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Villanueva A. Carlos E.

Biotecnología Microbiana

ESTEQUIOMETRIA MICROBIANA

  • 1. CONCEPTOS Y APLICACIÓN EN BIOPROCESOS

Estudia las relaciones aritméticas entre las masas o volúmenes de los reactantes y los productos en una reacción química llevada a cabo por los microorganismos.

Los cálculos estequiométricos permiten determinar las relaciones másicas y molares entre los reactantes y los productos finales en los procesos fermentativos.

¿Cual es la concentración final de microorganismos o productos obtenidos respecto de la concentración de los componentes (sustratos) del medio de cultivo ?

Esta información se deduce de las ecuaciones de reacción escrita y balanceadas correctamente y de los pesos atómicos pertinentes.

Por ejemplo:

Reactantes

1.

2 H 2

+

O 2

4 g

32 g

 

36 g

 
  • 2. C 6 H 12 0 6

 

+

6 O 2

 

180 g

192 g

 

372 g

 
 

Productos

 

2 H 2 O

36 g

6 CO 2

+

6 H 2 O

+

38 ATP

264 g

108 g

 

372 g

 

Durante las reacciones químicas o bioquímicas los átomos y moléculas se reordenan para formar nuevos grupos pero se conservan las cantidades siguientes:

  • 1. La masa total de reactantes = masa total de productos; y

  • 2. El numero de átomos de cada elemento (C,H,O) en los reactantes = numero de átomos de cada elemento (C,H,O) en los productos.

Sin embargo, no existe una ley correspondiente para la conservación de moles, es decir, moles de reactantes # moles de productos

La estequiometría es de aplicación en bioprocesos porque permite:

  • 1. El balance de masa y energía

  • 2. Determinar el rendimiento teórico y compararlo con el rendimiento actual del producto.

  • 3. Chequear la consistencia de datos de la fermentación experimental

El crecimiento microbiano (r x = dx /dt = µX) y la formación de productos (r p = dp/dt = q p . X) son procesos complejos que reflejan la cinética y estequiometría global de cientos de reacciones intracelulares.

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Discutiremos:

¿Como son formuladas las ecuaciones de reacción para el crecimiento microbiano y la síntesis de productos (metabolitos) ?

  • 2. ESTEQUIOMETRIA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Cuando ocurre crecimiento celular (r x = dx /dt = µX), las células (biomasa, X) constituye

un

producto

de

la

reacción

y

debe

ser

representada

en

la

ecuación

de

reacción

estequiométrica.

 
  • A. PLANTEAMIENTO DE LA ECUACION DE CRECIMIENTO CELULAR

  • a. El crecimiento celular obedece a la ley de la conservación de la masa y podemos escribir la siguiente ecuación para expresar el crecimiento celular aerobio.

El crecimiento microbiano (r = dx /dt = µX) y la formación de productos (r =

CwHxOyNz

El crecimiento microbiano (r = dx /dt = µX) y la formación de productos (r =

+

Formula quimica

sustrato

a O 2

+

b HgOhNi

El crecimiento microbiano (r = dx /dt = µX) y la formación de productos (r =

Formula quimica fuente N 2

c CHαO β Nγ Formula quimica
c CHαO β Nγ
Formula quimica

+

d CO 2

biomasa seca

+

e H 2 O

Glucosa: C 6 H 12 0 6 W = 6

X

= 2

Y

= 6

Z

=

carece

Donde:

a, b, c, d, e

son los coeficientes estequiométricos

  • b. La ecuación es escrita sobre la base de 1 mol de sustrato. Por lo tanto: a moles de O 2 son consumidos y d moles de CO 2 son formados por mol de sustrato reactante.

  • c. La figura representa esta conversión a nivel celular.

Bioconversión del sustrato, oxigeno y fuente de nitrógeno para crecimiento celular

CwHxOyNz

-----------

a O 2

----------

b HgOhNi

----------

Bioconversión del sustrato, oxigeno y fuente de nitrógeno para crecimiento celular CwHxOyNz -----------  a O

CELULA

---------

c CHαO β Nγ

--------

d CO 2

---------

e

H 2 O

  • d. No se incluye multitud de compuestos tales como ATP y NADH, no sujetos a intercambio neto con el ambiente. Las vitaminas y minerales podrían estar incluidos, pero se obvian por su consumo pequeño. Otras sustancias y productos podrían ser seleccionados si son apropiados.

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  • e. La biomasa es representada por la formula CHαO β que es una reflexión de la composición de la biomasa microbiana. Los microorganismos (por ej. E. coli) contienen un amplio rango de elementos (Tabla 1). Sin embargo 90 95 % de la biomasa puede estar constituida por 4 elementos mayores: C, H, O, N.

Tabla 1.

d. No se incluye multitud de compuestos tales como ATP y NADH, no sujetos a intercambio

En la Tabla 2 son listadas la composición elemental de varias especies en términos de aquellos 4 elementos.

Tabla 2

Composición elemental y grado de reducción para organismos seleccionados

Organismo

Formula elemental

Grado de reducción γ (Relativo al NH 3 )

Escherichia coli

C H 1.77 O 0.49

N 0.24

4.07

Saccharomyces cerevisiae

C H 1.83 O 0.56

N 0.17

4.20

Saccharomyces cerevisiae

C H 1.81 O 0.51

N 0.17

4.28

Candida utilis Candida utilis Candida utilis Candida utilis

C H 1.83 O 0.54 C H 1.87 O 0.56 C H 1.83 O 0.46 C H 1.87 O 0.56

N 0.10

4.45

Promedio

C

H

1.79

O

0.50 N 0.20

4.9

C H 1.8 O

0.5 N

0.2

puede ser usado como una formula general cuando el análisis de

composición no es disponible.

El peso molecular promedio de biomasa basado sobre cantidades de C, H, O, N, es por lo tanto 24.6 aunque el 5-10 % de residuo mineral es a menudo adicionado para contar aquellos elementos no incluidos en la formula.

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  • B. “FORMULA MINIMA” DE UN MICROORGANISMO PROMEDIO

1.

Composición elemental de un microorganismo

 

Es el porcentaje de cada elemento contenido en 100 partes de masa celular (tabla 1)

Se puede definir un “microorganismo promedio“ como aquel cuya composición (% P/P) de elementos mayoritarios (C,H,O,N) es:

 

C = 46.5 %

;

H = 6.49

;

O = 31.0 %

;

N =

10.85

Siendo el contenido de sales 5 %

 

La composición elemental de la biomasa se mantiene constante durante el cultivo, No se modifica mayormente durante un cultivo. Son semejantes para distintos tipos de microorganismos (bacterias y hongos). Sin embargo, la composición macromolecular (proteínas, ácidos nucleicos, etc.) puede variar sensiblemente.

2.

Determinación de “formula mínima” de un microorganismo promedio

Teniendo en cuenta la composición elemental media anterior es posible escribir una “formula mínima” de un microorganismo promedio, como:

C H 1.67 O 0.5

N 0.2

Esta formula representa solo el 95 % p/p de la biomasa. Se calcula así:

Cálculo de cocientes atómicos:

Dividir composición centesimal de cada elemento por su peso atómico

  • C = 46.5 / 12 =

3.88

H =

6.49

/

1

= 6.49

O = 31.0 / 16

= 1.94

N = 10.85

/ 14

= 0.78

Obtener relación atómica:

 

Dividir los cocientes atómicos por el menor de ellos

 
  • C = 3.88 / 0.78

=

4.97

H =

6.49

/

0.78

= 8.32

O = 1.94 / 0.78

=

2.49

N =

0.78

/

0.78

= 1

Relacionando al carbono

 

Dividir relaciones atómicas entre 4.97

 
  • C =

1

H = 1.67

0 = 0.5

N = 0.2

 

Resulta la:

“Fórmula mínima” : C H 1.67 O 0.5 N 0.2

Definir 1- “C mol de biomasa ”

Con fines netamente prácticos:

cantidad de biomasa que contiene un atomo gramo de carbono”

¿Qué peso de células ( o biomasa) corresponde “a un mol “ ? es decir, ¿Cuantos gramos de células ( o biomasa) corresponde “a un mol “ ?

12 (1) + 1 (1.67) + 16 (0.5) + 14 (0.2)

24.47

1C-mol de biomasa = ------------------------------------------------- = ------- = 25.8 g

0.95

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Por tanto una concentración de biomasa ( X en gL -1 ) es equivalente a:

X/25.8 C-mol de biomasa;

o bien:

XGx /12

C-mol de biomasa L -1

Donde: Gx es la fracción de carbono de biomasa (0.465 para el “microorganismo promedio”)

Esta última forma de calcular los C-moles de biomasa es ventajosa ya que solo requiere conocer Gx, un dato que se puede obtener fácilmente de la bibliografía.

En caso de no existir datos disponibles, se puede suponer Gx = 0.465 sin temor a cometer errores graves.

Definir 1-C mol de fuente de carbono y energía, y también 1 C mol de producto.

Por ejemplo para :

Glucosa (C 6 H 12 0 6 ) Etanol (C 2 H 6 0)

1-C mol de glucosa será 1-C mol de etanol será

CH

2

0

CH 3 0 0.5

= 30 g = 23 g

En general para un compuesto de la forma C n H L O q N m 1-C mol estará representado

por C H L/n O q/n N m/n

  • C. DETERMINACION DE COEFICIENTES ESTEQUIOMETRICOS

La ecuación de reacción planteada no es completa si no se conocen los coeficientes

estequiométricos

a, b, c, d,

e

CwHxOyNz

+

a O 2

+

b HgOhNi

c CHαO β Nγ

+

d CO 2

+

e H 2 O

PROCEDIMIENTO:

  • 1. Obtención de la formula para biomasa: una vez obtenida, los coeficientes son evaluados usando procedimientos normales para balances de ecuaciones.

  • 2. Balance elemental y solución de ecuaciones simultaneas

CwHxOyNz

+

a O 2

+

b HgOhNi

 

c CHαO β Nγ

+

d CO 2

+

e H 2 O

Balance de C:

 

w

=

c +

d

Bañlance de H:

 

x

+

bg

=

cα

+ 2e

 

Balance de O:

y

+

2a

+

bh

=

cβ

+

2d

+

e

Balance de N:

 

z

+

bi

=

cγ

Se tiene 5 coeficientes desconocidos y solo 4 ecuaciones de balance

  • 3. Información adicional: esta es requerida antes que las ecuaciones puedan ser resueltas. Usualmente es obtenida de experimentos. Un parámetro medible útil es el:

Moles CO2 producido

d

Coeficiente estequiométrico, RQ = ---------------------------------- = ---

moles O2 consumido

a

  • 4. Determinación de los coeficientes estequiométricos

  • 5. Completar ecuación de reacción.

  • 6. Determinar cantidades de S, N, O

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  • 3. ESTEQUIOMETRIA DE LA FORMACION DE PRODUCTOS

BALANCE QUIMICO:

Los procesos microbianos en los cuales la biomasa microbiana (CHαO β Nγ) es el único producto formado (ej. producción de levadura de panificación), son en la practica relativamente raros.

Cuando el crecimiento microbiano es acompañado de la producción de uno o varios metabolitos (C j H k O l N m ) la reacción global obedece al principio de la conservación de la materia y la ecuación estequiométrica del crecimiento puede extenderse para incluir la síntesis del metabolito de la sgte manera:

CwHxOyNz

+

a O 2

+

b HgOhNi

c CHαO β Nγ

+

d CO 2

+

e H 2 O

+

f C j H k O l N m

Donde: C j H k O l N m

f

: fórmula bruta del conjunto de productos del metabolismo diferentes a la biomasa, CO 2 y H 2 O : coeficiente estequiométrico para el producto.

APLICACIONES DE LOS CÁLCULOS ESTEQUIOMÉTRICOS

  • 1. Estequiometría de la producción de etanol

    • 1.1. Cálculo del coeficiente rendimiento teórico del etanol

Ejercicio:

Determínese el coeficiente de rendimiento de etanol conociendo que la reacción global del proceso fermentativo obedece a la siguiente ecuación química:

Solución:

C 6 H 12 O 6

2C 2 H 5 OH

+

2CO 2

La ecuación corresponde a la reacción principal de la fermentación de etanol: conversión de glucosa en etanol y dióxido de carbono

Esta ecuación expresa que una molécula de glucosa se descompone para dar 2 moléculas de etanol y dos moléculas de dióxido de carbono

Aplicando los pesos moleculares, la ecuación muestra que la reacción de 180 gramos de glucosa produce 92 gramos de etanol y 88 gramos de dióxido de carbono.

 

2 [ 12(2) + (6) + (16) ]

92

Y p/s

=

---------------------------------- =

------

=

0.51 gg -1

 

[ 12(6) + (12) + 16 (6) ]

180

Quiere decir:

se formaron 0.51 g de etanol por gramo de glucosa consumida

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  • 2. Estequiometría de la producción de aminoácidos

    • 2.1. Cálculo del coeficiente rendimiento teórico del acido glutámico

Ejercicio:

¿Cual es el rendimiento teórico del acido glutámico a partir de la glucosa y del total de reactantes consumidos?

La ecuación estequiométrica es:

Solución:

C 6 H 12 O 6

180 g

+

NH 3

+

3/2 O 2

C 5 H 9 NO 4

+

CO 2

+

3H 2

O

17 g

48 g

147 g

Aplicando los pesos moleculares, la ecuación muestra que la reacción de 180 gramos de glucosa produce 147 gramos de acido glutámico .

Y p/s

=

147 g

C 5 H 9 NO 4

------------------------------- =

180 g

C 2 H 12 O 6

147

------

180

=

0.81 gg -1

Y p/s

=

147 g

C 5 H 9 NO 4

------------------------------------------------- =

180 g C 2 H 12 O 6

+ 17 g

NH 3 + 48 O 2

147g producto ----------------------- = 245 g reactantes Consumidos

0.6 gg -1

El rendimiento es un término muy importante en el análisis bioquímico dada la complejidad del metabolismo y la existencia de frecuentes reacciones laterales.

  • 2.2. Cálculo de relaciones másicas en la producción de acido glutámico

Ejercicio:

La reacción global para la conversión microbiana de glucosa a acido glutámico es:

C 6 H 12 O 6

+

NH 3

+

3/2 O 2

C 5 H 9 NO 4

+

CO 2

+

3H 2 O

¿ Qué masa se O 2 se necesita para producir 15 g de acido glutámico?

Solución:

Pesos moleculares:

Oxigeno = 32 Acido glutámico: 147

En la ecuación, los gramos de acido glutámico se convierten en moles utilizando los corchetes unidad de pesos moleculares. Se aplica la ecuación estequiométrica para convertir los moles de acido glutámico en moles de oxigeno.

Finalmente los moles de oxigeno se convierten en gramos

1 mol glutámico

3/2 mol O 2

32 g O 2

15 g. glutámico [ --------------------- ] [ -------------------- ] [ ----------- ]

=

4.9 g

147 glutámico

1 mol glutámico

1 mol 0 2

O 2

Entonces se necesitan 4.9 g de oxigeno. Si existe también crecimiento microbiano se necesitará una cantidad de oxigeno mayor.

ESTEQUIOMETRIA EN LAS REACCIONES INDUSTRIALES

La ecuación de la fermentación alcohólica:

C 2 H 12 O 6

2C 2 H 5 OH

+ 2CO 2

. Sugiere

que todos los reactantes

(GLUCOSA)

se convierten en los productos especificados

(ETANOL y CO 2 ) y que la reacción progresa hasta el final .

Sin embargo, en los procesos industriales esto no es el caso. En las reacciones industriales la estequiometría puede no conocerse con exactitud y con el fin de manipular la reacción convenientemente, los reactantes no se alimentan en las proporciones exactas indicadas por la ecuación de la reacción. Normalmente se añaden cantidades de algunos reactantes en exceso, los cuales se encuentran mezclados con el producto una vez que la reacción ha finalizado. Además los reactantes se consumen en reacciones laterales para formar productos no descritos en la reacción principal; estos subproductos forman parte también de la mezcla final de la reacción.

En estas circunstancias se necesita información adicional antes de calcular las cantidades de producto formado o de reactante consumido.

Algunos términos utilizados para describir las reacciones parciales o laterales son:

REACTANTE LIMITANTE

Reactante que se encuentra presente en la menor cantidad estequiométrica.

Mientras que los otros reactantes pueden estar presentes en menores cantidades absolutas al mismo tiempo que se consume la última molécula de reactante limitante, en la mezcla final de la reacción aparecerán cantidades residuales de todos los reactantes excepto del reactante limitante.

Ejercicio:

Para la reacción de producción del acido glutámico:

C 6 H 12 O 6

180 g

+

NH 3

+

3/2 O 2

C 5 H 9 NO 4

+

CO 2

+

3H 2 O

17 g

48 g

147 g

¿ Cual es el reactante limitante si se proporcionan 100 g de glucosa, 17 g de NH 3 y 48g de O 2 ?

Solución:

La glucosa será el reactante limitante, incluso aunque se disponga de la mayor cantidad de masa comparada con las demás sustancias.

REACTANTE EN EXCESO

Reactante presente en una cantidad en exceso sobre la necesaria para combinar con aquel reactante limitante.

Es aquel que permanece en la mezcla de reacción una vez que el reactante limitante se ha consumido totalmente.

El porcentaje en exceso se calcula utilizando la relación entre la cantidad de material en exceso y la cantidad necesaria para el consumo completo de reactante limitante.

Moles (masa) presente moles (masa) necesarios para reaccionar completamente con el reactante limitante % en exceso = ------------------------------------------------------------------------------ moles (masa) necesarios para reaccionar completamente con el reactante limitante

x

100

CANTIDAD REQUERIDA DE REACTANTE

Es la cantidad estequiométrica necesaria para alcanzar la conversión completa del reactante limitante.

Ejercicio:

En el caso de la producción del acido glutámico:

C 6 H 12 O 6

180 g

+

NH 3

+

3/2 O 2

C 5 H 9 NO 4

+

CO 2

+

3H 2 O

17 g

48 g

147 g

  • a. ¿Cuál es la cantidad requerida del reactante NH 3 para alcanzar la conversión completa de 100 g de glucosa ?

  • b. Si se añaden 17 g de NH 3 ¿ Cuál es el % en exceso de NH 3 ?

Solución:

  • a. Se requiere 17 g de NH 3 para la conversión completa de 180 g de glucosa. Por lo tanto,

la cantidad requerida de NH 3 para la conversión completa de 100 g de glucosa es:

17 g NH 3

x 100 g glucosa

Cantidad requerida de NH 3 =

___----------------------------------------------------------

=

180 g glucosa

9.4 g NH 3

% en exceso de NH 3

=

17 g NH 3

-

9.4 g NH 3

--------------------------------- 9.4 g NH 3

x

100

=

0.80 x 100

=

80%

Las cantidades requeridas y en exceso se basan en la misma cantidad de reactante limitante incluso solo se produzca una parte de la reacción.