El DNA complementario (cDNA) se sintetiza a partir del mRNA.

El mRNA total se extrae de un tejido en particular y las copias de DNA (cDNA) de las molculas de mRNA son producidas por la enzima transcriptasa inversa. Para simplificacin, aqu se ilustra la copia de solo uno de estos mRNA en cDNA. Un oligonucletido corto complementario de la cola de la poli-A en el extremo 3 del mRNA primero se hibrida a RNA para actuar como un cebador para la transcriptasa inversa, que luego copia el RNA hacia la cadena de DNA complementaria, para formar de este modo una hlice hibrida de DNA/RNA. El tratamiento del hibrido DNA/RNA con la enzima RNasa H crea roturas y espacios en la cadena de RNA. El cDNA de cadena simple restante luego es copiado hacia cDNA de doble cadena por la enzima DNA polimerasa; el cebador para esta reaccin de sntesis es proporcionado por un fragmento del mRNA original. Recordemos que la mayora de los genes de mamferos son un mosaico de intrones y exones; estos genes interrumpidos no se pueden expresar en bacterias, ya que carecen de la maquinaria necesaria para escindir los intrones y eliminarlos del transcrito primario. Sin embargo, este problema se puede soslayar introduciendo en las bacterias un DNA recombinante que sea complementario al mRNA. La clave para construir ese DNA complementario es el enzima transcriptasa inversa. Por ejemplo, los retrovirus utilizan esta enzima para formar un hbrido DNA RNA durante la replicacin de su RNA genmico. La transcriptasa inversa sintetiza una hebra de DNA complementaria a un molde de RNA si se le proporciona un DNA cebador que est formando pares de bases con el RNA y que posea un grupo OH libre en posicin 3. Podemos utilizar como cebador una secuencia sencilla formada por residuos de timidina unidos. Esta secuencia se empareja con la secuencia poli(A) presente en el extremo 3 de la mayora de las molculas de mRNA eucariticas. A continuacin, la transcriptasa inversa sintetiza el resto de la hebra de cDNA en presencia de los cuatro desoxirribonuclesidos triofosfato. Posteriormente, la hebra de RNA de este hbrido RNA DNA se hidroliza aumentando el pH. A diferencia del RNA, el DNA es resistente a la hidrlisis alcalina. Para convertir la hebra sencilla de DNA en un DNA de doble hebra hay que generar otro lugar que funcione como cebador. La enzima transferasa terminal aade nucletidos al extremo 3 del DNA. Un Oligonucletido se puede unir a los residuos de guanina y servir de cebador para la sntesis de la segunda hebra del DNA. A esta doble hlice de DNA se le pueden aadir adaptadores sintticos para ligarlo a un vector adecuado. Se puede fabricar DNA complementario para todos los mRNA presente en una clula, insertarlo en vectores y posteriormente introducirlo en bacterias; a esta coleccin se le denomina biblioteca de cDNA.

Aplicaciones de la Reaccin en Cadena de la Polimerasa. Obtencin de huellas de ADN. Deteccin de mutaciones. Deteccin de enfermedades hereditarias como la fibrosis qustica, hemofilia clsica y distrofias musculares Duchenne/Becker. Permite identificar al agente infeccioso independientemente de su respuesta serolgica. En casos donde se quiere distinguir si la presencia de anticuerpos es seal de infeccin antigua o activa como ocurre ante el hallazgo de anticuerpos contra el virus de la hepatitis C y la necesidad de precisar si el virus est presente o no. En el diagnstico de enfermedades virales neonatales. Permite estudiar no slo organismos vivos, sino tambin sus restos fsiles, congelados o momificados. Sirve para medir la expresin de un determinado gen a partir de ARNm y la enzima transcriptasa inversa. Test de paternidad. Clonacin de genes. Identificacin de especies. El DNA complementario, se pueden crear bibliotecas de genes que incluyan solo genes transcritos en un tejido particular, en determinado momento, a partir de DNA complementario, la sntesis de cDNA tiene especial utilidad para identificar mRNA que estn presentes solo en unas pocas copias y a menudo es el punto inicial para la clonacin de genes.