HEMOGLOBINA Solucin DRABKIN

Mtodo CIANOMETAHEMOGLOBINA
Para determinacin de Hemoglobina en Sangre
1/1 2006-11v2.0
Cdigo Presentacin

02939 1 x 1000 ml



PRINCIPIO

La hemoglobina (Hb) presente en la muestra, en presencia de
ferricianuro, se oxida a hemiglobina (Hi, tambin llamada
metahemoglobina) que, a su vez, se combina con iones cianuro a
pH 7,2 convirtindose en cianuro de hemiglobina (HiCN o
cianmetahemoglobina). Todos los hemocromgenos, a
excepcin de la sulfohemoglobina, reaccionan completamente en
3 minutos y la lectura se efecta a 540nm.

CONTENIDOS

REACTIVO
Reactivo para Hemoglobina SOLUCION DRABKIN
Potasio Ferricianuro 0.6mM
Potasio Cianuro 0.7mM
Buffer y estabilizantes cs

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS

Conservado entre 15C y 30C y protegido de la luz , estable
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
El reactivo tiene componentes txicos, evite el contacto con
la piel, ojos y/o ropa. El reactivo contiene cianuro.
No mezcle con cidos.
No use el reactivo si su color es diferente al amarillo o si es
turbia o decolorada.

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO
SUMINISTRADOS

Patrn HEMOGLOBINA..
Espectrofotmetro o foto colormetro de filtros capaz de medir
absorbancia a 546nm.
Pipetas automticas.
Cronometro y/o timer.


MUESTRA

Sangre Total
a) Recoleccin: obtener sangre anticoagulada.
b) Aditivos: deben emplearse anticoagulantes concentrados
o anticoagulantes equilibrados y desecados.(citrato, EDTA o
oxalato).
c) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el
contenido hemoglobnico de la sangre es estable hasta una
semana en refrigerador (2-10oC). No congelar.


PROCEDIMIENTO

Tome 3 tubos de ensayo y proceda as:
BLANCO MUESTRA PATRN
Reactivo
Hemoglobina
5.0 ml 5.0 ml 5.0 ml
Sangre Total 0.02 ml
Patrn 0.02 ml

Agite bien, espere 5 minutos y mida la absorbancia de la muestra
a 540 nm o filtro verde (500 a 540) llevando el aparato a cero con
blanco de reactivo. Obtenga el valor en g/dl de la muestra,
utilizando la calibracin (curva o factor) preparada con el patrn
de hemoglobina.



CALCULO

FACTOR = Concentracin Patrn _______
Absorbancia Patrn

Hemoglobina (g/dl)= Factor x Abs. Muestra

VALORES DE REFERENCIA
Hombres: 12.5 a 17.5 g/dl
Mujeres : 11.5 a 15.5 g/dl

CARACTERISTICAS DE DESEMPEO

LINEARIDAD
La reaccin es lineal hasta 25 g/dl. Para valores superiores, se debe
reprocesar con la mitad del volumen de muestra y el resultado obtenido se
multiplica por dos (2).

REPETITIVIDAD
Concentracin media N DE CV%
8.9 g/dl 25 0.9 1.1
18.2 g/dl 25 1.2 1.4

REPRODUCIBILIDAD
Concentracin media N DE CV%
9 g/dl 25 0.8 1.0
13 g/dl 25 1.1 1.3

EXACTITUD
Anlisis de la regresin lineal obtenido con muestras de suero analizadas
con el presente mtodo y otro mtodo similar se hallo un coeficiente de
correlacin (r) igual a 0.992 con una ecuacin de regresin lineal
y=0.985x+0.09 (n=27, Rango 8.9-12.6 g/dl).

INTERFERENCIAS
Sustancias que causen turbidez pueden elevar falsamente el valor de
Hemoglobina. Esto incluye los lipidos, proteinas plasmaticas anormales
(macroglobulinemia) y hemolisis. Para una lista completa de los
medicamentos y sustancias que pueden interferir en la determinacin de
hemoglobina consulte Young, et al.
10


BIBLIOGRAFIA
1. Stadie, W.C., J. Biol. Chem., 41:237, (1920)
2. Drabkin, D.L., Austin, J.H., J. Biol. Chem., 112:51, (1935).
3. Crosby, W.H., et al, U.S. Armed Forces Med J., 5:693, (1954).
4. Crosby, W.H., et al, Blood, 12:1132, (1957).
5. Eilers, R.J., Am. J. Clin. Pathol., 47:212, (1967).
6. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2
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ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, p.411, (1976).
7. Henry, R.F., et al, Principles and Technics in Clinical Chemistry, 2
nd
Ed., Harper & Row, Hagerstown, MD, pp.
1128:1135, (1974).
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9. Van Kampen, E.J., et al, Clin. Chem. Acta, 6:538, (1961).
10. Young, D.S., et al, Clin. Chem., 21:1D, (1975).
11. Wolf, P.L., Practical Clinical Hematology, John Wiley & Sons, NY, p. 144, (1973).


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