Alumna: Ana Cecilia Cruz Jarata

III Semestre ENSAYO DE BIURET

Qumica Orgnica I

Alumna: Ana Cecilia Cruz Jarata

III Semestre ENSAYO DE SUDAN

Qumica Orgnica I

Alumna: Ana Cecilia Cruz Jarata

III Semestre ENSAYO DE DRAGENDORFF

Qumica Orgnica I

Alumna: Ana Cecilia Cruz Jarata

III Semestre ENSAYO DE LIBERMAN

Qumica Orgnica I

1. FUNDAMENTO Para determinar el colesterol total el mtodo utilizado comprende: 1. tratamiento del extracto lipdico con hidrxido de potasio para liberar el colesterol de los complejos lipoproteicos y saponificar los steres de colesterol. 2. extraccin del colesterol en un volumen medido de ter de petrleo despus de la dilucin de la solucin alcohlica con agua. 3. medida del colesterol en una alcuota de la fase etrea por medio de la reaccin de color de Liebermann-Burchard. La reaccin Lieberman-Burchard (L-B) se realiza en general en un medio cido fuerte constituido por cido sulfrico, cido actico y anhdrido actico. En la reaccin, el colesterol sufre una oxidacin gradual, formndose en cada etapa una molcula de colestapolieno que posee un doble enlace adicional con respecto al compuesto del cual deriva. La etapa inicial de la reaccin L-B consiste en la protonacin del grupo OH del colesterol, con la consiguiente prdida de agua obtenindose el in carbonio 3,5-colestadieno que constituye el primer paso de la reaccin de color. La oxidacin secuencial de este in carbonio allico por el SO 2- produce un cido colesta-hexano-sulfnico cromforo con mximos de absorbancia a 620 nm. 2. REACTIVOS Alcohol absoluto Eter de petrleo cido actico cido sulfrico Anhidrido actico Hidrxido de potasio (solucin al 33 %) - Solucin alcohlica de hidrxido de potasio. Se prepar recin antes de usar, se aadi 6 mL de KOH al 33% a 94 mL de alcohol absoluto. Solucin estndar de colesterol. 0.4 mg por mL, se disolvi en alcohol absoluto. Reactivo de Liebermann - Burchard modificado. 20 volmenes de anhidrido actico se enfriaron a una temperatura menor de 10 C en un frasco de vidrio tapado, se aadi 1 volumen de cido sulfrico concentrado, se mezcl bien y se mantuvo en fro durante 9 minutos. Se aadieron 10 volmenes de cido actico glacial y la mezcla se llev a temperatura ambiente. El reactivo se utiliz despus de una hora de su preparacin. 3. MATERIALES

Tubos de prueba de 15 x 150 mm con tapa Tubos de prueba de 10 x 100 mm Pipetas de 5 mL LMicropipeta de 50 Pipetas Pasteur Bao Mara a 60 C

Alumna: Ana Cecilia Cruz Jarata

III Semestre

Qumica Orgnica I

Centrfuga (International Centrifuque, model V) Espectrofotmetro (Coleman mod 6/20 Junior II)

4. PROCEDIMIENTO
Se tom 1 ml de la solucin extractiva en un tubo de prueba de 15 x 150 mm y se evapor el solvente a 40 C, luego se enfro. Se aadi 2.5 mL de KOH alcohlico. Se tom 2.5 mL del estndar y se adicion 0.15 mL de KOH al 33 %. Tapando y agitando bien todos los tubos, se llev a bao Mara a 37 40 C por 55 minutos. Despus de enfriar, se adicion 5 mL de ter de petrleo, mezclando bien, luego se adicion 2.5 mL de agua destilada; los tubos fueron agitados vigorosamente por 1 minuto. Se centrifugaron a baja velocidad por 5 minutos. Aparecen dos capas. La capa etrea de las muestras se transfiri a los tubos de prueba de 10 x 100 mm. Para el estndar se tom por duplicado 1 mL de la capa etrea; se evapor el solvente a bao Mara a 60 C, con suave corriente de aire. Despus de enfriar, se adicion 3 mL del reactivo Liebermann - Burchard luego se enfro. Se trabaj con un blanco. La absorbancia de cada muestra fue leda a 620 nm, 30 35 minutos despus de que el reactivo fue adicionado; las muestras no estuvieron sujetas a intensa luminosidad durante el desarrollo del color.

5. CLCULOS

Donde: COL (mg/g) = concentracin de colesterol total en miligramos por gramo de tejido hmedo A mp = Absorbancia de la muestra A St = Absorbancia del estndar mg St = cantidad del estndar en mg M = masa de la muestra en gramos 12 = factor de dilucin