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CHAPITRE 9 DES DBUTS DE LA GNTIQUE AUX ENJEUX ACTUELS DES BIOTECHNOLOGIES

1 Les dbuts de la gntique


Cest avec les travaux de Gregor Mendel vers la fin du XIXe sicle que furent poses les bases de la gntique. Lhybridation chez les plantes a permis de comprendre comment les facteurs hrditaires sont transmis.

1.

La reproduction sexue des vgtaux


9-1. Diagramme floral de la fleur de Pois.

axe de la tige spale ptale carpelle tamine

bracte 1 tamine libre tendard


COROLLE

aile carne

9 tamines soudes stigmate style ovaire form dun seul carpelle

ANDROCE

GYNCE

calice 5 spales souds

9-2. Coupe longitudinale de la fleur de Pois.

Les fleurs prsentent le plus souvent la fois des tamines (qui produisent les grains de pollen) et un pistil. Certaines varits de plantes peuvent sautofconder : le pollen produit par une fleur se dpose sur le stigmate de la mme fleur ; cest le cas du pois (Pisum sativum). La runion des gamtes haplodes (spermatozode et oosphre) donne naissance un uf diplode. La graine une fois forme, aprs dveloppement de luf, contient un nouvel individu.
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2. Les travaux de Mendel et la sgrgation


des facteurs hrditaires
G

Le moine Gregor Mendel fut le premier entreprendre des travaux rigoureux en tudiant la transmission des caractres (phnotype) de gnration en gnration. Il tudia lhybridation chez le Pois et travailla sur 7 caractres : taille de la plante, position de la fleur, couleur des gousses, forme des gousses, aspect des graines, couleur des graines et couleur du tgument.

G Une fcondation croise entre un pois dont la graine est lisse et un pois dont la graine est ride donne une premire gnration F1 dont les graines sont toutes daspect lisse. Mendel nomma dominant ce caractre observ chez tous les individus de la gnration F1. G

En laissant la gnration F1 sautofconder, on constate, en F2, la rapparition des caractres parentaux en proportions 3/4 pour le caractre lisse et 1/4 pour le caractre rid. Mendel qualifia ce dernier de rcessif . Cette sgrgation indpendante dun couple de caractres dominant et rcessif constitue la premire loi de Mendel.

G En ralisant un croisement en retour entre un plant de la gnration F1 et un plant parental de phnotype rid (rcessif), les deux caractres se retrouvent en proportion gale la gnration suivante. Ceci est la deuxime loi de Mendel.

3. Lapport des lois de Mendel


lpoque de Mendel, il tait largement admis que les dterminants dun caractre donn fusionnaient aprs la fcondation. Les travaux de Mendel montrent alors quil y a sgrgation des caractres ; il introduit la notion dhrdit particulaire : lhrdit sapplique des particules unitaires dfinies et indpendantes. Les plants de la gnration F1 possdent linformation susceptible de donner naissance des pois rids ou lisses mais seul le caractre dominant sexprime : ces individus sont htrozygotes. Les plants ne prsentant quun seul type dinformation (allle) pour un caractre donn (par exemple, les pois rids) sont qualifis dhomozygotes.

Lerreur classique viter


Ne pas confondre ovule et oosphre chez les vgtaux. Loosphre est le gamte femelle et lovule est une structure plus complexe regroupant plusieurs cellules. 203

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2 La thorie chromosomique
de lhrdit
Ce nest quau dbut du XXe sicle que les travaux de Mendel furent enfin reconnus grce ltude du comportement des chromosomes au sein des cellules. Cette thorie chromosomique de lhrdit permit galement dexpliquer les cas particuliers nobissant pas aux lois de Mendel.

1.
G

Les expriences de Morgan et la notion de gne

Une trentaine dannes aprs les dcouvertes de Mendel, trois botanistes (De Vries, Correns et Von Tchermack) retrouvent les mmes rsultats. Paralllement cela, les cytologistes tudient les mcanismes de la reproduction sexue ; lobservation microscopique de cellules en miose montre une sgrgation de chromosomes homologues. Ce comportement des chromosomes prsente de nombreuses analogies avec la sgrgation des caractres hrditaires observe par Mendel. La thorie chromosomique de lhrdit est alors propose par Sutton et Boveri : les units lorigine des caractres sont ports par les chromosomes, qui, lors des divisions lorigine des gamtes, sont sgrgs indpendamment les uns des autres.
G En 1909, Johannsen introduit le concept de gne, les notions de gnotype et de phnotype. Le gne est alors une unit dinformation lorigine dun caractre. G De 1910 1920, des expriences de croisements de Drosophiles (Mouches du vinaigre) sont ralises par lquipe de Morgan. Dans la population de mouches, apparaissent des individus mutants mles prsentant des yeux blancs au lieu dyeux rouges dans la souche sauvage. G Le croisement dun mle mutant aux yeux blancs et dune femelle de phnotype sauvage donne une gnration F1 de phnotype sauvage. En croisant les individus de la F1 entre eux, on obtient, en F2, une rpartition mendlienne des caractres. Cependant, 100 % des femelles prsentent un phnotype sauvage et 50 % des mles un phnotype mutant. Ces expriences ont permis de localiser le gne responsable sur le chromosome X uniquement (gne white not w+ pour lallle sauvage et w pour lallle mut) :

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Gnration P femelles w+//w+ [yeux rouges] mles w//Y [yeux blancs]

Gnration F1 femelles w+//w [yeux rouges] mles w+//Y [yeux rouges]

S S

Gnration F2 50 % femelles w+//w+ [yeux rouges] + 50 % femelles w+//w [yeux rouges] + 50 % mles w+//Y [yeux rouges]+ 50 % mles w//Y [yeux blancs]

2. Lexistence de gnes lis explique les exceptions


aux lois mendliennes
Chaque chromosome est porteur de nombreux gnes. Ces derniers sont qualifis de gnes lis et ne peuvent thoriquement subir de sgrgation indpendante. Lobservation de figures particulires appeles chiasmas lors de la miose a mis en vidence lexistence de crossing-over ; ce sont des phnomnes de recombinaisons entre chromosomes homologues. Des croisements de drosophiles corps gris et ailes normales avec des drosophiles corps noir et ailes vestigiales donnent des rsultats diffrents de ceux que lon attend par sgrgation indpendante. Les gnes couleur du corps et taille des ailes sont lis. Le calcul des pourcentages de recombinaison permet dvaluer la distance sparant les locus des gnes et de construire des cartes gntiques.

Lerreur classique viter


Deux gnes situs sur le mme chromosome mais une distance suffisante (> 50 cM) subissent une sgrgation indpendante lors de la miose. 205

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3 Gntique molculaire
Au milieu du XXe sicle, la gntique molculaire apparat et permet une volution spectaculaire dans la comprhension des mcanismes qui rgissent lexpression du gnome. Le support de linformation gntique est une double hlice dADN qui contient toute linformation ncessaire la synthse de protines.

1.

Lexpression dun gne aboutit, en rgle gnrale, une protine

G En 1941, George Beadle et Edward Tatum ralisent des expriences sur des Champignons Ascomyctes (Neurospora). La souche sauvage est capable de crotre sur un milieu nutritif minimal (sucre, sels minraux et biotine) ; en revanche, certains mutants en sont incapables si ce milieu nest pas complment avec certains nutriments. Chacun de ces mutants est dficient en une des enzymes ncessaires une chane mtabolique particulire. Pour un gne donn, une protine prcise est synthtise. Beadle et Tatum tablissent alors la relation gne-protine. G En1944, Oswald Avery, Colin McLeod et McLyn McCarthy dcouvrent la nature chimique du matriel gntique mis en vidence par Griffith en 1928 sur le Pneumocoque. Seul lADN extrait dune souche S de Pneumocoque suffit transformer des souches R non virulentes en souches S virulentes. LADN est le principe transformant ; il est le support de linformation gntique de tous les tres vivants.

2. La molcule dADN et sa rplication


semi-conservative
G En 1953, la structure en double hlice de lADN est mise en vidence par James Watson et Francis Crick laide dune technique de diffraction aux rayons X dADN cristallis et de nombreuses donnes biochimiques. G

En 1958, Matthew Meselson et Franklin Stahl ralisent une exprience de marquage de lADN par densit de faon reprer, au moment de la rplication, les brins nouvellement forms. Les rsultats de cette exprience dmontrent que la rplication de lADN est semi-conservative.

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3. Les modalits dexpression des gnes


et luniversalit du code gntique
De 1961 1965, les mcanismes de lexpression du gnome sont peu peu lucids. Lexistence dun intermdiaire informationnel entre ADN et protine est mise en vidence : il sagit de la molcule dARNm (messager). Lexpression se droule en deux tapes : la transcription et la traduction. Progressivement, Nirenberg, Matthaei et Ochoa dchiffrent le code gntique.
2e nuclotide U UUU UUC U UUA UUG CUU CUC C 1re nuclotide CUA CUG AUU AUC A AUA AUG GUU GUC G GUA GUG Val Ile Leu Leu Phe UCU UCC UCA UCG CCU CCC CCA CCG ACU ACC ACA ACG ACU ACC ACA GCG Ala Thr Pro Ser C UAU UAC UAA UAG CAU CAC CAA CAG AAU AAC AAA AAG AAU AAC AAA GAG 9-3. Code gntique. Glu Asp Lys Asn Gln His stop A Tyr UGU UGC UGA UGG CGU CGC CGA CGG AGU AGC AGA AGG AGU AGC AGA GGG Gly Arg Ser Arg stop Trp G Cys U C A G U C A G U C A G U C A G 3e nuclotide

Lerreur classique viter


Lexpression dun gne peut ne pas donner naissance systmatiquement une protine. Certains gnes sont lorigine des ARNr (ribosomes) et ARNt (ARN de transfert). 207

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4 La naissance du gnie gntique


La dcouverte, dans les annes soixante, des enzymes de restriction, a ouvert la voie de nouvelles techniques dtude du gnome et a permis les premires manipulations gntiques. De nos jours, les biotechnologies et la transgense occupent une place importante dans la recherche gntique.

1.
G

La dcouverte des enzymes de restriction

En 1968, les premires enzymes de restriction sont dcouvertes ; il sagit denzymes particulires, des endonuclases, capables de dcouper lADN au niveau de squences spcifiques. Par exemple, lenzyme EcoRI, extraite de la bactrie Escherichia coli, reconnat la squence suivante : - - - - - - - - GAATTC - - - - - - - - - - - - - - - CTTAAG - - - - - - - site de coupure de lenzyme EcoRI
G Un fragment dADN prsente en rgle gnrale plusieurs sites de restriction. Les fragments obtenus par cette mthode sont de tailles varies en fonction de lloignement des diffrents sites successifs. Les fragments sont ensuite rvls par lectrophorse. Cette technique permet de comparer des squences dADN dcoupes avec les mmes enzymes et dtablir des cartes de restriction. La squence dun fragment dADN est trs variable dun individu un autre. Le nombre de sites de restriction pour une enzyme donne peut par consquent galement varier ; on parle de polymorphisme de restriction (RFLP).

2. Les premires manipulations du gnome


Grce lutilisation des enzymes de restriction, de nombreux gnes ont pu tre identifis (par la technique du Southern blot) et isols. Au dbut des annes 1970, lexistence dune transcriptase inverse est dcouverte dans les rtrovirus ; celle-ci permet lobtention de molcules dADNc (complmentaire) partir dARNm. En 1974, les premiers gnes eucaryotes sont clons. Par des techniques appropries, les gnes peuvent dsormais tre squencs, notamment grce la technique de la PCR (mise au point en 1983), et manipuls.
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3. Transgense et biotechnologies
G La comprhension du gnome a ouvert la voie la transgense et lobtention dorganismes gntiquement modifis. Le principe de la transgense consiste en lincorporation dun gne tranger un organisme afin de lui faire exprimer un caractre nouveau. La transgense repose sur luniversalit du support de linformation gntique (ADN) et suit luniversalit du code gntique. G Lobtention dOGM ncessite lutilisation de vecteurs de transfert de gnes ; ce sont en gnral des virus modifis ou des bactries. Mais le transfert de gnes peut se faire par des mthodes physiques : micro-injection directe ou utilisation dun canon particules. On a ainsi obtenu, par transgense germinale, des varits de mas rsistantes aux Insectes (Pyrale du mas) ainsi que des organismes produisant des molcules dintrt pharmacologique (mdicaments, hormones). Les espoirs de la thrapie gnique reposent sur ces mcanismes de transgense et en particulier la transgense somatique. G La manipulation du gnome soulve aujourdhui de nombreuses craintes et des problmes dthique sont apparus. Nous ne disposons pas du recul suffisant pour valuer les risques ventuels des OGM. La transgense germinale est interdite chez lHomme depuis la loi de biothique de 1994.

Lerreur classique viter


Le virus ne peut pas tre considr comme un vecteur biologique de transfert de gne ; il ne sagit pas dun tre vivant. Les bactries, en revanche, sont des vecteurs biologiques. 209