confrence de presse sur La protection solaire : le
bon usage du soleil pour NIVEA (Rmunration
personnelle) (31/01/2005)
Confrences sur les ingrdients solaires et le
vieillissement. Soleil UV et peau pour la Socit
franaise des antioxydants (Aucune rmunration)
(25/05/2005 et 10/12/2007)


SR-A


Analyse Afsset :
Membre du Conseil scientifique de lassociation
Scurit solaire depuis 1997
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la
thmatique de la saisine

EL KHATIB
Acha 30 avril 2008
20 novembre 2009


Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

FLAHAUT
Emmanuel 29 avril 2008
17 juillet 2008
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 149
23 octobre 2009

IP-RE
Expert du groupe Effets des nanoparticules et
nanomatriaux sur la sant et lenvironnement de
lOMNT (Observatoire des micro et nanotechnologies)
(Aucune rmunration) (depuis 2007)


VB




Analyse Afsset :
Thse sur les interconnexions base de nanotubes
de carbone finance par Intel Ireland donnant lieu
versement lorganisme dappartenance (Universit
Paul Sabatier)
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la
thmatique de la saisine

GAFFET
ric 23 juin 2008
11 aot 2008
06 novembre 2008
04 novembre 2009

IP-RE

Expertises de programme de recherche (Nano) pour
diffrents tablissements: PCRD-Programme NMP
pour la DGXII (Europe) (2003, 2004 et 2005),
lInternational Copper Association (ICA) and the
University of Chile, through the Center for Advanced
Interdisciplinary Research in Materials (CIMAT), le
Belgian Federal Public Planning Service /Science
Policy, lAustralian Research Council, lANR et lANRT
(2000-2008)
DG XII : Expertises 7me PCRD - NMP-2008-SMALL-
1.3-2 (NMP-2008-1.3-2 : Impact of engineered
nanoparticles on health and the environment") et
NMP-2008-1.3-1 "Validation, adaptation and/or
development of risk assessment methodology for
engineered nano-particles (Rmunration
personnelle)
Expert Programme Blanc - Programme Matriaux
Fonctionnels et Procds Innovants - Programme
Contaminants - Ecosystmes et Sant pour lANR
(Agence nationale de la recherche) (Aucune
rmunration) (2008)
Expert franais auprs de la Commission europenne
: RIP - oN 1 : Reach Implementation program on
Nanomaterials (Aucune rmunration) (2009-2012)
Expertise du Programme national Belge NanoToxico
(Rmunration personnelle)
Expertise OSEO du Programme Genesis
(Rmunration personnelle)


IP-AC

Membre de comits de pilotage et de groupes de

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 150
travail sur les nanomatriaux pour lAFNOR (2005-
2007), ECRIN (2005-2007), la Fdration Franaise
de la Chimie (2006-2007)
Expertise ponctuelle pour lAgence de lInnovation
Industrielle (A2i) (2007)
Veille technologique Nanomatriaux pour CEIS-
Innovation 128 (2006)
Membre du Comit scientifique sectoriel de
lANR/PNano Nanosciences et Nanotechnologies
(Aucune rmunration) (2009-2011) et membre du
Comit de Pilotage) (Aucune rmunration) (2007 et
2008)
Membre du Club Amlioration des performances
humaines pour des applications de dfense et de
scurit, quelles opportunits et quelles limites vis
vis des nouvelles technologies? pour la DGA /
CHEAR (Centre des Hautes Etudes de l'Armement)
(Aucune rmunration) (2008-2010)
Membre du Comit de Pilotage NanoForum (CNAM-
DGS) (Aucune rmunration)
Reprsentant franais au sein de 2 GT
NanoMatriaux de lOCDE WPMN: Dveloppement
d'une base de donnes de l'OCDE sur la recherche
en Nanotechnologie et Stratgies de recherche
sur la sret sanitaire et environnementale des
nanotechnologies (Aucune rmunration)
Membre du Comit Scientifique NanoRisks 2008
(Aucune rmunration)
Membre du Groupe d'Appui direct de la Commission
Particulire Dbat Public/CPDP Nanotechnologies
(Rmunration personnelle) (2009-2010)
Expert/Collge Professionnel au CNC (Conseil
National de la Consommation) (Aucune rmunration)
(2008-2009)
Membre du Groupe de Veille sur les Impacts
Sanitaires des Nanomatriaux Nano du HCSP
(Haut Conseil Sant Publique)/DGS (Aucune
rmunration) (depuis 2007)
Expert Nanoparticules, nanomatriaux : effets sur la
sant et l'environnement de lOMNT (Observatoire
des Micro et Nano Technologies) (Aucune
rmunration)

IP-CC

3 confrences sur les nanomatriaux et
nanoparticules chez Saint-Gobain (1 jour en 2005),
EDF (1 jour en 2005) et le Syndicat des Industries
Minrales (2 jours en 2006)
Membre du Comit de Pilotage du Congrs Matriaux
2010 de la Fdration franaise des matriaux
(Aucune rmunration)


IP-A

Prsident de sance au 3rd Nano Safety for Success
Dialogue: Building Trust in Nanotechnologies

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 151
(Bruxelles, 3 et 4/11/2009) (Aucune rmunration)
Membre du Comit d'Organisation International la III
International Conference on Fundamental Bases of
Mechanochemical Technologies (FBMT 2009)
Membre du Comit Scientifique, Prsident de sance
au IV Symposium franco-japonais de Biothique et
d'Ethique des Sciences (Fukuoka-Japon, 17-
19/04/2009) (Aucune rmunration)
Membre International Advisory Committee INCOME
2008 (Aucune rmunration)

VB

Direction dun laboratoire partenaire des programmes
europens sur les nanomatriaux :
-STREP/NAMAMET (impliquant les entreprises TEaM
et TMC), financ par la Commission europenne
-Mechanocolor (impliquant les entreprises DGTec et
XAAR Jet), financ par lANR
Programme NANO-HP-CUIVRE : Recherche
Collaborative Le Bronze Industriel - Rgion
Champagne Ardenne (2009-2010)
Programme ANR/PNano : NanoNorma : partenaire de
ce programme pluridisciplinaire portant sur les
aspects normatifs des nanomatriaux et intgrant des
Juristes (SHS) et des Chimistes des Matriaux (2009-
2011)


SR-A

Co-encadrement dune thse CIFRE pendant la 1
re

anne et pendant la phase de prparation par
Schneider Electric Industries (2004-2006)
Licence de transfert de savoir pour un broyeur
plantaire permettant dlaborer des poudres
nanostructures avec Fritsch (Allemagne) (1999-
2006)
Co-auteur dun brevet franco-amricain de
densification des nanomatriaux, dpos en 1999,
non exploit

Analyse Afsset : Pas de risque de conflit dintrt par rapport la
thmatique de la saisine

HOURS
Martine 30 avril 2008
26 octobre 2009


Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

JOB
Agns 29 avril 2008
23 novembre 2009


Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

LABEYRIE
Antoine 28 avril 2008
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 152
20 novembre 2009

PF

Actions de la SARL Irilab

LD

Administrateur de la socit Irilab depuis 2000

IP-SC


Analyse Afsset :
Essais pour la socit Irilab depuis 2000 (Aucune
rmunration)
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la
thmatique de la saisine

LAMBERT
Jacques 06 mai 2008


Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

LAURIER
Dominique 13 mai 2008


Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

LE BIHAN
Olivier 23 juin 2008
15 octobre 2009


LD
Ingnieur tudes et recherche lINERIS (Institut
National de l'environnement industriel et des risques)


IP-SC et VB










Analyse Afsset :
Projet de recherche partenariale / Usure des
matriaux pour Nanoledge donnant lieu versement
lorganisme dappartenance (< 3 % du budget du
laboratoire) (2007)
tude prliminaire de mesures granulomtriques de
fines particules de silice dans l'air pour Rhodia
donnant lieu versement lorganisme
dappartenance (< 3 % du budget du laboratoire)
(2005)
Caractrisation des particules fines et ultrafines lors
d'oprations de maintenance pour Saint-Gobain
donnant lieu versement lorganisme
dappartenance (< 3 % du budget du laboratoire)
(2009)
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la
thmatique de la saisine

LEPOUTRE
Philippe 25 avril 2008
27 octobre 2009


Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 153
MARCHAL Didier
29 avril 2008
07 janvier 2009
24 octobre 2009
LD

Manager europen chez Johnson Controls Inc. depuis
1997

IP-SC




Analyse Afsset :
tudes de risques et de danger pour EHS Consultants
(Rmunration personnelle) (2005-2007)

Pas de risque de conflit dintrt par rapport la
thmatique de la saisine

MOCH Annie
29 avril 2008
24 octobre 2009

Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

PIRARD
Philippe 15 mai 2008
24 novembre 2009

Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

PLANTON Serge
10 juillet 2008
27 octobre 2009

Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

RUMEAU
Michel 02 mai 2008
20 novembre 2009

Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

de SZE Ren
12 juin 2008
20 novembre 2009

Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

TARDIF
Franois

15 avril 2008
26 novembre 2008
20 novembre 2009

IP-CC








Moyens de mesure des nanoparticules pour
ECRIN (Paris, 2005)
Utilisation des Nanotraceurs pour GFHN
(Grenoble, 2006)
Commission AFNOR Nanotechnologies (Aucune
rmunration)

Principaux contrats de collaboration scientifique

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 154


Analyse Afsset :
Laboratoire CEA/ industriels : HTH, Arjowiggins,
Sofileta, Alcen, Tronico, Faur Ingnierie, EDF, Andra,
Areva, DebioPharm, Philips. (< 50 % du budget du
labo)
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la
thmatique de la saisine
VALLET
Michel 24 avril 2008


Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

VECCHIA
Paolo 29 avril 2008
06 mai 2009
26 octobre 2009


Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/




Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 155
SYNTHESE DES DECLARATIONS PUBLIQUES DINTERETS DES MEMBRES DU GT PAR RAPPORT AU
CHAMP DE LA SAISINE

NOM


Analyse Afsset :
Prnom
Rubrique de la DPI
Description de lintrt

Date de
dclaration des
intrts

BOIZE
Magali 25 novembre 2008
26 fvrier 2009
04 novembre 2009




Analyse Afsset :
IP-AC
Participation au groupe de travail CSIC du Ministre de
lcologie, de lnergie, du dveloppement durable et de la
mer (Aucune rmunration)
Aucun lien dclar
/

BOTTERO
Jean-Yves 12 dcembre 2008
26 novembre 2009

IP-RE

Expert Programme Blanc Programme PNano pour lANR
(agence nationale de la recherche) (Aucune rmunration)
(2008).
Expertise ponctuelle pour lUniversit de Vienne.
(Rmunration personnelle).
Expertise pour lUniversit Mac Gill (Canada). (Aucune
rmunration)
Expertise pour lUniversit de Toulouse 3
Expertises pour C-Nano Ile de France


IP-AC

Membre du Groupe de Veille sur les Impacts Sanitaires des
Nanomatriaux Nano du HCSP (Haut Conseil Sant
Publique)/DGS (Aucune rmunration) (depuis 2007)
Expert Nanoparticules, nanomatriaux : effets sur la sant
et l'environnement pour lOMNT (Observatoire des Micro et
Nano Technologies) (Aucune rmunration) (depuis 2007)
Prsident du Comit dvaluation ECOTECH de lANR
(Aucune rmunration)
Membre du Comit Sectoriel de lANR P3N puis P2N Aucune
rmunration) (depuis 2007)



IP-CC
Congrs de lOCDE (confrence invite) : Nano: the hot
new thing... that has been around for a while (Paris,

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 156
septembre 2009)
Confrence Plnire de lEPFL (cole polytechnique fdrale
de Lausanne) : Le futur des nanoparticules et leurs dangers
potentiels. Nanotechnologies, potentialits et risques pour
lhomme et lenvironnement (30/11/2009)
Minralogie environnementale, colloque de l'Acadmie des
Sciences/Institut de France : Nanomatriaux et
nanoparticules manufactures : Perturbation de lactivit
biologique en milieu environnemental (14-15/09/ 2009)
UNSW Center for Water and Waste Technology Seminars:
Speciation of nanoparticles: Environmental and
ecotoxicological implications (Sydney-Australie, 20/11/2008)
4th SOLEIL Users Meeting : Formation Mechanism of
Nanosized Alumino-Silicate: A Multi Method Study
(Palaiseau-France, 21-22/01/2009)
237th ACS National Meeting : Physical-chemical
characterization of residues from alteration of engineered
nanomaterials : Commercialized sunscreens containing
titanium dioxide nanoparticles (Salt Lake City-USA, 22-
26/03/2009)
SOWACOR First Annual Assembly (confrence invitee) :
Natural and engineered nanoparticles in soils and surface
waters: occurence, benefits and risks (Utrecht-Netherlands,
18-19/05/2009)
Journes Scientifiques C'Nano PACA (confrence plnire) :
Environmental nanotechnologies (Porquerolles, 25-
27/05/2009)
19th Annual V.M. Goldschmidt Conference (confrence
invite) : Formation and growth mechanisms of natural
nanotubes : imogolites et Physical-chemical
characterization and ecotoxicity of residues from alteration of
engineered nanomaterials (Davos-suisse, 21-26/06/2009)
4th International Conference on the Environmental Effects of
Nanoparticles and Nanomaterials.: Aging of commercial
nanomaterials: a new environmental challenge? et
Mobility vs. Attachment of TiO2 nanoparticles in a natural
sandy porous media (Vienne-Autriche, 6-9/09/2009)
Nanoparticle and particle separation 2009 : Environmental
impact of nano-Residues from the Degradation of
commercialized Sunscreens : physico-chemical evolution
during aging and toxicity towards living organisms from
aquatic media (Duke University, Durham-NC-USA, 3-
5/06/2009)
UKY Dpt. Plant & Soil Sciences Seminar Series : Natural
and engineered nanomaterials : reactivity and ecotoxicological
aspects (Lexington KY-USA,14/09/2009)

IP-SC

Towards a definition of inorganic nanoparticles from an
environmental, health and safety perspective . Nature,
Nanotechnology, Vol 4 Issue 10 (2009)

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 157
CeO
2
nanoparticles induce DNA damage towards human
dermal fibroblasts in vitro . Nanotechnology (2009)
Hydration and dispersion of C-60 in aqueous systems : The
nature of Water-Fullerene interactions . Langmuir Vol 25, 19,
(2009)
Role of natural nanoparticles on the speciation of Ni in
andosols of la Reunion . Geochimica et cosmochimica acta
73 (2009)
Synthesis of unexpected large quantities of single-waled
aluminogermanate nanotubes . Research Highlights,
Materials science (2009)
Les membranes cramiques formes partir de
nanoparticules : technologie au service de lenvironnement .
Les Actualits Chimiques 331 (2009)
Synthesis of Large Quantities of Single-Walled
Aluminogermanate Nanotube . J. AM. CHEM.SOC. (2008)
Synthesis of Imogolite Fibers from Decimolar Concentration
at Low Temperature and Ambient Pressure: A Promising
Route for Inexpensive Nanotubes . J. AM. CHEM. SOC.
(2009)
Relation between the Redox State of Iron-Based
Nanoparticles and Their Cytotoxicity toward Escherichia
coli . Environ. Sci. Technol. (2008)
Chemical stability of metallic nanoparticles: a parameter
controlling their potential toxicity in vitro . Environmental
Pollution 157 (2009)

VB







Analyse Afsset :
Direction du CEREGE UMR 6635 CNRS-UPC impliqu dans
des projets de recherche sur les implications
environnementales des nanomatriaux et nanoparticules
(ANR PNANO, ANR CES, ANR PRECODD, 7th PCRD )
Direction du GDR-I ICEINT : International Consortium on
Environmental Implications of Nanotechnology (depuis janvier
2009)

Pas de risque de conflit dintrt par rapport la thmatique
de la saisine

CHEVALIER
Dany 05 novembre 2008
21 novembre 2008
29 janvier 2009
25 octobre 2009

Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

GAFFET ric (membre du CES valuation des risques lis aux
agents physiques, aux nouvelles technologies et aux grands
amnagements )
23 juin 2008
11 aot 2008
06 novembre 2008
04 novembre 2009

IP-RE

Expertises de programme de recherche (Nano) pour diffrents
tablissements: PCRD-Programme NMP pour la DGXII

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 158
(Europe) (2003, 2004 et 2005), lInternational Copper
Association (ICA) and the University of Chile, through the
Center for Advanced Interdisciplinary Research in Materials
(CIMAT), le Belgian Federal Public Planning Service /Science
Policy, lAustralian Research Council, lANR et lANRT (2000-
2008)
DG XII : Expertises 7me PCRD - NMP-2008-SMALL-1.3-2
(NMP-2008-1.3-2 : Impact of engineered nanoparticles on
health and the environment") et NMP-2008-1.3-1 "Validation,
adaptation and/or development of risk assessment
methodology for engineered nano-particles (Rmunration
personnelle)
Expert Programme Blanc - Programme Matriaux
Fonctionnels et Procds Innovants - Programme
Contaminants - Ecosystmes et Sant pour lANR (Agence
nationale de la recherche) (Aucune rmunration) (2008)
Expert franais auprs de la Commission europenne : RIP -
oN 1 : Reach Implementation program on Nanomaterials
(Aucune rmunration) (2009-2012)
Expertise du Programme national Belge NanoToxico
(Rmunration personnelle)
Expertise OSEO du Programme Genesis (Rmunration
personnelle)

IP-AC

Membre de comits de pilotage et de groupes de travail sur
les nanomatriaux pour lAFNOR (2005-2007), ECRIN (2005-
2007), la Fdration Franaise de la Chimie (2006-2007)
Expertise ponctuelle pour lAgence de lInnovation Industrielle
(A2i) (2007)
Veille technologique Nanomatriaux pour CEIS-Innovation
128 (2006)
Membre du Comit scientifique sectoriel de lANR/PNano
Nanosciences et Nanotechnologies (Aucune
rmunration) (2009-2011) et membre du Comit de Pilotage)
(Aucune rmunration) (2007 et 2008)
Membre du Club Amlioration des performances humaines
pour des applications de dfense et de scurit, quelles
opportunits et quelles limites vis vis des nouvelles
technologies? pour la DGA / CHEAR (Centre des Hautes
tudes de l'Armement) (Aucune rmunration) (2008-2010)

Membre du Comit de Pilotage NanoForum (CNAM-DGS)
(Aucune rmunration)
Reprsentant franais au sein de 2 GT NanoMatriaux de
lOCDE WPMN: Dveloppement d'une base de donnes de
l'OCDE sur la recherche en Nanotechnologie et Stratgies
de recherche sur la sret sanitaire et environnementale des
nanotechnologies (Aucune rmunration)
Membre du Comit Scientifique NanoRisks 2008 (Aucune
rmunration)

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 159
Membre du Groupe d'Appui direct de la Commission
Particulire Dbat Public/CPDP Nanotechnologies
(Rmunration personnelle) (2009-2010)
Expert/Collge Professionnel au CNC (Conseil National de la
Consommation) (Aucune rmunration) (2008-2009)
Membre du Groupe de Veille sur les Impacts Sanitaires des
Nanomatriaux Nano du HCSP (Haut Conseil Sant
Publique)/DGS (Aucune rmunration) (depuis 2007)
Expert Nanoparticules, nanomatriaux : effets sur la sant
et l'environnement de lOMNT (Observatoire des Micro et
Nano Technologies) (Aucune rmunration)

IP-CC

3 confrences sur les nanomatriaux et nanoparticules chez
Saint-Gobain (1 jour en 2005), EDF (1 jour en 2005) et le
Syndicat des Industries Minrales (2 jours en 2006)
Membre du Comit de Pilotage du Congrs Matriaux 2010
de la Fdration franaise des matriaux (Aucune
rmunration)


IP-A

Prsident de sance au 3rd Nano Safety for Success
Dialogue: Building Trust in Nanotechnologies (Bruxelles, 3 et
4/11/2009) (Aucune rmunration)
Membre du Comit d'Organisation International la III
International Conference on Fundamental Bases of
Mechanochemical Technologies (FBMT 2009)
Membre du Comit Scientifique, Prsident de sance au IV
Symposium franco-japonais de Biothique et d'Ethique des
Sciences (Fukuoka-Japon, 17-19/04/2009) (Aucune
rmunration)
Membre International Advisory Committee INCOME 2008
(Aucune rmunration)


VB

Direction dun laboratoire partenaire des programmes
europens sur les nanomatriaux :
-STREP/NAMAMET (impliquant les entreprises TEaM et
TMC), financ par la Commission europenne
-Mechanocolor (impliquant les entreprises DGTec et XAAR
Jet), financ par lANR
Programme NANO-HP-CUIVRE : Recherche Collaborative
Le Bronze Industriel - Rgion Champagne Ardenne (2009-
2010)

Programme ANR/PNano : NanoNorma : partenaire de ce
programme pluridisciplinaire portant sur les aspects normatifs
des nanomatriaux et intgrant des Juristes (SHS) et des
Chimistes des Matriaux (2009-2011)


SR-A

Co-encadrement dune thse CIFRE pendant la 1
re
anne et
pendant la phase de prparation par Schneider Electric
Industries (2004-2006)
Licence de transfert de savoir pour un broyeur plantaire
permettant dlaborer des poudres nanostructures avec

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 160
Fritsch (Allemagne) (1999-2006)
Co-auteur dun brevet franco-amricain de densification des
nanomatriaux, dpos en 1999, non exploit
Analyse Afsset : Pas de risque de conflit dintrt par rapport la thmatique
de la saisine

LE BIHAN Olivier (membre du CES valuation des risques lis aux
agents physiques, aux nouvelles technologies et aux grands
amnagements )
23 juin 2008
15 octobre 2009

LD
Ingnieur tudes et recherche lINERIS (Institut National de
l'environnement industriel et des risques)


IP-SC et VB










Analyse Afsset :
Projet de recherche partenariale / Usure des matriaux pour
Nanoledge donnant lieu versement lorganisme
dappartenance (< 3 % du budget du laboratoire) (2007)
tude prliminaire de mesures granulomtriques de fines
particules de silice dans l'air pour Rhodia donnant lieu
versement lorganisme dappartenance (< 3 % du budget du
laboratoire) (2005)
Caractrisation des particules fines et ultrafines lors
d'oprations de maintenance pour Saint-Gobain donnant lieu
versement lorganisme dappartenance (< 3 % du budget
du laboratoire) (2009)
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la thmatique
de la saisine

MOUNEYRAC
Catherine 26 novembre 2008
13 fvrier 2009
12 novembre 2009

IP-SC







Analyse Afsset :
Participation au 7
me
PCRDT NMP-2007-1.3.2. Risk
Assessment of engineered nanoparticles on health and the
environment (2008-2012)
IP-CC
Auditrice promotion 2009-2010 pour lIHEST (Institut des
Hautes tudes pour la Science et la Technologie-Ministre de
lenseignement suprieur et de la Recherche) (Aucune
rmunration)
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la thmatique
de la saisine

NESSLANY
Fabrice 14 aot 2009
16 octobre 2009
27 novembre 2009

VB





tudes de mutagense pour diverses socits
pharmaceutiques, cosmtiques, agro-chimiques donnant lieu
versement lorganisme dappartenance (Institut Pasteur de
Lille) (> 90 % du budget du laboratoire)
Travaux auprs de lAction Conjointe : exprimentations en
gnotoxicit sur des produits fournis par Rhodia dans le cadre
dun programme europen donnant lieu versement

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 161






Analyse Afsset :
lorganisme dappartenance (< 10 % du budget du laboratoire)
Programme rgional sur la Gnotoxicit des nanoparticules :
Caractrisation des proprits physico-chimiques
dterminantes et mise en place dun modle in vitro des voies
ariennes suprieures applicable ltude du danger des
particules issues dun environnement urbano-industriel (<
10 % du budget du laboratoire) (2009-2012)
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la thmatique
de la saisine
RIEDIKER
Michael 28 novembre 2008
08 juillet 2009

Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

TARDIF Franois (membre du CES valuation des risques lis aux
agents physiques, aux nouvelles technologies et aux grands
amnagements )

15 avril 2008
26 novembre 2008
20 novembre 2009

IP-CC










Analyse Afsset :
Moyens de mesure des nanoparticules pour ECRIN
(Paris, 2005)
Utilisation des Nanotraceurs pour GFHN (Grenoble, 2006)
Commission AFNOR Nanotechnologies (Aucune
rmunration)

Principaux contrats de collaboration scientifique Laboratoire
CEA/ industriels : HTH, Arjowiggins, Sofileta, Alcen, Tronico,
Faur Ingnierie, EDF, Andra, Areva, DebioPharm, Philips. (<
50 % du budget du labo)
Pas de risque de conflit dintrt par rapport la thmatique
de la saisine


Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 162
SYNTHESE DES DECLARATIONS PUBLIQUES DINTERETS DES EXPERTS RAPPORTEURS POUR LE
GT PAR RAPPORT AU CHAMP DE LA SAISINE

NOM


Analyse Afsset :
Prnom
Rubrique de la DPI
Description de lintrt

Date de dclaration
des intrts

OULDEHLKIM
Mostafa
26 mai 2008
15 octobre 2009

Analyse Afsset :
Aucun lien dclar
/

VERDIER Ccile
09 septembre 2009
IP-CC
COSMED [Intervenant aux "Rencontres
rglementaires" pour COSMED (Aucune
rmunration) les 30/03/2007 et 26/06/2007.
Intervenant sur les conservateurs dans les produits
cosmtiques : contraintes et nouvelles opportunits
pour lUFR de Pharmacie de Paris 5 en mai 2007
(Aucune rmunration)

Analyse Afsset : Pas de risque de conflit dintrt par rapport la
thmatique de la saisine


Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 163
Annexe 4 : Revue bibliographique de la toxicologie de largent
nanoparticulaire

Introduction sur utilisation de largent et des nanoparticules dargent et lexposition
cutane

Largent a t utilis pour la purification de l'eau, le traitement des plaies, dans les prothses
osseuses, la chirurgie orthopdique de reconstruction, des dispositifs cardiaques, des
cathters et des appareils mdicaux. Le progrs de la biotechnologie a permis lincorporation
de l'argent ionisable dans des textiles usage clinique afin de rduire le risque d'infections
nosocomiales ou pour l'hygine personnelle (Lansdown A.B.G.,2006).
L'action antimicrobienne de l'argent ou des composs base d'argent apparat proportionnel
aux ions argent monovalent bioactifs (Ag
+
) libr et leur disponibilit pour interagir avec les
membranes des cellules bactriennes ou fongiques. Largent mtal et les composs
inorganiques base dargent peuvent sioniser en prsence d'eau, de liquides corporels ou
d'exsudats tissulaires. Les ions d'argent sont alors biologiquement actifs et interagissent
facilement avec les protines, les rsidus d'acides amins, les anions libres et des
rcepteurs membranaires des cellules de mammifres et eucaryotes. La sensibilit des
bactries (et probablement des champignons) l'argent se rapporte au niveau d'absorption
intracellulaire d'argent capable dinteragir et de dnaturer de faon irrversible les principaux
systmes enzymatiques.
Largent montre une faible toxicit pour lhomme et le risque pour lhomme est considr
comme trs faible en cas dexposition clinique par les voies pulmonaire, orale, cutane ou
par voie hmatologique ou urologique. L'ingestion ou l'inhalation chronique de prparations
base d'argent (argent collodal en particulier) peut conduire notamment des phnomnes
de dpositions dargent mtal / particules de sulfures dargent au niveau cutan (argyrie)
et/ou oculaire (argyrose) qui ne reprsentent pas des menaces vitales mais sont
esthtiquement indsirables.
Les effets toxiques des substances base dargent sont proportionnels au taux de libration
dions argent libres (Wijnhoven S.W.P., 2009). Largent mtallique semble poser un risque
minime pour la sant alors que les produits contenant de l'argent soluble sont plus facilement
absorbs et peuvent induire des effets indsirables (Drake P.L. et Hazelwood K.J.,2005;
Wijnhoven S.W.P., 2009). En effet, outre argyrie et argyrose, l'exposition des composs
d'argent soluble peut produire d'autres effets toxiques dont des lsions au niveau du foie et
des reins, des irritations oculaire, cutane, respiratoire et du tractus intestinal ainsi que des
changements hmatologiques (Drake P.L., Hazelwood K.J.,2005). L'argent est absorb dans
le corps humain et gagne la circulation systmique puis est limin par le foie et les reins. Le
mtabolisme de largent est nanmoins modul par l'induction et la liaison aux
mtallothionines. En effet, ce complexe attnue la toxicit cellulaire de l'argent et contribue
la rparation tissulaire.
Dans tous les cas, lallergie largent est une contre-indication connue pour l'utilisation
d'argent (Lansdown A.B.G., 2006).

De la mme faon, les nanoparticules dargent ont des proprits antibiotiques,
antifongiques, antivirales et anti-inflammatoires et sont actuellement utilises dans des
crmes, des textiles, des produits topiques, des prothses chirurgicales, etc. (Wijnhoven
S.W.P., 2009). Selon le rapport trs rcent du RIVM, les nanoparticules dargent sont de loin
les plus utilises dans les produits de consommation. Selon la mise jour la plus rcente de
la base de donnes WWI (aot 2009), le nombre de produits de consommation et de
produits mdicaux contenant des nanoparticules d'argent identifis tait de 259.

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 164
Ainsi, l'utilisation de nanoparticules d'argent devient de plus en plus rpandue et en raison
dune exposition croissante des questions toxicologiques et environnementales doivent tre
souleves et, dans ce cas particulier, des donnes dabsorption cutane devraient tre
disponibles. En conditions normales, la peau est protge par une couche de cellules
mortes, lpiderme, sous lequel se trouve une autre couche, le derme, constitue de cellules
vivantes, innerves et vascularises. Lpiderme, lorsquil est intgre, constitue une efficace
barrire la pntration des particules.
Nanmoins, les quelques travaux de la littrature sintressant au passage des
nanomatriaux montrent quil existe un gradient de taille : plus leur diamtre est petit,
meilleure va tre leur pntration travers lpiderme (de Jalon E.G., 2001). Peu de
donnes sont actuellement disponibles concernant le passage ultrieur des particules dans
la circulation. Il faut noter que lpiderme peut tre facilement altr (coupures, piqres...), ce
qui pourrait contribuer une plus profonde pntration des nanomatriaux en cas
dexposition.

Par ailleurs, si des donnes sur les concentrations en nanoargent dans divers articles tels
que des conteneurs alimentaires, des complments alimentaires, des chaussettes et des
crmes ont t rcemment publies (base de donnes WWI), le nombre de produits de
consommation dont la concentration est rellement connue est trs faible avec seulement 15
% des produits (variable selon quil sagisse de complments alimentaires, de cosmtiques
ou de pansements) qui ont des concentrations connues en nanoargent se situant entre <6 et
10 000 ppm.

Ainsi, paralllement l'attention porte aux nouvelles applications des nanoparticules
d'argent, peu d'tudes renseignent quant aux interactions des nanoparticules d'argent avec
lorganisme. La bio distribution, l'accumulation dans certains organes, la dgradation, les
ventuels effets indsirables et la toxicit des nanoparticules d'argent et des nanomatriaux
manufacturs sont encore peu connus (Chen X., Schluesener H.J.,2008).
En dehors de la concentration, les donnes de migration et de lixiviation sont galement trs
importantes pour l'valuation de l'exposition et le risque pour lhomme pour les produits
contenant des nanoargent.

A- Effet connu sur l'organe cible

Aucune donne concernant labsorption cutane in vivo selon TG 427 (Skin Absorption: In
vivo method) nest actuellement disponible dans la littrature.

En revanche, le potentiel de pntration de la peau nanoparticules dAg a t valu in vitro
par la mesure du flux transcutan ex vivo (Larese F.F., 2009). Les essais ont t effectus
par une mthode de diffusion cellulaire sur cellule de Franz (Franz T.J.,1975) sur des peaux
humaines intactes ou endommages. Cette technique est dcrite dans la ligne directrice N
428 de lOCDE (Absorption cutane : mthode in vitro).

Il faut souligner que les fragments de peau utiliss dans cette tude ont t congels avant
utilisation.

Les nanoparticules dAg utilises au cours de cette tude ont t synthtises selon une
mthode dcrite dans la littrature permettant dviter une agrgation irrversible lors de la
dispersion dans un milieu aqueux (Graf C., 2003). Les mesures faites par microscopie
lectronique en transmission (MET) ont montr que la taille moyenne des nanoAg est de 25
7,1 nm (minimum 9,8 nm, maximum 48,8 nm). Aucune autre indication nest donne quant
la caractrisation de ces nanoparticules dargent.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 165

Une solution physiologique a t utilise comme phase rceptrice (dans le compartiment
receveur) et une quantit de 70 g/cm
2
de nanoparticules dAg enrobes au
polyvinylpirrolidone disperses dans une sueur synthtique a t applique dans le
compartiment donneur, au niveau de la surface externe de la peau pendant 24 heures. Les
mesures analytiques dans le fluide rcepteur ont t ralises par Electro Thermal Atomic
Absorption Spectroscopy. La limite de dtection de largent a t tablie 0,1 g/l. La
pntration de la peau humaine a galement t dtermine par microscope transmission
lectronique reli un systme dacquisition dimages digitales pour vrifier la localisation
des nanoparticules dAg dans les membranes exposes.

Des concentrations mdianes en Ag de 0,46 ng/cm
2
(soit 0,0006 % dabsorption) et de 2,32
ng/cm
2
(soit 0,003 % dabsorption) ont t retrouves dans les solutions rceptrices
respectivement quand les solutions de nanoAg ont t appliques sur une peau intacte et
endommage. Le flux transcutan dAg pendant 24 heures sur une peau endommage a
t de 0,62 0,2 ng/cm
2
(Larese F.F., 2009).
Ces rsultats confirment ceux obtenus au cours dune prcdente tude visant galement
valuer la pntration cutane in vitro des nanoparticules dargent (Filon F.L., 2007). Ces
expriences avaient galement t ralises selon la mthode de diffusion cellulaire utilisant
une cellule de Franz avec des peaux humaines intactes et endommages. Une solution
physiologique a t utilise comme phase rceptrice (dans le compartiment receveur) et une
quantit de 70 g/cm
2
de nanoparticules dAg disperses dans une sueur synthtique a t
applique dans le compartiment donneur au niveau de la surface externe de la peau pendant
24h. Les mesures dans le fluide rcepteur ont t raliss par Electro Thermal Atomic
Absorption Spectroscopy (ETAAS). Une concentration de 0,2 g/l dargent a t retrouve
dans les solutions rceptrices dans lesquelles des membranes de peau endommages ont
t places. Dans les autres essais, les concentrations dans le compartiment receveur se
sont rvles infrieures la limite de dtection. Ces donnes confirment que le passage
transcutan des nanoparticules dargent au travers la peau intacte ou endommage est
ngligeable.

Des tudes de biosurveillance ont galement t effectues chez des patients brls pour
lesquels des pansements enrobs de nanoparticules dargent de 15 nm (Acticoat

, Smith &
Nephew, Inc.) ont t utiliss pour limiter les sur-infections par libration de nanocristaux
d'argent (Trop M.,2006). Les rsultats ont montr que, aprs 1 semaine de traitement local
avec Acticoat

, une hpatotoxicit et une argyrie sont apparues chez un jeune patient avec
des brlures profondes. Les enzymes du foie ainsi que les niveaux d'argent plasmatiques et
urinaires se sont montrs levs avec respectivement 107 et 28 g/kg. Ces effets se sont
galement rvls rversibles puisque ds que l'arrt de lapplication locale d'Acticoat

, les
symptmes cliniques et les enzymes hpatiques sont revenus des valeurs normales. Des
conclusions identiques ont t faites par Vlachou et al. (Vlachou E., 2007) sur une tude
portant sur 30 patients. Il est prciser que, pour ces 2 tudes, on ne sait pas si largent
mesur correspond des ions argent ou de largent nanoparticulaire.

En conclusion, les rsultats obtenus au cours dessais de diffusion cellulaire in vitro sur des
peaux humaines montrent que labsorption de nanoparticules dargent travers la peau
intacte est dtectable mais trs faible. Nanmoins, tant donne lutilisation de fragments de
peau congels au cours de ces tudes, les rsultats pourraient sous-estims lexposition
interne, cest--dire la partie de lexposition externe qui est rellement absorbe par la peau.
Dans le cas dune peau lse, une augmentation de la permation dAg appliqu sous forme
nanoparticulaire est possible (Larese F.F., 2009) voire importante pour Acticoat

(Trop et al.,
2006).

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 166
B- Donnes toxicologiques

Comme nous lavons mentionn, aucun essai de toxicit aigu et/ou chronique par la voie
cutane, nest disponible. En revanche, des tudes de toxicit par voie orale et par inhalation
sont disponibles (Ji J.H., 2007; Ji J.H., 2007; Sung J.H., 2008; Sung J.H., 2009). La voie
dexposition principale est la voie cutane. Par dfaut, ltude de toxicit in vivo par voie
orale chez le rat mle et femelle traits pendant 28 jours est mentionne.

B1- Toxicit par voie orale

Une tude de toxicit in vivo par voie orale a t ralise chez le rat mle et femelle de
souche Sprague-Dawley traits pendant 28 jours avec des nanoparticules dargent de
diamtre moyen de 60 nm (Kim Y.S., 2008).
Cette tude a t conduite selon la ligne directrice OCDE 407 (tude de toxicit orale dose
rpte - pendant 28 jours sur les rongeurs) et a suivi les recommandations des Bonnes
Pratiques de Laboratoires.
Au cours de cette tude, des nanoparticules dargent de diamtre moyen de 60 nm (52,7
70,9 nm) de Namatech (Core) ont t mises en suspension dans la carboxymthylcellulose
0,5 %. Aucune indication nest donne quant la caractrisation de ces nanoAg
notamment dans lexcipient utilis.

Des groupes de 10 rats par lot (5 mles + 5 femelles) ont t traits par voie orale (gavage)
aux doses de 30, 300 et 1 000 mg/kg/jour pendant 28 jours sous un volume de 10 ml/kg.
Des tmoins ngatifs ont t constitus danimaux recevant l'excipient dans les mmes
conditions que les animaux traits (mme voie, mme volume).
Aprs lexamen complet des signes cliniques, du poids, de la consommation d'eau et de
nourriture, les paramtres hmatologiques, de la chimie clinique, le poids des organes et
l'histologie ont t effectus.
Aucun signe clinique visible na t not pendant la priode de 28 jours dexposition et
aucune diffrence dans la consommation de nourriture entre les animaux des groupes traits
et des groupes tmoin na t observe que ce soit chez les rats mles ou les rats femelles
qui nont montr aucun changement significatif de poids corporel ou de poids des organes.

Concernant les effets sur la biochimie sanguine, la phosphatase alcaline et le cholestrol ont
augment significativement pour la dose forte (mles) et pour les doses forte et moyenne
(femelles) indiquant une toxicit hpatique modre. Les protines totales ont diminues
pour la dose forte (mles). Concernant les effets sur les paramtres hmatologiques, des
diminutions significatives par rapport au groupe tmoin ont t observes pour le volume
globulaire moyen (dose forte chez les mles), et pour le nombre de globules rouge,
lhmoglobine et lhmatocrite (doses forte et moyenne chez les femelles).

Lexamen histo-pathologique des foies a rvl une augmentation dose-relie de lincidence
des hyperplasies de la vsicule biliaire autour de la veine centrale du lobule hpatique, avec
une infiltration de cellules inflammatoires, aussi bien chez les rats mles que chez les rats
femelles.

Les concentrations tissulaires ont t dtermines par spectromtrie dabsorption atomique.
Au cours de cette valuation, tous les tissus analyss (reins, foie, testicules, cerveau,
poumons, estomac et sang circulant) des groupes danimaux exposs ces nanoAg
pendant 28 jours ont rvl une augmentation statistiquement significative et dose
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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dpendante de la concentration en Ag. Les reins ont montr une accumulation dargent
sexe-dpendante avec un taux 2 fois plus lev chez les femelles par rapport aux mles ce
qui nest pas le cas aprs des traitements avec lAg non nanomtrique.
Il est prciser que les dosages ont t effectus par spectromtrie dabsorption atomique,
ce qui ne permet pas de connatre la forme (argent soluble ou nanoparticulaire).

La toxicit hpatique value par lanalyse histo-pathologique sest traduite par une dilatation
de la veine centrale, des hyperplasies des canaux biliaires et un nombre de foci augment.
Labsorption par voie orale dargent a montr un effet first-pass hpatique menant une
excrtion biliaire rduisant la distribution systmique. Cette tude tend montrer une
absorption similaire entre nanoAg et Ag. Laugmentation du temps de coagulation relie
une concentration sanguine croissante dAg indique que les nanoparticules dAg absorbes
oralement entrent dans la circulation sanguine et sont capables daffecter la coagulation.

C- Autres donnes toxicologiques

Concernant le potentiel dirritation / sensibilisation cutane, aucune donne concernant nest
actuellement disponible dans des publications internationales. Sur le site Internet dun
producteur de textiles contenant du nano-argent, quelques informations toxicologiques
rsumes sont fournies sur les nanoAg utilises de tailles comprises entre 25 et 250 nm.
Il est indiqu
- toxicit aigu : aucune toxicit na t observe pour des doses infrieures 5g/kg,
- allergnicit : la conclusion a t que la poudre de nanoparticules dAg na induit
aucune sensibilisation cutane chez le cobaye (Allergen test - ISO 10993-
10:1995(E).

Bien quindiques comme tant disponibles auprs du producteur A1 sur simple demande,
nous navons eu aucun retour de ce producteur aprs en avoir effectu la demande.
Aucune autre donne nest actuellement disponible dans la littrature.

C- Reprotoxicit

Aucune donne nest actuellement disponible dans la littrature.

D- Gnotoxicit

Concernant le potentiel gnotoxique, trs peu de donnes sont actuellement disponibles
dans la littrature. A lexception dune publication mentionnant la recherche daberrations
chromosomiques par le test du micronoyau in vivo au niveau de la moelle osseuse (TG 487
In Vitro Micronoyau Test) et de lsions primaires de lADN par mesure de la fragmentation
dans le test des comtes, on ne retrouve aucun rsultat issu des tests rglementaires
standards de gnotoxicit in vitro tels que le test de mutation sur cellules eucaryotes (TG
476 Essai in vitro de mutation gnique sur des cellules de mammifres) ou encore le test
daberrations chromosomiques (TG 473 Essai d'aberration chromosomique in vitro chez les
mammifres).

En revanche, le potentiel gnotoxique in vivo des nanoparticules dargent a t tudi selon
la ligne directrice OCDE 474 (Test de micronoyaux sur les rythrocytes de mammifre) et les
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Mars 2010 Version finale page 168
recommandations des Bonnes Pratiques de Laboratoires au cours de lessai de toxicit de
28 jours.

D1- Gnotoxicit in vivo

Le potentiel gnotoxique des nanoparticules dargent (diamtre moyen de 60 nm) a t
tudi in vivo au cours de lessai de toxicit de 28 jours tel que dcrit prcdemment (Kim
Y.S., 2008). Le test du micronoyau sur moelle osseuse a t effectu selon la ligne directrice
OCDE 474 a suivi les recommandations des Bonnes Pratiques de Laboratoires (BPL).

Au cours de cette tude, de Namatech (Core) ont t mises en suspension dans la
carboxymthylcellulose 0,5 %. Aucune indication nest donne quant la caractrisation
de ces nanoAg notamment dans lexcipient utilis.

Des groupes de 10 rats par lot (5 mles + 5 femelles) ont t traits par voie orale (gavage)
pendant 28 jours aux doses de 30, 300 et 1000 mg/kg/jour de nanoparticules dargent
(distribution 52,7 70,9 nm). Des tmoins ngatifs ont t constitus danimaux recevant
l'excipient dans les mmes conditions que les animaux traits (mme voie, mme volume).
En revanche, aucun tmoin positif comme produit mutagne de rfrence (exemple
cyclophosphamide) na t utilis ce qui empche de garantir la sensibilit de la souche
laction dun agent clastogne.

Les rsultats ne montrent aucune diminution significative du rapport PCE/NCE quelle que
soit la dose tudie, aussi bien chez les animaux mles que chez les animaux femelles. On
peut nanmoins garantir que les animaux ont bien t exposs tant donne la prsence
significative dAg dans les organes examins. En effet, tous les tissus analyss (rein, foie,
testicules, cerveau, poumon, estomac et sang circulant) des groupes danimaux exposs au
nanoAg pendant 28 jours rvlent une augmentation statistiquement significative et dose
dpendante de la concentration en Ag. Les dosages ont t effectus par spectromtrie
dabsorption atomique, ce qui ne permet pas de connatre la forme (argent soluble ou
nanoparticulaire).
Concernant la gnotoxicit, les frquences moyennes drythrocytes polychromatiques
micronucls pour les doses de 30, 300 et 1 000 mg/kg/jour ont t respectivement de 6 -
6,6 et 7,4 vs 5,2 dans le groupe tmoin excipient chez les animaux mles et de 3,5 - 2,4 et
3,4 vs 2,5 dans le groupe tmoin excipient chez les animaux femelles.
En conclusion, aucune augmentation statistiquement ou significative na donc t mise en
vidence chez les animaux traits aucune des doses tudies.

D2- Gnotoxicit in vitro

La gnotoxicit des nanoparticules dAg (6-20 nm et enrobes d'amidon) a t tudie in
vitro paralllement la cytotoxicit sur des fibroblastes de poumon humain, les cellules IMR-
90, ainsi que sur les cellules U251 issues de glioblastomes humains par le test des comtes
et dans le test du micronoyau (AshaRani, PV., 2009).

La cytotoxicit a t value en estimant les changements morphologiques des cellules, leur
viabilit, leur activit mtabolique et le stress oxydant. Les nanoparticules dAg rduisent le
contenu en ATP des cellules, induisent des lsions mitochondriales et augmentent la
production dERO dune faon dose-dpendante.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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La gnotoxicit in vitro a t value au travers 2 tests :
- le test des comtes (ou SCGE pour single cell gel electrophoresis) qui permet
didentifier les composs induisant des lsions de lADN telles que des cassures simple et
double brin, des sites alcali-labiles, des pontages inter et intra-brin ou des pontages ADN-
protines et des cassures simple brin de lADN associes avec des sites de rparation par
excision incomplte dans des cellules de mammifres (Olive P.L., 1990; Ostling O.,
Johanson K.J.,1984; Singh N.P., 1988) et
- le test du micronoyau avec blocage la cytokinse (en prsence de cytochalasine
B
59

1
) qui permet de dtecter simultanment le retard mitotique, l'apoptose, les cassures
chromosomiques, la perte d'un ou plusieurs chromosomes et la non-disjonction (Kirsch-
Volders M., 1997).

Les nanoparticules dargent enrobes d'amidon utilises au cours de cette tude ont t
synthtises selon une mthode publie (Raveendran P., 2003). Le choix de lagent
denrobage a t justifi par une stabilit des nanoAg dans le milieu de culture avec un
degr dagglomration plus bas par rapport aux nanoAg coates avec des protines ou
dalcool polyvinylique. La distribution analyse par MET et absorption UV montre que les
nanoAg utilises ont un diamtre compris entre 6-20 nm. Aucune autre indication nest
donne quant la caractrisation de ces nanoAg.

Les nanoAg ainsi obtenues ont t solubilises dans leau distille. Aucun contrle
(dispersion dans le milieu utilis) des prparations des nanoparticules dargent na t
effectu.

Les cellules IMR-90 et U251 ont t traites pendant 48 heures dans un milieu complet,
des concentrations allant de 25 400 g/ml pour le test des comtes et de 100 200 g/ml
pour le test du micronoyau.

Les lsions de lADN mesures dans le test des comtes et dans le test du micronoyau avec
blocage la cytokinse se sont rvles dose-dpendantes et en nombre plus important
dans les cellules U251 dans lesquelles une augmentation statistiquement significative a t
observe partir de 25 g/ml dans le test des comtes et la concentration minimale
tudie de 100 g/ml dans le test du micronoyau.

Lanalyse par TEM indique la prsence de nanoAg lintrieur des mitochondries et du
noyau, ce qui tend confirmer leur implication directe dans la toxicit mitochondriale et les
lsions de lADN. Un mcanisme possible de toxicit est propos qui implique la perturbation
de la chane respiratoire mitochondriale par les nanoAg conduisant la production dERO et
linterruption de la synthse dATP, entranant son tour des lsions de lADN. Le niveau
de lsions de lADN est probablement augment par dposition, suivie par des interactions
des nanoparticules dAg avec lADN entranant larrt du cycle cellulaire en phase G
2
/M
60
.

AshaRani et al. proposent un mcanisme possible de toxicit qui implique la perturbation de
la chane respiratoire mitochondriale par les nanoAg (dans cette tude, 6-20 nm) conduisant
la production dERO et linterruption de la synthse dATP, entranant son tour des
lsions de lADN. Le niveau de lsions de lADN est probablement augment par dposition,

59
Le test du micronoyau a t ralis en prsence de cytochalasine B qui a t dmontre comme
diminuant lendocytose (Doak et al., 2009), ce qui laisse suspecter une sousestimation de la rponse
gnotoxique dans ce test.
60
Il faut prciser que larrt du cycle cellulaire seffectue normalement en phase G1/S.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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suivie par des interactions des nanoparticules dAg avec lADN entranant larrt du cycle
cellulaire en phase G2/M (Asharani P.V., 2009).

Le potentiel gnotoxique des nanoparticules dAg a galement t recherch par des
mthodes non standard :

la mesure de H2AX (H2AX phosphoryle) qui indique la prsence de cassures
double-brin de lADN qui induisent la phosphorylation de lhistone H2AX au niveau de
la serine 139
le niveau de rgulation de la protine Rad51 (protine cl dans la rparation des
cassures double-brin de lADN)

Le potentiel gnotoxique in vitro des nanoparticules dargent (diamtre compris entre 5-10
nm) a t tudi sur la ligne cellulaire HepG2 par la mesure de la protine H2AX
indiquant la prsence de cassures double-brin de lADN (Kim S., 2009).

La mesure de H2AX a t effectue aprs 24 heures de traitement aux concentrations de
1 et 2 g/ml de nanoAg en utilisant une mthode par immunofluorescence en microscopie
confocale. Les nanoparticules dargent (5-10 nm) utilises au cours de cette tude ont induit
une augmentation significative et dose-relie de H2AX. De la mme faon, AgNO
3

augmente significativement le niveau de H2AX. Cependant, la prsence de N-AC inhibe
linduction de cet effet aussi bien pour les nanoAg que pour les ions Ag
2+
.

Les nanoparticules dargent de diamtre < 10 nm utilises au cours de cette tude ont
montr une activit gnotoxique in vitro sur les cellules HepG2 qui est inhibe par la
prsence dun anti-oxydant. Aucune diffrence significative entre lactivit gnotoxique des
nanoAg (<10 nm) et celle des ions Ag
2+
na t observe.

Cette tude a vis examiner linduction de lsions de lADN par des nanoparticules dAg
(fonctionnaliss en surface ou non par des polysaccharides) dans 2 types de cellules de
mammifre, des cellules souche embryogniques et des fibroblastes embryogniques de
souris (Ahamed M., 2008).
Les 2 types de nanoAg utilises dans cette tude diffrent essentiellement dans leur
composition chimique de surface. Les nanoAg de 25 nm non coates ont t traites par des
hydrocarbures. Les nanoAg de 25 nm coates ont t obtenues par rduction des ions Ag
2+

en solution polysaccharidique.
Les solutions de traitement ont t prpares dans le milieu de culture SANS srum avant
chaque essai.
Lincorporation et la localisation de ces nanoAg dans les 2 types cellulaires ont t vrifies
aprs traitement avec une sonde fluorescente sonde CTG qui colore compltement la cellule
avec confirmation par microscopie confocale. Les rsultats ont montr que les nanoAg non
coates sagglomrent et peuvent tre exclus de certains organites tels que le noyau et les
mitochondries alors que les nanoparticules dargent coates ne forment pas dagglomrats
et sont distribues dans toute la cellule.

Aprs des traitements de 4 et 24 heures, les 2 types de nanoAg ont entran une sur-
rgulation des gnes codant pour la protine p53 (contrle du cycle cellulaire) et pour Rad51
(protine cl dans la rparation des cassures double-brin de lADN) et une augmentation de
lexpression de H2AX phosphoryle (les cassures double-brin de lADN induisent galement
la phosphorylation de lhistone H2AX). Les nanoparticules dAg coates ou non induisent
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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galement de lapoptose telle que mesure par lexpression de la protine annexine V. La
cytotoxicit des nanoAg a t value par la technique au MTT (i.e. 3-[4,5-diMthylThiazol-
2-yl]-2,5diphnyl ttrazolium bromide) sur les cellules souches et les fibroblastes
embryogniques de souris aprs 24, 48 et 72 heures dexposition la concentration de 50
Mg/ml. Le nombre de cellules viables diminue significativement en fonction du temps. Leffet
des nanoAg coates sur la viabilit des 2 types cellulaires est plus important que celui des
nanoAg non coates.

Les auteurs concluent quen fonction de leur chimie de surface, les nanoAg induisent
diffrents degrs de lsions de lADN : les nanoAg coates montrent un niveau de lsions
plus important que les nanoAg non coates. Ces rsultats suggrent que les particules
enrobes de polysaccharides forment moins dagglomrats alors que ltat dagglomration
des particules non coates limite la disponibilit et le passage trans-membranaire.

En conclusion, les rsultats dAhamed et al. indiquent que les nanoAg coates et non
coates ne sont distribues de la mme faon dans la cellule et entranent ainsi des niveaux
de lsions de lADN diffrents dans les 2 types de cellules de mammifre utiliss. Les 2
types de nanoAg induisent une sur-expression de la protine p53, des cassures double-brin
de lADN et de lapoptose aussi bien dans les cellules souche que les fibroblastes
embryogniques de souris. Les nanoAg coates avec des polysaccharides ont induit des
lsions cellulaires plus importantes (niveau dexpression p53, Rad51, p-H2AX, annexine V et
MTT) ce qui suggre un rle important des proprits physico-chimiques de surface
(Ahamed M., 2008).

En conclusion, il existe un rel manque d'informations concernant lactivit gnotoxique des
nanoAg comme le souligne galement Singh et al. (Singh N., 2009). Seul un test in vivo a
t ralis selon une ligne directrice OCDE (Kim Y.S., 2008). La gnotoxicit in vitro des
nanoparticules dAg a t tudie sur des modles cellulaires non standard qui ne suivent
pas les recommandations de lignes directrices de lOCDE. Au cours de ces essais, les
nanoparticules dAg ont induit des lsions de lADN qui suggrent la prsence de cassures
double-brin de lADN, vnements gntiques qui devraient tre vrifis in vivo sur le (ou
les) organe(s) cible.

E- Mcanisme inflammatoire / Potentiel de gnration de ROS/RNS et induction de
stress oxydant

Les rponses cellulaires induites par des nanoparticules dargent ont t values dans de
nombreuses tudes in vitro. Ces tudes se sont particulirement intresses lvaluation
de la cytotoxicit in vitro sur plusieurs modles cellulaires (de diverses origines), la
corrlation entre lactivit cytotoxique et la gnration despces ractives de loxygne
(ERO), latteinte mitochondriale, linduction dapoptose, la ncrose et linflammation.
Ces tudes vise mcanistique ont en outre cherch tudier les liens entre ces diffrents
phnomnes et la taille des nanoparticules dAg et ont vis comparer les rsultats obtenus
avec ceux des ions Ag
+
.

E1 - Cytotoxicit / Potentiel de gnration de ROS/RNS et induction de stress
oxydant in vitro

Hussain et al. (Hussain S.M., 2005) ont tudi la cytotoxicit et la gnration despces
ractives de loxygne (ERO) in vitro sur 2 types de nanoparticules dargent (15 et 100 nm)
sur la ligne BRL 3A (cellules immortalises de spermatogonies de type A isoles partir de
testicules de souriceau).
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 172

Les auteurs indiquent que les nanoparticules dargent utilises au cours de cette
tude ont une taille de 15 et 100 nm. Aucune autre indication nest donne quant la
caractrisation de ces nanoAg.

Les cellules BRL 3A ont t traites pendant 24 heures dans un milieu sans srum, des
concentrations allant de 10 50 g/ml. Aucun contrle (dispersion dans le milieu utilis) des
prparations des nanoparticules dargent na t effectu.

A la fin de la priode de 24 heures de traitement, les changements morphologiques ont t
valus. A des concentrations < 10 g/ml, les cellules BRL 3A ne montrent pas de diffrence
morphologique par rapport aux cellules non traites. En revanche, des doses plus leves,
les cellules BRL 3A apparaissent plus petites et deviennent irrgulires

La cytotoxicit a t value en utilisant 3 marqueurs : le test MTT (mesure de la fonction
mitochondriale), le test au bleu Alamar et le test LDH (marqueur dintgrit membranaire).

Une augmentation significative et dose-relie de LDH a t note des concentrations de
nanoparticules dAg 10 g/ml. Une diffrence significative a t note entre les types de
nanoAg avec une cytotoxicit plus importante pour les nanoparticules de 100 nm par rapport
celles de 15 nm avec des CI50 calcules respectives de 24 et 50 g/ml.
Les rsultats du test au MTT montrent une diminution statistiquement significative partir de
5 g/ml mais aucune diffrence significative na t observe entre les 2 types de nanoAg
(CI50 calcules respectives de 19 et 24 g/ml respectivement pour les nanoAg de 100 et 15
nm).

La gnration dERO a t mesure par cytomtrie en flux en prsence de diactate de 2,7-
dichlorodihydrofluorcine aprs incubation des cellules traites aprs 6 heures aux
nanoparticules dargent de 15 et 100 nm en utilisant une gamme de concentrations allant de
5 50 g/ml. Le glutathion rduit (GSH) a galement t dos. Le potentiel membranaire
mitochondrial a t mesur par la technique de lincorporation de la rhodamine 123.
Les rsultats montrent que le traitement avec les nanoAg (15 et 100 nm) entrane une
augmentation significative et dose-relie des niveaux dERO intracellulaires jusqu environ
10 fois le niveau du tmoin ngatif pour les concentrations de 25 et 50 g/ml. Une dpltion
significative du GSH par rapport au tmoin (denviron 70 %) a t retrouve 25 g/ml de
nanoAg 15 et 100 nm. A linverse, le potentiel membranaire mitochondrial diminue
significativement 25 et 50 g/ml.

En conclusion, selon les auteurs, les nanoparticules dAg utilises dans cette tude (15 et
100 nm) induisent des modifications cellulaires morphologiques, une fuite de LDH et un
dysfonctionnement mitochondrial dans les cellules BRL 3A. Ces nanoAg entranent une
augmentation de la gnration dERO, une dpltion en GSH et une diminution du potentiel
membranaire mitochondrial. Le stress oxydant contribue la cytotoxicit de ces
nanoparticules.

Braydich-Stolle et al. ont galement tudi la cytotoxicit in vitro de nanoparticules dargent
(15 nm) sur une autre ligne de spermatogonies de type A, les cellules C18-4 immortalises
et isoles partir de testicules de souriceau (Braydich-Stolle L., 2005).

Les auteurs indiquent que les nanoparticules dargent utilises au cours de cette tude ont
une taille de 15 nm. Aucune autre indication nest donne quant la caractrisation de ces
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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nanoAg. Les nanoAg ont t disperses dans un tampon phosphate. Aucun contrle
(dispersion dans le milieu utilis) des prparations des nanoparticules dargent na t
effectu.

Les cellules C18-4 ont t traites pendant 48 heures des concentrations allant de 5 100
g/ml. A la fin de la priode de traitement, les changements morphologiques ont t valus.
A partir de la concentration de 10 g/ml, les cellules C18-4 montrent des changements
morphologiques de type ncrotique et apoptotique par rapport aux cellules non traites.
La cytotoxicit a galement t value aprs le traitement en utilisant 2 marqueurs : le test
MTS et le test LDH.
La fonction mitochondriale a t value par la technique utilisant un sel de ttrazolium
(similaire au MTT mentionn plus haut, le MTS[a]). Les rsultats du test MTS[a] montrent un
effet cytotoxique des nanoAg (15 nm) vis--vis des cellules C18-4 avec une CI50 aprs 48
heures de traitement estime 8,75 g/ml. Il est intressant de prciser que, en
comparaison, le carbonate dargent sest rvl nettement moins cytotoxique avec une CI50
estime de 408 g/ml (soit une cytotoxicit environ 50 fois moins importante).

Le dosage de la LDH (marqueur dintgrit membranaire), a permis de calculer une CI50 de
2,5 g/ml pour les nanoAg (en comparaison, le carbonate dAg na induit aucune cytotoxicit
la concentration maximale teste de 100 g/ml ce qui indique une cytotoxicit au moins
environ 40 fois moins importante).

Linduction dapoptose/ncrose dtermine par la technique la coloration au YO-PRO-1
sest montre significative ds la concentration faible de 5 g/ml.

En conclusion, selon les auteurs, les nanoparticules dAg utilises dans cette tude (15 nm)
induisent des modifications morphologiques des cellules, une fuite de LDH et un
dysfonctionnement mitochondrial dans les cellules C18-4, qui se sont rvles plus
sensibles que les cellules BRL 3A (Braydich-Stolle L., 2005).

La cytotoxicit in vitro des nanoparticules dargent (7-20 nm) a galement t tudie sur 2
modles cellulaires secondaires, les lignes A431 (cellules issues dun carcinome cutan
humain) et HT-1080, cellules issues dun fibrosarcome humain (Arora S., 2008) et sur 2
types de cellules primaires de souris, i.e. des fibroblastes et des hpatocytes (Arora S.,
2009).

Les nanoparticules dargent utilises au cours de cette tude ont t synthtises selon une
mthode brevete. Elles ont t utilises sous forme de suspension aqueuse collodale et se
sont montres stables dans le milieu de culture. Les nanoAg sont sphriques et plus de 90
% ont un diamtre compris entre 7-20 nm (analyse par MET haute rsolution). Aucune autre
indication nest donne quant la caractrisation de ces nanoAg.

La premire partie de ces tudes a vis mettre en vidence des changements
morphologiques. Des cellules A431 ou HT-1080 ont t traites pendant 24 heures des
concentrations allant de 0,76 50 g/ml. Les fibroblastes ont t traits pendant 24 heures
des concentrations allant de 6,25 100 g/ml et les hpatocytes de 12,5 200 g/ml. Les
concentrations en argent ont t dtermines dans toutes les prparations par spectromtrie
dabsorption.
A la fin de la priode de 24 heures dincubation, les changements morphologiques ont t
observs. Les rsultats montrent que les cellules HT-1080 et les fibroblastes non traits
apparaissent polydriques ou en toile et prsentent des expansions lamellaires fines qui
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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rejoignent les cellules voisines. Avec des concentrations croissantes de nanoparticules
dargent (de 6,25 50 g/ml pour les HT-1080 et de 50 100 g/ml pour les fibroblastes),
ces cellules apparaissent moins polydriques, plus fusiformes, tasses et arrondies. Les
cellules primaires hpatiques ne montrent aucun changement morphologique jusqu 100
g/ml et apparaissent rfringentes avec des membranes cellulaires irrgulires des
concentrations > 200 g/ml.
Les cellules A431 tmoin sont polygonales avec des contacts intercellulaires importants
alors que les cellules traites avec des nanoparticules dargent (de 6,25 50 g/ml)
montrent une morphologie bipolaire de type fuseau avec moins de contacts intercellulaires. A
des concentrations de nanoparticules dargent > 6,25 g/ml, le nombre de cellules dcrot
significativement et les cellules apparaissent arrondies et rfringentes.

Lvaluation de la cytotoxicit a t effectue en utilisant le test XTT (mesure de la fonction
mitochondriale) aprs traitement par des solutions de nanoparticules dargent pendant 24
heures. Les rsultats montrent une cytotoxicit dose-relie sur les diffrents modles
cellulaires avec des valeurs de CI50 de 10,6 et 11,6 g/ml respectivement sur HT-1080 et
A431 (Arora S., 2008) et de 61 et 449 g/ml respectivement sur des fibroblastes et des
hpatocytes (Arora S., 2009). Les tudes par MET rvlent la prsence dagrgats
sphriques, noirs lintrieur des mitochondries des fibroblastes exposs, lintrieur des
mitochondries et des vacuoles des hpatocytes.

Le stress oxydant a t valu en mesurant le glutathion rduit (GSH), les activits
superoxyde dismutase (SOD), catalase et glutathion proxydase (GPx) ainsi que la
peroxydation lipidique sur des extraits cellulaires obtenus aprs traitement la CI50, i.e. 6,25
g/ml, pendant 24 heures.
Sur cellules HT-1080, le traitement avec des nanoparticules dargent 6,25 g/ml induit une
augmentation de la peroxydation lipidique denviron 2,5 fois. En revanche, une diminution
denviron 2,5 fois du niveau de GSH a t note. Enfin, les changements de niveaux de SOD
(diminution de 1,6 fois), catalase et GPx ne se sont pas rvls statistiquement significatifs.
Sur cellules A431, le traitement avec des nanoparticules dargent 6,25 g/ml induit une
augmentation de la peroxydation lipidique denviron 2 fois alors quune diminution denviron 2
3 fois a t note respectivement pour les niveaux de GSH et de SOD. Enfin, les
changements de niveaux de catalase et GPx ne se sont pas rvls statistiquement
significatifs (Arora S., 2008).

Sur fibroblastes, le traitement avec des nanoparticules dargent induit une diminution de la
lipoperoxydation (1,4 fois) et une lgre augmentation du niveau de GSH denviron 1,2 fois
alors que les niveaux de SOD ne changent pas significativement. Sur hpatocytes primaires,
les nanoparticules dargent induisent une faible augmentation des niveaux de GSH et de
SOD (respectivement environ 1,1 et 1,4 fois) alors que la peroxydation lipidique nest pas
statistiquement modifie (Arora S., 2009).

La dtermination de linduction dapoptose a t recherche par sparation lctrophortique
en gel dagarose (image typique en chelle, dite image en ladder ).
Pour les cellules HT-1080 et A431, des essais de fragmentation de lADN gnomique ont t
effectus aprs 24 heures de traitement la concentration de 6,25 g/ml de nanoparticules
dargent (retenue comme CI50/2 et utilise dans les essais biochimiques et dtermination de
lactivit apoptotique).
Lanalyse tend dmontrer la formation de "DNA ladder" typique de lapoptose qui est
gnralement caractrise par la condensation de la chromatine, la formation de corps
apoptotiques et la fragmentation internuclosomale de lADN. Cette fragmentation ne permet
pas lidentification de cellules entrant en apoptose individuellement. Dans une exprience
indpendante, des essais colorimtriques spcifiques de la caspase 3 (qui dmontre la
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 175
progression irrversible de lapoptose) ont t raliss pour dterminer les concentrations de
nanoparticules dargent induisant de lapoptose et de la ncrose sur cellules A431 et HT-
1080. Ces essais montrent que les nanoparticules dargent induisent de lapoptose des
concentrations comprises entre 1,56 et 6,25 g/ml ou entre 0,78 et 6,25 g/ml
respectivement sur cellules A431 et HT-1080.

Pour les fibroblastes et les hpatocytes primaires, des essais colorimtriques de Caspase-3
ont t raliss des concentrations allant de 0,78 500 g/ml de nanoparticules dargent.
Concernant les fibroblastes, les nanoparticules dargent induisent de lapoptose sur une
gamme de concentrations comprise entre 3,12 et 50 g/ml et de la ncrose partir de 30
g/ml alors que pour les hpatocytes primaires, la gamme de concentrations entranant de
lapoptose est comprise entre 12,5 et 500 g/ml et de la ncrose partir de 900 g/ml.

En conclusion, dans ces tudes, une corrlation est faite entre cytotoxicit/gnration dERO
et potentiel apoptogne de ces nanoparticules dargent (7-20 nm).
Les valeurs de CI50 obtenues sur les cellules primaires (particulirement les hpatocytes)
sont clairement plus leves que celles observes sur les lignes secondaires ce qui
suggre que cellules primaires offrent une plus forte rsistance au traitement par des
nanoAg (Arora S., 2009). La prsence dagrgats lintrieur des mitochondries pourrait
conduire la production dERO. Cependant, sur ces lignes primaires, les auteurs ont
montr que le stress oxydant induit par des concentrations de lordre de CI50/2 est pris en
charge par les systmes enzymatiques anti-oxydant et ne persistait pas suffisamment
longtemps.

Afin de vrifier lhypothse du lien direct entre gnration dERO et apoptose, Hsin et al.
(Hsin Y.H., 2008) ont galement tudi la cytotoxicit et linduction dapoptose in vitro sur de
la poudre dAg (< 250 m, Sigma) et sur 2 types diffrents de particules dargent
nanostructures commerciales (1-100 nm) sur les lignes NIH3T3 (fibroblastes de souris),
A10 (cellules de muscle lisse de rat) et HCT116 (cellules humaines issues dune tumeur
cancreuse de colon).

Les nanoparticules dargent utilises au cours de cette tude ont t obtenues dans le
commerce (Ching-Tai et Sun-Lan). La structure de ces nanoAg a t examine par MET.
Aprs dilution dans leau purifie et schage lair, les chantillons ont t placs sur une
grille de cuivre coate avec un film carbone puis colors dans une solution 2 % dacide
phosphotungstique. Les nanoAg ont un diamtre compris entre 1-100 nm. Aucune autre
indication nest donne quant la caractrisation de ces nanoAg.

Lvaluation de la cytotoxicit a t effectue en utilisant le test MTT (mesure de la fonction
mitochondriale) aprs un traitement de 24 heures.
Pour les cellules NIH3T3 et A10, les particules de nanoAg (Ching-Tai et Sun-Lan) se sont
rvls cytotoxiques (< 50% viabilit) aprs 24 heures de traitement des concentrations
50 g/ml. Les cellules HCT116 se sont rvles moins sensibles avec un effet modeste la
concentration de 50 g/ml de particules de nanoAg (Sun-Lan). Paralllement, lAg non
nanomtrique na montr aucune toxicit 50 g/ml mme aprs 72 heures de traitement,
quel que soit le type cellulaire.
Afin dvaluer limpact de lapoptose dans la cytotoxicit, lactivit apoptique a t mesure
par cytomtrie en flux par la technique lannexine V couple au FITC et en prsence
diodure de propidium (IP) ce qui permet de distinguer plusieurs types de populations : les
cellules vivantes, sur lesquelles lannexine V ne se lie pas, les cellules en phase prcoce
dapoptose (IP-/FITC+), les cellules en phase tardive dapoptose ou en dbut de ncrose
(IP+/FITC+) et les cellules ncrotiques (IP+/FITC-).
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 176
Le pourcentage de cellules NIH3T3 en apoptose prcoce augmente significativement aprs
24 heures de traitement 50 g/ml de particules de nanoAg (Ching-Tai et Sun-Lan) alors
qu la concentration suprieure de 100 g/ml de particules de nanoAg (Ching-Tai),
lapoptose augmente trs peu pour les cellules HCT116. Pour ces cellules, un traitement
prolong jusqu 72 heures entrane lapparition de ncrose mais pas daugmentation de
lapoptose. En parallle, largent non nanomtrique na montr aucun effet sur linduction de
lapoptose quel que soit le type cellulaire.
Linduction dapoptose par les nanoparticules dargent a t confirme par microscopie
confocale par immunofluorescence qui montre, dans les cellules NIH3T3, un relargage de
cytochrome c des mitochondries vers le cytoplasme (associ avec la translocation de Bax du
cytoplasme aux mitochondries) aprs 24 heures de traitement 50 g/ml de particules de
nanoAg (Ching-Tai) alors que, pour les cellules non traites, le cytochrome c reste bien dans
les mitochondries. De la mme faon, le cytochrome c reste localis dans les mitochondries
des cellules HCT116 (et Bax reste cytoplasmique) mme aprs 24 heures de traitement 50
g/ml de particules de nanoAg (Ching-Tai).

Daprs les auteurs, ces rsultats indiquent que lapoptose induite par les nanoparticules
dAg est associe avec la translocation de Bax et le relargage de cytochrome c mitochondrial
pour les cellules NIH3T3, sensibles aux nanoAg, mais pas dans les cellules HCT116.

Pour dterminer les mcanismes dinduction de lapoptose par les nanoAg, les auteurs ont
examin lexpression de certains gnes rgulateurs de lapoptose (PARP et JNK). La
protine PARP-1, qui est active par liaison ou cassures simple ou double brin de lADN et
est en particulier implique dans le systme de rparation par excision de base, intervient
galement dans lapoptose (la mort cellulaire est accompagne de la destruction de la PARP
par les caspases). Les rsultats dmontrent que le clivage de PARP et la phosphorylation de
JNK, accompagns par la phosphorylation de la protine p53, sont augments dans les
cellules NIH3T3 (sensibles au nanoAg) traites avec 50 g/ml de nanoAg Ching-Tai. En
revanche, dans les cellules HCT116, le clivage de PARP nest pas dtect aprs traitement
100 g/ml nanoAg Ching-Tai alors que les protines JNK et p53 sont actives. Cette
observation indique quil y a induction de ncrose plutt que dapoptose dans les cellules
HCT116 aprs 72 heures dexposition aux nanoAg Ching-Tai. Lexpression de la protine
Bcl-2 par analyse RT-PCR (confirme par Western blot) rvle que les nanoAg Ching-Tai
augmentent le niveau dARN Bcl-2 aprs 12 heures de traitement dans les cellules HCT116
mais pas dans les cellules NIH3T3 ce qui signifie quune sur-rgulation des protines anti-
apoptotiques a lieu dans les cellules HCT116.

Par ailleurs, afin de dterminer si la diffrence de sensibilit entre les 2 types cellulaires est
lie des diffrences dincorporation de nanoAg, une cintique daccumulation dAg a t
ralise. Celle-ci montre quun traitement 50 g/ml de nanoAg entrane une augmentation
substantielle des concentrations intracellulaires dAg dans les cellules NIH3T3 aprs 8
heures. Des rsultats similaires sont obtenus 100 g/ml de nanoAg dans les cellules
HCT116. Lincorporation sest rvle trs rapide avec les nanoAg Ching-Tai qui ont montr
une accumulation intracellulaire significative ds la 1
re
minute de traitement.

Le stress oxydant a galement t valu en mesurant des ERO par cytomtrie en flux
aprs incubation des cellules traites en prsence de diactate de 2,7-
dichlorodihydrofluorescine. Les rsultats montrent que le traitement avec des nanoAg
(Ching-Tai) entrane une augmentation significative des niveaux dERO intracellulaires aussi
bien dans les cellules HT-1080 que dans les cellules HCT116. Linhibition de la gnration
dERO par un anti-oxydant, la N-actyl cystine (prcurseur de la synthse du glutathion)
rduit le pourcentage de cellules HT-1080 entrant en apoptose ce qui dmontre que les ERO
(majoritairement produites par les mitochondries) interviennent dans lapoptose induite par
les nanoAg.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 177

En conclusion, Hsin et al. (Hsin Y.H., 2008) ont montr un mcanisme reliant la gnration
dERO et lapoptose (activation de JNK) la cytotoxicit induite par les nanoAg via un
mcanisme apoptotique mitochondrial pour les nanoparticules dAg (1-100 nm).

Carlson et al. ont compar la cytotoxicit et la gnration dERO induites in vitro des
nanoparticules dargent en fonction de leur taille (15, 30 et 55 nm) sur macrophages
alvolaires de rat (Carlson C., 2008).

La caractrisation (taille et morphologie) des nanoparticules dAg, vrifie par SEM
(Scanning Electron Microscopy), a montr des nanoAg sphriques de taille croissante
denviron 15, 30 et 55 nm.
Une fois en suspension, ces nanoparticules tendent sagglomrer et sdimentent
rapidement dans la solution. Des tests pralables de dispersion ont donc t raliss dans
du tampon phosphate physiologique (PBS, pH 7,4), dans de leau dsionise, dans du
dimthylsulfoxyde (DMSO) et dans de lthanol afin dexaminer leur comportement. Sur la
base de ces essais de dispersion, leau dsionise a t retenue pour prparer les
diffrentes solutions stock des nanoAg 15, 30 et 55 nm, les solutions finales tant prpares
dans le milieu de culture Ham F-12K supplment de 10 % de srum de veau ftal.

Des macrophages alvolaires de rat ont t traits pendant 24 heures des concentrations
allant jusqu la concentration maximale de 100 g/ml. A la fin de la priode de 24 heures
dincubation, les changements morphologiques ont t observs sous microscope invers
contraste de phase.
Les macrophages alvolaires de rat tmoin apparaissent symtriques alors que les cellules
traites avec 25 et 75 g/ml de nanoAg 15 nm ont perdu leur membrane plasmique,
apparaissent tasses et de nombreux dbris cellulaires sont observs. Les macrophages
alvolaires de rat traits avec 25 et 75 g/ml de nanoAg 30 nm sont plus larges et des
agglomrats de nanoparticules sont visibles dans et autour des cellules. Concernant les
nanoAg 55 nm, les cellules traits avec 25 et 75 g/ml sagglutinent entre-elles avec la
prsence de larges agglomrats de nanoparticules leur surface.
Les macrophages alvolaires traits avec les nanoparticules dAg de 15 nm semblent avoir
subi les changements morphologiques cellulaires les plus importants. Des images haute
rsolution (TEM) des cellules traites avec 25 g/ml de nanoAg 55 nm pendant 24 heures
montrent une internalisation par les cellules dans des vacuoles. Le mcanisme
dincorporation na pas t tudi notamment, la question de la forme sous laquelle
pntrent les nanoparticules dans la cellule (individualises ou agglomres) na pas t
dtermine.

La cytotoxicit a t value aprs traitement de 24 heures en utilisant 2 marqueurs : le test
MTT et le test LDH.
Les rsultats du test MTT montrent une diminution significative de la fonction mitochondriale
observe pour les macrophages alvolaires exposs aux nanoAg 15, 30 et 55 nm des
concentrations allant de 10 75 g/ml. Les CI50 24 heures calcules sont denviron 28 et
33 g/ml respectivement pour les nanoAg 15 et 30 nm alors que pour les nanoparticules
dAg de 55 nm, la CI50 est > 75 g/ml.
Une diminution significative et dose-relie de la viabilit cellulaire a t note daprs les
rsultats obtenus dans le test de relargage de LDH. Dune faon trs similaire au test MTT,
cette diminution a t observe partir denviron 10 g/ml pour les macrophages alvolaires
exposs aux nanoAg de 15 et 30 nm (CI50 respectives denviron 15 et 14 g/ml) alors que
pour les nanoparticules dAg de 55 nm, la CI50 est > 75 g/ml.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 178
Lensemble de ces rsultats dmontre que le niveau de cytotoxicit tel que dtermin par les
mthodes MTT et LDH est dpendant de la taille des nanoAg.

Afin dvaluer le rle du stress oxydant, les dosages des ERO et du GSH ont t effectus.
La gnration dERO a t mesure par cytomtrie en flux en prsence de diactate de 2,7-
dichlorodihydrofluorcine selon Hussain et al. Le potentiel membranaire mitochondrial a
galement t mesur par la technique de lincorporation de la rhodamine 123 (Hussain
S.M., 2005).
Les rsultats montrent que le traitement avec des nanoparticules dAg de 15 nm entrane
une augmentation significative et dose-relie des niveaux dERO intracellulaires jusqu
environ 7 et 15 fois le niveau du tmoin ngatif respectivement pour les concentrations de 25
et 50 g/ml. Les niveaux dERO ne sont pas significativement augments en prsence de
nanoAg de 30 et 55 nm. Paralllement, le potentiel membranaire mitochondrial diminue
significativement de 60 30 % respectivement avec des nanoparticules dAg de 15 et 30 nm.
Enfin, une dpltion totale du GSH a t retrouve pour les nanoAg 15 et 30 nm 50 g/ml
alors que pour les nanoAg de 55 nm, concentration quivalente, la dpltion nest que
denviron 25% par rapport au tmoin.

Le choix dutiliser des macrophages alvolaires, cellules du tractus respiratoire, apparat
pertinent au regard de la recherche dinduction dERO. Ils sont en effet capables de secrter
des mdiateurs inflammatoires tels que chimiokines et cytokines. Afin de dterminer si les
macrophages alvolaires de rat rpondent un traitement avec des nanoAg de 15, 30 et 100
nm ont t traits pendant 24 heures des concentrations allant de 5 25 g/ml et les
marqueurs caractristiques, TNF-, MIP-2, IL-1 et IL-6 ont t mesurs dans les
surnageants par mthode ELISA. Les rsultats montrent une augmentation significative des
niveaux de TNF-, MIP-2 et IL-1 sur lensemble de la gamme de concentrations et quelle
que soit la taille des nanoparticules dAg. En revanche, il ny a eu aucune dtection dIL-6.

En conclusion, Carlson et al. (Carlson C., 2008) estiment que le niveau de cytotoxicit tel
que dtermin par les mthodes MTT et LDH apparat galement dpendant de la taille des
nanoAg avec une augmentation de la gnration dERO et de la dpltion en GSH en
prsence de nanoAg de 15 nm. Ces donnes suggrent que le stress oxydant contribue la
cytotoxicit de ces nanoparticules.
En revanche, des nanoparticules de tailles suprieures 30 et 55 nm induisent une
cytotoxicit alors que les niveaux dERO ne sont pas significativement augments.
En parallle, une augmentation significative de la scrtion des mdiateurs de processus
inflammatoires tels TNF-, MIP-2 et IL-1b a t note semble indpendante de la taille des
nanoparticules dAg.

Comme dcrit dans le paragraphe ddi la gnotoxicit in vitro, la cytotoxicit des
nanoparticules dAg (6-20 nm et enrobes d'amidon) a t tudie in vitro sur des
fibroblastes de poumon humain, les cellules IMR-90, ainsi que sur les cellules U251 issues
de glioblastomes humains (Asharani P.V., 2009).

La toxicit a t value en estimant les changements morphologiques des cellules, leur
viabilit, leur activit mtabolique et le stress oxydant.
Les cellules IMR-90 et U251 ont t traites pendant 48 heures dans un milieu complet,
des concentrations allant de 25 400 g/ml. A la fin de la priode de traitement, les
changements morphologiques des cellules ont t valus sous microscope. A des
concentrations < 10 g/ml, les cellules IMR-90 et U251 forment principalement des amas.

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 179
La cytotoxicit a t value aprs des traitements de 24, 48 et 72 heures par la numration
des cellules viables et mtaboliquement actives, en se basant sur la quantification du
contenu en ATP. Une diminution dose-dpendante et fonction de la dure de traitement a
t note pour les 2 types cellulaires partir de 48 heures de traitement (aucun effet
observ aprs 24 heures). En parallle, lobservation microscopique ne montre pas de mort
cellulaire massive ce qui implique plutt un arrt mtabolique. Les rsultats de ltude de
la fonction mitochondriale dtermine par la mesure fluorimtrique des cellules ayant une
activit mtabolique (base sur la rduction de rzasurine en rsorufine par les enzymes
mitochondriales et microsomales) confirment cet arrt mtabolique via une chute de
lactivit mitochondriale. Les lsions fonctionnelles et structurelles des mitochondries
pourraient mener vers cet arrt mtabolique suivi dune diminution du contenu en ATP.

La gnration dERO a t mesure par cytomtrie en flux en prsence de diactate de 2,7-
dichlorodihydrofluorcine (qui est fluorescent si il est oxyd par les ERO intracellulaires) et
de dihydrothidium (qui met une fluorescence rouge en prsence du radical superoxyde).
Les cellules IMR-90 et U251 ont t traites pendant 2 ou 5 heures avec des nanoparticules
dargent de 15 nm en utilisant une gamme de concentrations allant de 25 200 g/ml.
Lanalyse montre une augmentation significative de la production de lanion superoxyde
(OH
-
) et de H
2
O
2
dans les cellules traites des concentrations de 25 et 50 g/ml de
nanoAg (15 nm).

Le potentiel apoptogne a t mesur par cytomtrie en flux par la technique lannexine V
couple au FITC et en prsence diodure de propidium (IP) qui permet de distinguer les
cellules en phase prcoce dapoptose (IP-/FITC+), les cellules en phase tardive dapoptose
ou en dbut de ncrose (IP+/FITC+) et les cellules ncrotiques (IP+/FITC-). Les donnes
obtenues indiquent que seul un faible pourcentage de cellules entrent en apoptose ou en
ncrose aprs des traitements fortes concentrations de nanoAg :

augmentation de 5-9 % de la population cellulaire apoptotique prcoce / tmoin
ngatif des concentrations comprises entre 25-100 g/ml qui pourrait tre attribue
la production de ERO observe,
augmentation de 16 % de mort cellulaire par apoptose tardive et ncrose / tmoin
ngatif.

En conclusion, les nanoparticules dAg (6-20 nm) rduisent le contenu en ATP des cellules,
induisent des lsions mitochondriales et augmentent la production dERO dune faon dose-
dpendante.

Afin de distinguer la toxicit induite par les ions Ag+ de celle induite par les nanoparticules
dargent, Kim et al. ont tudi la cytotoxicit in vitro des nanoparticules dargent (< 10 nm)
sur la ligne continue HepG2, cellules issues dun hpatome humain (Kim S., 2009).

Les nanoparticules dargent utilises au cours de cette tude ont un diamtre < 10 nm et ont
t obtenues sous forme de solution. Un chantillon de cette solution a t plac sur une
grille de cuivre, sch lair et la structure a t examine par MET. Les nanoAg utilises
ont galement t observes aprs incubation de 24 heures 37C dans le milieu de
culture.

La morphologie observe par TEM a montr que les particules dargent nanostructures en
solution initiale sont sphriques, bien disperses et de diamtre compris entre 5-10 nm.
Cependant, des agglomrats de 100-300 nm ont t observs aprs incubation dans le
milieu de culture sans cellules. La localisation intracellulaire a galement t dtermine.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 180
Aprs un traitement pendant 24 heures, les cellules HepG2 ont subi une pr- fixation 2%
de glutaraldhyde suivie dune post-fixation au ttroxyde dosmium (1 %). Puis, les cellules
ont t dshydrates dans diffrents bains dthanol avant dtre incluses dans la rsine de
Spurr. Les sections de 1 m et de 80 nm ont t analyses laide dun microscope fond
noir et par microscope transmission lectronique (MET). Lanalyse a montr la prsence
de dpts de larges amas dans le cytoplasme et dans le noyau des cellules HepG2 traites
avec ces nanoparticules dargent. Dans le cytoplasme, les agglomrats de nanoAg ont t
observs dans des compartiments ressemblant des endosomes et des lysosomes.

Le niveau dions Ag
+
dans la solution de particules dargent nanostructures a t dtermin
aprs dsionisation laide dune rsine changeuse dions et comparaison aux solutions
initiales. Les rsultats dmontrent une trs faible teneur en ions Ag
+
libres dans les solutions
initiales de nanoAg.

La cytotoxicit a t value aprs traitement de 24 heures en utilisant 3 marqueurs : le test
MTT (mesure de la fonction mitochondriale), le test au bleu Alamar et le test LDH (marqueur
dintgrit membranaire).
Une diminution significative de la rduction du MTT a t note des concentrations 3
g/ml de particules de nanoAg (CI50 calcule 3,38 g/ml) alors que la CI50 de AgNO3 a t
value 1,37 g/ml soit environ 2,5 fois plus faible que celle des nanoAg, ce qui indique
une cytotoxicit moins importante des nanoparticules dAg. En revanche, les CI50 estimes
de AgNO
3
et des nanoAg daprs les tests au bleu Alamar et LDH ne montrent pas de
diffrence significative. Toutefois, la CI50 estime par la mthode LDH (0,53 g/ml) est
infrieure celle calcule par MTT ce qui suggre que lintgrit membranaire de la cellule
est plus facilement affecte que les activits mtaboliques mesures.
En parallle, laddition dun anti-oxydant, la N-actyl cystine (prcurseur de la synthse du
glutathion) inhibe lactivit cytotoxique de AgNO
3
et des nanoAg ce qui tend dmontrer que
le stress oxydant est fortement impliqu dans leur cytotoxicit.

Lexpression de gnes impliqus dans la rponse au stress oxydant, i.e. glutathion
proxydase 1 (GPx1), catalase et superoxyde dismutase (SOD), a t tudie par la mesure
des ARNm en RT-PCR aprs des traitements de 8 et 24 heures la concentration de 0,2
g/ml de nanoAg ou de AgNO
3
( 10 % de la CI50). Si aucune diminution des niveaux
dexpression des ARNm GPx1 na t note pour les NanoAg, en revanche, ceux-ci se sont
rvls 8 et 19 fois plus importants respectivement aprs 8 et 24 heures de traitement au
AgNO
3
. Le niveau dexpression des ARNm catalase des cellules HepG2 traites au nanoAg
augmente de 11 fois par rapport au tmoin aprs 24 heures de traitement alors quil sont de
26 et 44 fois respectivement aprs 8 et 24 heures de traitement au AgNO3 plus importants
respectivement aprs 8 et 24 heures de traitement lAgNO
3
. Enfin, les changements de
niveaux dexpression des ARNm de SOD ne montrent pas de diffrence significative aprs
traitement au nanoAg (4,5 fois /contrle aprs 24 heures de traitement) ou lAgNO
3
(3,1
fois /contrle aprs 8 heures de traitement).
En conclusion, les nanoparticules dargent de diamtre < 10 nm utilises au cours de cette
tude ont montr une cytotoxicit in vitro sur les cellules HepG2, principalement lie au
stress oxydant. Aucune diffrence significative entre lactivit cytotoxique des nanoAg (<10
nm) et celle des ions Ag

na t observe lexception dune toxicit moins importante des
nanoAg / aux ions Ag dans le test MTT. Lexpression des ARNm des gnes relis au stress
oxydant dans les cellules HepG2 aprs traitement avec des nanoAg ou AgNO3 est rgule
diffremment ce qui suggre que la cytotoxicit des nanoAg est due un effet intrinsque,
indpendant des ions Ag libres et, en consquence, le mcanisme daction des nanoAg

peut
tre diffrent de celui des Ag.

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 181
Des rsultats proches ont t obtenus par Cha et al. (Cha K., 2008) au cours dessais in vitro
sur une ligne cellulaire d'hpatome humain (Huh-7) traite avec des nanoparticules d'argent
de 13 nm ou des microparticules d'argent de 2 3,5 m. L'activit mitochondriale et la
production de glutathion ont t clairement modifies.
Paralllement, lanalyse histopathologique des foies des souris traites pendant 3 jours avec
ces mmes particules d'argent a rvl une infiltration lymphocytaire aussi bien dans les
foies provenant des animaux traits avec des nanoparticules que dans ceux des animaux
traits avec des microparticules, ce qui suggre une induction d'inflammation. Ceci a t
confirm par lanalyse par biopuces de l'ARN qui a montr que l'expression de gnes lis
l'apoptose et l'inflammation est modife. Ces changements de l'expression des gnes dans
les foies des animaux traits avec des nanoparticules conduisent des changements
phnotypiques qui refltent laugmentation de l'apoptose et l'inflammation (Cha K., 2008).

E2- Conclusion sur le potentiel de gnration de ROS/RNS, induction de stress
oxydant et/ou de mcanismes inflammatoires

Globalement, les nanoparticules dAg induisent des modifications morphologiques
cellulaires, un dysfonctionnement mitochondrial et une augmentation de la gnration
despces ractives de loxygne dune faon dose-dpendante et ce quelle que soit leur
taille : 15 et 100 nm (Hussain S.M., 2005), 7-20 nm (Arora S., 2009; Hsin Y.H., 2008), 15 nm
(Braydich-Stolle L., 2005; Carlson C., 2008), 6-20 nm (Asharani P.V., 2009) et < 10 nm (Kim
S., 2009). Le stress oxydant contribue la cytotoxicit de ces nanoparticules. Les nanoAg
entranent galement un arrt du cycle cellulaire et une apoptose et/ou ncrose. Lapoptose
survient des concentrations faibles puis la ncrose apparat. Il semble nanmoins que
linduction despces ractives de loxygne diminue avec laugmentation de la taille des
nanoparticules (Carlson C., 2008). Il semble galement que cellules primaires offrent une
plus forte rsistance au traitement par des nanoAg par rapport aux lignes secondaires
(Arora S., 2009).

Par ailleurs, la prsence dagrgats lintrieur des mitochondries qui a clairement t
dmontre est impliqu dans la toxicit mitochondriale et les lsions de lADN via la
production dERO (Arora S., 2008 ; Asharani P.V., 2009).
En parallle, une augmentation significative de la scrtion des mdiateurs de linflammation
a t note en prsence de nanoAg. Cet effet semble indpendant de la taille des
nanoparticules dAg (Carlson C., 2008).
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 182
Conclusion/
Plus faible dose
avec effet
Caractristiques
des NanoAg
(Taille/distribution
Agglomration/
agrgation
Forme
Composition
Surface spcifique
Chimie de surface
Charge de surface
Solubilit/Dispersibilit)
Dispersion
/Caractrisation
Modles
in vitro/
in vivo
Test de
gnotoxicit
Test de
toxicit/
cytotoxicit/
autres
Doses/
Schma de
traitement
Localisation Remarques
Conclusion
Plus faible
dose
avec effet
Rfrences
25 7,1 nm

coates au
polyvinylpirrolidone
Distribution
analyse par MET

Aucune
caractrisation
aprs dispersion
Absorption cutane :
mthode in vitro
Absorption trs
faible :
0,0006 %
peau intacte
0,003 %
peau lse

Filon FL et
al, 2007
Larese FF et
al.
(2009)
52,7 70,9 nm
CMC 0,5 %

Aucune
caractrisation
aprs dispersion

Rats mles et
femelles
Sprague-
Dawley

Micronucleus sur
moelle osseuse
(OCDE 474)

30, 300 et
1000
mg/kg/jour
pendant 28
jours


Trs bonne
exposition
systmique
des animaux

Aucune
augmentation
significative
des MPCE

Kim YS et
al.
(2008)

6 - 20 nm
enrobes d'amidon

Distribution
analyse par MET






Cellules IMR-90
(fibroblastes de
poumon
humain)
cellules U251
(glioblastomes
humains)

Test des comtes
Test du
micronucleus

48 heures de
25 400 g/ml
(test des
comtes)
100 et 200
g/ml
(test du
micronucleus)

Prsence de
nanoAg
lintrieur des
mitochondries
(analyse par
MET)

Traitement
en milieu
complet


Test
micronucleus
avec Cyto B

Augmentation
significative
des comtes et
de la frquence
des
micronoyaux

25 g/ml
(test des
comtes)

100 g/ml
(test du
nucleus)
AshaRani,
PV.
(2009)
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 183







Aucune
caractrisation
aprs dispersion

Contenu en ATP
lsions
mitochondriales
production dERO

Apoptose
(annexine V)
diminution
dose-
dpendante
pour les 2
cellules partir
de 48 h de
traitement
Apoptose entre
25-100 g/ml








5-10 nm
sous forme de
solution
Structure
analyse par MET
En solution initiale
sphriques, bien
disperses
Prsence d
agglomrats de
100-300 nm aprs
incubation dans le
milieu de culture
Cellules HepG2 Mesure de la
protine gH2AX


24 heures de
traitement
Prsence de
dpts dans le
cytoplasme
(endosomes et
lysosomes) et
dans le noyau
Augmentation
significative et
dose-relie
inhibe par la
prsence dun
anti-oxydant




Kim S et al.
(2009)
Conclusion/
Plus faible dose
avec effet
Caractristiques
des NanoAg
(Taille/distribution
Agglomration/
agrgation
Forme
Composition
Surface spcifique
Chimie de surface
Charge de surface
Solubilit/Dispersibilit)
Dispersion
/Caractrisation
Modles
in vitro/
in vivo
Test de
gnotoxicit
Test de
toxicit/
cytotoxicit/
autres
Doses/
Schma de
traitement
Localisation Remarques
Conclusion
Plus faible
dose
avec effet
Rfrences
5-10 nm
Structure
analyse par MET
En solution initiale
sphriques, bien
disperses
Prsence d
agglomrats de
100-300 nm aprs
incubation dans le
milieu de culture
Cellules HepG2 MTT,
bleu Alamar
test LDH
Formation dERO
24 heures de
traitement
Prsence de
dpts dans le
cytoplasme
(endosomes et
lysosomes) et
dans le noyau
Trs faible teneur
en Ag+ libres
dans les
solutions initiales
nanoAg

Comparaison
avec
cytotoxicit de
AgNO3

CI50
LDH
= 0,53 g/ml
(AgNO3 =
1,37 g/ml)
MTT
= 3,38 g/ml
Gnration
dERO
5g/ml
Kim S et al.
(2009)
suite
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 184
Mesure de
H2AX et
niveau de
rgulation de
Rad51





Rgulation de la
protine p53
(contrle du cycle
cellulaire)
augmentation
de lexpression
de H2AX



Sur-rgulation
de p53

25 nm
non coates ou
coates
polysaccharidique

Aucune donne
de distribution


Aucune
caractrisation
aprs dispersion
Cellules souche
embryognique
s de souris
et
fibroblastes
embryognique
s de souris



Apoptose
(annexine V)


MTT
4 et 24
heures








24, 48 et 72
heures
dexposition
50 Cg/ml
NanoAg non
coates
sagglomrent

NanoAg coates
pas
dagglomrats
distribues dans
toute la cellule
Traitement en
milieu de
culture SANS
srum
Cytotoxicit
augmente en
fonction du
temps
(tox plus
importante
pour nanoAg
coates)

Ahamed M
et al.
(2008)
15 nm


100 nm
Aucune donne
de distribution


Aucune
caractrisation
aprs dispersion
Cellules BRL
3A
(spermatogonie
de type A de
souriceau)
MTT,
bleu Alamar
test LDH
Formation dERO
24 heures Traitement en
milieu de
culture SANS
srum
Modif morpho
Fuite deLDH
Augment ERO
DpltionGSH
Diminution
potentiel
membranaire
mitochondrial
CI50
LDH
= 24g/ml
MTT
= 19 g/ml
gnration
dERO
5g/ml


Hussain S
et al.
(2005)
Conclusion/
Plus faible dose
avec effet
Caractristiques
des NanoAg
(Taille/distribution
Agglomration/
agrgation
Forme
Composition
Surface spcifique
Chimie de surface
Charge de surface
Solubilit/Dispersibilit)
Dispersion
/Caractrisation
Modles
in vitro/
in vivo
Test de
gnotoxicit
Test de
toxicit/
cytotoxicit/
autres
Doses/
Schma de
traitement
Localisation Remarques
Conclusion

Plus faible
dose
avec effet
Rfrences
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 185
15 nm

Aucune donne
de distribution



Aucune
caractrisation
aprs
dispersion

Cellules C18-4
(spermatogonie
s de type A de
souriceau)

MTS[a] ( MTT)
test LDH

Apoptose /
ncrose

Formation dERO

48 heures


- Modif
cellulaires
morpho,
- fuite de
LDH
- diminution
potentiel
membranaire
mitochondrial
CI50
LDH
= 2,5 g/ml
MTS[a]
=8,75
g/ml

Apoptose /
ncrose
5g/ml
Braydich-
Stolle et al.
(2005)
Cellules A431
(carcinome
cutan humain)
et cellules HT-
1080
(fibrosarcome
humain)
A431
CI50 = 11,6
g/ml (XTT)

HT-1080
CI50 = 10,6
g/ml (XTT)
7-20 nm
(sous forme de
suspension
aqueuse
collodale)
> 90% ont un
diamtre compris
entre 7-20 nm
(analyse par
MET)


Aucune
caractrisation
aprs dispersion
Fibroblastes et
hpatocytes de
souris



XTT ( MTT)
test LDH
dpltion GSH
Apoptose (ladder)

24 heures
Etudes en MET
Agrgats
sphriques, noirs
dans
mitochondries
(fibroblastes),
dans
mitochondries et
des vacuoles
(hpatocytes)
Apoptose
cellules
A431 : entre
1,56 et 6,25
g/ml

cellules HT-
1080
entre 0,78 et
6,25 g/ml
Modif
morpho

peroxydation
lipidique

ERO
Dpltion
GSH
Diminution
potentiel
membranaire
mitochondrial
Fibroblastes
CI50 = 61
g/ml (XTT)

Hpatocytes
CI50 = 449
g/ml (XTT)
Arora S et
al. (2008)







Arora S et
al. (2009)
1-100 nm
+ comparaison
Ag (< 250 m)
Analyse par
MET
Cellules IH3T3
(fibroblastes de
souris),
A10 (muscle
lisse de rat)
HCT116
(humaines,
tumeur
cancreuse de
colon)


MTT




Apoptose
(annexine V)


ERO
24 heures

jusqu 72
heures pour
Ag (< 250 m)
Augmentation trs
rapide de [Ag]
intracell
Pour NIH3T3 50
g/ml aprs 8
heures.
Pour HCT116
100 g/ml
Apoptose
A431 50
g/ml et
HCT116 > 100
Associe au
relargage de
cytochrome c

Ag : pas
dinduction







ERO
intracell dans
cellules HT-
1080 et
HCT116
NIH3T3 et
A10
CI50 50
g/ml (MTT)
HCT116
CI50 > 50
g/ml
Ag < 250 m
aucune
toxicit 50
g/ml aprs
72 h
Hsin Y-H et
al (2008)
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 186
Annexe 5 : Revue bibliographique de la toxicologie des silices
amorphes nanostructures

Introduction sur les silices amorphes de synthse :
Les SAS (CAS 7631-86-9), toutes confondues, ont fait lobjet de trs nombreuses tudes. Les
donnes de synthse prsentes ci-aprs sont principalement extraites des documents suivants :
- JACC Document N 51 (ECETOC,2006),
- SAS SI EPA Nano Submission, dossier de soumission volontaire lUS EPA dans le cadre
du NMSP (programme d'intendance pour les matriaux nanomtriques, 2008).

Les tudes de toxicit prsentes dans ces documents pour certaines trs anciennes portent sur
diverses SAS prcipites et/ou pyrognes. En revanche, aucune de ces tudes ne portent
spcifiquement sur le produit D.
Par ailleurs, il est important de prciser que pour lensemble de ces tudes, aucune caractrisation
spcifique lie au caractre nanomtrique des particules utilises na t effectue. Cela est
discut dans la partie conclusion. Par ailleurs, la littrature portant sur la silice cristalline et/ou sur
des modles exclusivement pulmonaires na pas t examine.

A- Donnes de toxicologie gnrale
De nombreuses tudes de toxicit des SAS par diffrentes voies dadministration, aprs
traitements aigus ou ritrs, sont fournies dans le JACC N 51 (ECETOC,2006; US EPA, 2008).
Un rsum est prsent dans le tableau suivant :

Tableau 14 : Rsum des essais de toxicologie des SAS aprs traitements aigus ou ritrs (daprs
ECETOC, 2006)


SAS
[7631-86-9]
NAS
[1344-00-9]
CS
[1344-95-2]
TOXICOLOGIE
Toxicit orale aigu
DL50 > 3300 mg/kg
(test limite)
DL50 > 5000 mg/kg DL50 > 5000 mg/kg
Toxicit aigu par
inhalation
CL50 > 0,14- > 2 mg/l
(concentration maximale
techniquement faisable)
Pas de donnes :
analogie
Pas de donnes :
analogie
Toxicit cutane
aigu
DL50 > 5000 mg/kg
(test limite)
DL50 > 5000 mg/kg
Pas de donnes :
analogie
Irritations locales
(cutane, oculaire)
Non irritant Non irritant
Pas de donnes :
analogie
Sensibilisation Pas de donnes Pas de donnes Pas de donnes
Toxicit doses
rptes
Raction inflammatoire
pulmonaire :
Pas de donnes :
analogie
Pas de donnes :
analogie
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 187
(par inhalation) NOEL (5j) = 1 mg/m
3

Toxicit doses
rptes
(par inhalation)
Raction inflammatoire
pulmonaire (rat) :
NOAEL (13 s) = 1,3
mg/m
3

Pas de donnes :
analogie
Pas de donnes :
analogie
Toxicit doses
rptes
(par voie orale)
Pas danomalies relies
la substance chez le rat :
NOAEL (6 mois) = 9000
mg/kg pc
Chronique : pas de
donnes : analogie
Pas de mortalit, pas
de signes majeurs de
toxicit chez le rat et
la souris : NOAEL (14
j) > 5000 mg/kg pc
Pas de mortalit, pas
de signes majeurs de
toxicit chez le rat

NOAEL (2 ans)
5000 mg/kg pc

A1- Toxicit aigu
Les rsultats de toxicit aigu de diverses SAS prcipites et pyrognes par voie orale chez le rat
nont dmontr aucune mortalit (priode dobservation jusqu 28 jours). Aucun signe de toxicit
na t mis en vidence jusqu la dose maximale de 5 000 mg/kg. Aucune anomalie
macroscopique na t releve aprs autopsie.
Concernant la toxicit aigu par voie cutane chez le lapin de diverses SAS prcipites (NB :
aucune donne sur des SAS pyrognes), aucune mortalit et aucun signe de toxicit nont t
observs jusqu la dose maximale de 5 000 mg/kg. Une lgre rougeur a t note sur peau
intacte (sur peau abrase, une rougeur accompagne dun gonflement ont t observs). Ces
effets se sont rvls rversibles aprs quelques jours.

A2- Toxicits locales et sensibilisation
Des essais de toxicit locale ont t raliss chez le lapin.
Les tudes dirritation cutane utilisant les protocoles standards nont rvles aucun signe
dirritation (dme ou rythme) aux temps 1, 24, 48 et 72 heures aprs retrait des patchs
occlusifs, aussi bien sur peau intacte que sur peau abrase.
Il est noter que des cas de scheresse cutane ou deczma dgnratif ont t rapports chez
des travailleurs aprs des contacts rpts (OCDE, 2004).
De la mme faon, aucun signe dirritation oculaire (dme ou rythme conjonctival, iris et
corne) aprs instillation unique chez le lapin na t observ aprs 1, 24, 48 et 72 heures.

Concernant les essais de sensibilisation cutane, aucune donne chez lanimal nest disponible.
Nanmoins, lexprience chez lhomme semble confirmer que les SAS peuvent tre considres
comme non sensibilisant cutan. Si des cas de scheresse et dirritation cutane (friction) ont t
notes, aucun cas dallergie de contact na t rapport (donnes recueillies au cours des 50
dernires annes sur une population denviron 400 travailleurs exposs aux SAS).

En conclusion, ces tudes valuant les effets toxiques de diffrents types de SAS par
administration orale chez le rat ont t conduites. Globalement, aucune mortalit et/ou signes de
toxicit nont t nots pendant les priodes dobservation. Les examens macroscopiques nont
rvl aucune anomalie au cours des autopsies. La mortalit survient des niveaux de doses trs
levs de 10 000 et 20 000 mg SiO
2
/kg.
Lensemble de ces rsultats montrent quaprs des traitements aigus par voie orale (ou cutane)
des doses leves, les SAS testes nont induit aucune toxicit systmique.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 188
Il est galement important de souligner quaucune diffrence na t note entre les valeurs de
DL50 des diffrents types de SAS tudis.

A3- Toxicit doses ritres
Une tude de toxicit sub-chronique par voie orale ralise sur une SAS pyrognique (Cab-O-Sil)
chez le rat trait pendant 13 semaines na montr aucun effet jusqu la dose maximale de 5 000
mg/kg/j (US EPA, 2008). Lors dune tude similaire galement chez le rat trait par voie orale
pendant 13 semaines, la SAS prcipite teste (Sipernat 22) a induit une augmentation de la prise
de nourriture associe une augmentation du poids moyen absolu et relatif du ccum la dose
maximale de 4 000 mg/kg/j. En revanche, les examens macroscopiques et microscopiques n'ont
rvl aucune anomalie lie au traitement. La NOEL a t estime 4 000 mg/kg/j (US EPA,
2008). La conclusion de cette tude indique que labsorption des silices amorphes par voie
digestive semble limite et la part non assimile est limine directement dans les fces et
lactivit pro-inflammatoire observe avec des particules de silice de 100 et 200 nm reste
transitoire.

L'effet toxique de particules de silice micromtrique (environ 30 m) et nanomtrique (30-90 nm,
prpares par sonication et stabilisation des particules micromtriques) a galement t tudi
chez la souris. Des souris Balb/C et C57BL/6J ont t traites pendant 10 semaines avec 1% de
nanosilice ou 1 % de microsilice soit 10 g/kg/j dans lalimentation. A la fin de cette priode de
traitement, les analyses sanguines biochimiques et hmatologiques ont t effectues. Aucune
diffrence entre les groupes traits/non traits na t note vis--vis des paramtres analyss
lexception du taux dalanine aminotransfrase (ALAT) plus lev pour le groupe trait avec les
nanoparticules de silice par rapport aux groupes non trait ou trait avec la silice micromtrique.
Paralllement, la coloration hmatoxyline/osine a permis de confirmer latteinte hpatique avec
une statose pour le groupe trait aux nanoparticules de silice alors que le contenu en Si dans le
foie est quasiment identique quel que soit le groupe. Ces rsultats suggrent que les
nanoparticules de silice ont un effet toxique sur le foie, mme si aucune diffrence significative na
t observe sur la sant pour une quantit totale ingre sur 10 semaines de 140 g de silice / kg
(So S.J., 2008).

A4- Toxicocintique
Afin didentifier les organes cible, la distribution tissulaire a t tudie aprs administration(s)
intraveineuse(s) sur diffrentes tailles de silice dans plusieurs publications :

Nishimori et al. (Nishimori H., 2009a) ont tudi la relation entre la taille des particules et leur
toxicit en utilisant des particules de silice de diffrents diamtres, i.e. 70, 300 et 1000 nm (SP70,
SP300, et SP1000). Pour valuer la toxicit aigu, une analyse histologique du foie, la rate, des
reins et des poumons aprs administration unique par voie intraveineuse de ces particules de
silice a t effectue. Les nanoparticules SP70 ont induit des lsions du foie 30 mg / kg de pc,
tandis que SP300 ou 1000 n'ont eu aucun effet jusqu 100 mg/kg pc. Ladministration de SP70 a
entran une augmentation des marqueurs sriques d'atteinte hpatique, i.e. les
aminotransfrases sriques et des cytokines inflammatoires. Cet effet a t accompagn dune
relation dose-dpendante.
Ces observations confirment les rsultats de ltude de Cho et al. (Cho M., 2009) qui ont cherch
identifier la toxicit, la distribution tissulaire et les voies dexcrtion des nanoparticules de silice in
vivo. Pour cette tude, des suspensions de nanoparticules de silice de 50, 100 et 200 nm
marques un colorant fluorescent ont t utilises. Ces nanoparticules ont montr une
distribution de taille homogne et de forme sphrique et les images au microscope lectronique
transmission ont montr que les diamtres des nanoparticules taient bien d'environ 50, 100 et
200 nm.
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 189
Dans cette tude, les suspensions de nanoparticules ont galement t injectes par voie
intraveineuse des souris. Les animaux ont t sacrifis 12h, 24h, 48h, 72h et 7 jours aprs
ladministration, le sang et les organes ont t prlevs et les urines et les fces ont t collects.
Des foyers de cellules inflammatoires ont t observs dans le foie des animaux traits avec les
nanoparticules, exclusivement au temps 12 heures aprs linjection avec une incidence et une
gravit de la raction inflammatoire significativement augmente pour les particules de 200 et 100
nm. En revanche, aucune rponse significative lie l'injection de particules de 50 nm na t
observe. Les particules de silice de 50, 100 et 200 nm sont limines par les voies urinaire et
biliaire avec une concentration rnale maximale au temps 24 heures. Les nanoparticules de silice
50 nm sont excrtes plus rapidement (maximum au temps 12 heures aprs administration) et
des concentrations plus importantes que les nanoparticules de 100 nm (maximum au temps 12
heures aprs administration) et 200 nm. Les particules de 200 nm sont excrtes dans les urines
et les fces des concentrations infrieures celles retrouves pour les nanoparticules de 50 et
100 nm. Quelle que soit leur taille, les nanoparticules de silice sont retrouves sous forme
dagrgats dans le foie et la rate 4 semaines aprs une injection unique. Les macrophages jouent
un rle prpondrant et sont associs avec la distribution des nanoparticules de silice. Lactivit
pro-inflammatoire des particules de silice amorphes semble plutt lie leur surface spcifique
comme lont galement dmontr Waters et al. (Waters K.M., 2009) sur des macrophages.
Effectivement, ces auteurs ont dmontr que la scrtion de protines inflammatoires induite par
les particules de silice amorphe (non opsonises) provoquant une activit cytotoxique, est
prcisment en corrlation directe avec la surface spcifique des particules, ceci sur une large
gamme de diamtres (7-500 nm). Lanalyse par microarray de la modification prcoce de
lexpression gnique montre effectivement que, pour la majorit des gnes affects, lamplitude
des changements est troitement corrle avec la surface spcifique des particules plutt qu la
masse ou au nombre de particules. En revanche, les processus biologiques mis en jeu par
lensemble de ces changements d'expression gnique sont quasiment identiques quel que soit le
diamtre des particules. Toutefois, les mcanismes cls impliqus dans la rgulation des gnes
mdis par les nanoparticules de silice et leur cytotoxicit n'ont pas encore t tablis.
Globalement, ces rsultats suggrent que sur la base dune surface spcifique quivalente, des
modes d'action biologiques communs sont attendus pour les particules de silice de taille nano et
supramtrique (Waters K.M., 2009).
Afin de consolider ces rsultats de toxicocintique, des souris BALB/c mles ont t traites par
voie intraveineuse 2 fois/semaine pendant 4 semaines avec des nanoparticules de silice
sphriques et non poreuses (Nishimori H., 2009b). Les mesures faites par zetasizer ont montr
que le diamtre moyen des nanoparticules utilises au cours de cette tude est de 55,7 nm. Elles
ont t mises en suspension dans en milieu aqueux et leur dispersion a t confirme par
microscopie lectronique. Aucune autre indication nest donne sur leur caractrisation.
Lanalyse histologique des principaux organes (foie, rate, poumons, reins, cerveau et le cur) a
rvl une microgranulation hpatique et une accumulation splnique des mgacaryocytes chez
les souris traites alors que les reins, les poumons, le cerveau et le cur sont rests inchangs.
Le foie et la rate semblent tre les principaux organes cibles de la toxicit par l'administration
chronique de nanoparticules de silice (Nishimori H., 2009b).

B- Gnotoxicit

Concernant le potentiel gnotoxique, trs peu de donnes sont actuellement disponibles. Le
tableau ci-dessous rsume les conclusions sur les tudes existantes (OCDE, 2004) :




Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 190
Tableau 15 : Conclusion des essais de gnotoxicit des SAS (daprs OCDE-SIDS, 2004)


SAS
[7631-86-9]
NAS
[1344-00-9]
CS
[1344-95-2]
GENOTOXICITE IN VITRO
A
Test sur bactries
(mutation gnique)
Non mutagne
Pas de donnes :
analogie
Non mutagne
B
Test sur cellules
(mutation gnique)
Non mutagne Pas de donnes :
analogie
Pas de donnes :
analogie
C
Test sur cellules
(aberration
chromosomique)
Non mutagne
Pas de donnes :
analogie
Non mutagne

GENOTOXICITE
IN VIVO
Non mutagne
Pas de donnes :
analogie
Non mutagne

B1- Gnotoxicit in vitro
Les tudes in vitro prsentes dans le document JACC51 (ECETOC, 2006) ont t effectues sur
des SAS pyrognes et gel mais aucune ne porte sur des SAS prcipites.
Les tests rglementaires standard de gnotoxicit in vitro disponibles sont :
le test d'Ames (TG 471 Essai de mutation rverse sur des bactries),
le test de mutation sur cellules eucaryotes (TG 476 Essai in vitro de mutation gnique sur
des cellules de mammifres) et
le test daberrations chromosomiques (TG 473 Essai d'aberration chromosomique in vitro
chez les mammifres).
Aucune activit mutagne in vitro na t mise en vidence au cours de ces essais.

Quelques rares tudes portant sur lactivit gnotoxique des silices amorphes sont disponibles
dans la littrature. Ces tudes soulignent l'importance de la taille des nanoparticules puisquil
semble que des particules de taille > 200 nm ne parviennent pas pntrer dans le noyau, ne
modifient pas la structure et les fonctions nuclaires et ninterfrent pas avec l'expression gnique
(Chen M. et von Mikecz A., 2005).
Il existe peu de preuves dmontrant clairement une activit gnotoxique des nanoparticules de
silice.

Certaines tudes rcentes utilisant le test des comtes ont dmontr que les nanoparticules de
silice dont la taille varie de 20 400 nm ninduisent pas de gnotoxicit significative :

La cytotoxicit et la gnotoxicit des nanoparticules de silice luminescentes de diamtre 50 3 nm
mises en suspension dans un tampon PBS ont t tudies vis--vis des cellules A549 qui sont
des cellules pithliales humaines de poumon (Jin Y., 2007).
Les objectifs de cette tude taient danalyser l'intgrit de l'ADN en utilisant des techniques
spcifiques visant dtecter :
- les modifications de bases de l'ADN,
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 191
- les cassures de brins d'ADN,
- et laugmentation de l'activit de rparation de l'ADN.

Des essais sur lADN gnomique isol directement expos aux nanoparticules ont galement t
raliss. Lensemble des rsultats montre labsence d'effets toxiques importants lis aux
nanoparticules de silice au niveau molculaire et cellulaire des concentrations < 0,1 mg / ml (Jin
Y., 2007).

La gnotoxicit de diffrentes silices nanoparticulaires commerciales a t value en utilisant le
test des comtes (fragmentation de lADN). La caractrisation approfondie des dispersions de
nanoparticules, Les suspensions des nanoparticules de silice testes (2 nanoparticules Glantreo
de diamtre 30 et 80 nm et 2 silices collodales Ludox de Sigma) ont t values en termes de
stabilit (dispersion/agrgation). La taille des nanoparticules a t value par TEM
(nanoparticules Glantreo de diamtre 30 et 80 nm = 33,21 nm et 34,89 nm ; 2 silices collodales
Ludox = 21,32 et 30,51 nm).
Le test des comtes a t ralis sur des fibroblastes de souris 3T3-L1 aprs 3, 6, et 24 heures de
traitement avec les diffrentes nanoparticules de silice aux 2 concentrations de 4 et 40 g/ml.
Aucune gnotoxicit significative n'a t observe pour les nanoparticules testes dans ces
conditions dans deux laboratoires distincts (Barnes C.A., 2008).

L'incorporation de nanoparticules de silice dans le noyau cellulaire a induit une accumulation
aberrante de topoisomrase I dans le nucloplasme (qui contient des protines spcifiques du
domaine nuclaire), et une agrgation de protines telles que l'ubiquitine, le protasome,... La
formation d'agrgats de protines intranuclaires (1) entrane linhibition de la rplication, de la
transcription, et de la prolifration cellulaire, (2) ne modifie pas significativement l'activit du
protasome ou la viabilit cellulaire, et (3) est rversible Chen M. et von Mikecz A., 2005).

B2- Gnotoxicit in vivo
Les tudes in vivo disponibles prsentes dans le document JACC51 (ECETOC, 2006) ont t
effectues exclusivement sur une SAS collodale, Syloid 244.
Les tests rglementaires de gnotoxicit in vivo sur cette SAS gel sont :
le test du micronucleus in vivo au niveau de la moelle osseuse de rat selon la ligne
directrice OCDE 474 (Test de micronoyaux sur rythrocytes de mammifre) et
le test du dominant ltal chez le rat selon la ligne directrice OCDE 478 (Essai de mutation
ltale dominante chez le rongeur).

De plus, un test non standardis, le Host Mediated Assay , a galement t ralis. Dans ce
test, les micro-organismes (dans ce cas levures et Salmonella typhimurium) sont injects dans la
cavit pritonale des animaux pralablement traits et sont, par consquent, exposs aux
mtabolites potentiellement mutagnes du produit test.

B3- Conclusions sur la gnotoxicit
Les tests effectus utilisant le plus souvent des mthodes standard nont mis en vidence aucune
gnotoxicit des SAS tudies aussi bien in vitro quin vivo.

Cependant, des remarques/critiques concernant ces tudes effectues peuvent tre formules :


Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 192
Concernant les tests raliss in vitro :
Le test d'Ames napparat pas judicieux quant la mise en vidence dune activit gnotoxique
des particules nanomtriques. A ce jour, on ne dispose daucune preuve de pntration des
nanoparticules dans la bactrie et les comportements de la suspension nanoparticulaire avec le
gel dagar sont inconnus, etc.

Concernant les tests raliss in vivo :
Tout dabord, lensemble des tudes in vivo ont t effectues sur la seule SAS collodale, i.e.
Syloid 244. Aucun test rglementaire na t men sur des SAS pyrognes ou prcipites.

Les organes tudis napparaissent pas pertinents au regard des essais de bio distribution
disponibles dans la littrature qui ont permis de dterminer que les principaux organes cible sont le
foie et la rate aprs des traitements uniques ou rpts (Cho M., 2009; Nishimori H., 2009a;
Nishimori H., 2009b).

Ainsi, concernant prcisment le test du micronucleus in vivo, mme si la moelle osseuse
constitue un organe systmique, ce choix napparat pas pertinent puisquil nest pas un organe
cible. Au cours de cette tude, aucune preuve formelle dexposition de la moelle osseuse na t
fournie (aucune diminution du rapport PCE/NCE, absence de donne concernant la concentration
plasmatique). Etant donns les rsultats obtenus lors des tudes de bio distribution, la gnotoxicit
devrait tre value au niveau du foie ainsi quau niveau dun organe directement expos tel quun
organe du tractus digestif (estomac, duodnum, clon).

De la mme faon, le test du dominant ltal chez le rat sintresse exclusivement aux mutations
ltales dominantes survenant au niveau des cellules germinales. Cest donc un test spcifique par
rapport au tissu tudi, i.e. les cellules germinales, qui ne sont pas toujours les mieux exposes et
qui ne reprsentent pas un organe cible majeur. Comme pour le test du micronucleus, aucune
preuve formelle dexposition des animaux nest donne.

Enfin, le test host-mediated nest pas un test rglementaire. Il a t utilis pour tudier la
mutagense de produits aprs activation par les systmes mtaboliques in vivo. Les micro-
organismes permettant de montrer une ventuelle activit mutagne sont en contact avec le(s)
mtabolite(s) mutagne(s) trs peu de temps ce qui rend ce systme dessai peu sensible. De
plus, comme prcdemment, ce test utilise des bactries qui ne semblent pas adaptes la mise
en vidence du potentiel gnotoxique. Enfin, aucune preuve formelle dexposition des animaux
nest fournie.

Nanmoins, il existe peu de preuves dmontrant clairement que les nanoparticules de silice sont
gnotoxiques. Certaines tudes rcentes utilisant le test des comtes a dmontr que les
nanoparticules de silice dont la taille varie de 20 400 nm ninduisent pas de gnotoxicit
significative (Barnes C.A., 2008; Jin Y., 2007). En revanche, Chen et al. ont montr que
l'incorporation de nanoparticules de silice dans le noyau cellulaire a induit la formation d'agrgats
de protines intranuclaires qui a entran linhibition de la rplication, de la transcription, et de la
prolifration cellulaire. Ces interfrences dordre mcanique avec le fuseau mitotique et lADN ont
dj t identifies comme mode daction de particules micromtriques et des fibres telle que
lamiante (Chen M. et von Mikecz A.,2005). Du fait de leur gamme de taille nanomtrique, il est
communment admis que les NP sont capables dinteragir et ventuellement dinterfrer avec des
constituants cellulaires de dimension comparable tels que les nuclosomes, les microtubules, les
filaments dactine et les centrosomes. Ainsi, linterfrence avec ces structures peut mener un
dysfonctionnement de la division cellulaire et perturber le trafic cellulaire (Gonzalez L., 2008).
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 193
Ces tudes soulignent l'importance de la taille des nanoparticules puisque des particules> 200 nm
ne parviennent pas pntrer dans le noyau, ne modifient pas la structure et les fonctions
nuclaires et ninterfrent pas avec l'expression gnique (Chen M. et von Mikecz A.,2005).

C- Cancrogense - Reprotoxicit

Les conclusions des tudes de cancrogense et de toxicit pour le dveloppement de SAS gel
(Syloid 244) et prcipite, ralises par voie orale chez diffrentes espces, sont rsumes dans
le tableau ci-dessous :

Tableau 16 : Rsum des essais de cancrogense et de reprotoxicit des SAS (daprs ECETOC,
2006)


SAS
[7631-86-9]
NAS
[1344-00-9]
CS
[1344-95-2]
Cancrogense
Cancrogense
(inhalation)
Rsultats
non concluants
Pas de donnes Pas de donnes
Cancrogense
(voie orale)
Non cancrogne chez
le rat et la souris
Pas de donnes :
analogie
Non cancrogne
chez le rat
Cancrogense
(intrapleurale)
Pas de donnes :
analogie
Non cancrogne
chez le rat
Pas de donnes :
analogie
Reprotoxicit
Toxicit pour la
fertilit
Pas deffet dans une
tude limite chez le
rat
Pas de donnes :
analogie
Pas de donnes :
analogie
Toxicit pour le
dveloppement /
Tratogense
Pas deffets
indsirables chez le rat,
la souris, le lapin et le
hamster
Pas deffets
indsirables chez le rat,
la souris, le lapin et le
hamster
Pas deffets
indsirables chez le rat,
la souris et le hamster

Chez la souris B6C3F1, la SAS gel (Sylod 244) administre dans l'alimentation pendant 21 mois
0 - 1,25 - 2,5 ou 5% (40/sexe/groupe), aucune augmentation significative des lsions noplasiques
ou non noplasiques na t observe dans les tissus examins (systme lymphatique, les
poumons, le foie et les reins). Dans les mmes conditions exprimentales, aucune augmentation
significative des lsions noplasiques ou non noplasiques na t note dans les tissus examins
des rats Fischer (systme lymphatique, les poumons, le foie, les glandes surrnales, les testicules,
la glande mammaire et prpuce).
Aucune tumeur maligne n'a t observe au cours dune tude ralise sur la SAS hydrophobe
(Arosil R972) chez le rat Wistar (20/sexe/groupe) exposs 100 mg/kg/j via l'alimentation
pendant 24 mois. Aucune diffrence dans le type et/ou dans le nombre de tumeurs bnignes par
rapport aux contrles. Aucune lsion sur d'autres organes na t signale (ECETOC, 2006).

Dans toutes les tudes effectues sur la SAS gel, aucune mortalit ou variation significative de
gain de poids chez les mres traites nont t retrouves. Aucune diffrence significative entre le
nombre de corps jaunes (mesur chez le lapin seulement), le pourcentage d'implantation et / ou de
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 194
rsorption et le poids des petits vivants na t note par rapport aux contrles. Le nombre
danomalies externes, viscrales ou squelettiques des groupes traits ne diffre pas des contrles
(ECETOC, 2006).

Ltude sur SAS prcipite (Arosil R972) a t effectue sur rats Wistar femelles ayant reu des
doses quotidiennes de 500 mg SiO
2
/kg pc dans l'alimentation pendant 8 ou 17 semaines avant
l'accouplement avec des mles (5 F / 1 M) ayant eux-mmes t soumis une exposition
semblable pendant 4,5 mois. Le traitement a t poursuivi au cours de l'levage. Les animaux de
la gnration F0 n'ont pas t affects par le traitement quel que soit le paramtre considr.
Aucun effet reli au traitement au niveau de la taille de la porte ou du poids la naissance.
Aucune anomalie clinique, comportementale significative na t observe chez les petits la
naissance. Le dveloppement de la descendance sest rvl normal et aucune modification lie
au traitement na t observe chez les petits de 4 semaines, pour les deux gnrations
(ECETOC, 2006).
Aucune tude spcifique sur la toxicit pour la fertilit nest disponible. On peut nanmoins
souligner quaucun effet indsirable na t not sur les organes reproducteurs des rats Wistar
exposs oralement cette mme SAS (Arosil R972) pendant 6 mois avec des doses contenues
dans la nourriture de 0 ou 500 mg SiO
2
/kg pc. En effet, lexamen pathologique, aucun signe
clinique ou observation macroscopique nont t observs et la comparaison du poids des organes
(testicules et ovaires) entre les groupes tmoin et trait na rvl aucune diffrence significative
(JACC51).
Les SAS ont t considres comme non toxiques pour la reproduction et non toxiques pour le
dveloppement (NOEL >> 1000 mg/kg/j).

En conclusion, les effets de certaines SAS sur la sant humaine, y compris la cancrogense, ont
t examins pour un certain nombre dorganismes et elles n'ont pas t classes comme
cancrognes ou dangereuses pour lhomme par le Centre International pour la Recherche sur le
Cancer (CIRC). Les SAS ne sont pas toxiques pour le dveloppement ftal. La fertilit n'a pas t
spcifiquement tudie, mais les organes reproducteurs des tudes long terme (tudes de
toxicit chronique et de cancrogense) n'ont pas t affects.

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 195
Tableau 17 : Etudes de toxicit pour le dveloppement de 2 SAS (daprs ECETOC, 2006).
Type/
Nom du
produit
Espce,
souche,
nombre
Priode
dexposition
(Jour de gestation)
Dose
(mg/kg pc/j)
Rsultat
NOEL,
toxicit
maternelle et
ftale
(mg/kg pc/j)
Hydrophile
Gel Gavage
Syloid 244 Rat, Wistar 6 - 15 0, 13.5, 62.7, 292, 1,350 Aucun effet > 1 350
Syloid 244 Souris, CD 1 6 - 15 0, 13.5, 62.7, 292, 1,340 Aucun effet > 1 340
Syloid 244 Lapin 6 - 18 0, 16, 74.3, 345, 1,600 Aucun effet > 1 600
Syloid 244 Hamster dor 6 - 10 0, 16, 74.3, 345, 1,600 Aucun effet > 1 600

Hydrophobe
Pyrogne Nourriture
Arosil R972

Rat, Wistar 8 ou 17 semaines,
puis accouples
avec des mles
exposs pendant
4,5 mois
0, 500 Aucun effet > 500

C- Mcanisme inflammatoire / Potentiel de gnration de ROS/RNS et induction de stress
oxydant

Les rponses cellulaires induites par des nanoparticules de silice ont t values dans de
nombreuses tudes in vitro. Ces tudes se sont particulirement intresses lvaluation de la
cytotoxicit in vitro sur plusieurs modles cellulaires (de diverses origines), la corrlation entre
lactivit cytotoxique et la gnration despces ractives de loxygne (ERO), latteinte
mitochondriale, linduction dapoptose, la ncrose et linflammation. Ces tudes vise
mcanistique ont en outre cherch tudier les liens entre ces diffrents phnomnes et la taille
des nanoparticules de silice.

C1 - Cytotoxicit / Potentiel de gnration de ROS/RNS et induction de stress
oxydant in vitro et in vivo
La toxicit des nanoparticules de SiO2 de diffrentes tailles, 10-20, 40-50 et 90-110 nm, et de
particules de Si micromtriques (45 Cm) a t value in vitro sur des lignes cellulaires humaines
de cerveau, de foie, d'estomac et de poumon. Il faut prciser quaucune caractrisation des
nanoparticules utilises au cours de cette tude na t ralise. En prsence de nanoparticules,
l'activit mitochondriale a diminu jusqu 15%. Le contenu en ADN a diminu jusqu 20% alors
que la production de glutathion a augment jusqu 15%. Aucun effet ne sest rvl dose-reli. La
permabilit de la membrane plasmique n'a pas t altre par la prsence de nanoparticules. De
plus, la cytotoxicit nest pas modifie du fait de la taille, la cytotoxicit de la silice micromtrique
tant semblable celle de la silice nanomtrique (Cha et Myung, 2007).

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 196
La rponse de fibroblastes normaux et de plusieurs cellules tumorales des doses variables de
silice amorphe ou des composites nanoparticulaires [silice chitosan] a t value en termes
de cytotoxicit aprs traitement de 48 heures en utilisant 2 marqueurs : le test MTT et le test LDH
(Cha et Myung, 2007).

Les diffrents types cellulaires utiliss ont t les suivants :
WS1 : fibroblastes cutans humains adhrents
CCD-966sk : fibroblastes cutans humains adhrents
MRC-5 : fibroblastes pulmonaires humains adhrents
A549 : cellules pithliales adhrentes de carcinome pulmonaire humain
MKN-28 : cellules pithliales adhrentes dadnocarcinome gastrique humain
HT-29 : cellules pithliales adhrentes dadnocarcinome colorectal humain

Au cours de cette tude, les nanoparticules de silice ont t disperses dans leau distille par
sonication. Une caractrisation de ces nanosilices dans lexcipient utilis a t effectue en termes
de taille, de morphologie et dtat chimique. La taille moyenne des nanoparticules de silice
analyse par SEM a t denviron 22 nm (silicate) et de 80 nm (TEOS).

La CI20 (concentration inhibitrice 20%) de la silice telle que dtermine par la technique au MTT
peut tre classe dans lordre croissant suivant :
MRC-5 (138 to 155 g/ml), WS1 (171 to 221 g/ml), CCD (224 to 310 g/ml), A549 (386 g/ml),
HT-29 (508 to 510 g/ml) et MKN-28 (443 to 572 g/ml).
Les lignes cellules cancreuses (A549, HT-29 et MKN-28) ont donc une viabilit plus importante
que les fibroblastes pulmonaires et cutans (MRC-5, WS1 et CCD-966sk) lorsquelles sont
incubes en prsence de nanoparticules de silice.

Les nanoparticules de silice ont galement induit des lsions membranaires (avec une libration
de LDH de 5,6 11,3%) dans lordre croissant suivant :
WS1 (9,8 11,3%), CCD-966sk (8,7 9,1 %), MRC-5 (8,7 8,8 %), HT-29 (6,6 7,7 %), A549
(5,6 7,1 %) et MKN-28 (5,6 5,7 %).
La perte de lintgrit membranaire tant lune des caractristiques physiologiques de la ncrose,
le test LDH rvle quune exposition croissante la silice induit une augmentation du nombre de
cellules qui vont mourir via un processus ncrotique.

Par ailleurs, la cytotoxicit sest rvle ngligeable pour les cellules traites avec des composites
nanoparticulaires [silice chitosan] (viabilit cellulaire >85% / tmoin 667 g/ml) qui nont induit
aucun effet toxique membranaire jusqu' 667 g/ml aprs 48 heures de traitement quel que soit le
type cellulaire (libration de LDH >3,7 %).

En conclusion, lessai de prolifration cellulaire indique que les nanoparticules de silice ne sont pas
toxiques des niveaux faibles de doses, mais que la viabilit cellulaire diminue fortes doses. Un
essai de dtermination de lactivit de la lactate dshydrognase (LDH) dans les surnageants de
culture indique que de fortes doses de silice induisent des lsions de la membrane cellulaire
caractristiques de la ncrose. Les deux tests rvlent que les fibroblastes ayant des temps de
doublement longs sont plus sensibles aux dommages induits par une exposition la silice que les
cellules tumorales qui ont des temps de doublement plus courts. En revanche, les composites
nanoparticulaires [silice chitosan] induisent moins d'inhibition de la prolifration cellulaire et
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Mars 2010 Version finale page 197
moins de lsions membranaires. Cette tude suggre que la cytotoxicit de la silice pour les
cellules humaines dpend fortement de leur activit mtabolique (Cha et Myung, 2007).

Des nanoparticules de silice amorphe de diffrentes tailles ont t utilises pour dterminer si les
nanomatriaux sont capables d'inhiber la diffrenciation de cellules souches embryonnaires en
cardiomyocytes spontanment excitables. Les distributions en termes de taille et les
caractristiques de dispersion des nanoparticules utilises ont t dtermines avant et pendant
l'incubation des cellules souches dans le milieu de culture par microscopie lectronique
transmission (TEM) et par diffusion de la lumire en mode dynamique (qui permet de mesurer
indirectement des tailles de particules en suspension). Les nanoparticules de silice ont t
suspendues dans leau distille. Les cellules souches embryonnaires de souris ont t exposes
des concentrations nanoparticules de silice allant de 1 100 g/ml pendant une priode de 10
jours (priode de diffrenciation). Lactivit cytotoxique a t dtermine aprs 24 heures et 10
jours dexposition aux SiO2 en utilisant le test standardis WST-1 (proche du test MTT).
Concernant la caractrisation, toutes les nanoparticules de silice examines par TEM se sont
rvles sphriques et non agrges, l'exception des particules de 10 nm. Les diamtres
mesurs pour les particules de 10 et 30 nm ont t respectivement de 11 et 34 nm. En revanche,
les diamtres mesurs ont t de 34 et 248 nm pour les nanoparticules de diamtres thoriques
80 nm et 400 nm.
Le test a permis de dmontrer une inhibition dose-dpendante de la diffrenciation des cellules
souches en cardiomyocytes se contractant spontanment pour les 2 nanoparticules de silice
testes de taille 10 (TEM 11) et 30 (TEM 34) nm avec des concentrations inhibitrices 50% (CI50)
de 59 et 29 Pg/ml alors que les deux autres particules de taille 80 (TEM 34) et 400 (TEM 248) nm
n'ont eu aucun effet jusqu' la concentration maximale teste de 100 g/ml (CI50 > 100 g/ml).
L'inhibition de la diffrenciation s'est produite des concentrations non cytotoxiques ce qui indique
un effet spcifique des particules sur la diffrenciation des cellules souches embryonnaires. Les
auteurs concluent que latteinte de la diffrenciation de cellules souches par des nanoparticules
largement utilises ncessite des tudes approfondies sur le potentiel de ces nanoparticules
migrer dans l'utrus, le placenta et l'embryon afin de dterminer leurs effets possibles sur
l'embryogense (Park M.V.D.Z., 2009). Le potentiel d'inhibition de la diffrenciation de cellules
souches embryonnaires induite par ces nanoparticules de silice nest pertinent que si leur
translocation de la mre au ftus travers le placenta est effective.

Les effets cytotoxiques des nanoparticules de silice de 20 et 50 nm ont t tudis sur des cellules
HEK293 (cellules de reins embryonnaires humains en culture). La viabilit cellulaire, la fonction
mitochondriale, la morphologie, les espces ractives de l'oxygne (ERO), le contenu en
glutathion (GSH), lestimation de la peroxidation lipidique (quantification des substances ragissant
avec l'acide thiobarbiturique), le cycle cellulaire et l'apoptose ont t valus sur des cellules non
traites et des cellules exposes aux nanosilices. Les nanoparticules de silice ont t suspendues
dans leau distille. Aucune caractrisation na t effectue.
Lexposition SiO
2
nanoparticulaire de 20 et 50 nm des doses comprises entre 20 et 100 g/ml
a entran une diminution de la viabilit cellulaire de faon dose-dpendante. La dose ltale
mdiane aprs 24 heures d'exposition a t de 80,2 6,4 et 140,3 8,6 g/ml respectivement
pour les nanoparticules de 20 et de 50 nm SiO
2
. Lexamen morphologique a rvl un
rtrcissement des cellules et de la condensation nuclaire aprs exposition aux nanoparticules de
SiO
2
. Une augmentation du niveau dERO intracellulaires et la rduction de la teneur en GSH ont
galement t observes dans les cellules HEK293 exposes aux nanoparticules de SiO
2
.
Laugmentation de la quantit de TBARS suggre un niveau lev de la proxydation lipidique.
L'analyse par cytomtrie en flux a montr que les nanoparticules de SiO
2
peuvent provoquer un
arrt du cycle cellulaire en phase G2/M et une augmentation de la population cellulaire en sub-G1
apoptotique de faon dose-dpendante. Ces donnes suggrent que l'exposition des
nanoparticules SiO
2
conduit des modifications morphologiques cellulaires, un dysfonctionnement
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Mars 2010 Version finale page 198
mitochondrial et un stress oxydant (augmentation dERO intracellulaires et TBARS ainsi que la
dpltion en glutathion) ce qui dclenche l'arrt du cycle cellulaire puis l'apoptose dune faon
dose-dpendante. En conclusion, l'exposition de cellules HEK293 en culture des nanoparticules
de SiO
2
entrane une cytotoxicit dose-dpendante associe un stress oxydant accru (Wang F.,
2009).
Le stress oxydant et les rponses inflammatoires induits par les nanoparticules de silice ont t
valus la fois chez la souris et sur la ligne cellulaire RAW264.7.
Les nanoparticules de silice (taille moyenne de 12 nm) utilises dans cette tude ont t fournies
par Degussa Co. (Parsippany, NJ, USA). Selon les informations du fabricant, la puret du SiO2
est > 99,8 % (impurets en Al2O3, Fe2O3, TiO2 respectivement < 0,05 %, 0,003 % et 0,03 %).
Les suspensions de nanoparticules de silice ont t prpares dans le milieu de culture et
disperses pendant 20 minutes laide dun sonicateur.
Le traitement unique avec des nanoparticules de silice (50 mg/kg) par voie intrapritonale (ip) a
conduit l'activation des macrophages pritonaux, une augmentation du niveau sanguin d'IL-1
et de TNF- et l'augmentation du niveau d'oxyde nitrique libr partir des macrophages
pritonaux. Lexpression des ARNm de gnes lis l'inflammation tels que IL-1, IL-6, TNF-,
iNOS et COX-2 se sont montrs levs dans les macrophages pritonaux en culture provenant
de souris traites. Lorsque la viabilit des splnocytes de souris traites avec des nanoparticules
de silice (50, 100 et 250 mg/kg, ip) a t mesure, leur viabilit sest rvle significativement
diminue pour les groupes traits aux doses les plus leves (100 et 200 mg/kg ip). Cependant, la
prolifration cellulaire a t dmontre dans le groupe trait avec la dose faible de 50 mg/kg ip
sans cytotoxicit apparente. Lanalyse en cytomtrie en flux des sous-types de leucocytes au
niveau de la rate des souris traites a montr que les distributions des cellules NK et des cellules T
ont augment pour atteindre respectivement 184,8% et 115,1% de la valeur du contrle, alors que
celle des cellules B a diminu 87,7%. Pour dterminer le mcanisme pro-inflammatoire des
nanoparticules de silice in vivo, une tude in vitro a t effectue en utilisant la ligne cellulaire
RAW 264.7 qui drive de macrophages pritonaux de souris. Le traitement cellules RAW264.7
avec des nanoparticules de silice a conduit la production despces ractives de l'oxygne
(ERO) accompagne dune diminution du GSH intracellulaire. Paralllement la gnration
dERO, les nanoparticules de silice ont galement augment le niveau d'oxyde nitrique libr. Ces
rsultats suggrent que les nanoparticules de silice gnrent des ERO qui peuvent dclencher des
rponses pro-inflammatoires aussi bien in vivo quin vitro (Park et Park, 2009).

Le rapport de lIRSST (IRSST, 2008) mentionne galement 2 tudes qui se sont intresses
l'tude de phnomnes cellulaires se manifestant par linduction de divers mcanismes ou par la
production de mdiateurs de l'inflammation :
- ltude in vitro de Lucarelli et al. (Lucarelli M., 2004) qui a confirm que les nanoparticules de
SiO
2
prsentaient une activit pro-inflammatoire significative sur lactivit des macrophages
humains en induisant slectivement la production de cytokines inflammatoires IL-1 and TNF-
,
- ltude de Peters et al. (Peters K., 2004) qui a tudi le comportement et la viabilit de
cellules endothliales humaines in vivo. Ces auteurs ont observ que les NP de PVC, de
TiO
2
, de SiO2 et de Co taient vacuolises dans les cellules. Les nanoparticules de Co ont
dmontr un potentiel pro-inflammatoire et cytotoxique important, alors que celles de SiO2
avaient un potentiel pro-inflammatoire faible et celles de TiO
2
un potentiel encore moindre,
mais observable, en dpit du fait que cette substance est souvent considre comme
biologiquement amorphe. La conclusion de ces auteurs est que si une stimulation pro-
inflammatoire des cellules endothliales se produit in vivo, une inflammation chronique
pourrait en tre une des consquences possibles.


Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 199
C2- Conclusion sur le potentiel de gnration de ROS/RNS, induction de stress
oxydant et/ou de mcanismes inflammatoires
Les donnes concernant linduction de stress oxydant et des rponses pro-inflammatoires pour les
nanoparticules de silice amorphe sont peu nombreuse comparativement celles de la silice
cristalline.
Le traitement unique avec des nanoparticules de silice (50 mg/kg) par voie intrapritonale (ip) a
conduit l'activation des macrophages pritonaux, une augmentation du niveau sanguin d'IL-1
et de TNF- et l'augmentation du niveau d'oxyde nitrique libr partir des macrophages
pritonaux. Lexpression des ARNm de gnes lis l'inflammation tels que IL-1, IL-6, TNF-,
iNOS et COX-2 se sont montrs levs dans les macrophages pritonaux en culture provenant
de souris traites. Lorsque la viabilit des splnocytes de souris traites avec des nanoparticules
de silice (50, 100 et 250 mg/kg, ip) a t mesure, leur viabilit sest rvle significativement
diminue pour les groupes traits aux doses les plus leves (100 et 200 mg/kg ip). Cependant, la
prolifration cellulaire a t dmontre dans le groupe trait avec la dose faible de 50 mg/kg ip
sans cytotoxicit apparente. Lanalyse en cytomtrie en flux des sous-types de leucocytes au
niveau de la rate des souris traites a montr que les distributions des cellules NK et des cellules T
ont augment pour atteindre respectivement 184,8% et 115,1% de la valeur du contrle, alors que
celle des cellules B a diminu 87,7%. Pour dterminer le mcanisme pro-inflammatoire des
nanoparticules de silice in vivo, une tude in vitro a t effectue en utilisant la ligne cellulaire
RAW 264.7 qui drive de macrophages pritonaux de souris. Le traitement cellules RAW264.7
avec des nanoparticules de silice a conduit la production despces ractives de l'oxygne
(ERO) accompagne dune diminution du GSH intracellulaire. Paralllement la gnration
dERO, les nanoparticules de silice ont galement augment le niveau d'oxyde nitrique libr. Ces
rsultats suggrent que les nanoparticules de silice gnrent des ERO qui peuvent dclencher des
rponses pro-inflammatoires aussi bien in vivo quin vitro (Park et Park, 2009).

tant donn que les nanoparticules de silice peuvent entraner une augmentation du niveau dERO
(Lin W., 2006) et du fait que le radical hydroxyle est une molcule extrmement ractive, la
production de

OH proche de l'ADN pourrait facilement conduire l'induction de cassure des brins


d'ADN et la formation de bases oxydes (Singh N., 2009). Les nanoparticules de silice ont
galement une incidence sur l'intgrit nuclaire en formant des agrgats au niveau de protines
intranuclaires qui peuvent conduire l'inhibition de la rplication, de la transcription, et de la
prolifration cellulaire (Chen M. et von Mikecz A.,2005).

Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 200
Annexe 6 : Tableau de synthse (cotoxicologie)
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 201

NPs Caractristique Expo et
Caractrisation
Origine
de la NP
Espce(s)
Modle utilis
Test utilis Resultat Rfrence
TiO2 25-70nm
C: 640 mg/l
Expo : 6,24 et 48
mg/l
Sigma
Aldrich
Microalgue
(Pseudokirchnerell
ia subcapitata)
Test OCDE (201)
Inhibition de la
croissance algale
Bulk TiO2 :
EC50 :35,9 mg/l
Nanoformulations:
EC50: 5,83mg/l
NOEC:
Bulk :10,1 mg/l
et nano: 0.98 mg/l
Formation dagrgats de
nano TiO2 pigeant les
cellules algales et expliquant
la toxicit.
Aruoja et al. 2009-09-14
Science of the total
Environment
TiO2 25-70nm

Sigma
Aldrich
Bacteria assay
V. fisheri

Crustacean
assay (D.
magna, T.
platyrus)
Toxicity and
growth inhibition


Mortality endpoint
TiO2: non toxique mme
20 g/l
EC50>20000
LC50 =20000
Heinlaan et al., 2008
Chemosphre
*Ag
TiO2
20-30nm
30nm
Tableau 1 Quantum
sphere


NovaCentri
x
Degussa
D. pulex
Zebra fish
Algues

Toxicit des NP
vs mtaux
solubles
Bioassays
LC50
Ag 40 g/l
Cu
60 gL
TiO2: pas de toxicit
Organismes filtreurs plus
sensibles que les
poissons
Forme nano moins
toxique que la forme
soluble
Griffitt et al 2008
Env Toxicol Chem
TiO2 <25nm
anatase
Taille des
agrgats 20-100
nm, moyenne :
100 nm
Sigma
Aldrich
D. pulex

Toxicit aige
Stress oxydant
biomarqueurs
protiques
Toxique des doses>
500ppm
GST, augmentation
500 ppm TiO2
Klaper et al 2009
Environ Pollut
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 202
Catalase augmentation
100ppm
Diminution des protines
100 ppm TiO2
TiO2
SiO2
TIO2 : 66nm, 950
nm
(anatase/rutile)
SiO2 : 14nm, 930
nm
Dans la
suspension:
TiO2: 66nm : 175-
810 nm, moy: 330
nm
950nm : 240-460
nm, moy : 320 nm
Test 50-5000
ppm
SiO2 : 14nm ; 135-
510 nm, moy :
205nm
930 nm ; 380-605
nm, moy : 480 nm
Sigma
Aldrich
E. Coli
B. subtilis
Inhibition de la
croissance
Tableau 2
B. subtilis : effet partir
de 1000ppm
E. coli : effet partir de
500ppm
Adams et al 2006
Water Research
*TiO2 Tableau 1
Anatase
TiO2 : 24, 47.9,
95.9, 167.8, 239.6
mg/l
Tableau 1

Hongchen
Material
(China)
Bulk form
Acros
Fisher
scientific
Nematode
Caenorhadibitis
elegans
Ltalit
Longueur des
vers
Nombre dufs et
progniture par
ver
Effets toxique
LC50: 79,9 mg/l nano,
135.8 mg/l bulk
Effet sur la croissance et
le nombre doeufs
Wang et al 2009-
Environ Pollut
*TiO2 Taille: 21nm
Aire:5015m2G
-1

Concentration
0.1, 0.5,
1.0mgL;
Dure: 14 days
Trs bonne
dispersion
Vrification de
lexpo
De Gussa
AG,
Lawrence
Industries
O. mykiss stress oxydant
Induction de dfenses
anti-oxydantes
pathologies branchiales
pas de perturbations
hmatologiques
diminution ATPase
Na/Kdpendante
Federici et al 2007
Aquat Toxicol
TiO2 <100 nm Sigma
Aldrich
Plusieurs
espces
Bioessais
toxicit
Les seuils de toxicit
dpendent des espces
utilises (Tableau 2)
Blaise et al 2008
Environ Toxicol
TiO2 10-20 nm 30 nm (filtered) D. magna Test de toxicit
aigue (USEPA
Filtr: augmentation
mortalit en augmentant
Lovern and Klaper,
2006 Environ Toxicol
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 203
100-500 nm
(sonicated)

48h expo
2024)
(0.2, 1, 2, 5, 6, 8,
10 ppm)
LOEC, NOEC
la dose
sonication: mortalit
varie
and Chemistry
*TiO2 Diamtre moyen
30 nm
Concentrations
correspondant
aux LOEC
(30 nm)
(2,0 ppm)
Alfa Aesar D. magna Behaviour (video:
heart rate,
appendage and
postabdominal
curling rate,
feeding rate by full
rotation ofthoracic
leg)
Pas de changement dans
les sauts frquence
Diminution (pas
significative) de la
frquence cardiaque)
Pas dimpact sur les
mouvements de
recherch de nourriture
Lovern et al 2007
Environ Sci Technol
TiO2 Produit 1: 25 nm,
forme crystalline:
anatase)
Produit 2 : 100 nm
100% anatase
Algue
(Desmodesmus
subspicatus)
Crustac (D.
magna)
Test OCDE, ISO
Test inhibition
croissance (algue)
Test
immobilisation
(crustac)
La toxicit dpend de la
nature de la np
Activit photocatalytique
se maintient aprs
irradiation
Hund-Rinke and Simon
Environ Sci & Pollut
Research
TiO2
+Cd
21nm
Surface: 50m2/g
De Gussa Carp
C. carpio
Adsorption du Cd
sur les
nanoparticules de
TiO2
Acculuation du Cd
Forte capacit
dadsorption du Cd sur
TiO2 NP
TiO2 augmente
laccumulation du Cd
Zhang et al 2007
Chemosphere
*TiO, 140nm
Particules
enveloppes (Al
+- Si)
Table 2 DuPont Mammifres
Bactries
Organismes
aquatiques
Bioessays
Tests OCDE
Toxicit/gnotoxici
t
Faible moyenne
toxicit
Warheit et al 2007
Toxicol letters
TiO2 Taille: 15nm
Surface: 190
290m2/G
(p 1908)
anatase
Expo par la
nourriture
0,5-3 000 g/g

agglomrats
Sigma
Aldrich
P. scaber Expo court
terme par la voie
alimentaire (3j)
Poids
Alimentation
survie
Les rponses (stress
oxydant) ne sont pas
dose-dpendantes
(p.1908)
Pas deffet haut
niveau dorg biol la
plus forte dose
Jemec et al2008
Environ Toxicol Chem
*TiO2 <25nm
10nm (small) 145
Exposition par la
nourriture -100
gG nourriture
Sigma
Aldrich
P. scaber Stress oxydant
(GST, Cat
taux
Stress oxydant :
importance de la
dure/concentration de
Drobne et al 2009 (Env
Pollut)
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
Mars 2010 Version finale page 204
m2/g
40nm (large) 40
m2/g
3 or 14 jous

Table 1


dalimentation,
mortalit,
modification de la
masse
lexposition
TiO2 5nm
Anatase
0,1-1 000 g/L
(cytotox)
1-100
gL(gnotox)
TiO2 seul ou
combine avec
UVA
Sigma
Aldrich
Goldfish skin
cells
Cytotoxic and
genotoxic effects
Radical Hydroxyl induit
par TiO2
Accentu par une
irradiation UVA
Reeves et al 2008
Mutation research
TiO2 75%rutile
25%anatase

taille 21 nm
Dans leau :
bonne dispersion
24,4 nm en
moyenne

Conc : 0,5-50
g/ml
deGussa
AG
Cellules de
poisson : O.
mykiss
Genotoxicit/cytot
oxicit UVA
Pas de (gno)toxicit
significative sauf en
prsence dirradiation
UVA
Vevers et Jha 2008
Ecotoxicology
TiO2
SiO2
7 et 20 nm
7 et 10 nm
1 mg/l
TiO2:
7 nm: 300.81 m
2
/g

20 nm: 66,6 m
2
/g
SiO2:
10 nm: 644,44
m
2
/g

SiO2: 7 nm: 349.7
m
2
/g

Sigma
Aldrich
D. magna
C. riparius
Test OCDE Pas deffet gnotoxique Lee et al 2009-09-17
Environ Toxicol
Pharmacol
*Ag (Table 1) Table 2 Sigma
Aldrich
Concombre
laitue
Microtox
Test de
germination
Bioluminescent
test
Faible (voire zero)
toxicit
Seulement qqes
perturbations
Barrena et al 2009-07-
10 Chemosphere
Afsset RAPPORT Nanomatriaux et exposition du consommateur Saisine n2008/005
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*Ag 10-200 nm, moy:
40 nm
NanoSys
GmbH
Algue
Chlamydomona
s reinhardtii
photosynthse Concentration Ag:
AgNP18 fois toxique
que AgNO3
Concentration Ag+
toxicit AgNP>AgNO3
Navarro et al 2008
Environ Sci Technol

SiO2 363 et 521gSiO2/l
Surface: 236 et
135 m2/g
Silica
LUDOX
LS,
LUDOX
TM40
Sigma
Aldrich
Algue verte
(P. subcapitata)
Test OCDE (201)
Inhibition de la
croissance algale
Importance de la surface
et non la masse
Van Hoecke et al 2008
Environ Toxico Chem
TiO2

TiO2 sous forme
nano ou non,
envelopp ou non
Nano : 50 sur 10
nm (envelopp)
20-30 nm (non
envelopp)
Trois eaux de
surface (diff
origines)

Nano : 0,01-100
mg/l
Taille : cf table 4
Produits
BASF :
TLite SF,
TLite SF-S
et TLite
max
(diffrents
coatings)
Daphnia magna Tests OCDE de
toxicit (tox et
reprotox)
6 tests faiblement positifs
pour nTiO2
Toxicit indpendante de
taille, coating, milieu
Wiench et al, 2009
Chemosphere
TiO2 10, 30 et 300 nm
288, 47 et 11,5
m2/g
0,6-250 mg/l

Taille moyenne ds
milieu :
1261 nm
416 nm
492 nm
10 nm :
Frederikse
n
(Danemark
)
30 et 300
nm :
Sachtleben
Chemie
GmbH
Algues verte
Pseudokirchneri
ella subcapitata
Inhibition de
croissance
Hartmann et al, 2009
Toxicology (in press)
TiO2 25-70 nm 625-20 000 mg/l Sigma
Aldrich
Levure S.
cerevisiae
Inhibition de
croissance
Diminution de
colonies viables
Pas de toxicit mme
20 g/l
EC50 > 20 000 mg/l
Kasemets et al, 2009
Toxicology in vitro
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Mars 2010 Version finale page 206
Annexe 7 : Liste des critres OCDE pour les essais de nanomatriaux

Cette annexe correspond une traduction fidle dun extrait du document ENV/JM(2008)13 du
groupe de travail WPMN (Working Party on Manufactured Nanomaterials) disponible sur le site
internet de lOCDE

.

Fnxemble Je buxe mlnlmule

Liste de critres

Informations sur le nanomatriau / identification
Nom ( partir de la liste de nanomatriaux)
Numro CAS
Formule structurelle / structure molculaire
Composition du nanomatriau test (notamment degr de puret, impurets connues ou additifs)
Morphologie de base
Description de la chimie de surface (revtement ou modification, par exemple)
Principales utilisations commerciales
Activit catalytique connue
Mthode de production (prcipitation, phase gazeuse, par exemple)

Proprits physico-chimiques et caractrisation du matriau
Agglomration / agrgation
Solubilit dans leau
Phase cristalline
Pulvrulence
Taille des cristallites
Image(s) reprsentative(s) obtenue(s) par microscopie lectronique transmission
Distribution des particules par taille
Surface spcifique
Potentiel zta (charge de surface)
Chimie de surface (sil y a lieu)
Activit photocatalytique
Densit brute (coulabilit)
Porosit
Coefficient de partage octanol-eau, sil y a lieu
Potentiel de rduction-oxydation
Potentiel de formation de radicaux
Autres informations pertinentes (lorsquelles existent)

Devenir dans lenvironnement
Stabilit de la dispersion dans leau
Dgradabilit biotique
Biodgradabilit facile
Essai de simulation sur la dgradation ultime dans les eaux de surface
Essai de simulation pour les sols
Essai de simulation pour les sdiments
Essai de simulation pour les eaux uses
Identification du (des) produit(s) de dgradation
Autres essais concernant le (les) produit(s) de dgradation si ncessaire
Dgradabilit abiotique et devenir
Hydrolyse, pour les nanomatriaux surface modifie
Adsorption - dsorption

61
http://www.olis.oecd.org/olis/2008doc.nsf/LinkTo/NT00003282/$FILE/JT03246895.pdf
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Mars 2010 Version finale page 207
Adsorption dans les sols ou les sdiments
Potentiel de bioaccumulation
Autres informations pertinentes (lorsquelles existent)

Toxicologie environnementale
Effets sur les espces plagiques ( court terme / long terme)
Effets sur les espces sdimentaires ( court terme / long terme)
Effets sur les espces pdologiques ( court terme / long terme)
Effets sur les espces terrestres
Effets sur les microorganismes
Autres informations pertinentes (lorsquelles existent)

Toxicologie pour les mammifres
Pharmacocintique (ADME)
Toxicit aigu
Toxicit doses rptes

Dans la limite des informations disponibles :
Toxicit chronique
Toxicit pour la reproduction
Toxicit pour le dveloppement
Toxicit gntique
Exprience acquise concernant lexposition humaine
Autres donnes dessai pertinentes

Sret du matriau
Dans la limite des informations disponibles :
Inflammabilit
Explosivit
Incompatibilit


253, avenue du gnral Leclerc
94701 Maisons-Alfort Cedex
Tl. +33 1 56 29 19 30
www.afsset.fr
ISBN 978-2-11-098857-7


A
f
s
s
e
t
,

D
E
C
I
D

m
a
r
s

2
0
1
0

C
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l
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0
1
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