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Devoir libre de Sciences Physiques n 1 du 11-09-2012 Probl` eme no 1 Aspect electrique de la technique du Patch Clamp Agro - V eto 2005
Invent e par E. Neher et B. Sakmann, le patch-clamp (ou l electrophysiologie cellulaire) est la technique de r ef erence pour l etude electrophysiologique des canaux ioniques. Chaque canal est travers e par un ux ionique elev e (de lordre de 106 ions par seconde) et g en` ere un courant electrique. Le patch-clamp consiste donc a ` enregistrer lactivit e electrique dune membrane cellulaire. A. Pr eliminaires Etude de la loi dOhm On consid` ere un milieu homog` ene conducteur de conductivit e electrique . Une charge, de masse m et de charge q , est susceptible de se d eplacer librement ` a lint erieur de ce mat eriau mais subit au cours de son mouvement de nombreux chocs que lon mod elise globalement par une force de frottement du type ff r = v o` u v est la vitesse de la charge et une constante positive. On suppose que le mat eriau etudi e est plac e dans un champ electrique uniforme et constant E = E ex (o` u E = Cte). La charge subit alors une force electrique f = q E. On n egligera les forces de pesanteur. 1. En appliquant la relation fondamentale de la dynamique, d eterminer l equation di erentielle v eri ee par la vitesse v. 2. Pr eciser la vitesse limite v atteinte par la charge et le temps caract eristique du r egime transitoire. 3. Sachant que le mat eriau poss` ede n charges mobiles par unit e de volume, en d eduire le vecteur densit e volumique de courant j en fonction de n, q , et E lorsque le r egime permanent est atteint. nq 2 4. Rappeler la loi dOhm locale. En d eduire que la conductivit e du mat eriau vaut = . m 5. Montrer que la force f = q E est une force conservative. Pr eciser lexpression de l energie potentielle Ep . On prendra Ep (x = 0) = 0. En d eduire lexpression du potentiel V (x) en fonction de E et x. 6. Une portion de ce conducteur de section S et de longueur L est soumise ` a une di erence de potentiel U . 1L En d eduire que la r esistance R de cette portion vaut R = . S On va maintenant etudier successivement trois montages quon assemblera par la suite. Conversion intensit e-tension et amplication 7. Lamplicateur op erationnel est suppos e parfait et fonctionne en r egime lin eaire. Le montage est celui de la gure 1 ` a gauche. Exprimer la tension de sortie V0 en fonction de lintensit e du courant I , de la tension Vr ef et de R. 8. Lamplicateur op erationnel est suppos e parfait et fonctionne en r egime lin eaire. Exprimer la tension vs en fonction de ve1 et ve2 ainsi que des di erentes r esistances. Que se passe-t-il si les quatre r esistances sont identiques ? R I + Vr ef V0 ve1 ve2
R1 R2

R1 +

R2

vs

Fig. 1 A gauche : Convertisseur intensit e-tension A droite : Amplicateur 9. Dans le montage AN I de la gure 2 (` a gauche), lamplicateur op erationnel est suppos e parfait et fonctionne en r egime lin eaire. D eterminer la tension v en fonction de v1 , R et Rvar . Donner un nom ` a ce montage. Etude dun r egime transitoire Nous consid erons le circuit de la gure 2 (` a droite) constitu e dun condensateur de capacit e C , initialement d echarg e, de deux r esistances R1 et R2 , aliment e par un g en erateur d elivrant un signal variable dans le temps
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R + v1

Rvar R1 i(t)

u(t)

R2

ve (t)

Fig. 2 Montage AN I Etude dun r egime transitoire ve (t). Nous allons appliquer ` a ce circuit une stimulation damplitude V = Vr ee t. Pour t < 0 ef > 0 et de dur et pour t > t, la tension appliqu ee au circuit est nulle. 10. Exprimer i(t = 0+ ) en fonction de Vr ef et R1 . 11. Exprimer i(t = t ) en fonction de Vr ef , R1 et R2 . On supposera t susamment grand pour que le circuit ait atteint un r egime permanent ` a linstant t . 12. Etablir l equation di erentielle v eri ee par u(t) en fonction de R1 , R2 , C et ve (t). Pr eciser la constante de temps de ce circuit. 13. Etablir lexpression de u(t) sur lintervalle [0, t]. En supposant t, pr eciser la valeur de u(t). En d eduire i(t) toujours sur lintervalle [0, t]. 14. Etablir lexpression de u(t) dans lintervalle [t+ , [. En d eduire i(t) sur lintervalle [t+ , [. Tracer + lallure de i(t) dans lintervalle [t , [. B. Mod` ele simpli e de lamplicateur Patch Clamp Les techniques impos ea ` une membrane ont pur nalit e le maintien du potentiel membranaire dune cellule ou dun groupe de cellules a ` une valeur xe et lenregistrement simultan e des courants ioniques li es aux transferts dions a ` travers la membrane. Toute mesure n ecessite une paire d electrodes : une electrode de mesure reli ee a ` un convertisseur et une electrode de r ef erence indi erente (g en eralement une electrode au calomel ou au chlorure dargent), mont ees en opposition. La pipette denregistrement est un simple tube de verre contenant une solution ionique de composition x ee par lexp erience dans lequel est plac ee une electrode dargent chlorur ee. Lensemble permet la conduction electrique entre la membrane cellulaire ou lint erieur de la cellule et le premier etage de lamplicateur qui est un convertisseur courant - tension. Nous donnons a ` la gure 3 le sch ema electrique equivalent en conguration cellule enti` ere qui permet lenregistrement de courants macroscopiques. R Rf i(t) + V0 Vr ef R R v1 R +
Pipette Electrodes

Rvar -

Fig. 3 Montage Patch Clamp 15. Exprimer V0 en fonction de Vr ef et Rf . 16. Exprimer v1 en onction de Vr ef et V0 , puis en fonction de i(t) et Rf . 17. Exprimer v en fonction de i(t), Rf , R et Rvar .
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Mesure de la r esistance de (( seal )) La pipette est mod elisable par une r esistance Rpip de 10 M. La zone de contact (ZC ) entre la pipette et la membrane peut etre repr esent ee par un cylindre de diam` etre d = 1 m et de hauteur h = 2 m, de conductivit e = 102 1 cm1 . Voir la gure ci-contre. 18. Exprimer la r esistance dacc` es Racc` a la membrane en fonction de h, d et es ` . Calculer num eriquement Racc` es . Il se forme de plus une r esistance de jonction, ou de fuite, appel ee r esistance de seal conditionnant la stabilit e de la liaison pipette - membrane. Cette r esistance est constitu ee par une colonne cylindrique entourant la zone ZC , de m eme conductivit e que ZC . Cette colonne a l epaisseur e = 3 1010 m et la hauteur h = 2 m.
pipette

d e h

19. Exprimer la r esistance de jonction Rseal en fonction de h, d, e et . Calculer num eriquement Rseal . solution membrane 20. Quel est alors le montage electrique equivalent ` a lassociation de ces trois r esistances : Rpip , Racc` es et Rseal ? Compte tenu des valeurs num eriques, simplier le montage. Mesure en conguration cellule enti` ere On mod elise par R1 la r esistance equivalente de la pipette pr ec edente et (R2 C ) repr esente la r esistance et la capacit e de la membrane, voir la gure 4. R Rf R1 i(t) R2 C + V0 Vr ef R R v1 R + R + v Rvar

Fig. 4 Montage Patch Clamp On obtient ainsi lenregistrement reproduit sur la gure 5. v (V ) 0, 2 0, 1 0, 4 0, 2 0 0, 1 0, 2 Fig. 5 Enregistrement 21. D eduire de lenregistrement de v (t) donn e ci-dessous les valeurs de R1 , R2 et C . On pr ecise que Vr ef = 5 mV, Rf = 100 M et Rvar = 0. Sur cet enregistrement, labscisse t est en seconde et lordonn ee est en volt. 0, 2 0, 4 0, 6 0, 8 1, 0 t(s)

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Probl` eme no 2 Caract erisation de leet Zeeman

Agr egation interne 2006

La lampe ` a vapeur dhydrog` ene emet un spectre de raies caract eristique de cet el ement. On sint eresse ` a une raie tr` es lumineuse du spectre de fr equence 0 . Si on soumet la lampe ` a hydrog` ene ` a un fort champ magn etique, on constate un d edoublement de la raie dorigine. Soumise ` a un champ magn etique B dintensit e elev ee, on obtient deux raies de fr equences 1 = 0 et 2 = 0 + avec 0 . Cet eet porte le nom deet Zeeman. Un photomultiplicateur plac e dans un montage interf erom etrique de Michelson va donner une intensit e electrique i(t) proportionnelle ` a l eclairement lumineux r esultant des interf erences entre les ondes lumineuses de fr equence 1 et des interf erences entre les ondes de fr equence 2 . Pour une onde de fr equence i , l eclairement obtenu dans le dispositif dinterf erences est de la forme : Ei = 2E0 (1 + cos 4ei ) c

o` u E0 est un eclairement lumineux caract erisant la raie de fr equence i , c = 3 108 m s1 la vitesse de la lumi` ere et e une longueur caract eristique r eglable de linterf erom` etre de Michelson. 1. On indique que les deux raies de fr equences 1 et 2 sont caract eris ees par le m eme eclairement E0 . Exprimer l eclairement total re cu par le photomultiplicateur. On mettra l eclairement total sous la forme : 4e0 ) c o` u V (e) sappelle le contraste ou visibilit e des interf erences. Exprimer V (e). Etot = 4E0 (1 + V (e) cos 2. Repr esenter la fonction V (e) en fonction de e puis la fonction Etot (e) en fonction de e. 3. Indiquer comment on peut acc eder ` a la connaissance de gr ace ` a un enregistrement de lintensit e electrique i(t) d elivr ee par le photomultiplicateur. Dun point de vue electrique, le photomultiplicateur utilis e (not e P M sur la gure 6) se comporte comme une source de courant i(t) en parall` ele avec un condensateur de capacit e C0 = 15 pF. An de pr elever une tension u(t) proportionnelle ` a ce courant, on charge le photomultiplicateur par une r esistance r = 50 . E1 + u1 i(t) C0 r u(t) R0 R +
PM AO1

A R1 R2

[1]

AO3

S1

[2]

AO2

R3 B R4 s1 (t)

+ E2 u2

Fig. 6 Circuit de d etection 4. On etudie la r eponse de ce syst` eme ` a un echelon de courant : la source id eale de courant d elivre une intensit e I constante ` a partir de linstant t = 0. Etablir l equation di erentielle d eterminant u(t). 5. R esoudre cette equation en consid erant la condition initiale u(0) = 0 et evaluer tR , le temps de r eponse ` a 5% du photomultiplicateur. 6. Le miroir mobile de linterf erom` etre se d eplace ` a une vitesse constante v telle que e = vt. La source de courant d elivre un courant i(t) proportionnel a ` l eclairement E (t) que le d etecteur re coit. Montrer que pour des temps d evolution tr` es sup erieurs ` a tR , la tension u(t) reproduit tr` es d` element les variations de l eclairement. Les signaux d etect es par le photomultiplicateur sont faibles, noy es dans des bruits aussi bien continus qualternatifs. La transmission de linformation saccompagne de parasites et nous consid ererons quen pratique, un signal parasite existe identiquement sur les ls de liaison de r esistance nulle not es [1] et [2]. Le signal du photomultiplicateur a besoin d etre conditionn e. Dans le montage de la gure 6, les amplicateurs op erationnels
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utilis es sont suppos es id eaux. Si un amplicateur fonctionne dans les conditions de saturation, on notera la tension de saturation Vsat et on prendra Vsat = 15 V. 7. Exprimer la di erence de potentiel entre les points A et B vA (t) vB (t) en fonction de u(t) = u1 (t) u2 (t). 8. Quelle conditions doivent satisfaire les r esistances R1 , R2 , R3 et R4 pour que le signal s1 (t) soit proportionnel a u(t) ? Ces conditions seront respect ` ees par la suite. 9. Quelles sont les fonctions de chacun des amplicateurs op erationnels de la gure 6. Quel est lint er et dun tel montage ? Apr` es conditionnement, le signal est trait e par le montage de la gure 7. S1 +
AO4

C 5

AO5

s1 (t) R

+ R9 i=0
C.I.

R6 R5 s2

s3 R7

R8 s4 R10 s(t)

Fig. 7 Circuit de comptage 10. Expliquer la fonction de lamplicateur op erationnel n 4. 11. Le signal s3 (t) est observ e` a loscilloscope et on obtient le trac e de la gure 8. Quel est lint er et du dispositif permettant de passer du signal s2 (t) au signal s3 (t) ? Comment choisir le produit RC pour obtenir le meilleur r esultat ? s3 ( mV) 600 0 -600 -15

0 Fig. 8 Enregistrement du signal s3 (t)

15

t( s)

12. Expliquer de mani` ere d etaill ee la fonction de lamplicateur op erationnel n 5 qui fonctionne en saturation. On prendra R8 = 100R7 . 13. Le compteur dimpulsions (C.I.) plac e en n de montage fonctionne avec une tension dentr ee voisine de 5V et lintensit e de son courant dentr ee est nulle. La diode est id eale, de tension de seuil nulle et de r esistance nulle dans le sens passant. Elle se comporte donc comme un interrupteur id eal ferm e dans le sens passant et ouvert dans le sens bloqu e. Les r esistances R9 et R10 v erient la relation R9 = 2R10 . Expliquer le r ole jou e par la diode dans l evolution de s(t) au cours du temps et tracer sur le m eme graphique lallure des oscillogrammes s4 (t) et s(t). 14. Entre deux annulations de la visibilit e V (e) (ou contraste), le nombre dimpulsions ach e par le compteur est N = 4464 pour une dur ee de comptage 2 = 3 105 s correspondant ` a un d eplacement e = 0, 2721 mm. calculer la valeur des fr equences 0 et .

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