UNIVERSIDAD DE CRDOBA FACULTAD DE INGENIERAS INGENIERA DE ALIMENTOS BIOQUIMICA LABORATORIO N 1

TITULACIN POTENCIOMTRICA DE AMINOCIDOS

Amada Abad 1., Amarilis Acosta 1., Bernardo Argumedo 1., Maura Castao1., Luis F. Logreira 1

RESUMEN Con esta prctica de laboratorio se determin el punto isoelctrico de varios aminocidos, para ello fue necesario medir el pH inicial del aminocido estudiado. Despus de esto se hizo la titulacin con HCl , a medida que se iba titulando se media el pH de la solucin y se registraban los datos. Este procedimiento se realiza igualmente con los dems aminocidos y se procede tambin a hacer la titulacin utilizando NaOH. Palabras claves: Titulacin, Aminocido, pH, Punto Isoelctrico.

ABSTRACT With this lab it was determined the isoelectric point of several amino acids, for this it was necessary measuring the initial pH of the studied amino acid. After all this it was made a titration with HCl, as would be half titrating the pH of the solution and recording the data. This procedure is made similarly with the another amino acids and the titration is made with NaOH. Word keys: Titration, Amino acid, pH, isoelectric point.

Estudiantes de Ingeniera de Alimentos, IV Semestre, Universidad de Crdoba, Facultad de Ingenieras, Programa de Ingeniera de Alimentos, Berasategui- Crdoba 2013

INTRODUCCIN Las protenas son macromolculas compuestas por unidades ms pequeas conocidas como aminocidos. En las protenas se encuentra bsicamente veinte aminocidos diferentes, los cuales contienen un grupo carboxilo y un grupo amino unidos al mismo tomo de carbono (carbono ) estos aminocidos difieren unos de otros solo por la naturaleza de sus cadenas laterales, o grupos R que varan tanto en estructura, como en tamao y carga elctrica e influyen en la solubilidad en agua.

Cada aminocido tiene sus propio pK, puesto que presenta diferentes sustituyentes en sus cadenas laterales. Mediante una titulacin, se puede determinar el pK de un aminocido. (1) Titulacin: Es la adicin de sucesivas cantidades de una base o de un cido fuertes, a una solucin de cido o de base a titular, con la medicin simultnea de su pH, hasta el punto de equivalencia en el cual los equivalentes de cido y de base se igualan.(2) La curva de titulacin ser bifsica. Habr dos porciones separada o inflexiones en la curva de titulacin. El punto medio de la primera inflexin (B) es donde el aminocido est mitad en forma cida y mitad en forma zwitterion. EL punto de inflexin C ocurre cuando todo el aminocido original ya est en forma de zwitterion. El pH al cual esto ocurre se denomina el pH isoelctrico (punto isolelctrico) y se le da el smbolo pI (asumiendo que el grupo R no tiene carga). En la titulacin de pH de un aminocido con un grupo no ionizable R, el punto de equivalencia ocurre en el pI del aminocido. En el punto medio de la segunda inflexin (D), la mitad del aminocido est en forma de zwitterion y la otra mitad est en forma bsica. (3) las curvas proporcionan informacin de la titulacin siguiente

Los grupos carboxilo y amino de los aminocidos funcionan como cidos y bases dbiles, respectivamente, y como tales, se ionizan cuando estn en solucin. Los aminocidos tienen al menos dos pK, por lo que tienen mayor capacidad amortiguadora, ya que presentan de tres a cuatro formas inicas diferentes. Cuando la forma inica tiene una carga neta de cero se dice que se encuentra en su punto isoelctrico o pI. Al variar de pH, cambia la proporcin de la formas inicas y es posible ver la capacidad amortiguadora de los aminocidos.

 Medida del pK de los grupos ionizables: se localizan en el punto medio de la zona tampn. Regiones de capacidad tampn: mesetas donde se localizan los pKs; dichas regiones se encuentran en el intervalo pK 1 unidad de pH.

Interpretar correctamente la curva de titulacin de la Lisina.

PROCEDIMIENTO Con el potencimetro se mide el pH inicial del aminocido estudiado, se procede a hacer las debidas titulaciones con HCl para cada aminocido, a medida que se titula se mide el pH a la solucin, seguir titulando hasta llegar a agotar 10 ml de HCl por ltimo se reportan los datos obtenidos y se desecha el titulado. Repetir este procedimiento utilizando ahora como agente titulador el NaOH. Los aminocidos a utilizar son alanina, arginina, acido asprtico y glicina. En el caso de nuestro grupo se tomo el aminocido Lisina.

pI: se localiza en el intervalo de viraje.

Formas ionizables del aminocido en cada rango de pH.

Carga elctrica del aminocido en cada rango del pH

Solubilidad relativa del aminocido en cada rango de pH. (4)

OBJETIVOS Construir con datos experimentales la curva de titulacin del aminocido Lisina. RESULTADOS Y DISCUSIONES Lisina Titulacin con HCl pH inicial= 6.48 Volumen pH (ml) 2 3.35 4 2.78 6 2.72

Establecer grficamente punto isoelctrico de la lisina.

el

Titulacin con NaOH pH inicial= 5.74 Volumen pH (ml) 2 7.78 4 8.80 6 8.20

8 10

8.42 8.57

8 10

2.49 2.40

Tabla # 1 resultado de la Lisina

Alanina Titulacin con HCl pH inicial= 6.23 Volumen pH 2 4 6 8 10 3.40 3.15 3.00 2.86 2.71

Titulacin con NaOH pH inicial= 6.23 Volumen pH (ml) 2 8.00 4 8.40 6 8.65 8 8.86 10 9.00

Volumen (ml) 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
Tabla # asprtico

pH 3.23 3.42 3.55 3.71 3.83 4.07 4.20 4.42 4.80 5.45
4

Volumen pH 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
resultados

2.77 2.65 2.51 2.31 2.10

del

A.

Arginina Titulacin con Hcl pH inicial=10.16 Volumen PH 2 4 6 8 10 9.85 9.68 9.40 9.28 9.20

Tabla # 2 resultados de la Alanina

Glicina Titulacin con HCl pH inicial= 6.48 Volumen pH (ml) 2 3.42 4 3.18 6 3.08 8 2.93 10 2.89

Titulacin con NaOH pH inicial= 6.48 Volumen pH (ml) 2 8.12 4 8.41 6 8.54 8 8.74 10 8.95

Titulacion con NaOH pH inicial= 10.16 Volumen PH (ml) 2 10.47 4 11.46 6 11.66 8 11.83 10 11.99

Tabla # 5 resultados de la Arginina

Tabla # 3 resultado de la Glicina

PARA LA ALANINA

Acido aspartico. Titulacin con HCl pH inicial= 3.00

El aminocido valorado se comenz con un pH diferente a 0 en este caso la alanina se titulo con pHi= 6.23 al valorar con NaOH, y de igual forma con el HCL. Hablando del punto isoelctrico, como sabemos este se define como el pH en el cual el nmero de cargas positivas se iguala al nmero de

Titulacin con NaOH pH inicial= 3.00

cargas negativas que aportan los grupos ionizables de una molcula. En el punto isoelctrico la carga neta de la molcula es cero (0), para el caso de la alanina que solo tiene solo dos grupos de disociacin tenemos: (CN= Carga neta.) El primer pk1(R-COOH) es 3.15 y el segundo pk2(R-NH3+) es 8.40. As que el punto isoelctrico (pI) de la alanina es:

como un cido diprtico, ya que tanto el grupo amino como el carboxilo se encuentran protonados, es decir, a pH = 1, el 100% de las molculas de aminocido se encuentran en forma de catin Al ser ste un amino cido neutro, posee un grupo amino y un grupo carboxilo es el aminocido mas sencillo, es decir su grupo R es un hidrogeno. El punto isoelctrico estipulado para este aminocido (Glicina) debe ser 5,97. Y el obtenido experimentalmente fue : 5.77.

PARA EL ASPARTICO

ACIDO

El ph inicial de la solucin de acido aspartico antes de valorar con HCL 0,1M y el NaOH fue de 3.0 ml, en el acido aspartico el valor del punto isoelctrico se tomo del ph medio entre los valores de pk, este pI esta dado de la siguiente manera:

PARA LA GLICINA

A pH cido la Gly se encuentra

Para este aminocido, al igual q los otros, se comenz con un pH diferente a 0 en este caso la lisina, su PH inicial fue: pHi= 5.74 al valorar con NaOH y HCL. El punto isoelctrico de la Lisina es de 9.74 pero en este caso el punto isoelctrico que obtuvimos experimentalmente no fue el mismo que se marca tericamente. Esto pudo ocurrir por el error que se tuvo al momento de hacer las respectivas mediciones, puesto que, no tomamos unos datos completos con respecto al Ph.

PARA LA ARGININA

Para la valoracin de la solucin del aminocido con HCl arginina el phi= 10.16, as mismo se tomo un igual para la titulacin con NaOH

ANLISIS DE RESULTADO: La representacin grfica de la variacin del pH de una solucin por la adicin de equivalentes de cido o de base se denomina curva de titulacin. En el caso de los aminocidos, las curvas de titulacin proporcionan la siguiente informacin Para este caso de la arginina que es un aminocido con cadena lateral bsica. -Medida del pK de los grupos ionizables: se localizan en el punto medio de la zona tampn. - Formas ionizables del aminocido en cada rango de pH. - Carga elctrica del aminocido en cada rango del pH

PARA LA LISINA

INVESTIGACIN

A) Registrar en una tabla resultados obtenidos:

los

Tabla # 7 pI Gly-A-Glu-His-Tyr-LysAsp

Aminocidos (ESTAN CONTENIDOS EN LOS RESULTADOS Tabla # 1, 2, 4 y 5). Glicina 6,05 Alanina Glutamico 3,25 Histidina 3,9 Treonina Lisina Asprtico 2,75

pK1

pK1 2,4

pI 9,7 6,1 4,3 6,0 6,5 5,7 3,6

2,3 2,2 1,8 2,6 2,2

9,9

10,4 9,2 1,9

D) Determinar el pI de siguientes aminocidos: B) Determinar el pI del aminocido.

Tabla # 6 Pl de los amioacidos estudiados en laboratorio Tabla # 8 pi de v, trp, met

los

Aminocidos pI Valina 5,96 Triptfano 5,89 Metionina 5,7

pK 1 2,32 2,83 2,28

pK1 9,62 9,39 9,21

Aminocidos pI Alanina 5.77 Glisina 5.70 Aspartico 3.00 Arginina 10.16 Lisina 5.66

pK1 3.15 3.42 2.77 9.85 3.35

pK2 8.40 8.12 3.23 10.47 7.78

Conclusin
Esta prctica, aunque su desarrollo fue sencillo, nos deja conocimientos amplios, sobre todo las curvas de titulacin, que son herramientas muy poderosas, ya que a travs de stas pudimos determinar, por ejemplo, el pKa, el pKb, y por medio de stos, el punto isoelctrico de un aminocido, en

C) Determinar el pI de los aminocidos Gly- A-Glu-His-TyrLys-Asp:

este caso la Lisina, aunque no nos hayan dado los resultados esperados.

(2) http://uninga.net/verpost/Apunt es/3847/Titulaci--n--Bioqu-mica--Medicina.html (3) http://agu.inter.edu/halices/TIT ULACION_AMINOACIDOS.pdf

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS (1) http://docencia.izt.uam.mx/sgp e/files/users/uami/jaislocr/BIOQ UIMICA_I/PRACTICA_3.pdf

(4) http://212.128.130.23/eduCom mons/cienciasbiosanitarias/bioquimica-phequilibrios-acido-2013base/contenidos/4.%20Curvas %20de%20titulacion%20de %20aminoacidos.pdf