CINETIQUE ENZYMATIQUE

Relation exp Relation exp rimentale v f (S]) rimentale v f (S])

C7 t7
C6 t6
C5 t5
C4 t4
C3 t3
C2 t2
C1 t1
C0 t0
[S] / [P]
T, min
Rsultats pour S]
1
LE GRAPHIQUE V
LE GRAPHIQUE V
INITIALE
INITIALE
EN
EN
FONCTION DE S]
FONCTION DE S]
[S], mM v,

mol/min
00,01 01,98
00,05 09,52
00,10 18,18
00,50 66,67
01,00 100,00
05,00 166,67
10,00 181,82
20,00 190,48
40,00 195,12
Cintique enzymatique
0
50
100
150
200
0 10 20 30 40
[S], mM
V
i
n
i
,

m
m
o
l
/
m
i
n
/
t
u
b
e
Calcul de Vm et de Km
Calcul de Vm et de Km
S], mM v, mol/min
0,000 0,000
0,010 18,182
0,050 66,667
0,100 100,000
0,500 166,667
1,000 181,818
5,000 196,078
10,000 198,020
20,000 199,005
40,000 199,501
0
50
100
150
200
250
0 10 20 30 40 50
[S], mM
v
,

m
o
l
/
m
i
n
Calcul de Vm et de Km
S], mM v, mol/min
0,000 0,000
0,010 18,182
0,050 66,667
0,100 100,000
0,500 166,667
1,000 181,818
5,000 196,078
10,000 198,020
20,000 199,005
40,000 199,501
0
50
100
150
200
250
0 10 20 30 40 50
[S], mM
v
,

m
o
l
/
m
i
n
Cintique michaelienne
0
50
100
150
200
0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
S], mM
v
,

m
o
l
/
m
i
n
Reprsentation graphique directe
Calcul de Vm et de Km
Reprsentation graphique en coordonnes inverses
Reprsentation graphique de Lineweaver-Burk
1/S],mM
-1
1/v
(mol/min)
-1
100,000 0,055
20,000 0,015
10,000 0,010
2,000 0,006
1,000 0,006
0,200 0,005
0,100 0,005
0,050 0,005
0,025 0,005
Reprsentation graphique de Lineweaver-
Burk de la cintique enzymatique
0,00
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0 20 40 60 80 100 120
1/[S], mM
-1
1
/
v
,

(

m
o
l
/
m
i
n
)
-
1
] S
1
.
V
K
V
1
v
1
m
m
m
+ ++ + = == =
1/V
m
K
m
/V
m
] S
K
1
V
v
m
m
+ ++ +
= == =
Calcul de Vm et de Km
Reprsentation graphique en coordonnes inverses
Reprsentation graphique de Lineweaver-Burk
] S
1
.
V
K
V
1
v
1
m
m
m
+ ++ + = == =
Reprsentation graphique de Lineweaver-
Burk de la cintique enzymatique
-50 0 50 100 150
1/[S], mM
-1
1
/
v
,

(

m
o
l
/
m
i
n
)
-
1
] S
1
.
V
K
V
1
0
m
m
m
+ ++ + = == =
m K
1
] S
1
= == =
m K
1

Calcul de Vm et de Km
Reprsentation graphique de Eadie-Hofstee
v/S] v
1818,18 18,18
1333,33 66,67
1000,00 100,00
333,33 166,67
181,82 181,82
39,22 196,08
19,80 198,02
9,95 199,00
4,99 199,50
Reprsentation graphique de Eadie-hofstee
0
500
1000
1500
2000
2500
0 50 100 150 200 250
v
v
/
[
S
]
m
m
K
V
V
m
m
m
m K
V
K
v
] S
v
+ ++ + = == =
Reprsentation graphique de Eisenthal-Cornish-
Bowden
-50
0
50
100
150
200
250
-0,15 -0,10 -0,05 0,00 0,05
S]
v
Reprsentation graphique de Eisenthal-Cornish-
Bowden
-50
0
50
100
150
200
250
-0,15 -0,10 -0,05 0,00 0,05 0,10 0,15
S]
v
Calcul de Vm et de Km
Reprsentation graphique de Eisenthal-Cornish-Bowden
x y
A1 0,00 18,18
B1 0,01 0,00
Droite D1
x y
A2 0,00 100,00
B2 0,10 0,00
Droite D2
S], mM v, mol/min
0,000 0,000
0,010 18,182
0,050 66,667
0,100 100,000
0,500 166,667
1,000 181,818
5,000 196,078
10,000 198,020
20,000 199,005
40,000 199,501
V
m
-K
m
Calcul de Vm et de Km

Signification de Vm et Km
Signification de Vm et Km
] S
1
.
k
k k
1
] E k
v
1
cat 1
0 cat






+ ++ +
+ ++ +
= == =
+ ++ +

V
m
k
cat
.E]
0
1
cat 1
0,5
k
k k
|S|
+ ++ +
+ ++ +
= == =
] S
K
1
V
v
m
m
+ ++ +
= == =
Calcul de Vm et de Km

Signification de Vm et Km
Signification de Vm et Km
] S
1
.
k
k k
1
] E k
v
1
cat 1
0 cat






+ ++ +
+ ++ +
= == =
+ ++ +

V
m
k
cat
.E]
0
1
cat 1
k
k k
Km
+ ++ +
+ ++ +
= == =
] S
K
1
V
v
m
m
+ ++ +
= == =
Vm c`est la vitesse de la raction quand la S]
devient saturante.
Que signifie S] saturante ?
Calcul de Vm et de Km

Signification de Vm et Km
Signification de Vm et Km
Vm c`est la vitesse de la raction quand la S]
devient saturante.
Que signifie S] saturante ?
Les conditions initiales
tat stationnaire
] ES . k ] S ]. E . k
1 1 +
=
s
1
1
K
k
k
] ES
] S ]. E
= =
+

Calcul de Vm et de Km

Signification de Vm et Km
Signification de Vm et Km
s
1
1
K
k
k
] ES
] S ]. E
= =
+

Ks est la constante de
dissociation
S devient saturant quand S] >> Ks ap. 10X
Dans ces conditions la E] libre devient ngligeable
et ES] est approximativement gale E]
0
Calcul de Vm et de Km

Signification de Vm
Signification de Vm
Vm k
cat
.E]
0
. C` est toujours (-dS]/dt dans les
conditions initiales condition que le substrat soit
saturant
Les units de vitesse de raction: UI et le katal
Activit de l`enzyme
Activit spcifique de l`enzyme
Calcul de Vm et de Km

Signification de Vm
Signification de Vm
UI : Unit Internationale. C`est la quantit d`enzyme qui
catalyse la transformation d`une mole de substrat/min
X L de la solution
d`enzyme contiennent
10 UI.
1L contient 10 UI/x.
Comparer avec le katal (kat)
Calcul de Vm et de Km

Signification de Vm
Signification de Vm
t
] S
) 0 t (
dt
] S d
v


= == = = == =
UI : Unit Internationale. C`est la quantit
d`enzyme qui catalyse la transformation d`une
mole de substrat/min
Cette dfinition, si elle est commode, n`est pas
exacte.
Pourquoi ?
Conclusion
Calcul de Vm et de Km

Signification de Vm
Signification de Vm
L`activit de l`enzyme A c`est la Vm de la raction
Activit spcifique de l`enzyme
Comme toute grandeur spcifique, l`AS de l`enzyme c`est
l`activit par unit de quantit de l`enzyme :
1- En protine
AS A/mg de protine
Revenez la diapositive 85 pour expliquer
Calcul de Vm et de Km

Signification de Vm
Signification de Vm
Activit spcifique de l`enzyme
1- La quantit de l`enzyme est exprime moles
ASM A/mol d`enzyme
V
m
k
cat
.E]
0
k
cat
V
m
/E]
0
ASM
Donc
k
cat
V
m
/E]
0
x mol
S
L
-1
.min
-1
/(y mol
E
.L
-1
)
x mol
S
.min
-1
/y mol
E
Peut on crire k
cat
x mol
S
.min
-1
/y mol
E
(x/y) min
-1
?
Calcul de Vm et de Km

Signification de Vm
Signification de Vm
Activit spcifique de l`enzyme
Peut on crire k
cat
x mol
S
.min
-1
/y mol
E
(x/y) min
-1
?
kcat
Turnover number
ASM
Calcul de Vm et de Km

Signification de K
Signification de K
m m
C`est la concentration du substrat pour laquelle v
est gale V
m
/2.
C`est l`inverse de l`affinit de l`enzyme pour le
substrat.
Km # Ks. Comparer en fonction des k ( # 80 et 81)

S]<<Km
S]<<Km
S E1 P1 S
E2
P2
] S .
K
] E . k
] S .
K
V
v
m 2
2 cat 2
m 2
m
2 = == = = == =
] S .
K
] E . k
] S .
K
V
v
m 1
1 cat 1
m 1
m
1 = == = = == =
m 2
cat 2
m 1
cat 1
2
1
K
k
K
k
v
v
= == =
Inhibition des r
Inhibition des r

actions enzymatiques
actions enzymatiques

Deux cat
Deux cat

gories d
gories d
`
`
inhibiteurs
inhibiteurs

D
D

finition d
finition d
`
`
un inhibiteur
un inhibiteur
-
-
Inhibiteurs irr
Inhibiteurs irr

versibles
versibles
-
-
Liaison covalente avec l
Liaison covalente avec l
`
`
enzyme : E + I
enzyme : E + I


E
E
-
-
I
I
100
100
20
20
80 0
80 0
20
20
Destruction totale et irr
Destruction totale et irr

versible de 20 de l
versible de 20 de l
`
`
activit
activit

enzymatique
enzymatique
Inhibition des ractions enzymatiques
-
-
Inhibiteurs r
Inhibiteurs r

versibles
versibles
E + I
E + I


EI.
EI.
L
L
`
`
tat d
tat d
`
`
quilibre est
quilibre est

tabli rapidement ;
tabli rapidement ;
approximativement dans les mmes conditions que
approximativement dans les mmes conditions que
celui du complexe ES.
celui du complexe ES.
La relation ci
La relation ci
-
-
dessus ob
dessus ob

it aux lois d
it aux lois d
`
`
action de masse :
action de masse :
] EI
] I ] E
Ki = == =
K
K
i i
est la constante d
est la constante d
`
`
quilibre dans le
quilibre dans le
sens de la dissociation.
sens de la dissociation.
Comme le Km c
Comme le Km c
`
`
est aussi une indication
est aussi une indication
de l
de l
`
`
inverse de l
inverse de l
`
`
affinit
affinit

de l
de l
`
`
enzyme
enzyme
pour l
pour l
`
`
inhibiteur
inhibiteur

Types d
Types d
`
`
inhibitions r
inhibitions r

versibles
versibles
Inhibition des ractions enzymatiques
Le type d`inhibition dpend de la nature de liaison entre
l`inhibiteur et l`enzyme
Nous considrons ici seulement trois types d`inhibitions :
- L`inhibition comptitive
- L`inhibition non-comptitive
- L`inhibition in-comptitive
Inhibition des ractions
enzymatiques

L
L
`
`
inhibition comp
inhibition comp

titive
titive
] S
K
]. ES ] E
m
= == =
i K
] I
]. E ] EI = == =
v k
cat
.ES]






+ ++ + + ++ +
= == =






+ ++ + + ++ +
= == =
i
m
m
i
m
0 cat
K
] I
1
] S
K
1
V
K
] I
1
] S
K
1
] E . k
v
+
Inhibition des ractions enzymatiques

L
L
`
`
inhibition comp
inhibition comp

titive
titive
|S|,M |I|0M |I|10M |I|25M
1 9,09 3,23 1,69
2 16,67 6,25 3,23
4 28,57 11,77 6,25
6 37,50 16,67 9,09
8 44,44 21,05 11,77
10 50,00 25,00 14,29
20 66,67 40,00 25,00
30 75,00 50,00 33,33
40 80,00 57,14 40,00
50 83,33 62,50 45,46
Vitesse initiale en M.min
-1
Inhibition des ractions enzymatiques

L
L
`
`
inhibition non
inhibition non
-
-
comp
comp

titive
titive v k
cat
.ES]
i K
] I
]. E ] EI = == =
i K
] I
]. ES ] ESI = == =
] S
K
]. ES ] E
m
= == =






+ ++ +






+ ++ +
= == =
] S
K
1
K
] I
1
V
v
m
i
m
Inhibition des ractions enzymatiques

L
L
`
`
inhibition in
inhibition in
-
-
comp
comp

titive
titive v k
cat
.ES]
i K
] I
]. ES ] ESI = == =
] S
K
]. ES ] E
m
= == =
i
m
m
K
] I
] S
K
1
V
v
+ ++ + + ++ +
= == =