Vous êtes sur la page 1sur 14
Isolementdessouchesd’actinomycètesproductrices desubstancesantifongiques Isolationofactinomycetesstrainsproducing
Isolementdessouchesd’actinomycètesproductrices
desubstancesantifongiques
Isolationofactinomycetesstrainsproducing
antifungalsubstances
Auteur:ElarbiBoussaber,IssamMeftahKadmiri,LahoucineHilali AbderraoufHilali
Auteur:ElarbiBoussaber,IssamMeftahKadmiri,LahoucineHilali
AbderraoufHilali

Catégorie:Environnement>Biologie

ScienceLibEditionsMersenne:Volume4,N°120801 ISSN2111-4706
ScienceLibEditionsMersenne:Volume4,N°120801
ISSN2111-4706

Publiéle:2012-08-27

www.sciencelib.fr

Elarbi Boussaber

Isolement des souches d’actinomycètes productrices de substances antifongiques Isolation of actinomycetes strains producing antifungal substances

Elarbi Boussaber * 1 , Issam Meftah Kadmiri 1 , Lahoucine Hilali 1 , Abderraouf Hilali 1 .

1-Université Hassan premier. Faculté des sciences et techniques. Laboratoire d’agroalimentaire et santé. BP 577. Settat (MAROC).

*Auteur correspondant : Elarbi Boussaber, Faculté des sciences et techniques. Laboratoire d’agroalimentaire et santé. BP. 577. Settat (MAROC). E-mail : Larbi_boussaber@yahoo.fr N° de téléphone : +212663697650

RESUME

Au cours des dernières années, les Champignons phytopathogènes ont été contrôlés principalement par l’utilisation des fongicides synthétiques d’origine chimique qui permettent de protéger les cultures et les récoltes contre ces organismes nuisibles. Pourtant, leur emploi inconsidéré pourrait faire courir des risques aux consommateurs et déstabiliser dangereusement les écosystèmes. Les microorganismes sont actuellement considérés comme des agents très prometteurs pour assurer une protection phytosanitaire performante. L’usage des antifongiques microbiologiques en font des alternatives viables à la lutte chimique. En effet, plus d’une centaine de bactéries, notamment les actinomycètes, ont été identifiées comme ayant un potentiel d’utilisation dans la lutte biologique. Le présent travail consiste donc à isoler des souches d’actinomycètes productrices de substances antifongiques, à partir de trois écosystèmes marocains différents. Ainsi, vingt-neuf souches d'actinomycètes ont été isolées sur trois milieux de culture choisis en fonction des données de la littérature (Olson, Bennett et GLM), à partir d'échantillons de sol prélevés de forêt, de dunes phosphatées et de décharge de poterie. L’activité antifongique des souches d’actinomycètes isolées a été mise en évidence sur milieu de culture Bennett par deux techniques de diffusion sur gélose. Parmi les 29 souches d’actinomycètes isolées, 25 (86.20 %) ont montré une activité antifongique vis-à-vis d’au moins un champignon étudié. Les extraits des trois actinomycètes représentatifs ont montré une activité inhibitrice intéressante, surtout la souche SP13’ qui s’est révélée plus efficace et présente une intense activité antifongique. Il apparaît donc nécessaire de s’orienter vers l’application de la lutte biologique contre les champignons phytopathogènes à l’aide de bactéries actinomycétales.

1

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

Mots-clés :

phytopathogènes.

Actinomycètes,

ABSTRACT

substance

antifongique,

lutte

biologique,

Elarbi Boussaber

champignons

In recent years, phytopathogenic fungi were mainly controlled by the use of chemical fungicides to protect crops against these pests. Nevertheless, the regular use of fungicides can potentially pose a risk to the environment, particularly if residues persist in the soil or migrate off-site and enter waterways, which lead to adverse impacts to the health of terrestrial and aquatic ecosystems. Microorganisms are currently considered as very promising for effective plant protection. The uses of microbial fungicides are viable alternatives to chemical control. Indeed, more than a hundred of bacteria, including actinomycetes, have been identified as having potential for use in biological control. The present work aimed to isolate strains of actinomycetes producing antifungal substances from three different Moroccan biota. Thus, twenty-nine Actinomycete strains have been isolated on three media selected among the most frequently cited in the literature (Olson, Bennett, and GLM). The strains were isolated from samples collected from forest soil, phosphate rock dunes and discharge of pottery. Antifungal activity of the strains of actinomycetes isolated has highlighted on medium Bennett by two techniques of diffusion on agar. Among the 29 strains, 25 (86.20%) have shown antifungal activity with at least a studied fungus. Three actinomycetes extracts showed interesting inhibitory activity, especially the strain SP13' which was more effective and showed intense antifungal activity. It therefore appears necessary to move towards the application of biological control fungi phytopathogenes using a bacteria.

Keywords: Actinomycetes, antifungal substance, biological control, phytopathogenic fungi.

INTRODUCTION Les champignons sont les principaux microorganismes responsables des pertes en agriculture, 83% des maladies des plantes sont dues aux champignons, 17% étant provoquées par des bactéries et des virus. La FAO estime qu’au moins 25% de la récolte mondiales des denrées agricoles est contaminée par les mycotoxines (Manfred et al., 2000).

Rhizopus stolonifer est un champignon phytopathogène responsable d’une maladie connue sous le nom de moisissure chevelue de certaines plantes (Dennis, 1975 ; Daubeny et al, 1980 ; Emond

2

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

Elarbi Boussaber

et al, 1996), en particulier la fraise, la carotte, la pomme, la prune, la pêche et la poire (Ogawa et al, 1963 ; Wilson et al, 1987 ; Snowdon, 1990).

Penicillium expansum est une espèce de champignon microscopique responsable de la pourriture des fruits (surtout pommes, poires et coings) (Roussel et al, 2007).

Fusarium culmorum est un agent phytopathgène responsable de divers symptômes tels que fonte des semis, pourriture racinaire, fusariose de l'épi, pourriture de la tige, etc. chez de nombreuses espèces de plantes mono et dicotylédones, en particulier chez les céréales (Wiese, 1977). C'est l'un des champignons responsables de la pourriture sèche du tubercule de la pomme de terre (Booth et Waterson, 1964).

Penicillium digitatum est un agent de pourriture des fruits, surtout les agrumes. Il est connu comme étant la pourriture verte des oranges et citrons (Taqarort et al, 2004).

Ces maladies ont été contrôlées principalement par l’utilisation des fongicides synthétiques d’origine chimique. Cependant, d’une part, la lutte chimique génère des impacts négatifs énormes sur l’environnement et, d’autre part, l’utilisation intempestive, inconditionnelle et irrationnelle des fongicides chimiques provoque le développement de la résistance chez les champignons phytopathogènes. Pour ces raisons, ce travail s’inscrit dans le cadre de la recherche des molécules antifongiques capables de jouer un rôle important dans la lutte biologique contre ces champignons. Ces molécules sont souvent recherchées à partir des microorganismes isolés d’échantillons prélevés de différents écosystèmes, dans le but de découvrir des taxons originaux et par-là de nouvelles molécules biologiquement actives. Les actinomycètes (bactéries dont la croissance donne lieu à des colonies constituées de filaments), sont les plus prolifiques de tous les micro-organismes en tant que producteurs de molécules à activités biologiques. Environ 75% des antibiotiques découverts entre 1971 et 1980 appartiennent aux actinomycètes (Iwai et Takahashi, 1992). Le but de ce travail est de chercher à isoler des souches d’actinomycètes productrices de substances à activité inhibitrices contre des champignons phytopathogènes à partir des échantillons de sol prélevés de trois écosystèmes de paramètres physicochimiques différents.

3

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

MATERIEL ET METHODES

Elarbi Boussaber

Prélèvement, analyse et traitement des échantillons

Les prélèvements des échantillons ont été effectués durant les mois de Novembre et Décembre à partir de trois sites différents (Forêt de Settat, décharge de poterie de Boujad et dune phosphatée d’Oued-Zem) situés dans la région Chaouia Ouardigha au centre du Maroc. Les trois échantillons de sol ont été prélevés selon la technique de Pochon Tardieux (1962) qui consiste à prélever à l’aide d’une grande spatule stérile, après avoir écarté les cinq à dix premiers centimètres de la couche superficielle du sol, 100g de terre et les déposer sur une feuille d’aluminium stérile ; puis, après avoir retiré les pierres et racines, 50g de l’échantillon trié sont placés dans un flacon stérile et transportés au laboratoire.

Les propriétés physicochimiques des trois échantillons [pH (pochon et Tardieu 1962), salinité, conductivité (Rodier, 1996) et humidité (Demeo, 1984)] sont mesurées dès l’arrivée au laboratoire.

1g de chaque échantillon de sol est séché à l’air puis mélangé avec 0.1g de CaCO3 et incubé à 28°C pendant sept jours dans une atmosphère saturée d’humidité (Cavalla et Eberlin, 1994).

Isolement, purification et conservation des actinomycètes

Une série de dilutions de 10 -1 à 10 -5 dans de l’eau physiologique (NaCl 9g.l -1 ) stérile a été préparée à partir de chaque échantillon. Après agitation au vortex pendant 10 min (Hilali et al., 2002), 0,1 ml de chaque dilution est ensemencé à la surface des boites de Pétri contenant l’un des trois milieux de cultures (Olson, Bennett et GLM) additionnés ou non d’antifongiques et d’antibiotiques (Anphotéricine B :75µg.ml -1 , Actidione 40µg.ml -1 , Acide nalidixique : 10µg.ml - 1 ) (Davet et al., 1997 ; Hilali, 2006 et Kitouni, 2007).

Après incubation à 28°C de deux à trois semaines, les colonies se rapprochant par leur aspect macroscopique aux actinomycètes ( Hilali, 2006) sont observées au microscope (Grossissement

x

100) à l'état frais. Après coloration de Gram, seules les souches à coloration de Gram positive

et

d’aspect filamenteux sont dénombrées, puis, repiquées par la méthode des stries sur les mêmes

milieux de culture utilisés pour l’isolement et purifiées sur le milieu de Bennett exempt d’antifongiques et d’antibactériens (Bastide et al, 1986). Cette dernière opération est répétée jusqu’à obtention de souches pures (Cheraiti et al, 2012) puis, conservées, d’une part, à 4 °C sur

4

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

Elarbi Boussaber

des géloses inclinées avec un repiquage tous les deux mois (Hilali et al, 2002) et, d’autre part, à -20°C en suspension en présence de glycérol à 20% (v/v) (Kitouni, 2007).

Activité antifongique des souches d’actinomycètes isolées

L’activité antifongique des actinomycètes isolés vis-à-vis des quatre champignons concernés, (R.stolonifer, P. expansum, P. digitatum et F. culmorum) qui sont des souches de la collection de l’Institut National de la Recherche Agronomique (INRA) de Settat, a été effectuée sur trois milieux (Bennett, Olson et GLM) par deux techniques de diffusion en gélose : La technique de la double couche (Shomura et al, 1979) et la technique des cylindres d’agar (Ichikawa et al, 1971 ; Lee et Hwang, 2002)

Dans les deux techniques, les boites de Pétri sont incubées à 28°C pendant 48 heures. Le diamètre des zones d’inhibition sont mesurés en millimètre du bord de la souche actinomycétale ou du cylindre d’agar à la limite de la zone où il n’y a pas inhibition du microorganisme cible (Badji et al., 2005; Boughachiche et al., 2005).

Tests de sensibilité de R. stolonifer, de P. digitaum, de P. expansum et de extraits d’actinomycètes.

F.culmorum aux

Parmi les souches actives, trois isolats (SP13’, SPO3 et SFr3’) ont été choisis, selon leur importance à inhiber la croissance des phytopathogènes pour faire les tests de sensibilité. Les souches d'actinomycète concernées ont été cultivées en trois fioles d'Erlenmeyer de 500ml contenant chacune 100ml du milieu dont la composition (sauf l'agar) est identique au milieu utilisé dans les tests d’activité. Après incubation des milieux ensemencés par les souches concernées à 28°C dans un bain d'eau agité pendant huit jours, 50ml de chaque culture sont centrifugés à 5000 tr/min pendant 20min. Les surnageants sont utilisés directement pour réaliser les tests de sensibilité (Bastide et al, 1986)

Un milieu gélosé, Potato Dextrose Agar (PDA) fraichement préparé, contenant 2%, 5%, 10% et 15% du surnageant à tester, est ensemencé une fois refroidi avec les spores de champignons dont on veut évaluer la résistance. Après 48 à 72 heures d’incubation, on note s’il y a eu lieu ou non croissance du champignon (Thibodeau et al, 2002).

5

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

RESULTATS ET DISCUSSION

Analyse physicochimique des échantillons

Elarbi Boussaber

Tableau 1: Propriétés physicochimiques des échantillons.

Lieu de

     

Conductivité

 

prélèvement

Code

pH

Salinité

µs.cm -1

Humidité

Sol de décharge de poterie

SP

8,11

0,22

465

20

Sol de forêt

SFr

7,3

0,09

200

14

Sol phosphaté

SPO

7,23

0,15

309

20

Le tableau 1 montre que l’échantillon prélevé de la décharge de poterie est caractérisé par un pH

alcalin et une conductivité élevée par rapport aux autres échantillons. D’après Lee et Hwang

(2002), le taux d’humidité de tous les échantillons est élevé (supérieur à 13), ceci est expliqué

par la période des prélèvements qui ont été réalisés durant la saison pluvieuse.

Isolement des actinomycètes à partir des échantillons de sol

Après 7 à 21 jours d’incubation à 28 °C, le dénombrement des colonies d’actinomycètes sur les

trois milieux de culture complémentés ou non en antibiotiques et antifongiques a conduit aux

résultats rassemblés dans la figure1.

a conduit aux résultats rassemblés dans la figure1 . Figure1: Evolution du nombre de colonies

Figure1: Evolution du nombre de colonies d'actinomycètes dénombrées selon le milieu de culture -ENT : échantillon non traité; ET: échantillon traité; MC.SAB: milieu de culture sans antibiotiques; MC.AB : milieu de culture avec antibiotiques-

6

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

Elarbi Boussaber

Le traitement des échantillons de sol par le CaCO 3 et l’addition des antibiotiques dans les

milieux de culture font augmenter le nombre de colonie sur tous les milieux utilisés. Quand les

échantillons ne sont pas traités et/ou le milieu de culture n’est pas complémenté en antibiotiques,

on constate que le plus grand nombre de colonies a été enregistré sur le milieu d’Olson,

cependant, lorsque les échantillons ont été, préalablement, traités et le milieu de culture a été

additionné d’antibiotiques, le plus grand nombre de colonies d’actinomycètes dénombrées a été

enregistré sur le milieu GLM. Cela revient à la composition des milieux de culture; le milieu

GLM est riche en matières organiques, ce qui favorise le développement de tous les

microorganismes. Or, en traitant les échantillons et en complémentant ces milieux en

antibiotiques, on sélectionne le développement des actinomycètes. Le milieu d’Olson est moins

riche en substances organiques et contient du Propionate de sodium qui agit comme

antifongique (Hilali, 2006), ce qui favorise la croissance des bactéries parmi lesquelles se

trouvent les actinomycètes.

Activité antifongique des souches d’actinomycètes isolées

L’activité antifongiques des souches d’actinomycètes isolée a été mise en évidence sur le

milieude culture Bennett par la technique de la double couche et la technique des cylindres

d’agar. Les résultats obteus sont rassemblés dans les tableau 2 et 3, d’oú il en ressort que 86.20%

des actinomycètes présentant une activité inhibitrice vi-à-vis d’au moins un des quatre

champignons étudiés. Les souches SP13’, SPO6 et SFr3’ qui ont été isolées successivement de la

décharge de poterie, du sol phosphté et du sol de forêt, ont montré une activité antifongique

interessance. Elles ont été choisies donc pour effectuer les tests de sensibilité des champignons

étudiés.

Tableau 2 : cliblage initiale des souches d’acctinomycètes isolées.

Lieu de

 

Nombre de souches d'actinomycètes isolées

Nombre de souches d'actinomycètes actives

prélèvement

Code

Décharge de poterie

SP

19

16

Sol phosphaté

SPO

5

5

Sol de forêt

SFr

5

4

Total

29

25

7

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

Elarbi Boussaber

Tableau 3 : Activité antimicrobienne des souches d’actinomycètes isolées

Lieu de

Isolats

Diamètres des zones d’inhibition en mm

Moyenne

prélèvement

R.stolonifer

P.expansum

F.culmorum

P.digitatum

en mm

 

SP1

10

0

8

10

7

SP2

10

1

8

14

8,25

SP3

7

1

12

15

8,75

SP4

0

0

0

10

2,5

SP6

15

0

8

17

10

SP8

12

0

3

15

7,5

SP9

10

9

0

1

5

SP1’

13

0

0

0

3,25

Sol de

SP2’

0

6

0

4

2,5

décharge de

SP3’

9

9

7

10

8,75

poterie

SP4’

3

5

0

5

3,25

SP6’

8

1

15

3

6,75

SP7’

NT

0

2

5

2,33

SP8’

0

14

NT

6

6,66

SP10’

4

10

14

4

8

SP11’

6

0

16

6

7

SP12’

0

0

0

0

0

SP13’

14

15

NT

17

15,33

SP14’

0

0

0

0

0

 

SFr1’

16

12

6

3

9,25

SFr2’

7

3

0

3

3,25

Sol de forêt

SFr3’

11

18

10

0

9,75

SFr4’

0

0

7

10

4,25

SFr5’

0

0

0

0

0

 

SPO1

7

5

3

0

3,75

SPO2

12

0

3

0

3,75

Sol

SPO3

15

13

4

 

9,75

phosphaté

7

SPO4

0

5

0

0

1,25

 

SPO6

NT

9

10

15

11,33

NT : Non testé

Ces valeurs représentent les moyennes des diamètres des zones d’inhibition obtenus par les

deux techniques utilisées pour la mise en évidence de l’activité antifongique.

8

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

Elarbi Boussaber

Tests de sensibilité de R. stolonifer, de P. digitaum, de P. expansum et de F.culmorum aux

extraits d’actinomycètes.

Le tableau 4 présente les tests de croissance des quatre champignons, après une incubation de

24 à 72 heures à 28 °C dans des milieux gélosés contenant différentes concentrations des

surnageants des souches d’actinomycètes représentatives.

Tableau 4 : Effets des extraits d’actinomycètes sur la croissance des champignons étudiés

   

R.stolonofifer

 

P.expansum

   

P.digitatum

   

F.culmorum

 

Composition du milieu de culture

2%

5%

10%

15%

2%

5%

10%

15%

2%

5%

10%

15%

2%

5%

10%

15%

PDA +

                               

Surnageant du

+

- +

- -

+ +

- +

-

- +

- +

-

-

SP13’

PDA +

                               

Surnagent du

SPO6

+

+ +

+ +

+ +

+ +

-

- +

- +

+

-

PDA +

                               

Surnagent du

+

+ +

- -

- +

- +

-

++

++

+

+

+

-

SFr3’

Témoin (PDA

 

+

   

+

   

+

   

+

 

seul)

+ : Croissance normale ; ++ : Croissance forte ; - : inhibition totale de la croissance.

L’effet des extraits d’actinomycètes sur la croissance fongique dépend de la concentration du

surnagent et du champignon testé. Tous les extraits d’actinomycètes étudiés ne sont pas

efficaces à une concentration de 2% pour inhiber la croissance des quatre champignons. Le

surnageant de l’isolat SFr3’ semblait stimuler la croissance P.digitatum alors qu’à une

concentration de 5%, 10% et 15% il inhibe la croissance successivement de P.expasum,

R.stolonifer et du F.culmorum. La croissance de ce dernier est inhibée par les trois surnageants

d’actinomycètes à une concentration de 15% de SPO6 et de SFr3’ et à une concentration de

10% de SP13’. Celui-ci apparait donc comme le plus prometteur pour lutter contre ces quatre

champignons phytopathogènes.

CONCLUSION

Cette étude a consisté à isoler

substances antifongiques à partir des échantillons de sol prélevés de différents écosystèmes

9

et sélectionner des bactéries actinomycétales productrices de

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

Elarbi Boussaber

marocains. Parmi l’ensemble des souches isolées, trois d’entre elles (SP13’, SPO6 et SFr3’) ont présenté une importante activité inhibitrice vis-à-vis de quatre champignons phytopathogènes. La souche Sp13’, qui a montré une forte activité antifongique, a été isolée d’un écosystème pollué ayant un pH alcalin et une salinité élevée par rapport aux autres écosystèmes, ce qui incite à orienter la recherche de substances bioactives à partir des bactéries actinomycétales vers l’exploitation des écosystèmes inhabituels (pollués, salins, arides etc.).

Les résultats obtenus à partir des tests de sensibilité de R. stolonifer, de P. digitaum, de P.expansum et de F.culmorum aux extraits d’actinomycètes pourraient être exploités de deux manières, la première consiste à utiliser les actinomycètes comme moyen de lutte biologique

contre les maladies végétales d’origine fongique (les surnageants des actinomycètes étudiés ont inhibé la croissance des champignons phytopathogènes), et la deuxième consiste à exploiter les autres propriétés physiologiques des actinomycètes (sécrétion d’enzymes, production d’hormones végétales, induction des mécanismes de défense chez les végétaux etc.) (Beaulieu

et Lerat, 2009) pour améliorer la croissance des plantes (le surnageant de SFr3’ a favorisé la

croissance de P. digitatum).

A la lumière de ces résultats, on peut conclure que les actinomycètes sont d'excellents candidats

producteurs de substances capables de fournir une alternative écologique fiable, efficace pour

le bio-contrôle de ces champignons phytopathogènes. Cependant pour valoriser ces résultats, il

serait intéressant de :

- Identifier les trois souches qui ont montré une large et forte activité antifongique ;

- Optimiser des paramètres culturaux afin d’améliorer la production d’antifongiques ;

- Identifier et caractériser le principe actif des souches d’actinomycètes représentatives et évaluer leurs effets au champ ou en entrepôt afin de les utiliser comme fongicides biologiques ou comme stimulateurs de la croissance des plantes.

10

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

Références bibliographiques

Elarbi Boussaber

Badji B., Riba A., Mathieu F., Lebrihi A., Sabaou N., 2005. Activité antifongique d’une souche d’Actinomadura d’origine Saharienne sur divers champignons pathogènes et toxinogènes. J.Myco.Méd., 15(4), 211-219.

Bastide A., de Méo M., Andriantsoa M., Laget M., Duménil G., 1986. Isolement et sélection de souches d'actinomycètes productrices de substances antifongiques de structure non- polyénique. Mircen J., 2, 453-466.

Beaulieu C., Lerat S., 2009. Facteurs influençant l’efficacité des actinomycètes comme outils de lutte biologique. Microbiona, Biotechnologie microbienne au service du développement. Marrakech (Maroc), 02-05 Novembre 2009, Microbiona édition, 48

Booth, C. and Waterson, J.M., 1964. Fusarium culmorum. CMI Descriptions of Pathogenic Fungi and Bacteria. Commonwealth Agricultural Bureaux. 26,2

Boughachiche F, Reghioua S, Oulmi L, Zerizer H, Kitouni M, Boudemagh A, Boulahrouf A., 2005. Isolement d’actinomycétales productrices de substances antimicrobiennes à partir de la sebkha de Ain Mlila, Sci. Technol. 23, 5-10.

Cavalla M., Eberlin T., 1994. Isolement des streptomycètes du sol. L'opéron, 19, 13-17.

Cheraiti N., Gacemi Kirane D. 2012. Isolement des souches d’actinomycètes productrices de nouvelles molécules antifongiques,,Rev. Microbiol. Ind. San et Environn. 6(1), 18-34.

Daubeny H.A., Pepin H.S., Barritt M., 1980. Post-harvest Rhizopus fruit rot resistance in red raspberry. Hortic. sci. 15, 35-37.

Davet P., Rouxel F., 1997. Détection et isolement des champignons du sol.Techniques et pratiques, INRA éditions, 203.

Demeo M.P., 1984. Sélection de microorganismes pigmentés, production d'un dérivé de l'actinorrhodine par une souche de Streptomyces coelicolor. Thèse de troisième cycle. Spécialité microbiologie : Université Marseille (France).

Dennis C., 1975. Effect of pre-harvest fungicides on the spoilage of soft fruit after harvest. An. Appl. Biol., 81, 227-234.

Emond G et al., 1996. Noms des maladies des plantes au Canada. Comité de nomenclature française des maladies des plantes. 3 e édition corrigée. SPPQ (éditeur), 456.

Hilali L., 2006. Isolement et sélection de souches d'actinomycètes productrices de substances antifongiques de structure non-polyénique. Production, extraction, purification de métabolite active et étude taxonomique. Thèse de doctorat: Université Hassa II- Faculté des sciences (Maroc).

Hilali H., Khattabi A., Nssarlah N., Malki A., Finance C.,2002. Isolement de nouvelles souches d’actinomycètes productrices de substances antifongiques à partir du milieu naturel marocain. Biol. Biotechnol, 2(1), 49-53.

11

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

Elarbi Boussaber

Ichikawa Y., Date M., Ishikura T., Ozoka A.,1971. Improvement of Kasugamycin-producing strain by the agar piece method and the prototroph method. Folia Microb., 16, 218-224.

Iwai Y., Takahashi Y., 1992. Selection of microbial sources of bioactive compounds in «The search for bioactive compounds from microorganisms», Spring-Verlag, New York, (Ed.),

281-302.

Kitouni M., 2007. Isolement de bactéries actinomycétales productrices d'antibiotiques à partir d'écosystèmes extrêmes, identification moléculaire des souches actives et caractérisation préliminaire des substances élaborées. Thèse de doctorat: Université Mentouri-Constantine. Faculté des sciences de la nature et de la vie (Alger).

Lee J.Y., Hwang B.K., 2002. Diversity of antifungal actinomycete in various vegetative soils of Korea. Can. J. Microbiol. 48, 407-417.

Manfred M. Nicole M., 2000. Précis des risques alimentaires. Tech. et Doc. Edition, Londres- Paris-New-York, 442. Ogawa J.M., Sandeno J.L., 1963. Comparisons in development and chemical control of decay-causing organisms on chemical hand-harvested stone fruits. Plant. Dis. Report., 47,

129-133.

Pochon J., Tardieux P., 1962. Techniques d'analyse en microbiologie du sol. Edition de la tourelle. St. Mandé, 110-111.

Rodier J. 1984. L'analyse de l'eau : eaux naturelles, eaux résiduaires, eaux de mer. 7ème édition, Dunod, Paris.

Roussel M., Lemarchand M., Benard M., Dreyfus J., 2007. La Patuline . Service régional de la protection des végétaux de Haute-Normandie. Ministère de l’agriculture et de la pêche. (France), 1.

Shomura T., Yoshida J., Amano S., Kojima, M., Niida T., 1979. Studies on Actinomycetales producing antibiotics only in agar culture.1.Screening, taxonomy and morphology- productivity relationship of Streptomyces halstedii, Strain SF-1993. J .antibiot. 32, 427-435.

Snowdon, Anal L., 1990.A color Atlas of post-harvest diseases & disorders of fruits & vegetables. Volume 1: General introduction & fruits. University of Cambridge. Wolfe Scientific Publications. CRC Press. Inc. Florida, 301.

Thibodeau P.O., Twagirayesa P., Charrier F., 2002. Evaluation de 15 fongicides contre la moisissure chevelue (Rhizopus stolonifer et Mucor sp.) de la fraise et de la framboise. Agrosol, 13(1), 75-80.

Taqarort L., Bouzerda E.H., Boubaker H., Akhayat O., Ait Benaoumar A., 2004. Sélection de levures antagonistes au Penicillium digitatum agent de la pourriture des fruits d’agrumes en post-récolte. Biotechnologies, 561-564. Wiese M.V., 1977. Compendium of wheat diseases. APS Press, Minnesota, USA, 52-53.

Wilson C.L., Franklin J.D., 1987. Biological control of Rhizopus rot of peach with Enterobacter cloacae. Phytopathology, 77, 303-305.

12

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

13

ScienceLib Editions Mersenne : Volume 4 , N ° 120801 ISSN 2111-4706

Elarbi Boussaber