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CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE

Rappel

constituants cellulaires et moléculaires de la MEC, en particulier de la lame basale (structure importante pour le maintien des cellules).

des

de

l’épisode

précédent:

Lors

du

cours

précédent

nous

avons

traité

Dans ce cours, nous allons étudier les interactions de cette matrice avec le cytosquelette, puis le remodelage et les pathologies de la MEC.

4 - Interaction de la matrice extracellulaire avec le cytosquelette

Comment la cellule va communiquer avec l’environnement qui l’entoure?

Les cellules en position 1 ont leur cytosquelette à l’intérieur de la cellule organisé de façon «Nord-Sud». Cette orientation va affecter les protéines de la MEC, et va lui donner une orientation identique. Cette matrice orientée va atteindre les cellules proches (2 et 3), et donner un message pour que leur cytosquelette soient orientés dans le même sens que la MEC. Les cellules 2 et 3 vont ensuite sécréter de la MEC qui va être orientée à nouveau dans le même sens et ce propager de proche en proche aux cellules avoisinantes. C’est le principe de l’interaction réciproque.

C’est le principe de l’ interaction réciproque . ( ( ( ( ( " ( "

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l’ interaction réciproque . ( ( ( ( ( " ( " ( ( (

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Cette interaction est importante pour le maintien de tissus. Dans les phénomènes pathologiques comme le cancer (on aura un cours dessus), on va avoir une dégradation de la MEC, étant donné que les cellules vont proliférer de manière anarchiques.

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A l’aide des techniques comme la fluorescence, on peut mettre en évidence ces

interactions réciproques.

Ici on a pris en exemple des fibroblastes en culture qui vont produire des fibres comme du

collagène. On marque l’actine et la fibronectine (protéines du cytosquelette), et nous observons que ces protéines sont orientées de la même façon.

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From"Molecular"Biology"of"the"Cell."4 th "Edi/on"

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La prof a dit que cette diapo n’était pas très importante, donc «on ne la détaillera pas plus». Cependant, la technique d’immunofluorescence est à connaître.

5 - Remodelage de la matrice extracellulaire

La MEC est en constante dégradation par des protéases.

Cette dégradation de la matrice permet un assemblage de la MEC et un remodelage structurel permanent en fonction de son état de développement.

Ces protéases ont des fonctions clés dans la formation, la croissance et la cicatrisation

de la MEC.

Par exemple, lorsqu’il y a une plaie au milieu cutané, non seulement on a les cellules du dermes ainsi que la MEC qui vont être affectés. Cela déclenche un processus de cicatrisation pour renouveler le tissu.

Elles sont également impliquées dans des processus pathologiques comme la croissance tumorale, arthrite, l’hypertension artérielle

CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE

La famille de ces protéases en général qui dégrade la matrice sont les endopeptidases (coupe à l’intérieur de la protéine) qui sont les principales enzymes dégradant les protéines de la MEC:

Elles sont regroupées en 3 familles:

- métalloprotéinases (en référence à l’activité enzymatique métallique comme le zinc)

- sérine-protéases

- cystéine-protéases

Dans la famille des métalloprotéinases, on trouve les MMPs

Les MMPs sont des endopeptidases zinc-dépendante. On en trouve au moins 25 comme:

- collagénases (MMP - 1, -8, -13)

- gélatinases (MMP -2, -9)

- stromélysines (MMP -3, -10, -11)

- métalloélastase (MMP - 12)

- MMP de type membranaire (MT-MMP; MMP -14 à -17)

Leur rôles physiologiques:

- apoptose

- développement embryonnaire

- migration cellulaire

- angiogénèse (formation de nouveaux vaisseaux)

- remodelage tissulaire

Leurs rôles pathologiques: cancer, arthrite rhumatoïde, sclérose en plaques, maladie

d’alzheimer

(dérèglement de la concentration des MMPs)

NB: Il y a aussi de la matrice dans le système nerveux central, mais il y en a beaucoup moins.

Elles ont de nombreuses caractéristiques et sont synthétisés et sécrétés sous forme de proenzymes inactives ou zymogènes. 3 domaines en commun:

- domaine pro-peptide

- domaine catalytique

- domaine C-terminal «haemopexin-like»

Dans le domaine catalytique on a un site de fixation pour le zinc (s’il n’est pas là, il n’y a pas d’activité enzymatique).

Pour que les MMPs soient actifs, il faut un signal extracellulaire. Par exemple, l’inflammation peut enclencher un certain nombre de signaux qui activent les MMPs (infiltration des cellules inflammatoires facilitées).

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Physiologiquement, dans le corps nous avons des inhibiteurs de MMPs qu’on appelle les TIMPs (inhibiteurs tissulaires) qui sont des protéases endogènes.

Alors pourquoi l’organisme à besoin de TIMPs? Tout simplement car dans l’organisme, il faut qu’il y ait un équilibre dans l’activité de la MMPs (régulation, empêchement d’une activité excessive de ces MMPs).

On peut également avoir recours à des composés pharmacologiques pour inhiber les MMPs (doxycycline, minocycline) notamment MMPs 2 et 9.

On va maintenant présenter les différents domaines des MMPs:

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les différents domaines des MMPs: ( ( ( ( ( " " " " " "

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Comme on peut le voir, les MMPs, ont leur 3 domaines (ça également été dit plus haut):

- le pro-domaine

- le domaine catalytique pour la fixation du substrat (dans le premier cas, le substrat est le

et pour la fixation du métal sans

lequel l’enzyme ne peut pas fonctionner. - l’hémopexine (domaine qui permet l’ancrage au niveau de la membrane plasmique dans le cas des MMPs membranaire)

collagène, dans le second cas, c’est la gélatine etc

)

En fonction du tissu dans lequel on se trouve, l’organisme va synthétiser les MMPs correspondant. Pour que ces enzymes soient actives, il faut cliver (couper) ce pro-domaine.

CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE

Sur ce schéma, on peut voir les différents procédés d’activation et d’inhibition des

MMPs.

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et d’inhibition des MMPs. ( ( ( ( ( " ( ( ( " " "

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On rappelle que pour qu’il y ait production de MMPs, il faut qu’il y ait un signal venant de «l’extérieur». Le stimulus va entraîner une série de cascades à l’intérieur de la cellule, puis la synthèse de l’ARN codant pour la MMP, et enfin la formation de la forme zymogène de MMP.

A partir de là, nous allons avoir différentes possibilités:

Des furines qui vont cliver le pro-domaine de la MMP et la rendre active. La MMP active va participer à la dégradation de la MEC.

➤ Sécrétion dans le milieu extérieur des zymogènes (protéines inactives), puis cascade d’activation et dégradation de la MEC.

➤ Il peut y avoir des inhibiteurs (comme TIMPs) qui peuvent former un complexe avec

MMP et son activité sera ainsi inhibée (que c’est triste :( ) ☆ Dans d’autres circonstances, il peut y avoir association des inhibiteurs avec des pro- MMP pour former un complexe qui va s’assembler à la MT-MMP (c’est la forme membranaire de la MMP) et permettre ainsi la dégradation de la MEC.

CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE

Voici un exemple où pro-MMP associé à son inhibiteur, peut être activé grâce à l’action des formes membranaires de MMP.

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des formes membranaires de MMP. ( ( ( ( ( ( ( ( " " On

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On observe ici MT1-MMP associé à la membrane sous forme monomérique qui peut se fixer à la molécule inhibitrice (ici TIMP-2). L’association de ce complexe créer une dimérisation de la MT-MMP. Le complexe MT1-MMP + TIMP-2 va se fixer à la forme zymogène de MMP-2 (Pro- MMP2). Cela ne va pas empêcher la forme zymogène d’être inhibée par TIMP-2 mais le pro-domaine va pouvoir être cliver grâce à l’action de MT1-MMP. L’activation de MMP-2 permet la dégradation de la MEC.

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Petit point méthode, comment mettre en évidence l’activation de MMP? Quelles techniques peut-on utiliser?

1) Une immunohistochimie à condition d’avoir des anticorps qui vont reconnaître la forme active et des anticorps qui vont reconnaître la quantité totale de protéine mais cela reste qualitatif.

2) Une électrophorèse suivie d’un Western Blot

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Maintenant, on souhaite une technique qui permette de mettre en évidence l’activité enzymatique => il s’agit de la zymographie.

On fait une électrophorèse de nos protéines sur un gel de polyacrylamide qui contient le substrat de l’enzyme que l’on cherche.

L’exemple choisi a été celui de la gélatinase, on s’est servi comme substrat de la gélatine.

On va utiliser des conditions dénaturantes (SDS) qui va «débobiner» et charger négativement la protéine. Ensuite, on va effectuer une électrophorèse pour séparer nos protéines.

Le schéma de gauche, expliquant très bien la suite de la procédure, je vous laisse vous y référer.

Les MMPs ne sont pas les seules enzymes participant à la dégradation de la MEC. Dans la famille des métalloprotéinases, il y a également les ADAM (portant un domaine désintégrine).

En dehors des métalloprotéinases, nous avons d’autres enzymes participant dans le remodelage de la matrice comme les sérines protéinases, les cystéines cathépsines, les carboxy-amino-peptidase

Celles

sérines

protéinases. Dans ces enzymes nous allons prendre deux exemples, les tPA (activateur tissulaire du plasminogène) et les uPA (activateur du plasminogène du type urokinase).

sur

lesquelles

la

prof

souhaite

attirer

notre

attention

sont

les

Quel est donc le rôle de ces enzymes? Elles participent également à la dégradation de la MEC. A partir du plasminogène, il y a formation du plasmine sous l’action de tPA et uPA.

La plasmine est une enzyme qui participe à la dégradation de la MEC. Elle a un rôle dans la migration, l’angiogénèse, mais à également un rôle fibrinolytique (dégrade la fibrine lors de la formation de caillot sanguin). De plus elle va agir sur les Pro-MMP-9 et Pro-MMP-2, et va les rendre actifs pour dégrader de la MEC.

On va avoir différents systèmes d’inhibiteurs qui participent à la régulation de la dégradation de la matrice. D’une part, nous avons les TIMPs, mais également la PAI-1, ce sont des inhibiteurs enzymatiques endogènes.

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tPA:"enzyme"ini/ant"la"fibrinolyse" Si"$" tPA:"risque"de"thrombose" Applica/on"médicale":"Ac/lyse®"( tPA"recombinant),"médicament"thromboly/que"" (dans"le"cas"d’embolie"pulmonaire,"infarctus"du"myocarde,"AVC"ischémique)""

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Lorsque l’on a un caillot sanguin, comment ce système peut permettre de le dissoudre?

Mettons nous en situation thrombolytique, nous un avons un patient avec un déficit de tPA, qui va entraîner une baisse de plasmine formée, empêchant la dégradation de fibrine. Nous avons donc un risque de formation de caillot sanguin. Ces caillots sanguins peuvent boucher une artère et entraîner une ischémie. Cela peut entraîner l’infarctus du myocarde, l’AVC ischémique ou encore une embolie pulmonaire.

On peut utiliser comme traitement l’Actilyse, ce médicament va augmenter la production tPA et donc permettre la dissolution de caillot sanguin.

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6 - Pathologies de la matrice extracellulaire

Maladies" géné/ques":"

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#Anomalies"de" synthèse" ou "de"matura/on"de" collagène":"" """""syndromes" d’EhlersODanlos "( fragilité" cutanée….)" #Fragilité" anormale"des" fibres " élas/ques ""

"""""Syndrome"de" Marfan "( anévrysmes "de" l’aorte:"dilata/on" anormale;" doigts "longs…)"

"

Maladie" congénitale"(malforma/on" dès "la"naissance)":"

#Maladie"des" os "de" verre"( ostéogénèse" imparfaite:" fragilité" ossesuse)"

"

Maladies" acquises ":"

#Scorbut "( carence"en" vit."C)":"fragilité" /ssulaire"( déchaussement"des"dents)" #Fibrose""

14"

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