UNIDAD N 1:

Tema 7: ENZIMAS

Blgo. Ms. Pablo Chuna Mogolln

Profesor Auxilar T.C. Area Biologa Departamento Acadmico de Ciencias - UPAO

TEMA 5. ENZIMAS

Caractersticas generales. Cofactor. Clasificacin. Especificidad. Sitio cataltico. Cintica enzimtica. Factores que afectan la actividad enzimtica.

ENZIMAS

Las enzimas son los catalizadores de las reacciones de los sistemas biolgicos. Cumplen con las siguientes caractersticas: a) Son termolbiles y su actividad depende en ciertos casos del pH del medio.

b) El reconocimiento de la enzima con el reactivo a procesar (denominado sustrato) es

altamente especfico. c) Tienen gran eficiencia, es decir, transforman un gran nmero de molculas de sustrato por unidad de tiempo. d) Estn sujetas a una gran variedad de controles celulares, genticos y alostricos. Aceleran notablemente la velocidad de una reaccin qumica y cumplen con las siguientes caractersticas: 1) Son efectivas cantidades en pequeas

2) No sufren modificaciones qumicas irreversibles durante la catlisis. 3) Disminuyen la E de activacin.

NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS

En muchos casos, el nombre termina en asa El nombre comun para una hidrolasa es derivado del sustrato

Urea: remueve -a, se reemplaza con -asa = ureasa Lactosa: remueve -osa, se reemplaza con -asa = lactasa Lactato deshidrogenasa

Otras enzimas se nombran por el sustrato y la reaccin catalizada

Piruvato descarboxilasa

Algunos nombres son histricos - no directamente relacionados al sustrato o tipo de reaccin

Catalasa Pepsina Quimotripsina Tripsina

CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS

CLASE 1: OXIDORREDUCTASAS (E.C. 1)
Catalizan reacciones de oxido-reduccin, y con frecuencia utilizan coenzimas como el NAD, FAD o lipoato. - Deshidrogenasas - Oxidasas - Oxigenasas - Reductasas - Peroxidasas - Hidroxilasas

Alcohol deshidrogenasa

CLASE 2: TRANSFERASAS (E.C. 2)

Catalizan la transferencia de un grupo de tomos desde un sustrato a otro. Los grupso que con ms frecuencia son transferidas son grupos: amino, acilo, fosfato, etc. - Transaminasas - Transmetilasas - Transcarboxilasas - Quinasas

Hexoquinasa

CLASE 3: HIDROLASAS (E.C. 3)

Cataliza reacciones en la que el sustrato es escindido siendo sus fragmentos transferidos a los componentes del agua (OH y H). Implican la rotura hidroltica de enlaces C-O, C-N, O-P y C-S. - Carbohidrasas - Esterasas - Fosfatasas - Peptidasas

CLASE 4: LIASAS (E.C. 4)

Catalizan reacciones en la que se eliminan grupos (por ej, H2O, NH3, CO2, para formar un doble enlace o se aaden a un doble enlceaces C-C, C-N y C-O, y con prdida de grupos funcionales simultnea a la aparicin de dobles enlaces. - Descarboxilasas - Hidratasas - Desaminasas - Liasas - Sintasas

CLASE 5: ISOMERASAS (E.C. 5)

Catalizan la interconversin de ismeros de cualquier tipo, pticos, geomtricos o de posicin. - Epimerasa - Racemasa - Mutasa

CLASE 6: LIGASAS (E.C. 6)

Participan en reacciones en las que se unen dos molculas a expensas de un enlace fosfato de alta energa procedente del ATP. - Tiocinasa - Carboxilasa - Sinetetasa

NATURALEZA QUIMICA DE LAS ENZIMAS

Casi todas las enzimas son de naturaleza proteica Algunas enzimas requieren cofactores para su funcionamiento. Las coenzimas se va a unir a la enzima bien de forma dbil y temporal o en otros casos de forma permanente y covalente (grupo prosttico). Holoenzima = Apoprotena
Peso molecular Termolbil No dializa

+ Cofactor (Coenzima o in metlico)

Peso molecular Termorresistente Dializa Molculas orgnicas complejas

Fe+ Mg+

Mn+
Zn+

Los iones metlicos son importantes en la catlisis porque: 1. Proporcionan una concentracin elevada de cargas positivas que es especialmente til para la unin de molculas pequeas. 2. Ayudan al sustrato a orientarse dentro del sitio cataltico. 3. Como los metales de transicin (p.ej. Fe2+ y Cu2+ ) tienen dos o ms estados de valencia, pueden actuar como mediadores en las reacciones de xido-reduccin.

ION METALICO Cu 2+ Fe 2+ o Fe 3+ Mg 2+

ENZIMA Citocromo oxidasa Ctalasa, peroxidasa Hexoquinasa, Glucosa 6- fosfatasa Arginasa, Ribonuclotido reducatasa Ureasa Glutation peroxidasa Alcohol deshidrogenasa, Anhidrasa carbnica, Carboxipeptidasa

Mn Ni 2+ Se Zn 2+

Nicotinamida adenina dinucletido (NAD)

Adenosin trifosfato (ATP)

CATALISIS ENZIMATICA
La enzima se une efectivamente al o a los sustratos, formando un complejo transitorio (ES), mediante una reaccin reversible, cuya energa de activacin es menor que la de la reaccin no catalizada. Las modificaciones que puede experimentar la molcula de la enzima durante dicha unin son pasajeras, ya que aparece inalterada al final de la reaccin. El proceso puede representarse con la ecuacin: E + S ES EP E + P

E + S ES EP E + P

SITIO CATALITICO

El sitio cataltico, centro activo o centro de fijacin del sustrato, es una pequea grieta o hendidura en una molcula proteica grande, donde se fija el sustrato. La estructura terciaria de la enzima est plegada de tal manera que se origina una regin con las dimensiones moleculares idneas para acomodar un sustrato especfico. Contiene varias cadenas laterales de aminocidos que participan activamente en forma directa para formar o romper enlaces del sustrato Los aminocidos que estn presentes son: serina, histidina, cistena, lisina, aspartato y glutamato

MECANISMOS DE ACCIN ENZIMTICA

1. Efectos de proximidad y orientacin Las enzimas logran en su centro activo una concentracin local de reactivos mucho mayor que cuando stos estn en solucin (efecto de proximidad) Adems, la fijacin al centro activo se hace en la orientacin correcta. 2. Efectos de torsin distorsin

Una vez unido el S al E, es forzado a modificar su estructura y adopta una ms prxima al estado de transicin
3. Existencia de grupos funcionales catalticos en el centro activo del enzima

ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS

Es la capacidad de una enzima de unirse solo a uno, o a muy pocos sustratos, thereby catalizando solo una unica reaccin. Compare estas 2 reacciones: Ureasa es muy especfica o tiene un alto grado de especificidad

La especificidad puede ser: Absoluta: enzima reacciona con solo un sustrato Grupo: enzima cataliza la reaccin de molculas con el mismo grupo funcional Enlace: enzima cataliza la formacion o ruptura de solo cierto tipo de enlace Estereoqumico: enzima reconoce solo uno de dos enantimeros

TEORAS DE LA ACCIN ENZIMTICA

MODELO DE LLAVE Y CERRADURA (Emil Fischer) El sustrato y la enzima se acoplan de forma estereoespecfica, de la misma manera que una llave se ajusta a su cerradura.

TEORIA DEL AJUSTE INDUCIDO (Koshland) Considera a la enzima como una estructura dotada de plasticidad y flexibilidad. Cuando el sustrato se une a la enzima, induce cambios conformacionales en la molcula de sta, que recin entonces acomoda los grupos funcionales crticos para asegurar la ubicacin ms efectiva.

FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

1. CONCENTRACIN DEL SUSTRATO Si se mantiene constante la concentracin de la enzima y se varia la concentracin de sustrato se obtiene una curva hiperblica como la de la figura. Al principio un aumento de la concentracin de sustrato produce un aumento rpido de la velocidad de reaccin, pero si se sigue aumentando la concentracin de sustrato, la velocidad comienza a disminuir y a muy altas concentraciones de sustrato se observa que no cambia la velocidad de reaccin, se dice que los sitios catalticos de la enzima se encuentran saturados.

2. CONCENTRACIN DE LA ENZIMA
La velocidad inicial es proporcional a la concentracin de enzima. Esta es la situacin en la mayora de los casos, donde en los grficos velocidad versus concentracin total de enzima se obtiene una recta que pasa por el origen

3. EFECTO DE LA TEMPERATURA Si bien el aumento de la temperatura incrementa la velocidad de una reaccin catalizada por una enzima esto resulta vlido slo en un intrevalo de T estrictamente limitado. Inicialmente, la velocidad de reaccin se incrementa conforme la T aumenta, debido al incremento de la energa cintica de las molculas reactantes. Finalmente, sin embargo, la E cintica de la enzima excede la barrera energtica, para la ruptura de los enlaces dbiles, los cuales conservan la estructura secundaria, terciaria de dicha enzima, provocando la desnaturalizacin.
Temperatura ptima para una tpica enzima humana Temperatura ptima para enzima de termfila
(Bacteria termotolerante)

Actividad

20

40

80

100

Temperatura (C)

Temperatura ptima para dos enzimas

4. EFECTO DEL PH
Para la mayora de las enzimas, la actividad ptima se encuentra entre valores de pH de 6 a 8. Por debajo o por encima de esos valores, la velocidad de reaccin cae ms o menos rpidamente. Se sabe que los cambios de pH del medio afectan el estado de ionizacin de ciertos grupos funcionales en la molcula de la enzima y tambin en la del sustrato. Por otra parte, los pH extremos provocan desnaturalizacin de la molcula enzimtica, con la consiguiente inactivacin.
ENZIMA Fosfatasa alcalina Lipasa pancretica Quimotripsina Tripsina Catalasa Carboxipeptidasa Amilasa salival Fosfatasa cida Pepsina pH 9.5 8.0 8.0 7.9 7.6 7.5 6.8 5.0 1.5 Actividad
pH ptimo para pepsina (enzima del estmago pH ptimo para tripsina (enzima intestinal)

3 4 0 2 1 pH ptimo para dos enzimas

INHIBICIN ENZIMTICA
INHIBICIN REVERSIBLE: INHIBICION NO COMPETITIVA. El inhibidor se une a la enzima en un lugar de la molcula diferente del sitio cataltico, a menudo deformndola de modo que sta no forme el complejo ES a su velocidad normal. - No existe competencia entre el sustrato y el inhibidor. - El Inhibidor presenta poco parecido estructural o ninguno con el S. - Ej. Isoleucina que acta sobre enzima treonina deshidratasa

Vmax diferente KM igual

INHIBICIN REVERSIBLE: INHIBICION COMPETITIVA:

El inhibidor puede combinarse con la enzima libre, de tal modo que compite con el sustrato normal por unirse al sitio cataltico. La estructura qumica de un inhibidor (I), por lo general es semejante a la del sustrato (S). El inhibidor se combina de manera reversible, con la E para formar un complejo EI. Una caracterstica de este tipo de inhibicin est dada por el hecho de que puede ser revertida aumentando la concentracin de sustrato.

La sulfamida compite con el cido para amino benzoico (PABA) por la enzima dihidropteroato sintetasa, lo que porduce como resultado la formacin de un producto que contiene sulfanilamida, que no puede ser transformado en cido flico.

Metotrexato (antileucmico) Anlogo estructural del tetrahidrofolato. Inhibe la dehidrofolato reductasa, una enzima esencial en la va de la biosntesis de bases nitrogenadas (timidina monofosfato). Se une 1000X mejor que el sustrato natural. Las clulas leucmicas no se pueden dividir.

Etanol por anticongelante venenoso

Inhibidor competitivo de la enzima alcohol deshidrogenasa

HO OH

Alcohol dehydrogenase
HO

O O HO OH O OH O

HO

ethylene glycol

glycoaldehyde

glycolic acid

OH

glyoxylic acid

oxalic acid

INHIBICION IRREVERSIBLE
El inhibidor irreversible forma un enlace covalente estable con la enzima (ej. alquilacion or acilacion de la cadena lateral de un sitio activo)
Nombre Cianuro Estructura Fuente Almendras amargas
Gas nervioso

Accin Inhibitoria Se une a iones metlicos de enzimas de la cadena respiratoria

Similar a Diisopropilfluorofosfato

Sarin

Paratin

Insecticida

Similar a Diisopropilfluorofosfato

Penicilina

Hongo Penicillium

Inhibe enzima que participa en sntesis de la pared celular bacteriana

Tokyo, 1995

INHIBICIN IRREVERSIBLE:

PROENZIMAS
Varias enzimas se sintetizan y almacenan en forma de precursores inactivos denominados proenzimaso zimgenos. Los zimgenos se convierten en enzimas activas por la rotura irreversible de uno o varios enlaces peptdicos.

Zimgeno Proelastasa Tripsingeno Quimotripsingeno A Pepsingeno Procarboxipeptidasa Tripsina Tripsina

Activador

Enzima Elastasa Tripsina Quimotripsina Pepsina Caroboxipeptidasa A, Carboxipeptidasa B

Tripsina + quimotripsina pH cido + pepsina Tripsina

ENZIMAS NO CONVENCIONALES RIBOZIMAS

Son molculas de RNA que pueden tener capacidad cataltica y comportarse como biocatalizadores muy activos.

ABZIMAS
Son anticuerpos que tienen propiedades catalticas.

SINZIMAS
Son enzimas artificiales.

ISOENZIMAS (ALOENZIMAS)
Son formas moleculares distintas de una enzima, resultante de la presencia de ms de un gen codificando cada una de estas formas moleculares en el genoma de un organismo.

Localizacin de las isoenzimas.

1. En la misma clula y en el mismo compartimento, como ocurre con las isoenzimas de la enzima Lactato deshidrogenasa que se encuentra en todo el citosol. En la misma clula pero en diferentes compartimentos, como es el caso de Glutamato oxalacetato transaminasa que se encuentra en el citosol y en las mitocondrias. En diferentes tejidos de un mismo organismo, como es el caso de Glutaminasa activada por fosfato de la que existen dos tipos: tipo rin (K) y tipo hgado (L). En el mismo individuo y en el mismo tejido, pero en diferentes fases del desarrollo, como es el caso de la Piruvato quinasa de la que se conocen dos formas: la fetal y la adulta.

2.

3.

4.