III.PRCTICA No.

3 IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS POR MTODOS CROMATOGRFICOS

3.1 Hidrlisis de carbohidratos Los derivados de azucares en los cuales el hidrgeno de los grupos OH del carbn hemiacetal o hemicetal es reemplazado por un radical orgnico (formando un acetal o cetal) son denominados glicsidos; una molcula de agua es eliminada cuando esta reaccin se lleva a cabo. Si el radical orgnico es derivado de otro monosacrido el producto formado es un disacrido. Los polisacridos son polmeros de monosacridos unidos unos a otros por enlaces glicosdicos. Los enlaces glicosdicos pueden ser hidrolizados por cidos relativamente fuertes o por enzimas especficas. Los oligosacridos son azucares reductores si uno de sus grupos carbonilos est libre (no forma parte del enlace glicosdico).

3.1.1 Cromatografa. Cromatografa es el nombre dado a la tcnica utilizada para separar solutos en base a sus distribuciones diferenciales entre dos fases, el sistema de solventes es la fase (fase mvil) que se mueve sobre la otra fase (fase estacionaria). Los solutos se movern con la fase mvil a una tasa que depender de sus distribuciones diferenciales entre las dos fases. Existen tres tipos de cromatografa: particin, intercambio inico y adsorcin. La distancia que se mueve e soluto en relacin a la distancia que se mueve el solvente sirve como un medio conveniente para la identificacin de solutos. Esta tasa relativa de flujo es el valor de Rf para el compuesto bajo las condiciones especficas del experimento.

Rf = distancia recorrida por el soluto (medida al centro de la mancha) Distancia recorrida por el solvente

Varios compuestos pueden tener el mismo valor de Rf en un sistema de solventes particular; estos frecuentemente pueden ser separados corriendo ms de un cromatograma cada uno con un diferente sistema de solventes. Ya que se deben usar

idnticas condiciones para obtener el mismo valor de Rf de un experimento a otro, es necesario siempre incluir un compuesto conocido en un cromatograma para propsitos de comparacin. 3.2 Competencias: 1. Describe y realiza la hidrlisis de un disacrido y polisacrido 2. Explica y conoce las tcnicas cromatogrficas para identificar carbohidratos

3.3 Material y reactivos

Materiales: 1. Matraz de 250mL 2. Pipetas de 5mL y 10mL 3. Cocinilla elctrica 4. Centrfuga 5. Esptula 6. Backer 250mL 7. Pro pipeta 8. Bagueta 9. Balanza analtica 10. Cuba cromatografica pequea 11. Asperjador con bombilla

Reactivos: 1. Acido Sulfrico al 5% 2. Carbonato de Calcio 3. Cromatofolio 20 x20 cm 4. Butanol 5. Acido actico 6. Piridina

7. Acetato de Etilo
8. Sacarosa Q.P 9. Almidn Q.P 10. Antrona 11. Lugol 12. Etanol 13. Revelador de difenilamina 14. Revelador acido 3.5-dinitrosalisilico

3.4 Procedimiento

3.4.1 Hidrlisis: 1. En un matraz colocar 1 g. de sacarosa y en otro 1 g. de almidn. 2. A ambos matraces aadirles 10mL de cido sulfrico al 5 % 3. Colocarlos en un bao mara hirviendo por 20 minutos 4. Probar con el matraz que contiene almidn si da coloracin con el yodo. 5. Enfriar los hidrolizados con agua corriente y neutralizarlos con suficiente cantidad de carbonato de calcio. 6. Centrifugar y filtrar, y utilizarlo para identificacin de los azcares por cromatografa en capa fina.
Sacarosa (cristales) Almidn (polvo) 10ml a cada matraz

1g

Sacarosa 20

Almidn

Diluidos

Centrifugar + Oscuro + Claro

3.4.2 Cromatografia 1. Preparar los siguientes sistemas de solventes: n-butanol-agua-cido actico (5:4:1) 2. Preparar las placas cromatogrficas utilizando como soporte silicagel G. 3. Sembrar las placas con patrn de glucosa versus los hidrolizados. 4. Desarrollar el cromatograma. 5. Revelar el cromatograma pulverizando con antrona (0,150g) en 20 mL del sistema etanol - cido actico - cido sulfrico concentrado (3:1:1) y calentando las placas de 5 a 7 minutos en la estufa a 110 C. Todos los glcidos dan manchas de color verde de diferente tonalidad.
Revelador DIFENILAMINA la cual da un coloreado amarillo toda la placa

3.4.3 Otros reactivos de identificacin para cromatogrfia A. DIFENILAMINA: Caracteriza a las aldohexosas y aldopentosas. 1. Pulverizar los cromatogramas con una solucin de 0,400 g. de difenilamina y 1g de cido tricloroactico disueltos en n-butanol- metanol(1:1). 2. Calentar los cromatogramas en la estufa a 110 C. Las aldopentosas dan manchas violaceas y las aldohexosas manchas marrones. B. ACIDO 3.5-DINITROSALISILICO: Caracteriza a los azcares reductores.

1. Pulverizar los cromatogramas con 0.100 g. de cido 3,5 - dinitrosaliclico y 0.800g. de hidrxido de sodio disueltos en 20 mL de agua. 2. Calentar las placas a 110 C por 5 minutos en estufa. Los azcares reductores dan manchas de color marrn sobre un fondo amarillo paja.

3.5 Resultados Se observ por medio de mtodos cromatogrficos (cromatografa en capa fina) las manchas caractersticas de los carbohidratos

Muestra Sacarosa (practica)

Migracin 2.6

Mig solvente 7.7

Rf 0.34

Color

obs

Blanco cristal Color visible antes revelado del

Glucosa (practica)

3.7

7.7

0.48

Blanco cristal Color visible antes revelado del

Frtucosa (teora)

3.1

7.7

0.40

Blanco cristal No hallaba color

se el

Almidon

2.9

7.7

0.38

Blanco polvo

3.6 Cuestionario 1. Indique otros reveladores para identificar azcares por cromatografa en capa Fina.

El n-butanol saturado de agua) y naftoresorcinol (enacetona, agua y cido fosfrico)Diversas tcnicas han sido empleadas en la deteccin de los

carbohidratosdespus de la separacin cromatogrfica. Aqu se incluyen las revelaciones consprays o inmersiones de tiras de papel en paltos de capa fina conteniendodiversos reactivos de coloracin.Aunque se trata de mtodos sensitivos, resulta muy difcil realizar un anlisiscuantitativo.Dentro de los sprays cromognicos se mencionan: el cido tiobarbitrico parala determinacin de cidos silicos; el orcinolcido sulfrico para determinar galactosa; antrona para hexosas; carbazol para cidos urnicos; el resorcinol para residuos de cidos silicos unidos, y otros generales y especficos.

2. Qu otros mtodos cromatogrficos de aplican para identificar carbohidratos. De ejemplos (Adjunte cromatogramas, grficos o figuras)

Cromatografia ionica Cromatografa en capa fina cualitativa Cromatografa de reparto

REACCIONES

SACAROSA + ACIDO SULFURICO C12H22O11 (s) + H2SO4 (l) 12 C (s) + 11 H2O (g) + H2SO4 (ac) Lo que ha sucedido es una reaccin de deshidratacin del azcar provocada por el cido sulfrico. La sacarosa se convierte en un residuo negro de carbono, mientras que el agua se desprende en forma de vapor provocando ese ascenso de la masa y esa textura esponjosa

ALMIDON + ACIDO SULFURICO (C6H10O5)n + H2SO4 => H2SO4 + 5nH2O + 6C

Conclusiones
La tcnica de cromatografa en capa fina (CCF) tiene numerosas ventajas,es rpida, sencilla, barata Tiene tambin la ventaja de utilizar poca cantidad de muestra

Esto lo hemos averiguado gracias a las muestras patrn, ya que al ser las muestras problema mezclas entre ellas, al meterlas a la camara , el disolvente subir por la placa e ir separando la mezcla, dejando abajo el patrn ms polar. Luego, gracias a los reveladores fsicos y qumicos, se ve que esta compuesta la mezcla problema.

Despus de terminado el trabajo, la realizacin de este informe nos aclaro en su desarrollo, muchas facetas de lo que son los Hidratos de Carbono, sus solventes y las reacciones que estos tiene frente a distintos solventes, respecto a sus distintas concentraciones y cantidades moleculares.

3.7 Fuentes de informacin 1. Fessenden J. Carbohidratos, Lpidos y Protenas Qumica Orgnica, Editorial Iberoamericana 1ra. Ed. 2. Schaums Carbohidratos, Lpidos y Protenas Qumica Orgnica, Teora y Problemas, Editorial MeGraw. 1ra. Ed.