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Cdigo: GRL-006
Versin: 4.0
INFORMACIN BSICA
NOMBRE DE LA PRCTICA:
Hidrlisis de Carbohidratos.
PRCTICA No.
ASIGNATURA: Bioqumica.
TEMA DE LA PRCTICA: Biomolculas.
LABORATORIO A UTILIZAR: Laboratorio de Bioqumica.
CONTENIDO DE LA GUA
OBJETIVO
Detectar mediante pruebas qumicas la formacin de monosacridos como producto de la hidrlisis cida de
polisacridos y disacridos como el almidn, la celulosa y la sacarosa
INTRODUCCIN
El trmino carbohidrato es usado para nombrar una gran cantidad de polihidroxialdehdos y
polihidroxicetonas que por condensacin polimrica forman molculas denominadas disacridos o
polisacridos. El almidn de los alimentos, el azcar de cocina, la celulosa de la madera, el algodn y el
papel son algunos ejemplos de carbohidratos que comnmente conocemos.
Los carbohidratos generalmente se clasifican en monosacridos, disacridos o polisacridos. Los
monosacridos son azucares simples como la glucosa y la fructosa que no se pueden convertir por hidrlisis
en molculas ms pequeas, en cambio los disacridos o polisacridos son azucares complejos formados por
dos o ms monosacridos, por ende cuando son hidrolizados pueden producir este tipo de azucares.
En esta prctica de Laboratorio se hidrolizara almidn, sacarosa y celulosa por medio de la adicin de cido
diluido, el estudiante estar en capacidad de comprobar la formacin de los monosacridos
correspondientes por medio de la adicin del reactivo de Fehling.
MARCO TERICO
1. LOS CARBOHIDRATOS
Los carbohidratos representan aproximadamente un 50% de la biomasa presente en el planeta, lo que los
hacen las biomolculas ms abundantes sobre la superficie terrestre. stas son muy importantes porque
conforman la estructura del material biolgico, juegan un papel importante en el reconocimiento molecular y
son la principal forma metablica de almacenamiento de energa. Usualmente, menos del 1% de la luz del sol
disponible es convertida en energa qumica potencial por fotosntesis, pues la energa del sol es almacenada
en los enlaces qumicos de los componentes estructurales de los carbohidratos. Si esta biomasa es procesada
eficientemente, ya sea qumica o biolgicamente, extrayendo la energa almacenada en los enlaces qumicos,
la energa producida se combinar con el oxgeno presente, oxidando el carbono y produciendo CO2 y H2O,
este proceso es cclico, pues el CO2 producido estar disponible para producir nuevamente biomasa. El
hombre desde sus inicios ha sacado provecho de la energa almacenada en los enlaces qumicos de la
biomasa, por medio de la quema de combustibles y el consumo de plantas para la nutricin (McKendry,
2002).
1.1 LA SACAROSA
La sacarosa (azcar comn) sintetizada en las plantas, es un producto intermedio de la fotosntesis, en la que
la energa de la luz del sol es reunida y usada para la sntesis de glucosa de CO2 y H2O (Cooper, 2000). Se trata
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de un disacrido formado por glucosa y fructosa (Figura 1) unidos por un enlace glicosdico el cual bloquea
los dos enlaces de los grupos carbonilo, por lo cual es considerado como un azcar no reductor. Este azcar
no se oxida y por tanto se obtienen resultados negativos al reaccionar con el reactivo de Fehling. La sacarosa
se puede hidrolizar (incorpora una molcula de agua) por diferentes medios, ya sean por accin de la enzima
invertasa presente en la saliva y el tracto digestivo o por accin de cidos diluidos como el cido clorhdrico.
Al hidrolizarse, la sacarosa produce un equivalente de glucosa y otro de fructosa esta mezcla se conoce como
azcar invertida (Biogeo_OV, 2011).
OH
Sacarosa
O H
(Dglucopiranosil Dfructofuransido)
H
OH
HO
H
OH
O
OH
O
HO
Glucosa
Fructosa
H
HO
OH
1.2 EL ALMIDN
Es un polisacrido muy abundante en las semillas, frutos y tubrculos. Est formado por molculas de -Dglucosa, en la molcula de almidn se puede distinguir dos fracciones: La amilosa, que es insoluble en agua
fra y en la que la glucosa se enlaza por las uniones 1,4- - glicosdicas, y la otra fraccin denominada
amilopectina (Figura 2), ste es un polmero soluble en agua fra cuyas ramificaciones 1,6- -glucosdicas se
presentan aproximadamente cada 25 unidades de glucosa.
Figura 2. Fragmento de la molcula del almidn correspondiente a amilopectina, la unidad encerrada en el crculo
corresponde a la glucosa. Tomado de Biogeo_OV (Biogeo_OV, 2011)
El almidn se digiere en la boca y en el estmago por medio de las enzimas glicosidasas, las cuales hidrolizan
selectivamente los enlaces -glicosdicos, estas enzimas catalizan la hidrlisis de estos enlaces y liberan las
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molculas de glucosa. La hidrlisis del almidn tambin se puede llevar a cabo por accin del calor y un cido
en medio acuoso dando como resultado la formacin de unidades de glucosa.
La celulosa es otro polisacrido de gran importancia que consta de miles de unidades de D-glucosa que se
enlazan por uniones 1,4-b-glicosdicas como las de la celobiosa (Figura 3). La molculas de celulosa pueden
interactuar por enlaces de hidrgeno, formando una macroestructura, que es la responsable de la resistencia
y rigidez caractersticas de las plantas, por ejemplo en el pasto, las hojas y el algodn (Nelson, 1993) (Stryer,
1995)
OH
O
H
OH
3
1
2
OH
OH
2
OH
H
H
H
1
OH
OO
H
OH
3
1
2
OH
OH
La celulosa puede ser degradada por diferentes compuestos, entre los cuales se encuentra el cido sulfrico,
cuya accin depende de la concentracin y duracin del contacto. Si el cido se usa concentrado y fro
aumenta el volumen y produce una sustancia parecida a la fcula y al engrudo de almidn. Cuando sta, se
vierte en mucha agua separa unos copos incoloros que dan una coloracin azul al tratarse con lugol
(solucin de yodo), llamndose por esta razn amiloide. Si contacto del cido sulfrico con la celulosa es
corto la capa amiloide solo se forma en la superficie, propiedad que es aprovechada para la fabricacin de
papel pergamino (Stryer, 1995)
CONSULTA PREVIA
1. Complete el mapa conceptual que aparece a continuacin con los siguientes trminos: Lactosa, Rafinosa,
Azcares simples, Fructosa, Disacridos, Celulosa. (0,5/5,0)
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2. El siguiente diagrama muestra los resultados tanto positivos como negativos que se pueden obtener al
tratar una muestra con el reactivo de Fehling y a continuacin se muestran los resultados obtenidos en
un laboratorio para diversos carbohidratos que fueron tratados con este reactivo (glucosa, Fructosa
maltosa, sacarosa, celulosa y almidn). De acuerdo a esta informacin complete la tabla de resultados
que se muestra: (1,0/5,0)
Tipo de
carbohidrato
Monosacrido
Disacrido
Polisacrido
Monosacrido
Polisacrido
Disacrido
Resultado con
Fehling
+
+
+
-
Nombre
3. Cul es la diferencia del enlace qumico entre las glucosas que conforman el almidn y la celulosa?
Explique sealando las diferencias en los dibujos de los respectivos enlaces qumicos (1,0/5,0).
DIBUJO ENLACE GLUCOSAS EN EL ALMIDN
EXPLICACIN:
EXPLICACIN:
O H
H
OH
H
H
HO
HO
O
OH
OH
Sacarosa
5.
OH
O
H
OH
OH
OH
O H
OH
Almidn
H
H
OH
O
H
OH
n
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REACTIVO
PELIGROS
CONSEJOS DE PRECAUCIN
Frases H
Frases P
cido Clorhdrico
cido Sulfrico
Hidrxido de
Sodio
(Presente en reactivo
de Fehling B)
Lugol de Gram
Sulfato de Cobre II
(Presente en reactivo
de Fehling A)
METODOLOGA
1. Ingreso de los estudiantes a la prctica (Cada uno debe tener sus elementos de bioseguridad: Guantes,
Tapabocas y bata).
2. Entrega y revisin de consulta previa.
3. Presentacin de Quiz sobre los objetivos, introduccin, marco terico y consulta previa.
4. Retroalimentacin de consulta previa, la cual incluye aclaracin en las posibles dudas que tengan los
estudiantes.
5. Explicacin del procedimiento por parte del docente.
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1
1
1
1
8
1
1
5
5
8
1
Beaker de 400 mL
Beaker de 250 mL
Pinza para tubo de ensayo
Vidrio de Reloj
Tubos de ensayo
Gradilla
Probeta 50 mL
Pipeta Graduada de 5 mL
Pipeteadores
Pipetas Pasteur
Plancha de Calentamiento
REACTIVOS
2 mL
10 mL
10 mL
3 mL
2 mL
4 mL
10 mL
1g
5 mL
MATERIALES ESTUDIANTE
Usar elementos de proteccin bata, tapabocas, guantes y gafas como requisitos mnimos de
seguridad al ingresar al laboratorio.
NUNCA corra o juegue en el Laboratorio, puede ocasionar un accidente.
EN LO POSIBLE, no saque de la cabina los reactivos que emitan vapores peligrosos.
Nunca pipetear con la boca. Utilice los pipeteadores.
No utilizar la misma pipeta para varios reactivos ya que los contamina.
Dejar el lugar de trabajo limpio, seco y organizado.
Lavar cuidadosamente todo el material al iniciar y al finalizar la prctica.
Al emplear la plancha de calentamiento tenga precaucin de que el cable NO toque
superficies calientes.
NUNCA coloque material de vidrio caliente sobre superficies fras.
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PROCEDIMIENTO A UTILIZAR
HIDRLISIS DE ALMIDN
Tubo de Ensayo
5 mL Almidn al 1%
3 mL HCl al 10%
Calentar en Bao de Maria
1 Calentar por 5 min.
PRUEBA DE LUGOL
Vidrio de Reloj
Tubo 1
Tubo 2
2 mL Sln AH
1 gota Sln AH
1 gota Almidn 1%
0.5 mL Fehling A
0.5 mL Fehling B
2 gotas de Lugol
Observar Coloracin
2 mL Almidn 1%
0,5 mL NaOH
3M
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HIDRLISIS DE LA SACAROSA
Tubo 2
Tubo 1
2 mL Sacarosa al 50%
Tubo 3
2 mL Sacarosa al 50%
2 mL Sacarosa al 50%
2 mL Agua Destilada
2 mL NaOH 10 %
2 mL HCl 10 %
0,5 mL de Fehling A
0,5 mL de Fehling B
Bao de Mara, 100C
Observar Coloracin
HIDRLISIS DE LA CELULOSA
Beaker 250 mL
Tubo 1
Tubo 2
2 mL Sln CH
0,2g Algodn
1 mL H2SO4
0,5g Algodn
1 mL NaOH 10%
10 mL Agua Destilada
0.5 mL de Fehling A
0.5 mL de Fehling B
Observar Coloracin
BIBLIOGRAFA
Aguirre,
REVIS
Firma:
Firma:
Nombre: Profesores Laboratorio de Nombre: Lic Alba Chaparro
Bioqumica
Fecha: Julio 2013
Fecha: Julio 2013
APROB
Firma:
Nombre: Ing. Claudia Fernndez
Fecha: Julio 2013
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de
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INFORME DE LABORATORIO
ESTUDIANTES:
GRUPO:
NOTA:
CARRERA:
Formule tres objetivos que desee cumplir con la prctica de laboratorio.(0,5/5,0)
(Deben realizarse durante la prctica)
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1.
2.
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3.
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RESULTADOS
1.
OBSERVACIONES
FEHLING
RESULTADO
(+) o (-)
OBSERVACIONES
RESULTADO
(+) o (-)
ALMIDN SIN
HIDROLIZAR
ALMIDN
HIDROLIZADO
FEHLING
MUESTRA
OBSERVACIONES
RESULTADO
(+) o (-)
SACAROSA
CON AGUA
SACAROSA
CON NaOH
SACAROSA
CON HCL
FEHLING
MUESTRA
OBSERVACIONES
RESULTADO
(+) o (-)
ALGODN
ALGODN
HIDROLIZADO
CUESTIONARIO
1.
A Qu se debe la diferencia de color al realizar la prueba del lugol con el almidn hidrolizado y con el
almidn sin hidrolizar? (0,3/5,0)
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2.
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A Qu se debe la diferencia de color al realizar la prueba de Fehling con el almidn hidrolizado y con el
almidn sin hidrolizar? (0,3/5,0)
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3.
Con cul prueba se detect la hidrolisis de un polisacrido y por qu esta prueba permite determinar
que realmente se llev a cabo la reaccin? (0,3/5,0)
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4.
5.
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Versin: 4.0
CONCLUSIONES (0,5/5,0)
1.
2.
3.
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