Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Characterization of Bioactive Recombinant Human Lysozyme Expressed in Milk of Cloned Transgenic Cattle Bin Yang1, Jianwu Wang1, Bo Tang2, Yufang Liu1, Chengdong Guo1, Penghua Yang1, Tian Yu1, Rong Li2, Jianmin Zhao2, Lei Zhang2, Yunping Dai1, Ning Li1* 1 State Key Laboratory for Agrobiotechnology, China Agricultural University, Beijing, Peoples Republic of China, 2 Beijing GenProtein Biotechnology Company, Beijing, Peoples Republic of China PLOSONE, MAYO 2011
PRESENTAN: Garca Zavala Jos Emmanuel Murillo Villafaa Luis Gerardo Pia Hernndez Vctor
Introduccin.
La lisozima tambin conocida como como muramidasa es una enzima del tipo glicano-hidrolasa la cual hidroliza los residuos de b1,4-ligandos entre el acido N-acetilmuramico y la N-acetil-Dglucosamina presente en la pared celular de las bacterias.
La lisozima humana esta presente en tejidos y fluidos humanos como lo son las lagrimas, saliva y leche. Y juegan un rolo muy importante como factor inmune no especifico y un factor antiinflamatorio. De igual manera se ha demostrado que la lisozima tiene factores anti fngicos y antivirales. Otras aplicaciones son la conservacin de alimentos y frmacos.
Introduccin.
Las concentraciones comunes en la leche materna de lisozima varia de 200-400 microgramos por mililitro. La leche bovina solo presenta de 0.5 a 0.22 microgramos por mililitro. Desafortunadamente muchas veces las madres deciden no lactar por lo que la produccin de HLZ podra ayudar mucho a los no lactantes.
Se plantea utilizar la glndula mamaria de las vacas como biorreactor para producir HLZ. De igual forma los animales se veran beneficiados al ser mas tolerante a la invasin que produce la bacteria que genera mastitis. En el trabajo se clonan vaquillas que expresen rHLZ, se prueba las caractersticas de la rHLZ se plantea un mtodo de optimizacin para la purificacin de rHLZ para una producciona mayor escala.
Resultados.
PCR analysis of transgenic cattle. M represents DNA ladder; B represents blank control; N represents non-transgenic cattle and P represents positive control form constructed vector
Resultados.
C) Southern blot analysis of transgenic cattle. Genomic DNA (20 mg per lane) was isolated from ear biopsies of cattle and digested with EcoRI. The bands were hybridized to a 565 bp specific probe that is complementary to a fragment of the HLZ gene. lanes 1, 2, and 5 represent positive controls with 1, 2, and 5 copies, respectively. N, genomic DNA from a non-transgenic cattle; 0503, 0504, 1241, and 1242 represent genomic DNA from transgenic cattle.
Resultados.
RT-PCR analysis of transgenic cattle. Total RNA was isolated from mammary epithelial cells. The 322-bp fragments represent the RT-PCR products of rHLZ, and the 121-bp fragments represent the RT-PCR products of GAPDH. M, DNA ladder; B, blank; C, negative control; N, non-transgenic cattle.
Western blot analysis of transgenic cattle. Samples of skim milk (1 ml each) were separated by SDS-PAGE and hybridized with anti-HLZ. HLZ, commercial HLZ (positive control); N, non-transgenic milk; HM, skim human milk; the other lanes, milk from transgenic cattle.
Resultados.
Resultados.
Resultados
Resultados
Conclusiones
Se logr la obtencin de rHLZ apartir de vacas transgnicas. La molcula obtenida fue similar a la HLZ comercial. Este trabajo da pauta a la aplicacin de gran escala para la produccin de HLZ.
Referencias
Bin Yang, et al. Characterization of Bioactive Recombinant Human Lysozyme Expressed in Milk of Cloned Transgenic Cattle. PLOSONE, MAYO 2011.