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TP3 : Mtabolites secondaires

Le but de ce TP est de doser les composs phnoliques prsents dans les extraits dpinard et de laitue

1-Principe des dosages :


Dosage des composs phnoliques : Ce dosage repose sur la mthode utilisant le ractif de Folin-Ciocalteu. Ce ractif est constitu dun mlange dacide phosphotungstique et dacide phosphomolybdique. Loxydation des phnols rduit ce ractif en un mlange doxydes bleus de tungstne et de molybdne. Lintensit de la couleur est proportionnelle au taux de composs phnoliques oxyds

2- Extraction des composs phnoliques totaux prsents dans les feuilles dpinard et de la laitue :
Peser 10 g de feuilles (dpinard ou de laitue), les dcouper rapidement et les broyer dans un mortier contenant une spatule de sable de Fontainebleau et 50 ml dthanol 50% Filtrer le broyat sur un entonnoir recouvert de gaze et de miracloth Evaporer le filtrat sec lvaporateur rotatif ( 60C) Reprendre les rsidus secs dans 5 ml dthanol absolu

3-Dosage des composs phnoliques totaux


Prparer dans des tubes essai le mlange suivant : 1 ml dextrait (pour lpinard faire deux dilutions 10 et 15 fois et pour la laitue la dilution 2.5 et 5 fois) 6 ml deau 1 ml de Na2Co3 20 % Mlanger, attendre 3 min puis ajouter 1 ml de ractif de Folin-Ciocalteu Mlanger et placer les tubes 40 C pendant 30 min Lire labsorbance 760 nm Gamme talon : La concentration dun compos phnolique, lacide gallique, sera dtermine grce une gamme talon. Pour cela,

A partir dune solution dacide gallique de 5 g/l, prparer les dilutions suivantes 150, 100, 50, 10, 5 et 0 mg/l (Vf= 5 ml) Prparer six tubes comme pour les extraits avec 1 ml de ces dilutions Lire labsorbance 760 nm

4- Rsultats :
Tracer la courbe talon de labsorbance en fonction de la quantit dacide gallique en mg Dterminer la quantit de composs phnoliques prsents dans les extraits dpinard et de laitue en mg par g de matire frache