Tecnologia de Produtos Naturais Licenciatura em Fitofarmcia e PAM Prof.

Doutora Isabel Ferreira Avaliao da actividade antioxidante e compostos bioactivos em plantas medicinais Metodologia Etapa 1 Preparao do extracto a) Medir aproximadamente 1 g (registar a massa exacta) de amostra para um gobel e adicionar 30 mL de metanol p.a. b) Colocar a amostra sob agitao magntica durante 15 min temperatura ambiente. c) Filtrar atravs de filtro de papel para um balo de vidro esmerilado de 250 mL, previamente pesado em balana analtica. d) Repetir os passos b) e c) e) Levar ao evaporador rotativo a uma temperatura de 50 C at secura completa. f) Determinar a massa de extracto. g) Preparar uma soluo-me de 40 mg/mL. h) Preparar solues de 2, 1, 0.5 e 0.25 mg/mL com volume final de 5 mL. Etapa 2- Avaliao de compostos bioactivos Flavonides Totais a) Preparar tubos de ensaio de acordo com a seguinte tabela. Tubos Branco P1 P2 P3 P4 P5 A1 A2 A3 Metanol 500 L Soluo-extracto 0.5 mg/mL 500 L 500 L 500 L Soluo-padro catequina 500 L 500 L 500 L 500 L 500 L gua destilada 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL

Nitrito de sdio (5%)

150 L 150 L 150 L 150 L 150 L 150 L 150 L 150 L 150 L

b) Agitar no vrtex e deixar repousar durante 6 minutos. c) Adicionar 150 L da soluo de cloreto de alumnio (10%), agitar no vrtex e deixar repousar durante 6 minutos. d) Colocar 2 mL de soluo de hidrxido de sdio (4%), 200 L de gua destilada e agitar no vrtex. e) Deixar repousar 15 minutos. f) Ler a absorvncia a 510 nm. g) Obter a recta de calibrao da catequina (P1 a P5) e determinar a concentrao de fenis na amostra (A1 a A3).

Etapa 3 - Avaliao do efeito captador de radicais livres a) Colocar 30 L de cada uma das solues de extracto numa placa de 98 poos e 270 L de soluo metanlica de DPPH 6 x 10-5 M. b) Preparar um branco com o solvente de extraco em vez da soluo de extracto. c) Esperar 30 min e ler a absorvncia a 515 nm. d) Obter a percentagem de actividade captadora de radicais DPPH pela frmula: [(ADPPH-Aextracto)/ADPPH] 100 e) Fazer a representao grfica da percentagem da actividade captadora de radicais DPPH em funo da concentrao de extracto.

Trazer bata e computador porttil (um por grupo).