TCNICAS DE CARACTERIZACIN DE LIGNINA. APLICACIN A LIGNINAS TCNICAS DE 5 ORGENES DISTINTOS.

Nour-Eddine El Mansouri, Joan Salvad Departament dEnginyeria Qumica, Universitat Rovira i Virgili Avda. Pasos Catalans, 26, 43007 TARRAGONA Tel : 977559641 Fax: 977558544 e-mail: jsalvado@etseq.urv.es RESUMEN. Se presenta una compilacin de diferentes tcnicas de caracterizacin de lignina, incidiendo en los distintos grupos funcionales de inters como, los metoxilos, OH-fenlicos, OH-alifticos, carbonilos, carboxilos y sulfonatos. Se realiz una revisin bibliografa de los distintos mtodos existentes. Se destacaron los mtodos de referencia, comparndolos con mtodos alternativos de ms fcil realizacin en su caso. Se comprob una parte de los mismos comparando los resultados entre distintos mtodos en su caso. Tambin se determin la composicin qumica de las diferentes ligninas estudiadas con las tcnicas de caracterizacin comnmente usadas para este fin. Las diferentes ligninas estudiadas en este trabajo fueron: lignina bioetanol, organosolv, sosa / antraquinona, Kraft y lignosulfonatos. Los mtodos usados fueron: anlisis elemental, lignina Klason, lignina soluble en cido, lignosulfonatos, cenizas, y determinacin de azcares elementales como mtodos analticos para determinar la composicin qumica de las ligninas. Para los grupos funcionales se ha utilizado, la aminlisis, espectroscopa ultravioleta (UV), potenciometra en medio no-acuoso, espectroscopa de RMN-1H y de 13C para los OH- fenlicos. Estas dos ltimas tcnicas se han utilizado para los OHalifticos. Para la determinacin de metoxilos se ha utilizado cromatografa de gases. As mismo la espectroscopa UV y la oximacin se utiliz para los carbonilos mientras que para los carboxilos y sulfonatos se us la potenciometra en medio no-acuoso. Una combinacin de los resultados de los grupos funcionales y del anlisis elemental ha permitido determinar la frmula expandida ms representativa de las 5 ligninas tcnicas estudiadas. PALABRAS CLAVE: ligninas, tcnicas de caracterizacin, bioetanol, organosolv, sosa/antraquinona, Kraft, lignosulfonatos, grupos funcionales, formula expandida. INTRODUCCIN. Despus de la celulosa, la lignina es el segundo polmero orgnico ms abundante en las plantas (1530%). La lignina se define como un material polifenlico, amorfo, con estructura tridimensional derivado de la unin de varios cidos y alcoholes fenilproplicos (cumarlico, coniferlico y sinaplico). Estas estructuras estn ligadas mediante multitudes de enlaces interunitarios que incluyen varios enlaces ter (-0-4, -0-4, 4-0-5) y C-C. Estas estructuras son muy complejas y dependen de la especie de la planta del que se obtiene la lignina, el proceso de pulpeo usado para fraccionarla de la celulosa, y del mtodo utilizado para su recuperacin de las lejas papeleras (Glasser, 1989). Las ligninas tcnicas se distinguen en dos categoras. Ligninas comerciales, que contiene azufre en su composicin, las cuales incluyen la lignina Kraft y lignosulfonatos existentes ya hace mucho tiempo y cuya produccin es mayor en el mundo. Las ligninas convencionales mayoritariamente usadas en la industria se obtienen de conferas. El segundo grupo son las ligninas sin azufre, como las ligninas organoslov, la del proceso sosa/antraquinona y las procedentes del proceso de sacarificacin/fermentacin de la biomasa. Estas ligninas provienen de leosas y conferas. El mayor aprovechamiento de las ligninas se destina en su uso energtico. Solamente 1-2% se asla del licor de pulpeo y se destina a usos industriales diversos. Algunas aplicaciones del uso de la lignina incluyen: fabricacin de tableros aglomerados y contrachapados, biodispersantes, surfactantes, espuma de poliuretano, resina epoxi, resinas fenlicas (Lora, 2002). Como un primer paso al aprovechamiento, se deben caracterizar para evaluar su potencial aplicacin. 1

La caracterizacin de la lignina, y ms precisamente la de los grupos funcionales, permite la elucidacin de su estructura. Sin embargo, el aumento del inters de los mtodos analticos de determinacin de dichos grupos funcionales depende de tres razones. Primero, la aparicin de nuevos tipos de ligninas tcnicas derivadas del desarrollo de nuevos mtodos de produccin de celulosa. As, la comprensin de los mecanismos de reaccin durante la delignificacin est ligado al estudio de sus propiedades funcionales. Segundo, una de las vas prometedoras para evitar el dao ambiental es cambiar su composicin funcional. Finalmente, la lignina, en el momento actual, est en la mira de varios especialistas que trabajan en varios mbitos de la ciencia e industria para buscar aplicaciones prcticas novedosas. En este sentido el anlisis de los grupos funcionales representa un indispensable mtodo de investigacin, lo que requiere un buen conocimiento de las tcnicas analticas de caracterizacin de la lignina. El presente trabajo tiene como objetivo el anlisis de los grupos funcionales tal como los metoxilos, hidroxilos alifticos y fenlicos, carbonilos, carboxilos, y sulfonatos (en lignosulfonatos), de ligninas tcnicas de cinco orgenes distintos (Kraft, lignosulfonatos, sosa/antraquinona, organoslov, lignina bioetanol), mediante diferentes mtodos analticos. Por ello, se ha procedido a revisar las distintas tcnicas existentes, escoger los mtodos de referencia y otros de fcil realizacin, y comparar entre ellos. Se proporciona, por primera vez, la frmula expandida ms representativa y completa de las distintas ligninas tcnicas bajo estudio. PARTE EXPERIMENTAL Origen, preparacin, aislamiento y tratamiento de las ligninas Las ligninas Kraft (LK) y lignosulfonatos (LS) fueron suministradas por Ligno-Tech derivadas de conferas. La lignina organoslov (OSL) fue suministrada por la Universidad de Santiago de Compostela. La lignina bioetanol (EPL) suministrada por CIEMAT (Centro de Investigaciones Energticas, Medioambientales y Tecnolgicas) de madera de chopo pretratada con explosin de vapor y sometida simultneamente al proceso de sacarificacin y fermentacin. La lignina sosa/antraquinona (SAL) fue suministrada por CELESA Celulosa de levante, S. A. de TortosaCatalua en forma de licor negro. Dicho licor se calent a 90-95C bajo agitacin rpida. Se precipit con cido sulfrico (20% en peso) a pH = 2. El precipitado formado se recuper mediante filtracin y se lav con agua caliente para solubilizar los azcares (Lin, 1992). Debido al alto contenido de cenizas (27% en la lignina Kraft) y azcares (22.3% en la lignina bioetanol) se lavaron extensivamente con cido sulfrico (1%) y con agua desionizada. Las ligninas obtenidas se secaron en un desecador hasta tener humedad uniforme y se almacenaron en botellas de plstico para los posteriores anlisis que se desarrollan a continuacin. Anlisis elemental El contenido de carbono, hidrgeno, azufre y de nitrgeno se determin con el analizador Perkin Elmer 640-C. El porcentaje de oxigeno se determin por diferencia. El porcentaje de protenas se calcul por N (%) * 6.25 segn Robert (1984). Contenido de lignina soluble en cido (LSA), lignina Klason, lignosulfonatos y azcares elementales Para las ligninas Kraft, sosa/antraquinona, organoslov, y bioetanol, la lignina klason se determin como el porcentaje del slido insoluble obtenido despus de dos etapas de hidrlisis cida (TAPPI Standard T-13), y la lignina soluble en cido (LSA), aplicando el mtodo de espectroscopa UV (Maekawa, 1989) al filtrado producido en esta hidrlisis. El mismo filtrado se analiz con la tcnica HPLC para determinar los azcares elementales (William, 1991). El contenido de los lignosulfonatos se determin mediante espectroscopa UV descrita por Lin (1992). Grupos metoxilos Los metoxilos se determinaron en un cromatgrafo de gases analizando el metanol liberado tras tratar 0,15g de lignina con 10ml de H2SO4 durante 10 min en modo de reflujo (Baloghl, 1992). 2

Grupos hidroxilos fenlicos y alifticos Los grupos OH-fenlicos se determinaron por aminlisis, espectroscopa UV, potenciometra en medio no-acuoso y espectroscopa de RMN-1H y 13C aplicadas a ligninas acetiladas. Estas dos ltimas tcnicas permitieron la determinacin simultnea de los OH-fenlicos y los OH-alifticos. Estas tcnicas se describen brevemente mas adelante. La aminlisis consiste en seguir la cintica de formacin de 1-acetilpirrolidina que equivale a la cantidad de hidroxilos fenlicos libres en la lignina. La cantidad de los hidroxilos fenlicos en la lignina se calcula extrapolando la lnea recta de la curva obtenida hasta tiempo cero (Lin, 1992). La espectroscopa ultravioleta fue desarrollada por Goldsmith (1954) y documentada por Zakis (1994) y Lin (1992). Este mtodo est basado en la diferencia de la absorcin a longitudes de onda de 300 y 360 nm entre las unidades fenlicas identificadas en solucin neutra y alcalina. La cantidad de los hidroxilos fenlicos ionizados se determinan comparando las de las muestras estudiadas en ciertas longitudes de ondas con las de sus respectivos compuestos modelos. La espectroscopa de RMN se emplea para el anlisis cuantitativo de la lignina. La RMN-1H permite cuantificar el contenido de protones pertenecientes a distintos grupos funcionales y estructuras caractersticas de la lignina (aromticos, hidroxilos, metoxi, cidos carboxilos). Los espectros se obtuvieron para ligninas acetiladas (10mg) en 0.5ml de CDCl3 en presencia del tetrametilsilano (TMS) como patrn interno de referencia. Los seales correspondientes a cada grupo funcional han sido integrados y referidos a los del grupo metoxilo para cuantificar sus contenidos (Vzquez, 1997). La espectroscopa RMN-13C es el mtodo ms conveniente para determinar los alcoholes benzlicos en la lignina. Los espectros obtenidos se registran para ligninas acetiladas disueltas en acetona-d6 bajo las condiciones citadas por Nimz (1981) y Robert (1984). La estimacin cuantitativa de diferentes grupos hidroxilos (localizados a 170.8ppm, 170ppm, y 168.9 para los OH-alifticos primarios, secundarios, y OH-fenlicos, respectivamente) se obtiene expandiendo diez veces el rea correspondiente a cada grupo funcional antes de su integracin. La combinacin de estos resultados con los obtenidos por el anlisis elemental y los metoxilos, permitieron determinar el contenido de cada grupo funcional. Los espectros de RMN 1H y 13C se obtuvieron en VARIAN GEMINI 300Hz . Grupos carbonilos El contenido de carbonilos se determin por dos mtodos: mtodo de oximacin modificado y espectroscopa UV diferencial. Todas las ligninas tcnicas estudiadas han sido analizadas segn el mtodo de oximacin modificado descrito por (Faix, 1998), que presenta una tcnica de correccin necesaria para las ligninas que contienen grupos carboxilos. La espectroscopia UV diferencial fue desarrollada por Alder y Marton en 1966 y consiste en medir la diferencia de absorbancia que se produce cuando los grupos carbonilos se reducen por el borohidrido sdico al correspondiente alcohol benzlico. La descripcin detallada del ltimo mtodo ha sido descrita por Zakis (1994). Grupos carboxilos y sulfonatos La potenciometra en medio no acuoso tiene la ventaja de determinar simultneamente los grupos carboxilos junto a los hidroxilos fenlicos; cuando se combina con un tratamiento de cambio inico permite la determinacin de los grupos cidos fuertes, grupos sulfonatos, en los lignosulfonatos. Dicha tcnica, fue desarrollada por Pobiner (1983) y descrita con detalle por Lin (1992), consiste en valorar potenciomtricamente la lignina en medio no-acuoso con el hidrxido de tetrabutilamonio en presencia de patrn interno, cido p-hidroxibenzoico. Acetilacin de ligninas Las ligninas estudiadas se acetilaron segn el mtodo descrito por Chum et al (1985) y consiste en hacer reaccionar las ligninas con una mezcla de piridina-anhdrido actico (1:1, v/v) durante 48h. El exceso de anhdrido actico se elimina usando metanol. Finalmente, se aplica un caudal suave de nitrgeno para evaporar los disolventes y se lleva a secar a vaco. 3

RESULTADOS Y DISCUSIN. Composicin qumica, anlisis elemental y frmula C9 simple de las ligninas La tabla 1 presenta los resultados de los anlisis de cenizas, contenido de ligninas y azcares elementales de las diferentes ligninas tcnicas estudiadas. La tabla 2 presenta los resultados de anlisis elemental, la formula C9 simple, peso molecular de la unidad C9 (PM) y el contenido de protenas de cada lignina estudiada. Las ligninas iniciales presentan bajo contenido de lignina total antes de su tratamiento con cido sulfrico por tener alto contenido de cenizas en el caso de lignina Kraft, o alto contenido de azcares elementales en el caso de lignina bioetanol. Las cenizas y azcares elementales pueden reducirse lavando la lignina con cido sulfrico al 1% en peso (Lin, 1992). Esto se confirma claramente al comparar los resultados obtenidos con las ligninas Kraft y bioetanol antes y despus del lavado. Las ligninas analizadas presentan un alto contenido de lignina total (que excede 94%), excepto la lignina procedente de la produccin de bioetanol y lignosulfonatos que presentan un porcentaje del 88% y del 56%, respectivamente. Las ligninas lavadas poseen un bajo contenido de cenizas y de azcares elementales (cerca de 2%). En la lignina bioetanol se encuentra un contenido significativo de azcares elementales (3.3%). Los azcares elementales predominantes en las ligninas son la glucosa y xilosa mientras que la arabinosa es componente minoritario. La galactosa y manosa estn prcticamente ausentes. Excepto la lignina bioetanol, todas las ligninas presentan un bajo contenido de nitrgeno. Esto se explica por el hecho de que en la lignina bioetanol existen enlaces fuertes entre liginina y protenas, difcilmente separables con el mtodo de extraccin usado. Tabla 1: Anlisis de humedad, cenizas, contenido de ligninas y carbohidratos de las ligninas tcnicas. KL SAL OSL EPL LS Humedad (% peso) 3.90 2.58 7.51 4.14 5.82 Cenizas (% peso) 0.44(27.10) 0.74 1.71 0.21(2.86) 9.30 Lignina total (% peso) 94.1 97.9 94.2 88 56.52 Lignina Klason (% peso) 91.3(61.2) 86.40 92.3 86.60(68.6) -----Lignina soluble en cido (% peso) 2.8(4.9) 11.50 1.9 1.40(2.9) -----Lignosulfonato (% peso) --------------------56.52 Carbohidratos ( % peso) 1.26(3.28) 2.39 1.16 3.3(22.37) -----Composicin de carbohidratos ( % peso) Glucosa 0.32(0.94) 0.29 0.36 2.7(19.84) -----Xilosa 1.03(1.83) 1.80 0.46 0.6(2.23) -----Arabinosa 0.23(0.51) 0.30 0.34 NF -----Galactosa NF NF NF NF -----Manosa NF NF NF NF -----() Resultados obtenidos antes de la purificacin de las ligninas. NF: no encontrados. Tabla 2: Composicin elemental, grupos metoxilos, frmula C9 simple, peso molecular de la unidad C9 (PM), y porcentaje de protenas de las ligninas. %C %H %N %S %O %, Formula C9 PM % OCH3 simple Protenas 65.00 5.41 0.05 1.25 28.24 10.47 C9H7,759O2,479N0,006S0,065 176.09 0.3125 KL (OCH3)0,597 186.03 1.0625 SAL 65.00 6.12 0.17 0.00 28.64 19.30 C9H7,942O2,104N0,020 (OCH3)1,166 44.84 5.15 0.02 5.85 44.14 8.70 C9H11,18O4,94N0,003 S0.40 220.89 0.125 LS (OCH3)0,73 184.07 0.125 OSL 63.51 5.55 0.02 0.00 30.92 15.20 C9H7,61O2,50N0,002 (OCH3)0,917 185.12 7.87 EPL 58.34 6.01 1.26 00.0 34.40 10.10 C9H9.95O3.62N0,166 (OCH3)0,646 4

Grupos funcionales La tabla 3 presenta los resultados de los grupos funcionales de cada lignina expresados en porcentaje en peso encontrados por diferentes mtodos analticos. Metoxilos Los grupos metxilos existen en las ligninas de todas las plantas. Su contenido no depende slo del origen de la planta, sino tambin del mtodo de aislamiento. Las conferas y leosas presentan unas medias de 14-16% y 17-22% respectivamente. Dado la importancia de ese grupo en el estudio de la funcionalidad de la lignina, se han elaborado varios mtodos analticos para su anlisis. Un resumen de estos mtodos analticos ha sido dado por Zakis (1994) y Lin (1992). Los ms comnmente usados son el mtodo de Ziel de mltiples versiones adaptadas a cada laboratorio y el mtodo basado en la cuantificacin del metanol liberado tras una hidrlisis cida descrito por Balogh (1992) que es de ms fcil realizacin. Los resultados de los metoxilos se presentan en la tabla 3. La lignina Kraft, lignosulfonato y lignina bioetanol presentan un bajo contenido de metoxilos comparando a las ligninas sosa/antraquinona y organosolv. El bajo contenido de metoxilos indica que estas ligninas poseen ms posiciones orto libres en sus anillos aromticos y, por tanto, pueden ser muy tiles en la produccin de resinas tipo lignina- fenl-formaldehdo. Tabla 3: Resultados de los grupos funcionales expresados en porcentaje de peso. Grupos funcionales KL SAL OSL EPL LS 10.47 19.30 15.20 10.10 8.70 Metoxilos Hidroxilos fenlicos Aminlisis 4.60 4.90 2.80 2.55 NA Espectroscopa UV 4.50 4.40 2.66 2.30 2.00 RMN protnica 4.10 4.50 3.33 2.65 NA RMN del C trece 4.99 5.31 3.23 2.70 NA Potenciometra en medio no-acuoso 4.54 5.10 3.56 2.92 2.55 Hidroxilos alifticos RMN protnica 10.09 3.10 3.50 4.73 -----RMN del 13C 9.80 2.45 3.20 4.55 -----Carbonilos Mtodo de oximacin con correccin 2.91 2.12 3.94 5.73 4.50 Mtodo de oximacin sin correccin 3.13 2.61 4.05 6.48 5.30 Espectroscopia UV-diferencial 2.35 1.94 2.90 5.20 4.70 7.06 1.91 3.15 2.02 4.63 Carboxilos -------------------------12.23 Sulfonatos NA: No acetilada. Hidroxilos : fenlicos y alifticos La determinacin de los grupos hidroxilos proporciona informaciones decisivas ligadas a la estructura y la reactividad de la lignina, y al mecanismo y la magnitud de su degradacin. Precisamente, los hidroxilos fenlicos son de gran importancia cuando se requiere la preparacin de varios derivados. Por ejemplo, la presencia de dichos grupos aumenta la reactividad de la lignina hacia el formaldehdo en la formulacin de resinas fenlicas. No obstante, la determinacin fiable de hidroxilos fenlicos no es una rutina fcil, aunque se han desarrollado varias tcnicas para este propsito. Ninguna de ellas ha encontrado aceptacin general hasta ahora. Faix Oskar (1992) revis algunas de estas tcnicas exponiendo brevemente el principio, ventajas y desventajas de cada una de ellas con sus respectivas referencias. Entre estas tcnicas se encuentran la aminlisis, el mtodo del periodato de sodio, la metilacin con diazometano, la espectroscopa UV, las conductimetra o potenciometra, la espectroscopa de RMN-1H y 13C aplicadas a lignina acetilada, la espectroscopa de infrarrojo por transformada de Fourier (FTIR), etc. Los protocolos experimentales de dichas tcnicas han sido revisados y documentados por Zakis (1994) y Lin (1992). Adems, existen otras tcnicas como: RMN-1H aplicada a un nuevo derivado de lignina, la lignina propianato (Shiming, 1997), y la RMN-31P (Agryropoulos, 1994). 5

Los hidroxilos alifticos se obtienen directamente por RMN-1H y 13C o indirectamente sustrayendo los OH-fenlicos de los hidroxilos totales. Los hidroxilos totales se determinan mediante el mtodo de Kuhn-Roth modificado por Bethge-Lindstm, documentado por Lin (1992). La determinacin de los hidroxilos fenlicos en las diferentes ligninas tcnicas estudiadas se ha llevado a cabo con la aminlisis como mtodo de referencia por no haber sido extensivamente criticado, la espectroscopa UV (mtodo popular por su fcil aplicacin), potenciometra en medio noacuoso (permite tener resultados de los COOH y HSO3 junto a los HO-fenlicos), RMN-1H y 13C (informaciones adicionales en cuanto a la estructura de lignina y hidroxilos alifticos). Los hidroxilos alifticos han sido determinados por las dos ltimas tcnicas. Los resultados de los OH-fenlicos de las distintas ligninas analizadas muestran que la aminlisis presenta valores mayores a la espectroscopa UV. Esta diferencia se explica por el total de OHfenlicos que determina la aminlisis incluyendo los catecoles y que la espectroscopa UV determina solamente algunas estructuras fenlicas. Las espectroscopas RMN-1H y 13C presentan valores similares por todas las ligninas analizadas salvo la lignina Kraft. Esta similitud muestra que las dos tcnicas tienen el mismo grado de precisin. Tambin presentan valores diferentes con respecto a los encontrados por la aminlisis. Esto se explica por el error acumulado cuyo origen es el acoplamiento de otras tcnicas con la RMN como el anlisis elemental y de los metoxilos, y por la dificultad de integrar diferenciadamente las reas correspondientes a los OH-fenlicos. La potenciometra en medio no-acuoso presenta valores cercanos a los encontrados por la aminlisis. Refiriendo a la aminlisis como tcnica de referencia podemos confirmar que la potenciometra en medio no-acuoso es una tcnica fiable. Al contrario de la aminlisis, la espectroscopa UV y de RMN permiten obtener informaciones adicionales en cuanto a la estructura de la lignina. Carbonilos Los carbonilos son unos de los grupos reactivos de la lignina. Su cuantificacin es de gran inters para evaluar las modificaciones que ocurren en la lignina durante el pulpeo, blanqueo, o el envejecimiento de la pulpa. Sin embargo, la determinacin de dichos grupos es difcil por su bajo contenido en las ligninas nativas y tcnicas comparando a otros grupos funcionales que contienen oxgeno. El contenido de los distintos tipos de carbonilos (totales, quinonas, cetonas, y aldehdos) depende del mtodo usado para sus determinaciones. As, la eleccin del mtodo es de gran importancia cuando se requiere estudiar la estructura de lignina. Zakis (1994) y Lin (1992) han revisado la mayora de los mtodos destinados para la determinacin de los carbonilos y han destacado el mtodo de oximacin y la reduccin con el borohidrido sdico o hidrogenacin cataltica cmo los ms comnmente usados para la determinacin de los carbonilos totales. Asimismo, la espectroscopa UV permite determinar diferenciadamente diferentes tipos de grupos carbonilos (cetonas y aldehdos) cuando se combina con la reduccin con el NaBH4 . Segn la literatura el mtodo de oximacin es el preferido de los mtodos hmedos y se considera como mtodo de referencia cuando se requiere desarrollar otro mtodo o comparar entre diferentes mtodos analticos de determinacin de los grupos carbonilos. Este mtodo ha sido modificado y comparado con el clsico y que segn Faix Oskar permite tener resultados precisos y reproducibles en poco tiempo y es de ms fcil realizacin. Los detalles de la comparacin entre las dos versiones del mtodo de oximacin han sido reportados por Faix Oskar (1998). Recientemente, Sevillano (2001) ha desarrollado un nuevo mtodo con RMN-19F que permite la distincin entre diferentes grupos carbonilos tales como los aldehdos, cetonas y quinonas. La espectroscopa de infrarrojo por transformada de Fourier (FTIR) ha sido investigada ltimamente por Faix Oskar. Dada la existencia de varios protocolos analticos que permiten la cuantificacin de grupos carbonilos hemos usado el mtodo de oximacin modificado y la espectroscopa UV anteriormente descritos brevemente. Los resultados de diferentes ligninas tcnicas se ven reflejados en la tabla 3. Los resultados de diferentes ligninas tcnicas muestran que el mtodo de oximacin presenta valores mayores a la espectroscopa UV debido a la existencia de otras formas de grupos carbonilos subestimados por la espectroscopia UV. Por ejemplo, en formas de quinona existentes en ligninas altamente oxidadas, especialmente ligninas tcnicas. Tambin se explica por la reaccin completa de 6

los grupos carbonilos menos reactivos durante la oximacin (por ejemplo, -CO en las unidades de OH-fenlicos libres). Adems, la espectroscopa UV solamente permite la determinacin de las estructuras tipo aldehdos y cetonas en las ligninas. Carboxilos Los grupos carboxilos se presentan en concentraciones extremadamente pequeas en las ligninas nativas, y en concentraciones significativas en ligninas sometidas a tratamientos biolgicos o qumicos por la ruptura de los anillos aromticos de la lignina que lleva a un aumento de las entidades que poseen los carboxilos. As, la cuantificacin de dichos grupos proporciona informacin acerca del grado de su degradacin y modificacin. Proporciona tambin informacin adicional acerca de su solubilidad. Existen varias tcnicas analticas para su determinacin, y la mayora de las aceptadas estn basadas directa o indirectamente en la acidez de estos grupos. En la neutralizacin de estos grupos se usa la conductometra o potenciometria para determinar el punto de equivalencia. Bajo condiciones ptimas, dichos mtodos tienen la ventaja de determinar diferenciadamente los grupos carboxilos y los hidroxilos fenlicos de carcter dbil; cuando se combinan con un tratamiento de cambio inico, los mtodos de valoracin mencionados se usan tambin para determinar los grupos cidos fuertes en los lignosulfonatos como los grupos sulfonatos. Dichas tcnicas han sido documentadas por Lin (1992) y Zakis (1994). Recientemente, se han realizado estudios de diferentes tcnicas de caracterizacin de ligninas focalizados en la composicin qumica y los grupos funcionales de ligninas. Referente a la determinacin de grupos carboxilo se ha realizado una comparacin entre mtodos de valoracin en medio acuoso y no-acuso (Gosselink, 2003). Se ha demostrado que la tcnica en medio no-acuosos es fiable y reproducible en cuanto a los carboxilos. Los resultados de carboxilos de las distintas ligninas estudiadas, presentados en la tabla 3, han sido determinados con valoracin en medio no acuoso (Pobiner, 1983). Sulfonatos Los lignosulfonatos generados en el proceso al bisulfito son una mezcla de un polmero derivado soluble en agua y los carbohidratos degradados. Los cidos sulfnicos alifticos forman parte de la lignina asegurando su solubilidad en agua en la presencia de sus iones (Na+, Ca2+, Mg2+, NH4+, etc). Existen distintas tcnicas que permiten determinar estos grupos y se dividen en dos grupos: Mtodos basados en estimar el azufre y asumir que slo existe en los sulfonatos (Lin, 1992), y mtodos basados en la medicin directa de los sufonatos con conductometra (Kaltz, 1984) o potenciometra (Pobiner, 1983). Los resultados de los sulfonatos en el lignosulfonato se reflejan en la tabla 3. Frmula molecular expandida. Las frmulas moleculares expandidas de cada lignina tcnica se presentan en la tabla 4. Estas frmulas han sido obtenidas combinado los resultados del anlisis de la composicin elemental y los grupos funcionales. En esta frmula se resume toda la informacin acerca de la estructura de cada lignina. Tabla 4: Diferentes formulas moleculares expandidas ligninas Formula molecular expandida C9 C9H6.01O0.2694N0.006S0.065(OCH3)0.597(OHAr)0.425(OHR)1.046(OCO)0.183(OOHCOOH)0.277 KL C9H7.032O0.974N0.020S0.065(OCH3)1.166(OHAr)0.493(OHR)0.338(OCO)0.141(OOHCOOH)0.079 SAL C9H10,36O2,88N0,003S0,07(OCH3)0,73(OHAr)0,26(CO)0,35(OOHCOOH)0,23(HSO3)0,33 LS OSL EPL C9H6.705O1.205N0.002(OCH3)0.971(OHAr)0.396(OHR)0.38(OCO)0.26(OOHCOOH)0.13 C9H9.036O2.270N0.166(OCH3)0.646(OHAr)0.289(OHR)0.515(OCO)0.378(OOHCOOH)0.083

AGRADECIMIENTOS. Los autores agradecen a la empresa Ligno-Tech, la Universidad de Santiago de Compostela, CIEMAT Centro de investigaciones energticas, medioambientales y tecnolgicas, la empresa CELESA Celulosa de levante, s. a. Pastas Especiales de celulosa de Tortosa-Catalua por habernos suministrado las distintas ligninas analizadas. Universidad Rovira y Virgili-URV (financiacin de la beca), y al Ministerio de Ciencia y Tecnologa, financiando el proyecto PPQ2001-1215-C03-01, Generalitat de Catalunya, financiando el proyecto SGR00323. 7

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