5.

ENZIMEK, KOENZIMEK, VITAMINOK

5.1. Enzimek

5.1.1. Az enzimek ltalnos tulajdonsgai Az enzimek a globulris fehrjk krbe tartoznak. A szervezet folyamataiban fontos szerepet jtszanak, mint biokataliztorok. Feladatuk abban ll, hogy a sejtekben vgbemen biokmiai reakcik a fiziolgiai krlmnyek kztt megfelel sebessggel vgbemehessenek. A katalitikus folyamat sorn a peptidlncban egymstl tvoli aminosavrszek kerlnek olyan trhelyzetbe, hogy egyttesen fejthetik ki hatsukat. A fehrje felletn egy olyan sajtos szerkezeti rszlet alakul ki, amelyhez a szubsztrt molekula illeszkedik, s az enzimhez kapcsoldik. Ez a kthely. A kthely a molekulban lv n. katalitikus hellyel egytt, ahol lejtszdhat a katalitikus reakci, az enzim aktv centrumt kpezi. A katalitikus helyen azok a funkcis csoportok tallhatk, amelyek a szubsztrtum talaktsban kzvetlenl rszt vesznek. Az enzimek kirlis molekulk, kpesek klnbsget tenni enantiotp csoportok s felletek kztt, mintegy 96-98%-os sztereoszelektivitssal. Az enzimmkds rszletes folyamatt a tripszin s a kimotripszin-A pldjn mutatjuk be (5.1. s 5.2. bra). Mindkt enzim a szerinprotezok csoportjba tartozik. Nevk onnan ered, hogy egyrszt protezok, mert polipeptidek, proteinek hidrolzist katalizljk. Msrszt pedig azrt klnbztethetk meg a tbbi proteztl, mert a katalitikus reakciban a szerin aminosav oldallnca jtszik dnt szerepet. Mindkt enzimben a katalitikus helyen a lncban egybknt tvoli hrom aminosav a hrom-dimenzis szerkezetben trkzeli helyzetbe kerl: az aszparaginsav (Asp-102), a hisztidin (His-57) s a szerin (Ser-195). Alapvet klnbsg a kt enzim kztt a ktdsi hely szerkezetben tallhat. A tripszin elnysen olyan peptidktst bont, melynek szomszdsgban bzikus oldallncot tartalmaz aminosav, pl. lizin, vagy arginin helyezkedik el. Ekkor a kthely s a szubsztrt kztt Coulomb-fle ionos klcsnhatsok alakulnak ki. A kimotripszin-A esetben pedig az enzim felletn olyan zsebszer kpzdmny keletkezik, mely hidrofb klcsnhats rvn rgzti a szubsztrtot: a kimotripszin-A gy olyan peptidktst bont,

101

melynek szomszdsgban pl. fenilalanin van. Ez illeszkedhet a hidrofb falhoz az enzim felletn. A ktdsi hely szerkezetben tallhat alapvet klnbsg hatrozza meg a szerinprotezok specifikussgt. A kt klnbz tpus kthely az albbi brn lthat:

5.1. bra. A tripszin s a kimotripszin-A kthelynek rszlete. A katalitikus reakci mechanizmust a kimotripszin-A pldjn mutatjuk be (5.2. bra).

5.1.2. A kimotripszin-A hatsmechanizmusa Szerkezete rgta ismert. 1964-ben Hartley megllaptotta az aminosav-sorrendet, a trszerkezett Blow hatrozta meg 1967-ben. A kimotripszin-A a hasnylmirigybl kristlyosan izollhat, mintegy 245 aminosavat tartalmaz fehrjebont enzim. Hrom peptidlncbl ll, melyeket diszulfn-ktsek rgztenek. Az aktv centrum rszt itt is a Ser-195, a His-57 s az Asp-102 aminosavak alkotjk. Proteinz s peptidz (hidrolz) szerepe van: kedvezmnyezetten olyan helyeken bont, ahol a karboxilcsoport aroms aminosav rsze: pl. fenilalanin, tirozin. Az enzim felletn a szubsztrt ktdsi helye egyttal a sztereospecifikussgot is meghatrozza. Ha
D-aminosav

van jelen ebben a

helyzetben, az oldallnc rossz irnyban, a zsebbel ellenkez oldalon helyezkedik el. Ezrt

102

a szerinprotezok aktivitsuk is van.

D-aminosavakat

nem hidrolizlnak. szter-ktst is bontanak, szterz

A peptidkts hidrolzisnek sszegzett reakcija a kvetkez:

O R C NH Q

+ H 2O

enzim R C

O + OH H2N Q

Az egyenletben R = az N-terminlis, Q = a C-terminlis peptid fragmens. Az aroms oldallnc szerepe, mint emltettk, abban rejlik, hogy a kthelyen az aroms gyr a kthely hidrofb falhoz kapcsoldik. A folyamatot az 5.2. brn mutatjuk be. Az I-es kpen a kiindulsi llapotot tntettk fel. A hidrolizland peptidktst tartalmaz fehrje aroms gyrjvel mr a kthelyhez kapcsoldott nem kovalens ktssel. Az enzim peptidlncban egymstl tvol ll, de a trszerkezetben egymshoz kzel kerlt hrom aminosav, melyeket mr emltettnk, gy kifejtheti katalitikus hatst. A hisztidin imidazol-gyrje egy proton-felvtellel s egy proton-vesztssel jr lpsben vesz rszt, s kialakul a II-es kpen lthat enzim-szubsztrt komplexben a nukleofil szerinoldallnc. Az alkoholt anion a peptid-karbonilcsoport sznatomja ellen intz nukleofil tmadst, melynek eredmnye az un. els tmeneti llapot, vagy tetrahedrlis (tetragonlis) tmeneti llapot, amely a III-as kpen lthat. Ezutn a proton a C-terminlis fragmenshez kapcsoldik, mely a szn-nitrogn kts hasadsa utn eltvozik. Az Nterminlis rsz szterktssel kapcsoldik az enzimhez s gy kialakul a gyakran acilenzim intermediernek nevezett vegylet, melyben a szubsztrtot s az enzimet kovalens kts kti ssze (IV). A szerin tulajdonkppen alkoholzissel bontotta el az amid-ktst. A kvetkez lpsben keletkezik az V acil-enzim-vz komplexnek nevezett struktra, a hisztidin egy vzmolekult deprotonl (V), s a keletkezett hidroxidion jabb nukleofil tmadssal az szter sznatomhoz ktdik. Ez egy szter-hidrolzis kezd lpse. Kialakul az un. msodik tmeneti llapot (VI), melynek stabilizldsa sorn a msodik peptidfragmens is szabadd vlik s eltvozik, mikzben a proton a hisztidinrl a szerin hidroxilcsoportjra vndorol. Visszajutunk a VII-es kpen bemutatott alapllapothoz: az enzim kszen ll a kvetkez amid kts hastsra.
103

I ENZIM

II ENZIM CH2 Ser-195 CH2 O H N His-57 N H O CH C NH C terminlis His-57 H O O Asp -102 O O Asp -102 CH2 Ser-195 CH2 O H N N O CH C NH C terminlis

Nterminlis

Nterminlis

III ENZIM O CH2 Ser-195 CH2 O H N Cterminlis His-57 H O O Asp -102 N C CH NH

IV ENZIM O Nterminlis Ser-195 CH2 O N His-57 N H C terminlis C CH2 CH

Nterminlis

H NH

O Asp-102

V ENZIM O CH2 Ser-195 CH2 O N His-57 N H O O Asp-102 C CH H O H

VI ENZIM O Ser-195 CH2 O H N His-57 N C OH CH2 CH

Nterminlis

Nterminlis

OH Asp -102

5.2. bra. A kimotripszin-A hatsmechanizmusa.

104

(az 5.2. bra folytatsa)

VII ENZIM

CH2 Ser-195 CH2 O H N His-57 N H O CH C OH

Nterminlis

O Asp -102

Fontosak a hisztidin reakcii. Ebben az imidazolgyr a fiziolgis pH-n knny protoncsert tesz lehetv, mivel konjuglt savnak a pKa rtke 6,2. Az imidazol ersen polarizlja a szerin hidroxilcsoportjt, nveli ennek nukleofilitst. Minthogy a szerin hidroximetil-csoportja rendszerint nem tlsgosan reaktv, a hisztidin imidazolgyrjnek a szerin hidroxilcsoportjn a negatv tlts kialaktsban alapveten dnt szerepe van. Ez a protontmenet valszntlen, azonban az aszparaginsav (Asp-102) negatv tltsvel stabilizlni kpes a hisztidin heterociklusos gyrjnek protonlsi folyamatt. Az enzim centrumban vgeredmnyben kt egymst kvet katalitikus reakci jtszdik le: egy bzis-katalizlt tszterezs, majd egy bzis-katalizlt alkoholzis, melyben bzisknt a hisztidin szerepel. A kimotripszin-A reakcimechanizmusa j pldja az enzimek mkdsnek. Lthat, hogy az aktivlt llapotok energetikai stabilizlsa s a reaktnsok meghatrozott, pontos trhelyzetben trtn rgztse mennyire fontos az aktivlsi szabadenergia cskkentsben. Emltettk, hogy a kimotripszin-A szterhidrolzist is katalizl. Az albbi egyszer plda jl bizonytja a szerin szerept. A trimetilecetsav-p-nitrofenil-sztert a kimotripszin A-val reagltatva, a reakci sorn az oldatban a p-nitrofenolt anion szabadul fel, mely UV-spetroszkpival jl kvethet. Ha ezutn a reakcielegybl visszanyerjk az enzimet, azt tapasztalhatjuk, hogy
105

az elvesztette aktivitst akr amid-, akr szterhidrolzises reakcikra. gy, miutn a trimetilacetil molekularsz sem szabadult fel, gyanthat, hogy az enzim valamely elsrend fontossg funkcis csoportja acilezdtt, megszntetve az aktivitst. Vgl is rntgenvizsglatokkal derlt ki, hogy ez a szerkezeti rsz pontosan a szerin-195 hidroxilcsoportja.

CH3 O H3C C C CH O
3

E(nzim) NO2

O E C C(CH3)3 + O NO2

Ezt a tnyt az a ksrleti tapasztalat is altmasztotta, hogy az gy inaktivlt enzimet az ersen nukleofil hidroxilaminnal reagltatva megkaptk a trimetilecetsav hidroxmsavszrmazkt, s ugyanakkor az ebben a reakciban visszanyert enzim jra aktvnak bizonyult.

O E C C(CH3)3 + H2N OH E +

CH3 O H3C C C CH NH OH
3

Msik lehetsge az enzim gtlsnak a tetrahedrlis kztitermken alapul. Ezt tmasztja al a formilcsoport szerepe a gtlsban. Ez a gtl hats aldehid polipeptidhez kttt, mgpedig oly mdon, hogy a formilcsoport szomszdsgban aroms gyr kell, hogy legyen. Az ilyen tpus vegyletek az aldehid-hidrt- ill. acetl kpzdst hasznljk fel a tetrahedrlis llapot kialaktsra, s gy az enzim nem kpes a valdi szubsztrttal kapcsolatba kerlni. O polipeptid NH CH C H CH2

106

OH CH OH

OH C O Ser H

Az irreverzibilis, kovalensen ktd inhibitorok kzl a foszftokat emlthetjk meg, melyek tipikusan kompetitv inhibitorok. Ilyenek a diizopropil-fluorofoszft (DFP) s a szarin (harci gz), melyek szintn a szerin hidroxilcsoportjhoz kapcsoldnak s azt blokkoljk. Ezek a vegyletek minden olyan enzim inhibitorai, melyek az aktv helyen szerint tartalmaznak. Gtoljk a szerin-protezokat, gy az acetilkolin-szterzt is, mely utbbi idegi ingerlet-tvitelben jtszik fontos szerepet: az emltett foszforvegyletekkel trtn bntsa sorn az inhibci az letfunkcik gyors sszeomlst eredmnyezi. Felhasznlsi terletk a rovarlk s ideggzok gyrtsa.

F O P O O diizopropil-fluorofoszft (DFP)

F O P CH3 O szarin

5.2. Koenzimek Az enzimek nagy rsznl a katalitikus funkcik mkdshez egy kisebb, nem fehrje termszet molekulra is szksg van. Ez az un. koenzim, mely valamilyen mdon kapcsoldik a fehrjhez (az apoenzimhez) s gy alakul ki a mkdskpes holoenzim. A koenzimek egy rsze nukleotid-szrmazk, ms rsze pedig a tovbbi fejezetben szerepl koenzim funkcij vitamin.

5.2.1. Nikotinsav-amid tartalm koenzimek Nikotinsav-amidot tartalmaz a nikotin-adenin-dinukleotid (NAD+) s 2-foszftja, a nikotin-adenin-dinukleotid-foszft (NADP+).

107

4 H2NOC O N 1'' OH OH nikotin-adenin-dinukleotid NAD O O O 5' O 2' OH OH N 1' O P O P O O N

NH2 N N

H2NOC

4 O N 1'' OH OH O O

NH2 N N N 1'

O 5' O 2' OH O O N O

O P O P O

O P O nikotin-adenin-dinukleotid-foszft NADP

5.3. bra. A NAD+ s a NADP+ szerkezete. Ezek a vegyletek voltakppen pszeudonukleotidoknak is nevezhetk, hiszen tartalmaznak DNS-ben, RNS-ben elfordul bzist, azonban a molekulkban tallhat msik heterociklus nem sorolhat a nukleinsav-bzisok krbe. (Az 5.3. brn kkkel jelltk a nikotinamid-rszt s pirossal a 2-foszft helyettestt.) Ezek a koenzimek oxidcis-redukcis folyamatokban vesznek rszt, mikzben hidrognt vesznek fel ill. adnak le. A redox folyamat vgeredmnyben a piridin-gyrn jtszdik le. A nitrognatom pozitv tltse hatsra a 4-es helyrl elektronvndorls indul meg a nitrogn irnyba. Ennek kvetkeztben a 4-es hely fel hidridanion (kt elektron s egy proton) intz nukleofil tmadst, mely eredmnyekppen az aroms rendszer felbomlik, kinoidlis szerkezet alakul ki s a hidrogn a 4-es sznatomhoz kapcsoldik.

108

pro-R H H H N O C H NH2 H + 2e + H H N H H H O C NH2

NAD + H

NADH

NAD + AH2

A + NADH + H
5.4. bra.

A piridingyr szerepe a NAD+ redukcijban.

Ilyen folyamat megy vgbe pl. a mjban az etil-alkohol acetaldehidd trtn oxidcijakor. Ennek a folyamatnak deutriummal jelzett vegyletek segtsgvel trtnt vizsglata sorn megllaptottk, hogy az alkohol pirossal jelzett pro-S hidrognje vndorol a piridingyrre s a folyamat az albbi reakciegyenlettel rhat fel:

OH NAD + CH3 H C H CH3 C

O H

+ NADH + H

A NADH esetn a 4-es helyzet sznatomhoz kapcsold hidrognek nem ekvivalensek, hanem enantiotpok. Ezt pldzza a piroszlsav tejsavv trtn redukcija is, mely a glikolzis sorn megy vgbe. Ekkor a karbonil sznatomot mindig a pro-R hidrogn tmadja. gy az enantiotp felletet kpez karbonilcsoport sznatomjt a tr olyan oldalrl ri a reagens (ebben az esetben a hidrogn) tmadsa, mely lehetv teszi a sztereospecifikus reakci vgbemenetelt, vagyis azt, hogy a reakciban ne racm, hanem
L-tejsav

kpzdjn.

109

CH3 C O COOH

COOH HO C H L CH3

enzim NH3 O His H O C O Glu

5.5. bra.

O C

H N NAD H pro-R

N H

CH3

A piroszlsav redukcija tejsavv.

Megemltjk, hogy ebben a reakciban a szubsztrtot ionos klcsnhatsok rgztik a kthelyhez az enzim bzikus aminosav-oldallncai segtsgvel, s a folyamatban fontos szerep jut a protoncserben szerepet jtsz hisztidinnek (His), valamint a glutaminsavnak (Glu).

5.2.2. Flavin-adenin-dinukleotid Redox-folyamatok koenzimje a flavin-adenin-dinukleotid (FAD): A vegylet csak egy nukleinsav-bzist tartalmaz, ez az adenin, mely ribofuranz s foszftrszeken keresztl kapcsoldik az brn kkkel jellt riboflavinhoz, mely a B2vitamin. A msik heterociklusos gyr az izoalloxazin, melynek alapja a pteridinvz. Ez utbbi pirazin s pirimidin kondenzcijval rhat fel az albbi mdon:

110

CH3

5 6 8

10 N 9 N

O 4 2 O B2-vitamin: riboflavin 3 H N

CH3 7

N 1' 1 CH2 2'CH OH 3' CH OH 4' CH OH 5'CH

2

NH2 N O O N N adenozin-difoszft OH OH O N

O O

O P O P O

1 N N 4 pirazin

2 3

c d 5 4

3 b N

a N1 6 pirimidin

7 6

8 N N 5

1 N

2 N3

pteridin = pirazino[2,3-d]pirimidin

8 7 6 5

9 N N 10

H 1 N O 2 4 N 3 H O

H N 9 N O izoalloxazin benzo[g]pteridin-2,4(3H,9H)-dion N O N 3 H

alloxazin benzo[g]pteridin-2,4(1H,3H)-dion

5.6. bra.

A FAD szerkezete.

111

Kln figyelmet rdemel a cukorrsz, mely a ribz reduklt alakja, a D-ribit(ol), mely a D- vagy L-ribz redukcijakor keletkezik, optikailag inaktv cukoralkohol:

CHO H H H OH OH OH CH2 OH D-ribz H H H

CH2 OH OH OH OH CH2 OH D-ribit(ol)

CH2 OH H C OH H C OH H C OH CH2 OH

A koenzim mkdsnek mechanizmust rszletesen a vitaminok trgyalsnl mutatjuk be.

5.2.3. A Koenzim-A szerkezete

Az egyik legismertebb koenzim a koenzim-A (CoA) (5.7. bra). Tartalmaz egy adenin-tartalm nukleotid rszt. Az 1940-es vekben F. Lipmann izollta, szintzisre 1959ben kerlt sor (Khorana). A ribofuranozid-gyr a 3-helyzetben foszforilezve van s az 5helyzethez kapcsold kt foszforsav-csoport kti ssze a vitaminknt is ismert pantotnsavval, amelyet a bltraktus baktriumai termelnek. A pantotnsav, melyet az brn kkkel jelltnk, kt s A rszbl az ll: egy hidroxisavbl, mr mely a
D-2,4-dihidroxi-

3,3-dimetilbutnsav, 3-aminopropionsav. jellve).

aminosavaknl

megismert

-alaninbl,

mely a amin

pantotnsav

-Ala

karbonilcsoportjhoz

kntartalm

kapcsoldik: ez a ciszteamin, mely a ciszteinbl vezethet le (az brn narancssrga sznnel Fontos szerepe az acilcsoport szlltsa, e szerepben legismertebb szrmazka az

acetil-koenzim-A (CoA-SAc). Ez a vegylet energiagazdag szter, gy igen reakcikpes. A

tiolsztert a knatom molekulaplyinak az oxigntl eltr tulajdonsgai destabilizljk a csak oxignt tartalmaz szterekhez kpest, ezrt a tiolszter szabadenergija a hidrolitikus folyamatokban megn.

112

NH2 N O O P O pantotnsav O C CH2 HN CH2 CH2 SH ciszteamin koenzim-A NH2 N O O P O O O P O O C CH2 HN CH2 CH2 S C CH3 O acetil-koenzim-A 5.7. bra. CH2 O CH3 OH CH3 O HN C CH C CH2 3' O O P O O OH O N N N CH2 O CH3 OH CH3 O O P O O HN C CH C CH2 3' O O P O O OH O N N N

A koenzim-A s az acetil-koenzim-A szerkezete.

5.3. Vitaminok
5.3.1. A vitaminok ltalnos tulajdonsgai

Olyan szerves molekulk, melyeket a szervezet tbbnyire nem kpes szintetizlni, s amelyekre azonban, ha kis mennyisgben is, de a biolgiai folyamatokhoz alapveten szksgnk van. Ezek a vegyletek az lethez nlklzhetetlen, esszencilis anyagok.

113

Elgtelen mennysgk jellegzetes hinybetegsgeket okoz, pl. az elzekben mr megismert C-vitamin hinya skorbutot, a D-vitamin hinya az angolkrt. A farkasvaksg az A-vitamin, klnbz ideggyulladsok pedig D-vitaminok hinyra utalhatnak. A fenti problmk elssorban a rgebbi idkben lptek fel, azonban ma is felelss tehet nhny krkpben a vitaminhiny, pl. a C-vitamin hinya szerepet jtszhat a fognyvrzsek kialakulsban. Ezek a panaszok azonban a helyes tpllkozssal gyakorlatilag megszntethetk. Ha a vitaminhiny rszleges, azaz a vitamin bevitele a szervezet ignye alatt marad,
hipovitaminzisrl beszlnk. Ezek a tnetek megfelel mennyisg vitamin szedsvel

megszntethetk. A teljes vitaminhiny, az avitaminzis, ma mr nagyon ritka. Ez a tnetegyttes azonban a fontosabb vitaminok teljes bevitele hinyban mr irreverzibilis vltozsokat okozhat a szervezet mkdsben s gy vgzetes kvetkezmnyekkel jrhat. Nhny vitamin, pl. az A- s D-vitaminok hatkony formja a szervezetben kpzdik s olyan receptorokon hatnak, melyeken a hormonok. A szervezetbe kerl, tbb esetben kiindulsi vegyletnek tekinthet formt, melyet sokszor rgebben a mr aktv vitaminnak tekintettek, provitaminnak nevezzk. A szervezet a vitamin aktv formjt ezekbl a vegyletekbl kpes szintetizlni. Ilyen pl. az A-vitamin esetn a -karotin, vagy a D-vitaminok krben a mg nem hidroxilezett, de mr gyrfelnylt struktrk. Sok esetben a vitaminok a fejldsben is fontosak, gondoljunk csak a D2- s D3vitaminokra. Egyes vitaminok a szervezet kros anyagai elleni vdekezsben jtszanak jelents szerepet (A-, C- s E-vitaminok: un. gykfogk). Ezek a kros anyagok tbbek kztt oxign felhasznlsval kpzdhetnek, ilyenek a hidroxil-, hidroperoxi- s peroxid-gykk, melyek jelenltnek mutagn (a genetikai kdot megvltoztat), teratogn (magzatkrost) ill. cancerogn (karcinogn: rkot okoz) hats tulajdonthat. Ezeket figyelembe vve a vitaminok nemcsak a szervezet normlis mkdshez szksgesek, hanem azrt is, hogy a krost anyagok hatsra aktivizld kros folyamatok ne lphessenek fel, ill. ezek hatst cskkentsk. Ezrt hvjuk ezeket az anyagokat preventv (megelz hats) szereknek is.

114

5.3.2. A vitaminok csoportostsa

A vitaminok hagyomnyosan hrom nagy csoportba sorolhatk: a) vzoldhat vitaminok (pl. a B-vitaminok), b) vzben nem, hanem zsrban oldd vitaminok (pl. A-, D- E-, K-vitaminok), c) vitaminszer anyagok (vitognek). A vzoldhat vitaminok feleslege tbbnyire kirl a vizelettel, azonban a zsroldhat vitaminok tladagolsra gyelni kell, mivel ezek a zsrszvetekben (mint ltni fogjuk, szerkezetkbl addan) elszeretettel felhalmozdnak, s ezrt nem rlnek ki a szervezetbl, kifejtve a szksgesnl tbb mennyisgben jelentkez kros (!) hatsukat. A tipikus tladagolsi jelensg a hipervitaminzis, D-vitaminok esetn pl. a kros meszesedsi folyamatok. A vzoldhat vitaminok nagyobb rsze enzimek koenzimjnek felptsben vesz rszt s gy fejtik ki hatsukat, melyek rszletes reakcimechanizmust a kvetkezkben ismertetni fogjuk. Az albbiakban sszefoglaljuk a vzoldhat vitaminok nhny jellegzetes hinybetegsgt, koenzim formjt s legfontosabb biokmiai reakciit. 1. B1-vitamin (tiamin): hinya beri-berit okoz, koenzimje a tiamin-difoszft (tiaminpirofoszft, a tovbbiakban: TPP), reakcija: C=O melletti C-C kts ltestse s bontsa, 2. B2-vitamin (riboflavin): hinya dermatitiszt, nvekedsi problmkat okoz, koenzimje a FAD, reakcija: oxidcis-redukcis reakcik, hidrogngyk s 1 vagy 2 elektrontranszfer, 3. Nikotinsavamid (B3-vitamin): hinybetegsge a pellagra (gyomor-bl tnetekkel, brs nylkahrtya-elvltozssal, idegrendszeri tnetekkel jr betegsg) s dermatitisz, koenzimje a NAD+, reakcija oxidcis-redukcis reakcik, hidridanion-transzfer, 4. Pantotnsav (B5-vitamin): hinyakor idegrendszeri problmk lphetnek fel, koenzimje a koenzim-A, reakcija: acetilcsoport szlltsa, 5. B6-vitamincsoport racemizls, (piridoxin): hinya idegrendszeri megbetegedseket okoz, koenzimje a piridoxl-foszft, reakcii: transzaminls, dekarboxilezs, izomerizci,

115

6. liponsav: hinyra nvekedsi problmk vezethetk vissza, koenzimje a lipoamid, reakcija: oxidci-redukci, hidrogn s acilcsoport tvitel, 7. Biotin (H-vitamin): hinybetegsge a humn dermatitisz, koenzimje a biotin-karboxilszllt protein, reakcii: karboxilcsoport beptse s szlltsa, 8. Flsav: hinya anmit (vrszegnysg) okoz, koenzimje a tetrahidroflsav, reakcija: egy szn-egysg (metil-, hidroximetil-, formil- s metilncsoport) tvitele, szlltsa, 9. B12-vitamin: hinybetegsge a vszes vrszegnysg, koenzimjben adenozin kapcsoldik hozz (ld. ott), reakcii: ktshastsok ill. trendezdsek, 10. C-vitamin (aszkorbinsav): hinya a legends skorbut volt, ma tbb ms kros anyag lekzdsben tulajdontanak neki szerepet, reakcii: pl. hidroxilezs, gykfogs.

5.3.3. Vzben oldhat vitaminok 5.3.3.1. B1-vitamin

A B1-vitamint vagy tiamint 1912-ben Casimir Funk rta le, mint az lethez nlklzhetetlen vital amin-t, s B-vitaminnak nevezte. A vegylet neve ksbb lett B1vitamin, amikor tbb nitrognt tartalmaz vzoldhat vitamint is felfedeztek.

NH2 N H3C N pirimidin CH2 Cl N

CH3 CH2 CH2 OH S B1-vitamin : TIAMIN

tiazol (pKa : 2,4)

A vitamin kt heterociklusos gyrbl ll: helyettestett pirimidinbl s tiazolbl, melyeket a tiazol nitrognjn keresztl metilncsoport kt ssze. Tiamin-pirofoszft koenzim formjban az -ketosavak (piroszlsav) oxidatv dekarboxilezsben jtszik szerepet.

116

NH2 tiamin H3C ATP AMP N N CH2 Cl N

CH3

O O

O O

CH2 CH2 O P O P O S

koenzim forma : tiamin-pirofoszft (TPP)

Korpban, gabonacsrban, lesztben s nem utolssorban a rizs hjban fordul el. Tartalmazzk a bab, bors s a kukorica is. llati szvetekben, gy a mjban, szvben s vesben is megtallhat. Az ers fzs roncsolja. Napi 1-3 mg szksges a szervezet szmra, de ez a mennyisg fgg a tpllkozstl: sznhidrt-fogyaszts nveli, zsr-, fehrje- s alkoholfogyaszts cskkenti a szksgletet. ltalban idegrendszeri krosodsok kezelsre hasznljk. Ilyen a polineuritisz (ideggyullads), neuralgia (idegi fjdalom), isisz (lideg zsba) herpesz zoszter (vsmr), szklerzis multiplex (idegrendszeri krfolyamat: az idegek vels hvelynek elvesztse), ill. alkoholizmus idegrendszeri kvetkezmnyei. Hinybetegsge a beri-beri, melynek kt vltozata ismert. A szraz vltozat tnetei az izomgyengesg, slycskkens s idegrendszeri zavarok, mg a nedves beri-beri esetn dma, szvelgtelensg lp fel. Az ismertetett tneteket vgeredmnyben a piroszlsav felszaporodsa okozza. Tvol-Keleti betegsg, a rizs hntolsa okozta, hiszen ott ez a f energiaforrs. A modern tpllkozs egyik forrsa azonban a hntolatlan rizs, melynek fogyasztsval ezek a problmk elkerlhetk. Koenzimje a tiamin-pirofoszft (TPP), mely a tiamin adenozin-trifoszfttal (ATP) trtn reakcijban keletkezik, ekzben az ATP adenozin-monofoszftt (AMP) alakul. Reakcijban a tiazolgyr C-2 pozicija jtszik dnt szerepet (5.8. bra). A szomszdos elektronszv csoport hatsra a 2-es helyzet hidrogn protonknt lehasad, s az gy keletkezett tiamin-pirofoszft (TPP) karbanion nukleofil tmadst intz a piroszlsav karbonilcsoportjnak sznatomja ellen. Lejtszdik a nukleofil addci, majd egy protonfelvtelt kveten dekarboxilz enzim kzremkdsvel a vegylet dekarboxilezdik s kialakul az A kzti termk.

117

OPP 1 S 2 H OPP +H N CH3 S O C C O O N CH3 S -H N S

OPP O + CH3 C C O O

N 3

piroszlsav OPP dekarboxilz O C C OH O -CO2 N CH3 C A S OH OPP +H

OPP -H N CH3 S C OH H "aciloil-tiamin" N CH3 C S

OPP

S S (CH2 )4 COOH

OH B acil-anion szintzis-ekvivalens OPP CH3 CO S SH

liponsav

N CH3

S C S OH S

-TPP

(CH2 )4 COOH

+ HS-CoA

(CH2 )4 COOH SH SH (CH2 )4 COOH dihidro-liponsav

CH3 CO S CoA

5.8. bra.

A piroszlsav dekarboxilezsnek mechanizmusa.

Ebbl protonfelvtellel az un. aciloil-tiamin keletkezik, mely protonleads utn a

B acil-anion szintzis-ekvivalenss alakul (A s B egybknt a mezomria viszonyban

llnak). A B inverz polrozottsg acetil-szinton (Umpolung!) ezutn, mint nukleofil a

118

liponsav knatomjra tmad, a liponsav 1,2-ditiolngyrje felnylik s a vegylet a liponsav reduklt (felnylt) formjhoz kapcsoldik. A liponsav a szervezetben proteinhez kapcsoldik a proteinben tallhat lizin aminosavon keresztl: ez a lipoxin. Errl a tovbbiakban a TPP lehasad, a dihidroliponsavhoz kttt acetilcsoport a CoA-ra kerl a dihidrolipoil-transzacilz enzim segtsgvel. A reakci eredmnye teht acetil-koenzim-A s dihidroliponsav. Ez utbbi FAD koenzim s dihidrolipoil-dehidrogenz enzim kzremkdsvel visszaalakul liponsavv s a keletkezett FADH2-t a NAD+ koenzim FAD-d oxidlja. gy felrhatk ezek a rszfolyamatok is: dihidrolipoildehidrogenz

dihidro-liponsav + FAD

liponsav + FADH2

FADH2 + NAD

FAD + NADH + H

A bemutatott reakcik a kvetkezkppen sszegezhetk:

liponsav TPP FAD

CH3

C COOH + O

HS

CoA + NAD

AcS

CoA + NADH + H + CO 2

A folyamat sorn a piruvt dehidrogenz ciklusrl van sz: az oxidatv dekarboxilezskor az energiads tioszter, az acetil-CoA keletkezik (G = -33,5 kJ/mol). A reakci lnyege, hogy az umpolung segtsgvel az acilanion-ekvivalens a liponsav felhasznlsval az acetil-CoA-t eredmnyezi. A folyamat jelentsge abban ll, hogy az acetil-koenzim-A, mely a citromsav-ciklus zemanyaga, sszekti a glkz- s a zsrsavmetabolizmust, a 2-oxoborostynksav (oxlacett) citromsavv alakulshoz ezton szolgltatva az acetil-CoA-t.

119

GLKZ

ZSIRSAV-METABOLIZMUS

PIROSZLSAV

ACETIL-KOENZIM-A

O C COOH CH2 COOH oxl-ecetsav

AcS-CoA

CH2 CO S KoA HO C COOH CH2 COOH citroil-koenzim-A

CH2 COOH HO C COOH CH2 COOH citromsav

A fenti biokmiai folyamatbl a szerves kmia, mint ltalnosthat umpolung reakcit, a Stetter-reakcit (5.9. bra) hasznlja 1,4-dikarbonilvegyletek ellltsra.
OH Br Ph NEt3 N S Br Ph OH R-CHO Br N Ph R CH S OH

OH Br N Ph R C OH S + CH2 CH COOEt R O C C O OEt

5.9. bra.

A Stetter-reakci.
Ez a reakci jl modellezi a tiaminbl keletkez acil-anion szinton

reakcikpessgt. A negatv polrozottsg sznatom ,-teltetlen szterekre intz

120

nukleofil tmadst a -sznatomon keresztl, s az addcis reakciban a karbonilcsoportot pros helyzetben tartalmaz oxosztereket kapunk.

5.3.3.2. B2-vitamin

A B2-vitamin, ms nven riboflavin a FAD koenzim rsze, szerkezetvel mr ott tallkoztunk. Nvnyekben, gombkban fordul el s a mjban is megtallhat. A blbaktriumok szintetizljk. Hinya dermatitiszt, vaksgot s idegrendszeri problmkat okozhat. Nlklzhetetlen a nvekedsben. Hinyban a nyelv s az ajak duzzadsa, slyos bltnetek, fradtsg, a hemoglobinszint cskkense is fellphet. Mkdsnek alapja: oxidcis s redukcis reakcikban koenzimknt funkcionl. A teljes reakci kt hidrognatom (kt elektron s kt proton) 1,4-addcija. A reakci a pteridinvzas heterocikluson megy vgbe, ahol R = a FAD koenzim trgyalsnl mr megismert oldallnc.
R CH3 CH3 N 9 N 4 O srga oxidlt forma FAD N 2 O 3 NH 2H -2H CH3 CH3 R N N H 1 H N 2 O 3 4 O NH

szintelen reduklt flavin FADH 2

Kataliztora a kvetkez folyamatoknak: 1.) Rszt vesz a triptofn oxidatv dekarboxilezsben, mely sorn indol-3-acetamid keletkezik:
O2 CH2 C COOH NH2 triptofn-oxidz-dekarboxilz NH indol-acetamid

H2O

H2N H NH L- (vagy S) triptofn

121

2.) A xantin hgysavv trtn talaktsban. A hgysav volt az els, vizeletbl izollt purinvzas vegylet, amelynek szerkezett szintzissel is igazoltk. O HN O NH N NH H2O + O2 H2O2 HN xantin-oxigenz O NH O NH O NH

xantin

hgysav

Msik funkcija az elektrontranszfer reakcik krbe tartozik. Els lpsben a 10-es helyzet nitrognatom protonldik, s a megfelel konjuglt sav keletkezik. Az gy kialakult pozitv tlts vegylet felrhat egy msik mezomer hatrszerkezettel is.

R N 10 N H N NH O O

R N N H O N O NH

R FADH2 H N N H O N NH O

szemikinon
5.10. bra.

A FADH2 keletkezse FAD redukcijval.

Egy elektron felvtelvel az un. szemikinon intermediert eredmnyezi. A pratlan elektront tartalmaz gyk egy hidrognatomot vesz fel ez idig nem teljesen tisztzott

122

folyamatban, s a FAD reduklt formja, a FADH2 a reakcisor vgeredmnye. A folyamatot az 5.10. brn vzoltuk fel. 3.) A rendszer kpes egyelektronos oxidcival a nem hemoglobinhoz kttt vas(II)-t vas(III)-m oxidlni:

FeII

FeIII

4.) Rszt vesz ktszer egyelektronos redukciban: az oxignt hidrogn-peroxidd alaktja.

O2

2e

H O O H

gy oxidz s dehidrogenz reakcikban, pl. a NADH redukl gens s a Fe3+ egy elektronos oxidl gens kztt intermedierknt funkcionl. Ez a szerepe a mitokondrilis elektrontranszportban.

5.3.3.3. Pantotnsav A koenzim-A alkotrsze. B5-vitaminnak is nevezik. Kt szerkezeti egysgbl tevdik ssze, egyik az brn lilval jelzett -alanin, mely amidktssel kapcsoldik a dihidroxisavhoz. A koenzim-A felptshez szksges, szablyozza az leszt nvekedst. Blbaktriumok is termelik.

H OH CH2OH HOOC CH2 CH2 NH C C C O H3C CH3 pantotnsav Hinya az l szervezetekben a nvekeds s a szaporods gtlst idzi el. Az egszsges szervezet mindenfle sejtjben megtallhat. Gazdag forrsa az leszt, a mj s a tojssrgja, valamint a zld nvnyi rszek.

-Ala

123

5.3.3.4. Niacinamid
A niacinamid vagy B3-vitamin tulajdonkppen nikotinamid, a nikotin-adenindinukleotid (NAD+) s 2'-foszftja a NADP+ koenzimek fontos rsze. A koenzimeknl mr tisztztuk az oxidcis s redukcis reakcikban betlttt szerept. Sav formja a niacin, vagy nikotinsav.

CONH2 N nikotinsavamid : niacinamid N

COOH

nikotinsav : niacin

A "vitamin" fogalomtl eltren az emberi szervezet kpes szintetizlni a triptofnbl B6-vitamin segtsgvel. Nvnyekben s llati szervezetekben is szleskren megtallhat, gy a rizskorpban, bzakorpban, lesztben, mjban, hsflkben, vesben s a halakban (elssorban a heringben). Hinya elssorban a nagyrszt kukorica alap tpllkon lkn mutatkozik. Fradtsg, gyomor-blrendszeri zavarok, szj- s nylkahrtya gyulladsok a tnetek. Fellp a pellagra kt formja: rdes br s fekete elsznezdsek a nyelven s a brn, a nyelv dagadsa, hasmens, valamint idegrendszeri zavarok is szlelhetk. A tnetek a niacin vagy a niacinamid adagolsra elmlnak. Miutn a biolgiai rendszerekben a savamid (niacinamid) fordul el, ezrt ezt tekintik vitaminnak annak ellenre, hogy a sav (niacin) amidlsa az llati szervezetben knnyen vgbemen folyamat.

5.3.3.5. B6-vitamincsoport
Ebbe a csoportba a kvetkez piridin-szrmazkok tartoznak: Ide sorolhat a piridoxl, mely a 4-es helyzetben knnyen karbonsavv oxidldhat aldehid-csoportot tartalmaz, a piridoxin vagy piridoxol, az elbbi alkoholl reduklt formja, valamint a piridoxamin, amelyben aminometil-csoport a reakcikban rsztvev funkcis csoport. Mindhrom vegylet tovbbi fenolos hidroxil- ill. metilcsoport helyettestket tartalmaz.
124

CHO HO H3C N piridoxl CH2OH HO H3C

CH2OH CH2OH N piridoxin vagy piridoxol HO H3C

CH2NH2 CH2OH N piridoxamin

Koenzimjeknt

3-as

helyen

lv

hidroximetil-csoport

alkoholos

hidroxilcsoportjnak foszforilezett szrmazka, a piridoxl-foszft szerepel.

CHO HO H3C N CH2OH ATP HO H3C

CHO

O CH2 O P OH OH

koenzim forma: piridoxl-foszft

Nvnyi magvakban fordul el. Hinybetegsge sorn, amely ritkn figyelhet meg, brelvltozsok, vrszegnysg, gyengesg, idegrendszeri bntalmak lphetnek fel. A szervezetnek ltalban kevs B6-vitaminra van szksge, melyet a normlis trend tbbnyire fedez, azonban bizonyos gygyszerek szedse nvelheti az ignyt. Ilyen pldul a tuberkulzis kezelsre hasznlatos IZONIAZID, melynek szerkezete izonikotinsavhidrazid. A vegylet a piridoxl aldehidcsoportjval hidrazont kpezve blokkolja a vitamint, mely ebben a formban nem kpes a megfelel biokmiai folyamatokban rszt venni. Biokmiai reakcii sorn az aminosavak metabolizmusban vesz rszt. A transzaminls sorn oxosavakbl aminosavak keletkeznek, a bemutatott pldban glutaminsav s oxlecetsav reakcijban -ketoglutrsav s aszparaginsav keletkezik. A folyamatban a glutaminsav az amindonor aminosav, az oxlecetsav pedig az akceptor. A reakciban a glutamin-aszparagin-transzaminz vagy aminotranszferz enzim is rszt vesz. A glutaminsav (vagy ahogy a biokmia tanknyvekben a fiziolgis krlmnyek kztt elfordul anionos formjt helyesen emlegetik, a glutamt), mint az ammnia-asszimilci

125

termke kulcsszerepet jtszik a transzaminlsban. Legtbbszr, de nem mindig, aminosav/ketosav prknt a glutamt/-oxoglutrsav (vagy -oxoglutart; -ketoglutart) pr az aminotranszferzok szubsztrtja. Ugyangy szerepel az aszpartt (aszparaginsav anionos formja) ill. az oxlacett is ebben a rendszerben, valamint az alanin/piruvt (piroszlsav anionos formja) is. Az ezekhez az oxosav/aminosav prokhoz kapcsold enzimek fontosak a klinikai diagnosztikban. Ilyenek a humn megbetegedsekben jellemz mrtk szrum glutamt-oxlacett transzaminz (SGOT) s a szrum glutamt-piruvt transzaminz (SGPT) aktivitsok. Ezek az enzimek, melyek nagy mennyisgben megtallhatk a szv s a mj szveteiben, a sejtek srlse esetn, melyeket pl. a miokardilis infarktus ill. a fertz mjgyullads, esetleg ms szerv kros llapota okoz, felszabadulnak a sejtbl. Ezen enzimek aktivitsnak mrse a vr szrumban felhasznlhat egyrszt a diagnzis fellltsban, msfell pedig a beteg kezels hatsra trtn reaglsnak nyomon kvetsre is.

COOH CH2 CH2 CH NH2 COOH glutaminsav (donor aminosav) +

COOH CH2 C O COOH oxlecetsav (akceptor)

glutamin-aszparagin-transzaminz

COOH CH2 CH2 C O COOH keto-glutrsav + COOH CH2 CH NH2 COOH aszparaginsav

A kvetkez katalizlt reakci, a dekarboxilezs sorn aminosavakbl aminok, mgpedig un. biogn aminok keletkeznek, melyeknek a szervezet mkdsben igen fontos szerepk van. A glutaminsav ezen az ton alakul t -aminovajsavv a glutamindekarboxilz enzim kzremkdsvel, mely aminovegyletet az angol elnevezse (-

aminobutyric acid) alapjn GABA rvidtssel hasznlnak. A GABA rendkvl fontos idegi
ingerlettviv anyagknt mkdik a szervezetben. Ebbe a folyamatba avatkozik be pl. a gyilkos galca a mrgezs sorn.

126

COOH CH2 CH2 CH NH2 COOH glutamin-dekarboxilz -CO2

COOH CH2 CH2 H C NH2 H GABA (-amino-vajsav)

Vgl pldaknt megemltjk az aminosavak izomerizcis ill. racemizcis reakciit is, melyekben e vitamincsoportnak szintn szerepe van. A reakcik rszletes mechanizmust az 5.11. brn mutatjuk be. A piridoxl Schiff-bzist kpez az apoenzim lizin aminosavjnak -aminocsoportjval, ily mdon ktdve az enzimhez. A lizin helyre az talaktand aminosav addcis-elimincis reakcival kerl t, szintn aldimint kpezve. Az intermediert stabilizlja a fenolos hidroxilcsoport segtsgvel kialakult hidrognhd kts. E forma stabilizlsban gyakran fmionok, pl. Al3+ s Cu2+ ionok is szerepet jtszanak. Ezutn a molekula ktfle kztitermkk alakulhat, attl fggen, hogy milyen folyamatot katalizl az sszetett reakciban rsztvev enzim. A protonldott nitrognatom irnyba trtn elektronramls hatsra megtrtnt dekarboxilezst kvet protonfelvtel s az imin kts hidrolzise a megfelel biogn aminhoz vezet. Msfell a kiindulsi aminosav-piridoxl Schiff-bzis protonvesztssel az brn lthat kinoidlis intermedierr alakulhat t. Ekkor az aminosav -sznatomja s az -helyzet nitrognatom kztt ketts kts jn ltre. Ez a planris szerkezet sztereotp felletknt szerepel a kvetkez protonfelvtel sorn. A bekapcsold proton ugyanis a planris struktra kt oldalrl kzeltheti meg a tmads helyt. Amennyiben az enzimkomplexben van kitntetett tmadsi irnya a reagensnek, esetnkben a hidrognnek, gy optikailag aktv aminosav keletkezik. Ha a reakci egyforma valsznsggel jtszdik le a sk mindkt oldala irnybl, akkor racemizci trtnik. Br a piridoxl-foszft ezekben a reakcikban koenzimknt mkdik, a reaktv forma mgsem az aldehid, hanem inkbb az aldimin struktra, amely a vitamin s az talaktand aminosav kztt jn ltre. Ha pl. az gy keletkezett aldimin szn-nitrogn ketts ktst (C=N) ntrium-tetrahidrido-borttal (NaBH4) redukljuk, az irreverzibilis vltozs kvetkeztben (eltnik a ketts ktses planris fellet) a rendszer elveszti aktivitst, s alkalmatlann vlik aminosavak talaktsra.

127

O C apoenzim NH HO LIZIN N enzim-Lys (Ad + E) N CH CH2OP N H (L) R CH COO NH3 R H C COO N H O CH CH2OP

CHO HO N CH2 OP + R CH2 NH2 (biogn amin)

H, H2O -CO2 (dekarboxilezs) -H

H R C COO N CH HO N + H2O H CH2OP +H (izomerizci v. racemizci)

R COO C N CH HO N H (kinoidlis intermedier) CH2OP

CHO HO N CH2 OP + (D)- vagy racm aminosav

5.11. bra. A B6-vitamin szerepe aminosavak dekarboxilezsben s izomerizcijban. A vitamin ltal katalizlt reakcikba a transzaminls is beletartozik. Ekkor a piridoxamin forma jtszik fontos szerepet, melyben az aminofunkci adja az oxosavval trtn kapcsolds lehetsgt szintn imin formjban. Vgeredmnyben ez a vitamincsoport mintegy 60 specifikus reakci katalzisben vesz rszt.
128

5.3.3.6. Liponsav
Hidrognezsi, dehidrognezsi folyamatok koenzimje. Az apoenzimhez trtn kapcsoldsa az oldallncban elhelyezked karbonsav funkcin keresztl trtnik lizin aminocsoportjval savamid formjban (lipoxin). Az brn az oxidlt s a reduklt formjt tntettk fel.

S S liponsav

COOH

SH

SH

COOH

dihidro-liponsav

Az emberi szervezet, eltren a tbbi vitamintl kpes szintetizlni. A mj s az leszt gazdag liponsavban, egyttal nhny baktrium nvekedsi faktoraknt is ismert. Szerept az -ketosavak dekarboxilezsben (acetilcsoport tvitel) mr a tiamin trgyalsakor bemutattuk.

5.3.3.7. Biotin
A vitamint H-vitaminnak is nevezik, biotinknt mgis jobban ismert. Fleg az lesztben s a mjban fordul el. Hinya brbetegsget okoz, ilyenkor gyulladsos pr lp fel az egsz testen (dermatitisz: brgyullads), valamint hmls, szrkihulls s krmsrlsek is tapasztalhatk. Innen a H-vitamin nv. Nmetl a br ui. Haut. Biciklusos vegylet, teltett imidazol s teltett tiofn kondenzcijval vezethet le. A gyrkapcsolat cisz-konfigurcij, a sztereocentrumok 2S,3S,4R-konfigurcijak. Jobbra forgat, optikailag aktv molekula. O 1' 3' HN 2' NH H H 4 3 2 H 5 S 1 6 COOH 10 (+)-2S,3S,4R-biotin

129

5.12. bra. A biotin trbeli szerkezete. A biotin a tojsfehrje egyik sszetevjvel, az avidin nev fehrjvel komplexet kpez, gy biolgiailag inaktvv vlik: az avidin (mint bzikus protein) teht ers antagonistja a biotinnak (amely karboxilcsoportot tartalmaz). Pl. a sok madrtejfogyaszts esetn biotinhiny lphet fel. A tojsfehrje lekti a biotint, azonban melegts hatsra, amikor denaturlds kvetkezik be, a vegylet jra szabad llapotba kerl. A biotin a karboxilcsoportja segtsgvel protein lizin aminosav aminocsoportjhoz ktdik peptidktssel, gy a protein s a biotin proteidet alkot (lipoxin). Biokmiai funkcija karboxilcsoport bevitele (CO2 beptse), a reakcit a biotinfgg karboxilz enzim katalizlja. A reakci mechanizmusa sorn a biotin molekuln elszr karboxiltcsoport pl az 1'-helyzetbe (5.13. bra). Ennek forrsa a szndioxid felvtelvel keletkez hidrokarbontion, valamint a folyamathoz adenozin-trifoszft (ATP) is szksges. A biotin 1'-helyzet nitrognatom szabad elektronprja irnybl elektrontmenet indul a hidrokarbont-ion karbonil sznatomja fel. Ebben a lpsben alakul ki a biotin-1-karboxilt, mely diacilaminknt viselkedve ers acilezszer.

130

O O ATP O P OH OH + HO C O + HN H

O NH H H S

CO2 CO NH Lys protein

O OOC N H S CO NH Lys protein NH H H + ADP + P

5.13. bra. A biotin karboxilezse. Ez utbbi a megfelel, koenzim-A-hoz kttt acilcsoporttal, az 5.14. brn R = H esetn acetil-koenzim-A-val reagl oly mdon, hogy az acilcsoporton protonvesztssel keletkezett karbanion nukleofil tmadst intz az N-karboxilt karbonil-helyettest sznatomja ellen. A folyamat a transzkarboxilz enzim katalzisvel megy vgbe, a reakciban pl. R = H esetn malonil-koenzim-A keletkezik. Ez utbbi fontos szerepet jtszik a zsrsavak metabolizmusban. A brutt reakci szabadenergija, Go: -2,1 kJ/mol.

131

O C N R CH C O S CoA + O H

O NH H H S CO NH Lys protein

(R=H, acetil-koenzim-A)

transzkarboxilz

O R CH C S CoA C O O + BIOTIN

(R=H, malonil-koenzim-A)
5.14. bra. Karboxilcsoport bevitele biotin segtsgvel. Hasonl reakciban az akceptor ketosav, gy piroszlsav is lehet, ekkor oxlacett kpzdik.

CH3 C O + H2O + CO2 + ATP COO piroszlsav

COO biotin CH2 C O COO oxlacett + ADP + P + H

132

5.3.3.8. Flsav
B10-vitaminnak is nevezik. Hrom f rszbl ll, a 2-amino-4-hidroxi-6metilpteridinbl, p-aminobenzoesavbl s L-glutaminsavbl.

flsav

COOH CH2 CH2 H C NH C COOH O 7 9 6 10 NH CH2 8 N N 5 1 N 2 NH2 4 OH N3

L-glutaminsav p-amino-benzoesav

pteridin-komponens

A termszetben elfordul flsav nemcsak egy glutaminsavat tartalmaz, hanem tbbet is. Ezek szma egymshoz kapcsoldva 3-8 kztt van, vagy esetenknt mg tbb is. A glutaminsavak nem a szoksos peptid-ktssel kapcsoldnak egymshoz, hanem az aminocsoport s a -karbonsav funkci kztt jn ltre savamid-kts. Ez a szerkezet valsznleg azt a clt szolglja, hogy a flsav a sejtben maradhasson, miutn a sejtbl csak a flsav monoglutamt formja kpes kijutni. Koenzim formja a tetrahidroflsav (H4F). A koenzim kt lpsben alakul ki (5.15. bra): a folt-reduktz enzim elszr a flsavat NADPH koenzim kzremkdsvel dihidroflsavv (H2F) alaktja, amely egy tovbbi redukcis lpsben alakul t a koenzimm. Ebben a szrmazkban a pteridin szerkezeti egysg pirazingyrje teltett formban ltezik. Nvnyi levelekbl izollhat. Jelents mennyisge tallhat az lesztben, mjban s a vesben. Baktriumok nvekedshez szksges, ezrt baktriumok specifikus nvekedsi faktornak tekinthet. Erre vezethet vissza, hogy pl. a baktriumellenes hats szulfonamidok, melyek a p-aminobenzamid rsznek bioizosztr analogonjaiknt lphetnek fel, gtoljk a baktriumok nvekedst s reprodukcijt. Voltakppen a flsav bioszintzise sorn a szulfonamid a p-aminobenzamid szerkezeti egysg helybe pl be, amely gy mr nem kpes kifejteni a baktriumok fejldsben egybknt fontos szerept.

133

COOH CH2 CH2 H C NH C COOH O 7 9 6 10 NH CH2 8 N N 5 1 N 2 NH2 4 OH N3 folt-reduktz (NADPH)

L-glutaminsav p-amino-benzoesav

pteridin-komponens

COOH CH2 CH2 H C NH C COOH O H NH CH2 H

H N N N N OH dihidro-flsav (H2F) NH2

COOH CH2 CH2 H C NH C COOH O H NH CH2 H H

H N N H tetrahidro-flsav (H4F) OH N N NH2

5.15. bra. A tetrahidroflsav kialakulsa. Kzponti biokmiai funkcija egy sznegysg tvitele (5.16. bra). A folyamat sorn hangyasav, ATP s tetrahidroflsav enzimkatalizlt reakcijban elszr a 10-es helyzet nitrognen formilezett szrmazk keletkezik (N10-formil-H4F). A formilcsoportnak a pteridingyr 5-s nitrognjre trtn gyrzrsakor a formil-vegylet 5 tag, kondenzlt gyrt alakt ki a pteridin-rszhez kapcsoldva. Ez az N5,10-meteniltetrahidroflsav. Az

N5,10-metenil-H4F a tovbbiakban elszr metiln-szrmazkk redukldik a NADPH

134

koenzim segtsgvel. Az gy keletkezett flsav-szrmazk metilncsoport tvitelben jtszik szerepet. Tovbbi hasonl (NADPH) redukci gyrfelnylssal a pteridingyr 5-s nitrognjn metilcsoporttal szubsztitult tetrahidroflsavhoz vezet (N5-metil-H4F), melynek a metilcsoport szlltsban van jelentsge.

NH H4F + ATP + HCOOH szintetz L-Glu C O O 10 N CH2 C H N10-formil-H4F NH

N NH O

NH2 + ADP + + Pi

NH N CH2 CH2 N

N NH O

NH2 NADPH L-Glu C O CH 10 N CH2

NH N

N NH

NH2

5 O

NADPH

N5,10-metenil-H 4F

NH N CH2 H N CH3 N5-metil-H 4F

N NH O

NH2

5.16. bra. Az N5-metiltetrahidroflsav bioszintzise. Metilncsoport tvitelre a glicinbl trtn szerin-bioszintzist emlthetjk (5.17. bra). A piridoxl-foszfthoz Schiff-bzis formjban kapcsoldott glicin az N5,10-metilnH4F s szerin-hidroximetil-transzferz enzim reakcija hatsra talakul, hidroximetilcsoport pl be a szerin -sznatomjra A kvetkez hidrolitikus lpsben a szerin s a piridoxl-foszft szabadd vlik.

135

COO H2N CH2 COOH Gly HO NH + piridoxl-foszft CH N CH CH2OP

OOC CH CH2 OH N CH H2O HO N H CH2OP

N5,10-metiln-H4F szerin-hidroximetil-transzferz

HOOC CH CH2OH NH2 Ser

piridoxl-foszft

5.17. bra. Glicin talakulsa szerinn. A metilcsoport tvitelre plda a nukleinsavak krben a dezoxiuridilsav uracil bzisnak metilezse az 5-s helyzetben, mely reakci sorn dezoxitimidilsav keletkezik, valamint az aminosavak bioszintzisnl a homocisztein metioninn trtn alaktsa:

HOOC CH CH2 CH2 SH NH2 homocisztein

B12

HOOC CH CH2 CH2 S CH3 NH2 metionin

Mindkt esetben a metilcsoport tvitelben az N5-metiltetrahidroflsav jtszik jelents szerepet.

136

5.3.3.9. B12-vitamin
Szerkezete hasonlsgot mutat a porfirinvzzal (5.18. bra).

NH2 O O H2N H2N O Me H2N O H Me O P O CH2OH H NH O HO O N Me N Me H H Me N Me 5,6-dimetil-benzimidazol O NH2 N Me H H CN Co N N Me Me H NH2 H Me Me korrin-vz O

O O

-ribofuranozid

5.18. bra. A B12-vitamin szerkezete. Kzponti rszt ngy pirrolgyrbl ll rendszer kpezi, mely azonban a porfirinvztl eltren nem alkot delokalizlt planris struktrt. Ez a korrinvz. Kzponti atomja a kobalt, amely heterociklusos bzishoz, az 5,6-dimetilbenzimidazolhoz ktdik. A hatodik koordincis ktst a cianidion foglalja el, ez azonban az izolls sorn kerlt oda. Ezen a rszen a vitamin a szvetekben vizet (akvakobalamin), vagy hidroxidiont (hidroxokobalamin) tartalmaz. Szerkezett totlszintzis segtsgvel llaptottk meg. Koenzimjben a cianocsoport helyett adenozin ribofuranz molekuljnak 5'-helyzet sznatomja kapcsoldik a kobalthoz.

137

llati szervezetekben, fleg a mjban, hsban, tojsban s tejben, valamint mikroorganizmusokban tallhat. Csak mikroorganizmusok szintetizljk. Nvnyekben nem fordul el, amire gyelnik kell a vegetrinusoknak. Hinya vszes vrszegnysget okoz. Felszvdsa a gyomor nylkahrtyja segtsgvel trtnik, ez glikoproteint vlaszt ki ("intrinsic factor"), amely megkti a vitamint s megvdi az elbomlstl. ppen ezrt hinyt a felszvds zavarai is okozhatjk. A vrben a transzkobalamin nev specilis fehrjhez ktdik, s a szervezet a mjban trolja. Biokmiai szerepe a metabolizmusban sokrt. Rszt vesz trendezdsekben (mutzok), ktsek hastsban, szn-szn kts hastsban, pl.:

COO H3C C H CO SCoA L-metil-malonil-koenzim-A CH2

COO CH2 CO SCoA szukcinil-koenzim-A

Szn-nitrogn-kts hastsban, pl. a lizin metabolizmusban:

CH2CH2CH2CH2 CH COOH NH2 NH2

D-lizin-mutz

CH3

CH CH2CH2 CH COOH NH2 NH2

Koenzimknt szerepet jtszik metilcsoport aktivlsban, gy a metildonor N5-metiltetrahidroflsavval egytt a homocisztein metioninn trtn talaktsban. A szn-oxign kts hastsban is rszt vesz, ez a folyamat tulajdonkppen trendezdsnek tekinthet:

CH3

CH CH2 OH OH

diol-dehidrz

O CH3 CH2 C H

Szerepe van ezen kvl a ribonukleotidok dezoxiribonukleotidokk trtn redukcis talakulsban is (ribonukleotid reduktz).

138

5.3.4. Zsrban oldd vitaminok

A tovbbiakban a zsroldhat vitaminok kzl az E- s K-vitaminokat mutatjuk be, az A- s D-vitaminok az elz fejezetekben mr ismertetsre kerltek.

5.3.4.1. Az E-vitamin
Az E-vitamin, ms nven -tokoferol, fenolos hidroxilcsoporttal s

metilcsoportokkal helyettestett benzopirngyrt, valamint alifs, apolris s gy hidrofb, vagyis lipofil oldallncot tartalmaz. Az oldallncban az aszimmetrikus sznatomok (R)konfigurcijak. Nvnyi olajokban (pl. bzacsraolajban) fordul el.

H3C

CH3 8 7 5 CH3

1 O

HO 6

CH3 CH3 CH3 CH3 R 2 (CH2)3 CH (CH2)3 CH (CH2)3 CH CH3 3 R R 4

benzopirn

E-vitamin: -tokoferol (-TH)

Hinya jellegzetes tneteket okozhat a reprodukcis kpessg cskkensben, valamint izomsorvads lphet fel. A hormontermel mirigyek tevkenysge is krosan megvltozik. Termszetes tpllkozs esetn azonban a vitaminhiny kialakulsa meglehetsen ritkn fordul el. Az -tokoferolban a gyrn lv metilcsoportok az 5-, 7- s 8-as helyzet sznatomokhoz kapcsoldnak. Ms tokoferolok is ismertek, gy a -tokoferol, melyben kt metilcsoport tallhat az 5-s s 8-as helyeken, a -tokoferol, melynek 7,8-dimetilszubsztitult benzopirn az alapvza. A -tokoferol csak egy metilcsoportot tartalmaz, a 8-as helyen. Termszetesen a 6-os helyzet fenolos hidroxilcsoport s a terpenoid jelleg oldallnc mindegyik vltozatban megtallhat. Ers antioxidns, kpes szabad gykk megfogsra, azaz redukcijra. Ebben jelents szerepe van a fenolos hidroxi-szubsztituensnek. A molekula tulajdonkppen gyrbe zrt hidrokinonnak tekinthet, s mint ezt az 5.19. brn lthat rszletes

139

reakcimechanizmus is mutatja, a vegylet a szabad gykk redukcija folyamn kinonn oxidldik.

H3C

CH3 8 7 5 CH3

1 O

HO 6

CH3 CH3 CH3 CH3 R 2 (CH2)3 CH (CH2)3 CH (CH2)3 CH CH3 3 R R 4

-H

benzopirn -tokoferol (-TH)

CH3 H3C O CH3 -TH (R=fenti oldallnc) CH3 H3C O CH3 O

CH3 R -H , -H +H2O

CH3 H3C O O

CH3 R

OH CH3 R

-tokoferol-kinon

5.19. bra. Az E-vitamin oxidcija -tokoferol-kinonn. A klnbz helyeken metilcsoportokkal helyettestett vegyletekben a metilhelyettestk a hidrokinonnak megfelel forma elektrdpotenciljt befolysoljk, amely hatssal van az illet tokoferol-szrmazk redukcis kszsgre. A reakci sorn els lpsben az -tokoferol (-TH) hidrognatomot veszt, mely lezrhatja egy szabad gyk lnc vgt, pl. peroxidgykt hidroperoxid-csoportt alaktva. Az

140

gy keletkezett tokoferol-gyk ezutn jabb hidrognatomot s protont vesztve vzzel reagl. Az aroms rendszer megbomlik, a benzopirngyr felnylik s kialakul a stabilis tokoferol-kinon. Ez az tja annak, hogy az els lpsben keletkezett tokoferol-gyk stabilizldhat. A vegyletnek fontos szerepe van tbbszrsen teltetlen zsrsavak peroxidcijnak gtlsban. Ismeretes, hogy a membrn lipidek rszt alkot tbbszrsen teltetlen zsrsavak ketts ktsei kztt metilncsoportok tallhatk. A kvetkez brn a lipidnek ezt a kis rszlett rajzoltuk fel, ahol L a lipidet jelenti, vagyis az LH kplettel azt a hidrognt is jelljk, amely gyksen lehasadhat az oxidcis folyamat sorn. A lipid-peroxidok jabb lipidekkel reaglva lipidgykket hozhatnak ltre. Mind ez utbbiak, mind pedig a peroxidgykk az -tokoferollal trtn reakciban semleges molekulkk alakulnak:

LH (L=lipid) H H L LOO + LH LOO + L + LOOH LOOH + LH +

A fenti brn vzoltuk fel a folyamatot, melynek sorn a keletkezett tokoferolgykk az elbbi mechanizmus szerint kinonn stabilizldnak. Az emellett keletkez hidroperoxidcsoport hidroxilcsoportt trtn redukcijt a glutation vgzi glutation-peroxidz enzim katalzisvel, gy a lncok lezrdhatnak. (Megjegyezzk, hogy hasonl hats a szeln is.)

5.3.4.2. K-vitaminok
A K1-vitamin vagy fillokinon nvnyekben (spentban, kposztban, ltalban a zld levelekben) tallhat:

141

O CH3 CH2 O 2-metil-1,4-naftokinon K1-vitamin: fillokinon

F rsze 2-metil-1,4-naftokinon, melyhez apolris oldallnc kapcsoldik egy teltetlen ktssel, amely egy izoprn egysg rsze. A K2-vitamin, ms nven menakinon, mely a blben, illetve baktriumokban tallhat, hasonl szerkezet. Ekkor azonban a naftokinon-gyrhz kapcsold oldallnc izoprn-egysgekbl ll.

CH2CH2 CH CH2)3

O CH3 ( CH2 CH C CH2 )n H O K2-vitamin: menakinon Az apolris oldallnc biztostja a vegyletek zsroldhatsgt. A K-vitamin szksges faktora a vralvadsnak, illetve nhny faktornak (II, VIIX), s hinya vrzkenysget okoz. Bizonyos antibiotikumok hatsra mennyisgk cskkenhet. Ilyenkor cskkenhet a vralvadshoz szksges idtartam. ppen ezrt e gygyszerek szedsnl erre gyelni kell. Szerepre az 5.20. brn bemutatott folyamat rhat fel.

n=6-9

142

OH protein + R CH2 CH2 COO OH KH2 (R=apolris oldallnc) CH2 CH COO O2 protein + H2O +

O + O K-vitamin epoxid O R

-glutamil-karboxilz CO2

protein

CH2 CH COO COO a Ca2+ ion kt oldala

5.20. bra.

A Ca2+ kt oldal kialakulsa K-vitamin segtsgvel.

A protrombin nev fehrje N-terminlis aminocsoportja mellett glutaminsav tallhat. A K-vitamin elsegti ennek acilezst oly mdon, hogy a reakci eredmnyekppen a protrombin Ca2+ iont kthessen meg. Ez az elfelttele a protrombin trombin tmenetnek. Ezt kveti a fibrinogn fibrinn trtn talakulsa s megkezddhet a vrlemezkk kicsapdsa, a vralvads folyamata. Az itt lert igen vzlatos folyamatot a kvetkez reakcik indtjk meg. A K-vitamin elszr a NADH koenzim segtsgvel a reduklt szrmazkv (KH2) alakul. Ezutn a protein-glutaminsavnak a karboxilcsoporttal szomszdos sznatomjrl a K-vitamin reduklt formjval (KH2) trtnt reakcijban s oxign felhasznlsval protonvesztssel karbanion keletkezik, valamint a K-vitamin epoxidja. Az gy keletkezett karbanion szndioxiddal a -glutamil-karboxilz enzim

143

katalizlta reakciban alakul t olyan szrmazkk, mely mr kt ionizlt karboxilcsoportot tartalmaz. Ez a szerkezeti rszlet mr alkalmas klciumion megktsre, ezen az ton alakul ki a Ca2+ ion kt oldala.

5.3.5. Vitaminszer anyagok: az ubikinon

Ebbe a csoportba sorolhatk a mr rintlegesen trgyalt inozit, kolin, karnitin (a zsrsav transzportjt segt enzim rsze), p-aminobenzot s ubikinon. Kzlk az ubikinont trgyaljuk. Ezt a kinonokhoz tartoz vitaminnak is tekinthet vegyletet a mitokondrium tartalmazza:

O CH3O CH3O O CH3 CH3 ( CH2 CH C CH2 )n H

A vegylet kinon, melyhez izoprenoid tpus oldallnc kapcsoldik. Baktriumokban az ubikinon 6 izoprnegysget tartalmaz (n=6), mg llati szvetekben n=10, vagyis az oldallnc tz izoprn egysgbl ll, ez utbbit nevezik nha koenzim-Q10-nek vagy Q10-nek. Ez a vegylet is zsroldhat, az apolris oldallncnak ksznheten. Fontos szerepe van a sejtlgzsben s az elektron-transzportban. Ennek folyamn az ubikinon elszr elektron-felvtelvel gykanionn alakul, melyet szabad gyk intermediernek neveznek, majd ez utbbi protont vesz fel. Ez a lps az un. protonlt szabad gykhz vezet. Ezt jra egy elektron, majd egy proton felvtele kveti, melynek sorn az ubikinon reduklt, hidrokinon formja keletkezik (5.21. bra).

144

1 R 2 R

3 R R 4

O +e R1 2 R R 3 +H 1 R 2 R

OH R3 4 R +e

4 R

O szabad gyk intermedier

O protonlt szabadgyk

1 R 2 R

OH R3 4 R O +H 1 R 2 R

OH

3 R 4 R

R1=R2= CH3O, R3= CH3, R4= izoprenoid oldallnc

OH hidrokinon

5.21. bra.

Az ubikinon redukcijnak mechanizmusa.

Az oxidcis-redukcis folyamatokban jabb kutatsok eredmnyei szerint szemikinon intermedier is jelents szerepet jtszik.

O CH3O CH3O OH szemikinon intermedier CH3 R = a fenti oldallnc R

Az ubikinon egy- s ktelektronos reakcikban vesz rszt. Egyelektronos folyamatban a szemikinon keletkezik. Reakciiban jelents szerepe van a citokrmoknak. Vgeredmnyben megfelel kzbens struktrt jelent a kt elektront szllt flavinkoenzim s az egy elektront hordoz citokrmok szmra.

145

146