SEGUNDA UNIDAD REGULACIN METABLICA

Procesos que afectan a la concentracin de una protena

Regulacin gnica
Genes constitutivos: Genes que se requieren en todo momento, tales como los de las enzimas de las rutas metablicas centrales, que se expresan en un nivel ms o menos constante en prcticamente todas las clulas de una especie u organismo. La expresin constante de un gen se denomina expresin gnica constitutiva.

Expresin gnica regulada. Niveles celulares de productos gnicos que disminuyen o aumentan en respuesta a seales moleculares.
Inducible. Productos gnicos que aumentan de concentracin bajo de terminadas circunstancias. El proceso se llama induccin. Ej. enzimas de reparacin del DNA. Reprimibles. Productos gnicos que disminuyen de concentracin en respuesta a una seal molecular. El proceso se llama represin.

Secuencia consenso del promotor de E. coli

Las RNA polimerasas se unen al DNA e inician la transcripcin en los promotores (sitios cercanos a los puntos donde inicia la sntesis de RNA en el molde del RNA). La regulacin del inicio de la transcripcin a menudo comporta cambios en que la RNA polimerasa interaccione con un promotor.

Protenas que regulan el inicio de la transcripcin por la RNA polimerasa

Factores de especificidad.

La subunidad 70 de la holoenzima de la RNA polimerasa de E. coli, interviene en el reconocimiento y en la unin al promotor. La sustitucin a 32 cuando las bacterias sucede cuando las clulas estn sometidas a estrs por calor.

Este promotor controla la expresin de un conjunto de genes que codifican las protenas de la respuesta al choque trmico.

Regulacin de genes procariticos

Los genes estn agrupados en el cromosoma y se transcriben juntos. La mayora de los mRNA son policistrnicos (mltiples genes en nico transcrito). El promotor nico que incia la transcripcin del grupo es el sitio de regulacin para la expresin de todos los genes del grupo.

OPERN: Grupo de genes y el promotor, ms secuencias adicionales que funcionan conjuntamente en la regulacin.

Regulacin del opern lac

En ausencia de lactosa, los genes del opern lac estn inhibidos. Z= Gen de la galactosidasa Y= galctosido permeasa A= tiogalactsido transacetilasa

Regulacin del opern lac

La glucosa, metabolizada directamente por gluclisis, es la fuente de energa preferida de E. coli.

La expresin de genes de protenas que procesen azcares como la lactosa o la arabinosa es sin duda un derroche si la glucosa es abundante. Represin por catabolito. Impide la expresin de los genes para el catabolismo de la lactosa, arabinosa y otros azcares en presencia de glucosa, incluso cuando estos azcares secundarios tambin estn presentes.

Efectos de la glucosa y la lactosa en la expresin del opern lac

Una fuerte induccin del opern lac requiere tanto lactosa (para inactivar el represor lac) como una baja concentracin de glucosa (para provocar un aumento de la [cAMP] y de la unin del AMPc a la CRP.

Induccin del opern lac

Cuando se suministra lactosa a las clulas, el opern lac se induce. 1.- Una molcula inductora (seal) se une en un sitio especfico del represor Lac, produciendo un cambio conformacional que provoca la disociacin del represor del operador. 2.- El inductor en el sistema del opern lac no es la propia lactosa sino la alolactosa, un ismero de la lactosa.

 Pueden existir inductores de la -galactosidasa pero no son sustratos (no metabolizables), tales como el isopropiltiogalactsido (IPTG).

Regulacin de la transcripcin del triptfano

Los genes de las enzimas requeridos para sintetizar un aa estn agrupados en un opern y se expresan siempre que la disponibilidad de ese aa sea inadecuada para cubrir las necesidades celulares.

Regulacin de la transcripcin del triptfano

Atenuacin de la transcripcin en el opern trp

Atenuacin de la transcripcin en el opern trp

Regulacin de la expresin gnica en los eucariotas

Porque el proceso es restrictivo?

El acceso a los promotores eucariticos est restringido por la estructura de la cromatina y la activacin de la transcripcin est asociada con mltiples cambios en la estructura de la cromatina en la regin transcrita. El 10% de la cromatina est en un estado ms condensado (heterocromatina) que el resto de la cromatina (eucromatina).

Heterocromatina = transcripcionalmente inactiva

Eucromatina = transcripcionalmente activa (slo una parte es activa)

 La metilacin en posicin 5 de los residuos de citosina en las secuencias CpG es frecuente en el DNA eucaritico, pero el DNA de la cromatina transcripcionalmente activa tiende a estar poco metilado.
Los sitios CpG de genes determinados estn menos metilados en las clulas de los tejidos donde esos genes se expresan que en aquellos en que no se expresan. El modelo global sugiere que la cromatina se prepara para la transcripcin mediante la eliminacin de barreras estructurales potenciales.

Remodelacin de la cromatina

La acetilacin y desacetilacin de las histonas juegan un papel destacado en los procesos de activacin de la cromatina para la transcripcin. Los dominios amino-terminales de las histonas internas son generalmente ricos en residuos Lys. Las histonas acetiltransferasa (HAT) acetilan residuos de Lys especficos. Las HAT citoslicas (tipo B) acetilan histonas recin sintetizadas antes de que sean importadas por el ncleo.

 La acetilacin de mltiples residuos de Lys en los dominios amino-terminales de las histonas H3 y H4 puede reducir la afinidad del nucleosoma por el DNA.
La acetilacin tambin puede impedir o promover interacciones con otras protenas implicadas en la transcripcin o en su regulacin. Cuando la transcripcin de un gen ya no es necesaria, la acetilacin de los nucleosomas en la regin donde se encuentra disminuye por accin de las histonas desacetilasa.

Potenciadores y las secuencias activadoras corriente arriba (UAS): secuencias reguladoras necesarias para regular la transcripcin

Potenciador: aumenta la transcripcin de los promotores cercanos (a centenares o incluso miles de pares de bases del sitio de inicio de la transcripcin), independiente de su orientacin en el DNA. UAS: Tambin aumenta la transcripcin. Se sitan corriente arriba y a no ms de unos pocos centenares de pb del sitio de inicio de la transcripcin.

Regulacin de la transcripcin en genes del metabolismo de la galactosa en levaduras

La galactosa es importada al interior de la clula y se convierte en galactosa 6fosfato. La transcripcin de estos genes es regulada por la accin combinada de las protenas Gal4p, Gal80p y Gal3p, con Gal4p desempeando el papel central como transactivador de unin al DNA. El complejo Gal4p-Gal80p es inactivo en la activacin gnica. La unin de la galactosa a Gal3p y su interaccin con Gal80p produce un cambio conformacional en Gal80p que hace posible que Gal4p acte en la activacin de la transcripcin.

Efectos de las hormonas esteroideas

Estrgenos, progesterona y cortisol. No se unen a receptores de la membrana plasmtica. Interaccionan con receptores intracelulares que son en s, transactivadores transcripcionales. Viajan unidas a travs de protenas transportadoras especficas desde el punto de su liberacin hasta la clula diana. En el tejido, la hormona pasa a travs de la membrana plasmtica por simple difusin y se une a su protena receptora especfica en el ncleo. El complejo hormona-receptor acta mediante la unin a secuencias de DNA muy especficas denominadas elementos de respuesta hormonal (HRE), alterando de este modo la expresin gnica.

La unin hormonal provoca cambios en la conformacin de las protenas receptoras de manera que son capaces de interaccionar con factores de transcripcin adicionales. El complejo hormona-receptor unido puede tanto potenciar como inhibir la expresin de los genes adyacentes.

Silenciamiento de genes por RNA de interferencia (silenciamiento postranscripcional)

Se pueden construir RNA para introducirlos en las clulas. El troceador corta el dplex de RNA en pequeos RNA de interferencia (siRNA), que interaccionan con el mRNA diana. El mRNA es a su vez degradado o su traduccin inhibida.

Regulacin del inicio de la transcripcin

Para inhibir el opern lac

El represor lac parece unirse tanto al operador principal como a uno de los dos sitios secundarios, con el DNA interpuesto formando un lazo.

Qu sucede con la expresin del opern lac cuando tanto la glucosa como la lactosa estn presentes?
Represin por catabolito. Impide la expresin de los genes para el catabolismo de la lactosa, arabinosa y otros azcares en presencia de glucosa, incluso cuando estos azcares secundarios tambin estn presentes.

Atenuacin de la transcripcin en el opern trp

Regulacin de la expresin gnica en los eucariotas

Transcripcin basal in vivo : Actividad inherente de los promotores y del mecanismo transcripcional en ausencia de secuencias de regulacin. Los promotores eucariticos fuertes se encuentran generalmente inactivos in vivo en ausencia de protenas de regulacin; el estado transcripcional basal es restrictivo.

Unin de la holoenzima de la RNA pol II activa a uno de sus promotores

La unin productiva de la holoenzima de la RNA pol II activa a uno de sus promotores se lleva a cabo mediante la participacin de las protenas:

Factores de transcripcin basal. Necesario en todos los promotores de la pol II. Transactivadores de unin al DNA. Se unen a potenciadores o UAS y facilitan la transcripcin. Coactivadores.

Promotores eucariticos y protenas reguladoras

Genes del metabolismo de la galactosa en levaduras

Transactivadores de unin al DNA

La fosforilacin de los factores de transcripcin nucleares puede contribuir a la regulacin