El cultivo in vitro de plantas: ventajas y aplicaciones

Alejandro Atarés
Grupo de Cultivo in vitro y Mejora Vegetal
I.B.M.C.P. – Departamento de Biotecnología
Universidad Politécnica de Valencia
 El cultivo in vitro de plantas:
ventajas y aplicaciones

Introducción al cultivo in vitro de plantas

Definición
Métodos y aparatos
Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas
La multiplicación de plantas
La mejora sanitaria
La mejora genética
El método haplo-diploide
El aprovechamiento de la variación intraespecífica y extraespecífica
La transformación genética
Ventajas del cultivo in vitro
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Definición de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de técnicas que permiten el cultivo de las

células y tejidos vegetales en condiciones axénicas y el
aprovechamiento de su totipotencia, así como de su
aptitud para la variación y capacidad de modificación
genética
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Definición de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de técnicas que permiten el cultivo de las

células y tejidos vegetales en condiciones axénicas y el
aprovechamiento de su totipotencia, así como de su
aptitud para la variación y capacidad de modificación
genética
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Cultivo de células y tejidos vegetales

Requerimientos para el crecimiento de células y tejidos vegetales

Aire

Luz

Agua

Nutrientes
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Definición de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de técnicas que permiten el cultivo de las

células y tejidos vegetales en condiciones axénicas y el
aprovechamiento de su totipotencia, así como de su
aptitud para la variación y capacidad de modificación
genética
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Cultivo axénico

Desarrollado en un ambiente donde no hay ningún otro organismo vivo

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Condiciones axénicas

Métodos de esterilización

P
T

t
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Condiciones axénicas

Esterilización del material vegetal

NaOCl (0,25-1%) Agua desionizada estéril

+ 7X (gotas)

5 minutos
10 minutos
10-30 minutos 15 minutos
Agitación
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Condiciones axénicas

Trabajo sin contaminación

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Condiciones axénicas

Diseño del laboratorio

Almacenamiento (temperatura ambiente y frío) Áreas externas
Lavado (puede estar junto a la de esterilización)
Otras (despachos, salas de reunión, recepción, etc)
Preparación-esterilización de los medios de cultivo
Transferencia (condiciones de esterilidad)
Incubación de los cultivos (condiciones controladas) Áreas protegidas

Transferencia Incubación
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Definición de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de técnicas que permiten el cultivo de las

células y tejidos vegetales en condiciones axénicas y el
aprovechamiento de su totipotencia, así como de su
aptitud para la variación y capacidad de modificación
genética
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Totipotencia
Capacidad de regeneración de una planta entera a partir de una célula o
un grupo de células
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Totipotencia
Células vegetales totipotentes
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Totipotencia
Organogénesis adventicia
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Totipotencia
Embriogénesis somática
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Definición de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de técnicas que permiten el cultivo de las

células y tejidos vegetales en condiciones axénicas y el
aprovechamiento de su totipotencia, así como de su
aptitud para la variación y capacidad de modificación
genética
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Aptitud para la variación genética

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Aptitud para la variación genética

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Definición de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de técnicas que permiten el cultivo de las

células y tejidos vegetales en condiciones axénicas y el
aprovechamiento de su totipotencia, así como de su
aptitud para la variación y capacidad de modificación
genética
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Capacidad para la modificación genética

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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicación de plantas: Micropropagación

La mejora sanitaria: Microinjerto
La mejora genética: Incremento de variabilidad genética
Método haplodiploide
Transformación genética
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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicación de plantas: Micropropagación

La mejora sanitaria: Microinjerto
La mejora genética: Incremento de variabilidad genética
Método haplodiploide
Transformación genética
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Micropropagación

Multiplication
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Micropropagación
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Micropropagación
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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicación de plantas: Micropropagación

La mejora sanitaria: Microinjerto
La mejora genética: Incremento de variabilidad genética
Método haplodiploide
Transformación genética
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Microinjerto en cítricos

Variedad

Patrón
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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicación de plantas: Micropropagación

La mejora sanitaria: Microinjerto
La mejora genética: Incremento de variabilidad genética
Método haplodiploide
Transformación genética
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Incremento de la variabilidad genética

Variación somaclonal: alternativa a otros agentes mutagénicos

Ficus benjamina

SC-Fb-’Green snow’
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Incremento de la variabilidad genética

Rescate de embriones: solución de incompatibilidad sexual
Polen
Especie A

Polinización

Esterilización Fruto inmaduro

Pistilo
Especie B

Aislamiento de
semillas inmaduras
con proembriones Semilla inmadura Híbrido
con embrión híbrido interespecífico
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Incremento de la variabilidad genética

Rescate de embriones: solución de incompatibilidad sexual

Lilium Lilium
x
auratum henry
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Incremento de la variabilidad genética

Hibridación somática

Permite la unión de dos materiales

con incompatibilidad sexual
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Incremento de la variabilidad genética

Hibridación somática
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Incremento de la variabilidad genética

Hibridación somática

En función de la información
genética que se combina de
ambos parentales se habla de:
- hibridación simétrica
- hibridación asimétrica
- cibridación
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Incremento de la variabilidad genética

Hibridación somática

Hay distintos métodos de fusión de

protoplastos:
- químicos
- eléctricos
- combinados
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Incremento de la variabilidad genética

Hibridación somática
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Incremento de la variabilidad genética

Hibridación somática
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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicación de plantas: Micropropagación

La mejora sanitaria: Microinjerto
La mejora genética: Incremento de variabilidad genética
Método haplodiploide
Transformación genética
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El método haplo-diploide

Obtención de plantas haploides

Estadios florales Cultivo de anteras Regeneración plantas haploides

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El método haplo-diploide

Ejemplo de mejora del arroz

Oryza sativa x O. glaberrima

Obtención de dobles haploides

Selección
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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicación de plantas: Micropropagación

La mejora sanitaria: Microinjerto
La mejora genética: Incremento de variabilidad genética
Método haplodiploide
Transformación genética
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La transformación genética

Cocultivo de explantes con Agrobacterium

(+)

Plántula de tomate Precultivo A. tumefaciens Infección Co-cultivo

Cultivo sin PS (2-3 días) Selección Desarrollo TG1

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La transformación genética

Soja

Algodón Maíz
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La transformación genética
Informe anual del I. S. A. A. A.
(INTERNATIONAL SERVICE FOR THE ACQUISITION OF AGRI-BIOTECH APPLICATIONS)
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La transformación genética

Presente y futuro
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagación

Uniformidad y reproducibilidad
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagación

Uniformidad y reproducibilidad
Obtención de un producto “superior”
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagación

Uniformidad y reproducibilidad
Obtención de un producto “superior”
Mayor control sanitario
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagación

Uniformidad y reproducibilidad
Obtención de un producto “superior”
Mayor control sanitario
Aplicable a un amplio espectro de especies
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagación

Uniformidad y reproducibilidad
Obtención de un producto “superior”
Mayor control sanitario
Aplicable a un amplio espectro de especies
Mejor planificación durante el año
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagación

Uniformidad y reproducibilidad
Obtención de un producto “superior”
Mayor control sanitario
Aplicable a un amplio espectro de especies
Mejor planificación durante el año
Ahorro de espacio
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagación

Uniformidad y reproducibilidad
Obtención de un producto “superior”
Mayor control sanitario
Aplicable a un amplio espectro de especies
Mejor planificación durante el año
Ahorro de espacio
Alta tasa de multiplicación
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagación

Uniformidad y reproducibilidad
Obtención de un producto “superior”
Mayor control sanitario
Aplicable a un amplio espectro de especies
Mejor planificación durante el año
Ahorro de espacio
Alta tasa de multiplicación
Disminución de costes
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora sanitaria

Saneamiento del material cultivado

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora sanitaria

Saneamiento del material cultivado

Eliminación de enfermedades de origen vírico
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora sanitaria

Saneamiento del material cultivado

Eliminación de enfermedades de origen vírico
Aumenta la seguridad en el intercambio de germoplasma
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora genética

Mayor rapidez en la obtención de ciertos logros

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora genética

Mayor rapidez en la obtención de ciertos logros

Objetivos difíciles de conseguir por los métodos clásicos
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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora genética

Mayor rapidez en la obtención de ciertos logros

Objetivos difíciles de conseguir por los métodos clásicos
Objetivos inabordables por los métodos convencionales