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FUNDAMENTOS DE ANLISIS INSTRUMENTAL. 7 RELACIN DE PROBLEMAS. 1.- Las sustancias A y B tienen tiempos de retencin de 16.40 y 17.63 min, respectivamente, en una columna de 30 cm. Una especie no retenida pasa a travs de la columna en 1.30 min. Las anchuras mximas (en la base) de A y B son 1.11 y 1.21 min, respectivamente. Calcule: a) la resolucin entre los compuestos A y B b) el nmero medio de platos de la columna c) la altura de plato d) la longitud de la columna necesaria para lograr una resolucin de 1.5 e) el tiempo necesario para eluir la sustancia B en la columna que da un valor de RS de 1.5 2.- La figura muestra el cromatograma de una mezcla de dos componentes en una columna cromatogrfica de lquidos empaquetada, de 25 cm. La velocidad de flujo fue de 0.40 mL min-1. a) Determina los factores de retencin para los dos componentes b) Calcula la resolucin de los dos picos c) Halla la altura media de plato d) Qu longitud de la columna se necesitaria para alcanzar una resolucin de 1.75? e) Supongamos que la longitud de la columna se ha fijado a 25 cm y que el material de empaquetamiento est fijo. Qu medidas podra usted tomar a fin de incrementar la resolucin para lograr la separacin en lnea base? f)Hay alguna medida que usted pudiera usar para lograr una mejor separacin en menos tiempo con la misma columna que en el apartado anterior?

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3.- El aldehdo cinmico es el compuesto del que depende el sabor de la canela. Tambin es un antimicrobiano potente, que forma parte de ciertos aceites esenciales. La respuesta de la cromatografa de gases (CG) con una muestra artificial que contiene seis componentes de aceites esenciales y metilbenzoato como patrn interno se muestra en la siguiente figura:

La siguiente figura es una ampliacin de la regin cerca del pico del aldehdo cinmico.

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Calcula: a) el nmero de platos tericos para el compuesto de estudio. b) La columna de slice fundida tiene 0.25 mm x 30 cm de dimetro y longitud de columna respectivamente, y con un tamao de partcula de 0.25 m. Determina la altura de plato terico. c) Se obtienen datos cuantitativos empleando metilbenzoato como patrn interno para los compuestos aldehdo cinmico y timol tal y como se muestra en la siguiente tabla. Sabiendo que los valores de rea relativas para cada compuesto se calculan dividiendo el rea del pico del componente/rea del patrn interno, calcula: el rea relativa para los dos compuestos anteriormente mencionados, determine las ecuaciones de la curva de calibrado para cada componente y a partir de los datos del apartado anterior determina qu componente tiene mayor sensibilidad. rea de pico abosluta Concentracin (g mL-1) 0.50 0.75 1.30 2.50 Metil benzoato 18225 18523 17895 18329 Aldehdo cinmico 12325 20140 35462 68090 Timol 20238 36890 69975 130215

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PARMETROS CROMATOGRFICOS
Seal
Compuesto A

tRB tRA

Compuesto A

Compuesto B

W1/2A

W1/2B

to WA Tiempo muerto WB Tiempo (min)

1. Tiempo de retencin (tR) 2. Factor de capacidad (K)

K'=

t R t0 t0

o bien

K'=

VR VO V0

3. Selectividad () Factor de selectividad, tambin llamado retencin relativa:

1, 2 =
4. Eficacia de la columna

t R2 t0 K 2 = t R1 t 0 K1

- Nmero de plato terico (N):

t N = 16 R

tR N = 5.54 1/ 2

: anchura de la base del tringulo construido por el pico. 1/2: anchura de la media altura del pico. - Altura de plato terico (H): 6. Resolucin (RS)

H=L/N

Rs =

(t R 2 t R1 ) 2(t t ) = R 2 R1 ( 2 + 1 ) / 2 ( 2 + 1 )

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1.- Las sustancias A y B tienen tiempos de retencin de 16.40 y 17.63 min, respectivamente, en una columna de 30 cm. Una especie no retenida pasa a travs de la columna en 1.30 min. Las anchuras mximas (en la base) de A y B son 1.11 y 1.21 min, respectivamente. Calcule: a) la resolucin entre los compuestos A y B b) el nmero medio de platos de la columna c) la altura de plato d) la longitud de la columna necesaria para lograr una resolucin de 1.5 e) el tiempo necesario para eluir la sustancia B en la columna que da un valor de RS de 1.5 a)

Rs =

(t R 2 t R1 ) 2(t t ) 2 * (17.63 16.40) = R 2 R1 = = 1.06 (2 + 1 ) / 2 (2 + 1 ) 1.11 + 1.21

Es una resolucin menor que 1.5, lo que indica que no hay separacin de los compuestos a lnea base. Este valor nos indica que la resolucin es aproximadamente del 90%. b)

t RA 16.40 N A = 16 * = 16 * = 3493 1 . 11 A
2

t RB 17.63 N B = 16 * = 16 * = 3397 1.21 B

2

N AB =
c)

N A + N B 3493 + 3397 = = 3445 2 2

H=

L 30.0cm = = 8.7 x10 3 cm N 3445

d) La resolucin se relaciona proporcionalmente con la raz cuadrada del nmero de platos:

N1 Rs1 = Rs2 N2
Siendo 1 la columna de 30 cm y 2 la columna a calcular

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1.06 3445 = N 2 = 6900 L = H * N = 8.7 x10 3 * 6900 = 60cm 1.5 N2

Nos vamos a otra columna el doble de larga, lo que dobla los tiempos de retencin y por tanto de anlisis. e) en este caso:

t R1 Rs12 17.63 1.06 2 = = t R 2 =35 min . t R 2 Rs22 tR 2 1.52

En el siguiente problema se plantearn otras estrategias para aumentar la resolucin sin que se incremente el tiempo de anlisis.

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2.- La figura muestra el cromatograma de una mezcla de dos componentes en una columna cromatogrfica de lquidos empaquetada, de 25 cm. La velocidad de flujo fue de 0.40 mL min-1. a) Determina los factores de retencin para los dos componentes b) Calcula la resolucin de los dos picos c) Halla la altura media de plato d) Qu longitud de la columna se necesitaria para alcanzar una resolucin de 1.75? e) Supongamos que la longitud de la columna se ha fijado a 25 cm y que el material de empaquetamiento est fijo. Qu medidas podra usted tomar a fin de incrementar la resolucin para lograr la separacin en lnea base? f)Hay alguna medida que usted pudiera usar para lograr una mejor separacin en menos tiempo con la misma columna que en el apartado anterior?

a)

KA '=

t R A t0 30 5 = =5 t0 5

KB ' =

t R B t0 50 5 = =9 t0 5

b)

Rs =

2(t R 2 t R1 ) 2 * (50 30) = = 1.025 (2 + 1 ) 23 + 16

De la grfica, prolongando hasta el eje, sacamos las anchuras de pico: 1 = (38-22) = 16 min 2 = (62-39) = 23 min No hay resolucin a lnea base

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c)

t RA 30 N A = 16 * = 16 * = 56.25 16 A
2

t RB 50 N B = 16 * = 16 * = 75.62 23 B
2

N AB = H=
d)

N A + N B 56.25 + 75.62 = = 65.93 2 2 L 25cm = = 0.379cm N 65.93

N1 Rs1 = Rs2 N2
Siendo 1 la columna de 25 cm y 2 la columna a calcular

1.025 65.93 = N 2 = 192.215 L = H * N = 0.379 *192.215 = 72.85cm 1.75 N2

Nos vamos a una columna casi tres veces la longitud original. e) Si la Fase Estacionaria es constante ( no vara L, ni tamao de partcula, dimetro o espesor de la capa lquida, es decir N) podemos actuar sobre la fase mvil: -Cambiar de eluyente, utilizar otros disolventes con mayor capacidad de elucin. - Adicin de sustancias a la fase acuosa, como tampones (cambio de pH y naturaleza del tampn), pares inico, ligandos formadores de complejos, etc. -Variacin de la temperatura. f) - aumentando el caudal de la fase mvil - elucin en GRADIENTE - variando la temperatura Actuando sobre la fase estacionaria, la resolucin se puede variar actuando sobre: -Longitud de la columna (aumenta los tiempos de retencin y de anlisis por tanto) -Tamao de partcula -Dimetro de la columna -Espesor de la capa lquida.

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3.- El aldehdo cinmico es el compuesto del que depende el sabor de la canela. Tambin es un antimicrobiano potente, que forma parte de ciertos aceites esenciales. La respuesta de la cromatografa de gases (CG) con una muestra artificial que contiene seis componentes de aceites esenciales y metilbenzoato como patrn interno se muestra en la siguiente figura:

La siguiente figura es una ampliacin de la regin cerca del pico del aldehdo cinmico.

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Calcula: a) el nmero de platos tericos para el compuesto de estudio. b) La columna de slice fundida tiene 0.25 mm x 30 cm de dimetro y longitud de columna respectivamente, y con un tamao de partcula de 0.25 m. Determina la altura de plato terico. c) Se obtienen datos cuantitativos empleando metilbenzoato como patrn interno para los compuestos aldehdo cinmico y timol tal y como se muestra en la siguiente tabla. Sabiendo que los valores de rea relativas para cada compuesto se calculan dividiendo el rea del pico del componente/rea del patrn interno, calcula: el rea relativa para los dos compuestos anteriormente mencionados, determine las ecuaciones de la curva de calibrado para cada componente y a partir de los datos del apartado anterior determina qu componente tiene mayor sensibilidad. rea de pico abosluta Concentracin (g mL-1) 0.50 0.75 1.30 2.50 a)
2

Metil benzoato 18225 18523 17895 18329

2

Aldehdo cinmico 12325 20140 35462 68090

Timol 20238 36890 69975 130215

t 19 N = 16 * R = 16 * = 23104 0.5

De la grfica, prolongando hasta el eje, sacamos las anchuras de pico: = (19.25-18.75) = 0.5 min

b)

H=

L 30m = = 0.13cm N 23104

c) Se trata del mtodo del patrn interno, para obtener la seal analtica, se divide el rea de pico del analito por la del patrn interno. Entonces se hace el ajuste por mnimos cuadrados
reas de pico corregidas Concentracin (g mL-1) 0.50 0.75 1.30 2.50 Aldehdo cinmico 0.676 1.087 1.982 3.715 Timol 1.110 1.991 3.910 7.104

Aldehdo cinmico: y = 1.514*rea corregida - 4.67x10-2 Timol: y = 2.975xrea Corregida 2.27x10-1 Mayor sensibilidad presenta el Timol, ya que la pendiente de la recta de regresin entre la seal analtica y la concentracin es mayor, luego, para obtener el mismo intervalo de seal analtica, se necesita un intervalo de concentraciones menores. Indicio es que podemos determinar concentraciones ms pequeas, pero el lmite de deteccin como hemos visto no solo depende de la pendiente de la recta de calibrado.