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hématocrite

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République algérienne démocratique et populaire Université Djillali Liabes Faculté de Médecine Département de Pharmacie

TP N°02 Détermination de l’hématocrite
Réalisée par: • BETTAYEB Mohamed Amine. • CHAREF KHODJA Meriem. • TAHRI Mahmoud. • GHERMI Mohamed. • ZIDOUR Mehdi Nabil 4 ème année pharmacie G05. Année universitaire : 2008 / 2009

TP N 02

HEMATOLOGIE - HEMATOCRITE

I- Généralités sur le sang
1- Numération érythrocytaire : nombre de globules rouges
C'est le nombre des globules rouges circulant dans un volume donné de sang. Le taux normal est : Chez l'homme 5,0 + 0,5 x 1012/l (tera/l) Chez la femme 4,5 + 0,5 x 1012/l (tera/l)

2- Dosage de l'hémoglobine (Hb)
Le taux d'hémoglobine est obtenu par spectrophotométrie après lyse des globules rouges. Le taux normal : Chez l'homme : 130 à 170 g/l (ou13 à 17 g/dl) Chez la femme : 115 à 150 g/l (ou 11,5 à 15 g/dl)

globulaire 3- Le volume globulaire moyen (VGM)
C'est la valeur moyenne mesurée du volume de chaque hématie. Normal : 90 + 5 fl (10-15 l) : normocytose Diminué : < 80 fl, dans les microcytoses microcytoses. Augmenté : > 100 fl dans les macrocytoses macrocytoses.

constantes A partir de ces données mesurées, d’autres constantes peuvent être calculées
L'hématocrite (Ht) C'est le volume occupé par les globules rouges (G.R) par rapport au volume du sang total (G.R + plasma). Il peut aussi être obtenu par centrifugation du sang. Le taux normal est : Chez l'homme : 47 + 7 % ou 0,47 + 0,07 l/l Chez la femme : 42 + 5 % ou 0,42 + 0,05 l/l Taux corpusculaire moyen en hémoglobine (TCMH ou TGMH) Se calcule par le rapport Hb/numération des G.R. Il correspond à la moyenne du poids d'hémoglobine contenu dans un G.R Normal : 30 + 2 pg (10-12 g) Diminué : < 27 pg, dans les hypochromies hypochromies. Augmenté : > 32 pg, dans les macrocytoses macrocytoses. Concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine (CCMH) Se calcule par le rapport Hb/hématocrite. Correspond à la saturation du G.R en hémoglobine Normale : 330 à 360 g/l (ou 33 à 36 g/dl) La CCMH normale définit la normochromie. En pathologie, elle peut être abaissée : hypochromie hypochromie.

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TP N 02

HEMATOLOGIE - HEMATOCRITE

IIII- Hématocrite
1- Principe
Étude du volume occupé par les globules rouges dans le sang total. Mesuré après décantation spontanée ou accélérée du sang (après mise en piles des globules rouges) en : • • • Une phase supérieure et jaunâtre : plasmatique Une phase inférieure et rouge : érythrocytaire Une interphase petite et blanchâtre : leucocytaire et plaquettaire

Le résultat est exprimé en pourcentage. Les chiffres normaux de l'hématocrite chez un sujet adulte vivant au niveau de la mer sont compris entre 36-48% pour la femme et 40-52% pour l'homme.

2- Réalisation technique
a- MACRO - MÉTHODE Principe : Prélèvement de sang veineux sur EDTA Le sang est placé dans un tube gradué et centrifugé pour rassembler tous les globules rouges. On lit directement la hauteur du volume occupé par les globules rouges dans le tube gradué que l'on rapporte à la hauteur totale de sang. Matériel : Tube gradué à hématocrite : diamètre = 0,6 cm, longueur = 9,5 cm, graduation : 0 à 100 Pipette Pasteur + poire. Centrifugeuse à main Mode opératoire : A l’aide de la pipette pasteur, remplir le tube de sang jusqu'à la graduation 100 ; Centrifuger 10 minutes à vitesse maximum (à peu près 3000 t / mn) Lire le résultat à la hauteur de la ligne de démarcation entre les globules rouges et la couche de leucocytes. S’assurer que l’on utilise la bonne série de graduations, vers le haut en direction du 100 Résultats : Le chiffre lu est un pourcentage, le diviser par 100 pour obtenir la fraction de volume érythrocytaire. b- MICRO - METHODE Principe : Le sang est placé dans un tube capillaire et centrifugé pour rassembler tous les
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TP N 02

HEMATOLOGIE - HEMATOCRITE globules rouges. On lit le résultat rendu en fraction de volume érythrocytaire grâce à la réglette prévue à cet effet. Matériel : Tube capillaire : diamètre = 1,5 mm, longueur = 75 mm.

Cire molle en pâte à modeler Centrifugeuse à hématocrite ou à main si défaut.

Réglette spéciale hématocrite pour la lecture

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TP N 02 Produit biologique : Sang fraîchement recueilli sur EDTA : Mode opératoire : Homogénéiser le sang
• • • • • • • •

HEMATOLOGIE - HEMATOCRITE

Placer l’extrémité du tube capillaire cerclée de rouge dans le tube du prélèvement sanguin. Le sang pénètre dans le tube par capillarité, le laisser se remplir environ aux ¾. Essuyer l’extérieur du micro tube puis le désinfecter Boucher, avec la cire molle, l’autre extrémité du tube capillaire, sur environ 2 mm. Identifier les prélèvements sur chaque tube capillaire. Déposer les différents tubes capillaires dans une des rainures du plateau de la centrifugeuse. L’extrémité bouchée doit être sur le pourtour extérieur du plateau. Centrifuger à grande vitesse.

Lorsque l’on n’a pas de centrifugeuse, on place les tubes à hématocrite numérotés dans un tube de grand diamètre au fond duquel on a déposé un peu de coton. Le coté pâte à modeler du capillaire est au fond du tube. On place ce tube dans la centrifugeuse à main et on pouline à pleine vitesse pendant 10 bonnes minutes. Lecture : • Mesurer la hauteur totale de sang : T • Mesurer la hauteur des globules : G On a : Ht = G/T • Placer immédiatement après la centrifugation le tube sur un abaque de lecture • Positionner le bas du culot globulaire rouge au niveau de la graduation zéro • Positionner le haut du plasma (ménisque inférieur) au niveau de la graduation 100 en faisant glisser le tube sur l’abaque • Lire le pourcentage correspondant à la position du haut du culot globulaire rouge en dessous de l’anneau blanc des globules blancs et des plaquettes o exprimé en litre de globules rouges/litre de sang o comparé aux valeurs de référence

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TP N 02 • inférieur aux valeurs de référence

HEMATOLOGIE - HEMATOCRITE

volume moyen des globules rouges et/ou nombre de globules rouges insuffisant(s) insuffisant • supérieur aux valeurs de référence volume moyen des globules rouges et/ou un nombre de globules rouges trop élevé(s) élevé

3- Valeurs normales :
• • • • •

Hommes : 0,40 -0,50 Femmes : 0,37 -0,43 Enfants (5 ans) : 0,38 - 0,44 Nourrissons (3 mois) : 0,35 - 0,40 Nouveaux nés : 0,50 - 0,58

IIIIII- Variations pathologiques :
physiologiques: Des variations physiologiques:
-> l'hématocrite est plus élevée chez le nouveau-né, le vieillard, lors des séjours en haute altitude, -> l'hématocrite est plus basse chez les sujets de race noire que chez ceux de race blanche.

Variations pathologiques: pathologiques:
-> l'hématocrite diminue en cas de baisse du nombre ou du volume des globules rouges (anémie), mais aussi en cas d'augmentation du volume plasmatique (hémodilution comme au cours de la grossesse, dans les états œdémateux : cirrhose hépatique, insuffisance cardiaque...). -> l'hématocrite peut être faussement normale si le nombre des globules rouges et le volume plasmatique sont diminués (cas des sujets anémiques et déshydratés) ; -> l'hématocrite est augmentée si le volume et/ou le nombre de globules rouges sont eux-mêmes augmentés comme dans en cas de polyglobulie (voir maladie de Vaquez)...

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