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LA STERILISATION

1. DEFINITION La strilisation est une opration qui a pour but de tuer toute vie microbienne (bactries, virus ou champignons) sur et dans un objet ou prparation. Cet objet ou produit strilis est dit strile quand le contrle de strilit montre une absence de germes revivifiables. La strilisation peut tre ralise soit : En tuant les micro-organismes par la chaleur, par les agents chimiques ou par des rayonnements ; En les liminant par filtration, cette mthode ne sapplique quaux fluides, liquides et gaz. Le procd utilis doit tre tel quen fin de strilisation , la probabilit de trouver une unit non strile doit tre infrieure 10-6.

2. Courbe de dcroissance bactrienne Quel que soit le procd de strilisation, toutes les courbes de dcroissance bactrienne ont une expression logarithmique de type :

Log N / N0 = - KT

: nombre initial de micro-organismes dans un volume dtermin ;

N0 : nombre de micro-organismes revivifiables dans le mme volume aprs strilisation ; K : constante de vitesse ; T : temps.

Le taux minimum de dcroissance bactrienne requis pour quun procd soit qualifi de strilisation est dau mois 10-6 selon la Pharmacope Europenne 6me Edition. En dessous de ce taux, les procds sont qualifis de dsinfection.

3. Que strilise t- on ? La strilisation sapplique : Aux mdicaments qui selon la Pharmacope doivent tre striles : prparations injectables, collyres, produits destins tre appliqus sur certaines blessures et brlures ; Au matriel chirurgical : (instruments, lingerie opratoire, fils ligatures), articles de pansement, matriel usage unique, vtements des personnes travaillant en ambiance strile; Au matriel injection : seringues, aiguilles, cathters, sondes ; Les objets de pansement, prothses et drains ; A certaines enceintes de lindustrie pharmaceutique et des hpitaux : blocs et htes striles. Le choix du procd de strilisation se fait en fonction du produit striliser, un procd inadapt peut nuire sa stabilit.

4. Strilisation par la chaleur Les spores bactriennes sont les formes les plus rsistantes la chaleur et cest en fonction de leur rsistance quont t tablies les conditions de strilisation thermique. 4.1. Sensibilit des micro-organismes la chaleur

La sensibilit des micro-organismes la chaleur est fonction : De lespce microbienne et de la forme sous laquelle elle se trouve : vgtative ou sporule Les spores sont plus rsistantes que les formes vgtatives. La plupart des bactries sont dtruites, sous leur forme vgtative, une temprature de + 52C 60C ; il faut des tempratures beaucoup plus importantes pour dtruire leurs spores.

De la dure du traitement thermique La quantit de germes prsents dans le milieu joue un rle important. Il existe une relation logarithmique entre la dure dun traitement la chaleur et le nombre de germes survivants dans le milieu trait, qui se traduit par une courbe exponentielle qui tend vers 0 sans jamais latteindre.

Nombre de germes survivants

Temps

Du nombre de germes prsents avant traitement Le risque de survie aprs un traitement thermique est dautant plus faible quil y avait moins de germes au dpart. De la temprature Plus la temprature augmente, moins il faut de temps pour atteindre le mme rsultat. Dans le cas de Clostridium botilinum il faut pour avoir le mme effet : 3 mn 9 mn 30 mn 4h 120 115 110 100

Du milieu dans lequel se trouve les germes Les germes sont beaucoup plus difficiles dtruire en milieu sec quen milieu humide. La chaleur sche agit par oxydation alors que la chaleur humide agirait surtout par coagulation des protines. La destruction est galement plus aise en milieu acide quen milieu alcalin.

4.2.

Procds de strilisation par la chaleur La strilit peut tre obtenue par la chaleur sche ou par la chaleur humide.

4.2.1. Strilisation par la chaleur sche La temprature de strilisation est de 180C pendant 1h. En raison des tempratures leves quil faut atteindre, la chaleur sche est rserve aux produits dont la rsistance thermique est leve tel que le verre et le matriel mtallique. A Oprations discontinues Le flambage : il consiste faire passer dans une flamme des objets de petite taille. Four pasteur ou strilisateur poupinel : ils sont chauffs llectricit et quips dun systme de ventilation pour assurer une homognit de rpartition de la temprature. B Oprations continues On utilise des fours tunnels qui sont surtout employs pour la strilisation de grandes quantits de flacons en verre destins au conditionnement aseptique des mdicaments.

4.2.2. Strilisation par la chaleur humide La temprature de strilisation est de 120C pendant 20mn. La chaleur humide permet linactivation des micro-organismes des tempratures et des temps infrieurs ceux ncessaires pour la chaleur sche car lhumidit favorise la diffusion et la pntration de la chaleur travers la membrane des spores ce qui provoque la coagulation des protines plasmatiques. A Immersion dans de leau bouillante Elle seffectue une temprature maximum de 100C pendant 30mn. Elle est utilise pour la strilisation des collyres, des ampoules, des objets en porcelaine ou en mtal. Ce procd est simple et rapide mais ne permet pas la destruction des spores bactriennes. B La tyndallisation Elle consiste chauffer 1h 70C pendant 3 jours conscutifs et 24h dintervalle les objets striliser. Daprs TYNDALL, lors du premier chauffage, les spores voluent et amincissent leur enveloppe. Elles deviennent plus sensibles la chaleur et sont dtruites au deuxime chauffage.
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Le troisime chauffage est destin dtruire les spores volution lente. La tyndallisation ne donne jamais une garantie absolue et ne convient pas pour les produits fortement contamins. C Lautoclavage Cest un procd qui utilise la vapeur deau sature sous pression. Cette association permet de striliser une temprature plus basse qua lair sec. A 100C, leau bout en passant ltat gazeux sous forme de vapeur deau. Mme si on continue chauffer, on ne russira jamais dpasser 100C la pression atmosphrique. Par contre si on chauffe de leau dans un rcipient ferm aprs avoir limin tout lair prsent, une pression suprieure la pression atmosphrique sera atteinte sous leffet de la vapeur qui se forme et la temprature dpassera 100C. Pour obtenir cette action mixte chaleur-humidit, on utilise des autoclaves qui sont des enceintes cylindriques ou rectangulaires en cuivre ou en acier inoxydable, munis dun couvercle fermant hermtiquement.

Le couvercle est muni : Dune soupape de suret rgle pour une pression maximale ; Dun robinet dvacuation de lair et de la vapeur ; Et dun manomtre.

Strilisation lautoclave

La strilisation la chaleur humide peut galement se faire en continu, on utilise dans ce cas la vapeur sous pression en continu. Ce procd est rserv pour la strilisation de prparations importantes tels que les soluts pour perfusion.

4.3. Strilisation par filtration Les mdicaments fragiles, thermosensibles ne peuvent pas supporter une strilisation par la chaleur, il est ncessaire de recourir la strilisation par filtration. Ce procd applicable aux fluides est bas sur la rtention des micro-organismes et particules par un rseau filtrant de porosit variable. Cette rtention se fait soit par criblage, soit par adsorption soit par les deux la fois. 4.4. Strilisation par les antiseptiques Les produits chimiques bactricides se prsentent sous deux formes : Antiseptiques liquides, Antiseptiques gazeux.

4.4.1. Antiseptiques liquides Leur addition directe aux mdicaments est trs rglemente. On les utilise lorsque le mode de strilisation ne donne pas de garanties suffisantes : strilisation par la chaleur 100C et strilisation par filtration. Les produits les plus utiliss sont les sels de sodium de lacide parahydroxybenzoique. 4.4.2. Antiseptiques gazeux Ce procd est applicable au matriel mdico-chirurgical qui ne peut pas tre strilis par la chaleur. Les gaz permettent de striliser des tempratures plus basses quavec la strilisation par la chaleur. A Le formol Cest un gaz peu pntrant donc uniquement un dsinfectant de surface. Il est utilis pour la strilisation du matriel et des locaux sous forme de pastilles de formaldhyde que lon chauffe 56C en atmosphre trs humide. On laisse en contact tout une nuit puis on llimine par ventilation avec de lair strile. B loxyde dthylne Loxyde dthylne est un gaz bactricide trs ractif, mais il est explosif et toxique. CH2 CH2

O Oxyde dthylne Il est utilis pour le matriel mdico-chirurgical qui ne supporte pas la strilisation lautoclave. Il prsente lavantage dtre utilis pour les articles placs dans leur emballage dfinitif. Proprits et mcanisme daction Loxyde dthylne est temprature ambiante un gaz incolore trs diffusible dont lodeur thre nest dtectable qua partir dune concentration de 700 ppm. Il forme avec lair un mlange explosif dans les proportions de 3 83%. Il prsente un large spectre dactivit bactricide, fongicide, virucide et sporicide il agit par alkylation des groupements fonctionnels des microorganismes.

Conduite de la strilisation La strilisation sopre dans une enceinte hermtiquement close o le vide a t fait pralablement. - On utilise loxyde dthylne des concentrations comprises entre 450 et 1200 mg/l avec un taux dhumidit compris entre 25 et 50%. - Aprs un contact de plusieurs heures, on fait plusieurs vides successifs, puis on introduit de lair filtr pour liminer le maximum de gaz. - La dsorption de loxyde dthylne est indispensable aprs strilisation et sa dure est fonction des produits striliss. Inconvnients de loxyde dthylne En plus du danger dexplosion, il prsente des risques dintoxication pour le personnel. Le matriel manipul aprs strilisation peut provoquer des dermites et a une action hmolytique.

4.4.3. Strilisation par lacide practique Cest un liquide incolore la temprature ordinaire. La solution concentre (35%) a une forte odeur piquante, elle est lacrymogne et attaque la peau et les muqueuses. La strilisation consiste chauffer 40 47C une solution 3,5% dacide practique et faire passer la surface de cette solution de lair qui circulera ensuite dans lenceinte striliser. Lefficacit de lacide practique est due la libration doxygne sous forme atomique, oxydant trs puissant qui agit sur la paroi cellulaire et les constituants cytoplasmiques des micro-organismes. Il est utilis pour la strilisation des enceintes striles. Trs toxique, lacide practique prsente aussi linconvnient de provoquer la corrosion des mtaux. Leffet strilisant dpend de lhygromtrie. Il est maximum pour 80% dhumidit relative.

4.5.

Strilisation par les rayonnements 4.5.1.Rayons ultra-violets

Le pouvoir microbicide de ce rayonnement est trs lev, mais les UV sont arrts par le verre, le plastique. Leur utilisation se limite des milieux transparents tels que la strilisation de latmosphre des enceintes striles et le maintien de la strilit de leau distille.

4.5.1. La radiostrilisation Ce procd prsente par rapport aux autres mthodes de strilisation un certain nombre davantages : Procd de strilisation froid permettant de traiter le matriel mdicochirurgical jetable en plastique, certains produits thermodgradables; Traitement de produits dans leur emballage dfinif et donc non susceptibles de contaminations secondaires ; Procd continu qui vite de multiplier les lots ; Procd sur puisque le seul paramtre defficacit est la dose minimale dlivre au produit.

5. Contrle de la strilit Le contrle de la strilit a pour but de dceler la prsence ventuelle de germes dans la prparation ayant t soumise une strilisation. La Pharmacope Europenne 6me numre un certain nombre de milieux de culture pouvant tre utiliss ainsi que les modes opratoires adapts lessai de strilit.