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LA TECNICA MAS EMPLEADA EN LOS ULTIMOS AOS: CROMATOGRAFIA

Dentro de los mtodos de separacin se encuentra la cromatografa, la cual dio sus primeros inicios en el ao 1903, sin embargo la primera persona que defini el termino la cromatografa como tal fue el botnico ruso Miguel Tswett en 1910 basndose en las palabras griegas khromatos(color) y graphos (escrito) ya que utiliz el trmino cromatografa para describir la separacin de pigmentos vegetales en referencia a las bandas coloreadas que se separaban por su adsorcin selectiva sobre columnas de yeso. Aunque la mayor parte de las separaciones que se realizan actualmente son de compuestos incoloros, el trmino inicial cromatografa se ha seguido manteniendo. El uso de esta tcnica de separacin fue aumentando cada vez mas, se fueron desarrollando diferentes versiones de la misma tales como: cromatografa de reparto (Martin y Synge, 1914), as como de papel (Connsden, Gordon y Martin, 1944), capa fina (Stahl, 1958, etc. Un gran giro en el desarrollo de la cromatografa lo constituyo la invencin de la cromatografa gas-liquido (Martin y James, 1952), esta tcnica que fue utilizada en mltiples aplicaciones de gran importancia, lo que condujo al desarrollo de la teora de la separacin cromatografa (Van Deemter, 1956; Giddings, 1965, etc), as como el desarrollo de innumerables instrumentos que facilitaran en gran medida las condiciones de trabajo. En la actualidad no existe campo de las ciencias qumicas, biolgicas, mdicas, etc. en el que no se requiera el empleo de la cromatografa, lo que nos arroja que se ah adoptado esta tcnica con sus variantes en uno de los mas importantes mtodos analticos para la determinacin de compuestos.
Definiendo ya en especifico lo que es la cromatografa encontramos que se trata de un mtodo fsico de separacin en el que los componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una inmvil o estacionaria y otra mvil la cual atraviesa la primera, en si el proceso de cromatografa se genera como resultado de varios procesos de sorcin-desorcin durante el movimiento de los compuestos de la mezcla que son arrastrados por la fase mvil a lo largo de la fase estacionaria, a esto se le conoce como elucin, despus de este proceso se produce la separacin debido a las diferencias entre las constantes de distribucin de cada uno de los componentes de la mezcla de las dos fases. Cuando se obtiene la distribucin final de los compuestos de acuerdo a donde se localicen en la fase estacionaria, o bien el tiempo en el que se genera la elucin se le conoce como cromatograma.

Para que se lleve a cabo una buena cromatografa, influyen diferentes aspectos importantes que deben tomarse en cuenta entre los cuales estn el Tiempo de retencin que es el tiempo en que el analito recorre la columna mediante algunas condiciones seleccionadas; el soluto que es el componente que se pretende separar, la muestra que es lo que se va a analizar, el disolvente que es la sustancia que solubilizar a otra. Uno de los mtodos cromatogrficos ms simples, se define como cromatografa de capa fina o plana, consiste en una placa de vidrio, sobre ella su superficie se deposita una capa uniforme muy delgada de una substancia absorvente, casi siempre silicagel o almina, en condiciones tales que resulte uniformemente extendida y suficientemente adherida. En general, de hace una mezcla acuosa con el adsorbente, que se deposita sobre la placa. Las placas se secan en estufa para activar la superficie del adsorbente y se encuentran aptas para efectuar la cromatografa. La fase inerte debe ser inerte frente a los componentes de la muestra y de la fase estacionaria, con una viscosidad adecuada, una alta pureza, baja inflamabilidad y toxicidad. 1- Cromatografia ascendente: el disolvente se encuentra en el fondo del recipiente que sostiene al papel y va subiendo a travs de el por capilaridad. 2- Cromatografia descendente: el disolvente esta en un recipiente esta en un recipiente del que cuelga el papel, fluye por l hacia abajo por una combinacin de capilaridad y gravedad.

Otro mtodo muy recurrido es la cromatografa de elucin por columna, en el cual la fase estacionaria se haya constituida por un slido que se empaqueta en una columna, que normalmente es de vidrio. Los componentes a separar se aaden en forma soluble por la parte superior de la columna, quedando retenidos en la misma. Posteriormente los componentes se desplazan arrastrados por una fase mvil lquida. Dependiendo de la absorcin selectiva de cada uno de ellos por la fase estacionaria se desplazan a distinta velocidad, efectundose la separacin. Para que haya una separacin efectiva de los componentes, su velocidad a travs de la columna debe ser suficientemente diferente y la longitud de la columna, adecuada.
Se han ido desarrollado tcnicas mas complejas y especificas como lo son la cromatografa de gases (CG) y la cromatografa de lquidos de alto rendimiento (HPLC).

Esta tcnica es similar a la cromatografia de columna, con la diferencia de que el sistema es cerrado y la fase mvil es un gas. La separacin de los componentes gaseosos se produce por adsorcin selectiva sobre un slido (C.G.S.) o por reparto entre un gas inerte y un lquido no voltil que constituye la fase estacionaria (C.G.L.). En la actualidad esta tecnica (C.G.L.) es la ms empleada, aplicandose el analisis de gases o de lquidos y slidos que puedan volatilizarse a temperatura no superior a 400C. La cromatografa de gases constituye el mejor mtodo analtico ideado para la separacin de gases, lquido o slidos que pueden pasar fcilmente al estado de vapor o transformndolos previamente en otros estados voltiles Ej. Metilacin de cidos grasos en el anlisis de aceite y a resuelto problemas de muy difcil solucin para la qumica analtica empleada hace una dcada. Por eso su utilizacin es indispensable en anlisis industriales, forenses bromatologicos, toxicologicos, clnicos y de contaminacin ambiental. Para la cromatografa de lquidos el fundamento es bsicamente como en las tcnicas clsicas: se hace fluir un lquido a travs de slido e instrumentalmente, se consideran columnas ms cortas (empaquetadas), y con el uso de altas presiones para forzar a la fase mvil a recorrer la fase estacionaria, por tanto, los tiempos de empleo son ms cortos y con separaciones altamente efectivas con cromatogramas con resoluciones altas (>1.5)

En las cromatografas clsicas, en las que la fase mvil es un lquido que fluye a traves de un slido por el efecto de la gravedad para alcanzar alta resolucin seria necesario emplear columnas excesivamente largas, lo que se traducira en un desarrollo muy tardado de los cromatogramas. Estos problemas se resolvieron gracias a la cromatografa de alta resolucin, en la que se trabaja con pequeas columnas, forzando el flujo de la fase mvil mediante elevadas presiones, con lo que se consiguen separaciones muy efectivas en un tiempo muy corto.
Las partes de un cromatgrafo ya sea de gases o lquidos son prcticamente iguales, ya que contienen un sistema de inyeccin de la muestra, sistema de introduccin de la fase mvil, tuberas de arrastre, fase estacionaria en columna, un detector de analitos y un sistema de recoleccin de datos. Un punto que se debe de considerar en la cromatografa de lquidos de alta resolucin es el ndice de refraccin con el que cuenta el detector, el cual corresponde a una relacin entre la velocidad de la luz en el aire y la velocidad de la luz en otra sustancia

El detector que tiene ms sensibilidad en cuanto a lmite de deteccin con un valor de 1x10-14 grs es el de fluorescencia el que le sigue es el detector electroqumico y espectrofotmetro de masas con 1x10-13 grs. En conclusin las tcnicas cromatogrficas son de gran utilidad y empleadas en una rea bastante amplia como abarcara la investigacin cientfica, tanto en la industria, en la deteccin de compuestos como aspartame en refrescos, cafena, o benzoatos; el rea de la clnica, con la separacin de triglicridos de muestras, rea ambiental se emplea la cromatografa para la separacin y anlisis de compuestos orgnicos, entre muchas otras aplicaciones.

BIBIOGRAFIA.
CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL Y CAPA FINA ELECTROFORESIS. (I. Smith y J. Feinberg) QUIMICA ANALITICA CUANTITATIVA (Burriel) BARQUERO, M. (2004). MECANISMOS Y APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTO DESEMPEO. Ed. UCR. San Jos, Costa Rica. SKOOG, D.A. James; Holler F. James. (2001). PRINCIPIOS DE ANLISIS INSTRUMENTAL, 5 ed.; Ed. McGraw-Hill. Madrid, Espaa.

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