SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

Engloba ncleo, retculo endoplasmtico, complexo de Golgi, lisossomos e sistema de vesculas. So organelas que tiveram origem com a invaginao da membrana, por expanses e desprendimentos. NCLEO 1. uma estrutura complexa com duas membranas em bicamadas lipdicas concntricas, as membranas nucleares interna e externa, que tm composio semelhante da membrana plasmtica, com protenas e fosfolipdios especficos. A externa contnua ao retculo endoplasmtico rugoso e compartilha as suas funes, como possuir ribossomos associados. As protenas sintetizadas nos ribossomos da membrana nuclear externa so transportadas para o espao entre as duas membranas, perinuclear, o qual contnuo com o R.E. 2. As protenas compem estruturas complexas, os poros, compostos por mais de 100 protenas. 3. As protenas receptoras de lminas, protenas integrais, se ligam aos filamentos intermedirios, lminas nucleares. As principais dessas protenas so LBP, LAP e emerina, que ficam na membrana interna e podem receber ajuda de protenas adaptadoras para a associao com as lminas. 4. As protenas ancoradoras do poro contribuem para a estrutura do poro, como a gp210 e POM121. 5. Transporte no poro (tudo que entra e sai do ncleo apenas pelos poros, diferente da membrana celular, que por auxlio de protenas ou por difuso): Passivo: molculas de at 9 nm de dimetro (tambm facilitado por protenas carreadoras especficas). Ativo (controlado por Ran GTP): molculas entre 9 e 26 nm (mRNA, DNApol, RNApol...). O trfego entre o ncleo e o citoplasma feito pelos chamados COMPLEXOS DE PORO NUCLEAR. Oito filamentos complexos esto voltados para o citoplasma e esto envolvidos na atrao das molculas a serem transportadas pelo poro. A classe mais abundante de protenas do poro nuclear conhecida como nucleoporinas (NUPs). 6. As lminas nucleares formam uma estrutura fibrosa que sustenta o envelope nuclear e se faz importante para a distribuio e a funo dos cromossomos no ncleo, ao interagir com as protenas receptoras e com os cromossomos na face em contato com o interior nuclear. So especficas para os tecidos, sendo que todos expressam pelo menos um tipo de lmina B. A expresso gnica da lmina depende do tipo de clula e do estgio de desenvolvimento. Elas adquirem uma mudana ps-traducional que as direcionam para o envelope nuclear. Esse processo envolve a adio enzimtica de uma cauda de hidrocarboneto hidrofbico a um motivo de aminocidos. A 7 tipos B 3 tipos C 2 tipos

7. IMPORTAO: Informaes contidas na prpria sequncia de aminocidos de uma protena so responsveis por definir o seu destino na clula, como a compatibilidade com a seletividade dos poros (sequncias gnicas de cada protena j indicam se ela nuclear ou no). A sequncia determinante para a passagem de uma protena pelo poro chama-se SEQUNCIA CONSENSUAL (NLS sinais de localizao nuclear), rica em lisina e arginina. A IMPORTINA responsvel por reconhecer esta sequncia e transportar a protena para dentro do ncleo atravs dos poros. Dentro do ncleo, onde a Ran SEMPRE fosforilada (ativada: GDP + P GTP), esta compete pelo stio da importina que reconhece a NLS, liberando a protena no ncleo. O complexo Ran-importina vai para o citoplasma, onde a Ran realiza sua atividade GTPase para liberar a importina e voltar ao ncleo. 8. EXPORTAO: a EXPORTINA forma uma trade com a Ran-GTP e com a molcula carreada, que reconhecida pela sequncia NES (sinal de exportao nuclear). Esse processo no s utilizado para exportar mRNA, mas tambm protenas que esto no ncleo e precisam ser recicladas. 9. As importinas, ao transportar uma protena pelo poro, se ligam tambm protenas do prprio poro, cujo stio de ligao so as repeties FG. O processo de passagem pelo poro marcado por ligao, dissociao e religao a sequncias FG adjacentes. 10. A Ran um interruptor molecular que pode existir em dois estados conformacionais, dependendo se o GTP ou o GDP est ligado. A converso entre os dois estados desencadeada por duas protenas reguladoras Ranespecficas: uma ativadora de GTPase, a GAP, citoslica, que aciona a hidrlise de GTP, convertendo Ran-GTP em Ran-GDP; e um fator de troca de guanina (GEF) nuclear, que promove a troca de GTP para GDP e, assim, converte RanGDP em Ran-GTP. Devido ao fato da Ran-GAP estar localizada no citosol e RanGEF estar no ncleo, o citosol contm principalmente Ran-GDP, e o ncleo, Ran GTP. Esse gradiente das duas formas dirige o transporte nuclear na direo apropriada. 11. Protenas participantes de atividade no ncleo podem ter a NLS e a NES, e podem ser (des)ativadas por (des)fosforilao ou serem inibidas por protenas citoslicas. Um sinal pode desencadear o processo de ativao dessas protenas. 12. LAMINOPATIAS: mutao em genes das lminas, da LAP, da LBP ou da emerina. a. Emerina mutada (EDMD): miopatia degenerativa, onde h contratura dos msculos do calcanhar, cotovelos e pescoo. A progresso da doena leva a uma alterao cardaca. b. Mutao no gene da laminina A gera apenas uma leve alterao cardaca. RETCULO ENDOPLASMTICO 1. Sua distribuio na clula acontece de acordo com a funo da mesma. 2. O retculo endoplasmtico liso tem muitas enzimas empenhadas no processo de produo dos lipdios, no permitindo que haja espao para os receptores de protenas ribossomais.

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Os tipos genricos de receptores ribossomais so RIBOFORINA e TRANSLOCON. Os ribossomos no so fixos ao retculo endoplasmtico rugoso. O retculo endoplasmtico rugoso, geralmente, fica perifrico. O retculo endoplasmtico ausente em clulas que sintetizam protenas citoslicas apenas para si mesmas (eritroblastos, clulas embrionrias, clulas neoplsicas de crescimento rpido). O R.E. presente em clulas que sintetizam protenas e no acumulam grnulos (fibroblastos e plasmcitos), que sintetizam protenas e acumulam em grnulos (granulcitos, mastcitos, macrfagos) e em clulas que sintetizam protenas e as secretam (clulas glandulares acinosa do pncreas). 7. COMPOSIO QUMICA: a. Glicose-6-fosfatase: participa da glicogenlise, portanto, est presente no msculo e nos hepatcitos. b. Glicosiltransferases OST (complexo oligossacaril-transferase): faz a adio de monossacardeos em lipdios e protenas. c. Citocromo P450 e citocromo b: transporte de eltrons importante para a sntese de lipdeos (colesterol e hormnios esteroides) processo de detoxificao. d. Chaperonas (scafolds): durante a sntese de protena, as chaperonas se ligam estrutura primria para lhe dar a estrutura terciria funcional e final (adicionam ligaes dissulfeto) e realizam tambm o controle de qualidade de protenas. Elas atuam em processos de febre. Ex.: calnexina, calreticulina, dissulfeto-isomerase, Bip e HSP. 8. FUNES: a. Sntese de protenas (de secreo e de composio de membrana plasmtica), participam: i. PRS ii. Receptor de PRS iii. Sec61 complexo de 3 protenas que compem a poro central da riboforina ou translocon iv. TRAM v. TRAP vi. Peptidase-sinal (cliva a sequncia-sinal) vii. Bip liga a Sec61, funciona como rolha. Toda protena de sntese no R.E. far parte de algum componente do sistema de endomembranas ou da membrana plasmtica. Todas as protenas produzidas no citoplasma que sero secretadas ou iro compor a membrana apresentam uma sequncia sinal que reconhecida pelo PRS. Essa ligao desativa a produo de protena pelo ribossomo. A PRS liga-se, ento, ao seu receptor, que vai fazer com que a Bip se desligue da Sec61, para que o ribossomo se ligue ao translocon e sua maquinaria seja reativada. A peptidase responsvel por clivar o peptdeo sinal, que vai para o citoplasma, e a protena vai para o lmen do R.E. A sequncia-sinal pode ser clivada pela peptidase-sinal ou pode ser extenso interna de aminocidos e permanecer parte da protena. Se o destino da protena for compor membrana, ela inicalmente ficar ligada membrana do R.E. por ter a parte hidrofbica. A parte externa,

receptor, de uma protena que vai compor membrana, em sua formao, fica voltada para o lmen do R.E. (lado - ). Protena solta dentro do retculo expulsa da clula. b. Sntese de lipdios colesterol e fosfolipdios: as enzimas esto inclusas na membrana do retculo. So usados glicerol e cidos graxos ligados CoA. c. Detoxificao: funo do retculo contra herbicidas, desfolheantes, conservantes e corantes alimentares, medicamentos, dejetos industriais. rgos: fgado, rins, pele, pulmes. Funciona tambm fisiologicamente. Necessidade de solubilizar as toxinas para destru-las, feito pelos citocromos (realiza reduo e oxidao das substncias). d. Glicogenlise: manuteno da glicemia pelo fgado e contribui para a contrao dos msculos estriados. e. Regulao de Ca: o clcio um segundo mensageiro, amplificador de sinal, ou seja, sua concentrao tem que estar sempre bem controlada, pois ativa muitas protenas, como as caspases, que so ativadoras de apoptose. 9. CARACTERSTICAS: a. Protenas solveis (lumiais) sequncia marcadora KDEL ou HDEL: no seguem para o complexo de Golgi, caso isso ocorra, so reconhecidas por receptores de l e retornam ao R.E. b. Protenas transmembranares sequncia marcadora KKXX ou KXKXX: so mantidas no R.E. Ex.: Enzimas do processo de sntese dos lipdios. 10. DOENA: a. Crigler Najjar, provocada pela deficincia da glicuronil-transferase, um dos sistemas que atuam para alterar a molcula xenobitica, tornando-a mais hidroflica e permitindo assim, sua eliminao, ou seja, essas enzimas permitem que a bilirrubina solvel seja secretada pelas clulas hepticas na forma de bile. O acmulo de bilirrubina no sangue leva a ictercia. Tratamento: administrao de Barbitricos, que estimulam a sntese dessa enzima, alm de aumentar as regies de retculo liso nas clulas hepticas, devido perda dos ribossomos adsorvidos em sua membrana. O aumento do R.E. liso contribui com a reduo do efeito de certos medicamentos aps uso prolongado. COMPLEXO DE GOLGI 1. CARACTERSTICAS: a. Possui redes e cisternas, sendo que as redes possuem intercomunicaes. b. O pH das cisternas tende a se acidificar da rede cis para a trans. c. As protenas contidas em vesculas passam por todas as cisternas. d. Clulas com maior taxa metablica apresentam um maior nmero de cisternas. e. Rede cis: prxima do R.E., vesculas cis se fusionam com o complexo. Rede trans: sada de vesculas.

2. FUNES: a. Glicosilao, sulfatao e fosfatao. b. N-acetilglicosamina fosfotransferase: adiciona N-acetilglicosamina fosfato ao C-6 de uma das manoses dos oligossacardeos hidrolases. N-acetilglicosamina glicosidase: remove a N-acetilglicosamina, mas deixa o fosfato em C-6 da manose. c. Na formao do lisossomo, a manose-6-fosfato das enzimas se liga ao MPR (Manose Phosphate Receptor) para agrup-las, logo, todas as enzimas lisossomais possuem a manose-6-fosfato. Isso ocorre numa cisterna de pH 6,5, conferindo o mesmo ao lisossomo. O pH 6,5 o ideial para a ligao da MPR manose-6-fosfato, que se dissociam em pH 6, j dentro do lisossomo. LISOSSOMO 1. Quando o lisossomo se forma, as suas enzimas ficam inativas. No caso de endocitose, o lisossomo funde-se ao endossomo primrio, originando o endossomo secundrio. A bomba de prtons originalmente presente no lisossomo vai bombear prtons H para o interior do endossomo, gerando o pH necessrio para ativar as enzimas lisossmicas. 2. FUNES: a. Digesto celular: i. Pinocitose especfica ii. Pinocitose regulada (rafts) conjunto de receptores que acumulam substncias especficas para formarem vesculas iii. Fagocitose b. Autofagia: ligada ao R.E. Uma lamela do R.E. engloba a estrutura a ser degradada, funcionando posteriormente com o lisossomo. c. Transcitose: por causa da sinalizao, o lisossomo no reconhece o endossomo, e ele no segue a via digestiva. Ex.: IgA no leite materno e no lmen do intestino. 3. DOENAS: a. Tay-Sachs b. Gaucher c. Niemann-Pick d. Doena de clulas I (de incluso) e. Hipercolesterolemia familiar OBS: CHAPERONAS NA FEBRE, EMERINA E LAMININA A NA MIOPATIA (EMBRIOGNESE), COMO OCORRE O PROCESSO DE DETOXIFICAO? QUAL A PARTICIPAO DA P450 E SUA REDUTASE? QUE SO OS BARBITRICOS? QUAIS SUAS FUNES? COMO AGEM? ANOTAES THE CELL: 1. As protenas podem se mover entre os compartimentos por trs caminhos, definido pela sua sequncia-sinal: c. Transporte mediado (poro);

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d. Transporte transmembrana (citosol lmen do R.E. / mitocndria) e. Transporte vesicular (move protenas entre compartimentos topologicamente equivalentes). reas do R.E. liso a partir das quais vesculas carregando protenas recmsintetizadas e lipdeos se desprendem para transporte at o aparelho de Golgi so chamadas de R.E. transicional, sendo proeminente em clulas especializadas no metabolismo de lipdios, como o colesterol gerando hormnios. O hepatcito possui um R.E. liso abundante, que o principal stio de produo de lipoprotenas por apresentar as enzimas responsveis por isso. O R.E. liso tambm contm enzimas que catalisam uma srie de reaes para destoxificar substncias lipossolveis e vrios compostos danosos produzidos pelo metabolismo. As reaes de destoxificao so realizadas por citocromos, como a famlia do citocromo P450, que catalisam uma srie de reaes nas quais substncias insolveis em gua, ou metablitos que, de outra forma, poderiam ser acumulados em nveis txicos, so transformadas em solveis em gua o suficiente para deixarem a clula e serem excretadas na urina. No R.E., a bomba de Ca o transporta do citosol para o lmen do R.E. O armazenamento desse on facilitado pelas altas concentraes de protenas que se ligam a ele no lmen do R.E. Nas clulas musculares, o R.E. liso modificado, chamando-se retculo sarcoplasmtico. A liberao e recaptao de clcio pelo retculo sarcoplasmtico desencadeiam a contrao e o relaxamento das miofibrilas. A SRP uma estrutura alongada que envolve a subunidade ribossomal maior, com uma extremidade ligada sequncia-sinal assim que o peptdeo emerge do ribossomo. A outra extremidade bloqueia o stio de ligao do fator de alongamento na interface entre as subunidades maior e menor do ribossomo. Esse evento gera uma pausa na sntese proteica at que o ribossomo se ligue membrana do R.E., garantindo que a protena no seja liberada no citosol. Ribossomos livres e os ligados membrana do R.E. so estrutural e funcionalmente idnticos, a protena que est sendo produzida em um dado momento que os difere. O R.E. faz uma adio covalente de acares protena, sendo uam das suas principais funes biossintticas. A maioria das protenas solveis e das protenas ligadas membrana que sintetizada no R.E. so GLICOPROTENAS. Os oligossacardeos dentro da estrutura da protena so por onde as chaperonas calreticulina e calnexinas reconhecem a molcula que precisa ser enovelada. O aparelho de Golgi um dos principais stios de sntese de carboidratos, sendo que muitos dos oligossacardeos so associados a protenas e lipdios, bem como estao de classificao e de destinao para produtos do R.E. Um subconjunto de oligossacardeos serve como rtulos para direcionar protenas especficas a vesculas que, ento, as transportam para os lisossomos. Eles tambm podem ser reconhecidos de outras maneiras, tendo outros destinos.

10. O citocromo apresenta o on ferro no grupo heme, que responsvel pela capacidade de transferncia de eltrons, podendo alternar entre os estados de oxidao Fe e Fe. O citocromo P450 responsvel pela transferncia de eltrons do NADPH + H para o oxignio e pela transferncia de grupamento OH para o substrato. O citocromo P450, em suas reaes de oxidao e reduo na detoxificao, tornam substncias lipossolveis em hidrossolveis. Essa alterao da substncia, consequentemente, dificulta a difuso da substncia pela membrana plasmtica, que hidrofbica, assim como a reabsoro das substncias nos tbulos renais, acelerando a eliminao das substncias. Somando-se a isso, a alterao realizada pelo citocromo na substncia pode modific-la de tal forma que altera a interao dela com biorreceptores. 11. Os lisossomos so compartimentos definidios por membranas preenchidos por enzimas hidrolticas, todas hidrolases cidas, como proteases, nucleases, glicosidases, lipases, fosfolipases, que controlam a digesto intracelular de macromolculas. As enzimas precisam de um pH em torno de 4,5 e 5 para uma tima atividade. Uma H ATPase na membrana lisossomal utiliza a energia da hidrlise de ATP para bombear H para dentro do lisossomo, diminuindo o pH do seu lmen. 12. CHAPERONAS: a sntese de HSP (protenas de choque trmico) a partir do DNA aumentada em caso de estresse trmico ou qumico que acarreta em alterao da conformao correta das protenas, agindo em resposta ao choque trmico (HSR). O fator de transcrio desse gene ativado no caso de estresse. A HSP atua ento como chaperona, garantindo que a montagem da estrutura final da protena seja completa e correta, conferindo-lhe a estrutura terciria. Os nveis aumentados de protenas do estresse do a clula meios para: a) identificar e talvez facilitar redobramento de protenas afetadas de modo adverso pelo estresse metablico; b) identificar e fazer ligao com protenas anormalmente dobradas, de modo que estas sejam marcadas e enviadas a um sistema proteoltico adequado, assim facilitando a eliminao das protenas defeituosas; c) facilitar a sntese e a maturao de novas protenas, que iro substituir aquelas destrudas no estresse metablico.