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INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL JEFATURA DE PRESENTACINES MDICAS COORDINACIN DELEGACIONAL DE EDUCACIN EN SALUD ESCUELA DE ENFERMERA HERMOSILLO,

SONORA INC. UNISN: LEN99-LXV/HE

METABOLISMO DE LOS HIDRATOS DE CARBONO TTULO

Q. B. Edna Leyva. Titular de la materia

E.L.E. Badachi Ruiz Iveth Sarah. E.L.E. Contreras Alba Arilu Susana. E.L.E. Garca Sesma Siria Alejandra. E.L.E. Lpez Meza Margarita. E.L.E. Martnez Hurtado Ma. Luisa O. Alumnas

. Microbiologa Materia II Semestre, Grupo B-2

Hermosillo, Sonora, a 11 de Marzo del 2013

IN VITRO Se refiere a una tcnica para realizar un determinado experimento en un tubo de ensayo, o generalmente en un ambiente controlado fuera de un organismo vivo. Muchos experimentos en biologa celular son llevados a cabo fuera del organismo, en clulas. Porque las condiciones pueden a veces no corresponder a las condiciones dentro del organismo, los experimentos in vitro pueden producir resultados poco exactos. Consecuentemente, tales resultados experimentales son a menudo denominados in vitro, para distinguirlos de los experimentos in vivo, en los que los tejidos estudiados permanecen dentro del organismo en el que normalmente se encuentran. Este tipo de investigacin apunta a describir los efectos de una variable experimental en un subconjunto de las partes constitutivas de un organismo. Tiende a enfocarse en rganos, tejidos, clulas, componentes celulares, protenas y/o biomolculas. Sobre todo, es ms apropiada para deducir un mecanismo de accin. Con menos variables y reacciones amplificadas, los resultados son generalmente ms discernibles. Actividad antimicrobiana in vitro: antibiograma La actividad de los antimicrobianos (antibiticos y quimioterpicos) debe ser evaluada in vitro para obtener la informacin que permitir decir si un microorganismo es susceptible o resistente a determinado producto. Los antimicrobianos actan produciendo toxicidad selectiva, no actan directamente sobre el husped, sino que se combinan qumicamente con determinados sistemas de los microorganismos , enfocando as la accin sobre los microorganismos ms que sobre el husped. La determinacin de la mnima concentracin inhibitoria (MIC) nos proporciona la dosis mnima necesaria del quimioterpico para impedir el desarrollo bacteriano, lo que permite hacer estudios de uso clnico y detectar mutantes resistentes. Dos son los procedimientos empleados para conocer sta informacin, el mtodo del tubo dilucin y el del disco difusin en agar, a ste ltimo se le denomina: antibiograma. Accin de los antibiticos. La actividad antimicrobiana in vitro determina: a) La potencia de un agente antibacteriano en solucin b) Su concentracin en los lquidos del cuerpo o en los tejidos c) La sensibilidad de un microorganismo a concentraciones conocidas del medicamento.

Inhibicin de sntesis de pared celular: Penicilina, Cefalosporinas, Bacitracina,Vancomicina, Novobiocina Alteracin de la permeabilidad de la membrana celular: Anfotericina B, Colistina,Nistatina, Polimixina. Inhibicin de la sntesis proteica : Aminoglucsidos ( Kanamicina, Amikacina ,Estreptomicina), Tetraciclinas, Cloramfenicol, Macrlidos (Eritromicina ),Lincomicinas. Inhibicin de sntesis de cidos nucleicos : cido Nalidxico, Novobiocina,Sulfonamidas, Trimetropin, Rifampicina. Medicin de la actividad antimicrobiana Esta se determina mediante los mtodos de dilucin o difusin, utilizando un microorganismo estandar y una cantidad conocida del antimicrobiano. Para ello se utilizan las pruebas de dilucin en tubos y el mtodo de difusin. Prueba de dilucin. En ste ensayo se incorporan cantidades conocidas de antimicrobianos en medios lquidos, se inoculan despus con las bacterias en prueba y se incuban. El punto final se toma cuando la cantidad de sustancias antimicrobiana es capaz de inhibirel crecimiento o de matar a las bacterias en prueba. Mtodo de difusin Preparacin del inculo.

La tcnica del antibiograma slo es aplicable a especies bacterianas en cultivo puro. Por ello previamente se proceder, si es preciso, a hacer un aislamiento en placa. Cultivar la bacteria aislada en un tubo con medio lquido apropiado (caldo nutritivo, infusin cerebro corazn) o preparar una suspensin directa a partir del cultivo en placa usando el siguiente mtodo: Tomar una colonia aislada con el asa y resuspender en el tubo de solucin salina frotando en la pared del tubo. a) Homogeneizar bien y ajustar la densidad ptica con un patrn de turbidez N 0,5de Mac Farland : 0,5 ml de cloruro de bario 0,048 M a 99,5 ml de cido sulfrico0,36 N 0,18 M. Esto equivale a 10 clulas/ml . Diluir si es necesario la suspensin o aadir ms inculo. b) Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez, sumergir una torunda estril en la suspensin, rotar la torunda estril varias veces. Presionando firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del lquido, para remover el exceso de inculo. c) Inocular la superficie seca de la placa con agar Mueller Hinton estriando con una torunda en tres direcciones mediante rotacin de la placa, para asegurar una distribucin uniforme del inculo, dejar secar la placa a temperatura

ambiente por 3 a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido. d) Colocar los discos sobre la superficie del agar con la ayuda de una pinza estril(o con un aplicador automtico) presionando suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto completo son la superficie del agar. Distribuir los discos uniformemente de modo que estn a una distancia de 15 mm del borde de la placa y a 25 mm uno del otro (el dimetro de los discos segn las normas de la Organizacin Mundial de la Salud debe ser de 6 mm), no deben colocarse ms de 6 discos en una placa. La dificultad de ste mtodo est en las diferentes velocidades de crecimiento para los diversos microorganismos. El uso de un disco para cada antibitico estandarizado , permite dar el informe de S(sensible), I (intermedio) y R (resistente). Factores que pueden afectar la actividad antimicrobiana in vitro: a) El pH del medio, ya que algunos antibiticos son ms activos a pH cido (Nitrofurantona), otros a pH alcalino (Aminoglucsidos , Sulfonamidas) b) Los componentes del medio, en este caso las protenas sricas fijan a las penicilinas desde 40 % para la Meticilina y 98 % para la Dicloxacilina. c) Estabilidad de los medicamentos , a la temperatura de la incubadora varios agentes antimicrobianos pierden su actividad. d) Cuanto ms grande sea el inculo bacteriano, ms baja ser la sensibilidad del microorganismo. e) Cuanto ms tiempo se prolonga la incubacin, mayor es la oportunidad de presentarse las mutantes resistentes , igualmente los microorganismos que crecen rpido y activamente son ms sensibles a la accin de los antibacterianos que aquellos que se encuentran en fase de reposo. f) Dilucin en tubo. Se obtiene un resultado cuantitativo , destacando dos caractersticas importantes.Concentracin mnima inhibitoria (CMI) : es la concentracin mnima de antimicrobiano que inhibe el crecimiento de un microorganismo. Concentracin mnima bactericida (CMB) : es la concentracin que mata a los microorganismos. Normalmente la CMI es suficiente para combatir una determinada infeccin, ya que los mecanismos inmunitarios se encargan de eliminar al microorganismo. MATERIALES: Caldo de cultivo con suspensin bacteriana a la escala de turbidez de N 0,5 de McFarland

Placas de Petri con agar Mueller Hinton Torundas estriles Discos impregnados con diferentes antibiticos Pinzas estriles.

METODOLOGA: 1) Sumergir la torunda en caldo tripticasa de soya con cepa bacteriana , presionar firme sobre las paredes del tubo y extender uniformemente en la superficie de la placa de agar Mueller Hinton. 2) Colocar con la ayuda de pinzas, los discos impregnados con diferentes antibitico sobre la superficie del agar. Los discos deben quedar a una distancia de 25 mm entre ellos. 3) Incubar a 37C durante 24 horas. 4) Realizar la lectura, observar y anotar los resultados. Lectura de los discos de sensibilidad. El dimetro de la zona de inhibicin se mide con una regla milimetrada, colocada debajo de la placas de Petri. El lmite del rea de inhibicin est dado por la inhibicin completa del desarrollo, tal como se puede apreciar a simple vista. Los milmetros de la lectura sern llevados a la tabla correspondiente para traducir su interpretacin en los trminos: sensible (S), intermedio (I), resistente (R).

Actividad antimicrobiana In Vivo. In vivo (Latn: dentro de lo vivo) significa "que ocurre o tiene lugar dentro de un organismo". En ciencia, in vivo se refiere a experimentacin hecha dentro o en el tejido vivo de un organismo vivo, por oposicin a uno parcial o muerto. Pruebas con animales y los ensayos clnicos son formas de investigacin in vivo. Este tipo de investigacin se aproxima al sujeto de experimentacin holsticamente. Es a menudo ms apropiado para la observacin de efectos finales y totales para un experimento en el sujeto viviente. En la biologa molecular, in vivo se refiere a experimentacin a nivel celular, donde stas pueden ser rotas y analizadas. En el pasado, los conejillos de indias fueron tan comnmente usados in vivo como sujeto experimental, que se hizo parte del idioma espaol tanto como del ingls: ser un conejillo de indias para alguien/algo. Sin embargo, estos animales han sido reemplazados por un tipo de rata que ms pequeo, barato y rpido en reproduccin. | Tambin puede hacer referencia a cualquier tipo de experimentacin por

oposicin a aquella que se hace in vitro, por ejemplo, los experimentos de propagacin de plantas que se hacen en viveros se consideran in vivo, contrario a lo que sucede cuando se propagan plantas en tubos de ensayo, que se considera in vitro. En ambos casos el sujeto de experimentacin est vivo. Es mucho mas compleja ya que hay que considerar las condiciones del hospedero. Factores que afectan la actividad antibacteriana in vivo. Estado de actividad metablica de los m.o. : puede ser muy diferente, generalmente menor, que en el laboratorio. Distribucin del medicamento en los diferentes tejidos y rganos: es muy variable, ej. algunos medicamentos no penetran al SNC.

Localizacin

de

los

microorganismos:

pueden

ser

parsitos

intracelulares, lo que dificulta la accin antimicrobiana. Sustancias que interfieren con el medicamento: el medicamento puede ser inactivado por condiciones ambientales dentro del organismo (ej. pH) o fijado por protenas sanguneas o tisulares.