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CENTRO ENTRO DE CIENCIAS AGROPECUARIAS DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA

FISIOLOGA POSCOSECHA DE PRODUCTOS VEGETALES


PRCTICA CUANTIFICACIN DE LA RESPIRACIN AERBICA POR EL MTODO COLORIMTRICO Carrera: INGENIERO AGR AGROINDUSTRIAL 3er semestre Elabor: OTILlO VZQUEZ MARTNEZ

Aguascalientes, Ags.

Numero de alumnos por prctica:


Tres equipos, cada equipo de 4 personas

Introduccin
El termino respiracin se ha usado por el general de la gente, para indicar el intercambio de gases entre los seres vivos y su atmsfera, concretamente el aspirar y expirar el aire por parte del hombre y los animales. En forma ms amplia, respiracin se define como la oxidacin de sustancias orgnicas en el interior de las clulas vivas, acompaada por la liberacin de energa, con el fin de realizar las funciones vitales de los organismos vivos. La respiracin celular consiste en una serie de reacciones para degradar los carbohidratos que se produjeron y almacenaron la energa lumnica de la fotosntesis, y obtener energa qumica cuyo principal acarreador es el ATP, junto con el NADH y NADPH. Es una cadena de reacciones ligada a todos los procesos celulares, consta de muchos pasos donde los compuestos intermedios pueden ser punto de inicio para otros procesos celulares. Un poco de energa se pierde como calor. La respiracin aerbica puede representarse en la ecuacin general siguiente:

Esta reaccin es prcticamente opuesta a la de la fotosntesis. Tambin es prcticamente igual a la de la combustin. La diferencia es que en la combustin la energa se obtiene rpidamente, mientras que en la respiracin la energa se obtiene lentamente y a travs de mltiples pasos que permiten su aprovechamiento en las clulas. Las reacciones que ocurren en la respiracin se pueden dividir en varias etapas. La primera se denomina gliclisis. En ella, la glucosa (6 carbonos) se divide en dos molculas de 3 carbonos hasta formar cido pirvico. No se requiere oxgeno, se realiza en el citosol. En el proceso se utilizan dos molculas de ATP y se producen 4, as como tambin se producen dos molculas de NADH. Sin embargo este camino no es de una sola
va, muchos pasos son reversibles y los productos intermedios son puntos de partida para la formacin de muchos otros compuestos importantes.

Posteriormente la degradacin contina a partir del cido pirvico, por medio del Ciclo del cido Tricarboxlico o Ciclo de Krebs. Esta fase requiere de oxgeno. En este proceso se puede tener la degradacin completa, liberndose el carbono en forma de CO2. Se producen tambin NADH y FADH2. Los productos intermedios pueden ser inicio para la formacin de otros compuestos esenciales para las plantas. Por (ultimo se tiene el proceso denominado Cadena de Transporte de Electrones, en la cual los electrones y sus iones de hidrgeno (del NADH producido anteriormente), pasan por una serie de reacciones para ser aceptados por el oxgeno y terminar finalmente en forma de agua, producindose en el proceso 36ATP.

Propsito especfico de la prctica


Calcular la cantidad de CO2 liberada y evaluar el proceso de la respiracin durante la germinacin de semillas, mediante el mtodo de precipitacin con BaCI2 y titulacin con NaOH/HCI

Criterios de desempeo
Calcular la cantidad de CO2 liberada para apreciar el proceso de la respiracin durante la germinacin de semillas, mediante el mtodo de precipitacin con BaCI2 y titulacin con NaOH/HCI cuando: Tengas el conocimiento terico del proceso bsico de la respiracin en clulas vegetales. Tengas los reactivos y soluciones preparadas y el sistema de pre-germinado, con 36 horas de anticipacin. Domines la tcnica de titulacin cido-base con fenolftateina como agente marcador visual. A partir del volumen de titulacin obtengas la cantidad de miliequivalentes de CO2 desprendido por las semillas durante su germinacin. Elabores un reporte completo.

Resultados esperados.
Que puedas explicar qumicamente las reacciones ocurridas al agregar BaClz y fenolftalena, as como el HCI. Que muestres grficamente los resultados del efecto que tiene la temperatura sobre la tasa respiratoria en las semillas. Que a partir de una mesa redonda de competencia discusin con tus compaeros de

equipo definan una aplicacin practica de esta metodologa en el rea agrcola o agroindustrial. b) Cuadro de disposicin de desechos

Tipo de peligro Quemaduras de piel por derrame del NaOH o del HCl

Como evitarlo Utilizar correctamente la bata y los gogles

Como proceder en caso de accidente En caso de derrame qumico sobre la piel o la ropa, enjuague el rea afectada con suficiente agua y contine por 10-15 minutos hasta que llegue ayuda profesional.

Ingestin del NaOH o del HCL

Pipetea utilizando los mbolos. Cercirate de utilizar el compuesto o frmula correcta.

No provoques vmito. Para HCl administre algn anticido y acuda con el mdico. Pon especial atencin en el grado de peligrosidad que la etiqueta del recipiente anuncia . NO regreses excedentes de reactivos al envase original.; consulte a su instructor. Al desechar cualquier reactivo consulte a su instructor y siga cuidadosamente las instrucciones.

Desarrollo de la Prctica
a) Programa de actividades

Momento

Actividad

Duracin (horas)

Imbibicin de semillas
Colocacin de semillas imbibidas en un

sistema hermtico, suspendidas sobre una solucin de NaOH

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Preparacin de reactivos y Titulacin

b) Dinmica 1. Coloca 50 ml de NaOH 0.2 N en cada uno de los 4 frascos de 500 cc y tapa inmediatamente. 2. Pesa tres porciones de 10 g de semillas que hayan estado inmergidas en agua durante una hora o ms y coloca cada porcin en un saquito de manta de cielo o gasa que se suspende del tapn del frasco por medio de un cordel, de modo tal que la semilla no est en contacto con el NaOH (ver figura 1). Un frasco debe quedar sin semilla. Coloca los otros tres frascos a diferentes temperaturas (5, 25 Y 400 C). El frasco de 25 C puede estar dentro del ambiente, al igual que el frasco sin semilla (ver secuencia de imgenes)

3 4
5

3. A las 36 horas extrae las semillas y tapa rpidamente. Titula para encontrar la cantidad de CO2 respirado por las semillas. Para ello toma una pipeta y extrae 10 mi del NaOH de cada uno de los frascos y colcalos en un vaso de precipitados de 50 mi, aade 5 mi de solucin de BaCl2 1 M, que precipitar el C02 absorbido por el lcali.; aade 3 gotas de fenolftalena que dar color rosa-violceo, y titula con HCI 0.2 N hasta que desaparezca el color (pH 8.5). Anota la cantidad de cido necesario para ello.

4. Repite la titulacin con cada uno de los frascos incluyendo al que careca de semillas para
calcular el CO2 del ambiente que haya sido atrapado al cerrar el frasco. 5. Resta esta cantidad a la cantidad necesaria para cada uno de los tratamientos, y multiplica por 5; obtendr as la cantidad de HCI equivalente al C02 despedido por las semillas; en cada uno de los frascos titula cada frasco por duplicado. 6. Reporta.
2.

e) Materiales y reactivos
- 4 frascos de 500 ml con tapn de hule - 4 vasos de precipitados de 50 mI. - 1 probeta de 25 mi - 1 bureta de 25 mi - Manta de cielo o gasa - Cordn de hilo - 30 g semillas de chcharo o frijol - BaCI2 - NaOH
- HCI

- 2 pipetas de 10 mi
- Algodn - Refrigerador - Fenolftalena al 1 % en etanol al 60% - Estufa incubadora

Sistema de evaluacin
La evaluacin se basa en la asistencia obligatoria a la prctica y en la entrega individual de un reporte escrito que deber cumplir con las recomendaciones generales que en este manual se proponen (Anexo 1) En la seccin de resultados: 1. Elabora una tabla que exprese la cantidad del HCI necesaria para titular el CO2 respirado en 36 horas, en semillas germinando a diferentes temperaturas.

2. Elabora una grfica que exprese la cantidad de CO2 desprendido en 36 horas por las semillas germinadas a diferentes temperaturas. Utiliza en el papel milimtrico anexo. 3. Clculo de la cantidad de CO2 desprendido: (N NaOH x V NaOH - N HCI x V HCI) meq CO2 = miligramos de CO2 4. Calcula la cantidad de CO2 desprendida en cada frasco, y anota tus resultados en forma de tabla.

CUESTIONARIO.

1 Explica qumicamente las reacciones ocurridas al agregar BaCI2 y fenolftalena, as como el HCI. 2 Describe otro mtodo para calcular la cantidad de C02 desprendida (u oxgeno consumido) Por productos vegetales. 3 Tiene su conclusin alguna aplicacin a la prctica agroindustrial? 4 Seala la diferencia entre respiracin y foto respiracin

La calificacin del reporte ser en base de 1 a 10 Y se evala otorgando valor proporcional a las secciones de resultados, discusiones, conclusiones y cuestionario (2.5 puntos cada seccin) siempre y cuando el alumno cumpla con las normas y criterios generales de evaluacin (Anexo 2)

Bibliografa Rovalo M. M. Y Garcidueas M.R. 1993 Fisiologa: vegetal experimental.


Limusa, Mxico.