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Laboratorio N2: Observacin de Bacterias, Hongos y Protozoos.

La clula es la unidad estructural y funcional de todo ser vivo, posee una organizacin molecular que le permite desempear funciones vitales, tales como: crecer, reproducirse y adaptarse a diferentes condiciones ambientales. La gran cantidad y diversidad de especies vivas ha llevado a agrupar a los organismos vivos en cinco grandes reinos: Procariontes, Protista, Hongos, Animal y Vegetal. El primero se caracteriza por poseer slo representantes procariontes unicelulares, que se pueden agrupar en colonias. La nutricin se realiza por absorcin, fotosntesis y quimiosntesis. La reproduccin es asexuada por fisin o yemacin; incluye bacterias y algas verde-azules. Las bacterias son procariontes, su forma puede relacionarse con esferas (cocceas), bastones (bacilos) o espirales (espirilos). Estos tipos, al agruparse, forman distintas asociaciones: diplococos (dos cocceas), estreptococos (varias cocceas en forma de hilera) o estafilococos (varias cocceas en racimos); diplobacilos o estreptobacilos. Muchas bacterias poseen una pelcula externa a la clula que se conoce como capsula; su composicin es en base a aminocidos, y se relaciona con la resistencia de la bacteria al medio ambiente y con la capacidad para producir enfermedades. La mayor parte de las bacterias poseen una estructura conocida como pared celular, la cual es una membrana rgida, y que funciona para proteger a la bacteria del medio, mantener su forma, y se relaciona con la capacidad de tincin de las bacterias. Por lo tanto, estos organismos pueden ser Gram positivos o Gram negativos, de acuerdo a su capacidad de retener el colorante azul-violeta, siendo las clulas con pared celular ms gruesa las que lo retienen mejor (Gram positivas). El segundo reino (Protista), se representan por medio de organismos unicelulares eucariontes que pueden vivir aisladamente o en colonias. Su nutricin puede ser por absorcin, ingestin o fotosntesis, segn la especie. El tipo de locomocin es variado, ya que algunos de los representantes poseen cilios, otros flagelos o peudpodos. En cuanto a la reproduccin, los protozoos utilizan mecanismos asexuados, mediante la mitosis, tales como: fisin binaria o biparticin, divisin mltiple o esquizogonia y yemacin. Sin embargo, existe una tipo de reproduccin sexuada, denominada conjugacin. Por ltimo, se considerara en este prctico el reino de los Hongos: siendo organismos difciles de clasificar por su gran diversidad y diferencias entre ellos. Son eucariontes, muchos binucleados con una pared celular, aunque diferentes a la de los vegetales. Pueden ser unicelulares o multicelulares, y se reproducen por yemacin o formacin de esporas. La nutricin se realiza por absorcin, y pueden ser tanto parsitos como saprfitos. En este grupo se pueden dividir principalmente en: mohos, levaduras, hongos y setas.

Objetivos. 1. Observar a travs de dos tcnicas de tincin bsicas, las caractersticas de los distintos organismos procariotas (bacterias) y eucariotas (protozoos y hongos). 2. Observar y comparar la morfologa unicelular de las distintas especies a investigar. Materiales: Microscopio ptico. Mechero Bunsen. Asa Gotario. Portaobjeto Cubreobjeto. Material biolgico: Muestras bacterianas, protozoos y hongos, Solucin de cristal violeta al 1%. Fucsina. Azul algodn. Lugol. Alcohol acetona. Aceite de inmersin.

Procedimientos: a) Frotis de las colonias de bacterias. 1.- Tomar una muestra de bacteria del frotis y depositarla sobre el portaobjeto. 2.- Dejar secar el frotis a temperatura ambiente o con mechero. 3.- Realizar una extensin y pasar luego hacia la coloracin: Cristal violeta (2 min.) Lavar con abundante agua destilada el exceso de colorante Lugol (1 min.) Decolorar con Acetona (30seg aprox) Lavar con abundante agua destilada. Fucsina (1 min.) Lavar con abundante agua destilada. Secar. Montar el cubreobjeto sobre la muestra.

4.-Observar al microscopio ptico.

Observacin esperada del frotis: Coloracin:

Gram negativas

Gram positivas

Forma:

b) Preparacin de muestras de protozoos. 1.- Tomar una muestra con un gotario de agua dulce. 2.- Depositar sobre un portaobjeto una gota de la muestra tomada. 3.-Ponga un cubreobjeto cuidadosamente, sin eliminar el agua. 4.- Llevar hacia el microscopio ptico, y luego realizar las observaciones pertinentes.

c) Frotis de colonias fngicas. 1.- Tomar una muestra de hongo del frotis y depositarla en el portaobjeto. 2.- Realizar una extensin de la muestra y pasar a colorar. 3.- Depositar una dos gotas de Azul Algodn a la muestra, mantener unos segundos. 4.- Colocar cubreobjeto y posteriormente realizar la observacin en el microscopio ptico.

Preguntas. 1. Cul es la importancia biolgica que poseen las bacterias, los protozoos y hongos?

2.

Qu diferencias hay entre una bacteria Gram positivo (+) de una Gram negativo (-)? Fundamente.