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Biologa Celular

MICROSCOPIA
Prctica 1
Partes del microscopio. Uso correcto del microscopio. Tipos. INTRODUCCIN Los organismos vivos estn compuestos de clulas. Los organismos pueden ser unicelulares o multicelulares. La mayora de las clulas no son visibles a simple vista. Para observar y estudiar las clulas y los tejidos, se usan diferentes tipos de microscopios. El microscopio de diseccin, se utiliza para el estudio de objetos relativamente grandes, de aproximadamente 0.05 a 20 milmetros. En un libro de texto vers diversas fotos tomadas con diferentes tipos de microscopios electrnicos, los cuales son utilizados para el estudio de objetos muy pequeos, hasta menos de un nanmetro. El microscopio compuesto, se utiliza mayormente para el estudio de objetos de aproximadamente uno a 2000 micrmetros, aunque se pueden ver cosas aun ms pequeas con el empleo de tcnicas especiales. Es imprescindible saber cmo usar correctamente este instrumento, con el cual estudiars varias laminillas a travs de este semestre y muchas adicionales en otros cursos. Uno de los propsitos principales de este ejercicio es el de asegurar que cada estudiante pueda no solamente ver algo con su microscopio compuesto, sino lograr la imagen ms ntida y detallada que el instrumento pueda brindar. Es responsabilidad individual y colectiva de todos los profesores y estudiantes mantener estos instrumentos en ptimas condiciones. Al llevar el microscopio de un lugar a otro es importante sostenerlo siempre con ambas manos, una colocada debajo de la base y la otra agarrando la columna o el brazo del instrumento. Cuando se deposita el microscopio sobre la mesa debe hacerse con suavidad, sin que haga ruido. Tampoco debe arrastrarse sobre la mesa o dentro del gabinete, pues esto produce vibraciones que con el tiempo sacan de alineamiento la delicada ptica del instrumento. COMPETENCIA Conoce la importancia del microscopio en el campo de la Biologa Celular, as como las partes que lo integran, uso y cuidado del mismo. FUNDAMENTO MICROSCOPIO: Es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles a simple vista. Ello se consigue mediante un sistema ptico compuesto por lentes de cristal o resina, que al ser atravesadas por los rayos de luz reflejados por el objeto, forman una imagen amplificada por l. Los microscopios se pueden clasificar desde un punto de vista muy sencillo en: Simples y compuestos. Se le da el nombre de microscopio simple a todas aquellas lentes con montura o sin ella, de distintos espesores y dimetros, biconvexas o planoconvexas, que nos permiten amplificar los objetos, comnmente conocidas como lupas. Un microscopio compuesto est constituido por la combinacin de dos sistemas de lentes convergentes. Uno prximo al ojo del observador, por lo cual se llama ocular y otro prximo al objeto denominado objetivo. MICROSCOPIA: Es la ciencia y el arte de interpretar, usar y saber sus aplicaciones del microscopio mediante un conjunto de tcnicas que hacen viable la observacin ya sea este fotnico o electrnico.

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Biologa Celular PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO PODER DE AMPLIFICACION: Capacidad de aumentar una imagen varias veces su tamao natural. PODER DE RESOLUCION: Es la medida de la cantidad de detalle que ofrece la imagen formada por el objetivo. La calidad de un microscopio reside en su poder separador (Lmite de Resolucin), es decir en la posibilidad de distinguir a travs del instrumento dos puntos muy prximos. El ojo humano puede diferenciar 2 puntos si estos estn separados ms de 0.075 mm, entonces el poder de resolucin del ojo humano es de 0.075 mm. El poder de resolucin del microscopio ptico es de 0.275 micras y esto est limitado por la longitud de onda de luz utilizada. LIMITE DE RESOLUCION: Poder del sistema ptico para mostrar 2 puntos separados a muy pequea distancia, se expresa en micras (m), los valores lmites son 0.5 - 0.275 m. El ojo humano tiene lmite de resolucin de 0.075 mm (200 m ) PODER DE DEFINICION: Cualidad del objetivo de formar imgenes claras y de contorno ntido. AUMENTO FINAL O POTENCIA: Es igual al producto del aumento del ocular por el aumento del objetivo. ABERTURA NUMERICA (A.N.) Es una constante de cada lente y mide su calidad para concentrar luz. Es igual al ndice de refraccin del medio interpuesto (n) multiplicado por el seno del semingulo de abertura (Sen )

GENERALIDADES: DESCRIPCION DE UN MICROSCOPIO DE LUZ O COMPUESTO Sistema de soporte: Pie o base: la funcin de esta pieza es dar estabilidad al microscopio y soporte a las dems partes que lo integran. Platina: es una pieza metlica cuadrada con un orificio en el centro por el cual pasa la luz, posee a su vez un carro mvil con una pinza que sujeta la muestra permitiendo su movilizacin para la observacin. Brazo: es el soporte que va desde la base hasta el sistema ptico, es el sostn de dicho sistema. Sistema ptico: Oculares: son lentes que se encuentran en el cabezal del microscopio, separados por un diafragma que permite el movimiento de estos para obtener una imagen con mejor calidad y comodidad de visin. Objetivos Es la parte mas importante del microscopio, se conforman por varias lentes que corrigen las aberraciones, se encuentran en la parte baja del cabezal sujetos a un carrusel o revolver que permite el cambio de un objetivo a otro. Estos lentes son parafocales, pues al cambiar de un objetivo a otro, la imagen queda casi en foco y slo es necesario un leve ajuste; en nuestro caso, hay 4 objetivos: 1. rastreo cuatro magnificaciones o 4x 2. baja potencia 10x 3. alta potencia 40x 4. alta potencia 1000x (usar solamente con aceite de inmersin)

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Biologa Celular Sistema de iluminacin: Fuente luminosa: es la luz proporcionada por una lmpara ubicada en la base del microscopio, la cual pasa a travs de la platina proporcionando iluminacin a la muestra. Condensador: es un sistema de lentes con gran abertura, que se encuentra entre la platina y la fuente de iluminacin; puede subir o bajar dependiendo del objetivo que se este utilizando. Diafragma: se encuentra situado debajo de la platina y permite regular la cantidad de luz que pasa por el condensador. Sistema de ajuste: Tornillo macromtrico o de enfoque rpido: se utiliza para conseguir un ajuste aproximado de la imagen a observar. Tornillo micromtrico o de enfoque fino: su desplazamiento es mucho ms lento y permite enfocar claramente nuestra imagen. Tornillo de carro mvil: se utiliza para desplazar la laminilla sobre la platina hacia los lados, hacia atrs y hacia delante. Significado de las inscripciones observadas en un objetivo:

Aumento Abertura numrica 25 / 0.45 160 / 0.17 Espesor del cubreobjeto (mm)
o o Aumentos de los oculares: 8X, 10X, 12X, 15X Aumentos de los objetivos: - Secos: 2.5X, 4X, 10X, 25X, 40X, 45X - Hmedos (requieren aceite de inmersin): 95X, 100X

longitud del tubo (mm)

Equivalencias de unidades de medidas usadas en microscopia 1 1 1 1 mm = m = nm = nm = 1,000 m (micrmetro o micra) 1,000 nm (nanmetro) 10 A (Ansgtrom) pm (picmetro)

USO CORRECTO DEL MICROSCOPIO Al usar el microscopio es importante no solamente observar cuidadosamente la imagen sino tambin interpretar correctamente lo que se ve con este instrumento. Con el microscopio compuesto, la imagen de un objeto se ve muchas veces ms grandeen este caso de 40 a 1000 vecesy de manera invertida. La profundidad de foco es limitada, especialmente con los objetivos de mayor magnificacin; por esto es esencialmente bidimensional o en un solo plano. Sin embargo, los organismos biolgicos son tridimensionales. La gran mayora de las

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Biologa Celular laminillas preparadas que estudiars no muestran colores naturales porque stos se pierden al preparar la muestra y se han empleado tintes artificiales para sealar tejidos o estructuras en particular. No debes preocuparte excesivamente con los colores que se ven, ya que diferentes laminillas preparadas del mismo organismo u objeto pueden mostrar colores distintos porque se han usado tintes diferentes. El uso correcto del microscopio requiere varios tipos de ajuste, los cuales son necesarios para que se vea con claridad y en todo su detalle cada objeto que debes estudiar. Bajo la supervisin del instructor de laboratorio, aprenders a manejar el microscopio compuesto a travs de la prctica. 1. Antes de usar el microscopio, verifica que los lentes oculares y objetivos estn limpios. Si es necesario limpiar los lentes u otras partes del microscopio (como el condensador o el filtro azul) slo debes usar papel de lente seco; la nica humedad que puede emplearse es la del aliento para empaar el lente y luego frotarlo suavemente. Si la laminilla est sucia o si est mojada por debajo, puedes usar una franela para limpiarla. Una de las principales causas de una imagen borrosa y poco definida es la presencia de sucio en los lentes o en la laminilla, especialmente polvo y huellas digitales en los oculares. Nunca debes tocar los lentes o la parte central de la laminilla con los dedos. 2. Estudia las muestras llevadas a clase. Si quieres obtener ms detalles, cambia a un objetivo de mayor magnificacin (10x 40x), corrigiendo el foco con el tornillo micromtrico solamente. Antes de cambiar el objetivo a uno de mayor magnificacin, el objeto debe aparecer en el centro del campo de visin. Despus de cambiar el objetivo debes ajustar la apertura del diafragma y la iluminacin: un objetivo de mayor magnificacin requiere mayor apertura del diafragma y mayor intensidad de iluminacin. Antes de remover la laminilla, debes devolver el objetivo de 4x 10x a la posicin vertical. 3. Para la prctica inicial cada estudiante debe estudiar estas muestras: a. Hilos coloridos observa la profundidad de foco con diferentes objetivos; enfoca hacia arriba y hacia abajo para apreciar la estructura tridimensional; estos son hilos sintticos. b. Letra a observa la inversin de la imagen por el microscopio compuesto. TIPOS DE MICROSCOPIOS ELECTRONICOS: Microscopio Electrnico De Transmisin . Utiliza haces de electrones que atraviesan la muestra y las proyecta sobre una pantalla fluorescente, un monitor o una placa fotogrfica la imagen de un objeto muy pequeo. Permiten obtener aumentos del orden de 250,000 y un poder de separacin 100 veces mayor que los microscopios ordinarios. La longitud de onda que utiliza es 100,000 veces ms pequea que la de la luz visible. Microscopio Electrnico De Barrido. Los haces de electrones no atraviesan la muestra y la imagen tiene un aspecto tridimensional (Alta resolucin en 3D). Caractersticas: Poder de resolucin: De 3 a 5 Angstrom Poder de amplificacin: Ms de 500,000 veces. DIFERENCIAS ESENCIALES ENTRE UN M.O. Y UN M.E. PTICO o Se ilumina el objeto y esa luz difundida por el objeto atraviesa el instrumento. o La imagen se ve directamente. o Se puede observar elementos orgnicos vivos

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Biologa Celular ELECTRNICO o El objeto examinado no difunde los electrones sino estas lo atraviesan total o parcialmente. o La imagen no es directamente visible sino sobre una pantalla o placa fotogrfica. o No se puede observar elementos orgnicos vivos CUESTIONARIO 1. Cul es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto? 2. Qu importancia tiene el uso del microscopio en la Biologa Celular? 3. Por qu es necesario utilizar aceite de inmersin al utilizar el objetivo del mismo nombre? 4. Qu significa resolucin, poder de resolucin y amplificacin, asimismo de qu factores depende cada uno de ellos? Presenta tus respuestas a manera de tabla. 5. Realiza una tabla comparativa de todos los tipos de microscopios incluyendo: fuente de iluminacin, condensador, longitud de onda, tipo de tincin, resolucin, amplificacin, tipo de lentes, etc.

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FORMAS Y TAMAOS CELULARES

Prctica 2
COMPETENCIAS: Conoce y compara las diferentes formas y tamaos celulares que forman parte de un organismo multicelular. Tamao celular: calcular el tamao aproximado de las clulas (a 400X) comparndolos con un eritrocito humano que mide aproximadamente 7 m (micrmetros) Durante el resto de este laboratorio se estudiar la forma y tamao de clulas eucariticas, a travs de las siguientes lminas fijadas. Observar, dibujar y esquematizar. Material de trabajo: Las siguientes lminas proporcionadas por el profesor 1. Lmina H016. CELULA ESTRELLADA / RAMIFICADA.- En neurona multipolar de la sustancia gris de la mdula espinal del sistema nervioso central. Bovino. Coloracin.- Luxol Fast Blue + Violeta de Cresil. 2. Lmina H017: CLULA CBICA / ISOPRISMTICA .- En clulas del epitelio de las vesculas tiroideas de la Tiroides de Alpaca, tambin en epitelio que reviste el tubo colector del rin, cubierta del ovario. Coloracin. - Tricrmico de Masson. 3. Lmina H018: CLULA CILNDRICA / COLUMNAR.- Clulas de la lmina epitelial de la vescula biliar, tambin en revestimiento del estmago, revestimiento del conducto uterino, epitelio de revestimiento del intestino delgado. Coloracin.Hematoxilina Eosina 4. Lmina HO19: CLULA POLIDRICA/POLIGONALES.- Hepatocito del hgado. Coloracin.- Tricrmico de Mallory. 5. Lmina H211: CLULA REDONDEADA/ESFRICA.- Ovocito en la corteza del ovario de gata. Coloracin.- Tricrmico de Shorr 6. Lmina H014: CLULA OVALADA.- Hemate de pollo. Extendido de sangre perifrica. Coloracin.- May Grnwaid-Giemsa. 7. Lmina H021: CLULA FUSIFORME.- Clula muscular lisa / fibra muscular lisa en la tnica muscular del intestino. Coloracin.- Hematoxilina Fosfotnsgtica de Mallory. 8. Lmina fija: CLULA IRREGULAR/PROTEIFORMES.- Macrfago. Piel de Ratn. Glbulos blancos, amebas, etc. Coloracin.- Hematoxilina+Carmn litinado.

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CLULA PROCARIOTA Y EUCARIOTA

Prctica 3
INTRODUCCIN Para observar las clulas con el microscopio, se deben hacer preparaciones muy finas que permitan el paso de la luz a travs de ellas. Como las clulas son transparentes y no se distinguen bien, es necesario colorearlas. Esto obliga a utilizar productos qumicos que actan como colorantes. Ejemplo, la tintura de yodo, azul de metileno, hematoxilina, eosina, etc. (con este mtodo las clulas no se pueden observar vivas) Tambin se pueden utilizar las propiedades fsicas de la luz para poder observar las clulas In vivo utilizando el condensador y el diafragma del microscopio. Las bacterias se observan como pequesimos puntos, comas o filamentos que vibran, se mueven y/o se desplazan en diferentes direcciones. COMPETENCIAS Establece algunas diferencias morfolgicas entre clulas procariticas y eucariticas, as como entre clulas vegetales y animales mediante la observacin de las mismas. MATERIALES: Microscopio porta objetos y cubreobjetos hoja de afeitar mondadientes pinzas goteros cristal violeta azul de metileno (proporcionar el laboratorio) yodo (proporcionar el laboratorio) hojas en blanco. Material biolgico: Cianobacteria: Nostoc sp. cushuro Sarro dental Corcho Elodea (Anacharis canadensis u otra especie de Anacharis) media cebolla (se estudiar la catfila) hojas de geranio PROCEDIMIENTO: A. Observacin de Clulas Procariotas 1. 2. 3. 4. En tu portaobjetos coloca 1 gota de agua Ahora coloca con ayuda del asa bacteriolgica 1 gota de tu muestra (sarro dental), revuelve. Cubrir con CRISTAL VIOLETA. Esperar3 minutos.

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Biologa Celular 5. 6. lavar con agua. Secar al medio ambiente. Observa a 10x, 40x y 100x (no olvides para esta ultima el aceite de inmersin)

B. Observacin de Clula Eucariota Animal 1. 2. 3. Obtener una muestra de clulas del epitelio bucal con un hisopo. Colocar sobre el portaobjetos una gota de agua y esparcir el hisopo con la muestra. Secar. Colorear la muestra con azul de metileno por 5 minutos luego lavar y secar. Observar con el microscopio. Dibujar.

C. Observacin de Clulas Eucariotas Vegetales 1. La pared celular del corcho. Cortar una fina lmina (lo ms delgado posible) del corcho con una hoja de afeitar nueva, colocar la muestra sobre el portaobjetos y colocar una laminilla y observar con el microscopio. Dibujar. Clulas de cebolla. Cortar la cebolla, separar un catfilo y desprender una fina membrana transparente del mismo. Coloca la membrana sobre el portaobjetos y agregar una gota de yodo. Colocar un cubreobjetos sobre la muestra. Observar con el microscopio y dibujar la clula. Identificar el ncleo. Estomas en la epidermis del geranio. Retirar la epidermis de la hoja de geranio. Colocar sobre la lmina, agregar una gota de agua, colocar el cubre objetos y observar con el microscopio. Identificar el ncleo, los cloroplastos y estomas. Observar tambin los pelos o tricomas que en realidad son clulas unidas. Dibujar. Cloroplastos en la elodea. Coloca una hojita (la ms pequea) de Elodea sobre el portaobjetos, agregar una gota de agua, colocar un cubreobjetos y observar con el microscopio. Dibujar.

2.

3.

4.

Al terminar la prctica de laboratorio: Devuelve los microscopios a sus gabinetes y las laminillas preparadas a las cajas correspondientes. Lava las laminillas sucias y bota los cubreobjetos sucios al basurero. Dejar las mesas de trabajo bien limpias.

CUESTIONARIO 1) Cules fueron las diferencias que observaste al microscopio entre las clulas eucariontes y procariontes? 2) Clasifica las clulas observadas en: Clulas Procariotas Clulas Eucariotas

3) Mencionar algunas diferencias estructurales entre las clulas vegetales y animales observadas al microscopio. 4) Qu son los cloroplastos y cual es su funcin?

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Biologa Celular 5) Qu es la clorofila? 6) Qu son los estomas y cul es la funcin que realizan?

ORGANISMOS UNICELULARES
Prctica 4
INTRODUCCIN En muchos aspectos las clulas ms complejas no se encuentran en los grandes organismos sino ms bien en algunos de los microorganismos eucariotas ms pequeos, como los protozoarios (de vida libre o parsitos) y las algas microscpicas unicelulares. Estas clulas son complejas debido a que una clula constituye un organismo celular completo. Todos los mecanismos necesarios para las complejas actividades en las cuales participan estos microorganismos, como percibir el ambiente, procurarse alimento, excretar el exceso de lquido, evadir a los depredadores, deben alojarse en los confines de una sola clula. Importancia: Contribuyen a la fertilidad del suelo, ya que descomponen la materia orgnica. Funcionan en el control natural de poblaciones microbianas, ya que se alimentan de varios tipos de microorganismos. Las formas parsitas causan enfermedades a humanos y animales de importancia domstica. COMPETENCIAS Reconoce y diferencia mediante la observacin microscpica los diferentes tipos y formas de organismos unicelulares (protozoarios) o colonias (algas microscpicas). Identifica y grafica las estructuras celulares: forma celular, vacuolas, flagelos y cilios. MATERIALES: Microscopio, porta objetos y cubreobjetos, gotero, glicerina, hojas en blanco. Material biolgico: cultivo de aguas estancadas de diferente procedencia. PROCEDIMIENTO: cuatro muestras por mesa Recoleccin: Cuatro a cinco das antes de las clases laboratorio, en un frasco de boca ancha (mostaza, mermelada), recolectar agua no contaminada (no debe tener olor pestilente) de; pozos, pequeas lagunas, estanques, floreros, ros, etc. Ojo: Colocar los frascos con la muestra de agua sin tapar en un lugar ventilado y con mucha luz. En el laboratorio: Preparar una lmina con una gota de agua estancada y observar al microscopio los distintos organismos que se pueden encontrar y cmo varan en forma y configuracin. Identificar: vacuolas, flagelos y cilios. Dibujar, esquematizar. Al terminar la prctica de laboratorio: Devuelve los microscopios a sus gabinetes y las laminillas preparadas a las cajas correspondientes. Lava las laminillas sucias y bota los cubreobjetos sucios en el basurero. Al finalizar la prctica dejar las mesas de trabajo bien limpias. Cuestionario: 1. Investigar la importancia de estos microorganismos. 2. Investigue algunos protozoarios parsitos del perro, gato y humano; y que enfermedad les causa. Ejemplos.

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PROTOZOARIOS

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Biologa Celular ALGAS (Plantae) Y ALGUNAS CIANOBACTERIAS (mal llamadas algas verde-azules)

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MODIFICACIONES DE LA MEMBRANA CELULAR

Prctica 5
COMPETENCIAS Conoce las diferentes modificaciones de la membrana celular segn la especialidad y funcin que cumplen las clulas en un determinado tejido u organismo unicelular. MATERIALES: Microscopio, porta objetos y cubreobjetos, gotero, hojas en blanco. Material de trabajo: solamente las siguientes lminas fijadas proporcionadas por el profesor: 1.- Lmina H023: CILIOS.- Son proyecciones citoplasmticas delgadas de la superficie celular apical. Tamao: 5 - 15 m de long. x 0,2 m de dimetro. Funcin: Proteccin del aparato respiratorio y Movimiento de desplazamiento en una direccin. Estructura interna: 9 + 2 pares de microfilamentos (tubulina). Localizacin: Epitelio de la trquea, oviducto, mcula y cresta del oido interno, Flagelo del espermatozoide. Modificados: Bastones y conos de la retina del ojo. Coloracin.- Hematoxilina Fosfotngstica de Mallory. 2.- Lmina H022: ESTEREOCILIOS.- Proyecciones citoplasmticas. Tamao: muy largos y delgados, poseen cierto movimiento limitado. Funcin: Absorcin y resorcin. Intercambio de sustancias moleculares espermatozoide. Estructura interna: Presentan microtbulos.. Localizacin: En la superficie interna de los conductos del epiddimo. Coloracin.- Hematoxilina Frrica de Heidenhain + Tricrmico de Van Giesson.

con

el

3.- Lmina H021: CHAPA ESTRIADA (microscopio ptico) / MICROVELLOSIDADES (microscopio electrnico). Son proyecciones citoplasmticas, delgadas, pequeas y digitiformes de la superficie celular apical, se hallan en todas las clulas implicadas en la absorcin y resorcin. En el microscopio de luz se observa como una Chapa estriada. Tamao: 0,6 - 0,8 m de long. x 0,1 m de dimetro. Funcin: Aumentar la superficie de absorcin. Estructura interna: Microfilamentos de actina. Localizacin: Superficie epitelial de la mucosa intestinal, Epitelio de la vescula biliar, Utero y saco vitelino, ovocitos de la corteza del ovario, tubos contorneados proximales del rin. Coloracin.- Hematoxilina Fosfotngstica de Mallory. CUESTIONARIO: 1. Nombre algunos organismos que posean solo cilios 2. nombre algunos organismos que posean slo flagelos 3. nombre algunos organismos que posean cilios y flagelos

http://aprendiendobiologia2010.blogspot.com/2010/06/los-protozoarios-son-protistas.html

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TRANSPORTE A TRAVS DE LA MEMBRANA CELULAR

Prctica 6
I. INTRODUCCIN La clula es un sistema termodinmico que intercambia materia y energa con su ambiente, ingresan a las clulas diversos nutrientes y gases y al mismo tiempo son eliminadas las sustancias de desecho. El intercambio de partculas a travs de la membrana se realiza en muchas clulas mediante la endocitosis y la exocitosis. Los materiales en solucin se intercambian mediante la difusin, la osmosis y el transporte activo. En la difusin, las partculas se difunden a travs de un gradiente de concentraciones hasta lograr la distribucin uniforme de dichas partculas como en el caso de la difusin del azcar en el agua, etc. En la osmosis, el agua se difunde a travs de una membrana semipermeable mediante un gradiente de concentraciones entre el interior y el exterior de la clula. En el transporte activo, las sustancias nutritivas se desplazan en contra de un gradiente de concentracin por lo cual la clula debe gastar energa. Debido a los mecanismos de transporte, el interior de las clulas puede mantener una correcta presin osmtica. II. COMPETENCIAS 1. Resalta en forma experimental la importancia de los mecanismos de transporte y los factores que afectan la velocidad de difusin (concentracin y temperatura). 2. Diferencia los procesos de difusin y osmosis. 3. Reconoce los efectos producidos sobre las clulas (turgencia, plasmlisis y crenacin), al ser expuestas a medios extracelulares de diferentes concentraciones. III. FUNDAMENTO El estudio de la difusin y la osmosis como procesos biolgicos que se lleva acabo a nivel de la membrana celular, puede ser estudiado utilizando un modelo fsico, cuyo manejo sea sencillo con el propsito de conocer los factores que afectan a dicho fenmeno. Es necesario recordar que la difusin simple, que es la que se estudiar en esta prctica, slo es vlida para explicar la transferencia de ciertas sustancias tales como el oxgeno, el bixido de carbono y algunas molculas sencillas, especialmente aquellas que no son ionizables. Para la mayor parte de las sustancias que entran en la clula o salen de ella, existen otros tipos de procesos de intercambio, mismos que se analizarn posteriormente. III. MATERIALES Microscopio. Parrilla elctrica. Un termmetro. 5 vasos de precipitado (beakers)de 250 mL Etiquetas. Cronmetro. 1 gotero. Pinzas. Hojas de papel milimtrico. Hielo.

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Biologa Celular Azul de metileno Agua destilada 3000mL Concentraciones salinas de: NaCl al 0.2%, al 0.9% y al 5% (200 mL de c/u) Lancetas. Elodea sp. (una ramita) Sangre. Lminas y laminillas.

IV. PROCEDIMIENTO A. DIFUSIN: Factores que afectan a la velocidad de difusin. Concentracin: 1. Coloca volmenes iguales de agua destilada en los 5 vasos de precipitado. Verifica que la temperatura sea igual en todos. (Observar esquema en el catalogo de imgenes) 2. Numera los vasos de precipitado del 1 al 5; en cada uno coloca un nmero de gotas del colorante igual a su propio nmero (una gota en el vaso 1, 2 gotas en el vaso 2, etc.). 3. Mide el intervalo el cual llamaremos tiempo de difusin que existe entre el tiempo cero (tiempo en que se coloca el colorante) y el tiempo final (momento en que la distribucin del colorante es uniforme). 4. Registra grficamente los resultados en papel milimtrico. En el eje de las X concentracin y en el eje de las Y tiempo de difusin en minutos. Temperatura: 1. Utilizando los mismos recipientes del experimento anterior (lavados y secos) y con la misma cantidad de agua destilada, mide el tiempo de difusin del colorante en las siguientes condiciones: se colocar una gota de azul de metileno en varios recipientes cuya agua estar a diferentes temperaturas (5, 15 ,25 ,35 y 45 C). 2. Representa grficamente los resultados en papel milimtrico. B. OSMOSIS: Turgencia y plasmlisis en clulas vegetales: 1. Cortar la epidermis de la hoja de Elodea o Canna edulis y colocarla sobre la lmina con una gota de agua destilada. Cubrir con la laminilla y observar al microscopio. 2. Dibujar las observaciones a 40X. 3. En otra lmina colocar sobre una gota de NaCl al la epidermis de Canna sp. 4. Dibujar y anotar las observaciones sealando la lmina que tiene clulas turgentes y la lmina que tiene clulas plasmolizadas. Crenacin y hemlisis de glbulos rojos (clulas animales): 1. Rotular 3 lminas: A, B y C. 2. Limpiar e desinfectar con alcohol la yema de un dedo. Pinchar con una lanceta y colocar una gota de sangre en cada una de las lminas rotuladas. 3. Agregar a la lmina A una gota de NaCl al 0.2%. 4. Agregar a la lmina B una gota de NaCl al 0.9%. 5. Agregar a la lmina C una gota de NaCl al 5%.

2%

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Biologa Celular 6. Hacer dibujos de las observaciones y explicar sobre la lmina conteniendo glbulos rojos crenados y plasmolizados. CUESTIONARIO 1) Qu efecto tiene la concentracin sobre la velocidad de difusin?, A qu obedecen los resultados obtenidos? 2) Cules son las variables del experimento de difusin y cmo se deben situar en los ejes coordenados? 3) Qu efectos tiene la temperatura sobre la velocidad de difusin? A qu obedecen los resultados obtenidos? 4) Cul es la diferencia entre plasmlisis y turgencia. 5) Qu explicacin dara sobre la accin del NaCl al 0,2% sobre las clulas de la hoja de Elodea. 6) Cul es la diferencia entre crenacin y hemlisis? 7) Realiza los dibujos correspondientes para cada una de las actividades anteriores.

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COMPONENTES DEL CITOPLASMA

Prctica 7
Organoides / organelas / organitos COMPETENCIAS Observa, reconoce y compara los diferentes componentes citoplasmticos de algunos tipos celulares. Material de trabajo: solamente las siguientes lminas proporcionadas por el profesor 1.- Lmina H181: MITOCONDRIAS GRANULARES / PUNTIFORMES.- En clulas delomorfas / parietales / acidfilas de las glndulas gstricas. Coloracin.- Alcian Blue + Hematoxilina Eosina

2.- Lmina H027: MITOCONDRIAS FILIFORMES / ALARGADAS.- En clulas de la porcin tubular del rin. Coloracin.- Luxol Fast Blue + Rojo nuclear

3.- Lmina H028A: APARATO DE GOLGI SUPRANUCLEAR.- En tercio superior de las clulas que recubren los conductos del epiddimo. Coloracin.- Impregnacin Argntica Da Fano + Rojo Nuclear. 4.- Lmina H016: ERGASTOPLASMA (microscopio ptico) / Sustancia Cromidial (microscopio ptico) / Retculo Endoplsmico Granuloso (microscopio electrnico).- En neuronas: Sustancia Nissl (microscopio ptico) / sustancia tigroide (microscopio ptico). Coloracin.- Luxol Fast Blue + Violeta de Cresil

de

CUESTIONARIO 1. Explique la relacin entre los ribosomas, retculo endoplasmtico y aparato de golgi. 2. Qu papel preponderante cumple las mitocondrias en esta relacin?

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FORMAS DE NCLEOS EN CLULAS SANGUNEAS

Prctica 8
INTRODUCCIN El ncleo es el centro de control celular y encierra la informacin gentica que le otorga a cada clula las caractersticas morfolgicas, fisiolgicas y bioqumicas que le son propias. Es imprescindible para la sobrevida de la clula. El ncleo es considerado como un organelo altamente organizado. Por ejemplo, las fibras de cromatina que constituyen una interfase determinada del cromosoma no se dispersan a travs de todo el ncleo, como podra esperarse, sino que se concentran en un dominio especfico que no se superpone extensamente con los dominios de otros cromosomas. Las interacciones entre los extremos de los cromosomas y la envoltura nuclear suministran otro medio de ordenar los cromosomas dentro del ncleo. Dentro del ncleo se encuentran: Los cromosomas , visibles como fibras muy largas de nucleoprotenas llamada cromatina. Matriz nuclear , que es una red fibrilar que contiene protenas. Uno o ms nucleolos , son estructuras amorfas que sirven para sintetizar ARN ribosmico y ensamblado de ribosomas. Nucleoplasma , sustancia lquida en el cual se disuelven los solutos del ncleo. FORMA: La forma del ncleo puede ser regular o irregular. Regular: esfrica, ovoide, cbica, etc. Coincidiendo con la forma de la clula. Es decir que la forma del ncleo coincide generalmente con la de la clula. Irregular: como en los glbulos blancos polimorfonucleares (neutrfilos), su morfologa polilobulada y en forma de herradura es la que le da aspecto irregular al ncleo; tambin en los eosinfilos, basfilos, monocitos y linfocitos.

COMPETENCIAS: 1. Reconoce mediante la observacin las formas irregulares de ncleos en los glbulos blancos polimorfonucleares de la sangre. 2. Diferencia las diferentes clulas que conforma el sistema sanguneo. Materiales: Lminas porta y cubreobjetos, Lanceta, Algodn, Alcohol absoluto Colorantes: Hematoxilina y Eosina (de parte del laboratorio) Microscopio Los neutrfilos son los encargados de combatir a las bacterias. En el caso de la apendicitis aguda, los GB y los neutrfilos estn elevados. Cuando los

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Biologa Celular neutrfilos llegan a 90% significa que en el organismo hay presencia de pus. Los eosinfilos son los leucocitos encargados de las reacciones alrgicas. Cuando un px tiene una eosinofilia pensamos en dos cosas: 1) Tiene una alergia crnica o 2) Tiene un parasitismo intestinal de tipo estrongiloides y o tipo scaris por lo que tambin tiene que hacerse un examen de heces. Los basfilos, monocitos y linfocitos son los GB encargados de la proteccin contra los virus. Especialmente, los linfocitos son los que nos protegen contra los virus. En un proceso viral encontraremos una linfocitosis, lo normal es de 20-40%. Los GB ms importantes son los neutrfilos y los linfocitos. Neutrofilos elevados: Bacteria. Linfocitos elevados: Virus.

Procedimiento: 1. Lavar bien las lminas portaobjetos con detergente. Secarlas con un pao limpio 2. Obtener una gota de sangre de uno de los dedos de la mano con la lanceta (la lanceta es personal) 3. Colocar la gota de sangre en un extremo de la lamina portaobjetos 4. Con otra lmina portaobjetos hacer el extendido de la sangre (con indicaciones del profesor) y secar al medio ambiente. 5. Cuando est completamente seco agregar sobre el extendido alcohol absoluto y dejar secar. 6. Colorear con Hematoxilina por 3 min 7. Lavar con agua destilada o corriente 8. Colorear con eosina por 10 seg 9. Lavar con agua destilada o corriente 10. Dejar secar completamente y observar con el microscopio. Dibujar, esquematizar. Conclusiones. CUESTIONARIO: 1. Investigar cul es el porcentaje normal de cada uno de estos leucocitos en la sangre de un adulto sano humano. 2. Cul es el porcentaje normal en perros? 3. Cul es el porcentaje normal en gatos?

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INCLUSIONES CITOPLASMTICAS EN CLULAS ANIMALES

Prctica 9
INTRODUCCIN Las inclusiones son ya producto del metabolismo celular o sustancias exgenas que han sido llevadas al interior de la clula. Las inclusiones de pigmendto endgeno se sintetizan dentro del organismo, a diferencia del pigmento que se han introducido en el organismo por ejemplo sales minerales, polvo, y lipocromos. Observar, dibujar y esquematizar. COMPETENCIAS Aprende, reconoce e identifica los diferentes tipos de inclusiones presentes en el citoplasma de la clula animal. Material de trabajo: solamente las siguientes lminas proporcionadas por el profesor 1.- Lmina H034: GRASA.- En clulas adiposas de la hipodermis de piel de ratn. Coloracin .- Impregnacin smica 2.- Lmina H035: GRASA IMAGEN NEGATIVA.- En clulas adiposas de la hipodermis de la piel de ratn. Coloracin.- Hematoxilina eosina + Carmn de Best. 3.- Lmina H038: GLUCGENO.- Hepatocitos. Coloracin.- Hematoxilina + Carmn de Best. 4.- Lmina H177: MELANINA.- En clulas epiteliales de la coroides del ojo. Coloracin.- Hematoxilina Eosina. 5.- Lmina H032: HEMOSIDERINA.- En los macrfagos del Bazo. Coloracin.- Hematoxilina eosina 6.- Lmina H052: MATERIAL FAGOCITADO.- Partculas de colorantes en macrfagos del tejido conectivo de la piel de ratn. Coloracin.- Hematoxilina eosina (coloracin post vital) + Carmn litinado (coloracin vital). 7.- Lmina H039: Grnulos de Secrecin de Tipo Mucopolisacridos .- En clulas caliciformes del epitelio de revestimiento de la trquea. Coloracin.- Alcian Blue + Nuclear Fast Red. CUESTIONARIO 1. Explique cmo es el proceso de formacin y acumulacin de la melanina en las clulas de la piel. 2. Explique la formacin y funcin del glucgeno. 3. Investigue sobre la importancia de los mucopolisacridos.

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INCLUSIONES CITOPLASMTICAS EN CLULAS VEGETALES

Prctica 10
I. COMPETENCIAS Aprende, reconoce e identifica las distintas inclusiones citoplasmticas presentes en las clulas vegetales. Reconoce y diferencia cada una de los diferentes tipos de inclusiones citoplasmticas. Diferencia entre una inclusin citoplasmtica y una organela vegetal. II. INFORMACIN TERICA Las inclusiones citoplasmticas son sustancias de reserva y subproductos del metabolismo que se encuentran disueltas, floculentes o cristalinas en la vacuola y pueden ser: Inulina: es un polisacrido (hidrato de carbono) que al deshidratarse la clula se precipita y se forman esfero cristales. Grnulos de Aleurona: son reservas proteicas que llenan las vacuolas y son visibles al microscopio ptico, forman grnulos regulares (cristaloides proteicos) o irregulares, se encuentran en el endospermo de las semillas y se hidrolizan las protenas sirviendo de alimento al embrin. Rafidios: Son cidos orgnicos y sus sales: presentes en el parnquima de la hoja, fruto y rizomas. Son los cidos ctrico, mlico, tartrico y oxlico, son abundantes en las plantas. El cido oxlico forma cristales en presencia del oxalato de calcio. Si se cristaliza con una molcula de agua los cristales se observan como agujas muy finas llamados rafidios. Si se cristalizan con tres molculas de agua los cristales son rmbicos o piramidales. El conjunto de pirmides unidas forma una drusa o macla. Plastidios: No son inclusiones citoplasmticas sino organelas exclusivas de las clulas vegetales y estn relacionados con procesos metablicos primordiales pues son capaces de sintetizar y almacenar sustancias, estas sustancias pueden ser consideradas como inclusiones citoplasmticas y son: a. Cloroplastos: son cromatforos fotosintticamente activos. Contienen el pigmento verde llamado clorofila que comunica color verde a los vegetales y de importancia primordial en la fotosntesis por captar la energa de la luz del sol. b. Cromoplastos: estos poseen pigmentos carotenoides y de ellos depende el color de las flores y los frutos. c. Leucoplastos: son incoloros, sirven como centros de almacenamiento de almidn y otros materiales y pueden ser: Amiloplastos: (almidn) son grnulos redondeados, ovoides o piriformes con capas concntricas o excntricas. Oleoplastos: (aceites) Proteinoplastos: (protenas) III. MATERIALES Proporcionar el laboratorio: Lugol Material por mesa de trabajo: Los alumnos traern: Hojas de afeitar nueva

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Biologa Celular 2 goteros Laminas portaobjetos (10) Laminas cubreobjetos (10) Una pizca de Avena, harina de maz, de trigo, harina de camote; rama de geranio, de begonia y de Elodea. Una zanahoria pequea, beterraga, papa, aj amarillo, limn.

IV. PROCEDIMIENTO PASO 1: Observacin de los grnulos de aleurona, rafidios e inulina. Realice un corte transversal muy fino del tallo de geranio o begonia y coloque sobre un portaobjetos agrguele una gota de agua coloque el cubreobjetos. Observe e identifique grnulos de aleurona, rafidios o inulina. PASO 2: Observacin de plastidios (leucoplastos) Coloque en diferentes portaobjetos una gota de agua y agregue una pequea cantidad (un pellizco) de harina de maz, avena o camote coloque el cubreobjetos y observe las diferentes formas de leucoplastos. PASO 3: Observacin de cromoplastos Realice cortes muy finos de zanahoria, betarraga, aj amarillo, limn; identifique la muestra y despus agregue una gota de lugol. Observe. PASO 4: Observacin de los cloroplastos. Nombre y esquematice todas sus observaciones V. CUESTIONARIO 1. Cul es la diferencia entre el pigmento que da el color rojo a la sangre (hemoglobina) y el pigmento que le da el color verde a los vegetales (clorofila) 2. Aplicacin comercial de las inclusiones citoplasmticas vegetales. En que se utilizan?, Para qu sirven? 3. Enumere las organelas citoplasmticas y las funciones de cada una 4. Cules son las organelas presentes en la clula animal y clula vegetal?

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MITSIS
Prctica 11
COMPETENCIAS Identifica todas las etapas de la mitosis en las clulas del meristemo apical (pice de la raz) de cebolla.

ES: pices de cebolla. HCl diluido. Colorante aceto - orcena. Portaobjetos. Cubreobjetos. Papel toalla (no hay en el laboratorio). Aguja de diseccin.

M A T E R I A L

Preparativos Previos: 1. Preparacin de la aceto - orcena: Aadir 2gr de orcena a 45 ml de cido actico caliente (80 a 90 C) y agitar rpidamente. Aadir gradualmente a esta solucin, 55 ml de agua destilada a temperatura ambiente. Dejar enfriar. Filtrar dos (2) veces. Guardar en botella oscura. 2. Obtencin de pices de raz de cebolla: Tomar una cebolla pequea o mediana y qutele la cscara con cuidado. Raspe cuidadosamente la parte inferior de la cebolla, en donde estn las races secas, con una navaja afilada. Coloque la cebolla sobre un frasco o recipiente pequeo que contenga agua (agua suficiente para tocar la parte inferior en donde brotarn las races); no permita que la cebolla caiga dentro del recipiente sino que quede suspendida sobre el agua (si es necesario, inserte unos palillos de dientes en los lados de la cebolla para que la sostengan).

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Biologa Celular Espere que aparezcan las races en la cebolla (esto puede tardar 3-5 das). Corte los ltimos 10mm de cada raz (entre 10:00 a.m. y 12:00 m.d.) y Deposite

estas races en la solucin fijadora Carnoy (3 metanol: 1 cido actico) durante 20 minutos. (o dejarlas all por 24 horas).
Despus de 24 horas de estar en solucin Carnoi, transfiera las races a alcohol etlico al 70% (all podrn permanecer por varios meses a temperatura ambiente).

Procedimiento: 1. Enjuague los pices de cebolla (fijados) en agua destilada por 5 minutos. 2. Observe los pices mediante un microscopio de diseccin. 3. Corte y conserve la porcin del pice que posea un tejido blanquecino (casi 2-3 mm del extremo de la raz) y deseche el resto. 4. Tome un cubreobjetos y produzca incisiones con su borde a lo largo del pice de cebolla (los pasos del 1-3 deben realizarse rpidamente tratando de que el tejido no se deshidrate). 5. Coloque el tejido en HCl 10% por 10 min. en un plato Petri (esto se hace para romper la pared celular). 6. Transferir los pices a agua destilada y dejarlos all 5 min. 7. Coloque el tejido sobre un portaobjetos. 8. Agregue dos gotas de aceto-orcena sobre el tejido y caliente la muestra suavemente por 5-7 minutos, por medio de toques intermitentes sobre la superficie de un plato de calentamiento o "hot plate" (durante este tiempo vigile que el tejido permanesca humedecido con el colorante, no permita que hierva ni que se seque; agregue ms colorante si es necesario). 9. Coloque un cubreobjetos sobre el tejido (sobre l se coloca un trozo de papel toalla) y presione fuerte y cuidadosamente por medio de un borrador de lpiz (esta tcnica se llama "extendido por aplastamiento" o "squach). Recuerde que mientras ms aplastado, mejor; as las clulas se encontrarn en el mismo plano. 10. Si es necesario, levante el cubreobjetos con la ayuda de una aguja de diseccin y agregue una gota adicional de aceto-orcena; coloque nuevamente el cubreobjetos sobre la muestra. 11. Observe al microscopio (primero con el objetivo 10x localice el rea adecuada, luego pase a 40x para observar con detalles). 12. Encuentre las cuatro etapas de la mitosis, adems observe la apariencia de las clulas que se encuentran en interfase (aquellas que no estn en mitosis). Investigar: Diferencia entre citocinesis en clula vegetal y animal. Qu es el fragmoplasto y placa celular? Las caractersticas de cada etapa de la mitosis. Comparacin entre mitosis en clulas vegetales y animales. Diferencia entre citocinesis y cariocinesis. http://www.cellsalive.com/mitosis.htm http://www.cellsalive.com/meiosis.htm

CROMATINA SEXUAL
Prctica 12
INTRODUCCIN

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Biologa Celular En la mayora de los organismos existe un par de cromosomas, los cromosomas sexuales, que en el curso de la evolucin se han especializado para la determinacin del sexo. Uno de los sexos lleva un par de cromosomas idnticos (XX) y el sexo contrario un solo cromosoma X, que en algunas veces es impar (XO) y en otras forma pareja con un cromosoma Y (XY). El par XY se llama tambin heteromrfico a consecuencia de la morfologa diferente de ambos cromosomas. El varn es heterocigote y produce dos tipos de espermatozoides en proporcin semejante. Hay unos que llevan el cromosoma X y otros el Y. La hembra es homocigote y solo produce un tipo de gameto (vulo). Mediante la fertilizacin slo dos combinaciones de gametos son posibles, lo que determina 50 por ciento de machos y 50 por ciento de hembras. En 1949, Barr y Bertram descubrieron que el ncleo interfsico de las hembras exista un pequeo cuerpo de cromatina que faltaba en los machos. Este se denomin cromatina sexual o cuerpo de Barr. Esta puede encontrarse como un pequeo corpsculo en diferente posicin dentro del ncleo. Por ejemplo, en la clula nerviosa puede estar cerca del nucleolo, en el ncleoplasma o prximo a la envoltura nuclear. En las clulas de la mucosa bucal, se encuentra generalmente adherido a la envoltura nuclear, y en los leucocitos neutrfilos puede aparecer con un bastoncillo llamado palillo de tambor. COMPETENCIAS Identifica, reconoce y aprende que el estudio de la cromatina sexual tiene amplia aplicacin mdica y ofrece la posibilidad de relacionar el origen de ciertas enfermedades congnitas con anomalas cromosmicas. En las clulas del epitelio bucal vara entre 20 y 50 % en mujeres normales y vara entre las especies animales. Materiales: Lminas portaobjetos Goteros Hematoxilina Eosina Alcohol absoluto Aceite de inmersin Procedimiento: Hacer un raspado de la mucosa bucal con el borde de una lamina portaobjeto teniendo cuidado de no daar la mucosa. Utilizar lminas limpias lavadas con detergente y secas. 1) Con otro portaobjeto hacer un extendido de la muestra a lo largo de la lmina. 2) Dejar secar bien al medio ambiente y fijar con alcohol absoluto hasta que se evapore el alcohol de la lmina. 3) Colorear con Hematoxilina por 3 minutos. 4) Enjuagar con agua corriente. 5) Colorear con Eosina por unos segundos y enjuagar con agua corriente. 6) Observar a 400X y 1000X. Cuestionario: Investigue que tipo de enfermedades congnitas est asociado con el cromosoma sexual X.

EL CARIOTIPO
Prctica 13
INTRODUCCIN

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Biologa Celular El nombre de cariotipo se refiere al grupo de caractersticas que permiten la identificacin de un conjunto cromosmico, como nmero de cromosomas, tamao relativo, posicin del centrmero, largo de los brazos, constricciones secundarias, satlites, etc. El cariotipo es caracterstico de una especie, de un gnero o de grupos ms amplios, y se representa por la serie ordenada de los pares homlogos de tamao decreciente. Algunas especies pueden tener caractersticas especiales; por ejemplo, en el ratn hay cromosomas acrocntricos; en muchos anfibios slo se observan cromosomas metacntricos, en plantas pueden ser los cromosomas ms grandes. Por ejemplo; el cariotipo Humano normal consta de 46 cromosomas; formados por 23 pares de homlogos, 44 son somticos y 2 sexuales, XY para el varn y XX para la mujer. El cariotipo se hace generalmente con microfotografas. Los cromosomas se recortan y se disponen con sus pares respectivos en una serie decreciente de tamao. La tcnica se facilita si se determina el llamado ndice centromrico, que representa la relacin entre la longitud del brazo largo y corto del cromosoma. El extendido de las clulas sobre el porta objetos hace que estas desplieguen todos sus cromosomas, que generalmente se estudian en la metafase. Acompaado con otras tcnicas como por ejemplo la de bandeado, se ha alcanzado una mayor resolucin al estudiar los cromosomas tambin en la profase y la prometafase. COMPETENCIAS El estudiante Identifica y clasifica los defectos o aberraciones cromosmicas que son causas de muchas enfermedades y sndromes congnitos. Tabla: Caractersticas de los cromosomas en el cariotipo humano normal

Grupo s A B C D E F G

Pares 1-3 45 6 12 + X 13 15 16 18 19 20 21 22 + Y

Descripcin Grandes y metacntricos Grandes y submetacntricos Medianos y submetacntricos Medianos y acrocntricos con satlites Pequeos submetacntricos Pequeos y metacntricos Pequeos y acrocntricos con satlites (Y sin satlite)

Materiales: Tijeras Pegamento (goma) Regla Hoja de papel A4 Fotocopia de cariotipo

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Biologa Celular Procedimiento: Identificar y clasificar los cromosomas homlogos y recortarlos. Luego clasificarlos y pegarlos de acuerdo a las caractersticas de la tabla. El trabajo es personal. Colocar su nombre y entregar al profesor. Cuestionario: Qu son las constricciones secundarias?, A qu se denominan organizadores nucleolares y regiones satlites?, Qu es el cinetocoro?, Haga un grfico y denomine las partes del cromosoma.

CODIGO GENTICO Y SNTESIS DE PROTENAS

Prctica 14

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Biologa Celular I. INTRODUCCIN El DNA almacena toda la informacin hereditaria bajo la forma de genes, los cuales para expresarse deben ser copiados en una molcula ms ligera, el RNA mensajero (mRNA), que sea capaz de llevarlos de! citoplasma hacia los ribosomas. en donde se efectuar su traduccin en protenas. Son estas protenas las que van determinar las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas que presenta cualquier organismo. La primera parte de la sntesis de protenas se denomina transcripcin. Se trata de la sntesis de una molcula do mRNA a partir de la informacin contenida en el DNA, que se efecta mediante la complementariedad entre las bases nitrogenadas y la participacin simultnea do las enzimas DNA polimorasa y RNA polimerasa. Cabe sealar que una molcula de mRNA se forma a partir de slo una de las cadenas de la molcula de DNA. La segunda parte del proceso se denomina traduccin. En ella, el mensajero contenido en el mRNA en forma de codones o secuencias de 3 nucletidos deber ser interpretado por los ribosomas y otro tipo de molculas de RNA, los RNA de transferencia (tRNA), que se asocian a los aminocidos en forma especfica y de acuerdo a secuencias complementarias a los codones del mRNA que se denominan anticodones. Teniendo en cuenta que el DNA posee 4 bases nitrogenadas distintas que por lo menos existen 20 aminocidos diferentes, capaces de ligarse para formar las protenas, es evidente que la traduccin est regida por una clave. Por lo tanto, la existencia de caracteres hereditarios es la expresin de ciertas zonas del ADN a travs del cdigo gentico. Para la correcta traduccin del cdigo gentico se consideran los siguientes aspectos bsicos: El mRNA tiene los codones o tripletes de bases nitrogenadas; por ejemplo; AAA. El tRNA unido a aminocido especfico lleva un anticodn que debe ser complementario al codn; por ejemplo: UUU. Los aminocidos se unen uno a uno formando una cadena peptdica a medida que aparezcan los codones. El proceso se realiza en el citoplasma con la participacin de los ribosomas y enzimas particulares. El crecimiento de la cadena de protenas contina hasta que aparezcan los codones que indican la terminacin.

II. COMPETENCIAS 1. Comprende y diferencia los mecanismos de la transcripcin y la traduccin. 2. Conoce y analiza la interpretacin de! cdigo gentico. III. MATERIALES Baraja I: en cartulina amarilla se preparan las siguientes cartas: ADENINA (25). GUANINA (25). CITOSINA (25). TIMINA/URACILO (25). DNApol (5). RNApol (25). DNAasa (25) LIGASA (2).

Total: 114 cartas. Baraja II: en cartulina verde se preparan las siguientes cartas:

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Biologa Celular Metionina (3). Triptfano (3). Fenilalanina (4). Tirosina (4). Asparragina (4). cido glutmico (4). cido asprtico (4). Glutamina (4). Cistena (4). Lisina (4). Histidina (4). Punto final (5). Formil-metionina (5). Prolina (8). Valina (8). Glicina (8). Alanina (8). Treonina (8), Isoleucina (8). Leucina (12). Serina (12). Arginina (12).

Total: 136 cartas. IV. PROCEDIMIENTO Los estudiantes se organizarn en grupos de 4 y competirn en grupos de 2: A. Formacin del DNA molde (Baraja I): 1. Se separan las cartas de RNApol, se barajan y se reparten 25 cartas para cada equipo. Cada equipo tratar de formar primero el DNA molde, consistente en 8 tripletos de bases nitrogenadas. 2. El equipo que tenga la carta DNApol iniciar la sntesis de su DNA colocndola sobre la mesa. En caso de no tenerla, robar una carta y botar otra. Ningn equipo puede tener ms de 25 cartas, sumando las que tiene en las manos y las que estn en la mesa. 3. Luego armarn el triplete iniciador (TAC), que codifica para la formil-metionina. 4. A continuacin sintetizarn 6 tripletos cuidando que ninguno codifique la terminacin o punto final 5. El octavo y ltimo triplete deber codificar la terminacin. Puede ser ATT, ATC o ACT, Si un equipo no tiene la base correcta para formar su tripleto terminador botar una carta y robar otra en cada turno hasta obtenerla. 6. La DNAasa hidroliza totalmente al ADN y la ligasa une nucletidos y neutraliza la accin de la DNAasa. El equipo que tenga la carta DNAasa puede utilizarla para destruir la cadena de DNA del equipo contrario, salvo que este ltimo tenga una carta ligasa que bloquee esta accin, Si no la tuviera tiene que recoger todas las cartas, excepto la DNApol, y regresarla al mazo. Luego robar tantas cartas como haya devuelto al mazo. y en su turno, volver a construir la cadena molde. 7. Es importante que una vez aplicada la DNAasa, sta regrese al mazo y el equipo que la utiliz robe una carta. De igual manera, se procede para el caso de la DNAligasa.

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Biologa Celular 8. El equipo que concluya primero los 8 tripletes ms una DNA polimerasa (25 cartas) ganar 8 puntos. El otro equipo tendr tantos puntos como tripletes completos haya logrado. B. Sntesis del RNA (Baraja I): 1. Cada equipo con la secuencia de DNA molde ganador anotada en una hoja, confeccionar el mRNA, segn la regla de complementariedad de bases (A = U, G C). 2. Se barajan las cartas teniendo cuidado de separar previamente las cartas DNAasa, DNA ligasa y DNApol, colocando en su lugar las de RNApol. Se reparten 25 cartas por equipo y se procede igual que para la sntesis de DNA, pero utilizando como molde el DNA patrn sintetizado. Para iniciar la formacin del mRNA, el equipo debe colocar en la mesa la carta de la RNApol. 3. El equipo que termine primero la secuencia de codones tendr 8 puntos y el otro equipo 1 punto por cada codn completo. Anoten este puntaje y smenlo al obtenido en la primera parte del juego. B. Sntesis de protenas (Baraja II): 1. Se Mezclan las cartas y se reparten 8 cartas por equipo. Hay que tener en cuenta que el primer aminocido es la formil-metionina y que el codn terminador codifica la carta que dice punto final. 2. Utilizando el cdigo gentico, realicen la traduccin de los codones a la secuencia de aminocidos. Procedan de forma similar que en las partes I y II: partan del RNA sintetizado, roben una carta y boten otra en caso de no poseer el aminocido respectivo. 3. Son 8 puntos para los ganadores y 1 punto para cada aminocido que coloc el otro equipo. Anoten y smenlos. Ganar el que tenga mayor puntaje. PREGUNTAS 1. Por qu se ha hecho diferentes nmeros de cartas para los aminocidos? Existe alguna sustentacin biolgica? 2. A partir de la siguiente secuencia de DNA: TACGGTAACTTTTATCGCTGCATG, determine'. La cadena de mRNA (en base a la secuencia TACGGT...). La secuencia de aminocidos que se origina a partir del mRNA 3. Qu significado tienen los tripletes de terminacin? Qu ocurrira si se copia mal el mRNA y aparece un codn de terminacin fuera de lugar? 4. Qu funciones cumplen en comn la DNA polimerasa y la RNA polimerasa?

TCNICA DE FECUNDACIN IN VITRO

Prctica 15
INTRODUCCIN

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Biologa Celular Es importante tener presente que un embrin producido in vivo es el resultado final de un nmero de eventos delicadamente relacionados, los cuales estn bajo el control de mecanismos perfeccionados por miles de aos de evolucin. La manipulacin artificial de estos procesos sobrepasa muchas veces este fino control, de manera que los procedimientos utilizados son slo simulaciones de los eventos naturales. Es preciso remarcar que el desarrollo de esta tcnica es reciente y para ello basta con sealar que los primeros terneros obtenidos por la produccin totalmente in vitro de blastocistos, ocurri en 1988. En los Laboratorios y grupos de investigacin en el mundo se encuentran estudiando la manera de mejorar los sistemas de produccin in vitro de embriones bovinos y mltiples estrategias se han abordado con la finalidad de incrementar el rendimiento de las distintas etapas del proceso. COMPETENCIA Realiza una simulacin de la tcnica de fecundacin in Vitro. A continuacin se har una breve sntesis de las mismas as como de su eficiencia. En trminos generales, estas etapas son: a) Obtencin de los ovocitos a fertilizar b) La maduracin ovocitaria La maduracin ovocitaria o "maduracin meitica" define el perodo en el que el ovocito reinicia la meiosis (interrumpida en estado de la profase I) hasta el estadio de metafase II. En este estado, los ovocitos adquieren la competencia para ser sometidos a una fertilizacin normal y tener un adecuado desarrollo embrionario. Los ovocitos provenientes de folculos antrales inferiores a los 6 mm, como se mencion anteriormente, y acompaados por las clulas del cmulus oophorus pueden madurar in vitro, despues de 24 horas en medio y ambiente apropiados. Alrededor del 90% de los ovocitos inmaduros alcanzan su maduracin cuando las condiciones de cultivo fueron las apropiadas. c) La fertilizacin propiamente dicha Entre 20 y 24 hs despus (este tiempo varia de acuerdo a las especies) de ser colocados en el sistema de maduracin, los ovocitos son expuestos a los espermatozoides. Se utiliza semen congelado, el cual debe ser preparado para eliminar los componentes del medio de congelacin y la mayor parte de los espermatozoides muertos. Existen para ello metodologas de laboratorio bien definidas que permiten con una pajuela de semen de 40 millones de espermatozoides, inseminar aproximadamente 700 a 800 ovocitos. Los espermatozoides tratados son entonces enfrentados con los ovocitos ya maduros con los que permanecen en contacto alrededor de 24 hs. La tasa de fertilizacin, medida como la tasa de clivaje a las 48 hs postinseminacin, oscila habitualmente entre el 70 y 80% de los ovocitos. d) El desarrollo embrionario Cumplido el perodo mencionado, son eliminados los restos de clulas propias de los ovocitos y de espermatozoides y colocados en un nuevo medio donde permanecern 7 das hasta alcanzar el estadio de blastocisto (estadio en el que pueden ser transferidos). Es precisamente en esta etapa de desarrollo donde se produce la mayor cantidad de muertes celulares ya que slo entre 10 y 30% de los ovocitos iniciales llegarn al estadio de blastocisto. Llegado a este grado de desarrollo los embriones pueden ser transferidos o conservados. Desde un punto de vista prctico, y como lo fue en su momento para la inseminacin artificial, slo puede tener xito la prctica en discusin si se dispone de un mtodo

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Biologa Celular apropiado de conservacin de los embriones para disponer de ellos en el momento oportuno. La aplicacin de FIV esta creciendo y hoy tiene un futuro muy amplio. Con el uso de la tcnica de inseminacin artificial de una vaca se puede conseguir solo un ternero por ao, con el uso de la superovulacin y transferencia de embriones de una vaca se pueden conseguir 20 o 30 embriones al ao; con FIV se puede llegar a producir 1 embrin por semana que significara aproximadamente 50 o 60 embriones anuales. No existe una absoluta garanta de que cada vaca pueda producir embriones viables a travs de FIV, pero el temprano xito obtenido con esta tcnica hace de esta una opcin viable, especialmente para criadores que poseen vacas genticamente valiosas y que no pueden producir cras por las vas convencionales. COMPETENCIAS Aprende y explica los fundamentos de la fecundacin in Vitro y las posibles aplicaciones de la tcnica en el campo de la reproduccin MATERIALES: Equipo de diseccin Jeringas hipodrmicas Pipetas pasteur Placas petri Suero fisiolgico Estereoscopio METODOLOGA: Obtencin de los ovocitos: Seguir la metodologa de la practica 12 Obtencin de espermatozoides: Seguir la metodologa de la practica 13 Fecundacin in vitro: En cada cpsula petri colocar un ovocito en 10 ml de suero fisiolgico. Agregar a la cpsula 1ml de solucin diluida de espermatozoides Colocar la cpsula en la incubadora por espacio de 30 minutos a 37 C luego observar con el estereoscopio y tambin con el microscopio.

CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. Qu son las clulas madre? Cules son las partes de un ovocito? Cules son las futuras aplicaciones de la fecundacin in vitro? Qu enzimas intervienen en la penetracin del espermatozoide al ovocito? (fecundacin) 5. Qu es capacitacin espermtica?

FUENTES DE INFORMACIN

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Biologa Celular
BIBLIOGRFICAS: CURTIS, H., BARNES, N. S., SCHNEK, A. y MASSARINI, A.: Biologa. Ed. Mdica Panamericana, 7. a edicin, 2008. SOLOMON, E. P.; BERG, L. G. y MARTN, D. W.: Biologa. Ed. Interamericana McGraw-Hill, 8. a ed., 2008. CAMPBELL, N. A. y REECE, J. B.: Biologa. Ed. Mdica Panamericana. 7. edicin, 2007. AUDESIRK, T.; AUDESIRK, G. y BYERS, B. E.: Biologa. La vida en la Tierra . Ed. Prentice-Hall Hispanoamericana. 8.a ed., 2008. SADAVA, D., HELLER, H. C., ORIANS, G. H., PURVES, W. K., HILLIS, D. M.: Vida. La Ciencia de la Biologa. Ed. Mdica Panamericana, 1.a ed., 2009. MADER, S. S.: Biologa. Ed. Interamericana McGraw-Hill, 9. ed., 2008. Invitacin a la Biologa. H. Curtis, S. Barnes, A. Schnek, G. Flores. Editorial Mdica Panamericana. 6 Edicin. 2006. Bibliografa complementaria Es muy recomendable la consulta y lectura de otros textos, para ampliar conocimientos, solucionar dudas o profundizar en temas de especial inters personal: ALBERTS, B., BRAY, D., HOPKIN, K., JOHNSON, A., LEWIS, J., RAFF, M., ROBERTS, K. y WALTER, P.: Biologa Celular y Molecular. Mdica Panamericana, 2. ed., 2006. BECKER, W. M., KLEINSMITH, L. J. y HARDIN, J.: El mundo de la clula. Pearson Addison Wesley, 6. ed., 2006. CORTS, E., MORCILLO, G.: Ingeniera Gentica: Manipulacin de genes y genomas. Coleccin Educacin Permanente. UNED, 2002. FONTDEVILA, A. y MOYA, A.: Evolucin: origen, adaptacin y divergencia de las especies. Sntesis , 2003. FREEMAN, S. y HERRON, J. C.: Anlisis evolutivo. Prentice Hall, 2. ed., 2002. GRIFFITHS, A. J. F., WESSLER, S. R., LEWONTIN, R. C. y CARROLL, S. B.: Gentica. McGraw-Hill Interamericana, 9. ed., 2008. KARP, G.: Biologa celular y molecular. Conceptos y experimentos . McGraw-Hill Interamericana. 4. ed., 2005. KLUG, W. S., CUMMINGS, M. R. y SPENCER, C. A.: Conceptos de Gentica. Prentice Hall, 8. ed., 2006. LODISH, H. F., BERK, A., MATSUDAIRA, P., KAISER, M., KRIEGER, M., SCOTT, M. P., ZIPURSKY, S. L. y DARNELL, J. E.: Biologa Celular y Molecular. Mdica Panamericana, 5.a ed., 2005. LUQUE, J. y HERREZ, A.: Biologa Molecular e Ingeniera Gentica. Harcourt, 2001.

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Biologa Celular
MOLLES, M. C.: Ecologa, concepto y aplicaciones. McGraw-Hill Interamericana, 3 ed., 2005. MLLER-ESTERL, W.: Bioqumica. Revert, 1. ed., 2008. NACHTIGALL, W. 2002. Microscopa. Materiales. Instrumental. Mtodos. Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial Omega. Pgs. 8-13. 2002 NELSON, D. L. y COX, M. M.: Lehninger: Principios de Bioqumica. Omega, 4. ed., 2006. RENNEBERG, R.: Biotecnologa para principiantes. Revert, 2008. SMITH, T. M. y SMITH, R. L.: Ecologa. Pearson Addison Wesley, 6. ed., 2007. VOET, D., VOET, J. y PRATT, C. W.: Fundamentos de Bioqumica. Mdica Panamericana, 2. ed., 2007. FUENTES ELECTRONICAS: http://www.prenhall.com/~audesirk

Recursos y Actividades del libro de Biologa General de

Audesirk & Audesirk (en ingls)

http://www.ultranet.com/~jkimball/BiologyPages/ Enciclopedia con formato web con ensayos sobre temas de Biologa general, celular y molecular. http://esg-www.mit.edu:8001 Contiene hipertextos sobre temas de biologa: Macromolculas, Biologa celular, Bioqumica enzimtica, Glucolisis y Ciclo de Krebs, Fotosntesis, Gentica Mendeliana, Gentica de procariotas y expresin gnica, DNA recombinante, e Inmunologa. http://www.biology.arizona.edu/ The Biology Project: es un recurso para aprender biologa online de la Universidad de Arizona (en ingls con algunos temas en espaol). Con contenidos sobre: Bioqumica, Biologa celular (en espaol), Productos qumicos y salud, Biologa del desarrollo, Inmunologa, Gentica mendeliana (en espaol). Biologa molecular. http://www.um.es/~molecula/indice.htm Aula Virtual de Biologa, pgina desarrollada por la Universidad de Murcia con diversos temas sobre biomolculas, con ejercicios de autocomprobacin y estupendas figuras explicativas (los temas son tratados a nivel bsico). http://gened.emc.maricopa.edu/Bio/BIO181/BIOBK/BioBookTOC.html On line Biology Book. Un excelente enlace para consultar diversos temas de biologa. http://www.rdg.ac.uk/NCBE The European Iniciative for Biotechnolgy Education (EIBE). Contiene distintas unidades didcticas sobre biotecnologa realizadas por diferentes expertos europeos, algunos temas estn traducidos al espaol. http://www.arrakis.es/~lluengo/biologia.html Pgina de la profesora Luengo sobre temas de biologa desarrollada para estudiantes de bachillerato pero puede ser til para fijar algunas conceptos bsicos. http://www.arrakis.es/~ibrabida/biologia.html De la misma profesora que la anterior pero sobre temas de ingeniera gentica.

http://www.bioxeo.com/palbioca.htm Numerosos enlaces, ordenados por temas, a pginas de biologa. http://es.scribd.com/doc/20805277/GUIA-DE-PRACTICAS-DE-LAB-BIOLOGIA-CELULAR

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