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UNIVERSITE DE NOUAKCHOTT FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

FASCICULE DE TRAVAUX PRATIQUES DE BIOLOGIE VEGETALE BGF2

Elabor par : Mohamed Abdeljelil O. Houeibib Abdelwedoud O. Ahmed LOULY

Anne 2007-2008
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SOMMAIRE
TP 1 La cellule vgtale TP 2 - Etude des tissus pidermiques TP 3 - Les tissus conducteurs (vaisseaux ligneux) TP 4 - Tissus scrteurs (Etude des laticifres et des poches excrtrices) TP 5 - Etude de tissus vgtaux sur coupe transversale TP 6 - Reproduction chez deux Algues

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RECOMMANDATIONS IMPORTANTES

Les tudiants sont pris de : - Arriver lheure pour ne pas perturber le droulement de la sance ; - Travailler par binme ; - Porter une blouse blanche propre ; - Prparer la sance de TP : lire attentivement le texte du fascicule correspondant la manipulation du jour ; - Nettoyer sa paillasse la fin de chaque sance. - Se munir de matriel de dessin : feuilles de dessin blanches non quadrilles format A4, crayon graphite HB, gomme, taille, rgle.

Ralisation des copies - Les copies doivent tre ralises entirement au crayon ; - Sur chaque feuille doit figurer : en haut et gauche votre nom et prnom, votre numro de groupe, en haut et droite la date au milieu le thme et le titre du TP - Ne jamais dessiner recto-verso, une seule face du papier doit tre employe pour une bonne prsentation ; - Dune faon gnrale, le dessin doit reproduire fidlement limage que donne le microscope (agrandir limage en lui conservant ses proportions et sa disposition) et donner la valeur du grossissement ; - Tout dessin doit tre accompagn dune lgende complte, sinon le travail na aucune valeur. Les flches doivent tre, dans la mesure du possible, toutes situes du mme ct du dessin droite en gnral et diriges vers le dessin, les crire horizontalement. Les flches doivent tre traces la rgle et paralllement les unes aux autres.

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TP N1 : LA CELLULE VEGETALE

Objectifs : mise en vidence des caractristiques de la cellule vgtale

1. Introduction : Les cellules sont les units structurelles et fonctionnelles des tre vivants. La cellule vgtale prsente quelques diffrences par rapport la cellule animale

2. Matriel et ractifs

Microscope, lame et lamelle, oignon, tomate, pomme de terre, pince fine, scalpel, solution de rouge neutre 1 g/L, lugol (eau iode).

3. Manipulations

3.1. Placer un fragment dpiderme doignon dans une goutte de lugol, puis placer un autre fragment dpiderme doignon dans une goutte de rouge neutre. Observer entre lame et lamelle, dessiner et lgender vos observations au faible puis au fort grossissement. 3.2. Raliser un frottis de tissu de pomme de terre puis ajouter une goutte de lugol pour mettre en vidence les rserves damidon Dessiner et lgender vos observations au faible puis au fort grossissement.

3.3. Couper une tomate en deux morceaux. Sous la peau, la chair (pulpe) est ferme : plus profondment elle forme une gele molle. Prendre un petit fragment de 1 ou 2 mm de pulpe glifie, le porter sur une lame, recouvrir dune lamelle. Ecraser doucement pour bien aplatir, examiner au microscope et dessiner.

A partir des observations prcdentes, prciser les caractristiques dune cellule vgtale

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TP 2. ETUDE DES TISSUS EPIDERMIQUES 1. INTRODUCTION Ce sont les tissus qui recouvrent les parenchymes des organes ariens (feuilles, tiges jeunes, fleurs et fruits). a. Cellules pidermiques Elles assurent la protection contre la dshydratation excessive. Elles sont toujours troitement juxtaposes. On distingue : piderme simple (une seule couche de cellules) piderme compos (plusieurs couches)

Ce sont des cellules vivantes sans chloroplastes chez les vgtaux suprieurs, mais chez les vgtaux dombres et certaines plantes aquatiques elles sont pourvues de chloroplastes. b. Stomates Ils permettent les changes gazeux entre la plante et latmosphre (O2, CO2, vapeur d'eau...). Un stomate est essentiellement constitu par une ouverture, ou ostiole, dlimite par deux cellules rniforme appele cellules stomatiques et pourvues de chloroplastes. c. Poils Chez certaines espces, les cellules pidermiques portent des poils qui donnent un touch chevelu sur la surface des feuilles ou des tiges. Ces poils sont uni ou pluricellulaires. Lorsquils sont trs courts, ils sont appels papilles 2. MATRIEL ET REACTIFS

Microscope, lames, lamelles, Pince fine, scalpel, verre de montre Rouge neutre, solution de saccharose 6%. Feuilles de Allium porrum L. (poireau) (Famille des liliaces ; Feuilles de Catharanthus roseus L. (pervenche de Madagascar)

classe des Monocotyldones)

(Famille des apocynaces ; Classe des Dicotyldones) 4

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3. MANIPULATION 3.1. PRELEVEMENT Couper un morceau de lpiderme de la face infrieure de la feuille de la plante tudie (pervenche de Madagascar et/ou poireau). 3.2. COLORATION ET MONTAGE Placer chacun dans un verre de montre diffrent contenant une solution de saccharose 6%, colore au rouge neutre. Faire en sorte que les fragments prlevs soient bien drouls. Aprs 2 ou 3 minutes, poser une goutte du liquide de coloration sur la lame, y placer un fragment de l'piderme de chaque plante et le recouvrer d'une lamelle. 3.3. OBSERVATION DESSIN ET CONCLUSIONS Observer et dessiner avec lgende, au faible puis au fort grossissement une portion reprsentative de la prparation. Comparer les tissus pidermiques des 2 espces

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TP 3 - LES TISSUS CONDUCTEURS (VAISSEAUX LIGNEUX) 1. INTRODUCTION Le xylme, ou tissu ligneux, ou tissu vasculaire assure essentiellement la conduction de la sve brute de sels minraux. Il comprend des lments conducteurs (trachides et vaisseaux ligneux) associs des cellules parenchymateuses et souvent des fibres ligneuses. Chaque vaisseau provient dune file de cellules mortes, rduites leurs membranes latrales pourvues dpaississements lignifis. 2. Principe En faisant bouillir des morceaux de feuilles de poireau, on obtient un dcollement des pidermes et une extraction facile des tissus libroligneux avec un minimum de parenchyme rsiduel. Il est possible de faire le montage de l'chantillon directement dans une goutte d'eau ou mieux dans une goutte de glycrine. Cependant, la double coloration permet d'aboutir une observation de qualit. 3. Matriel 3.1. Matriel biologique Feuille de poireau (Allium porrum L. ; famille des Liliaces ; classe des Monocotyldones). 3.2. Matriel et produits chimiques Eau de javel 2% dans leau distille Acide actique 1% dans leau distille (Eau actique) Carmin vert d'iode, comme colorant : (ou carmino vert de mirande). glycrine verres de montre pour la double coloration pinces fines lames et lamelles

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4. Manipulation 1. Couper des morceaux de 4 5 cm dans une feuille de poireau bien verte. 2. Mettre ces morceaux bouillir dans de l'eau pendant 10 minutes. La cuisson permet de sparer facilement les tissus de la feuille. 3. A l'aide d'une pince fine dgager, en tirant, les tissus conducteurs situs dans les nervures.

4. placer 2 3 chantillons dans de l'eau de javel pendant 20 minutes

5. Rincer dans de l'eau pendant quelques secondes

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6. Placer l'chantillon dans de l'eau actique pendant 3 4 minutes 7. Placer l'chantillon dans le colorant carmin vert d'iode pendant 3 minutes 8. Bien rincer l'chantillon dans de l'eau 9. Placer l'chantillon bien rinc dans une goutte de glycrine. Couvrir l'chantillon d'une lamelle

5. OBSERVATION Observer et dessiner avec lgende, au faible puis au fort grossissement une portion reprsentative de la prparation. Faire des conclusions.

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TP N 4. TISSUS SECRETEURS (ETUDE DES LATICIFERES ET DES POCHES EXCRETRICES) Les tissus scrteurs sont spcialiss dans la synthse de certaines substances (essences, tanins, rsines, latex, etc.). On peut en distinguer les catgories suivantes : les cellules scrtrices isoles, les pidermes scrteurs, les poches et canaux excrteurs, les laticifres. 1- Les laticifres Ce sont des lments allongs en cordons, ramifis ou non. On en distingue : les laticifres non articuls : chaque laticifre provient dune seule grande cellule, trs allonge, et contenant de nombreux noyaux (coenocyste qui peut atteindre plusieurs mtres, voire dizaines de mtres) ; les laticifres articuls : Ils sorganisent chacun partir de nombreuses cellules disposes en file (chacune de ces cellules est un article du laticifre ainsi form). A lintrieur des laticifres se trouve une volumineuse vacuole centrale contenant le latex. Il sagit dun liquide visqueux gnralement daspect laiteux et plus rarement limpide. Chez certaines plantes, le latex contient des grains damidon en suspension se colorant en violet par liodure diode. 1.1 - Matriel Tige de Euphorbia balsamifera ; famille des Euphobiceae ; classe des

Dicotyldones ; Microscopes, lames, lamelles, pinces fines et lames de rasoir ; Iodure diode. 1.2 - Manipulation Faire des coupes longitudinales (parallle laxe principal ; voir figure ci-dessous) dans lcorce de la tige puis les mettre, dans une goutte diodure diode, sur une lame et les couvrir avec lamelle. Observer au faible puis au fort grossissement. Dessinez et mettez la lgende puis identifiez, en justifiant la rponse, le type de laticifres observ.

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2- Les poches excrtrices Ce sont des cavits situes dans le parenchyme des feuilles, des tiges et des fruits, chez certaines espces. Ces poches sont nombreuses dans le pricarpe des oranges, mandarines, citrons, etc. o lon observe, lexamen microscopique, une cavit sphrique contenant une essence et borde par une range de petites cellules scrtrices. 2.1 - Matriel - Oranges (fruits doranger doux, Citrus sinensis ; famille des Rutaceae) ; Microscopes, lames, lamelles, pinces fines et lames de rasoir ; Alcool. 2.2 - Manipulation Faire une coupe tangentielle dans la couche orange de lenveloppe du fruit puis placer le produit dans une goutte dalcool sur une lame. Placer une poche excrtrice au centre du champ du microscope et passer au fort grossissement. Dessinez et mettez la lgende.

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Ralisation des coupes

b c. d.

Fig.1. types de coupes : a. et b. coupe longitudinale axiale ; c. coupe longitudinale latrale : d. coupe transversale.

Fig. 2. Plans des coupes

Fig. 3. Excution des coupes dorganes vgtaux destines lexamen microscopique. A. Lorgane couper est inclus dans un bton de moelle de sureau. B. Excution de la coupe

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TP N5 - ETUDE DE TISSUS VEGETAUX SUR COUPE TRANSVERSALE (PARENCHYMES, COLLENCHYMES, SCLERENCHYMES) 1- Introduction

Les parenchymes, groupe fondamental de tissu, sont forms de cellules isodiamtriques ou allonges dont les vacuoles sont bien dveloppes mais dont la paroi cellulaire est assez mince. Ils sont classs daprs leurs fonctions en parenchymes chlorophylliens, parenchymes de rserve, parenchymes aquifres et parenchymes arifres. Les cellules des parenchymes chlorophylliens, riches en chloroplastes, sont parfois spares par des mats ou de grandes lacunes. Le collenchyme, tissu de soutien vivant, est form de cellules plus ou moins allonges, fusiformes, dont la paroi sest paissie tout en demeurant de nature cellulosique. On peut distinguer : Un collenchyme annulaire : lpaississement de la paroi est uniforme sur toute ltendue de celle-ci ; Un collenchyme angulaire : lpaississement cellulosique est localis aux angles des cellules ; Un collenchyme tangentiel : lpaississement affecte uniquement les parois tangentielles des cellules. Le sclrenchyme : cest un tissu de soutien form de cellules gnralement allonges dont la paroi, trs paissie, est entirement lignifies. Les cellules sclrifies, dont la paroi est impermable, sont des cellules mortes. On distingue deux types de cellules : les fibres, cellules trs allonges, et les sclrites, cellules courtes parfois de forme irrgulire. 2- Matriel et produits Tige de la coloquinte Citrullus colocynthis ou de la pastque Citrullus lanatus Microscopes, lames, lamelles, verres de montre, couteau ou lames rasoir, scalpel ; Support (moelle de Sureau ou carotte) ; Eau, glycrine, eau de Javel, acide actique, colorants (carmin alun et vert diode, ou carmino-vert de Mirande). 12

(famille des Cucurbitaceae ; classe des Dicotyldones) -

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3- Mthode de travail Faire des coupes transversales conformment la technique dcrite (voir ralisation des coupes) ; Effectuer une double coloration (voir coloration et montage des coupes) ; Observer, au faible puis au fort grossissement, une coupe bien faite (prendre 3 coupes pour lobservation); Dessiner une parie de la coupe comprenant 5 7 cellules de chacun des tissus suivants : lpiderme, les parenchymes, les collenchymes et les sclrenchymes (remarquer la prsence de la lamelle moyenne). Mettez la lgende. Ralisation, coloration et conservation des coupes Les tudes histologique et anatomique des organes vgtaux se font laide de coupes minces observes au microscope. 1- Ralisation des coupes (voir figures ci- jointes) On effectue des coupes minces en tenant directement lorgane vgtal la main sil est grand et dur. Sil est souple ou de petite taille, on utilise un support et dans ce cas : Fendons un bton de moelle de Sureau (ou une carotte) longitudinalement en deux demi-cylindre avec un scalpel ; On creuse lintrieur du support un trou si la taille de lorgane tudi est grande ; Plaons lorgane entre les 2 moitis perpendiculairement; On tient le couteau par la main droite et le support par la main gauche et on coupe une partie du support avec lorgane de faon trouver un plan de coupe homogne ; On ralise plusieurs coupes trs minces (10 15) dont on choisira les meilleures la fin de lopration. Ces coupes sont rcupres dans leau. 2- Coloration et montage des coupes La mthode de la double coloration par le carmin alun et le vert diode est celle qui est la plus utilise. Les coupes ralises sont places dans : 13

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Leau de javel pendant 15 20mn. Cette opration entrane la destruction du contenu cellulaire tout en conservant les parois cellulaires ; Leau pendant 2 5mn pour liminer les traces de leau de Javel et favoriser la fixation des colorants dans les tapes venir ; Le carmin alun pendant 5mn ce qui entrane une coloration rose des parois cellulosiques ; Le vert diode pendant 30s au maximum ce qui entrane la coloration des parois lignifies en vert.

Les coupes sont soigneusement laves pour liminer lexcs du colorant. Elles sont ensuite montes entre lame et lamelle dans une goutte de glycrine. 3- Conservation des coupes et des organes vgtaux Pour conserver les prparations danatomie pour les observer ultrieurement, nous procderons comme suit : Aprs le lavage, dshydrater les coupes dans un bain dalcool 95 pendant quelques minutes ; Les plonger dans lalcool absolu pendant le mme temps ; Les tremper dans du tolune (ou du xylme) pendant 3 5mn ; Les introduire dans une goutte de baume de Canada place sur lame propre et sche. Les couvrir avec une lamelle et laisser scher la prparation. Pour les tudes anatomiques, les organes vgtaux peuvent tre conservs dans lalcool 10% additionn de glycrine pour les rendre moins cassants. Si ltude anatomique est trs prcise, les chantillons sont placs dans un milieu fixateur qui tue rapidement les cellules sans modifier leur structure. Pour cela, on utilise le formol 10% avec une solution physiologique (liquide de Ringer). Pour les algues marines, on utilise le formol 4% dans leau de mer contenant du carbonate de calcium.

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TP 6. REPRODUCTION CHEZ DEUX ALGUES

I. Etudes de la conjugaison scalariforme chez Spirogyra La spirogyre est une algue verte qui se dveloppe en eaux douces bien oxygnes. Son thalle est constitu dune seule file de cellules identiques. Chaque cellule est caractrise par la prsence de plastes rubans hlicodaux dans le cytoplasme parital portant plusieurs pyrnodes. Au moment de la reproduction sexue, apparaissent, chez la spirogyre des protubrances issues de cellules appartenant deux filaments diffrents. Les parois en contact se glifient et les contenus cellulaires entrent en communication. Les chloroplastes se modifient, le cytoplasme se condense et le contenu dune cellule se dverse travers le bec de copulation dans lautre cellule. Le zygote form sentoure dune paroi paisse et passe ltat de vie ralentie. La conjugaison peut galement seffectuer entre 2 cellules voisines dun mme filament ; cest la conjugaison latrale. On dispose de prparations de Spirogyre : Dessiner cette Algue en slectionnant les parties illustrant le dbut et la fin de la conjugaison ; Mettre la lgende ; Identifier la structure du thalle. II. Etude des organes reproducteurs du Ficus Il sagit dalgues brunes vivant dans la zone de balancement des mares. On les trouve sur les ctes de lAtlantique. Les organes reproducteurs mles et femelles se trouvent dans les rgions fertiles appeles rceptacles. Dans ces rceptacles sont situs des conceptacles communiquant avec lextrieur par des ostioles. Les conceptacles femelles contiennent des poils striles (paraphyses) et des gamtocystes femelles (oocystes) produisant par miose 8 oosphres. Les conceptacles mles contiennent des poils ramifis portant des spermatocystes qui se divisent par miose et donnent 64 spermatozodes biflagells. Les spermatocystes et les oocystes se librent travers les ostioles des conceptacles mais les gamtes ne sont librs que sous leffet de leau. On dispose de prparations contenant des conceptacles males et femelles : Dessiner deux conceptacles (mle et femelle) ; Mettre la lgende. 15

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ANNEXE
Prparation des colorants

1. Carmin alun Dissoudre 10 g de Carmin 40 pour histologie et 40 g dalun de Potassium (sulfate daluminium et de potassium) dans 1L deau distille. Porter le mlange bullition pendant 1h, laisser refroidir et filtrer.

2. Vert d'iode Dissoudre 1 g de vert diode dans 100 ml deau distille.

3. Prparation du colorant Carmino vert de Mirande 1. Dissoudre 6 g de Carmin 40 pour histologie et 12 g dalun de Potassium dans 200 ml deau distille. 2. Chauffer feu doux, ajouter 200 ml deau distille et 0,4 g de Vert dIode, porter bullition puis laisser refroidir et filtrer.

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