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ENTEROBACTERIES
PLAN:
I. ENTEROBACTERIES GENERALITES
1 Introduction 2 Morphologie 3 Culture 4 Caractres Biochimiques 5 Caractres antigniques 6 Sensibilit aux ATB
II. ESCHERISCHIA COLI
ENTEROBACTERIES
Famille des entrobacteriacae comprend nbreux Genres bactriens dfinit comme suit: -BG-, non sporules aerobies et anarobies facultatifs -mobiles(ciliature pritriche) ou immobiles -culture sur milieu ordinaire -fermentant le glucose avec ou sans production de gaz -possede une nitrate rductase -raction - des oxydases -catalase + sauf Shigella dysenteriae du srotype I -G+C:39 -59moles % ADN,ceci permet dexclure Pseudomonas arobies stricts , mtabolisme oxydatif; Vibrio , Aeromonas , Plesiomonas anarobies facultatifs ciliature non Pritriche,oxydase +
INTRODUCTION
Espces frquemment isoles appartiennent aux genres : Citrobacter, Enterobacter , Escherichia Hafnia , Klebsiella , Morganella , Proteus , Providencia , Salmonella , Shigella , Yersinia
MORPHOLOGIE Bacille Gram ngatif de 2-3m de long sur 0,6 de large Polymorphisme frquent chez Proteus Mobilit Bactries immobiles : Klebsiella,Shigella,Yersinia pestis Espces mobiles plus nombreuses: -mobilit variable en fonction de la temprature dincubation Yersinia pseudotuberculosis, Hafnia alvei souvent mobiles 28C ,et immobiles 37C
MORPHOLOGIE
Flagelle : longueur dpend condition de culture 20m 20nm Pili ou fimbriae : nature protique, ppts adhsives aux cellules eucaryotes(hmaties). pili MS si adhsion inhibe par mannosides pili MR si adhsion non inhibe par le mannose pili MS agglutine cellule levure et hmaties cobayes pili MR ceux de lhomme ; ils peuvent tre cods par les gnes plasmidiques , chromosomiques
MORPHOLOGIE
Capsule
certaines entrobactries ont une volumineuse capsule; frquente chez Klebsiella, exceptionnelle chez E. coli . ces bactries capsules donnent des colonies muqueuses sur milieux gloss en absence de vritable capsule bien dlimite, elles sont entoures dune substance visqueuse rendant difficile lidentification des Ag O et H
CULTURE
Les entrobactries se dveloppent rapidement in vitro sur des milieux "ordinaires". La temprature optimale de croissance est 37C mais la culture est possible entre 20 et 40C. Leur temps de division varie de 20 40 minutes. Sur glose, - frquemment les colonies sont rondes (E. coli ,Salmonella , Enterobacter) - lisses(smooth S) ,rgulires et atteignent 2-3 mm aprs 18h dincubation 37C repiques en bouillon on a culture homogne avec des ondes moires. diffrences dans la rapidit de dvpt , colonies ; Shigella , E.coli , Salmonella
CULTURE
Yersinia :colonies plus petites dveloppement lent. Les Proteus ont tendance envahir la glose et y former un tapis uniforme. Les Klebsiella forment des colonies souvent trs muqueuses, larges, grasses luisantes - colonies rugueuses(rough=R) rencontres sur des cultures de collection la suite de mutation portant sur le LPS de la paroi ; - elles sont plates , surface mate , bords irrguliers repique en milieu solide la culture est forme dagglutinats spontanes
CULTURE
toutes les cultures dentrobactries mobiles peuvent envahir la surface de milieu gloss si lon abaisse leur concentration en agar
le temps de division moyen des entrobactries 20- 40min sur milieu liquide
CARACTERES BIOCHIMIQUES
Cest sur leur tude que repose en pratique le diagnostic de genre etdespce Les mthodes utilises ont pour principe:
: absence de fermentation
X :tardivement irregulirement + ,lacidification est due lapparution de mutants aptes acidifier d : +/- suivant les souches au sein de la mme espce
CARACTERES BIOCHIMIQUES:
2.Recherche de lutilisation dun substrat en milieu complexe en arobiose :citrate, malonate Une raction + alcalinisation 3.Recherche dun mtabolite par une raction caractristique: production de nitrites partir de nitrate par une rductase (dfinition entrobacteries) le 2-3 butane diol produit terminal de certaines espces qui le produisent partir de lac pyruvique lors de fermentation glucose (transformation en actone rvl par raction Voges-Proskauer ou VP) lindole produit partir du tryptophane les gaz qui lors de la fermentation du glucose tmoigne de la prsence dune hydrolyase Scinde lacide formique HCOOH en CO + H
CARACTERES BIOCHIMIQUES
4.Identification de certaines enzymes rvles par action sur leur substrat ou un analogue color de celui ci: dcarboxylases de lysine(LDC) formation de Cadaverine ; dcarboxylase de lornithine (ODC)formation de putrescine ,rvles par alcalinisation 2re de milieux contenant ces substrats et du glucose dsaminases de la phnylalanine ou du tryptophane qui les transforment en ac phnylpyravique ou en ac. indolpyruvique que lon rvle par le per chlorure de fer
CARACTERES BIOCHIMIQUES 4.Identification de certaines enzymes rvles par action sur leur substrat ou un analogue color de celui ci: urase: production de carbonate dammonium rvl par alcalinisation -galactosidase: scinde le lactose gluc +gal , capable de scinder lorthonitrophenyl -D galactopyranoside (ONPG) librant lorthonitrophenol qui colore le milieu en jaune , ONPG+
CARACTERES BIOCHIMIQUES
-glucuronidase:substrat chromogne le para Nitrophenyl -Dglucuronide -xylosidase: substrat le paranitrophenyl -D xylopyranoside -glutamyltransfrase : substrat ac.-Lglutamique paranitroanilide Glatinase Ttrathionate rductase (TTR) transforme le ttrathionate en thiosulfate
CARACTERES
BIOCHIMIQUES
5. Etude de la croissance en milieu minimal: Recherche de laptitude de la bactrie culitiver en utilisant une source de carbone dfinie par exple citrate de Na(mil Simmons) en Milieu minimal: seules les bactries prototrophes poussent 6.Recherche de laptitude ou linaptitude cultiver en prsence dun inhibiteur cyanure de K( milieu de Braun)
TABLEAU
CARACTRE
Citrobacte r Enterobac ter
DIDENTIFICATION
Klebsiella Serratia
DES
Shigella
GENRES
Proteus
*SEULEMENT 20C
Escherichi a Salmonell a
+ + + + + -
+ + + + + -
+ + + + + + -
+ + + +/+ + + -
+ + + + + -
+ +/+ -
+ +/+/-
+ +/-* +/+* + +
HS
+/-
+/-
la R naturelle aux ATB est dune grande aide la dmarche didentification des entrobactriacae toute divergence entre lidentification biochimique et le phnotype de rsistance doit amener le biologiste vrifier lidentification du germe
Groupe II: production naturelle dune penicillinase comme Klebsiella,Citrobacter diversus,C.amalonaticus ,E. hermanni
GroupeIII:productionnaturelledecphalosporinase comme le phnotype pnicillase de haut niveau retrouv chez la des souches de E. coli et Proteus mirabilis; lmergence des BLSE , cphalosporinases plasmidiques
ESCHERICHIA COLI
PLAN: Historique Taxonomie Epidmiologie Caractres bactriologiques Facteurs de pathognicit Pouvoir pathogne Diagnostic biologique Sensibilit aux antibiotiques / Rsistance aux antibiotiques Traitement / Mesures dhygine
HISTORIQUE
Escherichia coli encore appele colibacille (bacille du colon)est un bacille gram ngatif dcouvert en 1885 par le pdiatre allemand Theodor Escherich dans les selles de nourrissons
Dans les annes 1950, de nombreuses souches dE. coli sont evoques en tant quagents tiologiques de diarrhes infantiles par la suite on dcouvre que certaines souches spcialises dE. coli sont associes des pathologies trs diverses y compris extra intestinales
TAXONOMIE
Bacteria Proteobacteria Gamma proteobacteria Enterobacteriales Enterobacteriaceae Escherichia E. coli E. fergusonii E. hermannii E. vulneris E. blattae
EPIDEMIOLOGIE 1
Les E. coli sont des htes normaux du tube digestif, de la partie distale de lilon et du colon de lhomme et de la plupart des animaux sang chaud quils colonisent ds les premires heures aprs la naissance. Ils constituent lespce dominante de la flore arobie (106 108 bactries par gramme de selles chez ladulte = 1000 fois moins importante que la flore anarobie). Une dizaine de srotypes coexistent normalement chez un mme individu subit frquemment des fluctuations dans sa composition. La plupart des souches sont sans danger mais certains gnes peuvent donner des E. coli commensaux des potentialits pathognes.
EPIDEMIOLOGIE 2
La prsence des E. coli dans leau et le sol est un indicateur de contamination fcale. Le dnombrement des coliformes dans leau est appel colimtrie.
Transmission: aliments souills, les mains sales souilles par le contact avec des animaux porteurs ou leurs djections, par contact avec les malades qui excrtent des bactries dans ses selles
CARACTERES BACTERIOLOGIQUES
CARACTERES CULTURAUX
CARACTERES BACTERIOLOGIQUES
CARACTERES BIOCHIMIQUES 1
Rouge de mthyle Lactose ONPG Mannitol Indole Urase Actoine/VP Citrate H2S Gaz Rduit les nitrates en nitrites Saccharose Salicine LDC (+) (+) (+) (+) (+++) (-) (-) (-) (-) (+) (+) (+) (+)
CARACTERES BIOCHIMIQUES 2
Existence des variants ngatifs pour un caractre habituellement positif (par exemple indole). Ceci est conscutif une mutation. A linverse, on peut exceptionnellement rencontrer des variants positifs pour un caractre habituellement ngatif (par exemple la production de H2S); caractre souvent cod par un plasmide.
Les variants immobiles et agazognes dE. coli peuvent causer des problmes de diagnostic diffrentiel avec les Shigella , ils avaient reu un nom particulier : Alkalescens-Dispar
CARACTERES BACTERIOLOGIQUES
CARACTERES ANTIGENIQUES 1
Les composants antigniques de E. coli sont varies et appartiennent 3 types de structures. Leur identification permet de dfinir le srotypes cest - -dire lassociation des spcificits des antignes O, H et si possible K.
Cette srotypie permet de caractriser une souche, en particulier les souches pathognes et endmiques.
Ex:
CARACTERES ANTIGENIQUES 2
Antigne somatique O
CARACTERES ANTIGENIQUES 3
Antigne H
Il correspond aux protines flagellaires La diversit des antignes est du aux diffrents types de flagelline (composante essentielle du flagelle) 56 srotypes difficiles mettre en vidence en raison de leur fragilit et de la faible mobilit de la plupart des souches lors de leur isolement Intrt pidmiologique pour la confirmation lappartenance dE. coli la mme souche bactrienne Le typage de lAntigne H peut se faire par sroagglutination ou encore par des techniques molculaires de srotypage
CARACTERES ANTIGENIQUES 4
Antigne K
93 Antignes K
une enveloppe dimportance variable antigne K de type B . Sa mise en vidence est difficile; cest pourquoi ces antignes napparaissent plus dans les formules antigniques soit une vritable capsuleantigne K de type A de Kaufmann. Dans ce cas, les colonies bactriennes sont alors mucodes et lantigne O est masqu. Il ne peut tre rvl quaprs chauffage
FACTEURS DE PATHOGENICITE 1
Des
adhsines : confrant aux souches qui les possdent la proprit de se fixer aux cellules pithliales. de nature protique, elles sont portes le plus souvent par des pilli communs.
l'adhrence constitue une tape essentielle de la pathogense des infections dues aux bactries entriques.
FACTEURS DE PATHOGENICITE 2
Des toxines
Ce sont des toxines cytotoniques qui agissent sur le contrle entrocytaire de la scrtion hydro-lectrolytique. Ces facteurs de virulence sont cods par les plasmides. La toxine LT est proche de la toxine cholrique
POUVOIR PATHOGENE 1
LES INFECTIONS DE L'ARBRE URINAIRE :
Mcanisme
La migration des germes du tube digestif vers l'arbre urinaire par voie ascendante et externe Contamination par voie lymphatique
Facteurs favorisants :
Urthre fminin plus court que celui de lhomme plus frquent chez la femme Toutes les causes de stase telles que : lithiase, prostatite, compression, grossesse, malformation. En effet, le pH acide et les vidanges priodiques de la vessie jouent un rle important pour empcher la prolifration intra vsicale des bactries
E. Coli est impliqus dans 90% des infections communautaires du tractus urinaire survenant sur un arbre urinaire anatomiquement normal. Il sagit essentiellement des cystites, pylites et pylonphrites.
POUVOIR PATHOGENE 2
Cependant, la contamination vsicale par le colibacille ne donne une infection urinaire et surtout une atteinte du parenchyme rnal, qu'avec certaines souches particulires Souches uro pathognes (UPEC = uropathogenic E. coli) Facteurs de pathogenicite :
pili de type P ou pili PAP (pyelonephritis Associated Pili) Pili de type 1 et F1C
Les adhsines S, M et Afa/Dr Induction de la scrtion de cytokines pro-inflammatoire Synthse des sidrophores Capsule
srotypes O : 1, 2, 4, 6, 7, 16, 18, 25, 50, 75 srotypes K : 1, 2, 3, 5, 12, qui possdent des adhsines
POUVOIR PATHOGENE 3
LES INFECTIONS ABDOMINALES
Suppurations (pritonales, biliaires, appendiculaires, gnitales) et maladies inflammatoires (maladie de Crohn) Les souches en cause
Colonisent la muqueuse grce aux pili de type 1, pntrent lintrieur de la cellule pithliales sy multiplient Appartiennent au pathovar AIEC = Adherent-invasive E. coli ont un pouvoir cytotoxique sur les polynuclaires, opposent une rsistance la phagocytose Survivent et se multiplient lintrieur des macrophages possdent des systmes de captation du fer
POUVOIR PATHOGENE 4
LES BACTRIMIES
Les pathovars des Escherichia coli incrimins dans les bactrimies sont caractriss par un fort pouvoir invasif. Ils possdent dans ce cas : des systmes de captation du fer, des cytotoxines qui, occasionnent des dgts tissulaires en facilitant leur diffusion des facteurs de rsistance la phagocytose (par la capsule) et l'action bactricide du complment (par les chanes latrales du LPS)
LE CHOC ENDOTOXINIQUE
Fivre, collapsus et hmorragies sont les symptmes principaux du redoutable choc septique qu'engendre la lyse massive dans l'organisme d'entrobactries (ou de bactries Gram ngatif) qui librent de grandes quantits de LPS.
POUVOIR PATHOGENE 5
LES MNINGITES ET LES BACTRIMIES DU NOUVEAU NE ET DU NOURRISSON
30% environ des mningites nonatales sont dues Escherichia coli. Elles s'accompagnent presque toujours d'un tat bactrimique, voire septicmique.
POUVOIR PATHOGENE 6
LES MNINGITES ET LES BACTRIMIES DU NOUVEAU NE ET DU NOURRISSON
Il existe dautres parents immunologiques entre des antignes K de E. coli et ceux dautres bactries agents des mningites:
K92/mningocoque du groupe C K7/Streptococcus pneumoniae de type capsulaire 3 K100/Haemophilus influenzae de type capsulaire b
POUVOIR PATHOGENE 7
LES INFECTIONS INTESTINALES
Les
souches de E. coli responsables dinfections intestinales sont actuellement classes dans 6 pathovars dfinis sur la base des facteurs de pathognicit et des signes cliniques engendrs
ETEC
6-8-15-20-25-27-63-78-80-85-115-128ac 139-148-153-159-167
ECEI EHEC
EAEC
3-4-7-9ab-15-21-51-55-77-86-91-92-106111-126-127 4-15-28-44-50-55-69-75-86-125-126-127128
DAEC
POUVOIR PATHOGENE
Ces souches sont responsables de la "diarrhe des voyageurs" ou "turista" et de syndromes diarrhiques pidmiques chez les enfants de moins de 2 ans dans les pays du tiers-monde. Linfection se produit aprs absorption deau ou daliments contamins et se manifeste par une diarrhe trs aqueuse, cholriforme, des nauses, des crampes abdominales associes ou non avec une lgre fivre
Les ETEC se fixent sur la muqueuse par lintermdiaire des facteurs dadhsion CFA/1, CS et laborent les entrotoxines thermolabiles (LT) et thermostables (ST).
POUVOIR PATHOGENE
Ces souches (trs voisines des Shigella par leurs caractres biochimiques et antigniques) sont responsables de syndromes dysentriques avec invasion de la muqueuse intestinale. Cette pathologie ressemble celle cause par les Shigella, avec fivre leve. Les souches entroinvasives touchent toutes les tranches dge. Invasion de lepithlium colique et raction inflammatoire intense avec libration massive dinterleukine
POUVOIR PATHOGENE
POUVOIR PATHOGENE
Souches entropathognes EPEC (Enteropathogenic Escherichia coli) Leur mcanisme physiopathologique est d la capacit de ces souches adhrer aux entrocytes et ensuite dentraner leur destruction sans jamais envahir les entrocytes. Ils crent des lsions dattachement-effacement caractrises par un effacement des microvillosits de la bordure en brosse des entrocytes et par une adhsion intime des bactries la cellule hte
POUVOIR PATHOGENE
Souches
Leurs diarrhes sont caractrises par des selles aqueuses avec du mucus et ne comportent ni hmaties ni leucocytes. Elles saccompagnent de fivre, de malaise, de vomissement.
POUVOIR PATHOGENE
Les EAggEC sont des souches qui ne scrtent pas les entrotoxines LT ou ST Leur pouvoir pathogne se fait par adhsion aux cellules (adhsion agrgative). Scrtion de mucus par les entrocytesles bactries sont piges la surface de la muqueuse persistance de la colonisation Production de lentrotoxine EAST1 (pour EAggEC ST-like toxin ), qui prsente environ 50 % dhomologie avec la toxine ST des ETEC. La contribution de ces toxines au pouvoir pathogne nest pas encore tablie. Les EAggEC sont responsables : De diarrhes persistantes pratiquement dans tous les pays du monde De retard de croissance surtout chez les jeunes enfants.
POUVOIR PATHOGENE
Les Escherichia Coli Adhsion Diffuse E C A D (ou diffuse adhering Escherichia coli =DAEC)
Ces souches, tout d'abord classes avec les Escherichia coli entro-pathognes, forment maintenant un groupe part, du fait de leur phnotype d'adhsion particulier qui n'implique pas d'agrgats microbiens. Responsables de diarrhes chez lenfant
Deux marqueurs caractrisent ces souches : l'antigne fibrillaire de surface F1845 associ un fimbriae (pili) la protine adhesin involved in diffuse adhrence, AIDA-1
DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE
PRELEVEMENT 2eme jet durine chez ladulte Urine dans un collecteur chez le nourrisson LCR Hmoculture Selles dans un flacon strile Pus Liquide d panchement EXAMEN MICROSCOPIQUE Numration des leucocytes par mm la cellule de Malassez Coloration de Gram BG Permet dorienter sur le choix du milieu
DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE
CULTURE
Sur glose ordinaire Milieu non chromogne avec un indicateur de lattaque du lactose permettant une diffrentiation des colonies Non slectif (CLED, milieu lactose au bromocresol pourpre) Slectif (milieu de Mac Conkey, milieu de Drigalski) Milieu chromogne
dveloppement de bacilles gram ngatif, fermentant le lactose et prsentant les caractres biochimiques qui caractrisent lespce
DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE
Quel que soit le milieu utilis, les colonies sont obtenues aprs 18 heures dincubation 37C. Colonies rondes , lisses, bord rguliers et de 2-3 mm de diamtre. Sur milieux de culture usuels, les mutants dficients en facteurs de croissance produisent des colonies naines trs peu visibles. En milieu liquide, la culture confre un trouble homogne.
DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE
Identification de lespce
Elle repose sur l tude de lensemble des caractres biochimiques (galeries classiques, Api 20E)
DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE
Recherche de l'antigne K1 dans le srum, le L.C.R ou les urines du malade par agglutination de particules de latex sensibilises mais raction croise avec l'antigne du groupe B des mningocoques. Rvlation de la prsence d'adhsines grce leur pouvoir hmagglutinant sur les globules rouges humains ou animaux. Mise en evidence du pouvoir invasif par :
le test de Sereny (l'instillation de la souche sur l'il d'un cobaye provoque une krato-conjonctivite) leur pouvoir envahissant sur cellule HeLa en culture.
Recherche sur les souches isoles d'infections urinaires des anticorps fixs sur les bactries dont la prsence signerait une infection haute, rnale ou pylo-calicielle.
-lactamines : pnicillines A (ampicilline, amoxicilline), C1G, C2G, C3G, les carboxypnicillines, les acylurido-pnicillines, les carbapnems et les monobactams. Les aminosides et les polypeptides sont galement actifs Autres : sulfamides, aminosides, quinolones
50% de rsistance lampicilline, lamoxicilline par production de pnicillinases plasmidiques 15 - 20% de rsistance lamoxicilline + lacide clavulanique 2-4% de rsistance aux C3G par production de LSE 5 - 10% de rsistance aux fluoroquinolones (acide nalidixique, ofloxacine) Nombreuses souches Rsistantes aux ttracyclines et aux sulfamides. Origine plasmidique par acquisition de rplicons par transfert horizontal
TRAITEMENT Il est fonction de la localisation de linfection et de lantibiogramme INFECTIONS URINAIRES antibiotiques ayant une bonne diffusion urinaire et non nphrotoxiques
Cystites
Traitements courts
dose unique pour pefloxacine, ciprofloxacine, ofloxacinefosfomycine-trometadol 3 jours pour cotrimoxazole 7 10 jours pour C3G, Amoxiciline-Acide clavulanique
Pylonphrites aiges Traitement de 10 20 jours avec C3G orale, fluoroquinolone, association G3G parentraleaminoside
TRAITEMENT
INFECTIONS EXTRA-INTESTINALES LOCALISEES
MENINGITES ET BACTERIEMIES
INFECTIONS INTESTINALES
MESURES DHYGIENE
Toute
viande hache doit tre bien cuite (temprature intrieure de la viande doit atteindre 70 80C) jus doivent tre pasteuriss
Les Les
laits frais manant directement de lanimal sont proscrire surtout chez les jeunes enfants fruits et surtout les lgumes doivent tre lavs avant consommation
Les
MESURES DHYGIENE
Le lavage des mains doit tre trs soigneux et doit se faire: avant de prparer les aliments aprs tre alls aux toilettes ou toutes manipulations douteuses et surtout celle des animaux domestiques Les surfaces de travail au niveau de la cuisine doivent tre laves et ainsi que les ustensiles qui ont t en contact avec la viande crue ou surtout celle de la volaille. Les aliments doivent tre conservs une temprature de 4C au moins. Attention la consommation deau provenant de certains cours deau, ou de certaines sources
FIN