COMPARTIMENTOS INTRACELULARES Y SORTING DE PROTENAS. Sorting de protenas: Envo direccionado de protenas que corresponden.

Destinacin de protenas, como van y como llegan. Compartimentos intracelulares: Todas las estructuras dentro de la clula.

Volmenes relativos estructuras intracelulares (en hepatocito): Citosol (54%) Mitocondria (22%) RER (9%) Vesculas de REL y de Golgi (6%) Ncleo (6%) Peroxisomas, lisosomas, endosomas (1% cada uno)
TIPO DE MEMBRANA PORCENTAJE DE LA MEMBRANA CELULAR TOTAL Hepatocito Membrana plasmtica Membrana del RER Membrana del REL Membrana interna de mitocondria 2 35 16 32 Clula pancretica 5 60 <1 17

Por lo tanto: Los componentes y las concentraciones entre clulas son distintos, dependiendo de la funcin de cada clula. Hepatocito encargado de detoxificacin y sntesis de lpidos, entre otros -> REL desarrollado. Clula pancretica exocrina -> Enva insulina al torrente sanguneo, por lo tanto RER, encargado de la sntesis de protenas (en este caso insulina), est ms desarrollado.

Vas de transporte intracelular: Citosol mitocondrias Citosol retculo endoplasmico Citosol plastos Citosol peroxisomas Reticulo endoplasmico golgi (y viceversa) Golgi Endosoma tardo ( y viceversa ) Golgi vesculas de secrecin Golgi Superficie extracelular Superficie extracelular endosoma temprano Endosoma temprano endosoma tardo

Transporte transmembrana (atraviesan la membrana) participan protenas translocadoras)

Transporte vesicular (transporte a travs de vesculas)

Varias protenas son sintetizadas en el citosol y otras no, protenas que tienen que salir de la clula o que van a la membrana celular, van a ser transportadas a travs de vesculas (neurotransmisores, citoquinas, etc.) tienen que ser exportadas, y ese transporte ocurre desde el golgi en vesculas, son las protenas sintetizadas por el retculo las protenas que van a ser exportadas por vesculas.

RER (sntesis) -> va a golgi, quien procesa las protenas y de este salen las vesculas secretoras cuyos contenidos van a lisosomas a ser secretados o a la membrana. Citosol ncleo -> Transporte regulado (Gated transport) no es pasivo, tiene que atravesar poros nucleares entre ncleo y citoplasma. Entrada tambin con una secuencia seal de por medio. Dentro del retculo endoplsmico rugoso van a ocurrir el proceso de ensamblaje de protenas tambin con chaperonas y de aqu van a ser transportadas a travs de vesculas a complejo golgi separado en distintas zonas (cys al trans) es aqu ocurrirn un montn de modificaciones, tambin se van a ir concentrando las protenas y van a salir vesculas que irn cargadas con protenas que son necesario secretar. Dos mecanismos de salida: o Regulada por seales: Protenas que pueden salir por una va secretora regulada que por un estimulo o seal se van a pegar esta vescula a la membrana y se va a liberar el contenido. La vescula va a llegar y va a liberar su contenido solo por un ESTIMULO, si no hay estimulo se van a quedar almacenadas. Exceso de protenas producidas por retculo endoplsmico rugoso es regulado por feed back negativo. o Constitutiva que tiene que ver con el recambio normal de protenas entre la membrana plasmtica y el medio intracelular, que son secretadas constitutivamente. (Ancladas en la membrana y las que funcionan fuera de la membrana incluyendo protenas de matriz). *Tercer destino que pueden ser son los lisosomas, estas vesculas van llegar a la membrana. NO NECESITA ESTIMULO. Hay protenas solubles y otras ancladas (de membrana) Para esto siempre habr un compartimento que ser el donante y otro el blanco, las vesculas contienen adems de los componentes solubles (pelotitas rosadas), protenas de membrana (palos negros). Despus se fusiona con la membrana del blanco o compartimento diana (membrana plasmtica de golgi o lisosoma) y se libera el contenido de la vescula. Las protenas de membrana mantienen su orientacin (en este caso hacia afuera). Son las seales de sorting (o secuencia seal) las encargadas de determinar la transferencia, orientacin de estas protenas de membrana. stas son reconocidas por receptores de sorting. Estas secuencias seales tienen diversas funciones: de importacin o exportacin al ncleo a la mitocondria, importacin a plastidios a peroxisomas, al retculo endoplsmico o de residencia en el.

Dos tipos de seales para retculo, una de importacin una protena que se est sintetizando sea incorporado al retculo y otras que se mantengan en el retculo una secuencia de retorno al retculo, retencin al retculo.

SINTESIS DE PROTENAS El mensajero que est en citosol cmo va ser incorporado al retculo?, tenemos el ribosoma, el mensajero 5 3 se comienza a traducir, a sintetizar la protena y cuando empieza, aparece la secuencia seal de importacin al retculo, por lo tanto esta protena es importante para el retculo, entonces que sucede, esa secuencia es reconocida por un receptor de una secuencia seal de retculo y eso hace que se ancle con ribosoma y todo a la membrana del retculo, por eso el ribosoma est pegado en la membrana, estn en activa reaccin. Este es el mecanismo cotraduccional (A), a medida que se va traduciendo se va translocando, anclando. La traduccin ocurre incorporando la protena hacia dentro. Es ms frecuente. En algunas ocasiones, muy pocas veces, la protena puede ser sintetizada y esa protena que tiene secuencia seal de importacin al retculo, si no fue anclada antes, al tener la secuencia seal presente despus de haber sido traducida se va anclar a la membrana del retculo. (B) Posttraduccional.

Tenemos translocador, la secuencia seal fue reconocida, comienza la sntesis, se incorpora la protena y esta secuencia seal es cortada por una peptidasa de seal y esa secuencia seal es degradada, y en este caso es una protena soluble no tena zona hidrofbica para que quedara anclada y es madurada dentro del retculo, el RNAm es traducido simultneamente por varios ribosomas. - Celeste el translocador, complejo que ayuda al paso de la protena al interior del retculo anclndose al ribosoma -Amarillo peptidasa de seal: Reconoce seal y corta la protena. -Verde pptido seal -Rojo secuencia seal, incorpora protena dando paso de esta al retculo.

Qu me permite que llegue la secuencia seal al retculo? Es una partcula compuesta por protenas y RNA, se llama SRP, en la parte derecha (celeste) tiene una zona de reconocimiento de la secuencia seal, es una regin hidrofbica, un bolsillo hidrofbico que reconoce a la secuencia seal hidrofbica, en el costado izquierdo tenemos RNA, lo que le permite que reconozca la secuencia seal y adems hibride, se pegue al ribosoma por

complementariedad de bases ya que el ribosoma est constituido entre otras cosas por RNA ribosomal, que va a pasar entonces...

Tenemos el ribosoma, el pptido reciente, la secuencia seal que va a ser reconocida por el bolsillo hidrofbico y eso va a permitir que el resto se agarre, se pegue al ribosoma cuando se pega al ribosoma detiene momentneamente la sntesis de protenas para que este ribosoma pueda ser anclado al retculo antes que contine la traduccin. Posteriormente el SRP es reconocido por un receptor que est en la membrana del retculo y va a hacer que se inserte el ribosoma en el translocador y ah ancla el ribosoma y puede continuar el proceso de importacin de la protena y la traduccin del mensajero.

Tambin es posible que se unan polirribosomas, el importante es el primero ya que los siguientes ribosomas que se anclen, el RNAm ya va estar pegado por estos ribosomas en la membrana del RE. La energa que se utiliza para este proceso es la impulsada de la misma sntesis y las chaperonas que se encuentran en el retculo.

Imagen para explicar que el proceso de reconocimiento la incorporacin de este pptido al translocador requiere de energa requiere la hidrolisis de GTP. Unidos a GDP o GTP cambian su conformacin y esa energa permite que el proceso ocurra.

Inmediatamente que es reconocido el ribosoma con el pptido saliente al translocador el SRP se sale, el SRP es necesario para detener la traduccin y para unirse de forma especfica al translocador. Las chaperonas que nos van a ayudar en el proceso para incorporacin de la protena y para el plegamiento de estas, inmediatamente despus de que va entrando la protena llega una chaperona para empezar el plegamiento de la protena, y tambin para impulsar el proceso.

El complejo translocador de eucariontes, es el sec61 que permite la unin y paso de la protena (Cotraduccional (A)). Post traduccional (B) y (C) en eucariontes y bacterias con distintos procesos para cada uno En eucariontes: sec 61 permite la entrada, acompaado del complejo mayor sec 62 (o 63, 71,72). Chaperonas (BIP) incorporan la protena utilizando ATP, se van uniendo y tirando la protena para incorporarla, cada vez que se tira se utiliza un ATP. **LA PROTEINA VA A INGRESAR A RE SI HAY ATP, CHAPERONAS, COMPLEJO (TRANSLOCADOR, ETC). TRANSLOCACIN DE PROTENAS SOLUBLES.

Las ms simples, translocador inactivo se abre al unirse a la secuencia seal (seal de inicio de translocacin), se incorpora la protena se corta la secuencia seal y se libera la protena en el RE.

PROTENAS INTEGRALES DE MEMBRANA (INSOLUBLES) TODAS PARTEN EN EL RETCULO Protena tipo I con corte de secuencia seal 1 paso transmembrana, secuencia seal amino va a ser incorporada y cuando llegue una secuencia de detencin de transferencia esa secuencia hidrofbica va llegar a esta zona y va a parar la transferencia el ribosoma ya no va poder seguir incorporando porque est en una secuencia hidrofbica entonces se va a detener y el ribosoma va a seguir traduciendo pero afuera ya no estar anclado en el translocador de la membrana del RE generando una protena de 1 paso transmembrana con su extremo amino NH2 dentro y su extremo carboxilo COOH afuera.

Inmediatamente cuando va naciendo la protena se van uniendo carbohidratos modificando la protena teniendo funciones importantes para el proceso de ensamblaje de protenas, plegamientos y tambin para que no salgan del retculo protenas que no han sido ensambladas (GLICOSILACIN (desarrollada ms adelante)). Protenas tipo II (con secuencia seal interna)

1 Paso transmembrana donde el amino tiene que quedar hacia el citosol y el carboxilo hacia el interior del retculo, en el amino no existe la secuencia seal, sino que hay una secuencia seal interna y en ese caso empieza la sntesis de protena y recin cuando sale la secuencia seal va a ser reconocida por el SRP se va a detener la sntesis, se va unir al receptor del SRP luego al translocador y ah va a seguir la sntesis y cuando termine, el carboxilo va a estar hacia dentro.
TRANSLOCACIN DE UNA PROTENA CON DOBLE PASO TRANSMEMBRANA (SECUENCIA SEAL INTERNA)

Va a tener una secuencia seal interna pasado del amino eso va hacer que se incorpore y despus va a seguir sintetizando y llegara una segunda secuencia que va a detener la transferencia y el ribosoma se va a soltar y va terminar la sntesis hacia afuera y quedarn los extremos tanto amino como carboxilo hacia el citosol.

TRASLOCACIN PROTENAS CON MULTIPLES PASOS TRANSMEMBRANA

La diferencia con lo anterior es que una vez que se ha reconocido la secuencia seal de STOP el SRP volver a unirse a una nueva seal de inicio anclando nuevamente al ribosoma para que contine la traduccin del mRNA y luego a una nueva seal de stop desanclndose el ribosoma y continuando en el citosol con la traduccin y as sucesivamente. GLICOSILACIN EN N- TERMINAL Incorporacin de azucares cuando la protena va ser incorporada al RE. Son residuos de asparagina que se anclan en el amino, este core de carbohidratos compuestos por glucosa, manosas y N-acetylglucosamina, sirve principalmente para el plegamiento.

Obviamente son sintetizados estos core de polisacridos unidos a fosfolpidos de la membrana y en el minuto en que la protena empieza aparecer en el RE en cuanto aparece la asparagina el core (grupo de carbohidratos) es transferida a la protena por medio de una oligosacaridotransferasa, las protenas donde este la asparagina van a estar glicosiladas.

Oligosacaridos unidos a los fosfolipidos por medio de dos fosfatos. La sntesis del core de carbohidratos ocurre en la cara cistoslica del RE. Las 3 ltimas glucosas sern importantes ya que van a permitir que sea reconocido o que se vaya modificando, sacando o colocando estas glucosa nuevamente para ser reconocido por un grupo de protenas las calnexinas cuando pierden dos glucosas y solamente nos queda una glucosa va a ser sitio de unin para una calnexina, esta calnexina es una chaperona que est unida a la membrana del retculo, adems es una lectina, protenas que reconocen carbohidratos, que tienen funcin de chaperonas y como estn ancladas a la membrana del retculo retiene a la protena en el retculo, esta protena va a estar en el retculo esperando a que se pliegue correctamente y aqu se produce un juego entre la glicosil transferasa y las glicosidasas, las glicosidasas van a sacar estas glucosas soltando entonces, permitiendo que la calnexina ya no reconozca a esta protena con su oligosacarido y esto puede tener dos consecuencias, primero si la protena est bien plegada, la protena va a salir del retculo, si no est plegado correctamente va a ser reconocida por una glicosil transferasa, y esta va a volver a colocarle glucosa y de esa forma va a ser nuevamente retenida por la calnexina y permitiendo que se siga plegando en el retculo , las protenas que no estn ensambladas correctamente no saldrn del retculo hasta que estn plegadas en forma normal y ya no van a ser reconocidas por la glicosil transferasa. Proceso que durar hasta que la protena se pliegue correctamente. Cuando protena sese pleg incorrectamente y ya no sese puede desarmar para volver a plegarse Cuando protena pleg incorrectamente y ya no puede desarmar para volver a plegarse correctamente, esta protena vava a ser sacada del retculo hacia el el citosol donde vava a ser degradada va correctamente, esta protena a ser sacada del retculo hacia citosol donde a ser degradada va proteosoma, ser marcada, ubiquitizada y ser degradada por proteosoma. proteosoma, ser marcada, ubiquitizada y ser degradada por proteosoma. Protena que quedo mal ensamblada vava a ser retrotranslocada hacia el el citosol y degradada por Protena que quedo mal ensamblada a ser retrotranslocada hacia citosol y degradada por proteosoma. proteosoma. Estrs de retculo debido a aumento de protenas mal ensambladas la la clula sealiza si si esto aumenta Estrs de retculo debido a aumento de protenas mal ensambladas clula sealiza esto aumenta van a hacer reconocidos por receptores que estn dentro del retculo, existen al al menos tres tipos , , van a hacer reconocidos por receptores que estn dentro del retculo, existen menos tres tipos transmembrana que tienen actividad kinasas, sese vava a dimerizar sese vava a fosforilar y eso adems vava aa transmembrana que tienen actividad kinasas, a dimerizar a fosforilar y eso adems activar un dominio ribonucleasa de corte que vava a producir que algunos pre-mensajeros que estn en activar un dominio ribonucleasa de corte que a producir que algunos premensajeros que estn en el el citosol citosol sufran sufran splicing splicing salida salida de de intrones, intrones, con con eso eso se se madura madura el el mensajero mensajero y y se se provoca provoca la la sntesis sntesis de de protenas que tienen que ver con la la regulacin gnica. Estas protenas van a ir al al ncleo y van a cambiar protenas que tienen que ver con regulacin gnica. Estas protenas van a ir ncleo y van a cambiar la la expresin de genes, van a aumentar la expresin de chaperonas, ya que el retculo se da cuenta de expresin de genes, van a aumentar la expresin de chaperonas, ya que el retculo se da cuenta de que las protenas se estn plegando mal por lo que se deben traducir mas protenas chaperonas para que las protenas se estn plegando mal por lo que se deben traducir mas protenas chaperonas para mejorar y disminuir el el mal plegamiento de las protenas. mejorar y disminuir mal plegamiento de estas.

Regulacin Splicing de un mensajero inicia la traduccin de una protena reguladora de genes. Existen otros receptores que inducen la fosforilacin e inactivan la translocacin de factores de iniciacin de la traduccin, traduccin selectiva ms genes reguladores. Otros que producen al activarse otras proteasas cortan y el mismo receptor funciona como una protena reguladora de la expresin gnica, cambiando la expresin y respondiendo entonces a este estrs del retculo que por algn motivo est ensamblando mal sus protenas.