Instituto Tecnolgico de Celaya.

Ingeniera Bioqumica.

Anlisis Instrumental.

Cristalografa de rayos X y Espectropolarimetra.

Fernndez Cruz Karenn Mariana.

Celaya, Guanajuato. 04 de noviembre del 2013.

Cristalografa de rayos X y Espectropolarimetra.

Cristalografa de rayos X. La cristalografa de rayos X es una tcnica experimental para el estudio y anlisis de materiales, basada en el fenmeno de difraccin de los rayos X por slidos en estado cristalino.
Cristalografa es la rama de la ciencia dedicada al estudio de la estructura molecular y cristalina. Sus teoras fundamentales se basan en la fsica atmica y las matemticas.

Max von Laue realiz los primeros experimentos de cristalografa de rayos X en 1912. Von Laue, William Henry Bragg y William Lawrence Bragg desarrollaron inicialmente la teora de difraccin de cristales, tarea a la que pronto se sumaron otros cientficos. A lo largo del siglo XX tuvieron lugar varios avances tericos y tcnicos, como la aparicin de los superordenadores y el uso de sincrotrones para la produccin de rayos X, que resultaron en un creciente capacidad del mtodo para determinar las propiedades estructurales de todo tipo de molculas: sales, materiales inorgnicos complejos, protenas y hasta componentes celulares como los ribosomas. Es posible trabajar con monocristales o con polvo microcristalino, consiguindose diferentes datos en ambos casos. Para las aplicaciones que requieren solo una caracterizacin precisa de los parmetros de la red cristalina, puede ser suficiente la difraccin de rayos X por polvo; para una dilucidacin precisa de las posiciones atmicas se prefiere trabajar con monocristales. La mayor limitacin de este mtodo es la necesidad de trabajar con sistemas cristalinos, por lo que no es aplicable a disoluciones, a sistemas biolgicos in vivo, a sistemas amorfos o a gases. En algunos casos, los rayos X pueden romper los enlaces qumicos que mantienen la integridad estructural, lo que resulta en un modelo distorsionado de la molcula estudiada. Este problema afecta especialmente a los materiales de inters biolgico. Los rayos X interactan con los electrones que rodean los tomos por ser su longitud de onda del mismo orden de magnitud que el radio atmico. La interaccin de los rayos X con los cristales demostr que los rayos X eran radiacin electromagntica de longitud de onda del orden de 10 -10 metros y que la estructura interna de los cristales era discreta y peridica, en redes tridimensionales, con separaciones de ese orden. El haz de rayos X emergente tras esta interaccin contiene informacin sobre la posicin y tipo de tomos encontrados en su camino.

En un cristal, donde la disposicin de los tomos o molculas se repite peridicamente, los haces de rayos X dispersados elsticamente por los tomos en ciertas direcciones resultan amplificados gracias al fenmeno de interferencia constructiva, dando lugar a un patrn de difraccin. Los rayos X difractados son interceptados por detectores y su intensidad y posicin analizadas por medios matemticos para obtener una representacin de las molculas del material estudiado a escala atmica. Otra restriccin intrnseca de la tcnica afecta al tipo de informacin que proporciona sobre la estructura: Los modelos obtenidos por este mtodo representan una media de las posiciones atmicas para todas las molculas del cristal; cuando la molcula cuenta con tomos que oscilan entre diferentes conformaciones, la densidad electrnica media se extiende sobre la totalidad del espacio que pueden ocupar estos tomos y las partes desordenadas de la molcula resultan invisibles. Esto representa un serio problema para el estudio de enzimas si el sitio activo de la molcula asociada a su actividad qumica presenta una gran movilidad; en estos casos la determinacin de las propiedades de materiales biolgicos in vivo a partir de su estructura cristalina presenta dificultades y requiere mtodos de estudio alternativos, como la resonancia magntica nuclear. Incluso si las molculas adoptan la misma conformacin en distintas celdas unidades, las vibraciones atmicas limitan la resolucin alcanzable con los datos de difraccin. En muchas ocasiones no suele ser posible determinar el estado de oxidacin, detectar los tomos de hidrgeno o distinguir tomos con nmeros atmicos semejantes. La dbil interaccin de los rayos X con los tomos ligeros es otra desventaja de la tcnica en aplicaciones, como la caracterizacin de nanomateriales. Finalmente, las propiedades ionizantes de los rayos X pueden alterar o destruir las molculas del cristal durante el experimento. Cuando este proceso tiene lugar, el modelo obtenido no refleja la verdadera estructura molecular y se puede llegar a interpretaciones errneas sobre sus propiedades. Adems, las distorsiones globales de la red cristalina y otros efectos secundarios de la irradiacin dificultan la obtencin de las fases. Este problema es grave en cristales de protenas por contar con un alto nmero de enlaces qumicos susceptibles al ataque por productos de la radiolisis del agua y los compuestos orgnicos presentes en estos cristales. los experimentos con molculas biolgicas se suelen realizar a temperaturas de 100 K o menores; esto

frena la difusin de radicales libres, aunque no soluciona enteramente el problema, pues los fotoelectrones excitados por los rayos X permanecen mviles hasta el cero absoluto.

Espectropolarimetra. La Espectropolarimetra es la ciencia de la medida de la polarizacin de la luz precedente de los objetos celestes en un ancho de banda lo ms estrecho posible con un polarmetro convencional. Los principios son los mismos que los del polarmetro convencional, si bien las longitudes de onda medidas son aisladas con un espectrgrafo en vez con filtros. La Espectropolarimetra es utilizada para medir el campo magntico de las estrellas a partir del efecto Zeeman y para estudiar el origen de las lneas espectrales. El efecto Zeeman es muy importante en aplicaciones como: espectroscopia de resonancia magntica nuclear (RMN), la espectroscopia de resonancia electrnica de spin y espectroscopia Mssbauer, as como en la Espectropolarimetra. Tambin puede ser utilizado para mejorar la precisin en la espectroscopia de absorcin atmica. Esto es debido a la interaccin entre los niveles de energa magnticos de un sistema y un campo magntico externo H. Se traduce en la rotura de la degeneracin entre niveles de distinta proyeccin Sz: los Ms=-S son los alineados con el campo, y por tanto los estables, frente a los Ms=+S, que se oponen al campo, y son los ms inestables. Se describe por el modelo hamiltoniano:

Donde g es el factor de Land y

es el magnetn de Bohr.

La polarimetra consiste en medir la actividad ptica a una sola longitud de onda, mientras que la Espectropolarimetra se basa en medir dicha actividad ptica en funcin de la longitud de onda, dando lugar a un espectro, a partir del cual puede obtenerse informacin acerca de la propia estructura de la molcula activa.

En general se puede decir que la Espectropolarimetra es la medicin de los espectros pticos acoplados con polarizacin de la luz. La Espectropolarimetra tiene la ventaja de que se puede averiguar el estado de polarizacin de las lneas espectrales, a la vez que permite discriminar con mayor precisin entre las causas que producen la dependencia de la polarizacin con la longitud de onda. Bibliografa. Introduccin al Anlisis Instrumental. Hernndez, Lucas. Gonzles, Claudio. Mtodos pticos de anlisis. Olsen, Eugene.