LUCRARE PRACTIC NR.

3 ESUTUL CONJUNCTIV Structur histologic: (i) matricea extracelular, alctuit dintr-o component amorf i o component fibrilar (fibrele esutului conjunctiv) (ii) celule: proprii (fixe) i migrate (libere). Caracteristici generale morfo-funcionale: (1) originea mezenchimatoas (mezo i ectomezenchim), (2) producerea unei mari cantiti de macromolecule extracelulare ce alctuiesc o matrice complex, (3) structurarea unora dintre macromolecule sub form de fibre (4) dispersarea celulelor n matrice i, n consecin, lipsa jonciunilor intercelulare (5) adeziunea celulelor cu matricea extracelular, rezultnd o interaciune celule-matrice. Acest esut cuprinde multiple varieti tisulare, distincte sub raportul populaiei celulare i al materialului extracelular. I. COMPONENTELE ESUTULUI CONJUNCTIV

A. MATRICEA EXTRACELULAR este constituit, dup modalitatea fizico-chimic de organizare, din matricea (substana) amorf i matricea fibrilar (organizat sub form de fibre). a. Matricea amorf, numit i substan fundamental sau matrice nefibrilar, prezent in vivo ca un material translucid, este un gel nalt hidratat, alctuit dintr-un sistem coloidal dispersat ntr-o faz apoas. Sistemul coloidal este constituit dintr-o serie de macromolecule, reprezentate de glicozaminoglicani, proteoglicani i glicoproteine de adeziune. b. Matricea fibrilar - din punct de vedere morfologic i dup proprietile tinctoriale au fost descrise trei tipuri de fibre: de colagen, reticulare i elastice. 1. FIBRELE DE COLAGEN Colagenul reprezint de fapt o familie de scleroproteine dure, inelastice, fibrilare, de natur glicoproteic. Multiplele tipuri de colagen existente (peste 15) constituie aproximativ 20% din proteinele prezente n organism. Aspecte n microscopie optic - coloraie standard HE: organizate n mnunchiuri cu diametre de 0,5-10 m i de lungime nedefinit, acidofile; traicet ondulat, nu se ramific i nu se anastomozeaz; trec dintr-un mnunchi n altul. Orientarea lor variaz n raport cu varietatea de esut conjunctiv. - coloraii speciale: fuxina acid (rou), derivai ai anilinei (albastru), verde lumin (verde). n practic, utilizarea acestor colorani se realizeaz prin tehnicile: van Gieson, tricrom Mallory i tricrom Masson. - n lumina polarizat fibrele: birefringente, fapt ce indic existena unor subuniti submicroscopice, orientate paralel n axul lung al fibrei. Degradarea colagenului este realizat prin intermediul unor enzime denumite metaloendoproteinaze de matrice, elaborate n principal de fibroblaste, dar i de alte celule (macrofage i neutrofile). Dintre acestea, rolul esenial revine colagenazei, care acioneaz iniial asupra colagenului normal, neafectat, fiind capabil s cliveze triplul helix la un pH neutru.

Tipurile de colagen pot fi grupate pe baza unor criterii de organizare (morfologice, chimice etc.) n opt mari categorii: colagen de tip fibrilar, colagen de tip nefibrilar, colagen asociat colagenului fibrilar, colagen de tip perlat, colagen de ancorare, colagen transmembranar, colagen cu funcii necunoscute, molecule proteice care conin teritorii triplu helicoidale. 2. FIBRE DE RETICULIN - Sunt subiri cu un diametru de 0,5 pn la 2 microni. Nu formeaz fascicule ci reele care constituie suport pentru diferite organe i esuturi. - Nu se coloreaz n tehnici uzuale dar se coloreaz cu sruri metalice, mai ales cu cele de argint. - Alt coloraie folosit este cea cu PAS. Acest lucru sugereaz prezena glicoproteinelor. - Ca i compoziie biochimic, fibrele de reticulin sunt alctuite din colagen tip III. - Sunt formate din fibrile fine care sunt mpachetate lax i care formeaz reele extinse n jurul vaselor de snge, fibrelor musculare netede, acinilor glandulari etc. Ele formeaz i stroma unor organe parenchimatoase ca ficatul, unele glande endocrine, organe hematolimfopoietice. Ele mai apar i n cursul proceselor de cicatrizare Deoarece formeaz reele foarte flexibile ele se gsesc alturi de fibre elastice n organe care trebuie s-i modifice frecvent forma sau volumul n diferite stri fiziologice: de exemplu la nivelul pulmonilor, arterelor, uter etc. 3. FIBRELE ELASTICE Fibrele elastice reprezint o alt categorie specific matricei extracelulare fibrilare, n care molecula predominant este reprezentat de ctre elastin. Aspecte n microscopie optic - coloraii speciale (orcein, rezorcin-fuxin, aldehid-fuxin) - fibre individualizate, fine (1-3 m), ondulate, care nu formeaz fascicule i au tendin de ramificare i anastomoz, rezultnd reele cu ochiuri largi - lamele de tip fenestrat (pereii arterelor de tip elastic) de diferite dimensiuni, dispuse n manier concentric = lamine elastice. - localizare: alveolele pulmonare, ligamentul galben al coloanei vertebrale, tunica medie a aortei B. CELULELE ESUTULUI CONJUNCTIV Dup originea embrionar, n esutul conjunctiv pot fi distinse dou categorii de celule: proprii i migrate. CELULELE PROPRII Reprezentate de celule mezenchimale, fibroblaste/fibrocite i adipocite (origine mezenchimal). 1. CELULA MEZENCHIMAL - specifice vieii embrionare - form stelat sau uor alungit, nuclei mari, ovali sau elongai, palizi, cu cromatina dispersat i citoplasm abundent, cu numeroase prelungiri, relativ srac n organite - se difereniaz n celule proprii ale esutului conjunctiv, celule endoteliale, fibre musculare netede - puine rmn n stadiu nedifereniat, ca celule pluripotente (mezenchim embrionar restant); asociate capilarelor sanguine (pericite). 2. FIBROBLASTUL FIBROCITUL

Fibroblastul - prezent n toate varietile, derivat din celula mezenchimal nedifereniat, responsabil de sinteza i degradarea matricei extracelulare Fibrocitul - fibroblastul aflat ntr-o stare de activitate de sintez mult diminuat. Fibroblastul i fibrocitul sunt aceeai celul n etape funcionale diferite. Fibroblastul MO - celul alungit, fuziform sau stelat, cu diametrul variind ntre 20-30 m / 5-10 m - citoplasm bazofil, cu expansiuni neregulate ca form i dimensiuni - nucleu mare, central, ovalar sau rotund, hipocrom, cromatin fin granular dispus periferic i un nucleol adesea evident. Fibrocitul MO - celul filiform alungit - citoplasm eozinofil - nucleu bastoniform, cromatin condensat, de regul fr nucleol evident Funcii - produce matrice extracelular i menine echilibrul ntre sintez i liz - posed receptori pentru LDL (proteine implicate n geneza ateromatozei); prin endocitoz mediat de receptori, fibroblastul catabolizeaz LDL, realiznd i un transfer al colesterolului pe HDL (proteine neimplicate n procesul de ateromatoz) - produc interferoni (IFN), substane cu rol important n aprarea natural - produc factori chemotactici, cu rol n reacia de aprare nespecific 3. ADIPOCITUL - celul difereniat n vederea stocrii i eliberrii de lipide (n special trigliceride) - n dezvoltarea embrionar: adipoblaste, din care rezult ulterior dou varieti celulare: adipocitul alb i adipocitul brun. Adipocitul alb (unilocular) - celul izolat sau n grupuri mici - n esutul conjunctiv lax - aglomerri importante: formeaz n ansamblu o varietate particular esutul adipos. MO - celul sferic (rotund pe seciuni), cu un diametru de 80-100 m - periferic: mic halou citoplasmatic eozinofil (1-2 m grosime) - central: incluzie lipidic mare, rezultat ca urmare a coalescenei unor picturi mai mici (n principal trigliceride) - nucleu mpins la periferie n tehnicile histologice de rutin, datorit utilizrii solvenilor organici, incluzia trigliceridic dispare i celula apare goal. Nucleul mpins la periferie i aspectul optic gol determin compararea clasic a adipocitului cu un inel cu pecete. Pentru meninerea incluziei se indic utilizarea seciunilor prin congelare i folosirea unor colorani liposolubili (Sudan III, IV, Scharlach, Albastru de Nil etc.). Funcie - realizeaz, n echilibru dinamic, un proces de lipogenez (sintez i stocare de trigliceride) i de lipoliz. Adipocitul brun (multilocular) - celul caracteristic pentru mamiferele hibernante i, n cadrul speciei umane, pentru nou-nscut,

MO -

celul poliedric, 20-30 m citoplasm de aspect spumos sau spongios, aspect datorat incorporrii de multiple incluzii lipidice mici, care nu conflueaz - nucleu central. Funcie - direct implicat n procesul de termogenez. CELULELE MIGRATE Reprezentate de macrofage, plasmocite, limfocite, mastocite i, n numr mai mic, eozinofile. Toate aceste celule au rol important n reaciile de aprare specific i nespecific, n special de cauz bacterian i, ca atare, apar n special n zonele invadate de microorganisme. 1. PLASMOCITUL Plasmocitele sunt n fapt limfocite B activate ca urmare a unei stimulri antigenice. MO - form uor ovalar - dimensiuni de 20 m - citoplasm bazofil - nucleu rotund, plasat excentric, cu halou perinuclear, nucleol proeminent central, dispoziie caracteristic a cromatinei, sub form de grmezi condensate la periferie (aglomerri de heterocromatin alternante cu zone de eucromatin); acest aspect a fost comparat cu imaginea n spie de roat sau cadran de ceasornic. Funcie - celul sintetizant i secretant de polipeptide glicozilate - produsul de sintez al plasmocitelor este reprezentat de imunoglobuline molecule plasmatice cu activitate de anticorpi (efectori ai rspunsului imun umoral). 2. MACROFAGUL Dei face parte din categoria celulelor migrate, din punct de vedere numeric, n multe varieti de esut conjunctiv, macrofagul se plaseaz pe locul doi, dup fibroblast. Originea macrofagelor (numite i histiocite n esutul conjunctiv) este n monocitele circulante, care au capacitatea ca la un anumit semnal s migreze din sistemul vascular n esutul conjunctiv, unde, dup ce se matureaz, au o durat de via de aproximativ 60 de zile. Macrofagele tisulare sunt reprezentate n principal de: histiocitele sau macrofagele esutului conjunctiv; celulele Kupffer hepatice; macrofagele organelor limfopoetice (splin, limfoganglioni); macrofage pulmonare; microglia sistemului nervos central; celulele dendritice epidermice Langerhans; osteoclastele esutului osos. MO - macrofagul n repaus este difereniat cu dificultate de fibroblast - form neregulat, stelat sau de fus, cu un diametru care variaz ntre 10-30 m - citoplasm bazofil sau acidofil (n raport cu stadiul funcional al celulei) - nucleu central, mic, hipercromatic, cromatin frecvent dispersat, nucleol uneori prezent - macrofagul n activitate - funcie principal: fagocitoz

suprafa celular neegal, cu prelungiri cu aspect diferit (fie scurte i boante, fie de tip filopodia, digitiforme, lungi), invaginri i falduri membranare - nucleul frecvent indentat pe o latur, reniform - n unele situaii i localizri, citoplasma prezint vacuole i incluzii variate: material lipidic, pigmeni endogeni (bilirubin, hemoglobin, hemosiderin) sau pigmeni exogeni (particule de carbon, siliciu etc.) Funcii principale: - fagocitoz - sintez i secreie - prezentare a antigenului 4. MASTOCITUL - origine la nivelul mduvei osoase hematopoetice: precursor care se dezvolt n paralel cu precursorii celorlaltor serii sanguine. MO - celul rotund sau oval, diametru 20-30 m - nucleu central, sferic, relativ mic comparativ cu dimensiunea celulei, cu 1-2 nucleoli evideni i cromatin fin granular - citoplasm bazofil, ocupat de numeroase granule, intens bazofile, delimitate de membran, dimensiuni 0,3-0,8 m, frecvent mascheaz nucleul - celula greu de identificat n coloraia de rutin, necesit coloraii speciale: datorit coninutului n heparin (glicozaminoglican sulfatat heparansulfat), granulele sunt metacromatice (culoarea virnd din albastru n rou magenta) n cazul utilizrii de colorani derivai ai anilinei. Populaia mastocitar: dou tipuri celulare diferite, n special prin localizare i prin coninutul granulelor: mastocite ale esutului conjunctiv propriu-zis i mastocite ale mucoaselor. Funcii - activitate de sintez i stocare a unor produse biologic active: mediatori preformai i mediatori neoformai (sintetizai pe seama fosfolipidelor membranare) - eliberare prin exocitoz II. VARIETI DE ESUT CONJUNCTIV esutul conjunctiv, prin localizarea, structura i multiplele funcii pe care le ndeplinete, prezint o multitudine de varieti. Clasificare didactic: trei tipuri principale: - esutul conjunctiv propriu-zis - esutul conjunctiv cu proprieti speciale - esutul conjunctiv specializat. esutul conjunctiv propriu-zis include, n funcie de raportul existent ntre elementele constituente (matrice extracelular nefibrilar i fibrilar, celule): - esutul conjunctiv lax - esutul conjunctiv dens - esutul conjunctiv reticular - esutul conjunctiv elastic - esutul conjunctiv mucos. esutul conjunctiv cu proprieti speciale este o varietate heterogen, n care celulele conjunctive sunt difereniate i specializate pentru anumite funcii exemplul cel mai elocvent fiind esutul adipos.

esutul conjunctiv specializat se prezint sub forma a dou varieti esutul cartilaginos i esutul osos n care att celulele proprii, ct i matricea extracelular sunt specializate, n principal, pentru funcia de susinere a organismului, intrnd n structura scheletului. 1. ESUTURI CONJUNCTIVE PROPRIU-ZISE - cantitate relativ de matrice extracelular nefibrilar, fibrilar i de celule - diferenele cantitative ale raportului acestora variaz n raport cu localizarea, existnd o corelaie ntre histoarhitectonic i funcie ESUTUL CONJUNCTIV LAX - proporii aproximativ egale a celor trei componente: celule, fibre, matrice extracelular nefibrilar - alte denumiri: areolar dup modul de aranjare a fibrelor, difuz dup larga lui distribuie i celular datorit prezenei n numr relativ mare, att a celulelor autohtone, ct i a celor migrate Caracteristici: - fibre de colagen, reticulare i elastice dispersate sau organizate ntr-o reea tridimensional, determinnd existena unor spaii areolare, care conin substan fundamental abundent i celule. - colagenul nu formeaz mnunchiuri groase de fibre fibrele sunt individualizate, realizeaz traiecte sinuoase i au orientri variate - celulele proprii i migrate se gsesc n raport diferit, dependent de funcionalitatea esutului: predomin fibroblastele i macrofagele, iar n unele teritorii sunt prezente i adipocite albe solitare sau n grupe mici. - prezena de fibre nervoase mici i de numeroase capilare sanguine asigur schimburile hidroelectrolitice, gazoase i nutritive ntre snge i diferite celule. Localizare - cea mai rspndit varietate n corpul omenesc - stromei diferitelor organe (uneori ca septuri care delimiteaz lobuli) - corionul mucoaselor sau lamina propria i dermul superficial (papilar) - seroasele care formeaz marile caviti naturale (peritoneu, pleur, pericard), precum i a meningelui moale - n jurul fibrelor nervoase i tunica extern (adventicea) vaselor sanguine. ESUTUL CONJUNCTIV DENS - predominana fibrelor esutului conjunctiv, frecvent organizate sub form de mnunchiuri - dou subtipuri: - dens neregulat sau semiordonat (n care mnunchiurile de fibre au orientri diferite) - dens regulat sau ordonat (n care mnunchiurile de fibre au o organizare paralel ntre ele) A. ESUTUL CONJUNCTIV DENS SEMIORDONAT - format, n principal, din colagen (predominant de tip I), organizat sub form de fibre care formeaz fascicule groase, orientate spaial n mod variat, printre care apar dispersate reele fine de fibre elastice. Localizare - dermul profund al pielii - capsulele conjunctive care tapeteaz unele organe interne (splin, testicul, ficat, rinichi, limfoganglioni) i, uneori, septurile, care compartimenteaz interiorul acestora

- dura mater - tecile nervilor mari B. ESUTUL CONJUNCTIV DENS ORDONAT - format din fascicule grosolane de colagen de tip I, mpachetate strns i orientate pe direcia de aciune a forelor mecanice de traciune, ceea ce confer astfel o rezisten maxim - matrice extracelular nefibrilar prezent n cantitate redus, celule puine (fibrocite, dispuse printre fibre, cu axul lung paralel cu fasciculele de collagen) Localizare - structuri rezistente de susinere i protecie: - tendoane, ligamente, - aponevroze - cornee - capsule de nveli ale organelor. ESUTUL CONJUNCTIV RETICULAR - predominan a fibrelor reticulare (colagen de tip III), organizat ntr-o reea tridimensional, cu ochiuri mai mici (strnse) sau mai mari (largi) Localizare - stroma pentru organele hematopoetice i limfoide - cadrul arhitectural al sinusoidelor ficatului, esutului adipos, muchilor netezi i al insulelor Langerhans pancreatice. ESUTUL CONJUNCTIV ELASTIC - abundena fibrelor de tip elastic, organizate fie ca atare, fie ca lamele elastice Varianta fibrilar: - fibre individualizate, bine reprezentate printre fibrele de colagen, formnd uneori fascicule - Localizare: septurile interalveolare pulmonare, lamina propria a vezicii urinare, dermul pielii Varianta lamelar - fibre aranjate paralel, rezultnd foie subiri sau membrane fenestrate - Localizare: vasele sanguine mari (tunica medie, de tip elastic), ligamentul galben al coloanei vertebrale i ligamentul suspensor al penisului. 2. ESUTURI CONJUNCTIVE CU PROPRIETI SPECIALE - esut adipos alb - esut adipos brun