bioelisa bioelisa HBsAg 3.

LEER CAMBIOS SOMBREADOS 3000-1158 96 tests 3000-1159 480 tests Test de ELISA para la deteccin de antgeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) en suero o plasma humano para ser utilizado en laboratorios clnicos y como prueba de cribado en bancos de sangre. Sumario La hepatitis B es una enfermedad causada por una infeccin vrica. A lo largo de la infeccin aparecen varios marcadores serolgicos entre los cuales est el HBsAg. En 1964 Blumberg y col. 1 detectaron por primera vez en el suero de un aborigen australiano un antgeno que reaccionaba con un anticuerpo del suero de un paciente hemoflico de Nueva York. Posteriormente este antgeno se identific como el antgeno de superficie de la hepatitis B. El descubrimiento del HBsAg signific un gran paso para el conocimiento y diferenciacin de las hepatitis vricas. La presencia de HBsAg en suero o plasma constituye el marcador ms importante para el diagnstico de una infeccin por virus de la hepatitis B (HBV). En 1971 Engvall y Perlmann2 y van Weemen y Schuurs describieron por primera vez un enzimoinmunoensayo. El desarrollo posterior de la tcnica y la utilizacin de microplacas por Voller y col.4,5, han permitido confeccionar kits de diagnstico de alta precisin y sensibilidad. Principio bioelisa HBsAg 3.0 es un mtodo inmunoenzimtico directo, de tipo sandwich, en el que los pocillos de una microplaca han sido recubiertos con anticuerpo de cobaya anti-HBs que acta como anticuerpo de captura y que utiliza como conjugado anticuerpo de cabra anti-HBs marcado con peroxidasa. La muestra a analizar se incuba en uno de los pocillos de la microplaca. Si la muestra contiene HBsAg ste se fijar al anticuerpo anti-HBs unido a la placa. Despus de lavar para extraer el material no fijado, se aade el anticuerpo de cabra anti-HBs conjugado con peroxidasa, que reaccionar con el posible complejo antgeno-anticuerpo formado en la primera incubacin. Despus de esta segunda incubacin y posterior lavado se procede a la adicin del sustrato enzimtico que contiene un cromgeno, lo que dar como resultado la aparicin de color azul si la muestra es positiva para HBsAg. El color azul cambia a amarillo despus de parar la reaccin con cido sulfrico. La intensidad del color es proporcional a la concentracin de HBsAg en la muestra. Componentes 1. MCPL MICROPLACA: 12 x 8 pocillos recubiertos con anticuerpo de cobaya anti-HBs. Pocillos separables individualmente. 2. CONJ 51x CONJUGADO CONCENTRADO: Anticuerpo de cabra anti-HBs conjugado con peroxidasa. Contiene colorante rojo, protenas estabilizadoras, Bronidox al 0,02% y sulfato de gentamicina al 0,001%. A diluir 1/51 con el diluyente del conjugado antes de usarse. DIL CONJ DILUYENTE DEL CONJUGADO: Tampn Tris que contiene colorante amarillo, aditivos, Bronidox al 0,02% y sulfato de gentamicina al 0,001%. Para diluir el conjugado concentrado. WASH SOLN 10x SOLUCIN DE LAVADO: Tampn fosfato concentrado (10x) que contiene Tween 20 al 1% y mertiolato sdico al 0,01%. Diluir 1/10 con agua destilada o desionizada antes de usarlo. SUBS BUF TAMPN SUSTRATO: Tampn citrato-acetato que contiene perxido de hidrgeno. SOLN TMB CROMGENO: 3,3', 5,5'-Tetrametilbenzidina (TMB) disuelta en dimetilsulfxido (DMSO). Contiene colorante rojo. CONTROL + CONTROL POSITIVO: Suero humano normal diluido en tampn fosfato que contiene HBsAg purificado e inactivado y azida sdica al 0,02%. Contiene colorante verde. Listo para usar. CONTROL - CONTROL NEGATIVO: Suero humano negativo para HBsAg diluido en tampn fosfato que contiene azida sdica al 0,02%. Contiene colorante amarillo. Listo para usar.
3

3.

4.

5. 6. 7.

8.

BIOKIT, S.A. - 08186 Lli dAmunt - Barcelona - SPAIN

3000-1158 R02 02.2010 spa.doc

0459

bioelisa
9. H2SO4 1N SOLUCIN DE PARADA (slo en el kit de 1 placa): cido sulfrico 1N. Listo para usar.

10. SEALS LMINAS ADHESIVAS: Para cubrir la microplaca durante las incubaciones. 11. BAG BOLSA DE PLSTICO: Para guardar las tiras sin usar. Precauciones bioelisa HBsAg 3.0 es slo para el diagnstico IN VITRO. Para uso exclusivo por profesionales. ATENCIN: MATERIAL DE RIESGO BIOLGICO. Todo el material de origen humano utilizado en la preparacin de este producto ha sido encontrado negativo a la presencia de anticuerpos de los virus HIV-1/HIV-2 y HCV, as como a la del antgeno de superficie de la hepatitis B, utilizando un mtodo comercial aprobado, excepto cuando necesariamente positivo. El HBsAg contenido en el control positivo ha sido inactivado a 60C durante 10 horas. Sin embargo, dado que ningn mtodo puede ofrecer la total seguridad de la ausencia de agentes infecciosos, este producto debe manejarse con precaucin: No permitir que los reactivos entren en contacto con la piel o los ojos; si esto ocurre, lavar con abundante cantidad de agua. Usar guantes. No pipetear ningn reactivo con la boca. No fumar. Depositar todos los materiales usados en recipientes adecuados para material biocontaminante. Los restos de muestras, controles, reactivos aspirados y puntas desechables deben recogerse en un recipiente destinado al efecto y autoclavarse una hora a 121C, o tratarse con hipoclorito sdico a una concentracin final del 10%, durante 30 minutos. (Los restos que contengan cido deben ser neutralizados antes de aadir el hipoclorito sdico). Algunos reactivos de este kit contienen azida sdica como conservante. La azida sdica puede reaccionar con tuberas y desages de plomo o cobre dando lugar a azidas metlicas altamente explosivas. Al desechar los restos de reactivos, deje correr agua abundante.

Precauciones de manejo: Ajustar el lavador al tipo de placa utilizado (fondo plano), para realizar un buen lavado. No mezclar reactivos procedentes de diferentes lotes. No usar los reactivos una vez hayan caducado. No utilice el reactivo si observa algn cambio de apariencia en cualquier componente incluido en el kit. Deben extremarse las precauciones para evitar contaminaciones microbianas y contaminacin cruzada entre los reactivos. Utilizar una nueva punta desechable para pipetear cada muestra o reactivo. Es muy importante preparar la solucin de sustrato-TMB justo 5-10 minutos antes de ser empleada. Mantenerla en un recipiente bien tapado y al abrigo de la luz. Restos de jabones y/o agentes oxidantes en los recipientes utilizados para la preparacin de la solucin sustrato-TMB, pueden interferir en la reaccin. En caso de que se utilicen recipientes de vidrio, es conveniente lavarlos con cido sulfrico o clorhdrico 1N, enjuagarlos bien con agua destilada y secarlos antes de usarlos. Usar preferiblemente material plstico desechable.

Conservacin y estabilidad Los componentes permanecern inalterados hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, si se conservan entre 2-8C. La bolsa que contiene la microplaca debe llevarse a temperatura ambiente antes de abrirla para evitar condensacin en los pocillos. Una vez abierta la bolsa, la microplaca es estable por 3 meses guardada a 2-8C en la bolsa de plstico bien cerrada, con la bolsita de silicagel. La solucin de lavado, una vez diluida, es estable durante dos semanas si se conserva entre 2-8C. El conjugado, una vez diluido es estable por 7 das a 2-8C. Guardar el cromgeno al abrigo de la luz. La solucin sustrato-TMB una vez preparada no es estable, por lo que se deben seguir estrictamente las indicaciones para su utilizacin.

BIOKIT, S.A. - 08186 Lli dAmunt - Barcelona - SPAIN

3000-1158 R02 02.2010 spa.doc

0459

bioelisa
Presentaciones disponibles Kit de 1 placa (96 tests), REF 3000-1158. Contiene: 1 placa, 1 x 0,4 ml conjugado concentrado, 1 x 16 ml diluyente del conjugado, 2 x 50 ml solucin de lavado concentrada, 1 x 14 ml tampn sustrato, 1 x 1,5 ml cromgeno, 1 x 1,7 ml control positivo, 1 x 5 ml control negativo, 1 x 12 ml solucin de parada, 1 bolsa de plstico y lminas adhesivas. Kit de 5 placas (5 x 96 tests), REF 3000-1159. Contiene: 5 placas, 1 x 1,3 ml conjugado concentrado, 2 x 30 ml diluyente del conjugado, 3 x 100 ml solucin de lavado concentrada, 5 x 14 ml tampn sustrato, 1 x 1,5 ml cromgeno, 1 x 1,7 ml control positivo, 1 x 5 ml control negativo, 1 bolsa de plstico y lminas adhesivas.

Material necesario no incluido Agua destilada o desionizada. Pipetas multicanal y micropipetas (100 l) y puntas desechables. Incubador (seco o con humedad) a 37C 1C. Cronmetro. Lector de microplacas con filtro de 450 nm. Recomendable filtro de referencia de 620 630 nm. Sistema de lavado manual o automtico. Solucin de parada (kit de 5 placas): cido sulfrico 1N. Tambin puede emplearse cido sulfrico 2N 4N. Recoleccin de la muestra Usar suero fresco o plasma (citrato/EDTA). Otros anticoagulantes deben ser comprobados antes de utilizarse. Las muestras pueden ser conservadas durante 3 das entre 2-8C. Si es por un perodo de tiempo ms largo las muestras deben ser congeladas (-20C). Debe evitarse congelar y descongelar las muestras repetidamente. Partculas en suspensin deben eliminarse por centrifugacin. Los sueros o plasmas no deben ser inactivados por calor, ya que puede conducir a resultados incorrectos. Procesamiento automtico Esta prueba permite su uso de modo automtico o semiautomtico en diferentes instrumentos. Es muy importante validar cualquier sistema automtico para demostrar que los resultados obtenidos para las muestras son equivalentes a los obtenidos emplendose el ensayo manual. Se recomienda que el usuario valide peridicamente el instrumento. Si encuentra cualquier dificultad en la programacin y ajuste de los procesadores automticos de Biokit, por favor contacte con su distribuidor. PROCEDIMIENTO (Ver esquema del procedimiento) Operaciones previas Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente antes de empezar el ensayo. Los reactivos lquidos deben homogeneizarse suavemente antes de usarlos. Diluir la solucin de lavado concentrada 1/10 con agua destilada o desionizada. Para una placa completa mezclar 50 ml de solucin de lavado concentrada con 450 ml de agua. En caso de utilizar menos de una placa, preparar la parte proporcional de solucin. Diluir el conjugado concentrado 1/51 con el diluyente del conjugado. Para una placa, aadir 240 l del conjugado concentrado (color rojo) en 12 ml de diluyente del conjugado (color amarillo). Mezclar suavemente. Para menos de una placa seguir las indicaciones de la tabla 1. LA SOLUCIN DE CONJUGADO DE TRABAJO TIENE UN COLOR NARANJA. TABLA 1 Tiras requeridas Diluyente del conjugado ml Conjugado concentrado l 1 1,0 20 2 2,0 40 4 4,0 80 6 6,0 120 8 8,0 160 10 10,0 200 12 12,0 240

Monitorizacin de la adicin de muestra y de reactivos El hecho de que la muestra no requiere predilucin y que todos los reactivos y los controles son coloreados permite la monitorizacin de su adicin en la microplaca por medio de lectura espectrofotomtrica. Para ello, despus de dispensar una placa esta debe leerse a 450 nm (sin filtro de referencia). Los valores de absorbancia deben ser: SUERO / PLASMA / CONTROLES: CONJUGADO DE TRABAJO (color naranja): SUSTRATO DE TRABAJO (color rosa): 0,100 0,500 0,050

BIOKIT, S.A. - 08186 Lli dAmunt - Barcelona - SPAIN

3000-1158 R02 02.2010 spa.doc

0459

bioelisa
Si en algn pocillo no se cumplen las especificaciones mencionadas, es indicativo de que ha habido algn problema durante la dispensacin y debe ser investigado posteriormente. Realizacin de la prueba 1. Transferir 100 l de cada uno de los controles positivo y negativo a los pocillos correspondientes. Utilizar como mnimo 3 pocillos para el control negativo, un pocillo para el control positivo y uno para el blanco de sustrato en todas las placas o fraccin de las mismas cada vez que se realice el ensayo, independiente del nmero de muestras a probar. Dejar el pocillo del blanco vaco (se recomienda reservar el pocillo A1 para el blanco). 2. 3. 4. Transferir 100 l de cada una de las muestras a analizar a los pocillos correspondientes. Cubrir la placa con una lmina adhesiva e incubar durante 60 5 minutos a 37C. Desechar la lmina adhesiva. Aspirar el contenido de los pocillos y llenarlos completamente (aproximadamente 350 l) con solucin de lavado diluida. Repetir el proceso de aspiracin lavado 3 veces ms. Asegurarse de que cada columna de pocillos est en remojo al menos 15 segundos antes del nuevo ciclo de aspiracin. Despus del ltimo lavado golpear la placa invertida sobre un papel absorbente para eliminar cualquier exceso de lquido en los pocillos. Transferir 100 l de conjugado diluido a todos los pocillos de la placa, a excepcin del pocillo para el blanco de sustrato. Cubrir la placa con una lmina adhesiva e incubar 30 2 minutos a 37C. Durante los ltimos 5-10 minutos de esta incubacin, preparar la solucin de sustrato-cromgeno. Para una placa entera aadir 280 l de la solucin de cromgeno (TMB) a un vial de tampn sustrato (14 ml) y mezclar bien. LA SOLUCIN SUSTRATO DE TRABAJO TIENE UN COLOR ROSA, descartar en caso de que se vuelva azul. Si no se utiliza toda la placa, preparar la cantidad necesaria segn indica la tabla 2. TABLA 2 Tiras requeridas Tampn sustrato ml Cromgeno (TMB) l 1 1,0 20 2 2,0 40 4 4,0 80 6 6,0 120 8 8,0 160 10 10,0 200 12 12,0 240

5. 6. 7.

NOTA: El TMB est disuelto en DMSO. Dado que la temperatura de fusin del DMSO es de 18C, el cromgeno debe alcanzar una temperatura de 20-25C y agitarse bien antes de usarlo. 8. 9. Desechar la lmina adhesiva. Aspirar y lavar la placa como en el punto 4. Aadir 100 l de sustrato-TMB a todos los pocillos, incluso el blanco.

10. Incubar durante 30 2 minutos a temperatura ambiente (20-25C). 11. Aadir 100 l de solucin de parada a cada pocillo, guardando la misma secuencia y con los mismos intervalos observados en la adicin del sustrato-TMB. 12. Ajustar el cero del lector con el pocillo del blanco a 450 nm y leer la absorbancia de cada uno de los pocillos en el plazo mximo de 30 minutos. Se recomienda hacer lectura bicromtica utilizando filtro de referencia de 620 - 630 nm. Control de calidad Los resultados de un ensayo son vlidos si se cumplen los siguientes criterios: 1. Blanco del sustrato. El valor de absorbancia debe ser inferior o igual a 0,100.

BIOKIT, S.A. - 08186 Lli dAmunt - Barcelona - SPAIN

3000-1158 R02 02.2010 spa.doc

0459

bioelisa
2. Valor medio del control negativo (CNx). Calcular el promedio de los valores de absorbancia obtenidos para el control negativo. Cada uno de los valores individuales obtenidos debe ser igual o mayor a 0,5 veces CNx e igual o inferior a 1,5 veces CNx. Si alguno de los valores no entra dentro de los lmites debe descartarse y recalcularse la media. Si son dos los valores fuera de lmites, la prueba deber repetirse. Ejemplo: Control negativo 1 2 3 0,144 CNx = 3 = 0,048 Absorbancia 0,045 0,050 0,049 Total 0,144

0,5 x 0,048 = 0,024 1,5 x 0,048 = 0,072 En este ejemplo no existe ningn valor a descartar. La media de los valores de absorbancia de los controles negativos debe estar por debajo de 0,120 despus de restar el blanco. CNx < 0,120 3. Control positivo (CP). El valor de absorbancia obtenido para el control positivo debe ser igual o mayor que 0,700 despus de restar el blanco. CP 0,700 Si alguno de los criterios arriba no se cumple, el ensayo no es vlido y se deber repetir. Resultados La presencia o ausencia de HBsAg en las muestras a analizar se determina relacionando el valor de la absorbancia de cada muestra con el valor umbral. 1. Calcular el valor umbral aadiendo 0,040 a la media del control negativo. Valor umbral = CNx + 0,040 2. Dividir la absorbancia de la muestra por el valor umbral. Positivo: Negativo: Dudoso: relacin absorbancia/valor umbral 1,0 relacin absorbancia/valor umbral < 0,9 relacin absorbancia/valor umbral 0,9 < 1,0

Interpretacin de los resultados Un resultado repetidamente positivo para HBsAg es indicativo de la existencia de infeccin por el virus de la hepatitis B. Para determinar si se trata de una infeccin aguda o crnica deben analizarse otros marcadores serolgicos de la hepatitis B estudiando paralelamente el cuadro clnico del paciente. Limitaciones del procedimiento Toda muestra que haya dado un resultado positivo o dudoso debe analizarse de nuevo por duplicado. Si el resultado es repetidamente positivo o dudoso, debera analizarse con otra prueba de caractersticas similares. Aunque la presente prueba est calificada como un mtodo de tercera generacin para la deteccin de HBsAg, est reconocido que los mtodos actuales existentes para la deteccin de HBsAg no son lo suficientemente sensibles para detectar todos los casos posibles de hepatitis B.

BIOKIT, S.A. - 08186 Lli dAmunt - Barcelona - SPAIN

3000-1158 R02 02.2010 spa.doc

0459

bioelisa
Resultados esperados La prevalencia de portadores crnicos de HBsAg vara ampliamente en el mundo, de alta (> 8%, ej., frica, Asia y Pacifico Oeste) a intermediaria (2-7%, ej., el sur y este Europeo) y baja (< 2%, ej., Europa occidental, Amrica del Norte y partes de Amrica del Sur). En Europa occidental el ndice de portadores de HBsAg se sita entre el 0,1 y el 0,5% y en el sur de Europa la prevalencia de portadores vara entre el 1 y el 5%.13 Caractersticas funcionales Sensibilidad analtica La sensibilidad es, como mnimo, de 0,100 unidades/ml de HBsAg para los subtipos ad y ay, utilizando patrones de HBsAg referenciados a los del Instituto Paul Ehrlich (PEI-Alemania, ref. 87). Utilizando el Segundo Estndar Internacional de la Organizacin Mundial de Salud para HBsAg, subtipo adw2, genotipo A (cdigo NIBSC: 00/588) la sensibilidad obtenida es como mnimo de 0,125 UI/ml. Evaluaciones En un estudio para evaluar el funcionamiento del kit, se probaron 416 muestras presuntamente positivas para HBsAg y se compararon con un mtodo de referencia. En este estudio se obtuvo una sensibilidad del 100%. 200 muestras de pacientes hospitalizados se probaron en comparacin con un mtodo de referencia. 196 muestras resultaron negativas con ambos mtodos, 3 se confirmaron positivas y 1 fue un resultado falso positivo. La especificidad obtenida en este estudio fue del 99,5%. Se probaron 440 muestras de suero de un banco de sangre con tres lotes de reactivo y se compararon los resultados con el mtodo utilizado en rutina para el cribado de HBsAg. Se obtuvo una especificidad del 100% con dos lotes y del 99,5% con el tercer lote. En un banco de sangre (EFS Centro Atlntico, Francia), 4871 muestras de donantes no seleccionados se analizaron en paralelo con el mtodo utilizado en rutina para el cribado de HBsAg. De este total, 11 muestras fueron inicialmente reactivas (0,23%), de las cules 3 fueron repetidamente reactivas (0,06%). La especificidad obtenida fue del 99,94%.

Precisin Reproducibilidad intra-ensayo: Los coeficientes de variacin obtenidos para los valores de absorbancia de 72 replicados de una muestra positiva fueron del 2,2%, 2,5% y 2,6% en tres lotes estudiados. Reproducibilidad inter-ensayo: El control positivo se prob en 5 das diferentes con 3 lotes diferentes de bioelisa HBsAg 3.0. Los coeficientes de variacin obtenidos para os ratios absorbancia/valor umbral del control con los tres lotes fueron del 1,2%, 1,0% y 2,4% respectivamente. Interferencias Interferencia por adicin No se observ interferencia por hemoglobina (2 mg/ml), bilirrubina (0,2 mg/ml) y triglicridos (13 mg/ml). Reacciones cruzadas En un estudio de posibles interferencias, se probaron 144 muestras con un riesgo potencial de producir resultados falsos positivos. De dichas muestras, 20 eran provenientes de sueros positivos para RPR, 15 eran provenientes de sueros positivos para mononucleosis, 18 eran positivas para anticuerpos anti-nucleares (ANA), 9 eran positivas para factor reumatoide (RF), 32 eran de mujeres embarazadas, 20 eran positivas para anticuerpos frente a la hepatitis C, 20 eran positivas para anticuerpos frente al HIV y 15 eran positivas para anticuerpos frente a la hepatitis A. Se encontraron 2 muestras positivas que se confirmaron con un test de referencia. Todas las otras muestras fueron negativas con el bioelisa HBsAg 3.0.

BIOKIT, S.A. - 08186 Lli dAmunt - Barcelona - SPAIN

3000-1158 R02 02.2010 spa.doc

0459

bioelisa bioelisa: Gua de problemas

Problema
1. Controles fuera de validacin.

Posibles causas
1a. Temperatura, incubacin o pipeteo incorrecto. 1b. Preparacin incorrecta de reactivos, error en las diluciones. Reactivos no mezclados correctamente. 1c. Contaminacin cruzada entre controles. 1d. Filtro de lectura incorrecto.

Solucin
Comprobar el procedimiento. Repetir el ensayo. Comprobar el procedimiento. Repetir el ensayo.

1e. Interferencia en el camino ptico.

1f. Se han utilizado componentes de lotes diferentes. 1g. Reactivos caducados.

2. Sin color o poco color al final del ensayo.

2a. Uno o ms reactivos no aadidos o aadidos en secuencia equivocada. 2b. Conjugado inactivo: dilucin incorrecta, conservacin incorrecta. 2c. Microplaca inactiva: conservacin incorrecta. 2d. Sustrato inactivo: conservacin o dilucin incorrecta, el contenedor utilizado afecta la estabilidad del sustrato, contaminacin cruzada con la solucin de parada.

Pipetear cuidadosamente. No intercambiar los tapones de los viales. Repetir el ensayo. Comprobar que el filtro de lectura sea de 450 nm. Si no se usa filtro de referencia de 620 - 630 nm, las absorbancias aumentan aproximadamente 50 miliunidades. Comprobar el lector. Limpiar o secar el fondo de los pocillos. Comprobar que no haya burbujas de aire. Repetir la lectura. No utilizar componentes de lotes diferentes puesto que estn ajustados para cada lote en particular. Comprobar la caducidad del kit y de sus componentes. No utilizar un kit o reactivos caducados. Comprobar el procedimiento. Repetir el ensayo. Comprobar si ha habido contaminacin, comprobar el procedimiento. Repetir el ensayo. Mantener siempre las tiras no utilizadas en la bolsa bien cerrada, con el desecante dentro. Repetir el ensayo. Utilizar siempre una dilucin fresca de TMB en tampn sustrato. Usar contenedores desechables o lavados con cido o etanol y enjuagados con agua desionizada. Comprobar el procedimiento. Repetir el ensayo.

BIOKIT, S.A. - 08186 Lli dAmunt - Barcelona - SPAIN

3000-1158 R02 02.2010 spa.doc

0459

bioelisa bioelisa: Gua de problemas

Problema
3. Demasiado color en todos los pocillos de la microplaca.

Posibles causas
3a. Sustrato contaminado, oxidado o preparado incorrectamente.

Solucin
Comprobar que el sustrato preparado sea de color rosa, descrtelo si est azul. Asegrese que el TMB est completamente lquido antes de utilizarlo. Asegurar la correcta mezcla del TMB en el tampn sustrato. Utilizar contenedores desechables o lavados con cido o etanol. Repetir el ensayo. Comprobar contaminacin (aspecto turbio). Comprobar diluciones. Repetir el ensayo. Comprobar la calidad del agua destilada/desionizada utilizada para preparar la dilucin. Repetir el ensayo. Comprobar el lavador. Llenar los pocillos hasta el tope y aspirar completamente. Incrementar el nmero de ciclos de lavado y el tiempo de remojo. Golpear la placa invertida contra papel absorbente. Repetir el ensayo. Utilizar slo la solucin de lavado de biokit.

3b. Reactivos contaminados o preparados incorrectamente. 3c. Solucin de lavado (1x) contaminada. 3d. Lavado insuficiente o no consistente: llenado o aspiracin insuficiente o no uniforme, nmero de ciclos de lavado insuficiente. Lavador contaminado. 3e. Se ha utilizado solucin de lavado de otro fabricante. 4a. Problemas de lavado. 4b. Pipetas mal calibradas o puntas mal encajadas. Tcnica de pipeteo incorrecta.

4. Reproducibilidad pobre o elevado nmero de muestras reactivas que no se repiten.

Ver apartados 3c, 3d, 3e. Utilizar pipetas calibradas con puntas bien ajustadas. Pipetear cuidadosamente sin burbujas ni salpicaduras. Repetir el ensayo. 4c. Reactivos y muestra no a Atemperar muestras y temperatura ambiente o reactivos y mezclarlos bien no correctamente antes de utilizarlos. mezclados antes de usar. 4d. Corrientes de aire sobre Mantener la microplaca la microplaca durante las protegida de las corrientes de incubaciones. aire. 4e. Demasiado tiempo en la Desarrollar una tcnica adicin de muestras y/o uniforme y consistente. reactivos. Inconsistencia en los intervalos de tiempo. Burbujas de aire. 4f. Interferencia en el camino Ver 1e. ptico.

BIOKIT, S.A. - 08186 Lli dAmunt - Barcelona - SPAIN

3000-1158 R02 02.2010 spa.doc

0459