Mengumpulkan sel dalam kondisi mapan sesuai dengan yang berbeda tahap fermentasi Anggur batch menggunakan terus

menerus Modus budaya yang menantang karena sebagian dari proses industri dicapai tanpa pertumbuhan ragi, selama fase stasioner. Akibatnya, multi-level fermentors desain harus digunakan, dengan tahap pertama terus makan yang terakhir dengan sel beristirahat. Karakterisasi dari dua-dan fermentasi empat tahap berkelanjutan (TSCF dan FSCF, masing-masing) perangkat menunjukkan bahwa setidaknya dua tahap dengan sel tumbuh diperlukan. Hal ini untuk benar menciptakan kondisi lingkungan dan fitur fisiologis ragi pada fase yang berbeda dari proses fermentasi Enological Menggunakan desain TSCF, kelelahan total nitrogen dari media dalam bejana fermentor pertama adalah prasyarat untuk memperoleh sel dalam fase diam untuk tahap kedua. Akibatnya, pada steady state, konsentrasi sisa nitrogen mendekati nol di kedua tank. Fisiologis parameter yang berhubungan dengan pertumbuhan dan produksi metabolit yang diukur pada tahap pertama - setara dengan nitrogen terbatas chemostat - berbeda jauh dari orang-orang di fase pertumbuhan dari fermentasi batch winemaking. Hal ini mungkin karena perubahan dalam pola regulasi metabolisme sel yang berkaitan dengan perbedaan ketersediaan nitrogen antara dua mode fermentasi. Ragi telah mengembangkan berbagai cara untuk secara khusus merasakan ketersediaan ekstraseluler asam amino.amonium (misalnya sistem sinyal SPS) dan untuk lebih mengatur dan mengarahkan metabolisme sesuai dengan kandungan nitrogen di lingkungan mereka (sintesis misalnya C-kerangka untuk asimilasi nitrogen dan penyimpanan) (Schneper et al., 2004). Memang, sebelumnya telah melaporkan bahwa di stabil state nitrogen membatasi chemostats, sel menunjukkan global pola ekspresi gen yang lebih dekat dengan budaya bets sesaat sebelum kelelahan hara membatasi (Brauer et al, 2005.; Saldanha et al, 2004.). Akibatnya,dalam tahap pertama TSCF, ragi fisiologi di tidaknya nitrogen mungkin berbeda berbentuk selama fase pertumbuhan fermentasi Enological. ini adalah khususnya yang berkaitan dengan kemampuan untuk tumbuh dan orientasi pusat karbon metabolisme. Konsisten dengan ini, lebih tinggi tingkat akumulasi karbohidrat penyimpanan telah dilaporkan di anaerobik nitrogen terbatas budaya chemostat dibandingkan dengan glukosakelebihan nitrogen terbatas kondisi (Hazelwood et al., 2009). Dengan sistem FSCF, fermentasi sinambung dapat dijalankan setidaknya kapal pertama fermentor dalam kondisi kelebihan glukosa dan nitrogen, mirip dengan fase pertumbuhan Enological bets proses. Dalam serangkaian empat fermentors (inwhich nitrogenwas kelelahan dalam sepertiga), fisiologis parameter utama dari anggur EC1118 ragi pada setiap tahap serupa dengan yang dalam batch Enological fermentasi pada kemajuan fermentasi yang sama. ini menunjukkan kelayakan dari penggunaan desain FSCF untuk mereproduksi berbagai tahap pembuatan anggur fermentasi pada steady state, asalkan nitrogen ketersediaan di fermentors pertama sudah cukup. Strain laboratorium V5, adalah strain haploid berasal dari Champagne anggur ragi. Ini menunjukkan karakteristik fermentasi yang sama untuk orang-orang tua industrinya, dan iswidely digunakan sebagai amodel untuk s tudi pada fisiologi ragi selama fermentasi anggur (Ansanay-Galeote et al., 2001; Cambon et al, 2006).. Namun, jenis virus ini akan menampilkan yang spesifi k metabolik properti yang berkaitan dengan latar belakang genetiknya. The FSCF Sis tem memungkinkan penyelidikan lebih lanjut dari beberapa sifat karakteristik untuk j

enis virus ini, terutama nitrogen asimilasi. Salah satu ciri khas metabolik V5 duringwine fermentasi comparedwith lainnya S. cerevisiae strain adalah yang kemampuan untuk menghasilkan a-KG, perantara dari pathwaywhich TCA adalah pada perempatan antara karbon dan nitrogen metabolisme. Senyawa ini biasanya tidak dirilis oleh ragi, sejak pembentukannya melalui dehydrogenases isocitrate yang halus disesuaikan dengan persyaratan ofa-KG untuk produksi glutamat dan digunakan lebih lanjut dalam metabolisme nitrogen. Selama fermentasi anggur V5, ekskresi a-KG - yang secara langsung berkorelasi dengan jumlah nitrogen berasimilasi (Gbr. 6) - mencerminkan ketidakseimbangan antara produksi dan konsumsi a-KG. ini adalah kemungkinan besar karena perubahan dalam jaringan regulasi dari jenis virus ini. Terlepas dari kandungan nitrogen dari media, tingkat tertentu amonium konsumsi V5 lebih rendah dari 5 mg amonium / h / (g berat kering) di seluruh fermentasi batch. Ini secara langsung dampak pada permintaan untuk a-KG diperlukan untuk anabolisme. Dalam sistem FSCF, itu adalah mungkin untuk memaksakan ini tingkat tertentu pada tingkat yang lebih tin ggi dari ini nilai ambang (25 mg amonium / h / (g berat kering) selama pertama stage). Dalam hal ini, produksi a-KG meningkat secara linear dengan nitrogen konsumsi, tetapi 3 kali lipat lebih rendah dibandingkan dengan batch-mode fermentasi. Pengamatan ini menunjukkan bahwa V5 strainmost kemungkinan dirilis a-KG untuk mencegah akumulasi intraseluler dari senyawa ini karena fluks berkurang terhadap produksi glutamat dan anabolisme Dalam studi ini, kami menunjukkan bahwa adalah mungkin untuk mereproduksi berbagai negara batch-anggur fermentasi dalam serangkaian berurutan stabil negara. Perangkat ini menawarkan perspektif baru untuk menganalisis spesi fik fitur fisiologi ragi selama pembuatan anggur untuk dua utama alasan. Pertama, FSCF desain - di mana sel-sel berada dalam terkontrol dan Lingkungan yang stabil - adalah alat yang relevan untuk penggunaan pasca-genomik cutting-edge teknologi untuk menyelidiki adaptasi ragi ke ekstrim lingkungan fermentasi anggur. Kedua, sistem ini memungkinkan untuk uncouple variasi parameter lingkungan yang tergantung pada batch-proses fermentasi. Hal ini akan membantu mendapatkan wawasan baru ke dalam metabolisme ragi dan peraturan selama alkohol fermentasi.