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complementariedad de las
bases nitrogenadas. Dicho
modelo fue demostrado por
Meselson y Stahl en 1957, el
nombre de semiconservativo,
es debido a que las dos dobles
hélices recién sintetizadas
poseen una cadena vieja (una
mitad vieja) y otra nueva
2. Adición de nucleótidos endirección
cadena
retardada
cadena
líder cadena
líder
Cadena Cadena
líder retardada
Las ADN polimerasas solamente sintetizan ADN en la
dirección 5' – 3’.
ADN
3´ 5´ cadena vieja
5´
3´ - OH cadena nueva
primer ARN ADN
La Primasa es una ARN polimerasa que utiliza
como molde ADN.
Primasa actúa:
• 1 vez sobre la cadena líder (1
primer)
• Múltiples veces sobre la cadena
retardada:
1 vez/fragmento Okazaki generado
Primer de RNA: 23-30 nucleótidos (E.
coli)
10 nucleótidos
(eucariotas)
Síntesis de primer
RNA (primasa)
Síntesis de un
nuevo fragmento de
Okasaki
Unión de los
fragmentos (ligasa)
Otras proteínas
involucradas en
Helicasas
Enzimas dependientes
de ATP encargadas de
separar la doble
cadena, desempeñan
un papel fundamental
para que se puedan
sintetizar los primers
en la cadena
retardada.
Proteínas de unión a ADN de cadena
sencilla (SSB, single strand binding)
Previenen la formación de estructura secundaria y
apareamientos internos en la cadena sencilla (paterna), evita
el reensamblajedel dúplex mientras ocurre la síntesis de la
cadena hija. Además protege a la cadena sencilla del ataque
de nucleases. La unión de esta proteína favorece la unión de
las siguientes.
Problemas topológicos en la
replicación
La separación de la doble hélice produce
superenrollamientos (enrollamientos del eje de la
doble hélice)
La “relajación” del superenrollamiento requiere
roturas de la doble hélice
Topoisomerasas:
Clase I y II
Topo I:
Cortan 1 cadena
DNA
Topo II:
Cortan las 2 cadenas
DNA
Topoisomerasa
ADN
Enlace covalente:
5’P(DNA)-Tyr
Horquilla de replicación: Actividades participantes
(Resumen)
Desenrollamiento doble hélice
(topoisomerasa)
Primasa
(Eliminación primer,
Síntesis relleno)
Polimerasa III
Polimerasa I
Ligasa
cadena líder
cadena
retardada
Tarea
:MODELOS DE REPLICACIÓN CONSERVATIVO Y DISPERSIVO
Modelo Conservativo: cuando el ADN doble hélice se replica
se producen dos dobles hélices, una de ellas tiene las dos
hebras viejas (está intacta, se conserva) y la otra doble hélice
posee ambas hebras de nueva síntesis.
Sitio actividad
exonucleasa
3´ -- 5´
Polimerasa ADN
(I, II y III)
Actividad polimerasa Actividad exonucleasa
Función elongación (3´)
Función correctora
ADN Polimerasa III (E. coli)
origen origen
horquilla de burbuja de
replicación replicación
replicón replicón
Polimerasas en eucariotes
Para la replicación de ADN en células eucariotas se utilizan dos
polimerasas diferentes, una para sintetizar la hélice conductora y
otra para producir la hélice retardada. La ADN polimerasa
sintetiza la cadena retardada mientras que la ADN polimerasa
sintetiza la cadena líder, ambas enzimas tienen función correctora
(exonuleasas 3´– 5´).
Control de la Replicación durante el ciclo
celular
El control de la replicación está
íntimamente ligado al ciclo celular,
cada célula hija ha de tener la misma
cantidad de DNA que la madre.
ADN primer
extremos especializados ARN
llamados telómeros ADN
(estructuras que confieren 5´ 3´ cadena vieja
3´
estabilidad al cromosoma). 5´ - OH cadena nueva
ADN primer
ARN
Todas las polimerasas
conocidas extienden la
cadena de ADN en
dirección 5’- 3’ y para
iniciar la síntesis se
requiere un primer.
La síntesis de la cadena
líder se completa hasta el
final, PERO, la cadena
discontinua (retardada) se
iría acortando en cada
ronda de replicación
5´ …_ GGGGTT GGGGTT GGGGTT GGGGTT 3´
3´ …_ CCCCAA CCCCAA 5´
La telomerasa es un complejo de
ribonucleoproteina
(RNA+proteínas) que sintetiza
un fragmento de DNA a partir de
un RNA molde. Añaden en los
extremos 3´segmentos lineales
+
de ADN. No necesitan molde ya
primasa
que intrínsecamente poseen un
Este ARN de la enzima se posiciona sobre el ADN y a partir del extremo
3‘OH comienza la síntesis de secuencias en tandem TTGGGG. Una vez
añadido algunos nucleótidos la enzima se transloca (actuando así como
molde movible) para comenzar otra vez y así se van sintetizando las
secuencias repetidas del telómero. Esto mecanismo permite el
alargamiento del extremo protuberante 3’ OH.
Replicación de
•Plásmidos
•Virus (cadena doble, sencilla, lineales o
circulares)
•ADN mitocondrial
Elementos genéticos lineales
1. Algunas ADN
polimerasas añaden la
primera base
(nucleótido) a un OH de
proteínas específicas
que se unen a los
extremos de los
cromosomas lineales.
círculo estructura
rodante (teta)
Modelo replicativo tipo
teta
Replicación bidireccional a
partir de un origen, da lugar
a intermediarios replicativos
que asemejan a la letra
griega .
forma replicativa origen
(doble cadena))
Modelo
enzima de ruptura
replicativo del
ruptura círculo rodante
ADN circular de cadena sencilla
(Fago X174)
ruptura
punto de
crecimiento
cadena
desplazada
punto de
crecimiento
Primer
1
Primer
2
síntesis del
fragmento por la
polimerasa
La reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) se basa
en la repetición de un ciclo formado por tres etapas:
Después de 25 ciclos
(30 millones de veces)
Elementos que componen la
reacción
Elementos esenciales: