UNIVERSIDAD DE LA FRONTERA FACULTAD DE INGENIERA CIENCIAS Y ADMINISTRACIN DEPARTAMENTO DE INGENIERA QUMICA

IIQ 434 MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

INFORME DE LABORATORIO MEDIOS DE CULTIVO: MEDIOS NUTRITIVOS, MEDIOS SELECTIVOS, MEDIOS DIFERENCIALES

Integrantes:

Solhzetniczi Fritz Pea Alejandro Parra Mena Sebastin Rocha Mella Alejandra Rubio Valenzuela

Profesores: Carrera:

Dr. Csar Burgos Daz Paulina Torres Corales Ingeniera Civil en Biotecnologa

17 de Julio de 2013

RESUMEN 1 INTRODUCCION 2 OBJETIVOS

Producir un yogurt mediante una fermentacin lctica. Determinar los productos de fermentacin responsables del descenso de pH durante la fermentacin y la concentracin microbiana final.

3 MATERIALES Y METODOS
3.1 MATERIALES
Cultivo iniciador (cultivo de yogurt termfilos FD-DVS YC-380 - Yo-Flex, CHR HANSEN. Cultivo de la cepa mixta definida que contiene Streptococcus thermophilus y Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus mezclado en una forma liofilizada conveniente para producir yogurt. YC-380 va a producir yogurt con una viscosidad media y fuerte sabor. El cultivo es ideal para la fabricacin de los siguientes tipos de yogur: movido y congelado. Cultivos liofilizados deben ser almacenados a -18 C (0 F) o menos. Si los cultivos se almacenan a -18 C (0 F) o menos, la vida til es de al menos 24 meses. Si se almacenan a 5 C (41 F), la vida til es de al menos 6 semanas. Retire los cultivos del congelador justo antes de su uso. No descongele ESTOS Cultivos. Sanear la parte superior de la bolsa con cloro. Abra la bolsa y verter la grnulos liofilizados directamente en el producto pasteurizado mediante agitacin lenta. Agitar la mezcla durante 10-15 minutos para distribuir uniformemente el cultivo. Tubos de ensayo con 9 ml solucin salina: NaCl 0,85. 500ml de leche entera, marca Lider 500ml de leche entera sin lactosa, marca Loncoleche Vaso precipitado de 1L, estril Sensor de pH (pH metro) Agitador magntico Bao de agua a 45C Tubos de ensayo con 9 ml de solucin salina, NaCl 0,85, estriles Pipeta de 1 ml, estril Placas Petri, estriles Agar de soja tripticasa (TSA):

Peptona de casena 15 g Peptona de soya 5g Cloruro de sodio 5g Agar-agar 15 g Agua destilada 1000 ml pH final : 7,3. Se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min. Termmetro Estufa de incubacin Termmetro Microscopio Reactivos para la tincin de Gram

Fig 1. Informacin nutricional de la leche con lactosa (izquierda) y sin lactosa (derecha).

3.2 METODOLOGA
1. En primera instancia se realiz la pasteurizacin de la leche, depositando y calentando la leche en una olla hasta alcanzar una temperatura de 90C. 2. Para la inoculacin, se verti la leche en un vaso de precipitado de un 1 L, provisto de una sonda de pH. Se dej enfriar la leche hasta que tenga una temperatura de 45C. Se adicion el cultivo starter del yogurt (cepas de bacterias Streptococcus thermophilus y Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), agitando la leche por 2 min para distribuirlo homogneamente. 3. En el proceso de incubacin, el vaso precipitado se someti a una temperatura de 45C durante 8 h en bao de agua. Transcurrido el tiempo se observ la coagulacin del producto adquiriendo una mayor consistencia. 4. Se fue analizando el pH durante 8 horas, con el objetivo de construir un grfico de tiempo v/s pH. 5. Se realizaron diluciones seriadas hasta 10-2, 10-8 y 10-7 para muestras de leche sin lactosa, yogurt con lactosa y yogurt sin lactosa, respectivamente. Para esto se transfiri 1 ml de la muestra en el primer tubo de ensayo, el cual corresponde a la

dilucin 10-1, y enseguida se transfiri 1 ml de esa muestra al siguiente tubo de ensayo, y as sucesivamente hasta completar la dilucin requerida. 6. Se prepar el agar TSA. 7. Se transfiri 1 ml de la dilucin 10-2 de leche sin lactosa en 2 placas Petri, y se agreg agar a una temperatura que sea apta de tocar con la mano, o sea no quemarse. Lo descrito anteriormente corresponde a la siembra en profundidad por duplicado. 8. Se realiz un proceso similar al descrito en el punto 8 para las diluciones de yogurt con y sin lactosa, pero para ellos se consideraron las diluciones 10-6, 10-7 y 10-8 de yogurt con lactosa y las diluciones 10-5, 10-6 y 10-7 de yogurt sin lactosa para la siembra en profundidad por duplicado. 9. Se incubaron las muestras a 45C durante 24 horas. 10. Se realiz un recuento del cultivo para determinar el crecimiento bacteriano.

4 RESULTADOS
Tiempo (horas) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 pH yogurt con lactosa 6,53 6,44 5,75 4,87 4,43 4,11 4,02 3,95 3,90 pH yogurt sin lactosa 6,36 6,42 5,87 4,94 4,55 4,18 4,11 4,04 3,98

Tabla 1. pH de yogurt con y sin lactosa obtenido cada 1 hora, durante 8 horas de incubacin a 412C.

7 6.5 6 5.5 5 4.5 4 3.5 3 0 2 4 6 8 10 Leche con lactosa Leche sin lactosa

pH

Tiempo (horas) Grfico 1. Variacin del pH cada 1 hora a 412C en muestras de yogurt con lactosa y sin lactosa.

5 DISCUSIN Y CONCLUSIN

6 REFERENCIAS